Obiectivele:

1. Tipurile de acizi nucleici, funciile i repartizarea lor n celul.

2. Constituienii acizilor nucleici; bazele azotate, pentozele, acidul fosforic.
3. Nucleozidele i nucleotidele:
nucleotidele: structura, rolul,. Lanurile polinucleotidice.Legatura fosfodiesteric.
4. Dogma central a biologiei (geneticii) moleculare
5. Structura genelor la procariote i eucariote .

1. ADN: structura i funciile. Dublul helix i conformaiile lui de tip

B,A.Z
2. Nivelurile de compactizare a moleculei de ADN la procariote
(nucleoidul) i eucariote nucleozomii, cromatina i cromozomii.
3. Proprietile fizico chimice ale ADN. Denaturarea i renaturarea.
Hibridizarea.
4. Replicarea ADN la procariote - matricea, , substratele, enzimele i
factori proteici. Mecanismul biochimic i etapele biosintezei ADN.
Inhibitorii replicrii mecanismul deaciune i rolul biomeduical
(aciclovir, foscarnet, doxorubicin).
5. Particularitile replicrii la eucariote.Telomerele i telomeraza.
Structura i rolul biomedical al telomerazei
6. Mecanismele biochimice ale reparaia ADN. Enzimele implicate.
7. Mecanismele biochimice ale genezei mutaiilor punctiforme. Rolul
biomedical al mutaiilor. Patologii determinate de mutaii( anemia
falciform, fenilcetonuria etc.
 Acizii nucleici
sunt produi de policondensare ai mononucleotidelor,
deci sunt polinucleotide.

n funcie de componentele lor structurale acizii nucleici se

mpart n dou mari categorii:
a) acizii dezoxiribonucleici (ADN)
b) acizii ribonucleici (ARN),
 Structura,
componena i
importana ADN

ADNacid dezoxiribonucleic
 ADN
ADN biopolimer biologic
format din dou lanuri
polinucleotide.
.
 Istoricul descoperirii ADN-ului
Structura ADN-ului a fost decodificat la nceputul anilor
1950. Americanul James D. Watson i britanicul
Francis Crick sunt considerai drept primii care au
descifrat structura de dubl spiral a ADN-ului. Conform
propriilor afirmaii, saltul calitativ al descifrrii secretului
vieii s-ar fi produs n ziua de 23 februarie 1953.

James D.
Watson Francis Crick
Aflai n competiie contra cronometru cu alte
echipe, mult mai celebre i mult mai bine
dotate, aa cum a fost cea a chimistului
american Linus Pauling, laureat al premiului
Nobel pentru chimie n 1954, aparentul cuplu
ciudat a nvins tocmai datorit orizontului lor
intelectual foarte larg n care operau, a solidei
i universalei lor pregtiri interdisciplinare
precum i a minilor lor flexibile i deschise
oricrei ipoteze confirmabile de ctre realitate.
 Este demn de remarcat faptul c impecabilele imagini
luate unor molecule iluminate prin difracia razelor X de
ctre Rosalind Franklin, specialist n fotografii de difracie
create cu raze X, i-a fcut pe Watson i Crick s ntrevad
structura de dubl elice a ADN-ului.
Colegul acesteia, Maurice Wilkins, a contribuit de
asemenea decisiv la luarea unor fotografii edificatoare

Rosalind
Franklin Maurice
Wilkins
 ADN - localizarea n celul:

Nucleu (97-99%);
Mitocondrii 1-3%
Plasmide

Hloroplaste
1: pstreaz Funciile ADN
informaia
genetic (IG)

2.Transmite IG altei celule

n timpul diviziunei
celulare
3. Joaca rol de matri
i transmite IG
spre locul de biosintez
a proteinelor
 ADN Compoziia
ADN - polimer.
monomerii- nucleotide.
Nucleotidul reprezint o substan format din
trei componente

Strutura nucleotidului

Baze azotate: Zahr: Acid fosforic

- denina; - Dezoxiriboza
- Guanina;
- Citozina;
- Timina;
 Nucleotidele - sunt esteri ai nucleozidelor cu
un rest, dou sau trei resturi fosfat

Rest al Nucleozid
acidului
c
 Nucleozidul
const dintr-o baz azotaz purinic sau
pirimidini
o pentoz (riboza sau dezoxiriboza),

Nucleozidele snt mai solubile n ap dect bazele

azotate, snt mai stabile n soluii alcaline i uor se
hidrolizeaz la nclzire n acid dnd baze libere
i pentoze

Unite ntre ele cu

legtura N glucozidic
Bazele pirimidinice
Bazele purinice
Terminologie Ribonucleozide/Ribonucleotide
(cnd pentoza = riboz)

Baza Nucleozidul Nucleotidul

Adenina Adenozina (A) Adenozin monofosfat
(A) (AMP) sau adenilat

Adenozin difosfat
(ADP)

Adenozin trifosfat
(ATP)
Terminologie Ribonucleozide/Ribonucleotide
(cnd pentoza = riboz)
Baza Nucleozidul Nucleotidul
Adenina (A) Adenozina (A) Adenozin monofosfat (AMP)
Adenozin difosfat (ADP)
Adenozin trifosfat (ATP)

Guanina (G) Guanozina (G) Guanozin monofosfat (GMP)

Guanozin difosfat (GDP)
Guanozin trifosfat (GTP)
Citozina (C) Citidina (C) Citidin monofosfat (CMP)
Citidin difosfat (CDP)
Citidin trifosfat (CTP)
Uracil (U) Uridina (U) Uridin monofosfat (UMP)
Uridin difosfat (UDP)
Uridin trifosfat (UTP)
Timina (T) Timidina (T) Timidin monofosfat (TMP)
Timidin difosfat (TDP)
Timidin trifosfat (TTP)
 Terminologie comparativ

Ribonucleotide Dezoxiribonucleotide
Adenozin monofosfat Dezoxiadenozin monofosfat
(AMP) sau adenilat (dAMP) sau dezoxiadenilat

Adenozin difosfat Dezoxiadenozin difosfat

(ADP) (dADP)

Adenozin trifosfat Dezoxiadenozin trifosfat

(dATP)
 Terminologie Dezoxiribo-nucleozide/nucleotide
(cnd pentoza = dezoxiriboz)
Baza Nucleozidul Nucleotidul
Adenina (A) Dezoxiadenozina (A) Dezoxiadenozin monofosfat (dAMP)
Dezoxiadenozin difosfat (dADP)
Dezoxiadenozin trifosfat (dATP)

Guanina (G) Dezoxiguanozina (G) Dezoxiguanozin monofosfat (dGMP)

Dezoxiguanozin difosfat (dGDP)
Dezoxiguanozin trifosfat (dGTP)
Citozina (C) Dezoxicitidina (C) Dezoxicitidin monofosfat (dCMP)
Dezoxicitidin difosfat (dCDP)
Dezoxicitidin trifosfat (dCTP)
Uracil (U) Dezoxiuridina (U) Dezoxiuridin monofosfat (dUMP)
Dezoxiuridin difosfat (dUDP)
Dezoxiuridin trifosfat (dUTP)
Timina (T) Dezoxitimidina (T) Dezoxitimidin monofosfat (dTMP)
Dezoxitimidin difosfat (dTDP)
Dezoxitimidin trifosfat (dTTP)
 Rolul nucleotidelor:
1. Nucleozid monofosfaii reprezint elementul structural al acizilor nucleici.
Nucleozid trifosfaii sunt precursori macroergici la sinteza DNA i RNA.
n aceste reacii cednd grupa pirofosfat se transform n resturi de
nucleozidmonofosfat.
2. ATP - purttorul energiei chimice n celul, servete la transferul grupelor
fosfat macroergice i e cheia ce leag procesele ce decurg cu eliminarea,
degajarea energiei i cele ce utilizeaz energia.
3. iau parte la transferul unor blocuri de constructie (acidul acetic, glucoza,
colina) transformndu-le n substane / biologice active
uridindifosfatglucoz, citindifosfatcolin a etc.
4. Unele mononucleotide conin i alte baze azotate - nicotinamida n
nicotinamid mononucleotid, precursorul NAD, flavinmononucleotida i FAD.
5. In organiusme snt prezente 2 feluri de esteri fosforici ai nucleotidelor,
a) (AMP, ADP, ATP),
b) nucleotide ciclice - 2',3' i 3',5 unde fosfatul leag 2 atomi de 0 ai pentozei
n acelai nucleotid. .
2',3' cAMP se formeaz ca intermediat la degradarea ribornucleotidelor,
3',5' cAMP - este mesager secund n reglarea hormonal.
 Structura ADN
Structura primar- reprezint succesiunea
dezoxiribonucleotidelor (formate de BA: A,G,C,T ;
Pentoza- dezoxiriboza, rest fosfat) ntr-un lan
polinucleotidic unite ntre ele cu legturile
3'5' fosfodiesterice (format la interaciunea 3'hidroxigrupei din
pentoza unui nucleotid i 5'-hidroxigrupei pentozei altui nucleotid.

Catena de DNA are dou capete 3' i 5'.

