1

Biofizica - Conf. Dr. Constanta GANEA - Curs 10.2 Elemente de fotobiologie

Fotobiologia

studiaz

interaciunea

radiaiilor

electromagnetice

neionizante cu sistemele biologice.

Spectrul radiaiilor electromagnetice

Undele electromagnetice sunt unde transversale care au component magnetic i o component electric, vectorii electric i magnetic fiind perpendiculari unul pe cellalt i pe direcia de propagare. Mrimile ondulatorii caracteristice acestor unde sunt lungimea de und , frecvena i perioada T. Din punct de vedere al caracteristicilor ondulatorii spectrul radiaiilor electromagnetice se ntinde de la undele radio lungi caracterizate prin frecvene mici i lungimi de und mari ( km) pn la razele de mare energie, de frecvene mari i lungimi de und mici () (fig.). Energia radiaiilor electromagnetice i interacia lor cu substana Conform relaiei lui Planck, energia unei unde electromagnetice este:

E = h = hc/
unde h = 6,62 10-34 Js, constanta lui Planck c = 3 108 m/s, viteza luminii n vid. Din punct de vedere al energiei transportate, radiaiile electromagnetice se clasific n: I. Radiaii neionizante II. Radiaii ionizante

La interacia cu substana, radiaiile electromagnetice cedeaz energie atomilor i moleculelor. Efectele interaciei pot fi: - creterea energiei de agitaie termic a atomilor i moleculelor - excitarea atomilor i moleculelor (electronii ce intr n alctuirea acestora pot trece pe nivele de energie superioare, tranziiile fiind cuantificate) - ionizarea atomilor i moleculelor (extragerea electronilor din nveliurile electronice ale acestora). Energia de ionizare a principalilor atomi care intr n structura

biomoleculelor este: 13,54 eV pentru hidrogen, 13,17 pentru oxigen, 11,24 pentru carbon i 14,51 pentru azot (1 eV = 1,6 10-19 J). Se observ c energia cea mai mic de ionizare este cea pentru carbon. Se poate calcula lungimea de und a radiaiei care are energia suficient pentru a produce ionizarea carbonului:

E = hc/ = hc/E = 6,62 10-34 3 108/11,241,6 10-19= 110 nm

n spectrul radiaiilor electromagnetice, numai radiaiile x i ndeplinesc condiia ca lungimea de und s fie mai mic de 100 nm, deci numai acestea pot produce ionizri ale principalilor atomi din componena materiei vii. De aceea, radiaiile x i se numesc radiaii ionizante. Radiaiile cu lungimea de und mai mic de 100 nm , ncepnd cu UV (radiaii ultraviolete) extrem(100-190 nm) i mergnd spre undele radio lungi sunt radiaii neionizante. Radiaiile neionizante din domeniul radiaiilor vizibile i ale celor cu lungimi de und apropiate de acestea i interacia lor cu substana constituie obiectul de studiu al fotobiologiei. Ele sunt radiaii cu care aproape toate sistemele vii convieuiesc i sunt absorbite selectiv de ctre moleculele componente ale sistemelor vii.

Interaciunea radiaiilor neionizante cu substana

Se realizeaz prin: 1. Transferul energiei undelor electromagnetice ctre molecule. Energia E = Ee + Ev + Er Ee energia electronilor Ev energia de vibraie Er energia de rotaie Prin creterea energiilor de rotaie i vibraie are loc nclzirea substanei (creterea agitaiei termice): E = Ev + Er Radiaiile infraroii (IR) pot mri numai energiile de vibraie i rotaie ale moleculelor, pe cnd radiaiile ultraviolete pot mri toate tipurile de energie. 2. Transferul energiei undelor electromagnetice ctre electronii periferici ai atomilor i moleculelor, Ee. Prin acest transfer se produce excitarea atomilor i moleculelor, respectiv trecerea lor pe nivele de energie superioare. Conform principiului de incertitudine al lui Heisenberg, electronii nu pot rmne mult timp n stare excitat (10 -8 10-6 s n starea de singlet cu spinii orientai antiparalel- i 10-3 100 s n starea de triplet cu spinii orientai paralel). Dup aceste interval de timp, electronii se dezexcit, iar dezexcitarea poate fi de dou feluri: a dezexcitare radiativ b dezexcitare neradiativ. total a acesora va crete:

Dezexcitarea radiativ
Dezexcitarea sau egal radiativ cu cea a este numit i fotoluminescen. Exist dou Absorbia tipuri de

fotonului este urmat de emisia unui foton cu o lungime de und mai mare fotonului absorbit.

fotoluminescen:

fluorescena

(reemisia

din

starea

singlet)

fosforescena (reemisia din starea triplet)(fig.). Atu nci cnd lungimea de und n reemisie este egal cu cea a fotonului absorbit, fluorescena se numete de rezonan. Durata fluorescenei este foarte mic, practic emisia se face n acelai timp cu excitarea. n fosforescen emisia continu i dup ncetarea excitrii. 3. Transferul energiei undelor electromagnetice ctre molecule, avnd

drept rezultat creterea reactivitii chimice a acestora ori producerea unor reacii fotochimice. Dintre aceste reacii fotochimice se pot meniona: izomerizri i rearanjri interne ale moleculei, polimerizri sau combinri ntre molecule, fotosensibilizri. Exemple Reacia cu o alt molecul, reacie care altfel nu s-ar fi produs (M* molecula fotoexcitat): M* + A D Reacia de dimerizare: M* + M MM Fotosensibilizarea - energia absorbit de M este transferat speciei N care devine reactiv: M* + N M + N* Radiaiile respective sunt absorbite de ctre grupri speciale ale unor molecule, grupri care se numesc cromofori. Exemple de grupri cromofore: - N = N - , = C = O, - N = O Aceste reacii fotochimice se desfoar conform unor legi.

