Curs 3 19.10.

2011

Clasificarea proteinelor
Structura proteinelor
Structura primar
Proteine cu structura secundar
Keratina; Colagenul; Elastina
Structura teriar
Structura cuaternar
Hem
 Proteine

Compui macromoleculari

Sunt 1010 1012 tipuri de proteine n lumea vie

Clasificarea proteinelor
 Dup compoziia chimic
proteinele simple formate numai din aa (lizozimul, ribonucleaza).

proteinele conjugate conin grupri adiionale (prostetice)

hem (hemoglobina, mioglobina, citocromii, catalaza);
coenzime provenite din vitamine (succinat dehidrogenaza, transaminazele,
lactat dehidrogenaza);
metale (feritina, ceruloplasmina);
acizi nucleici (ribozomii, nucleozomii);
lipide (chilomicroni, VLDL, LDL, HDL);
glucide (imunoglobulinele, colagen).
 Clasificarea proteinelor dup mrime i
form
Proteine globulare
uor solubile n ap
intracelulare: hemoglobina, mioglobina, imunoglobulinele,

Proteine fibrilare
insolubile n ap
extracelulare, cu roluri de susinere: collagen, cheratin, miozin,
elastin.
 Clasificarea proteinelor dup rol

structural: colagenul, elastina, keratina;

catalitic (enzime): tripsina, chimotripsina, revers transcriptaza;

aprare: imunoglobulinele , interferonii

hormonal: insulina, glucagonul, parathormonul;

transport:

- albuminele serice (transport cationi, vitamine, metabolii)

-hemoglobina (transport oxigen)

-transferina (transport fier)

 Structura proteinelor
Structura primar
Proteine cu structura secundar
Keratina; Colagenul; Elastina
Structura teriar
Structura cuaternar
Hem
 Structura proteinelor

Organizare structural:
-structura primar;
-secundar;
-teriar;
-cuaternar
 Aminoacid
a).Structura
primar
Legtur
peptidic

b).Structur
secundar

-foaie pliat
-helix
Legturi de hidrogen

c).Structura Lasou
tertiar

d).Structura
cuaternar
 Structura primar a proteinelor sau structura
covalent

Structura primar precizeaz:

-tipul;

-cantitatea;

-secvena aa din molecul

O R2 H O

H3N+ CH C N CH C N CH C

R1 H O R3
 F. Sanger 1953 structura insulinei
 Secvena aa din proteine este determinat
genetic

-fiecare aa proteinogen este codificat de una

sau mai multe secvene de trei nucleotide
numite codoni.
 Este important s tim structura

primar a proteinelor ???

 Determinarea secvenei de aa este important
pentru:

a. patologia molecular

anemia falciform rezult din nlocuirea

Glu din poziia 6 a lanului al Hb cu

Val
b.determinarea structurii tridimensionale
Structura tridimensional a moleculelor
proteice

se realizeaz structura cu energia

minim determinat de interacii
necovalente
 Mioglobina i hemoglobina au fost primele
proteine pentru care s-a stabilit structura
tridimensional prin difracie cu raze X

In 1962 Perutz i Kendrew au primit premiul

Nobel pentru aceast realizare

Sunt reprezentate zonele de helix i

gruparea prostetic numit Hem
 Cine determin realizarea structurii
secundare i teriare a proteinelor ???

-axul catenei polipeptidice i cele

-20 de tipuri de radicali legai la C
Structura secundar a proteinelor se refer la
aranjamentul spaial al axului catenei polipeptidice

O R2 H O
+
H3N CH C N CH C N CH C

R1 H O R3
 Care este conformaia cea mai stabil ?

cea n care se realizeaz cel mai mare

numr de puni de hidrogen ntre gruprile
NH- i CO- care aparin diferitelor
grupri peptidice.
N H O C
Paquling i Corey
au postulat 2 structuri secundare:

-elicea i

structura
 Structura -helix
C
O
lanul din L-aa se rsucete n jurul
C
unui ax, la nivelul legturilor simple; C
O
HO
C
N
gruprile CO- i NH- O C N
HO
devin adiacente stereochimic H N C
C
i formez puni de hidrogen. O
O

N H
N

HH
NN
NN
 Caracteristicile helixului
elice dreapt;

distana ntre 2 aa pe vertical este 0,15 nm;

pasul elicei, este de 0,54 nm i cuprinde 3,6

aa per pas;

diametrul elicei este de 1,01 nm;

radicalii R ai tuturor aa sunt orientai spre

exteriorul -helixului
 a) Atomii Cai resturilor
aminoacidice b)
consecutive
R
R R

R
R
0.54 nm
3,6 aminoacizi R
per tur
R
R
Catena polipeptidic
Structura se afl la proteinele fibrilare i globulare

Mioglobina, protein globular, conine 75% structur

Keratina, proteina fibrilar, conine aproape 100% structur

 Structura -foaie pliat

Toate legturile peptidice componente sunt implicate n

legturi de hidrogen care sunt perpendiculare pe axul
catenei.
Structura , se refer la legturile de hidrogen
dintre punile peptidice din cadrul aceluiai lan
polipeptidic

Structura se refer la legturile de hidrogen dintre

punile peptidice, care fac parte din lanuri
polipeptidice diferite.
 Tipuri de structuri
structur cu lanuri antiparalele
H R O H R O H
N N N

N N
R O H R O H R O

R H O R H O R H
N N N
N N
O R H O R H O
 Structur cu lanuri paralele
H R O H R O H
N N N

N N
R O H R O H R O

H R O H R O H

N N N

N N

R O H R O H R O
 Structura ac de pr sau -turn
prolina i glicina sunt aminoacizii cei mai rspndii n
cadrul acestei structuri

H2 N

HOOC
 Structura este n proporie de ~100% n
fibroina din mtase;

Structurile conin ntre 2-12 catene

polipeptidice;

Fiecare caten conine pn la 15 resturi aa.