Captul 5' este trifosforilat iar 3 con ine
hidoxilul liber. Deci catenele sunt polare
Structura secundar
a ADN
 Chargaff (1949) studiind
componena ADN a stabilit
urmtoarele legiti
- la aceeai specie de organisme
ADN are o componen nucleotidic
identic
-componenta ADN la diverse specii
de organisme difer
- ADN la aceeai specie nu este
dependent de: vrst, raie
alimentar, condiiile mediului ambiant
- n DNA, A=T i G=C,
deci A/T=1 i G/C=1
- suma BA purinice =suma BA
pirmidinice A+G=C+G
-dac A+T > G+C avem ADN de tip
AT
-dac G+C > A+T avem ADN de tip
GT
-t C de topire este mai mica cnd
predomin perechile A-T
-t C de topire este mai mare cnd
predomin perechile G-C
-la eucariote ADN mitocondrial este
circular
-ADN conine secvene structurale i
 Dublu helixul ADN
Conform lui Watson i Crick structura secundar
a ADN este un dublu helix format din dou
catene de ADN asociate prin mperecherea
bazelor
Inelele glucidice legate prin resturi fosfat
constituie scheletul extern al dublu helixului, n
timp ce bazele azotate hidrofobe sunt orientate
spre interior i perpendicular pe axa helixului .
ADN-ul uman conine aproximativ 3,5 x 109
perechi de baze.
 Structura schematic a ADN
Nucleotidele:
1. Sunt arangate la
distana de 0,34 una
de alta
2. Masa unui nucleotid
este 345.
3.Diametrul spiralei este
de 2
4.Aceste valori sunt
constante indefirent de BA
 Nucleotide ntr-un lan se unesc
cu legtura
fosfodiesteric
care se formeaz
prin interaciunea
dezoxiribozei unui
nucleotid i restul
acidului fosforic
al altui nucleotic
 Lanurile de ADN intr-o molecul de
ADN
se unesc cu ajutorul
legturilor de hidrogen
care se formeaz intre
bazele azotate
complimentare
 Complementaritatea
Reprezinta principiul de interaciune dintre bazele azotate sau
modalitatea de mperechere a BA
 Dublul helix al ADN
( structura secundar)

1. Stabilitatea ADNdc este asigurat

de:
- interaciunile hidrofobe dintre bazele
azotate suprapuse (stivuite) de pe
aceeai caten
- legturile de hidrogen ce se stabilesc
ntre bazele azotate de pe o caten i
cele complementare de pe cealalt
caten.

1. Cele dou catene de ADN sunt

antiparalele .
 Dublu helix ADN
(structura secundar)

6. Exist mai multe confomaii ale

ADN;
Conformaia B: descris de Watson i
Crick
- orientare spre dreapta,
- pasul dublului helix este 34
(3,4nm),
- diametrul de 2nm,
- 10 perechi de baze per tur ;
- cea mai rspndit.
Conformaia A:
- Orientaere spre dreapta dar
mai compact,
- pasul elicei este de 2,8nm,
- 11 perechi baze per tur .
Conformaia Z:
- dublu helix de stinga,
- pasul elicei 4,56nm
- 12 perechi baze per tur.
STRUCTURA TERTIAR A
AND:polinucleozomul
sau compactizarea
 De la ADN la cromozomi
In eucariote ADN-ul este stocat n nucleu.
Deoarece nu este suficient sapiu iar molecula
ADN-ului este extrem de mare (lungimea ADN
de la o singur celul uman e 2m!!!), ADN-ul
trebuie compactat.

Exist cinci nivele de compactare a ADN care

conduce la o scdere de 10.000 de ori lungimii
ADN.
 Nivelele de
compactare a ADN
n nucleu
-Primul nivel-
r
Dublul helix de ADN se
nfoar n jurul unui
octamer proteic format din
histone- fiecare unitate de
ADN spiralat de 1,75 ori n
jurul unui compelx histonic
se numete nucleozom.

Histonele sunt proteine

bazice cu mas molecular
mic (max. 20.000), bogate
n aa bazici (Arg pt.H2A,
H2B i, Lys pt H3, H4).
 Nivelele de
compactare a ADN
n nucleu
-Primul nivel-
1. n jurul octamerului histonic
r (H2A H2B H3 H4)x2 este spiralat
ADN-ul nucleozomic fomat din 140
perechi de baze.
- Nucleozomii sunt legai ntre ei prin
ADN intrenucleozomic sau ADN
linker format din 30 perechi de
baze). Histona H1 itercaioneaz cu
ADN linker, avnd rol n
superspiralizarea nucleozomilor .
- Polinulceozomul seamn cu nite
mrgele pe a (=fibrile de
cromatin n jur de 10nm ).
r

Aparena de
mrgele pe a a
ADN
 Nivelele de
compactare a ADN n
nucleu
-al doilea nivel-
Polinucleozomul se
superspiraleaz pentru a
forma structura de
solenoid.
Solenoidul conine 6-7
nucleozomi per tur.Pasul e
de 10nm, diametrul de 30
nm.
Solenoidul formeaz
fibrele de cromatin cu
diametruul de 300 nm.
 Nivelele de
compactare a ADN n
nucleu
-nivelele 3,4 i 5-
r Fibrele de cromatin se compacteaz i
mai mult form domenii n form de
bucl.

- Aceste domenii n bucl sunt

superspiralizate i organizate n structuri
distincte numite cromozomi.

- ADN -ul uman nuclear ( genomul)

const n 23 perechi de cromozomi.
 Compactizarea
DNA cromatinei

Firul de
cromatin?
~ 1,000

30 nm Solenoid ~40 / 50

Nucleosoma
= ctamer de histone
H2a, H2b, H3, H4
146 / 200 bp DNA
Compactizare Cromosoma metafazic/
~10 ori
cromatina interfazic
~ 10,000
Diferena dintre celulele diploide i
celulele haploide

Majoritatea celulelor eucariote conin

perechi de cromozomi i sunt astfel
denumite diploide.

Celulele care conin cromozomi

nepereche sunt denumite haploide.
Cromozomii genomului uman
 Proprietile fizico-chimice ale
acizilor nucleici
- Propritile fizico-chimice ale acizilor nucleici
sunt:
- masa molecular mare.
- proprietile coloidale i osmotice, tipice pentru
toi compuii macromoleculari.
- Proprietile lor hidrofile depind de fosfai.
- viscozitatea i densitatea nalt a solu iilor,
- capacitatea de denaturare.
- la pH fiziologic toti AN sunt polianioni (-)
 Denaturarea i renaturarea
- proprietate caracteristic pentru moleculele cu organizare
spaial e provocat de nclzire, aciunea substanelor,
care rup legturile de hidrogen, forele Van-der-Waals,
ce stabilizeaz structura secundar i teriar a acizilor
nucleici.
Ex. nclzirea DNA-duce la desfacerea spiralei duble n
dou catene, adic are loc transformarea spiral -
ghem".
La rcirea treptat catenele din nou se reunesc dup
principiul complementarittii, formnd spirala dubl
nativ. Acest fenomen se numete renaturare.
La racirea brusc renaturarea nu are loc. Denaturarea i
renaturarea acizilor nucieici este nsoit de schimbarea
activittii lor optice. Toti acizii nucleici posed activitate
optic maxim la lungimea undei de 260 nm, ceea ce
corespunde cu absorbia maximal a bazelor azotate.
 Hibridizarea AN
Pe capacitatea de renaturare a AN este bazat metoda
de determinare a gradului de nrudire a acizilor nucleici,
care poart denumirea de hibridizare molecular.
La baza metodei st mperecherea complementar a
sectoarelor unicatenare ale acizilor nucleici. Aceast
metod a permis descoperirea particularitilor structurii
primare a DNA. S-a stabilit, c n componena DNA a
animalelor se afl sectoare cu o succesiune nucleotidic
identic, care de multe ori se repet. Hibridizarea
decurge foarte repede. Restul DNA este prezentat printr-
o succesiune unical a nucleotidelor, care nu se
dubleaz.
 Dogma central a geneticei
moleculare
Postulatul de baz a geneticei moleculare a fost formulat de
Watson i Krick: este transmiterea informaiei genetice de la ADN
la protein care se realizeaz prin urmtoarele trei procese:
replicarea; au loc n nucleu
transcripia;

translaia. are loc n citozol Expresia genelor

Procesul de transcripie este reversibil. Enzima care catalizeaz

transcripia invers se numete revertaza (reverstranscriptaza) i a fost
descoperit la oncovirui.
Sinteza ARN-ului pe baza ARN se numete replicarea ARN, ea are loc
la virui, care nu au ADN. Procesul de translaie este ireversibil i se
numete biosinteza proteinei.
 Dogma central a geneticii moleculare

ADN

ARN Protein
 Ciclul celular
Reprezint o perioad
scurt de la formarea
unei celule prin
diviziune pn la
diviziunea acesteia.
Fiecare ciclu celular
cuprinde dou
perioade dinamic i
calitativ distincte:
interfaza i mitoza
 Durata ciclului celular
este variabil n funcie de specie i tip celular, ba chiar i pentru celulel e aceluiai
esut.
Exist celule n organism care se divid foarte rapid, parcurgnd ntregul ciclu
celular n 8 ore, pe cnd altele se divid rar, cu ciclul celular de 100 zile sau chiar
mai mult. La eucariotele superioare ciclul celular dureaz 10-25 ore, din care
diviziunea celular dureaz o or.
Perioada G1 are durata cea mai variabil, n timp ce
perioada S este cea mai constant pentru un anumit tip celular.
Dup ce au depit perioada G1, timpul necesar perioada S i G2, deci pn la
nceputul diviziunii este foarte constant pentru diferite celule.
De acea s-a introdus noiunea de punct de restricie (punct R) pentru momentul
imediat, urmat de sfritul perioadei G1, care trebuie depit pentru ca celula s
poat parcurge etapele urmtoare ale ciclului celular .
Un alt punct de restricie se afl spre sfritul perioadei G2. Inhibarea sintezei
proteinelor n aceast faz mpiedic intrarea celulei n mitoz.

