STRUCTURA I FUNCIA GENELOR

Conf. dr. E.V. GORDUZA

11

U.M.F IAI

1. GENA - UNITATE DE STRUCTUR A MATERIALULUI GENETIC

GENA = un segment de cromozom,

precis delimitat, continuu (indivizibil), ocup o poziie fix, numit locus* determin un anumit caracter
--------------------------* Plural = loci

GENA X
CARACTER
locus

Cromozom

U.M.F IAI

Polialelie
GENA
O gen (A) mai multe mutaii diferite alele multiple (A1, A2, A3), cu efecte fenotipice (N sau An) Cromozom limitate la acelai caracter. Locusul ABO : alele A1, A2, B i O

GENE ALELE. POLIALELIE

PROTEIN

mutaie 1

CARACTER

mutaie 2

Culoarea ochilor (ochi negri) Gene alele

M1

Variant / alel normal

OCHI ALBATRI

O gen normal poate suferi o mutaie * ce produce o variant a genei numit alel. ALELA este o form alternativ a genei. - ocup acelai locus, - influeneaz acelai caracter*

M2

Variant / alel anormal

ALBINISM OCULAR

U.M.F IAI

GENE ALELE. POLIALELIE

Un caracter (fenotip) va fi determinat de o pereche de gene alele (genotip*) situate n aceeai poziie (locus) pe cromozomii omologi. Genele alele segreg n meioz:
gameii (haploizi) sunt puri genetic (posed o singur alel); Genele alele situte pe o pereche de crz. omologi (ex., Dd) segereg (n meioz) independent de genele alele situate pe alt pereche (ex., Mm) formndu-se gamei cu combinaii genice diferite.
4

U.M.F IAI

HOMOZIGOT. HETEROZIGOT. HEMIZIGOT

Genele alele (N sau A), ce ocup loci omologi, pot fi :

identice (NN sau AA) HOMOZIGOT diferite (Na sau An) HETEROZIGOT ( A1A2 ) HETEROZIGOI COMPUI

La brbaii XY o gen autozomal de pe X nu are echivalent a pe Y genotip HEMIZIGOT (X Y)

U.M.F IAI

DOMINANT. RECESIV. CODOMINANT

La heterozigoi, genele alele diferite se pot manifesta fenotipic diferit, n funcie de "fora" lor de expresie. GenotipFenotip Gena i caracterul care se A1A1 A1 manifest la heterozigoi sunt numite dominante. A1A2 A1 Ex., Genele ABO Na caracter N A1 o A1 [(A1>A2)=B]>0 An caracter A B B B Gena (a sau n) care NU se B o B manifest la heterozigoi se A1B A1B numete recesiv; A2B A2B ea se exprim numai la homozigoi (aa sau nn). Dac ambele gene alele se manifest fenotipic la heterozigoi codominante 6

U.M.F IAI

B. CONCEPIA ACTUAL DESPRE STRUCTURA GENEI

GENA = un ansamblu liniar de secvene nucleotidice de ADN necesar pentru a produce un produs funcional: un polipeptid sau o molecul de ARN Gena este o unitate de transcripie. Genele :
segmente de ADN, imprecis delimitate divizibile = structur discontinu ocup un locus distinct
7

U.M.F IAI

1. ANATOMIA UNEI GENE CARE CODIFIC PROTEINE

prezint o regiune central, transcris integral n ARN mesager precursor, numit "cadrul de lectur" al informaiei genetice necesar pentru sinteza proteinei; flancat de dou pri laterale, ne transcrise, cu rolul de a regla expresia genei

U.M.F IAI

ANATOMIA UNEI GENE CARE CODIFIC PROTEINE

1.1.REGIUNEA CENTRAL transcris integral n ARN mesager precursor (ORF*); alternana de secvene codante = exoni i necodante = introni ncepe cu: - situsul de iniiere al transcripiei (SIR sau INR) i - regiunea netrasnlat 5UTR ce conine i codonul iniiator ATG
5-CCAGCCATG-3
9
* ORF=

Situs de iniiere al transcripiei codon iniiator

open Reading Frame

U.M.F IAI

REGIUNEA CENTRAL A GENEI

EXONII secvene transcrise n pre ARNm i pstrate n ARNm matur. Regiuni codante pt anumite pri din protein = domenii.

