CURS 2

GENETICA UMAN

U.M.F IAI

B.

STRUCTURA GENOMULUI UMAN

Genomul uman (GU) =

coninutul ADN celular sau ansamblul integrat al celor 25 de molecule diferite de ADN (24 n nucleu: 22 autosomi+X+Y i 1 n mitocondrii), = 3,2 miliarde de pb

GU = un genom nuclear (complex, 99,5% ADN) + un

genom mitocondrial (simplu i mic, 0,5%).

U.M.F IAI

2. STRUCTURA GENOMULUI UMAN

GU = un genom nuclear (complex, 99,5% ADN) +
un genom mitocondrial (simplu i mic, 0,5%).

25.000 gene

U.M.F IAI

2.1. GENOMUL NUCLEAR

Enorm (3,2 miliarde pb), Fragmentat: (22A+X+Y) molecule de ADN + proteine cromozomi Complex, heterogen: ADN nerepetitiv ADN moderat repetitiv ADN nalt repetitiv ADN genic (25%) + ADN extragenic (75%)

U.M.F IAI

2.1. Genomul nuclear a) ADN GENIC (25%)

Gena = unitatea de informaie genetic codific un produs primar specific (proteine sau ARN) Structura genelor este foarte complex - ADN genic:

25.000 gene

ADN codant = exoni (10%) ADN necodant (90%) = introni, secvene reglare, gene nefuncionale (pseudogene) sau fragmente de gene

- Gene ce codific proteine (1,5%), - Gene ce codific ARN

U.M.F IAI

b) ADN EXTRAGENIC (75%)

Secvene netrasncrise (necodante);
Funcii puin cunoscute:

- rol tampon a mutaiilor; - mperecherea corect a

cromozomilor omologi n meioz i schimbul egal (CO) de segmente cromozomiale recombinare genic surs de variabilitate !!!.

Alctuit din:

ADN nerepetitiv = secvene unice sau un nr mic de copii (60%) ADN repetitiv (40%).

U.M.F IAI

(1) ADN EXTRAGENIC

NEREPETITIV (60%)

SECVENELE UNICE sau SECVENE NTR-UN NR MIC DE COPII

DUPLICAII SEGMENTALE (5% GU) blocuri (~10Kb) ce flancheaz genele (pe acelai cromozom) ; rol n sinapsa corect a omologilor in meioz * . Importan: fiind identice - pot genera erori de mperechere a cromozomilor omologi CO inegal mutaii: duplicaii /deleii genice BOLI GENOMICE

Duplicaie genic

gen CO inegal

Deleie genic

HMSN = neuropatie ereditar motorie i senzorial HLPP = neuropatie ereditar cu predispoziie la pareze presionale

U.M.F IAI

(2) ADN EXTRAGENIC REPETITIV (40%)

ADN moderat repetitiv (~30%): secvene scurte repetate de sute de mii de ori, dispersate n genom
(ex SINEs i LINEs)

ADN nalt repetitiv (~10%): secvene foarte scurte, repetate n tandem , de milioane de ori; 3 tipuri:
ADN satelit (blocuri HCRT la centromer, telomere, CS) = rol structural; ADN minisatelit (minisatelii hipervariabili), dispersat n toi cromozomii = markeri genetici individuali = folosii n amprenta genetic ADN microsatelit

AMPRENTA GENETIC (DNA fingerprint)

U.M.F IAI

3. GENOMUL MITOCONDRIAL
ADNmt cteva mii de copii per celul = 0,5% Genomul mitocondrial difer de genomul nuclear: mic (16.569 pb); circular; neasociat cu proteine; fr ADN repetitiv; compact: 97%=secvene codante 37 de gene:

Codul genetic mitocondrial

difer puin de cel nuclear

contigue, fr introni.

U.M.F IAI

GENOMUL MITOCONDRIAL

Genomul mitocondrial al zigotului provine, prin ovul, exclusiv de la mam.