 Reglarea ciclului celular

Exist mecanisme i factori reglatori, ce
controleaz trei evenimente cheie ale
ciclului celular:
- iniierea sintezei ADN este controlat de complexul activator al
perioadei S;
- derularea replicrii materialului genetic nuclear este controlat de
alt factor semnal de ntrziere a perioadei mitotice;
- declanarea procesului mitotic, n care are loc segregarea
materialului genetic, este dirijat de factorul de activare a mitozei
(M-phase promoting factor: MPF).
 Factorii de cretere specifici
Factorul de cretere epidermal EGF Stimuleaz proliferarea mai multor tipuri celulare
Factori de cretere de tip insulinic IGF1, IGF2 Stimuleaz proliferarea adipocitelor i a celulelor
din esutul conjunctiv

Factorul de cretere a fibroblatilor FGF Stimuleaz proliferarea: fibroblatilor, celulelor endoteliale i

mioblatilor

Factorul de cretere neuronal NGF Induce cretere axonal i viabilitatea neuronilor simpatici i senzori
INTERLEUKINA 2 IL2 Stimuleaz proliferarea limfocitelor T
INTERLEUKINA 3 IL3 Stimuleaz proliferarea celulelor Stem i a majoritii celulelor precursoare ale multor
celule difereniate

ERITROPOIETINA Stimuleaz proliferarea celulelor precursoare ale

eritrocitelor.
Factori de stimulare a coloniilor granulocitare GCSF Stimuleaz proliferarea: celulelor
precursoare ale macrofagelor i granulocitelor, neutrofilelor
Factori de stimulare a coloniilor de macrofage M-CSF Stimuleaz proliferarea celulelor
precursoare ale macrofagelor i granulocitelor

Exist i factori tisulari, care inhib diviziunile celulare cum sunt chalonele
(peptide sau glicoproteine).
 Ciclinele
o familie de proteine implicate n controlul
ciclului cecular prin activarea kinazelor ci
clin dependente.
Pentru descoperirea lor i a kinazelor
ciclin-dependente Leland H. Hartwell, R.
Timothy Hunt, and Paul M. Nurse au primit
n 2001 Premiul Nobel n Fiziologie i
Medicin
 Grupele majore de
Cicline si CDK
1.Ciclinele perioadei G1 spre S ciclinele
D/CDK4 D/CDK6 i E/CDK2;

2. ciclinele perioadei S ciclina A/ CDK2;

3. ciclinele perioadei G2 ciclina B/CGK1. C

Inhibitori ai diviziuniii celulare
chalonele (peptide sau glicoproteine).
 Replicarea
(sinteza unei noi molecule de ADN
pe matrice de ADN)
Componentele necesare pentru
replicare sunt:
1.Matri- ADN bicatenar parental
2. Substrate:
- Dezoxinucleozidtrifosfaii respectivi dATP,
dCTP. dGTP, TTP
- ribonucleozidtrifosfaii respectivi: ATP,
GTP, CTP, UTP
- ionii de Mg++, Mn++, Zn++
 3. Enzimele i proteinele specifice
stabilizante .
- Helicaza - desfacerea dublului helix, treptat, pe poriuni mici.
- Proteinele de stabilizare menin cele 2 catene separate ca urmare a interveniei
- Topoizomeraza I i II nltur supertorsiunile ADN, (I introduce supertorsiuni
negative; II scindeaz o leg. fosfodiesteric pe una din catene i permite celor 2
catene s se roteasc una fa de alta)
- ADN-polimerazele I, II, III sinteza catenei fiice n direcia 5'3' .
ADN-polimerazele I- posed activitate 5'- 3 exonucleazic, nltur
primerul i-l nlocuiete cu fragmente de ADN
ADN-polimerazele II rol neclar
ADN-polimerazele III aciune polimerazic (5'- 3) - sintetizeaz n
direcia 5- 3' lanul polidezoxiribonucleotidic, prelund instrucii de la ADN-
matri,
- Aciune exonucleazic (3'- 5)
- ARN-polimeraza, primaz - sintetizeaz primerul n direcia 5'- 3 .
- ADN -ligazele unesc fragmentele Okasaki de pe catena ntrziat
 Procesul biosintezei DNA se
caracterizeaz prin :
- sediul sintezei ADN este: nucleul eucariote. Procariote ?
- replicarea este un proces semiconservativ
- se desfoar n trei etape : iniiere, elongare, terminare
- prezena praimerului este obligatorie
- replicarea este cuplat cu desfurarea ADN parental (necesit
energie)
- replicarea decurge n ambele direcii cu aceeai vitez. Pe catena
ntrziat se sintetizeaz fragmentele Okazaki.
- este bazat pe mpachetarea complimentar a bazelor azotate
- catena-fiic este antiparalel cu catena parental dar nu identic
dup secvena nucleotidic
- forta motric a procesului este hidroliza pirofosfatului
- angajeaza simultan intregul cromozom.
 DNA-polimerazele
(III)
Prezint un complex multienzimatic ce posed cteva situsuri -
pentru DNA, pentru amors, dRTP, exonucleazic i catalitic.
are activitate polimerazic, preia instrucia de la matri i necesit
prezena amorsei cu OH n 3'liber ct i dezoxinucleozidtrifosfailor
nu poate iniia sinteza catenelor de ADN-deaceia este necesar
primerul.
posed activitate 3'-5'-exonucleazic i exercit o funcie de
autocorecie este ncadrat n repararea ADN.
(I):
ndeprteaz praimerii prin activitatea sa 5'R3' exonucleazic i
adaug dRN prin activitatea sa polimerazic

ireversibilitatea procesului e asigurat de aciunea ei pirofosfotazic

posed aciune de sudare cu consum de ATP posed funcie de
autocontrol catalizeaz o copiere a ADN complimentar cu cea
matriceal.
 Mecanismul replicrii
3 etape: iniierea, elongarea, terminarea
Iniierea parcurge dou etape:
a. Formarea furcii de replicaie
- sub aciunea helicazelor are loc
desfacerea duplexului parental pe
anumite poriuni replicatori
(la scindarea leg. de H dintre BA - se utilizeaz min 2
mol. de ATP).
a. Topoizomeraza efectueaz rupturi monocatenare
apoi sudeaz legtura fosfodiesteric i
favorizeaz relaxarea structurii DNA
Mecanismul
a. Sinteza primerului
- sub aciunea
primazei se
sintetizeaz o
poriune mic de
ARN n direcia 5'-
3'. Primerul este
format din 5-10
ribonucleotide.
Gruparea 3OH e un
iniiator al sintezei
de ADN.
 Elongarea
ADN polimeraza III unindu-se la
captul 3' OH al primerului ncepe
sinteza ADN fiic. Reacia decurge
prin atacul nucleofil al grupei 3' OH al
primerului asupra unui dNTP
complementar catenei de ADN matri.
Se formeaz legtura fosfodiesteric i
se elibereaz PP;
Elongarea decurge n direcia 5' 3,
i parcurge cu aceeai vitez pe
ambele catene
Catena de baz se va sintetiza
continuu, iar cea ntrziat va fi format
din fragmente Okasaki. (dimensiuni de
1000 2000 nucleotide la procariote i
150-200 la eucariote).
ADN polimeraza I exclude primerii i
sintetizeaz complementar ADN.
Fragmentele snt unite cu enzima ADN
ligaza (necesit ATP la eucariote i
NAD la procariote).
Mecanismul funcionrii
ADN ligazei
 Terminarea
Terminarea replicrii are loc atunci, cnd
cele dou bifurcaii de replicare se
ntlnesc ntr-o regiune opus regiunii "ori".
Proteinele speciale semnalizeaz oprirea
repilcrii prevenind aciunea helicazelor.
 Replicarea la eucariote
Particulariti:
1. ADN polimerazele:
2. - implicat n replicarea ADN nuclear- responsabil de sinteza
catenei ntrziat
3. rspunde de sinteza catenei lider. Ea manifest aciune
exonucleazic
4. implicat n reparaia ADN
5. - implicat n replicarea ADN mitocondrial
6. Bifurcaia replicii este de 3000 baze pe minut comparativ cu
16.000 la procariote
7. Pe o molecul de ADN exist mai multe origini de replicare
(3X104 - 3X105 separate prin perechi de baze). n aceste origini
multiple de replicare se organizeaz bifurcaii- ce se deplaseaz
biderecional pe cromosomul eucariot n curs de replicare.
 Telomer Telomeraza
Replicarea capetelor 5 ale catenelor
este incomplet (teoria lui Olovnicov,
1971), deoarece dup nlturarea
primerilor ADN p nu e capabil s
completeze aceste goluri. Astfel la
fiecare replicare, capetele ADN se
scurteaz.
Aceasta nu afecteaz informaia
genetic deoarece catenele conin
fragmente repetitive neinformative
telomere.
Telomerele sunt replicate de o E
specific telomeraza
Telomeraza reprezint o
ribonucleoproteid: ARN i protein
Subunitatea proteic TRT (telomeraze
revers transcriptase) posed activitate
catalitic.
 Telomeraza
este o revertaz (ADN polimeraza ARN
dependent) folosete ca matri propria coenzim
un fragment de ARN.
.
 Structura i funcia RNA
telomerazice
Structura primar: la majoritatea RNA
telomerice, regiunea matricial se afl la
deprtarea de 50 nucleotide de la captul
5, i are urmtoarea succesiune de
nucleotide 5-CUAACCCUA-3.
Structura secundar e compus din 4
bucle i un fragment unicatenar, ce
conine matria pentru sinteza DNA
telomerice.
Mecanismul elongrii capetelor
cromozomului la eucariote
Inhibitorii replicrii mecanismul deaciune i rolul
biomeduical (aciclovir, foscarnet, doxorubicin

