Ecuația Michaelis-Menten

 ES 
E  S   E  P
k1 k2

k1 k2
➢ Curba obținută pentru reacțiile enzimatice nu poate fi comparată cu
modelele standard ale reacțiilor chimice omogene. Prin urmare a fost
necesară o altă abordare, a fost introdus ca termen de măsurare a vitezei
de reacție viteza inițială.

Viteza inițiala pentru fiecare concentrație

inițială de substrat este măsurata la timpul
zero, când efectul reacției inverse este
neglijabil.
 Ecuația Michaelis-Menten

 k1
E  S  ES  E  P k2
k1

Viteza de reacție: V0  Vmax

 S
KM  S 

Vmax - viteza specifică maximă - când

centrii activi ai enzimei sunt saturați cu Vmax  k2  [ E ]
substrat:

k1  k2
KM - constanta de afinitate: KM 
k1
Din punct de vedere matematic cinetica enzimatică este determinată
de o serie de constante de reacție și de parametrii, precum: KM, Vmax,
kcat etc.

Problema actuală a biochimiștilor: determinarea exactă a parametrilor

cinetici esențial în studiul diferitelor enzime.

Cele mai întâlnite metode de determinare a parametrilor ecuației M-M

disponibile în literatură:
- Liniarizarea Langmuir (Hanes-Woolf)
- Liniarizarea Lineweaver-Burk
- Liniarizarea Eadie-Hofstee
 Liniarizarea Langmuir
Vmax   S 
V  y  ax b
KM  S 

S  [ S ] Vmax
S   V
K M  [S ] 
V

K M [S ] [S ] S    S
 KM

Vmax V V Vmax Vmax
 Liniarizarea Langmuir
S 
V y  ax b

1 S   KM

 S
KM Vmax
V Vmax Vmax
Vmax

[S ]

Dezavantaje: atât pe abscisă, cât și pe ordonată nu sunt prezentate

variabile independente; în acest caz ambele variabile depind de concentrația
substratului.
 Liniarizarea Lineweaver – Burke
Vmax   S 
V  y  ax b
KM  S 

1 1 1 K M  [S ]
 
V [S ] V Vmax  [ S ]

1 KM [S ] 1 KM 1 1
    
V Vmax  [ S ] Vmax  [ S ] V Vmax [ S ] Vmax
 Liniarizarea Lineweaver – Burke

1 y  ax b
V
KM
1 KM 1 1
1
Vmax   
Vmax V Vmax [ S ] Vmax

1
[S ]
Această formă de linearizare prezintă o serie de dezavantaje pentru că
erori experimentale mici pot genera erori mari pentru valorile constantei KM
determinate grafic în special la valori mici ale concentraţiei substratului.
 Liniarizarea Eadie – Hofstee
Vmax   S 
V  y  ax b
KM  S 

V V Vmax
V 
[S ] [S ] [S ]  K M

V V V
 [ S ]   K M  Vmax V  Vmax  K M 
[S ] [S ] S 
 Liniarizarea Eadie – Hofstee
Vmax
y  ax b

V
V V  Vmax  K M 
S 
Vmax
S 
V
S 
 Aceste metode au fost folosite de-a lungul timpului pentru a determina
rapid cei doi parametrii cinetici importanți.
În momentul de față aceste metode au fost înlocuite cu metode de
regresie neliniară, care sunt mult mai precise.