METODE DE STERILIZARE

SI DEZINFECTIE
 STERILIZAREA

 Sterilizarea: metode de distrugere sau indepartare a

tuturor microoorganismelor, inclusiv a endosporilor
bacterieni, a micobacteriilor, a virusurilor neanvelopate
si a fungilor.
 DEZINFECTIA

 Dezinfectia: distrugerea formelor vegetative

ale microorganismelor, dar nu obligatoriu a
sporilor, a micobacteriilor si a virusurilor
nude.
Prezervarea

 Prezervarea: prevenirea multiplicarii unor

microorganisme in produse farmaceutice,
alimentare, etc.
Asepsia

 Asepsia: ansamblul masurilor prin care

prevenim contaminarea unor materiale si
organisme, in primul rand a omului, cu
microorganisme.
Antisepsia

 Antisepsia: ansamblul procedeelor utilizate

la nivelul tegumentelor si mucoaselor
pentru evitarea unor infectii microbiene de
suprafata.
 Efectele antibacteriene

Se pot traduce prin:

- efect microbicid: fenomen ireversibil, de
omorâre a microorganismului
(bactericid, virulicid, fungicid, sporicid);
- efect microbiostatic: fenomen reversibil, de
inhibare temporară a multiplicării
(bacteriostatic, fungistatic).
Antibiotice şi
chimioterapice

Sunt substante cu efect

bactericid sau bacteriostatic
cu toxicitate selectivă,
obtinute prin:
- biosinteză microbiană (antibioticele) sau
- sinteză chimică (chimioterapicele)
 Factori care influenteaza eficienta
antimicrobiana

 Intensitatea si timpul de actiune

timpul de omorare a microorganismelor variaza invers proportional cu
intensitatea agentilor antimicrobieni.
 Influenta mediului
substantele organice, turbiditatea, duritatea apei, pH-ul.
 Gradul de rezistenta a microorganismelor
diferente intre specii sau in cadrul aceleasi specii.
 Concentratia microorganismelor
pentru aceeasi intensitate a agentului, timpul de omorare creste
proportional cu conc. acestora prin “efectul populational”.
Antiseptice si dezinfectante

 Diferenta:
Antiseptic: se foloseste pe
tegumente si mucoase
Dezinfectant: se foloseste pe
suprafete inerte
 Diferentierea:
“curat” si “murdar”
 Curat: lipsa substantelor organice
(spalare cu apa si sapun)
 Murdar: prezenta substantelor
organice
 Clasificare in functie de mecanismul de actiune

Substante care:
 Denaturează proteinele (efect bactericid): acizi, baze, alcooli.
 Oxidează grupările chimice libere ale enzimelor: hipermanganat de
potasiu, peroxid de hidrogen, halogenii şi derivatii lor.
 Blochează grupările chimice libere ale enzimelor: săruri ale unor
metale grele (mercurocrom, azotat de Ag), agenti alchilanti (glutaraldehida,
formaldehida, oxid de etilen).
 Lezează membranele celulare:
- derivati fenolici (crezoli, hexaclorofen)
- biguanide(clorhexidina)
- detergenti • anionici (săpunuri, perlan etc.) • cationici (compuşi cuaternari
de amoniu)
 Alterează acizii nucleici: derivati de acridină (rivanol), coloranti bazici
(violet de gentiană, albastru de metil, fucsină bazică)
Clasificare in functie de actiunea antimicrobiană

 Nivel înalt: substante care distrug toate microorganismele cu

exceptia unui număr redus de spori bacterieni, cu conditia timpului
de contact de cel putin 20 de minute (peroxid de hidrogen stabilizat
6%, acid peracetic, hipoclorit de sodiu 5%, 25%, glutaraldehida 2%,
cloramina B 2%).
 Nivel mediu: substante care distrug virusuri, fungi, formele
vegetative bacteriene (inclusiv Mycobacterium tuberculosis) dar nu
distrug endosporii bacterieni şi unele virusuri fără înveliş extern
(rhinovirus, enterovirus). Timpul de contact este de 10 minute:
fenoli, iodofori, alcooli, compuşi pe bază de clor etc.
 Nivel scăzut: substante care distrug majoritatea formelor vegetative
bacteriene, unele virusuri, unii fungi dar nu distrug M.tuberculosis,
endosporii bacterieni şi virusurile nude. Timpul de contact este de
10 minute: clorhexidina, compuşi cuaternari de amoniu.
Hipocloritul de sodiu
(NaOCl) 5%
 Oxidează grupările chimice libere ale
enzimelor
 Instabil in timp
 Coroziv
Alcoolul etilic
 Denatureaza rapid proteinele si
dezorganizeaza membranele
 Eficient in conc.70%
 Inactiv pe sporii bacteireni
Compusii fenolici
 Activi pe membranele celulare
 Nonsporocid
 Activ pe micobacterii
Compusii quaternari de
amoniu
 Activi pe membranele celulare
 Micobacteriostatic si sporostatic
Formaldehida
 Folosita pentru decontaminarea
echipamentelor si spatiilor largi.
 Potential carcinogena