 Structura proteinelor fibrilare

keratina, miozina, colagenul, elastina

Keratina se afl n pr, unghii, piele
La mamifere:
keratinele au structur n
proporie de ~ 100%

se afl cca. 30 variante de keratin

n funcie de esut
Structura primar
-au un coninut ridicat de Cys

-fiecare lan peptidic conine 7 aa care se repet

-n poziiile a i d predomin resturi nepolare

-pasul elicei n -helix este 0,51 nm

Structura secundar
dimer protofilament protofibrile microfibrile

macrofibrile
 a) Dimer b) Protofilament c)Microfibril
Capete
N-terminale

~450 A
Capete

Protofibril
C-terminale
 Proprietile keratinelor
Keratinele pot fi:
- cu coninut ridicat n sulf hard;
- cu coninut sczut n sulf soft

Legturile disulfurice pot fi rupte prin reducere cu

mercaptani.
Tratarea prului cu un agent oxidant restabilete
legturile de sulf ntr-o conformaie nou
 Colagenul.
este cea mai abundent protein fibroas
(~25% din masa proteinelor organismului uman)

este componentul major al esutului conjunctiv din oase, dini

cartilagii, tendoane, cornee i din matricea fibroas a pielii i vaselor
de snge.

reprezint 90% din matricea organic a osului

prezint rezisten la traciune

pstreaz integritatea esuturilor n constituia crora intr.

 Structura primar: (X Y - Gly)n

glicina (33%)
prolina (10%)
hidroxiprolina i hidroxilizina doi aminoacizi atipici (proporie mic)
nu conine cistein

prolilhidroxilaza i respectiv lizilhidroxilaza n prezena

O2, a ionilor Fe2+ i a vitaminei C catalizeaz hidroxilarea prolinei i
lizinei

Deficiena vitaminei C afecteaz hidroxilarea i, prin urmare,

obinerea unui colagen normal.
 Structura secundar

trei lanuri polipeptidice ,

fiecare formnd cte o elice cu rsucire spre stnga,

se nfoar unul n jurul celuilalt

rezultnd un triplu helix (tropocolagen)

cu rsucire spre dreapta

 pasul elicei din lanurile este 9,3 (din
cauza prolinei)

pasul triplei elice este de ~28

 moleculele de tropocolagen se asociaz
formnd microfibrile
 Sinteza polipeptidelor

Modificri
post-translationale n RER si aparatul Golgi
din fibroblaste
Formare triplu-helix
(procolagen)

Secretie n spatiul extracelular

Clivarea extensiilor peptidice

din capetele N- si C-terminale n spatiul extracelular
cu formarea tropocolagenului al tesutului conjunctiv

Asamblarea moleculelor de
tropocolagen n microfibrile

Formarea de legturi covalente

(cross-lincare) n microfibrile
Fibr matur de colagen
 -
COO -
COO
+
H2 N CH +
-
H2 N CH
H 2 C CH (CH2 ) 2 CH COO
H2 C CH 2 H2 C + +
CH 2 OH H 3 N OH NH3
OH
4-hidroxiprolin 3-hidroxiprolin 5-hidroxilizin
 N CH CO N CH CO
Prolil-hidroxilaza
H 2C CH2 + -cetoglutarat H 2C CH2 + succinat
C Vitamina C C
H H H OH
rest de prolin O2 CO2 rest de 4-hidroxiprolin

NH CH CO NH CH CO
Lizil-hidroxilaza
(CH 2 )2 + -cetoglutarat (CH 2 )2 + succinat
CH 2 Vitamina C HC OH
CH 2 O2 CO2 CH 2
NH 2 NH 2
rest de lizin rest de 5-hidroxilizin
 NH O2 NH3+H2O NH O=HC NH
2+
Cu
HC (CH2) 3 CH 2 NH 2 HC (CH2) 3 CH=O + CH 2 (CH2) 2 CH
lizin-oxidaza
CO rest de lizin CO rest de alizin CO
rest de alizin
condensare cu un rest de lizin
condensare crotonic
-HOH -HOH

NH NH NH CH=O NH
HC (CH2) 3 CH N (CH2) 4 CH HC (CH2) 3 CH C (CH2) 2 CH

CO CO CO produs de condensare CO
baz Schiff ntre dou resturi de
alizin

NH NH
HC (CH2) 3 CH 2 NH (CH2) 4 CH

CO lizinonorleucin CO
(cross-linkare)
 Peptidul pro-

-cetoglutarat O2
Hidroxilarea prolinei si lizinei
succinat CO2
OH
RER
OH OH
Glicozilarea hidroxilizinei
OH

Intracelular
OH OH
OH Asocierea celor 3 lanturi pro-
S S
OH OH S
S
S
S S
S
OH OH
Glicozilare suplimentar
OH
S S Complex
S OH OH S
S Golgi
S S
S OH OH

Etapele sintezei intracelulare a procolagenului

 OH
S S
S OH OH S
S
S S
S OH OH
Clivarea extensiilor peptidice
din capetele C- si N-terminale
cu formarea tropocolagenului

TTTropocolagen Extracelular
Asocierea moleculelor de tropocolagen

Fibrila de colagen
Cross-linkare intra-
si intermolecular

Fibra de colagen
 Secventa de
aminoacizi - Gly - X - Y - Gly - X - Y -Gly - X - Y -

-helix

Triplu helix

Tropocolagen

Fibrila de colagen

Fibra de colagen
 microfibrilele sunt stabilizate prin legturi
covalente ncruciate la care particip resturile
de Lys i His

numrul legturilor ncruciate crete cu

vrsta

microfibrilele se dispun n mod deosebit n

diverse organe
 La mamifere:
19 varieti de colagen
30 lanuri , distincte genetic
cel mai rspndit este colagenul de tip I
[1 (I)]2 . 2(I)
 Colagenul, odat format, este relativ stabil metabolic;

Degradarea colagenului este crescut n foame i n diferite

stri inflamatorii

Producerea excesiv de colagen are loc n ciroza hepatic

 Elastina este cea mai important protein din esuturile care necesit
elasticitate (plmn, artere, unele ligamente elastice).