ADNmt poate suferi mutaii germinale sau somatice Mutaiile germinale produc o serie de boli degenerative n SNC, SNP, muchi, etc, care se transmit maternal: de la mam la toi descendenii; brbaii bolnavi nu transmit boala

U.M.F IAI

ADNmt poate suferi mutaii somatice, dup natere:

(generai n mitocondrii); favorizate de structura ADNmit (absena histonelor; densitate mare de gene; etc) Mutaiile se acumuleaz rapid datorit absenei mecanismelor de reparare Determin scderea produciei de energie boli degenerative, cancer i senescen

produse de radicalii liberi de O2

U.M.F IAI

1. APARATUL GENETIC AL CELULEI

(v. LP 1) APARATUL GENETIC:

structurile celulare care conin ADN: nucleul + mitocondriile

(1). NUCLEUL 99,5% ADN ADN + proteine (fibre) CROMATIN CROMOZOMI.
Cromatina i cromozomii = dou modaliti diferite de organizare morfo - funcionl a materialului genetic n inetrfaz i diviziune.

(2). MITOCONDRIILE 0.5% ADN, origine exclusiv matern.

U.M.F IAI

2. CROMATINA

(v. LP ) 2.1. EUCROMATINA I HETEROCROMATINA

CROMATINA = ADN + proteine

Exclusiv n nucleu! Dou tipuri morfo-funcionale distincte: - EUCROMATINA activ genetic dispersat - HETEROCROMATINA inactiv genetic condensat (cromocentri)

Caracteristici Condensare Colorare

EUCROMATINA Fin dispersat Slab

HETEROCROMATINA Puternic condensat (cromocentri) Intens

Replicare n faza S
Activitate genetic Compoziie chimic Rol morfologic

Precoce
Activ Predomin p.b. C - G; ADN nerepetitiv; proteine nehistonice Alctuiete benzile R pozitive (sau G negative)

Tardiv
Inactiv Predomin p.b. A - T; ADN repetitiv; proteine histonice Alctuiete benzile R negative (sau G pozitive)

U.M.F IAI

EUCROMATINA I HETEROCROMATINA

(v. LP )

HETEROCROMATINA:
constitutiv constant n structura cromozomilor: benzi G, benzi C (cen, Yq, p A, CS) facultativ diferit n celule / organisme diferite (hetrocromatinizarea o form de reglaj genic) ex., cromatina sexual

U.M.F IAI

2.2. CROMATINA SEXUAL

(v. LP )

CROMATINA SEXUAL - definiie:

un corpuscul de HCRT, = cromocentru poziie, mrime, form ali cu particulariti morfologice bine definite, cromocentri care permite identificare NR cromozomilor sexuali - determinarea sexului genetic (XX sau XY); - anomaliile cromozomilor sexuali (XO, XXX, XXY). La femeie: cromatina X (corpusculul Barr) Morfologie v.LP La brbat: cromatina Y (corpusculul F)

U.M.F IAI

ORIGINEA CROMATINEI SEXUALE

CROMATINA X: rezult prin inactivarea unui cromozom X (la femeile XX) va forma (prin heterocromatinizare) corpusculul Barr

Ipoteza Lyon (1961): (1) inactivarea cromozomului X este total; ambele sexe un singur X activ. (corect = parial* regiuni/gene active n ambii cromozomi X) (2) se produce precoce (i.u) i este definitiv; (posibil = uneori reversibil) (3) are loc la ntmplare (XM sau XP) i independent n fiecare celul (posibil = uneori ne ntmpltoare)

Inactivarea ntmpltoare (XM sau XP) i independent n fiecare celul femeile sunt un MOZAIC celular*
Femeile heterozigote XN Xa
sntoase?