- Mitomicina c - mpiedic separarea

catenelor de ADN
- Acidul Nalidixic - inhib ADN giraza
 Aciclovirul
Inhib DNA polimeraza herpesului simplu
 Doxorubicina
Interactioneaz cu DNA intercalndu-se i impiedic funcionarea topoizomerazei II,
relaxeaz supetorsiunile in DNA astfel stopeaz replicarea .
Doxorubicin mai induce evacuarea histonelor din cromatin. i ca resultat, raspuns
inadecvat la reglarea transcripiei, epigenomul i transcriptomul dereglat n celulele
expuse la doxorubicin.
 Foscarnetul (trisodium
fosfonoformat)
Blocheaz non competitiv centrul de
fixare a pirofosfatului la DNA polimeraza
viral, astfel nu are loc clivarea
pirofosfatului din dNTP i elongarea
lanului de DNA viral.
 Inhibitorii telomerazei

oligonucleotidele modificate, complementare

regiunii matrice a RNA telomerazice. Aa
nucleotide specific se fixeaz de matria RNA
telo a omului, inhibnd activitatea telomerazic in
vitro. In vivo apare problema transportului
inhibitorilor prin membrana celular i micarea
dirijat n nucleul celular.
Ca inhibitori au fost testai i inhibitorii
reverstranscriptazelor azidotimidina,
didezoxiguanozina.
Numrul telomerilor determin durata vieii
fiecrei celule i condiioneaz reducerea
critic a numrului lor, induce moartea
programat a celulei deci pierderea
motivelor telomerice este cauza
imbtrnirii (telomera conine mii de motive
TTAGGG).
lungimea telomerei este marcherul
biologic al mbtrnirii.
 Reparaia ADN
Erorile n timpul replicrii sunt reduse la
minimum datorit DNA polimerazei ce posed
funcie endonucleazic
Tipuri de deteriorri:
1. Formarea de bree
2. Modificarea BA
3. Pierderea de BA
4. Formarea dimerilor de pirimidin sub aciunea
razelor ultraviolete
 Reparaia prin
excizia dimerului
Reparaie prin fotoreactivare
Reparaie prin recombinare
 Obiective:
1. Structura primar, secundar i teriar a acizilor
ribonucleici (tRNA, mRNA, rRNA). Complexele
nucleoproteice.
2. Particularitile structurii genelor la procariote. Gene
structurale i reglatoare.
3. Transcripia la procariote: matria, substraturile,
enzimele, mecanismul biochimic.Inhibitorii transcripiei
(rifampicina, acidul nalidixic,a-amanitina)
4. Particularitile transcripiei la eucariote. Modificrile
post-transcripie ale ARNm.
5. Mecanismele biochimice care asigur reglarea expresiei
genelor la procariote i eucariote.
6. Transcripia invers. Mecanismul biochimic i rolul
biomedical.
 ARN (acizii ribonucleici)

sunt produi de policondensare ai mononucleotidelor, deci

sunt polinucleotide.
 ARN Localizarea:

11% - n nucleu
15% -n mitocondrii
50% - n ribosomi
24% - n hialoplasm
 ARN tipuri
ARN mesager ,
ARN ribozomal
ARN de transport
ARN regulatori ai expresiei genelor:
ARN antisens, ARN ce conine regiuni complementare ARN-ului mesager care, prin apariere, poate
determina formarea de regiuni dublu catenare ARN-ARN, regiuni ce pot fie modifica capacitatea ARNm de
a fi translat , fie pot duce la degradarea moleculei de ARNm. Acest proces de degradare este numit
interferen ARN i a fost descoperit de Andrew Z. Fire i Craig C. Mello (premiul Nobel de Fiziologie i
Medicin n 2006).
ARN regulator de talie mare ce determin modificri epigenetice (condensare a cromatinei i oprirea
expresiei genelor localizate n regiunea respectiv). Un exemplu l reprezint ARN-ul Xist la mamifere ce
intervine n procesul de inactivare a unui cromozomul X la organismele de sex feminin.
ARN catalitic (ribozime) Unele molecule de ARN (numite i ribozime, enzime) au capacitatea de a
cataliza reacii chimice.
Ex: siturile active (peptidil i aminoacil) ale ribozomilor care sunt formate exclusiv din segmente de ARN
ribozomal. Ribozimele pot cataliza i reac ii de modificare ale acizilor nucleici, spre exemplu spliceozomii,
complexe ribonucleoproteice implicate n procesul de mat urare al ARN-ului premesager. Pentru
identificarea ribozimelor Thomas Cech i Sidney Altman au primit premiul Nobel pentru Chimie n 1989.
 ARN mesager (mARN)
constituie 25% din totalul ARN-lui.
Localizat - n nucleu i citozol. Prezint
copia sectorului de ADN i conine
informaia despre structura catenei
polipeptidice a proteinei.
Rolul:Transmite informaia de la ADN spre
ribozomi, sediul de sintez a proteinei.
 ARN ribozomal (rARN)
constituie 60% din totalul ARN-ului.
Localizat- n ribozomii citoplasmei.
Formeaz scheletul ribozomilor.
Joac un rol auxiliar n procesul de
asamblare a proteinelor.
 ARN de transport (tARN)
constituie 15% din totalul ARN-lui.
Localizat: n citoplasm, ribosomi,
mitocondrii.
Rolul: Particip la activarea i transportul
AA spre ribozomi i asamblarea lor n
polipeptide.
 ARN cromosomial
activarea genelor ADN
 ARN nuclear
formarea scheletelor particulei proteice
care transport ARN din nucleu n
citoplasm.
 ARN nivele de organizare
1. primar
2. secundar
3. teriar
 ARN
Structura primar- secvena de
ribonucleotide (baze: A,G,C,U; pentoza-
riboza i rest fosfat) stabilizat de legturi
fosfodiesterice. Este monocatenar.
 Structura secundar a t-RNA
are infiarea unei "frunze de trifoi" Ea se formeaz n urma
imperecherii complementare intracatenare a nucleotidelor anumitor
sectoare. Sectoarele, care nu sunt ncadrate n formarea legturilor
de H formeaz lanuri sau bucle
- Sectorul de acceptare CCA cu hidroxilul 3 liber la care se fixeaz
grupa COOH al AA.
- Bucla anticodonic este format din apte nucleotide. Ea conine
un triplet nucleotidic specific pentru fiecare t-RNA numit anticodon.
Anticodonul t-RNA dup principiul complementarittii se
mperecheaz cu codonul respectiv din RNAr. Interaciunea codon-
anticodon determin ordinea aranjrii aminoacizilor n catena
polipeptidic.
- Bucla pseudouridilic const din apte nucleotide n care restul
acidului pseudouridilic este obligatoriu i particip la interaciunea cu
ribozomii.
- Bucla dihidrouridinic const din 8-12 resturi nucleotidice, printre care
prezena ctorva resturi de dihidrouridin este obligatorie i
interactiuneaz cu enzima aminoacil-RNAsintetaza, care contribuie
la recunoaterea de ctre aminoacid a ARN-t specific.
 Structura teriar a tRNA
are de acum nu forma frunzei de trifoi dar
amintete forma ncheieturii cotului (Van-
derWaals)
 Structura genelor- dimensiuni, GS; GR
Gene- poriunile ADN ce conin informaia genetic cu privire
la sinteza unei proteine
Fiecrei gene i corespunde un lan polipeptidic- de aici i
conceptul: o gen un lan polipeptidic
GS- genele ce codeaz polipeptide i ARN. Poriunile GS ce
conin informaie (transductibile) exoni; iar secvenele ce nu
sunt traduse n ARNm introni
GR segmente de ADN, repetabile, relativ mici ce au un rol
reglator. Rolul lor:
1. Pot fi semnale ce ne arat nceputul i sfritul GS
2. Particip n iniierea i terminarea transcripiei GS
Dimensiunile genelor f. variabile. Ex. Proteina ce conine
350 AA--- 350X3=1050 nucleotide. tiind c BA sunt
localizate la 0,34 nm_---0,34 nm X 1050=357 nm =0,36mcm
Structura genei
n secvena genei se disting :
-secvene n amonte reglatoare care structureaz
promotorul,
- un situs de iniiere al transcripiei, sau start
point notat cu +1, locul unde este ncorporat
primul nucleotid de unde ncepe transcripia
-o succesiune variabil de exoni i introni; exonii
tradui, intronii netradui coninnd alte secvene
reglatoare i n sfrit
-ultimul exon.
Ansamblul mecanismelor care conduc la producerea
unui ARNm sau a unei proteine sunt desemnate prin
termenul de expresia genei.
Clasificarea genelor nucleare
1. n dependen de produsul genic:
gene de cl.I pentru ARNr
gene de cl. II pentru ARNm i proteine
gene de cl.III pentru ARNt, ARNr, ARNsn
2. n dependen de locul activitii:
gene active n toate celulele
gene active n anumite celule, esuturi
3. n dependen de perioada ontogenetic
gene active pe tot parcursul vieii
gene active numai prenatal
gene active numai la pubertate
gene active numai la adult
4. n dependen de interaciunea cu factorii de mediu;
gene stabile
gene plastice
Clasificarea genelor nucleare
5. n dependen de gradul de expresie:
gene normomorfe
gene hipomorfe
gene hipermorfe
gene amorfe
6. n dependen de numrul de copii n genom:
gene unice
gene repetate n tandem sau dispersate
Clasificarea genelor nucleare
7. n dependen de funcia produilor genici:
enzime - 31,2%;
modulatori ai proteinelor sintetizate - 13, 6 %;
receptori;
factori de transcripie;
proteinele matricei intracelulare i matricei extracelulare;
transportatori membranari i proteine canal;
molecule semnalizare celular;
hormoni;
Ig. 50%:
 Transcrierea (transcripia)-biosinteza ARN
pe matrice de ADN
Componentele necesare:
1. DNA dublu helicoidal (anumite poriuni) (catena+),
2. Substrat - ribonucleozidtrifosfatii, (ATP, GTP, CTP, UTP)
3. RNA polimeraza: posed aciune polimerazic, nu posed
aciune exonucleazic, conine ionii de Zn i necesit
prezena ionilor de Mg++, Mn++ n mediu.
la procariote prezint un pentamer compus din 5 protomeri
sigma , 2, i 1;
posed centre catalitice(a) , de fixate a DNA i a
substratelor.
la eucariote: RNApI sintetizeaza RNA ribozomal (28S si 18S)
RNApII sintetizeaza RNAm
RNApIII sintetizeaza RNAt, RNAr 5S i molecule mai mici
 Etapele transcripiei
Sinteza decurge n 3 etape:
iniierea,
elongarea,
terminarea.
Iniierea ncepe n anumite secvene de ADN
numite promotor
 Initierea la procariote