Spre deosebire de colagen:

nu conine hidroxilizin; conine ~30% Glicin, ~10% Prolin,

muli aa nepolari i o proporie foarte mic de hidroxiprolin

nu conine:
unitatea repetitiv (Gly-X-Y)-

triplul helix

carbohidrai
 Este o singur varietate genetic de elastin;

Se sintetizeaz n fibroblati sub form de tropoelastin n

care cteva resturi de prolin sunt hidroxilate la
hidroxiprolin

Dup secreie n mediul extracelular formeaz agregate

insolubile

extrem de stabile

cu un turnover lent
 comprimare relaxare

monomer de elastin legturi

ncrucisate
HOOC CH NH 2 H2 N COOH
(CH 2 )2 CH
H2 N CH COOH COOH
CH 2 (CH 2 )2 CH
H2 N (CH 2 )3 COOH (CH 2 )2 NH 2
CH 2
NH HC (CH 2 )2 (CH 2 )2 CH +
+ N (CH 2 )3
CH 2 HOOC N NH 2 NH 2
(CH 2 )4 CH
CH 2 (CH 2 )4
(CH 2 )2 CH COOH
H2 N CH COOH H2 N COOH
HOOC CH NH 2
lizinnorleucin desmozina izodesmozina
 (CH 2 )3 (CH 2 )3 CH 2 (CH 2 )3
C H CH 2 CH 2 CH 2
C C
O NH 2 condensri C N+
H C O O
aldolice
H2 C
C C
H C CH2
(CH 2 )3 (CH 2 )3 (CH 2 )2 CH 2

legturile covalente stabilite

de desmozin
 O scdere a cantitii de elastin se
nregistreaz n emfizemul pulmonar
 Fibronectinele, o familie de glicoproteine care se afl n
matrixul extracelular i n plasm

sunt dimeri (250 kDa) unii prin puni disulfurice;

au rol:
n interaciile dintre celule i membranele bazale sau

ntre diveri componeni ai matricei extracelulare i celule

n embriogenez

n meninerea integritii esuturilor

n hemostaz
 Fibronectinele stabilesc legturi cu alte proteine
conectnd:
proteine extracelulare (colagen, laminin)

mucopolizaharide (proteoglicani)

receptori membranari (integrine)

proteine intracelulare care formeaz citoscheletul

(actin, vinculin)
 Structuri supersecundare
In structura proteinelor globulare se combin
elemente de structur secundar
-helix
-foaie pliat
secvene nerepetitive

Unitate -- Greek key -meander -barell

 Resturile prolil, mpiedic rsucirea elicoidal a
lanurilor polipeptidice

Resturile glicil, confer lanurilor polipeptidice

flexibilitate

structuri de forma literei , formate din 6 pn la

16 resturi aminoacidice au rol n procesele biologice
de recunoatere.
 Structura teriar a proteinelor

descrie mpachetarea lnului polipeptidic ca urmare a

interaciunilor necovalente dintre radicalii R de la C

este dictat de structura primar

 Aminoacid
a).Structura
primar
Legtur
peptidic

b).Structur
secundar

-foaie pliat
-helix
Legturi de hidrogen

c).Structura Lasou
tertiar

d).Structura
cuaternar
Tipuri de legturi necovalente dintre radicalii R
ai aa
Legturi ionice
- ntre radicalii cu sarcin negativ (din Asp, Glu)
-radicalii cu sarcin pozitiv ( din Lys i Arg):

NH NH
- +
CH CH2 COO H3N (CH2) 4 CH

CO CO

Aspartil Lizil
 Puni de hidrogen
ntre radicalii cu grupri:
-alcoolice (din Ser, Thr)
-fenolice (din Tyr)
-amidice (din Gln i Asn):

NH H NH
CH CH2 OH O CH2 CH
CO CO

Seril Seril
 Interaciuni hidrofobe

ntre resturile aa nepolari ca Val, Leu, Ile,

Phe, Ala:

NH H3 C NH
CH CH3 CH CH
CO H3 C CO

Alanil Valil
 Legturi disulfurice
ntre resturi de Cys

NH NH
CH CH 2 S S CH 2 CH

CO CO

Cisteinil Cisteinil
Etape n mpturirea proteinei
 Localizarea radicalilor n structura tridimensional a
proteinelor n funcie de polaritatea lor

Radicalii nepolari de la Val, Leu, Ile, Met i Phe ocup

n cea mai mare parte interiorul proteinei, fiind lipsii
de contactul cu apa

Radicalii polari, cu sarcin electric de la Arg, His, Lys,

Asp i Glu sunt de obicei localizai la suprafaa
proteinei n contact cu apa.