U.M.F IAI

a = displazie ectodermal anhidrotic

U.M.F IAI

Numrul c. Barr = suma cromozomilor X (numrul cromozomilor X = nr. c. Barr + 1)

DIAGNOSTIC
Nr. C. Barr
0

Femeie
1 XX 2 0 XY

Brbat
1 2

Sex genetic
(n stri intersex) Anomalii de numr cromozomi sexuali n obs. clinice de disgenezii gonadice
XO

XXX

XXY XXYY

XXXY

U.M.F IAI

CROMATINA SEXUAL

CROMATINA Y: reprezint heterocromatina de pe 2/3 distale bra lung cromozom Y (colorat cu flurocromi ex., quinacrin i vizibil la microscop UV ca un corpuscul fluorescent ) corpuscul F) exclusiv la barbati Nr. corpusculi F = nr. cromozomi Y ex., brbaii XYY au 2 corpusculi F

U.M.F IAI

2.3. STRUCTURA SUPRAMOLECULAR A CROMATINEI

Analiza cromatinei la microscopul electronic evideniaz un sistem ierarhizat de compactare a moleculei de ADN fibre de cromatin,
de dimensiuni diferite, alctuite din ADN, histone i proteine nehistonice.

U.M.F IAI

1) Filamentul cu nucleozomi (10nm)

Un segment de ADN (146 pb) - se nfoar (1 tur i 3/4) - n jurul unui "miez" histonic, cilindric (8 mol.) un NUCLEOZOM. Nucleosomii legai printr-un segment de ADN liniar (60 p.b.) FILAMENTUL CU NUCLEOZOMI (~ "irag de mrgele"). FN - meninut mpachetat de ctre histona H1, ce leag doi nucleozomi vecini. Rat de "compactare" a ADN nativ este de circa 10:1

U.M.F IAI

2) Fibra de cromatin (30nm)

Filamentul cu nucleozomi se spiralizeaz n solenoid fibra de cromatin (FC) (30 nm) Rat de "compactare" a filamentului cu nucleozomi este de circa 5:1

U.M.F IAI 3) Fibra pliat n bucle laterale (300

nm)
FC (30 nm) se pliaz n bucle laterale ataate la un schelet de proteine nonhistoince FPBL = 300nm O bucl (domeniu crs) de ~75Kb cteva gene = unitate funcional (de transcripie i replicare). Rat de "compactare" este de circa 10:1

U.M.F IAI

4) Cromozomul metafazic (300 nm)

n profaz fibra de cromatin se condenseaz (20:1) cromatida (700 nm) unui cromozom Cromozomii grad maxim de condensare n metafaza diviziunii

U.M.F IAI

STRUCTURA SUPRAMOLECULAR A CROMATINEI sintez

ADN

FILAMENT F I B R A FIBRA CU DE PLIAT NUCLEOSOMI CROMATIN N BUCLE

CROMATIDA UNUI CROMOZOM

INTERFAZA

DIVIZIUNE

Fiecare cromatid are o singur molecul de ADN

organizat n mai multe structuri succesive i ierarhizate, compactat de ~ 10.000 ori, pentru a face posibil:
localizarea n nucleu distribuia corect a materialului genetic n diviziune

U.M.F IAI

STRUCTURA SUPRAMOLECULAR A CROMATINEI Sintez Buclele fibrei de 300 nm se fixeaz neregulat de scheletul proteic:
zone cu mici aglomerri = cromomere zone mai laxe

Prin condensarea cromatidei n profaz, cromomerele se unesc i formeaz benzi intens condensate i colorate (benzi G + = heterocromatin) care alterneaz cu benzi mai puin condensate i mai clare (benzi R + = eucromatin).

U.M.F IAI

STRUCTURA SUPRAMOLECULAR A CROMATINEI

Sintez

Fiecare cromozom are o structur intern eterogen caracteristic (permite identificarea lui precis)

U.M.F IAI

3. CROMOZOMII UMANI

CROMOZOMI = organite nucleare care fixeaz intens colorani bazici (chroma + soma) Funcii:
Transport + distribuie materialul genetic n cursul diviziunii stabilitatea proceselor ereditare. Asigur recombinarea genetic n meioz

U.M.F IAI

3.1. MORFOLOGIA CROMOZOMILOR UMANI a). Elemente comune tuturor cromozomilor: Cromatidele
Centromerul

(1) COMATIDELE - Crz = bicromatidian dup replicare; - Cromatidele surori 1 molecul de ADN + Pr