Structura promotorului:
Caseta Pribnow 5 TATAAT 3
Caseta 35 5 TTGACA 3

Unica ARN polimeraz cu subunitatea sa Sigma:

- gsete punctul de iniiere;
- activeaz identificarea secvenelor de RNA
polimeraz(holoenzim)
- ia parte la desfacerea dublului helix de ADN
- Ia parte la formarea primei legturi
fosfodiesterice.
Astfel complexul de iniiere este format, sigma Pe P deosebim 2 locusuri: de
subunitatea e disociat de la holoenzim i ia recunoatere (depistat cu ajutorul
parte la iniierea unui alt ciclu de transcriere. sigmei) i locusul de legare lax a ARN
polimerazei. Locusul de recunoatere e
situat la o distan de 25 nucleotide de
locusul de legare i 10 nucleotide de la
punctul de iniiere (+1)
 Initierea transcripiei la eucariote
Structura promotorului
1. GC casete GGGCG
2. CAAT casete CCAAT
3. Caseta Hogness TATAT/AT
Primele 2 sunt responsabile de frecvena
transcripiei (cnd ncepe), a 3 - - implicat
n iniiere semnal (unde). Toate sunt
responsabile de exacitatea iniierii.
ARN pol.I, II si III funcioneaz mpreun cu
proteinele TF II, care se fixeaz pe
secventele promotorului, dirijand i
activd astfel enzima. Primul TFII care
se leaga de promotor este- TFIID - are
o subunitate de legare a TATA (TATA
binding proteinTBP) care recunoaste
si se fixeaza de boxa TATA. TFIID
atrage dupa sine si alti FT (in ordinea
TFIIA, TFIIB, TFIIF, TFIIE si TFIIH),
care permit fixarea ARN-polimerazei in
regiunea promotor si activarea enzimei
transcriptia incepe la nivelul situsului
de initiere a transcriptiei; primul
nucleotid transcris este numerotat
conventional +1.
 Elongarea
- alunecarea ARN polimerazei pe matria de
ADN sinteza transcriptului (50 nucleotide pe
secund) . RNAp nu controleaz catena
sintetizat erorile sunt mai multe fa de
ADN
 Terminarea
RNAp recunoate secvenele nucleotidice specifice de
pe ADN, ce conin un numr mare de G, C i T.. Proteina
- se asociaz la E i se mic mpreun cu ea, ns la
identificarea semnalelor de terminare coboar de pe
matri i ncetinete aciunea E.
Mecanismul functionrii
proteinei RHO
 Procesingul
Toi precursorii de ARN n nucleu trec etapa de maturizare
posttranscripional. Pe parcursul procesingului - pre-ARN se
transform n ARN matur.
Procesingul nclude trei operaii:
Modificarea fragmentelor terminale 5 i 3 ale ARN:
a. Cap-area: la captul 5 -este adiionat guanozina metilat
(protejarea mARN de atacul 5-exonucleazelor);
b. la captul 3 se adaug o secven mare de poli A (200 A -coad).
Ea servete la exportul moleculelor de ARN din nucleu n
citoplasm.
Excizia intronilor i sudarea exonilor. Aa numitul splising are loc
n nucleul celulei: enzime specifice identific secvenele de baze la
jonciunea intron exon. Un rol important n excizie le revine ARN
nuclear (ARN U), care are o secven de baze complementar cu
secvenele de la fiecare intron. ARN nuclear scoate intronii,
capetele exonilor sunt apoi sudate de RNA ligaze
Metilarea bazelor t-ARN mpedic distrugerea ARNt de ctre
nucleaze.
Capare, metilare
Poliadenilarea
Splisingul ARNr
Micro RNA
 Transcripia invers
sinteza ADN pe catena de ARN
Matria ARN
Substrat dRNTP:dATP, dGTP,
dCTP, TTP
Enzima revers transcriptaza
Caracteristic viruilor oncogeni
Mecanismul:
a. Revers transcriptaza sintetizeaz pe
ARN viral catena de ADN- hibrid
ADN_ARN
b. Scindarea ARN viral de o nucleaz
c. Autoreplicarea ADN cu formarea
unui duplex de ADN
 Expresia genei:
Ansamblul mecanismelor care conduc la
producerea unui ARNm sau a unei
proteine.
 FACTORII REGLATORI AI
EXPRESIEI GENICE
CIS-genici TRANS genici ) EPI-genici,
Boxe pentru iniierea
(negenetici)

transcripiei Factori proteici de

Boxe specifice de esut transcripie generali Modificarea histonelor
Boxe RE induse prin (metilare, acetilare,
Factori proteici de
hormoni, ioni, AMPc fosforilare, ubiquitinare
transcripie specifici de esut
Enhancers, silencers Metilarea ADN
Factori proteici de
transcripie inuctibili Variaii n configuraia ADN
Enh, sil.
 Reglarea EG.nivele:
Pretranscripional decondensarea
cromatinei (eliberarea ADN de
histone (epigenetic, reversibil,
potenial ereditar)
Transcripional identificarea
promotorului, formarea complexului
de iniiere, rata de transcripie
Posttranscripional procesarea
ARNm, alegerea variantei de
splicing, controlul transferului ARNm
n citoplasm
Translaional selectarea matriei,
formarea complexului de iniiere,
controlul calitii polipeptidului,
stabilitatea ARNm
Posttranslaional modificarea
posttranslaional a polipeptidului,
direcionarea proteinelor
Reglare la nivel de condensare:
Eucromatina
Heterocromatina
 Reglarea la nivel pretranscripional
Modificarea histonelor:
metilarea H3(Lys4 au/i,79) sau
metilarea H4 (Arg4) expresie activ a genei
metilarea H3(Lys9i/sau27) atenuarea transcripiei
Ubiquitinarea H2A inhib transcripia
Ubiquitinarea H2B activeaz transcripia
acetilarea histonelor relaxarea cromatinei,
facilitarea transcripiei
dezacetilarea histonelor condensarea cromatinei,
inactivarea
transcripiei
fosforilarea H1 supracondensarea cromatinei
defosforilarea H1 decondensarea cromatinei
 Reglarea la nivel pretranscripional
(Modificarea ADN)

2. Metilarea ADN (insulele 5MeCpG,

frecvent n promotor)
inactivarea transcripiei.
Retinem !!!
Metilarea ADN; dezacetilarea histonelor
represia transcripiei
3. Modificri n configuraia ADN:
helixul B helix Zrepresie genic.
(excepie promotor).
Reglarea la nivel transcripional
I. Formarea complexului de iniiere a transcripiei:
II. Interaciunea factorilor proteici transreglatori cu
secvenele cis-reglatoare ale promotorului (selectarea
promotorului la genele cu mai muli promotori)
III Reglarea activitii ARN-polimerazei:
- direcionarea;
- alegerea +1
- alegerea catenei transcrise
IV.Controlul ratei de transcripie
 Promotori alternativi