Gruprile polare nencrcate electric de la Ser, Thr,

Asn, Gln i Tyr sunt de obicei la suprafaa proteinei dar
se pot localiza i n interiorul moleculei.
 Titina = conectina codificat de gena TTN (363
exoni)

Este o protein gigant (varianta uman conine

34.350 amino acizi), Metionin-------Izoleucin

responsabil de elasticitatea musculaturii striate

funcioneaz ca un arc molecular

it serves as an adhesion template for the assembly

of contractile machinery in muscle cells
 Mioglobina
protein globular Hem
se afl n muchi
rezervor tisular de oxigen.

conine o parte proteic

numit globin i o grupare
neproteic denumit hem.
 75% din lanul polipeptidic C
formeaz -helix

Lanul polipeptidic cuprinde 8 F

B D
segmente elicoidale G
(denumite A, B, C, .H) E

Prolina se afl n 4 puncte de

terminare a elicelor H
A
 Neuroglobina
-a fost identificat n anul 2000 ca
protein implicat n homeostazia
celular a oxigenului

-n 2003 s-a stabilit structura

tridimensional 3D a neuroglobinei
umane
Neuroglobina
Este hemoprotein intracelular exprimat n:
sistemul nervos central i periferic
lichidul cerebrospinal
retin i
esuturi endocrine
Monomer care leag reversibil oxigen, mult
mai puternic dect Hb
-furnizeaz protecia creierului n condiii de
hipoxie sau ischemie
 Structura cuaternar
proteine oligomere, sunt alctuite din mai
multe lanuri peptidice, numite protomeri

protomeri prezint fiecare structura sa

primar, secundar i teriar.
 Asamblarea protomerilor, structura cuaternar, se
realizeaz numai prin fore slabe necovalente

Complementaritatea suprafeelor de contact

asigur un grad nalt de specificitate structurilor
cuaternare

+
 Proteina Masa proteinei Numr Masa protomerilor
Kdaltoni protomeri Kdaltoni

Creatin kinaza 80 2 40

Miozina 468 2 212

Lactat dehidrogenaza 150 4 35

Glicogen fosforilaza 270 4 92,5

Hemoglobina 64,5 4 16

Ceruloplasmina 151 8 18

Glutamin sintetaza 592 12 48,5

 Importana structurii cuaternare

Structura cuaternar permite reglarea activitii

proteinelor

Defectele pot fi reparate prin simpla nlocuire a

subunitii
 aperonii moleculari
sunt proteine care:
favorizeaz mpturirea corect a proteinelor;

permit proteinelor greit mpachetate s se rearanjeze n forma lor

nativ;

faciliteaz transportul proteinelor prin membrane

aperonii = proteine de oc termic (Hsp) deoarece viteza lor de

sintez crete cu creterea temperaturii

Hsp 70, proteine cu masa molecular 70-kD i aperonine,

proteine mari cu multe subuniti.
 Impturirea greit a proteinelor
(protein misfolding)
Se asociaz cu amiloidozele i bolile prionice
Amiloidozele
Cine determin impturirea greit a proteinelor ?
se poate produce spontan sau poate fi determinat de o mutaie
genetic.
Precursorul
proteinei
amiloid
Amiloid
Clivare
enzimatic A
Extracelular
Agregarea spontan a
Membran amiloidului cu formarea
fibrilelor de foi -pliate
Intracelular
Clivare
enzimatic
Formarea plcii amiloid
 Bolile prionice
Prionii sunt proteine implicate n maladii ca:

encefalopatia spongiform transmisibil

maladia Creutzfeldt Jakob la om

scrapie in sheep i

mad cow disease

Forma neinfecioas a prionilor este prezent n creierul mamiferelor

fiziologic normale, pe suprafaa neuronilor i a celulelor gliale

Ea are aceiai structura primar cu proteina infecioas

 Protein normal protein infecioas
transformare determinat de modificarea
conformaiei tridimensionale

Agentul infecios este, o versiune modificat

a proteinei normale, care acioneaz ca
template pentru transformarea proteinei
normale ntr-o form patogenic.
Modificarea conformatiei proteinei
Cresterea exponential a formei
infectate
 PI proteine

Denaturare proteine
 Curs 4 26.10.2011

Hemoproteine
Mioglobina

Hemoglobina; citocromii

Proteine plasmatice
serumalbumine

Imunoglobuline

Factorii coagulrii (fibrinogenul)

 Hemoproteinele

proteine conjugate (hem + parte proteic):

-hemoglobina;
-mioglobina;
-citocromii;
-diverse oxidaze i peroxidaze
 Hemul
Hem = grupare prostetic
-conine Fe2+ i protoporfirina IX

Protoporfirina IX = compus tetrapirolic, cu

caracter aromatic, cu urmtorii substitueni:
1, 3, 5, 8 grupri CH3 (metil, M);
2, 4 grupri CH=CH2 (vinil);
6,7 grupri CH2-CH2-COOH (propionic, P)
 M V

HC CH
M N M
H
N N
H
P N V
HC CH

P M
Protoporfirin IX
 Protoporfirina leag coordinativ un ion de Fe2+
formnd hemul

Ionul feros din hem are cifra de coordinaie 6

Hemul este aezat n cavitatea hidrofob a

hemoproteinelor
 Mioglobina
protein globular Hem
se afl n muchi
rezervor tisular de oxigen

conine o parte proteic

numit globin i o
grupare neproteic
denumit hem.
(87 prox 58 distal)
 Legarea O2 n mioglobin

rol n depozitarea i dispersarea O2 la nivel

tisular.
leag reversibil un mol de O2

Mb + O2 MbO2
 His proximal

N N
2+
Fe

N N

O=O His distal

 Metmioglobin
Mb n care se afl Fe3+
nu poate lega O2
oxigenul este nlocuit cu o molecul de ap

hem din proteine poate lega i: CO, NO, H2S

cu afinitate mult mai mare dect O2
 Mb leag O2 la presiunea mic a acestuia din
esuturi

CO2 O2

Plmn
PO2=100mm Hg

Snge Hemoglobin + CO2 Hemoglobin + O2

PO2=20 mm Hg
Muschi CO2 Mioglobin + O2

Mitocondria
 Curba de oxigenare a Mb
100 Arc de hiperbol
Saturare cu O2 (%)

80 Mb

60

40

20

20 40 60 80 100 120
Presiunea O2 (mm Hg)
P50 pentru Mb = 1 torr
 Hemoglobina
protein intracelular (eritrocite)
Tetrameric (are structur cuaternar)
d culoarea sngelui

fiecare subunitate a Hb = hem + globin,

unde se leag oxigenul
hem din Mb hem din Hb
 Structura hemoglobinei
protein oligomer
a) b)

Hem
Locul de legare a
2,3-bisfosfogliceratului

 Specii moleculare de Hb

Hb A1 =

Hb A2 = d

Hb F = g

Hb E = e
 Rolul fiziologic al Hb

Hb transport

O2 de la plmn la esuturi

CO2 i protonii de la esuturi la plmn.