Telomerele

U.M.F IAI

a). Elemente comune tuturor cromozomilor (2) CENTROMERUL

locul de ataare a cromatidele surori (prin proteina ISS) unic constricie primar mparte cromatidele n braele p i q poziie fix determinat de o secven ADN repetitiv (ADN satelit) identic la toi cromozomii) + ADN specific fiecrui cromozom; cromozomi M, SM, A

U.M.F IAI

a). Elemente comune tuturor cromozomilor

(2) CENTROMERUL

Rol esenial pentru SEGREGAREA cromozomilor din cursul diviziunii celulare:

La ADN cen se fixeaz proteine CENP = kinetocorii locul de fixare a filamentelor fus de diviziune ce vor tracta cromatidele la poli (n anafaz)

U.M.F IAI

a). Elemente comune tuturor cromozomilor

(3) TELOMERELE = structuri specializate, formate din ADN repetitiv + proteine asociate, care acoper i protejeaz capetele cromozomilor.

Funcii:
meninerea integritii structurale; asigurarea replicrii complete; poziionare cromozomilor omologi n nucleu

b). Elemente caracteristice unor cromozomi

(1) SATELIII = mase mici de heterocromatin ataate pe braele scurte ale cromozomilor acrocentrici (exceptnd Y) = variante normale (2) CONSTRICIILE SECUNDARE= blocuri de heterocromatin situate pe 1q, 9q, 16q lng centromer = variante normale (3) SITUSURILE FRAGILE = lacune necolorate pe cromatidele unor cromozomi. Majoritatea = variante normale; excepie fra Xq27 asociat cu retard mintal = Sdr. X fragil (RMLX-1:4000 nn)

U.M.F IAI

CS

SF

SF

U.M.F IAI

c). Elemente specifice fiecrui cromozom: BENZILE

Prin diferite tratament se observ pe cromozomii metafazici o serie continu de benzi longitudinale, - unele intens colorate (benzi G) - ce alterneaz cu benzi slab colorate (benzi R)

U.M.F IAI

c). Elemente specifice fiecrui cromozom: BENZILE

Benzile reflect structura intern, heterogen, a cromozomilor. Fiecare cromozom are un model caracteristic de benzi identificarea sa precis.

U.M.F IAI

3.2. TEHNICI DE ANALIZ CROMOZOMIAL (v LP) a). Principiile metodelor (!!!) (1) Obinerea de celule n diviziune:
Culturi celulare: limfocite, fibroblaste, celule fetale ( amniocentez);
- 0,5 ml snge periferic (recoltat steril, pe heparin) mediu cultur cu PHA (stimuleaz diviziunile) 72 ore

esuturi care se divid activ: mduv osoas ( punvie medular), trofoblast ( placentocentez);

(2) Obinerea de celule n metafaz: blocare cu colchicin (3) Obinerea preparatelor: hipotonizare, fixare, etalare pe lame, colorare, tehici de marcaj n benzi. (4) Analiza preparatelor* cariotip

U.M.F IAI

EVOLUIA TEHNICILOR DE ANALIZ CROMOZOMIAL (v LP)

(1) TEHNICI DE GENERAIA I (1956) - cromozomi uniform colorai; - identificare imprecis* (2) TEHNICI DE GENERAIA II (1970) - marcaj n benzi G sau R cromozomi metafazici (400 benzi); - identificare precis

GI

G II

Identificarea precis a cromozomilor

U.M.F IAI

TEHNICI DE ANALIZ CROMOZOMIAL (v LP)

(3) TEHNICI DE GENERAIA III (1977) - nalt rezoluie: cromozomi pro-matafazici (550 benzi) sau profazici (850 benzi) - o band = 3-5 Mb

PM

TEHNICI DE ANALIZ CROMOZOMIAL (v LP)

U.M.F IAI

(4) TEHNICI DE GENERAIA IV (1991) - citogenetic molecular - FISH metafazic - se pot identifica f. precis remanierile cromozomiale i microdeleiile - FISH interfazic

t(1q;2q)

Trisomie 21

Del 15q

Sindromul Velo-Cardio-Facial: del 22q11