Unele gene umane au doi sau mai multi promotori. Prin folosirea lor
alternativa rezulta diferite izoforme ale unei proteine, cu proprietati diferite.
Alegerea promotorilor nu se face la intamplare, ci prin actiunea unor factori
trans-reglatori, dintre care unii specific tisulari. Selectarea promotorilor are
loc, de exemplu, in cazul genei distrofinei, care are cel putin opt promotori.
Patru promotori sunt situati in regiunea 5 si sunt specifici pentru cortexul
cerebral, cerebel, muschi, limfocite; datorita folosirii unui prim exon diferit,
produc patru izoforme de distrofina, diferite prin capatul N-terminal. Ceilalti
patru promotori sunt intragenici, in structura cadrului de citire; atunci cand
transcriptia incepe la nivelul acestor promotori sunt folositi numai o parte din
exoni, rezultand izoforme mici de distrofina prezente in retina, celulele
Schwann, rinichi.
 Elementele cis-reglatoare
sunt secvene scurte de ADN ale cror funcii sunt limitate la o anumit gen; dup
fixarea unor factori "trans-reglatori" specifici (factori de transcripie),aceste secvene
permit recunoaterea genei de ctre ARN polimeraz i regleaz specificitatea n i
intensitatea transcripiei, adaptnd-o la nevoile celulare. Reamintim c unele
elemente cis-reglatoare au o localizare perfect definit n promotorul genei:
TATA box, CAAT box, GC box; pe aceste secvene sefixeaz factorii de transcripie
generali care formeaz, mpreun cu ARN polimeraza, complexul de iniiere a
transcripiei sau complexul transcripional bazal
Alte secvene (situate mai n amonte) confer specificitatea tisular
a expresieigenelor ce le posed iar secvenele RE (de la "responsive element) care
fixeaz factori transcripionali inductibili, activai n prealabil de ctre un stimul
extracelular: hormoni, AMPc, ioni etc. Ultimul tip de secvene au o localizare
variabil (n regiunea 5' sau n 3' sau n introni) i regleaz intensitatea transcripiei;
ele pot fi secvene stimulatoare ale transcripiei (enhancers) sau secvene
atenuatoare (silencers).
Factorii de transcripie se pot
clasifica n cinci grupe.
(1)Factori de transcripie generali (GTF sau TFII); se asambleaz pe
secvena TATA;
(2) Factori de transcripie comuni care se fixeaz la secvenele CAAT i
GC;
(3)Factori de transcripie inductibili care dup ce sunt activai de ctre
stimuli externi se fixeaz pe secvenele RE, producnd o cretere a
transcripiei genelor ce posed RE;
(4) Factori de transcripie specifici pentru anumite celule (de exemplu Pit-
1, factorul specific glandei hipofize);
(5) Proteine activatoare sau represoare care se fixeaz pe activatori
(enhancers) sauatenuatori (silencers) i intensific sau inhib transcripia
genei
 Structura factorilor de transcripie
Structura factorilor de transcripie

Toti factorii de transcriptie contin doua domenii: un domeniu de activare (care activeaza
Toti factorii de transcriptie contin doua domenii: un domeniu de activare (care activeaza transcrierea) si un domeniu
de fixare la ADN;
ADN; domeniul de fixare are o structura particulara de aminoacizi ce formeaza un motiv structural; in
functie de aceasta, se descriu mai multe tipuri de FT:
Proteine helix-bucla-helix (helix-loop-helix
(helix-loop-helix)) la care domeniul de fixare este format din doua -helixuri
-helixuri separate
printr-o bucla scurta (fig. 11); acest model structural este prezent la FT care stimuleaza sinteza de
imunoglobuline.

Proteine cu degete de zinc (zinc(zinc finger),

finger), in care aminoacizii se dispun in spatiu sub forma unor degete de
manusa, la baza carora se fixeaza un ion de zinc (Zn 2+) (cel mai frecvent de cisteina sau histidina) ; acestea se
intalnesc in structura FT ai promotorului genelor menajere; Ex: H.glucocorticoizi
Proteine cu fermoar de leucine (leucine
(leucine zipper)
zipper) sunt proteine dimerice; fiecare monomer,-
monomer,-helicoidal,
helicoidal, contine
cate o leucina la fiecare sapte aminoacizi (fig. 13). Cele doua helixuri interactioneaza strans (ca un fermoar), mai
ales prin legaturi intre leucine. Acest tip de FT se gasesc la unele protooncogene.
Deoarece aceste secvente sunt situate adesea la distante foarte mari, in amonte sau in aval de situsul de initiere,
se presupune ca activatorul fixat pe secventa intensificatoare interactioneaza cu o componenta a complexului bazal
de transcriptie, formand o bucla de ADN care apropie cele doua secvente.
 Factorii de transcripie generali
(GTF)
se asambleaz pe TATA box ntr-o ordine
secvenial pentru a forma
complexul transcripional bazal
care fixeaz, poziioneaz iactiveaz
ARN polimeraza II (de aceea se mai
numesc TF II)
Primul se fixeaz TF IID, un complex
multiproteic) care se leaga la TATA prin
proteina TBP;apoi se fixeaz n ordine:
TFIIA,TDIIB,TFIIF/ARN polimeraza,
TFIIE i TFIIH.
Unii din aceti factori au i alte
activiti: de helicaz, de protein-
kinaze, asemntoare ciclinelor, de
reparare a ADN (TFIIH).
 Celulele dispun de proteine - enzime:

a) Inductibile, a cror concentraie depinde de prezena

sau absena din mediu a unui compus - inductor. De
obicei aceste enzime sunt implicate n ci catabolice.

b) Represibile, a cror concentraie depinde de prezena

sau absena din mediu a unui compus corepresor

c) Constitutibile care sunt n cantitate constant

indeferent de starea metabolic a organismului
Modelul lui Jacob-Manod de reglare a biosintezei
proteinelor poart numele deTeoria operonului.

Reglarea prin inducie

bacteria prefera glucoza ca surs de energie
Att n cazul prezenei doar glucozei ct i a ambilor
substraturi (glucoza i lactoza) bacteria va prefera
glucoza i nu va cheltui energie pentru biosinteza
enzimelor ce catabolizeaz lactoza.
Doar n lips de glucoz AMPc care servete ca semnal
de foame a bacteriei se leag de o protein receptoare
specific i se fixeaz pe promotor, favoriznd fixarea
ARN polimerazei.
i dac lactoza este prezent n mediu, respectiv
operatorul este liber i are loc transcrierea genelor
structurale cu informaia despre enzimele ce vor iniia
metabolizarea lactozei.
 Control negativ
Bacteria are ca surs doar glucoza.
(Lactoza absent)
 Control negativ
(Lactoza prezent)
 Contriol pozitiv:
Bacteria are ca surs glucoza
i lactoza este prezent
 Nivelul de glucoz scade (la fel i cantitatea de energie),
atunci (cAMP) se fixeaz cAMP receptor protein (CRP) care
activeaz transcriptia.
Tryptophan absent, repressors inactive,
gene transcribed transcribed.
 Reglare prin represie.
Tryptophan present, repressor active, gene not transcribed
Reglarea posttranscriptional
(splicing alternativ)
Reglarea posttranscriptional
(dezaminare C spre U) (apare codon terminal)
Editarea ARN
Reglarea tranlaiei
( prin molecule citoplasmatice EX: Fe)
 Reglarea tranlaiei RNA interferent (RNAi)
(Andrew Fire i Craig C. Melloshared 2006 premiul Nobel)

ARN dublu catenar, scindat i separat

de catena sens,care este scindat.
Catena antisens n complex cu
protenele RISC intervine n:
diminuare vitezei de tanslaie
sau stoparea ei prin degradarea
ARNm
Importana biomedical.
utilizare in tratamentul
Tumorilor cerebrale
SIDA
degenerescenei maculaire
 Reglarea tranlaiei
prin modificarea factori de initiere ai translatiei

De exemplu, fosforilarea IF-2 (n soc termic, infecii virale,

etc) reduce procesul de sinteza proteic.
 Reglarea posttranslational

Reglarea vitezei de degradare

Reglarea fiecrei
modificri a proteinelor
Aditia diferitor grupe, ioni
i cationi: (metil, acetil,
carboxil, idroxil,Iod, Fe
Foldingul
Clivarea
Direcionare transport
 Inhibitorii transcripiei
Ex: Alfa amanitina
- protein ciclic constituit din opt AA.
- se coninute n mai multe tipuri de ciuperci
- are afinitate: mare pentru ARN polimeraza II.
mai slab pentru ARN polimeraza III i
nu afecteaz ARN polimeraza I.
Mecanismul toxicitii: se fixeaz la enzim, blocheaz
funcionarea sa, nceteaz sinteza proteinelor i are loc
distrugerea celulei (citoliz).
n corpul uman, la o otrvire cele mai afectate celulele sunt
cele hepatice si renale.
 Inhibitorii transcriptiei:

- Actinomicina D - se fixeaza pe ADN i

mpiedic fixarea ARN polimerazei.
Rifampicina - inhiba ARN polimeraza
bacteriilor.
 Obiectivele:
Compoziia i structura ribozomilor la pro- i eucariote.
Bazele biochimice ale codului genetic. Proprietile lui.
Bisinteza proteinelor la procariote. Etapele:
Modificrile posttranslaionare ale proteinelor.
Particularitile biosintezei proteinelor la eucariote factorii translaiei i
modificrile posttranslaionale i foldingul proteinelor sintetizate.

Reglarea biosintezei proteinelor la procariote i eucariote.