 Curba de oxigenare a
hemoglobinei.
Hb fixeaz 4 molecule de O2

cooperativitate

O2 O2 O2
O2
Hb HbO2 Hb(O2)2 Hb(O2)3 Hb(O2)4
 Curba de oxigenare a Hb este o sigmoid
Valoarea P50 pentru Hb
este de 26 mm Hg
Mioglobin Hemoglobin (pH=7,4)
100

Saturare cu O2 (%)
80 Tesut
Plmn
60

40

20 P50 (Hb)

20 40 60 80 100 120
Legarea O2 la Hb Presiunea O2 (mm Hg)

se face prin cooperativitate

 Strile conformaionale T i R ale Hb
Starea T - conformaia deoxiHb
-interaciuni intracatenare i intercatenare;
-opt legturi ionice

Asp His
NH3 + COO-
94 146

Arg Asp Lys

COO- NH3+
141 126 40
Lys Asp Arg
NH3 +
COO-
40 126 141
His Asp
COO- NH3+
146 94

Starea R - conformaia oxiHb

 Planul
protoporfirinei

CH CH
H2C H2C O
2+ 2+
N Fe N Fe O
C C
CH O2 CH
Histidina proximal
(F 8)
Forma T Helix F

Leu
Leu Val

Forma R
Histidina proximal (F 8)

Fe

Planul protoporfirinei
O2
Factori care influeneaz eliberarea
O2 de pe Hb:

-temperatura

-pH-ul

-presiunea CO2

-2,3-bisfosfogliceratul
 Transportul CO2 i efectul Bohr

efect Bohr

Eliberarea O2 de ctre Hb crete cu scderea

pH-ului i creterea presiunii pariale a CO2.

 100
pH=7,6
Saturare cu O2 (%)

80
pH=7,4
60
pH=7,2
40

20

20 40 60 80 100 120
Presiunea O2 (mm Hg)

Efectul Bohr, creterea afinitii Hb pentru O2, cu creterea pH-ului

 Prin efectul Bohr Hb furnizeaz O2 suplimentar
muchiului n contracie

muchiul n contracie, P <20 torri.

Muchiul genereaz acid lactic

pH-ul poate ajunge de la 7,4 la 7,2.

La pO2 de 20 tori Hb elibereaz de ~10 ori mai

mult oxigen la pH=7,2 dect la pH=7,4
 Transportul CO2 la plmn:

15% din CO2 este transportat la plmn sub form

de carbamai
gruprile NH2 ale aa terminali din lanurile Hb i a altor proteine,

leag CO2

forma T (deoxi) a Hb leag mai mult CO2 dect forma R (oxi).

- +
R NH2 + CO2 R NH COO + H
ion carbamat
 85% din CO2 este transportat n form de ion bicarbonat
la plmn:

anhidraza carbonic
CO2 + H2O H 2CO3
+ -
H2CO3 H + HCO3
 Plmn Snge Muschi

Respiratie
Expirare
AC AC
CO2+H2O CO2 HCO3- +H+ HCO3- +H+ CO2 CO2+H2O

H2O H2O
MbO2
Inspirare Hb HbH+ HbH+ Hb

O2 O2
O2
Mb
pO2=100 tori HbO2 HbO2
pO2=20 tori
 Bisfosfogliceratul se leag la deoxi-Hb

Se afl n eritrocite n raport molar 1:1 cu Hb

micoreaz afinitatea Hb pentru O2 de 26 de ori
-
O
C O
H C O PO32-
2-
H C O PO3

H
D-2,3-bisfosfoglicerat
 Structura hemoglobinei
protein oligomer
a) b)

Hem
Locul de legare a
2,3-bisfosfogliceratului

 His 143

Lys
82 His 2

G
P
NH3+

B
NH3+

Lys 82
His 2

His 143
 Curba de oxigenare a hemoglobinei n absena 2,3-
bisfosfogliceratului
Fr 2,3-BPG
100
Saturare cu O2 (%)

80
Cu 2,3-BPG
60

40

20

20 40 60 80 100 120
Presiunea O2 (mm Hg)
 lanurile peptidice g din Hb F nu leag 2,3-bisfosfogliceratul

Hematii de la ft

Saturare cu O2 (%) 100

80

60 Hematii de la mam

40
O2 trece de la oxihemoglobina
20 matern la deoxihemoglobina
fetal

20 40 60 80 100 120
Presiunea O2 (mm Hg)

In prezena 2,3-bisfosfogliceratului Hb F are afinitate mai mare pentru oxigen

dect Hb matern.
 Hb transport NO, vasodilatator, la
celulele din pereii capilarelor tisulare
favoriznd eliberarea O2
 Aspecte clinice

Glicozilarea Hb A1 n diabetul zaharat

-peste 12% din cantitatea total de Hb poate fi glicozilat n
diabet (NORMAL ~ 5%)

