Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
metabolism
As.Univ.Dr.Cerasela Jardan
Boli genetice
1.Cromatida
2.Centromer
3.Brat scurt (p)
4.Brat lung (q)
Structura Cromozomilor
Benzile cromozomice
sunt specifice fiecarui
cromozom (markeri
citologici ai structurii
interne heterogene a
cromozomilor)
Benzile G -obtinute
prin digestia controlata
cu tripsina si colorate cu
Giemsa; benzile Q
colorare cu quinacrina;
benzile R ( dispozitie
inversa a benzilor G)
Distributia genelor in benzile
G
1. Se poate vedea ca in
benzile G numarul de
gene e mai scazut ca in
interbenzi
2. In regiunea
centromerului lipsesc
gene exprimate
Morfologia cromozomilor
– Metacentric – centromer median
(raportul bratelor este egal : q/p=1,0-1,7)
– Submetacentric – centromerul este
plasat catre unul din capete (raportul
bratelor=1,7-3,0)
– Subtelocentric – centromerul este
situate in regiunea subterminala
(raportul bratelor = 3,0-7,0)
– Acrocentric – centromerul este plasat
aproape terminal (raportul bratelor= 7,0-
infinit)
Metode de obtinere a cromozomilor
Sisteme de Cariotipare
Citogenetica moleculara
Tehnica FISH: hibridizare prin
complementaritate a unei sonde ADN cu o
anumita regiune a unui cromozom
Pentru a fi evidentiate dupa hibridizare,
sondele sunt marcate cu un fluorocrom(vizibil
la microscopul in UV)
Tehnica M-FISH sau SKY – utilizeaza
combinatii specifice de sonde marcate.
Diferentele sunt la captura imaginii
(secventiala in M-FISH sau captura unica si
analiza semnalului capturat)
Tehnica CGH – analiza variatiilor numarului de
copii ale unor segmente ADN
FISH
FISH
Deletia de 5q
detectata de 5p
(verde) (control) si
5q (rosu) proba
specifica
Del 5q
Whole cromosome paint
Translocatiile=
transferul de segmente
cromozomiale intre doi
cromozomi
Rearanjamente cromozomiale
echilibrate
Inversiile=ruperea
cromozomului in doua
puncte urmata de
rotirea fragmentului
intermediar cu 180º si
reunirea fragmentelor
Anomalii neechlibrate
Deletia=pierderea unui
fragment cromozomial
Consecintele fenotipice
a) consecintele anomaliilor cromozomiale
neechilibrate
-dezechilibrul genetic determina o serie de semne :
tulburari de crestere prenatala si postnatal, dismorfism
craniofacial, anomalii congenitale majore multiple, displazii,
dermatoglife anormale, alterari ale SNC, tulburari ale functiei
gonadale
b) anomalii echilibrate
-fenotip normal – consecinte reproductive serioase (3-6%
cupluri sterile sau cu avorturi spontane AV)
Afectiuni pediatrice datorate
anomaliilor cromozomiale
A) Boli cromozomiale autozomale
-trisomiile autozomale
-sindroamele cu deletii autozomale
-sindroame cu microdeletii si microduplicatii
Analiza citogenetica:
Testul cromatinei X (testul Barr)
Analiza cromozomiala obligatorie
Evolutie/prognostic:depistarea precoce permite
folosirea unei terapii eficace cu hormoni de
crestere si prepubertar cu estrogeni.