Inhibitorii translaiei (tetraciclina, cloramfenicolul, eritromicina, streptomicina, toxina
difteric) Rolul medical.
Polimorfismul proteinelor (variantele hemoglobinei, grupele sangvine).
Ingeneria genetic i semnificaia ei practic. Sinteza anticorpilor.
Bazele biochimiceale patologiilor ereditare. Metode biochimice de diagnostic.
 Ribozomii
Reprezint sediul de traducere a ARNm i sinteza proteinelor.
Structura- complexe ribonucleoproteice i sunt formai din dou
subuniti de mrime inegal (mare i mic)
Structura ribozomilor procariotici:
subunitatea 30 S conine ARNr 16S i 21 proteine.
subunitatea 50S ARN r 5S, 23S i 31 proteine.
Sinteza ARNr i formarea subunitilor are loc n citoplasm.
Structura ribosomilor eucariotici:
subunitatea 40S ARNr 18S i 33 proteine.
subunitatea 60S ARN r 5S, 5,8S, 28S i 49 proteine. ARNr se
formeaz n nucleol.
Ribozomul va avea constanta de sedimentare 70S la procariote
si 80S la eucariote.
S este coeficientul de sedimentare Svedberg, care depinde
de forma, densitatea i dimensiunea particulelor.
Centrele catalitice ale ribosomilor
Situsul A - aminoacil responsabil de unirea
complexului aminoacil- ARNt
Situsul P peptidil gzduiete ARNt legat de un lan
polipeptidic deja sintetizat
Situsul E e responsabil de eliminarea ARNt
Procesul de sintez proteic poate fi schiat sumar prin
interaciunea celor 3 tipuri de ARN - informaia din ARNm
este citit n ribozom si transpus n proteine, AA
necesari fiind adui de ARNt.
n starea sa nedisociat ribozomii sunt activi.
Deplasarea liber a ribozomilor n diferite sectoare ale
celulei, sau combinarea lor n diferite locuri cu
membranele reticulului endoplasmatic ofer posibilitatea
de asamblare a proteinei n celul.
Mai muli ribozomi pot
citi simultan acela
ARN mesager pe care
il parcurg in acela
sens. Se constituie
astfel un poliribozom,
structur ce permite
accelerarea sintezei
proteice.
 Codul genetic
Informaia genetic referitor la biosinteza
proteinelor se transmite cu ajutorul codului
genetic, ce reprezinta forma de exprimare a
relaiei dintre secvena de nucleotide din
DNA i succesiunea de AA din LP.
Cele 4 nucleotide, grupate cte 3, pot oferi
64 de posibilitti pentru cei 20 AA. Un AA
este specificat de 3 nucleotide i fiecare
triplet se numete codon. Codonii se citesc
consecutiv de moleculele de tRNA, care
ndeplinesc rolul de adaptor n sinteza
proteinelor.
 Propriettile codului genetic
- este triplet 61 codoni codific aminoacizii
corespunztori, 3-codific terminatia sintezei proteice;
- codul este degenerat unui aminoacid poate s-i corespunda
mai multe codoane: arg, leu, ser, fiecare este codificat de cte
6 codoni, ns met- i trp sunt specificati de ctre un singur
codon. Codonii unui aminoacid sint sinonime. Specificitatea
codonului e determinat de primele dou litere. Degenerarea
se refer la nivelul nucleotidului 3 din codon sau 1 din
anticodon care oscileaza, (o baz ovielnic) i e dispus s
incalce regulile (efectul Wobble).
- Codul nu are virgule, semne de punctuatie, ce ar indica
nceputul i sfritul fiecarui codon. Citirea mesajului genetic se
face nentrerupt de la codonul start pn la cel terminator.
-
- Codul genetic este universal - toate vietuitoarele utilizeaz acela
mecanizm de traducere (abaterea prezint codul genetic al
mitocondriei);
- -Codul genetic nu este ambiguu (acelai triplet nu semnific 2
aminoacizi diferiti.
- Nu se suprapune cu exceptie la virusuri;
- Codul genetic este liniar (este coliniar adic exist o concordant
liniara ntre gen i proteina codificat).
- (AUG) este tripletul de initiere
- iar UAG, UAA,UGA de terminare (non sens) uracilul n pozitia 1
prezint codoanele nonsens
- codoanele cu U (n pozitia 2) codifica AA hidrofobi
- cei cu A n pozitia -2 codific AA polari sau cu sarcin
- dac n anticodon n directia (5'->3') prima baz nucleotidic e:
- a) Citozina sau Adenina,
el va citi un singur codon;
- b) Uracilul sau Guanina el
va citi 2 codoane;
- c) inozina - respectiv va
citi 3 codoane;
 Translarea (traducerea,
biosinteza proteinelor)
se realizeaz n urmtoarele etape:
I. Activarea AA.
II. Translarea propriozis:
1.Iniierea lanului polipeptidic.(LP)
2. Elongarea LP.
3. Terminarea LP i eliberarea acestuia
III. Prelucrri posttraducere ale proteinei sintetizate.
 Activarea aminoacizlor,
- are ioc n citozolul celulei
- AA se leag de gr. OH din pozitia 2' sau 3' al
cap CCA din RNAt cu consum de energie (2
leg. Macroergice).
- activarea tuturor AA e catalizat de 20 de AA
RNAt - sintetaze care asigur specificitate.
- Enzima are 4 centre de fixare: pentru tRNA,
ATP, AA i H20.
- necesit prezena ionilor de Mg2+, K, pentru
a-i exercit funcia.
aciunea pirofosfatazei cauzeaz
ireversibilitatea reaciei
 Activarea AA
Se desfoar n dou etape:
ATP PPi
1. NH2-CH-COOH NH2-CH-CO O-AMP
I I

R Aminoiacil ARNt R Aminoacil Adenilat

sintetaza

2. NH2-CH-CO O-AMP+ARNt NH2-CH-CO O-RNAt +AMP

I I

R R
Aminoacil RNAt
 Biosinteza decurge n 3 etape:
Iniierea, elongarea, terminarea FI2
Iniierea:
FI3
- subunitatea 30S formeaz complex 30S
cu FI-3- apoi se leag ARNm cu
codonul AUG plasat n situsul P
- se agaug FI-1- fmet-ARNt i GTP
se leag de FI-2 i se unete la P 50S A
complexul format de subunitatea FI1
30S. Dup hidroliza GTP la GDP i
P i eliberarea factorilor de
iniiere se formeaz complexul de
iniiere.
- Complexul de iniiere se combin
cu subunitatea 50S formnd
ribozomul integru, funcional
activ 70S .
-
 Elongarea
Decurge n 3 etape :1 fixarea noului
Aminoacil ARNt
complexul: aminoacil-ARNt, factorul de FE-G
elongare T (FE-Tu) i GTP.
se fixeaz pe situsul A, dup ce are
loc hidroliza GTP la GDP care se 30S
elibereaz mpreun cu FE-T.

2. formarea P 50S A
legturii peptidice.
Enzima peptidil-transferaza catalizeaz
formarea legturii peptidice ntre doi FE-Tu
AA din situsul A i P.Peptida rmne
ataat de RNAt de pe situsul A.

3. translocaia E-PT
ribozomul se deplaseaz la
urmtorul codon de pe ARNm i
peptidilARNt trece de pe situsul A pe FE-Tu
P
aceast etap necesit factorul de
elongare G (FE-G) i GTP (necesar
pentru realizarea modificrilor
conformaionale care deplaseaz
ribozomul).
 Particulariti la eucariote
EF1A (or EF-Tu) is responsible for the selection and binding of the
cognate aminoacyl-tRNA to the A-site (acceptor site) of the
ribosome.
EF2 (or EF-G) is responsible for the translocation of the peptidyl-
tRNA from the A-site to the P-site (peptidyl-tRNA site) of the
ribosome, thereby freeing the A-site for the next aminoacyl-tRNA to
bind.
Elongation factors are responsible for achieving accuracy of
translation and both EF1A and EF2 are remarkably conserved
throughout evolution.
 Terminarea
este semnalat de unul din cei trei codoni stop.
dup ce ultimul rest de aminoacid (C terminal) a
fost adugat la lantul polipeptidic, el este
covalent ataat cu grupa sa COOH de ARNt n
situsul A.
desprinderea necesit prezena factorilor de
desprindere RI ,R2, R3, care transfer peptide
pe situsul P.
rup legtura esteric dintre ARNt i polipeptid
desprind ARNm, ARNt i disociaz ribozoma n
dou subunitti.
Necesarul energetic la formarea
fiecrei legturi proteice
- dou legturi macroergice se folosesc la
activarea fiecrui AA
- o legtur macroergic- la fixarea AA
ARNt la situsul A
- o legtur- la translocare
 Modificrile posttraducere
includ:
- ndeprtarea restului formil la procariote i a metioninei la
eucariote;
- formarea hidroxiprolinei i hidroxilizinei
- acetilarea capatului N - terminal- metilarea lizinei,
argininei
- fosforilarea hidroxiaminoacizilor
- carboxilarea glutamatului
- iodurarea resturilor de tirozin
- glicolizarea resturilor de lizin
- excizia unor secvente polipeptidice
- formarea puntilor disulfidice
- ataarea unor substitueni neproteici (hemul)
 Inhibitorii sintezei proteice:
la nivelul translatiei:,
- Tetracicilina - inhiba legarea ARNt la
ribozomi
- Puromicina - blocheaza elongarea inhibnd
competitiv ARNt
- Kanamicina translatie -inhiba citirea
codului genetic
- Toxina difteric - inhib translocaza
Reglarea sintezei proteinelor
la eucariote
Att la nivelul transcripiei ct i la nivelul translaiei
Reglarea hormonal (cortizol- sinteza E
gluconeogenezei; estrogenii, androgenii, vitamina D
sintez de proteine specifice)
Reglarea exspresiei genetice prin moleculele proteice
legate de ADN (histonele) sinteza ARN pe ADN e
inhibat prin adaosul de histone
Reglarea proteinei la nivelul translaiei e posibil prin
aciunea factorilor proteici, care contribuie iniierea,
elongarea, terminarea.
Reglatrea expresiei la nivel de translaie
Ex: prin fosforilarea la eukariote
a factoruluide translaie, eIF-2

eIF-2 fosforilat este inactiv i

respectiv inhib translaa la etapa
de iniiere.
reacia este catalizat de kinase
care se activeaz ca raspuns
condiii de mediuca: dificien de
amino acizi, caren de heme, of
dsRNA(ARN dublu catenar),
acumulare de proteine misfold in
reticulul endoplasmitic.
constituiti din:- 2 lanturi polipeptidice
grele identice (H446 AA)
Anticorpii sunt
i dou uoare (L-214AA),

fiecare dintre ele

contin cite o poriune:

varabil V".