Hemoglobinopatiile (mutaiile n structura subunitilor

proteice):
-Hb S sau anemia cu hematii n form de secer
Glu 6 Val
-Thalasemiile sunt anemii hemolitice determinate de producerea
unor cantiti insuficiente de subunitii sau din hemoglobin.
 Citocromii
transport electroni
Structura citocromului c
 In legtur cu Hb este corect afirmaia:

A. Hb leag 4 molecule de 2,3-bisfosfoglicerat

B. OxiHb i dezoxiHb au aceiai afinitate pentru
protoni
C. Acidoza (scderea pH-ului) micoreaz
sigmoidicitatea curbei de saturare cu oxigen a Hb
D. Hb transport NO la celulele din pereii capilarelor
tisulare favoriznd eliberarea O2
E. Afinitatea Hb pentru oxigen scade cu creterea
procentului de saturare cu oxigen a acesteia
Afirmaia corect att pentru mioglobin, ct
i pentru hemoglobin este:

A. Leag hemul ntr-o cavitate hidrofil

B. Curba de saturare cu oxigen este influenat de variaia pH-ului mediului

C. Contine subuniti proteice legate covalent ntre ele

D. Leag bioxidul de carbon sub form de carbamino-derivai

E. Are o proporie foarte mare de structur ca structur secundar

 Structura hemoglobinei
protein oligomer
a) b)

Hem
Locul de legare a
2,3-bisfosfogliceratului

 Proteinele plasmatice

Concentraia proteinelor Linia de start

plasmatice 7g/dl
gAlb

Albumine 55 (%) Sensul de migrare

1-globuline 4
2-globuline 8 Albumine
-globuline 12
g-globuline 16
g
Fibrinogen 200-400 mg/dl
Hipergamaglobulinemie policlonal (difuz)
-infecii bacteriene cronice
-boli hepatice cronice
-boli autoimune
Hipergamaglobulinemii monoclonale (paraproteinemiile)
Prolifereaz o singur clon de limfocite B Ig cu structur identic
(ex.proteine Bence - Jones)
 Rspuns imediat determinat de
stres, inflamaie cauzat de infecii, distrucii tisulare, traume chirurgicale
 Inflamaie cronic
(endocardit bacterian, tuberculoz, poliartrita cronic, colagenoze=
(Proliferare plasmocite din mduv, ganglioni, splin)
Sindrom nefrotic
 Sindrom nefrotic (pierdere de proteine pe cale renal)
Scad proteinele serice totale i extrem de accentuat proteinele cu mas mic
(albuminele, siderofilina, antitrombina III, componente 1), datorit
eliminrii prin urin ca urmare a creterii permebilitii filtrului glomerular fa
de proteine

Cresc proteinele serice cu mas mare (2 macroglobulina, fibrinogenul,

lipoproteinele i IgM) dei nu se elimin renal i au turnover rapid
Scderea concentraiei albuminelor serice duce la reducerea presiunii coloid
osmotice a plasmei (apariie edeme) fapt ce stimuleaz sinteza hepatic de proteine
inclusiv de albumine dar acestea se elimin renal

Crete colesterolul i lipemia

Hipogamaglobulinemia (sindromul deficienei de anticorpi)
-hipogamaglobulinemiile trectoare ale nou-nscuilor
-hipogamaglobulinemii: congenitale legate de sex
(lips plasmocite, limfocite circulante normale)
de tip alimfocitar
(lips plasmocite, hipoplazie timus i esuturi limfatice)
-hipogamaglobulinemii c tigate (sindrom nefrotic, lezarea celulelor productoare)
 Pierdere enteral de proteine
eliminare proteine plasmatice n tractul digestiv
Lipsesc hipercolesterolemia i hiperlipemia
i globulinele nu cresc ca n nefroz
 Serumalbuminele

proteine sintetizate n ficat

Au pI = 5

La pH-ul fiziologic migreaz spre anod

avnd o ncrcare negativ
 Menin presiunea coloid osmotic a plasmei

Sunt transportori:
Hormoni
vitamine
Medicamente
Cationi
acizi grai liberi
bilirubin

sistem tampon plasmatic

 Globulinele
-globulinele care cuprind: -antiproteaza
(antitripsina), apolipoproteina A;

-globulinele care cuprind: haptoglobina,

ceruloplasmina;

-globulinele care cuprind: transferina,

apolipoproteina B, componentele C3 i C4 ale
complementului

g-globulinele care cuprind: anticorpii

 Imunoglobulinele

Sunt proteine solubile

numite
anticorpi (Ac)
 VL VL
Loc de legare Lant usor Loc de legare
antigen antigen
CL CL

VH VH
COO- -
OOC

Lant CH 1 CH 1
greu Fab
Fab Papaina Zon flexibil

OHC CHO Zon de legare a complementului

CH 2 CH 2
Punti de sulf
Fc

CH 3 CH 3 V = Zone variabile
C = Zone constante

-
OOC COO-
 In ce lichide biologice se afl ???

saliv,
lacrimi,
lapte matern,
majoritar n plasm;

nu pot traversa bariera hemato-encefalic

sau filtrul renal.
Cine le produce ???

sunt elaborate de limfocite B (plasmocite)

n urma unui stimul antigenic;
Ce rol au ???

Ac + Ag complexul Ag-Ac care

blocheaz antigenul i

iniiaz procese care distrug antigenul

 Funciile sistemului imun
recunoatere antigeni;

declanarea cilor pentru distrugerea

antigenilor

recunoaterea i distrugerea celulelor nonself

 Care sunt celulele responsabile de

producerea anticorpilor ????