Pot apare:tiroidite autoimune, HTA, DZ, obezitate
Sindromul Turner
Etiopatogenie:
-2% din sarcini prezinta monosomie X
-cauzele monosomiei nu se cunosc
-AV spontane a 95% din embrionii cu
monosomie X se datoreaza probabil
haploinsuficientei
-nu se stie explicatia ca desi letalitatea in
utero a monosomiei X este mare, n.n cu
aceeasi anomalie supravietuiesc fara probleme
majore
Sindromul Turner
Sindromul Klinefelter
Trisomia XXY (trisomie gonosomala)
Incidenta 1/1000 n.n de sex masculin
Simptomatologie:
copilarie: statura inalta, aspect gracil, dificultati de
adaptare scolara
pubertate: talie inalta pe seama mb inferioare,
testicule de mici dimensiuni, absenta spermatogenezei si a
secretiei de testosteron, ginecomastie, intelect la limita
inferioara, tulburari de invatare
Analiza citogenetica : 47,XXY (85%); mozaicuri
(46,XY/47,XXY)
Sindromul Klinefelter
Bolile monogenice
grad inalt de
N-ul si se opresc
nucleotidica
e
tr-un numar definit,
de fragmente =
Separarea fragmentelor ADN
prin electroforeza
Datorita gruparilor fosfat incarcate negativ, in
prezenta unui camp electric, fragmentele vor
migra spre anod
O data cu esantionul ADN se pun sa migreze
si markeri ADN cu marime cunoscuta; ofera
posibilitatea calcularii lungimii moleculelor din
esantion
EF in gel de agaroza -separa fragmente ADN 0,1-
20kb
Ef in gel poliacrilamida-(3,5%) frg 1000-2000kb sau
(20%) 6-100 nucleotide
EF in camp electric pulsatil -frg 5Mb
Clonare acelulara a ADN
(PCR)
Amplificare exponentiala a ADN-ului pornind de la
cantitati mici
Principiul extensiei unei amorse (primer sau
amplimer)
2 oligonucleotide care reproduc o secventa de 15-
25 nucleotide situate la capatul 3' a celor doua
catene ale segmentului de ADN; declanseaza
sintezaADNdupa“matrita” fragmentului
Tehnologie automatizata in 3 etape:
I denaturarea ADN la (95º C)
II pozitionarea/hibridizarea primer-ului (50-60º C);
III polimerizarea nucleotidelor sub actiunea ADN-
polimerazei termostabile (72º C)
PCR
Metoda Southern blot
Extragerea ADN genomic
Fragmentarea prin clivare cu ER
Separarea fragmentelor in gel de agaroza
Denaturarea in mediu alcalin a frg bicatenare
Transferarea moleculelor monocatenare pe un suport
solid(filtru de nitroceluloza sau nylon)
Hibridizarea frg cu o sonda monocatenara specifica unei
gene sau marker genotipic , marcata radioactiv
Spalarea: heteroduplexul puternic fixat pe filtru
Punerea in evidenta a duplexului dupa contactul filtrului cu
un film foto (autoradiografie)
Evidentiaza 2 tipuri de mutatii : deletii sau insertii genice >
50-100pb; mutatii punctiforme
Metoda Southern blot
Valoarea tehnicilor de
biologie moleculara
Permit detectarea mutatiilor
Mutatia = orice modificare in secventa sau
aranjarea nucleotidelor din ADN
Mutatiile au consecinte genotipice (asupra
expresiei genei)– depind de tipul si localizarea in
structura genei (la nivelul transcriptiei, procesarii
mARN, al translatiei)
Mutatiile au efect fenotipic (asupra proteinelor)-
mutatiile in diferite regiuni din structura genei
produc o modificare a structurii proteinei (
pierderea functiei, castigul functiei, achizitionarea
unor proprietati noi de catre proteina mutanta)
Bolile monogenice
Boli enzimatice (erori innascute de
metabolism)
Boli prin anomalii ale moleculelor de transport
Boli prin anomalii ale proteinelor structurale
(DMD)
Boli prin anomalii ale proteinelor implicate in
comunicarea intercelulara si controlul
dezvoltarii (neurofibromatoza)
Boli ale proteinelor implicate in controlul
homeostaziei extracelulare (hemofilia)
Fenilcetonuria (PKU)
Boala AR a metabolismului fenilalaninei
Mutatia genei PAH (localizata pe cromozomul
12q 24.1) codifica pentru ezima fenilalanin
hidroxilaza ce transforma fenilalanina in
tirozina
Incidenta: 1:15 000 n.n
Fenilcetonuria
Fenilcetonuria
• Clinic: pigmentatie cutanata redusa (par blond, ochi
albastri) – determinata de deficitul de tirozina si un
precursor al melaninei; tulburari neurologice, retard mental;
mirosulparticularalurinei“(desoarece”)
• Genetica: gena PAH a fost descoperita in
1986; are mare heterogenitate alelica (mutatii
diferite in acelasi locus care produc fenotipuri asemanatoare clinic);au