10

U.M.F IAI

REGIUNEA CENTRAL A GENEI

INTRONII (secvene intercalante = IVS) Secvene necodante Transcrise iniial n preARNm i apoi decupate precis i ndeprtate din ARNm matur, alctuit numai din asamblarea exonilor (matisare) ncep cu 5 GT i sfresc cu AG 3 semnale pentru decuparea precis*. Rol puin cunoscut probabil n matisarea alternativ (selecia anumitor exoni)
11

U.M.F IAI

REGIUNEA CENTRAL A GENEI

Regiunea central se termin cu o secven 3UTR necodant ce conine:

Unul din codonii stop (TAA; TAG, TGA) Situsul de terminare al transcripiei (AATAAA) Situsul de poliadenilare locul de desprindere a moleculei de ARNm sintetizat i adugare unui segment poliadenilic (rol n stabilitatea i transportul ei din nucleu)
12

U.M.F IAI

ANATOMIA UNEI GENE CARE CODIFIC PROTEINE

1.2. REGIUNILE LATERALE Flancheaz regiunea central (ORF) Netranscrise

Rol de reglare a transcripiei

13

ANATOMIA UNEI GENE CARE CODIFIC PROTEINE

a). Regiunea lateral 5' (n amonte de ORF)

U.M.F IAI

3 situsuri:
PROMOTOR Situs de specificitate tisular Situs de modulare a activitii genice

Servete la: iniierea transcripiei (fixarea ARN polimerazei) reglarea anumitor gene n anumite esuturi (specificitate tisular), n anumite stadii de dezvoltare (specificitate temporal) sau la anumite semnale / stimuli din mediu (ex. hormoni) Reglarea intensitii transcripiei (activator/ inhibitor)

14

U.M.F IAI

REGIUNEA LATERAL 5

PROMOTORUL conine mai multe elemente sau module pe care se ataeaz proteine reglatoare (trans-activatoare) numite factori de transcripie (TF II); TF se fixeaz la miezul promotorului (TATA; CAAT; GC) i are rolul s fixeze, s poziioneze i s activeze ARN polimeraza II, astfel ca transcripia s nceap exact la SIT, cu primul nucleotid (+1) Ali TF regleaz specificitatea tisular, rspunsul la semnale i intensitatea transcripiei
15

U.M.F IAI

b. REGIUNEA LATERAL 3

Regiunea lateral 3' - situat n aval de cadrul de lectur al genei.

o secven netranscris, imprecis delimitat i cunoscut, rol structural i funcional.
n aceast regiune se gsesc secvene semnal care afecteaz procesarea, stabilitatea i durata de via a ARNm.

16

FUNCIA GENEI
171

A.1. GENERALITATI

Relaia "o gen un caracter

O GEN BOAL UN CARACTER FENOTIPIC

FUNCTIE GENIC

Excepii de la regula "o gen un caracter:

Poligenie; Pleiotropie; Interaciuni genice; Eterogenitatea genetic
18

A.2. POLIGENIA

unele caractere sunt determinate prin aciunea conjugat a mai multor perechi de gene alele, care ocup loci diferii; fiecare pereche de gene are efecte cantitative mici i aditive
MAI MULTE GENE UN CARACTER FENOTIPIC

abaterea de la regula "o gen un caracter" este aparent, deoarece fiecare gen determin o parte din caracter
19

A.2. POLIGENIA

distribuia caracterului n populaie corespunde unei curbe de tip Gaussian (distribuie continu); genele implicate acioneaz independent, iar expresia lor este influenat de factori de mediu caractere multifactoriale normale (talia, tensiunea arterial, culoarea pielii, inteligena) sau anormale (bolile comune ale adultului, malformaiile congenitale izolate, unele forme de cancer )
20

A.2. POLIGENIA

70

80

90

100 110

120 130 140 150 160

Distribuia valorilor normale ale tensiunii arteriale sistolice ntr-un lot populaional neselecionat

21

A.3. PLEIOTROPIA

efecte fenotipice multiple determinate de o singur gen mutant (dominant) sau o pereche de gene mutante (recesive);
dou tipuri de pleiotropie:
pleiotropie relaional pleiotropie nerelaional
22

A.3. PLEIOTROPIA

Pleiotropie relaional corelaie patogenic mutaia genic efectele fenotipice; exemple:

sindromul Marfan, osteogenesis imperfecta, fibroza chistic albinismul

23

24

Sindromul Marfan Inciden 1/10.000 de nou-nscui Tip de transmitere dominant autosomal Genetic mutaia genei fibrilinei Patogenie prezena unei fibriline anormale determin modificri ale esutului conjunctiv din sistemul osteoarticular, pereii vasculari i ligamentul suspensor al cristalinului. Diagnostic clinic se bazeaz pe evidenierea a trei categorii de semne i simptome: -oculare miopie, ectopie cristalinian; -scheletice membre lungi i subiri (dolicostenomelie) deformri sternale (pectus excavatum sau carinatum) scolioz, degete lungi i subiri (arahnodactilie) i hipermobilitate articular (luxaii frecvente); -cardiovasculare regurgitaie a sngelui din ventricolul n atriul stng datorit prolapsului de valv mitral i dilataii ale peretelui aortic (anevrisme) care induc o insuficien ventricular stng. Diagnostic paraclinic radiografii scheletice, ecografie cardiac, aortografie, examene oculare. Prognostic risc crescut de moarte subit prin ruptura peretelui aortic i risc de moarte prin insuficien cardiac. Tratament corectarea deficitelor de vedere, evitarea eforturilor fizice mari, 25 medicaie -blocant pentru a reduce fora contraciei cardiace.

HIPERMOBILITATE ARTICULAR

26

ARAHNODACTILIE

27

DEFORMAII SCHELETICE

28

SUBLUXAIE DE CRISTALIN

29

PROLAPS DE VALV MITRAL

30

ANEVRISM AORTIC

31

A.3. PLEIOTROPIA

Pleiotropie nerelaional Nu exist corelaie patogenic mutaia genic efectele fenotipice; exemplu:
sindromul Moon - Bardet Biedl:
polidactilie obezitate, surditate, hipogonadism, retinit pigmentar retard mintal
32

OBEZITATE

33

HIPOGONADISM

POLIDACTILIE

34

RETINIT PIGMENTAR

35

A.4. INTERACTIUNI GENICE

Interaciuni alelice;
Interaciuni non-alelice; Interaciuni cu mediul.

36

A.4. INTERACTIUNI GENICE

Interaciuni alelice; Dominan-recesivitate.

A1>0 sau B > 0
A1 > 0
Genotip Antigen A1A1 A10 00 A1 H Fenotip Anticorpi i anti-H i Grup sanguin A1 0
37

A.4. INTERACTIUNI GENICE

Interaciuni alelice;
Codominan.
A1 = B
A1 = B Genotip Antigen A1A1 A1B BB A1 A1 i B B Fenotip Anticorpi i anti-H anti-H i anti-H Grup sanguin A1 A1B B
38

A.4. INTERACTIUNI GENICE

Interaciuni non-alelice;
epistazie.
Expresia fenotipic a unei perechi de gene alele poate fi influenat de aciunea altor perechi de gene alele, care ocup loci diferii de pe acelai cromosom sau de pe cromosomi diferii; lanuri metabolice > enzime (gene diferite) caracter fenotipic:
mutaia oricrei gene caracter anormal

39

A.4. INTERACTIUNI GENICE

Interaciuni cu mediul
Modificarea aciunii unor gene de ctre factori de mediu.
Expresivitate variabil Penetran incomplet

40

Interaciuni gene - mediu

EXPRESIVITATE VARIABIL

GEN

FENOTIP MODIFICAT

MEDIU

PENETRAN INCOMPLET

41

A.4. INTERACTIUNI GENICE

Interaciuni cu mediul
Expresivitate variabil
manifestarea variabil a aceleiai boli la indivizi afectai din aceeai familie sau din familii diferite; expresivitatea variabil poate interesa:
spectrul de semne manifeste, severitatea afeciunii, vrsta de debut a bolii

42

PENETRAN INCOMPLET
Penetrana - noiune cantitativ evideniat n bolile dominante raportul nmulit cu 100 dintre numrul de indivizi care manifest boala i numrul de purttori ai genei mutante A

B p= 100 AA + An
Penetran - complet toi heterozigoii = bolnavi p = 1;
Penetran incomplet unii heterozigoi = sntoi p < 1 Exemple de boli cu penetran incomplet:
exostoza multipl p = 60%,

otoscleroza p = 50%,
retinoblastomul p= 80% osteogenesis imperfecta p = 90%.
43

A.5. ETEROGENITATEA GENETIC

fenotipuri identice (asemntore) mutaii genice diferite Tipuri:

eterogenitate de locus sau nonalelic, eterogenitate alelic eterogenitate clinic ;

44

Boal

Caracteristici clinice Retinopatie progresiv cu pierderea vederii Fracturi la traumatisme surditate, sclere albastre Neuropatie periferic minore,

Loci 20 loci 7, 17 1, 5, 8, 11, 17, X 1, 14, 19, 21 de

A.5. ETEROGENITATEA GENETIC

Retinit pigmentar Osteogenesis imperfecta Boala CharcotMarie-Tooth

Eterogenitatea de locus fenotipuri identice (asemntore) mutaii diferite n gene diferite