 Curs 5 2.11.2011

Imunoglobuline

Proteine cu rol n coagulare

 Limfocite

organele limfoide primare (timus i mduva

hematogen).

organele limfoide secundare (splin, ganglioni limfatici,

amigdale)

limfocite circulante - aproximativ 25% din elementele

figurante albe
Dup mecanism rspunsul imun poate fi:

Umoral mediat de limfocitele B

Celular mediat de limfocitele T

 Rspunsul imun umoral
se bazeaz pe producerea de Ig

Mediat de limfocite B maturate n mduv

Antigen

Y Diferentiere
proliferare
Limfocite B Plasmocite Ig (Y)
 Rspunsul imun celular
Mediat de limfocite T maturate n timus

Receptorii limfocitelor T:

pot exista numai ca molecule ataate la suprafaa limfocitelor T;

recunosc numai epitopii rezultai din procesarea antigenelor native i

care au fost expui la suprafaa celulelor prezentatoare de antigen
(macrofage, monocite, limfocite B, celule dendritice) n conjuncie cu
moleculele MHC II (complexul major de histocompatibilitate).
 Limfocitele T

-celule T killer

-celule T helper

-celule T supresoare
 Antigeni
antigeni = orice substan
exo- sau
endogen

capabil s declaneze un rspuns imun.

In ce const declanarea unui rspuns imun
???

stimularea producerii de Ac sau receptori celulari

care se pot cupla specific cu Ag inductor.
 Proprietile antigenelor

Imunogenitatea = Ag determin organismul s

produc un rspuns;

Ce presupune rspunsul imun:

-selecia clonal (clon = o populaie de celule
identice);
-activarea metabolic a clonei;
-expansiunea clonal
Imunogenicitate

Antigen

Y Diferentiere
proliferare
Limfocite B Plasmocite Ig (Y)
 Specificitatea

Ag induce sinteza de Ac care se combin

doar cu Ag care au indus rspunsul

 Care sunt componentele
macromoleculei antigenice ???

determinani antigenici sau epitopi =

locul specific de pe antigen la care se leag
anticorpul

pe suprafaa unui antigen pot exista 10 pn

la 1000 determinani antigenici
 Antigenele pot fi:
imunogene sau complete
-declanaz rspuns imun
-reacioneaz specific cu produsele rezultate
haptene sau Ag incomplete
-greutate molecular mic
-reacioneaz cu Ig specifice
-nu pot iniia un rspuns imun umoral tradus
prin producie de anticorpi, dect cuplate cu o
macromolecul purttoare.
 Ag complet:

component haptenic i

componenta purttoare
 Condiii de antigenicitate
s fie non-self
s aib o greutate molecular mai
mare de 10.000 dal
s aib conformaie spaial stabil
structura chimic s fie ct mai
complex
 Clase de antigene

Proteinele sunt cele mai puternic antigenice

Glucidele i lipidele pot deveni antigene numai

legate de proteine.

Acizii nucleici sunt slab antigenici.

 Structura anticorpilor

Anticorpii sunt tetrameri cu formula molecular

H2L2
-dou lanuri grele identice H (heavy)
-dou lanuri uoare identice L (light)
 VL VL
Loc de legare Lant usor Loc de legare
antigen antigen
CL CL

VH VH
COO- -
OOC

Lant CH 1 CH 1
greu Fab
Fab Papaina Zon flexibil

OHC CHO Zon de legare a complementului

CH 2 CH 2
Punti de sulf
Fc

CH 3 CH 3 V = Zone variabile
C = Zone constante

-
OOC COO-
 Funciile imunoglobulinelor
recunosc Ag i se combin cu el

Ag + Ac Ag - Ac

O molecul tetrameric de Ig este bivalent

 Clasele de anticorpi
IgG cu lanuri grele de tip g; i lanuri uoare lsau k

IgA cu lanuri grele de tip ; i lanuri uoare lsau k

IgM cu lanuri grele de tip m; i lanuri uoare lsau k

IgD cu lanuri grele de tip d; i lanuri uoare lsau k

IgE cu lanuri grele de tip e;i lanuri uoare lsau k

 Rolul anticorpilor

IgG
-sunt monomeri bivaleni
-75-80% din Ig organismului
-traverseaz bariera placentar
-IgG apar dup IgM i IgE
-se afl n snge, limf, lichide interstiiale
-se sintetizeaz n cantiti mari.
-activeaz complementul
 IgA

pot fi monomeri i dimeri

reprezint 15% din Ig organismului.

se afl n snge, n secreii i pe suprafaa

mucoaselor

IgA nu activeaz complementul.

S C
l
S S
S S
J m

J
 IgM
sunt pentameri cu cinci situsuri de legare a Ag

reprezint 3% din Ig organismului.

se gsesc predominant intravascular (80%).

pot traversa bariera vascular alterat, aprnd

n focarele inflamatorii.

nu se transmit transplacentar, dar apar n

concentraii reduse n colostru i secreii.

IgM intervin dup IgE, dar naintea IgG.

 IgE

sunt monomeri, sunt bivalente.

se mai numesc reagine.
IgE sunt circulante sau fixate la suprafaa
mastocitelor, avnd rol n strile de
hipersensibilitate de tip anafilactic.
Dup imunizare, sunt primii anticorpi care
apar (ntre ziua a 7-a i a 10-a).
Nu activeaz complementul.
 IgD

sunt monomeri, sunt bivalente.

reprezint 0,2% din totalul Ig serice.
IgD se afl pe suprafaa limfocitelor B, n
structura receptorilor.
n legtur cu hepatenele sunt corecte afirmaiile:

A.Sunt macromolecule
B.Pot funciona ca antigene
C.Legate covalent de o macromolecul pot funciona
ca determinani antigenici
D.Se leag puternic de anticorpii specifici
E.Nu acioneaz niciodat ca determinani antigenici
Care dintre afirmaiile de mai jos n legtur
cu imunoglobulinele nu sunt corecte ?

