Diagnosticul de laborator

in infectia cu VHC
 VHC
 Fam. Flaviviridae;
 ARNss +, anvelopat;
 Transmitere parenterala;
 Fereastra serologica;
 Variabiltate crescuta;
 85% infectii cronice.
 DIAGNOSTIC IN HEPATITE
VIRALE
1. Tablou clinic
2. Teste biochimice
• Markerii necrozei hepatocitare (transaminaze, LDH)
• Markeri colestaza (FAL, GGT, bilirubina)
• Markeri ai incapacitatii de sinteza la nivel hepatic (proteine serice,
colesterol, trigliceride)

3. Date epidemiologice: cale transmitere, contact

infectant, per. incubatie, vaccinuri
4. Diagnostic etiologic = detectia markerilor virali:
• Antigene virale (Ag)
• Anticorpi antivirali (Ac)
• Acid nucleic viral
 Diagnosticul infecţiei VHC

 Teste serologice (ac. Anti HCV);

 Teste moleculare (ARN/VHC);

 Teste de genotipare.
 Teste serologice in diagnosticul infectiei VHC

TESTE EXEMPLE APLICATII COMENTARII

SEROLOGICE Detectie Ac. Nu pot ELISA-sensibilitate
anti VHC – diferenţia între mare, în populaţii cu
ELISA o infecţie risc scăzut de infecţie
indirecta; acută, cronică are valoare predictivă
sau vindecată pozitiva mică
Confirmare:
Western-Blot;
RIBA.
Teste serologice in diagnosticul infectiei VHC

ELISA de generatia a 3-a : ac. anti NS4, core,

NS3, NS5 (polipeptide recombinate; sensibilitate
97%);

Teste rapide : ac. anti HCV din sange (FDA 2010

– screening).
 Tehnicile moleculare in diagnosticul infectiei
HCV

“Standard de aur”

Diagnosticul infectiei active + Aprecierea

rezultatelor terapiei

GENOTIPARE - apreciază durata

tratamentului şi prognosticul
Tehnicile moleculare in diagnosticul infectiei HCV

TESTE TESTE Detecţia timpurie a

MOLECULARE CALITATIVE: infectiei
Diagnosticul O singură determinare
RT- PCR infectiei active negativă-neconcludentă

TESTE Aprecierea Monitorizarea

CANTITATIVE rezultatelor tratamentului
terapiei – (RVS-
- RT- PCR; răspunsul
- RT- qPCR; virusologic
- TMA. sustinut)
Genotipare VHC LiPA

Distributia genotipurilor VHC pe glob, OMS 2009

Tehnicile moleculare in diagnosticul infectiei HCV

TESTE DE Secvenţiere Genotipuri Apreciază durata

GENOTIPARE nucleotidică, Subtipuri tratamentului şi
RFLP, LiPA Cvasispecii raspunsul la tratament
Restriction Fragment Length Polymorphisms
(RFLP)
Restriction Fragment Length Polymorphisms
(RFLP)
LiPA
Line Probe Assay – genotipare

Hibridizare cu sonde
moleculare cu
specificitate pentru
regiuni conservate
din cadrul
genotipurilor si
subtipurilor
Tehnicile moleculare in diagnosticul infectiei
HCV

• Analiza polimorfismului genei interleukinei 28B

(IL-28B): genotip C/C homozigot; genotip C/T
heterozigot; genotip T/T homozigot.
 Patternul infectiei VHC acute
cu vindecare
anti-
HCV
Ac anti VHC
Symptoms +/-

HCV RNA

ALT
ALT

Normal
0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4
Months Years
Time after Exposure
 Patternul infectiei VHC acute
care cronicizeaza
anti-
HCVVHC
Ac anti
Symptoms +/-

HCV RNA

ALT
ALT

Normal
0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4
Months Years
Time after Exposure
Anti-HCV / HCV RNA Interpretare clinică
Anti-HCV negativ, HCV-RNA •Absenţa infecţiei VHC
negativ
Anti-HCV pozitiv, HCV-RNA •Infecţie VHC acută sau cronică
pozitiv (activă)

•Infecţie acută recentă în care nu

Anti-HCV negativ, HCV-RNA a avut loc încă seroconversia
pozitiv •Infecţie cronică la un pacient
imunosupresat

Anti-HCV pozitiv + HCV RNA negativ

•Infecţie vindecată
•Viremie cu nivel redus sau fluctuantă, intermitent negativă
Diagnosticul de laborator al
infectiei cu VHA
 VHA
 Fam. Picornaviridae;
 ARNss+, neanvelopat;
 Transmitere enterala;
 Nu cronicizeaza.
 Diagnostic de laborator in hepatita A

• ImunoEM

• Dg. Molecular (RNA / VHA ) :

RT-PCR

• Dg. serologic :

detectie Ac anti VHA IgM (ELISA de captura);

detectie Ac anti VHA IgG (ELISA indirecta);
 ELISA de captura
ELISA de detectie anticorpi de clasa IgM

Ag marcat
enzimatic =
conjugat

IgM

Anti-IgM
 ELISA de captura

Placute cu anticorpi anti IgM uman

1.Incubare ser pacient : 1h la 37ºC

2.Spalare
3.Incubare CONJUGAT (antigen marcat enzimatic) :
60min la 37ºC
4.Spalare
5.Incubare SUBSTRAT 20 min la t.camerei
6.Solutie de stopare
7.Citire la spectrofotometru => D.O., MN, MP, Cut-off
 EVOLUTIA MARKERILOR INFECTIEI CU
VHA
simptomatologie
ALT IgG

IgM
Viremie

Infectie
VHA in MF

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
saptamana
Diagnostic hepatita acuta A = detectie Ac anti VHA IgM (ELISA de captura)