Boala Alzheimer

Demen senil progresiv

Melanomul familial
Hemofilia

Tumori maligne melanocite

derivate

din

1, 9
X

Tulburri de coagulare, sngerri masive, hemoragii interne i intraarticulare Cancer colorectal cu dominant autosomal transmitere

Cancerul colorectal nonpolipozic ereditar Cancer de sn dominant autosomal Scleroza tuberoas

2p, 2q, 3, 7 13, 17 9, 16

Debut precoce al cancerului de sn i ovarian Crize comiiale, angiofibroame faciale, macule tegumentare hipopigmentate, retard mental Chiti diseminai n ambii rinichi insuficiene renale cronice

Boala polichistic renal a adultului

4, 16

45

RETINIT PIGMENTAR
GENE AUTOSOMALE
TRANSMITERE RECESIV 12 FORME TRANSMITERE DOMINANT 5 FORME

GENE PE CRS. X
TRANSMITERE RECESIV 3 FORME

Degenerescena celulelor cu bastonae

Degenerescena celulelor cu conuri

Degenerescena vaselor retiniene

Depunere de pigment pe retin

MODIFICRI FIZIOPATOLOGICE
Pierderea vederii nocturne Pierderea vederii diurne Vedere n tunel

ORBIRE

MODIFICRI CLINICE
46

A.5. ETEROGENITATEA GENETIC

Eterogenitatea alelic
mutaii genice diferite n aceeai gen boli diferite exemplu mutaii n gena distrofinei:
Distrofia muscular Duchenne; Distrofia muscular Becker

47

DISTROFIA DUCHENNE Inciden 22/100.000 nou-nscui biei; Transmitere recesiv legat de cromosomul X; Genetic deleia genei distrofinei (localizat Xp21) determin absena sintezei distrofinei Patogenie absena distrofinei determin: leziuni membranare ale fibrei musculare i anomalii ale jonciunii sinaptice; fibrele musculare sunt nlocuite cu esut conjunctiv; Diagnosticul clinic se bazeaz pe: -apariia de slbiciune muscular la nivelul membrelor inferioare, asociat cu probleme de mers (urcatul scrilor) i greuti la ridicatul de pe scaun, ncepnd cu vrsta de 3 ani; -paralizie a membrelor inferioare ncepnd cu vrsta de 10 12 ani; -deces la 20 de ani prin insuficien respiratorie sau cardiac; Diagnostic paraclinic nivel crescut de 50-100 de ori al creatininei serice, absena distrofinei n muchi, identificarea mutaiei prin tehnici de analiz a ADN-ului; Prognostic deces la 20-25 de ani; Tratament nu exist tratament.

DISTROFIA BECKER Inciden 3,8/100.000 biei; Transmitere recesiv legat de cromosomul X; Genetic mutaia genei distrofinei determin sinteza unei proteine anormale; Patogenie prezena distrofinei anormale are efecte mai reduse asupra fibrei musculare dect absena complet a proteinei; Diagnosticul clinic: -apariia tardiv (dup 20-25 de ani) a slbiciunii musculare la nivelul membrelor inferioare; -paralizia membrelor inferioare poate fi absent sau apare tardiv; -rareori decesul se produce prin insuficien respiratorie sau cardiac;

Diagnostic paraclinic nivel crescut al creatininei serice, prezena unei cantiti reduse de distrofin n muchi, identificarea mutaiei prin tehnici de analiz a ADN-ului; Prognostic deces la 50-60 de ani; Tratament nu exist tratament. 48

Mutaia genei distrofinei

Modificri ireversibile musculare

Distrofin normal stabilizarea membranei musculare

Distrofin anormal distrugerea membranei musculare

49

50

A.5. ETEROGENITATEA GENETIC

Eterogenitatea clinic
mutaii genice diferite n aceeai manifestri clinice de severitate diferit gen

exemplu mutaii n gena -L-iduronidazei:

Sindrom Hurler; Sindrom Scheie

51

MUTAIA GENEI -L-IDURONIDAZEI

ACTIVITATE ENZIMATIC NUL

ACTIVITATE ENZIMATIC DEFICITAR

SINDROM HURLER
debut - 6-18 luni dizostoze multiple blocaje articulare hepatosplenomegalie deces < 10 ani facies grosolan hidrocefalie opacifieri corneene retard mental

SINDROM SCHEIE
debut > 5 ani blocaje articulare boli cardiace valvulare opacifieri corneene deficite vizuale intelect normal

speran de via N

52

A.5. ETEROGENITATEA GENIC

Importana fenomenului de eterogenitate

Tratament de ex. hemofilia A i B (eterogenitate de locus) diagnostic terapie corect:
Hemofilie A - tratament substitutiv cu factor de coagulare VIII; Hemofilie B tratament substitutiv cu factor de coagulare IX.