i una

constant C"
Secvena de AA n poriunea variabil este diferit pentru
fiecare anticorp. Lanurile sunt unite ntre ele prin legturi
disulfidice.
Genele ce corespund poriunilor V" i C ale unui
anumit tip de lan uor sunt foarte apropiate n ADN al
imunocitelor care produc acest tip de lan uor, dar se
gsesc departe una de alta n ADN al celulelor ce produc
alte tipuride anticorpi.
De aici reiese, c n imunocit se selecteaz un anumit
segment de ADN, ce codific poriunea variabil a unui
anumit lant uor, care se transfer prin transpoziie n
vecintatea secvenei codificatoare a poriunii constante
a lantului uor. Deci ADN ce codific sectoarele V" ale
lanurilor H" i "L" const din cteva gene de tip diferit
care-i pot schimba locurile proprii i asocia cu formarea
imenselor combinaii.
 Sinteza Anticorpilor
Fiecare dintre milioanele de anticorpi produi
leag unul dintre milioanele de antigene
posibile. Este greu de crezut c organismul
are n patrimoniul su genetic cte o gen
pentru fiecare anticorp pe care-l produce
ntruct aceasta ar presupune o
supradimensionare a genomului eucariot.
 Gradul de diversificare n obinerea lanurilor H" i L"
este crescut prin faptul c o poriune variabil este
rezultatul asamblrii a 3 regiuni. Deci ADN ce
determin poriunea variabil a anticorpului este
constituit din:
1. Poriunea variabil (V) constituit din - 400 de gene.
2. Poriunea de diversitate (D) ce cuprinde -12 gene
3. Portiunea de articulare sau jonciune (J) - 4 gene
Asamblarea acestor gene n diferite combinaii permite
construirea a 20000 de sectoare V - fapt ce asigur
extrema varietate a anticorpilor.
Grupele sangvine
 Grupa Grupa Aglutinogen Aglutinine
(Landsteiner) (Jansk) (antigen) (anticorpi)

O I nu are i
A II A
B III B
AB IV A i B nu are
 Grupele de snge
sunt diferentiate datorita prezentei unor antigene
notate cu A si B pe suprafata eritrocitelor si a unor
anticorpi in plasma notati cu si .
Pe baza prezentei antigenelor si anticorpilor se
diferentiaza cele patru grupe de sange - OI, AII,
BIII, ABIV.
- Antigenele nu trebuie sa intre in contact direct
cu anticorpii de acelasi tip (A cu , respectiv B cu
) deoarece se produce aglutinizarea si liza
hematiilor.
 Ingineria genetic

tiinta, preocupat de crearea noilor fenotipuri prin transplantarea

genei unui organism n genomul altuia n scop de a lichida defectele
ereditare ale genomului, adic tratarea afectiunilor ereditare (gena
ntrodus nu figureaz n patrimoniul ereditar al genomului -gazd )
Se obtin molecule hibride (himerice)
n linii marl procedura include etapele:
1. Cptarea genei
2. Cptarea ADN-ului recombinat
3.Clonarea ADN-ului recombinat
Cptarea genei:Stiind structura primar a proteinei n laborator se
poate obine gena respectiv (se obin gene pn la 250 codoane)-
mai greu e obinerea genei din genomul celulei (genele se despart
prin introni)- mai uor e cptarea genelor din virusuri cu enzima
revertaza.
Cptarea ADN-ului recombinat-
gena necesar se ntroduce n celul pentru a se integra cu genomul
acestuia. Pentru aceasta n vitro gena se unete cu ADN-vector
(plasmide ce conin ADN inelar (cteva gene).
De regul se folosete E Coli, ce contine un cromozom i plasmide,
ce plutesc n citozol (plasmida este de 1000 ori mai mica dect
cromozomul). Plasmidele se replic independent de
replicarea materialului genetic. Unele plasmide se pot include n
cromozom i apoi din nou s-l prseasc. Plasmidele pot trece
dintr-o celul n alta n procesul de conjugare. Plasmidele se separ
din E.Coli i li se nltur o parte de ADN inelar cu ajutorul enzimelor
restrictaze, care recunosc i taie diferite sectoare. Folosind
restrictaze diferite se poate de tiat ADN n locusurile necesare. In
rezultat se formeaz capete lipicioase (sectoare monocatenare,
capabile de a uni nucleotide complimentare. La fel se procedeaz i
cu gena,care trebuie ntrodus (se formeaz capete lipicioase
complimentare capetelor plasmidei). Dac se amestec gena i
plasmida ele se vor uni cu capetele lipicioase. Enzima ligaza va uni
capetele i se va cpta molecula ADN inelara, care conine gena
menit pentru transplantare.
 3.Clonarea
ADN-ului recombinat- obinerea cantitilor
dorite de protein codificat de gena
eucariot ntrodus n plasmid. Dac n
cultura E.Coli se ntroduc plasmide
recombinate, se formeaz bacterii
recombinate. In celul plasmidele se replic.
Bacteriile nmulindu-se formeaz celule,
care conin aceste plasmide. Acum din
masa bacterian se poate de capatat
cantitti sufuciente de ADN recombinat.
Ranadamentul sintezei bacteriene este
impresionabil: Ex- 100 celule E.Coli produc prin
clonare 5 mg somatostatin (cantitate, ce se
obine prin prelucrarea a 100 tone de creier de
bovine). Prin tehnica engineriei genetice s-au
obtinut cantiti mari de insulin (Humulun),
Interferon, vaccine.
Diversitatea formelor n Iimita uneia i aceai
specie se datorete mutaiilor i ntr-o
msura mai mare recombinrii genetice.
 Mutaiile.
Modificrile genomului orgnismului, care se pstreaz i se transmit prin
ereditate poart numele de mutaii. Mutaiile sunt modificri ale informaiei
genetice, care se transmit apoi de la o generaie la alta. Modificrile pot
interesa o pereche de baze (mutatii punctiforme) sau un grup de baze pe
una sau pe ambele catene ale unei molecule de DNA.
Mutatiile punctiforme: pot decurge prin:
l. substitutie (misens mutatii, unde deosebim 2 tipuri):
a. Tranzitie - o BA purinic este nlocuit tot cu una
purinc, una pirimidinic -tot cu una pirimidinic.
b.Transversie - o pereche de baze purinice este
nlocuit cu una pirimidinic sau invers.
2. Inserie - acest mecanism const n ntroducerea unei perechi de
baze suplimentare n catena de DNA.
3. Deleia const n excluderea unei perechi de baze n aa mod ca ea nu mai
poate f complementar i la replicare apare "golul" n ambele catene. Unele
modificri n secventa nucleotidic pot duce la formarea codonului sinonim
i succesiunea aminoacizilor nu se va schimba (mutatii benigne).
La afectarea segmentelor mari de gen apar mutatii ntinse. In dependent de
consecinele modificrilor deosebim mutaie benign, neutr, nociv.
Agenii mutageni pot provoca mutaiile spontane ct i mutaiile induse.
 Mutatiile in codul genetic
Repetitii trinucleotidice
Boala Huntington: insertii CAG care adauga resturi de glutamina
(afeciune neurodegenerativ)
Ataxia Friedreich: repetitii GAA in primul intron (afecteaz n general mduva
periferici).
spinrii i nervii periferici)

Atrofia dentatorubral-pallidoluysiana (DRPLA), produsa prin

amplificarea unor secvente CAG ce produce poliglutamina in proteina
atrofina-1
Boala Kennedy, produsa prin amplificarea trinucleotidica a secventei
CAG in primul exon al genei receptorului androgenic
Sindromul X Fragil: insertii CGG pe cromozomul X; practic acestea
nu sunt legate de arginina deoarece mutatia este localizata in
regiunea 5 netranslata;
CTG in distrofia miotrofica ;
Ataxia spinocerebelara, cu repetitii CAG
 Mutatii missense
Anemia Sickle-cell: GAG se transforma in GTG in gena beta a
hemoglobinei;
APC: varianta missense GAC la GTC
Cancer prostatic: mutatie missense GCC la ACC in gena steroid 5
alfa-reductaza
Mutatii nonsens:
-thalassemia (-globin gene)
Boala McArdles glicogenoza prin mutatie nonsens in gena
miofosforilazei
Deletia: Fibroza chistica deletia UUU