Glutaraldehida
 Activa pe membranele celulare
si pe
peretii celulelor bacteriene.
Dezinfectante uzuale in laboratorul clinic
DEZINFECTANTE INDICATII
HIPOCLORITI Dezinfectia suprafetelor, borcane,
pipete
DERIVATI FENOLICI Dezinfectia suprafetelor, borcane,
pipete
FORMALDEHIDA Dezinfectia suprafetelor, boxelor
(f.gaz); inactivare de suspensii
bacteriene (solutie)
GLUTARALDEHIDA Dezinfectia suprafetelor

DETERGENTI CATIONICI Spalarea si dezinfectia suprafetelor

IODOFORI Sol. dezinfectante pentru pipete

DEZINFECTIA

TESTE DE EFICIENTA

Coeficientul fenolic: cu cat este mai activ un compus

fenolic in comparatie cu fenolul pur

Test Rideal-Walker (cu substante pure)

Test Chick-Martin (in prezenta de substante organice)
Coef.CM<Coef.RW
 AGENTI FIZICI

 Caldura
Uscata (deshidratare/oxidare)
Umeda (coagularea proteinelor)
 Frigul
 Desicarea
 Presiunea osmotica
 Radiatiile
 Filtrarea
Caldura uscata
PRINCIPIU: OXIDAREA PROTEINELOR

 Incalzirea la rosu
(ansa bacteriologica)
Caldura uscata

 Flambarea (trecerea prin flacara)

 Incinerarea (arderea cu reducere la cenusa)
 Sterilizarea prin aer cald
Etuva (poupinel)
Indicaţii: sticlărie de laborator, vase din porţelan, instrumentar
chirurgical metalic, pulberi inerte termostabile, substante uleioase

60 min. at 160°C
40 min. at 170°C
20 min. at 180°C
Controlul eficientei sterilizarii

Indicatori fizici

Indicatori chimici

Indicatori biologici
(benzi de hartie de filtru cu
10^6 spori B.subtilis )
Caldura umeda
PRINCIPIU: DENATURAREA PROTEINELOR

 Temperaturi <100°C
pasteurizarea
- 62°C/6min+ racire brusca la 4°C
- 72°C/8-12sec+ racire brusca la 4°C
- 90°C/3 min.(UHT)
• Temperaturi = 100°C
- fierberea
- tyndalizarea
inclazire succesiva timp de 3 zile la
60°C/60 de min.
 Temperaturi >100°C autoclavarea
 Autoclavarea
Sterilizare prin vapori sub presiune
Mecanism de acţiune:
- Denaturarea proteinelor/enzimelor
- t° vaporilor de apă într-un spaţiu
închis creste proporţional cu
presiunea:
0,5 atm 115°C/30-40min.
1 atm 121°C/30min.
2 atm 134°C/20min.
- Indicaţii: sterilizarea materialului
infecţios din laborator, medii de
cultură termostabile, instrumente
chirurgicale, halate, câmpuri
operatorii, etc.
- Contraindicaţii: material plastic,
piele, blană
Controlul eficientei sterilizarii
Indicatori chimici Indicatori biologici
(mediu de cultura inclus
cu spori de Bacillus (Geobacillus)
stearothermophilus ATCC 7953)
Frigul
 Refrigerarea
Temperaturi de 0 – 7° au efect bacteriostatic asupra majoritătii
microorganismelor; unele bacterii mor (Neisseria meningitidis,
N.gonorhoeae, Haemophilus influenzae) altele se pot multiplica.
 Congelarea
Dacă este făcută lent, la temperaturi de (-20°C) favorizează
formarea cristalelor de apă care lezează membrana citoplasmatică a
celulei bacteriene care va fi distrusă (efect microbicid).
Congelarea rapidă la (-80°C) în bulion glicerinat duce la solidificarea
amorfă a apei intracelulare ceea ce face ca celula microbiană să
rămână în viată.
 Socul rece
Unele bacterii pot fi distruse prin scăderea bruscă a temperaturii, de
la 45°C la 15°C.
Liofilizarea

 Asocierea a 2 factori fizici (frigul şi desicarea)

 Metoda constă în congelarea rapidă a suspensiei
microbiene într-un mediu protector urmată de uscarea
rapidă în vid şi înfiolarea produsului obtinut.
 Presiunea osmotica

 Înmedii hipotone are loc acumularea apei în celula bacteriană

care devine turgescentă, peretele bacterian spărgându-se.

 În mediul hiperton bacteria pierde apă (plasmoliza), fenomen

cu efecte letale asupra bacteriei.
Presiunea osmotica
 Filtrarea

 Trecerea unui fluid printr-un corp

poros (1…0.22… 0,025m)

 Membrane: acetat de celuloza (filtre

Millipore), nitrat celuloză,
policarbonat, teflon

 Indicatii: sterilizarea lichidelor

termolabile, sterilizarea aerului
pentru crearea unui mediu aseptic in
boxe cu flux de aer laminar HEPA
(High-efficiency particulate air)
Radiatiile
 R. ionizante X, 
Ionizeaza apa si
distrug ADN-ul celular
Penetraţie mare
Indicatii:seringi plastic, manusi
chirurgicale, materiale de sutura,
catetere

 R. neionizante UV
Afecteaza replicarea
ADN-ului celular
Penetratie slaba (260nm)
Lampa germicidă: sterilizarea
suprafeţelor de lucru netede,
curate, sanitizarea saloanelor,
sălilor de operaţie