fost descrise peste 400 de mutatii, 6 fiind
responsabile de 2/3 din cazuri
Fenilcetonuria
Patogenie: deficitul PAH determina incapacitate de
transformare a fenilalaninei in tirozina si acumularea
fenilalaninei si a unor metaboliti ai acesteia (acid fenilpiruvic;
acid fenillactic) producand leziuni SNC; excluderea din
alimentatie a fenilalaninei previne aparitia acestora
1/3 din cazurile cu hiperfenilalaninemie prezinta
deficit ale unor enzime implicate in
metabolismul tetrahidrobiopterinei (BH4) un
cofactor al PAH
Excluderea fenilalaninei din alimentatie nu este
eficienta deoarece BH4 este cofactor pentru
enzime ce intervin in sinteza unor
neurotransmitatori; necesita suplimentarea cu
L-DOPA
Fenilcetonuria
Diagnostic: fenilalanina plasmatica >20mg/dL; eliminare
urinara de acid fenilpiruvic/ortohidroxifenilacetic; tirozina
plasmatica scazuta; important ca diagnosticul sa se
precizeze la n.n deoarece dieta restrictiva in fenilalanina
previne instalarea leziunilor neurologice
Screening: testul Guthrie de inhibitie bacteriana; cateva
picaturi de sange recoltate de regula din calcai la 2-3 zile
de la nastere sunt plasate pe o hartie de filtru speciala;
esantion din picatura de sange uscat este plasata pe o
placa de agar si incubata cu o linie de Bacillus subtilis care
necesita fenilalanina pentru crestere; masurarea cresterii
bacteriene permite determinarea cantitativa de fenilalanina
Fenilcetonuria
Tratament:
- reducerea aportului de fenilalanina
- momentul initierii cat mai precoce
- valoarea pentru fenilalanina sa se mentina
intre 2-10mg/dL (preferabil 6mg/dL)
Mucopolizaharidoze(MPZ)
Boli cu evolutie progresiva
Majoritatea se transmit autosomal recesiv(AR)
exceptie MPZ II- transmitere legata de X
Cauza: acumularea intralizozomala in exces a
MPZ acide datorita deficitului unor enzime
lizozomale
MPZ acide ( glicozaminoglicani) se leaga de
proteine formand proteoglicani (constituienti ai
tesutului conjunctiv)
Enzimele lizozomale degradeaza aceste
macromolecule in componenti mai mici: heparan
sulfat, dermatan sulfat, keratan sulfat (produsi ai
unui proces de degradare incompleta –
acumularea acestora interfera cu functia celulei)
Aspecte clinice
• SNC: hidrocefalie, retard mental, instabilitate
atlantoaxiala
• Cardiac: angina (secundar aterosclerozei);
disfuntii valvulare, HTA, insuficienta cardiaca
• Pulmonar: boala obstructiva, trahee/cai bronsice
inguste; apnee in somn
• Oftalmologic: opacifiere corneeana, scaderea
acuitatii izuale, glaucom, papiloedem cronic,
degenerare a retinei
• ORL : surditate de conductie, neurosenzoriala;
infectii, deformari ale oaselor mici
• Musculoscheletal: statura mica, blocarea
articulatiilor/hiperlaxitate; sdr de tunel carpian
MPZ I (Hurler si Scheie)
• Deficit de α-L-iduronidaza; urinar se
detecteaza dermatan si heparan sulfat
• Sanatosi la nastere; diagnosticul se
contureaza la 6-24 luni
• Clinic: hernie inghinala/ombilicala,hepatosplenomegalie,
opacifieri corneene, deformitati scheletale (dysostosis
multiplex); trasaturi faciale ingrosate , statura mica,
pierdere auz, Retard mental
• Deces in jurul varstei de 10 ani
• MPZ I (Scheie) - debut la varsta de 5 ani;
statura normala; inteligenta normala, speranta
de viata normala
Mucopolizaharidoze(MPZ)
MPZ II (Hunter)
• Deficit de iduronat sulfataza; urinar se
detecteaza dermatan si heparan sulfat
• Debut la 2-4 ani
• Transmitere ereditara legata de X
• Forma severa:
Clinic: leziuni ale pielii, neurodegenerare
progresiva (RM, comporament agresiv);
degenerare a retinei, deformitati ale
scheletului, trasaturi faciale grosolane
Deces 10-15 ani
• Forma usoara: rata progresiei mai scazuta;
inteligenta normala; deces 16-17 ani
MPZ II (Hunter)
MPZ III (Sanfilippo)
• Deficit de heparan N-sulfataza; in urina se
pune in evidenta heparan sulfatul
• Debut 3-6 ani
• Clinic: implicare severa a SNC; trasaturi
grosolane,hirsutism,usoara
hepatosplenomegalie,hidrocefalie; devin
agresivi; profund retardati
• Deces:20-30 ani
MPZ IV (Morquio)
• Necesar de apa
• Necesar energetic
b) AA semi-esentiali
d) AA potential esentiali
• Steroli, sfingomieline
• Ofera energie.