Prognostic boli cu eterogenitate alelic sau clinic diagnostic corect estimare evoluie:
distrofie muscular Duchenne deces la 20-25 ani; distrofie muscular Becker deces dup 50-60 ani.

Sfat genetic boli cu eterogenitate de locus diagnostic corect calculare risc de recuren:
forme dominant autosomale - risc 50%; forme recesiv autosomal risc 25% forme recesive legate de X risc 25% (50% din biei bolnavi)
53

CONCEPTIA ACTUAL REFERITOARE LA FUNCTIA GENEI

Genele controleaz sinteza proteinelor

54

B.1. GENELE CONTROLEAZ SINTEZA PROTEINELOR

Genetica clasic:

O gen un caracter fenotipic

Descifrarea erorilor nscute de metabolism:

O gen o protein O gen un polipeptid

Introducerea molecular: tehnicilor de genetic

O gen un produs funcional

55

B.1. GENELE CONTROLEAZ SINTEZA PROTEINELOR

GENA ESTE SEGMENTUL DE ADN CARE CONINE INFORMAIA GENETIC NECESAR SINTEZEI UNUI PRODUS FUNCIONAL.
Genele care codific proteine considerate gene structurale sunt
56

B.2. RELAIA O GEN PROTEIN

A fost descifrat efectelor mutaiilor

pe

baza

studiului

Exemplu: drepanocitoza (sicklemia, anemia cu hematii n form de secer)

57

B.2. RELAIA O GEN PROTEIN

DREPANOCITOZA Transmitere recesiv autosomal. Incidena bolii - 1/400 1/600 de nounscui la populaiile originare din Africa, bazinul mediteranean, Orientul mijlociu i India.
Incidena crescut avantaj selectiv al heterozigoilor Na = imunitate natural la malarie.
58

B.2. RELAIA O GEN PROTEIN

DREPANOCITOZA se manifest la homozigoiii aa anemie hemolitic sever. dureri la diverse niveluri (mini, picioare, abdomen splin, mezenter, ficat, pancreas) microinfarcte obstrucia capilarelor. hemoliza cronic splenomegalie pierderea funciei imune a splinei susceptibilitate la infecii bacteriene cauza principal de deces.
59

B.2. RELAIA O GEN PROTEIN

DREPANOCITOZA Mecanism patogenic:

1949 - Pauling n sicklemie hemoglobina S (migrare electroforetic diferit de HbA). 1956 - Ingram - HbS - catena a globinei (poziia 6) valin acid glutamic HbS afinitate N pt. O2 n condiii normale de oxigenare n hipoxie (microcirculaia capilar) 50% afinitate O2 solubilitate Hb precipitare bastonae hematii n secer
60

B.2. RELAIA O GEN PROTEIN

DREPANOCITOZA

Mecanism patogenic:
Hematii n secer lezarea membranei eritrocitare (capilare) + blocarea microcirculaiei (microtrombusuri).
Lezarea membranei distrugerea hematiilor anemie hemolitic microtrombozele dureri cronice n diverse organe

1975 - secvenierea genei -globinei.

sicklemie - mutaie punctiform = substituia adeninei cu timina codon 6 lan -globin GAAGTT acid glutamic valin
61

NORMAL
ADN ARNm

SICKLEMIE

peptid

HbA
Form solubil

HbS

HIPOXIE

Precipitare

Celul normal

Celul n form de secer

62

Lezare membran

Hemoliz intravascular

ANEMIE
sechestrrii splenice de hematii

Fibroz splenic

cardiace pulmonare

imunitii
RISC INFECII

INFARCTE

renale

cerebrale Microtromboze musculare

63

RELAIA O GEN PROTEIN

DREPANOCITOZA concluzii:
genele = secvene de nucleotide informaia genetic pentru asamblarea specific a aminoacizilor. Mutaiile genice schimbarea secvenei de nucleotide sinteza de proteine anormale boal molecular gena are trei categorii de efecte:
efectul primar la nivel molecular n sicklemie substituia acidului glutamic cu valina n poziia 6 a -globinei, cu apariia HbS; efectul secundar la nivel celular n sicklemie modificarea formei hematiei (din disc biconcav n secer) efectul teriar la nivel de organ sau organism (semne i simptome) n sicklemie: anemie hemolitic cronic, dureri de tip infarctic, infecii recurente.
64