A. Legarea antigenului se face printr-un

domeniu situat la capetele carboxi-terminale
B. Migreaz electroforetic cu fraciunea gama a
globulinelor plasmatice
C. Leag antigenul prin legturi covalente
D. Contine legaturi disulfurice intre lanturile de
tip H
E. Pot functiona ca receptori de membran ai
limfocitelor B, pentru antigeni nativi
 Proteine implicate n coagularea
sngelui.
Coagularea sngelui este o component a
hemostazei care implic:
-vasoconstricie
-aderarea i activarea trombocitelor la
locul leziunii vasculare.
 La coagulare particip componeni

plasmatici sau tisulari.

 Componenii cascadei de coagulare

Majoritatea sunt enzime care se activeaz n

cascad
se noteaz cu cifre Romane, de la I la XIII
(factorul VI nu exist)
sufixul a arat c factorul este activ.
 ionii de Ca2+ reprezint factorul IV

Factorii V i VIII nu sunt enzime

Factorul III sau factorul tisular este produs de

endoteliul vascular
F III + Ca2+ activeaz F VII

Se afl n snge, n form inactiv de zimogeni,

se activeaz prin proteoliz, n cascad
 Calea intrinsec
Calea extrinsec
Kalikrein, Kininogen
Traum tisular
Factor XII Factor XIIa
Factor tisular
Factor XI Factor XIa
Factor VIIa Factor VII

Factor IX Factor IXa

VIIIa

VIII Factor X
Factor X Factor Xa
Va
V

Protrombina Trombin
Factor XIII
II

Fibrinogen Fibrin Factor XIIIa

I

Retea stabilizat de fibrin

 Fibrinogenul
Factorul I al coagulrii

protein plasmatic solubil n ap

este precursorul fibrinei (Factorul Ia)

Concentraia plasmatic: 200-400 mg/dl

(2-3% din proteinemia total)
 Structur
Este un hexamer (ABg)

Lanurile B i g au oligozaharide legate N-glicozidic

are 17 puni disulfurice

fibrinopeptidele A i B conin resturi de Glu i

Asp;
n segmentul B se gsesc i resturi de tirozin sulfatat.
 Fibrinopeptidul A
Fibrinopeptidul B Lantul A

Lantul B
Lantul g
-COO- -NH3+ -COO-

47,5 nm
Transformarea fibrinogen-fibrin

Fibrinogen
H2O
Fibrinopeptide

Monomer de fibrin
Agregare

Chiag moale de fibrin

Factor XIIIa (transamidaz)

Chiag stabil de fibrin

2.Legtura:

A.Se formeaz sub influena F-XIIIa

B.Este o legatur de tip baz Schiff

C.Se formeaz ntre lanurile L i H ale imunoglobulinelor

D.Se formeaz ntre lanurile alfa i beta din hemoglobin

E.Particip la formarea structurii primare a proteinelor

 Protrombina (Factorul II)
sintetizat n ficat
Captul N-terminal al protrombinei conine multe resturi
de acid glutamic carboxilat,
carboxilarea este un process dependent de prezena
vitaminei K
- -
O OC COO
CH
R CH 2
NH CH CO NH CH CO
 - - -
COO O OC COO
CH 2 CH
CH 2 CH 2
O2; CO2
Protrombin NH CH CO Protrombin NH CH CO

OH O
CH 3 CH 3

R R
OH O
 Trombina
proteaz care activeaz un numr mare de
factori din cascada de coagulare:
fibrinogen (factorul I);
factorul de stabilizare a fibrinei (factorul XIII);
factoru V;
factorul VIII;
factorul XI.
 Reglarea procesului de coagulare

1. Inhibarea formrii chiagului

Natural
 De ctre componeni plasmatici

inhibitorul cii extrinseci

antitrombina III

proteina C este o serin proteaz plasmatic,

dependent de vitamina K, activat de trombin, care
transform factorii activi VIIIa i Va n forme inactive
 trombomodulina este o glicoprotein din endoteliul
vascular, care acioneaz ca receptor pentru
trombin

Complexul trombin-trombomodulin:

scade afinitatea trombinei pentru fibrinogen

crete afinitatea trombinei pentru proteina C

 2.Degradarea chiagului (fibrinoliza).
Plasminogenul este activat de:
urokinaza (activatorul plasminogenului din rinichi)

factorul tisular activator al plasminogenului (proteaz

eliberat de endoteliul vascular).

Factor tisular

Plasminogen Plasmin

Cheag de fibrin Peptide solubile

n contrast, 2-antitripsina, proteina plasmatic, se leag de plasmina

activ inhibnd fibrinoliza.
 Urokinaza

Factorul tisular activator al plasminogenului

Streptokinaza
(o proteinaz bacterian cu activitate
similar, sunt utilizate n clinic pentru
dizolvarea chiagurilor formate n urma unor
afeciuni cardiace).
 Homeostazia plachetar este meninut de:

Tromboxan A2 produs de plachetele activate care

Promoveaz agregarea plachetelor
Stimuleaz vasocostricia musculaturii netede
vasculare

Prostaciclina produs de celulele endoteliului

vascular
Inhib agregarea plachetar
Stimuleaz vazodilataia
Efectul opus al TXA2 iPGI2 inhib formarea
trombilor la locul injuriei
Care dintre afirmatiile de mai jos, referitoare la
fibrinogen, sunt corecte ?
A. Este necesar transformrii protrombinei in
trombin
B. La pH fiziologic, molecula este ncrcat
negativ
C. Nu prezint structur cuaternar
D. Are solubilitate n ap mai mic dect fibrina,
ntruct are masa molecular mare
E. Conine resturi de tirozin sulfatate