• Alimentatie la cerere
• Alaptare ineficienta
2) Proteine
• Cazeina: 20-30%
3) Lipide
• Lactoza=aproape 6g/100ml
• Hidrolizata de lactaza in intestinul subtire
• Rol fermentativ, prebiotic
• Principalul component osmotic al laptelui uman
• Oligozaharide
• Ca/P=2-2,2 (absorbtie=75-80%)
• Fe=0,3 (absorbtie=50%)
6) Vitamine
7) Osmolaritate: 98mOsm/l
LAPTE UMAN
7) Factori protectori
• Efect analgezic
• Reflux gastrointestinal mai rar la sugarii alaptati (timp de
digestie=1,5 ore la sugarii alaptati / 3-4 ore la cei
alimentati cu formule de lapte)
AVANTAJELE ALAPTARII
• La mama
• Grabeste involutia uterine postpartum
• Intarzie menstruatia, contraceptie naturala
• Protejeaza impotriva cancerului de san si ovar,
osteoporozei, DZ tip 2
• Accelereaza scaderea in greutate
• Scade riscul aparitiei anemiei postpartum
• 5-8 scaune/zi
• 6-10 mictiuni/zi
• Conditii permanente
• Legate de mama: tuberculoza, hepatita, HIV/SIDA,
malarie, sepsis, malignitati, insuficienta cardiaca sau
renala, boli neuropsihiatrice, boli endocrine
• Legate de sugar: galactozemie, intoleranta la lactoza,
fenilcetonurie
LAPTE DE VACA
• Proteine x 3
• Contine β lactoglobulina (alergenica)
• Raport ser/cazeina inadecvat
• Lactoferina, IgA in cantitati mici
• Necesita adaos de cisteina, taurine, nucleotide
• Valoare energetica=60-70kcal/100ml
• Proteine: 1,8-3g/100kcal
• Sursa: laptele de vaca
• Proteine ale serului/cazeina: 60/40
• Minerale si vitamine
• Aprox ca in laptele uman
• Ca, P x 2 decat in laptele uman, biodisponibiliate mai
scazuta
• Fe scazut -> suplimentarea formulelor
• Ex: PreNan
FORMULE-hipo/delactozate
• Indicatii
• Boli asociate cu scaderea sau absenta activitatii
lactazei/intoleranta la lactoza (primara sau secondara -
post gastroenterita acuta, diaree cronica, sindroame de
malabsorbtie sau malnutritie)
• Galactozemie
FORMULE-proteine hidrolizate
• Proteine: AA/peptide din proteine hidrolizate din laptele
de vaca 12-15% (partial) -> 50-55% (extensiv)
• Indicatii
• Intoleranta la proteinele laptelui de vaca (asociata
frecvent cu intoleranta la lactoza in boli diareice
acute/recurente)
• Intoleranta la proteinele din soia
• Malabsorbtie / maldigestie
FORMULE-speciale
• Fortificatori de lapte uman
• Se incepe cu:
- cereale (distrofici)
- piureuri de fructe sau legume (eutrofici)
- alimente proteice (pasare, vita, peste, galbenus de
ou), iaurt, branza