Legile fotochimiei
1. Legea Grotthus-Draper: radiaia trebuie s fie absorbit de o molecul nainte ca reacia fotochimic s aib loc; dac substana iradiat nu absoarbe radiaii, nu se produce reacia fotochimic.

2. Legea Stark-Einstein: radiaia absorbit nu duce n mod obligatoriu la o reacie fotochimic, dac totui se produce reacia, pentru fiecare molecul transformat este necesar un singur foton. n legtur cu aceasta se definete randamentul cuantic : = Nm/Nf Nm numrul de molecule (respectiv moli) care au reacionat Nf numrul de fotoni (respectiv Einsteini) care au fost absorbii 1 Einstein = NA h n sistemele biologice efectele la nivel molecular deter min efectele la nivel celular sau la cel al organismului.

Efectele radiaiilor vizibile

Fotosinteza
Const n conversia energiei radiante n energie chimic folosit n sinteza unor molecule complexe. Celulele plantelor verzi conin organite celulare numite cloroplaste, n care se afl pigmeni clorofilieni i carotenoizi. Clorofilele sunt molecule complexe care conin grupri cromofore n sisteme de duble legturi conjugate. Prin absorbia luminii de ctre gruprile cromofore se produce excitarea electronilor pe nivele superioare de energie. Revenirea lor pe nivelul fundamental se face n trepte, de-a lungul lanului transportor de electroni. n fiecare treapt are loc o reacie de fosforilare a ADP cu formare de ATP. Astfel, energia luminoas este

transformat n energie chimic nmagazinat n ATP. realizeaz prin dou tipuri de reacii: - reacii la lumin, direct dependente de energia luminoas - reacii la ntuneric, n absena luminii

Fotosinteza se

ntr-o variant foarte simplificat, reaciile la lumin sunt cele de fotoliz a apei, de formare a NADPH (nicotinamid-adenin dinucleotid-difosfat) i a ATP, n timp ce n reaciile la ntuneric are loc reducerea CO 2 cu formarea de polimeri hexozici. 2 H 2O + h O2 + 4H+ + 4 e2 NADPH CH2O + H2O + 2 NADP

2 NADP + 2 H+ + 2e-

CO2 + 2 NADPH + 2 H+ + 2eh n(H2O) + nCO2

(CH2O)n + nO2

Ionii de H se fixeaz pe NADP i reduc la NADPH, ionii oxidril se combin ntre ei genernd ap, oxigen i electroni care trec de-a lungul lanului de transportori cednd treptat energia pentru sinteza ATP. Bilanul n sinteza moleculei de glucoz este:
h 6H2O + 6CO2 C6H12O6 + 6O2

Aceste reacii se produc n nite structuri lamelare (discuri lipoproteice) ale cloroplastelor numite membrane tilacoide sau tilacoizi (fig.).

Fotorecepia cu ajutorul pigmenilor rodopsinici

Rodopsinele vizuale, rodopsina i iodopsinele, fac parte din clasa proteinelor retinale, al cror cromofor este aldehida vitaminei A numit retinal. Sub aciunea radiaiilor luminoase vizibile se produce izomerizarea retinalului din configuraia 11-cis n cea all-trans i desprinderea acestuia de opsin. n acest mod se produce activarea rodopsinei i se declaneaz ciclul de reacii biochimice la n tuneric. Energia radiaiei luminoase este utilizat pentru declanarea excitaiei vizuale. Pentru ntreaga cascad de reacii biochimice ce urmeaz, i care se ncheie cu nchiderea canalelor de Na i Ca i hiperpolarizarea membranei, este utilizat energi a metabolic. Bacteriorodopsina, de asemenea membru al familiei proteinelor retinale, reprezint o pomp protonic activat de lumin. Cromoforul bacteriorodopsinei este tot retinalul care la ntuneric se afl n configuraia all-trans i care prin fotoizomerizare trece n configuraia 13-cis. Urmeaz o serie de reacii nsoite de modificri conformaionale ale rodopsinei, reacii care au ca efect translocarea unui proton din citoplasm n exteriorul celulei. Gradientul protonic astfel creat poate folosi la sinteza ATP. Transportul de protoni este cuplat cu fosforilarea ADP (ADP + P evacuarea ionilor de Na din celula bacterian. Radiaiile ultraviolete (UV) Radiaiile UV se situeaz n spectru dincolo de radiaiile vizibile de lungime de und mic (violet) i din punct de vedere al efectelor biologice sunt clasificate astfel: UV-A, cu lungimea de und cuprins ntre 315-400 nm UV-B, cu lungimea de und cuprins ntre 280 - 315 nm UV-C, cu lungimea de und mai mic de 280 nm. ATP) i cu

Cea mai mic energie o au radiaiile UV-A i cea mai mare UV-C. Energia radiaiilor UV se afl n domeniul 3-7 eV, deci este mai mic dect energia de ionizare a principalilor atomi constitueni ai biomoleculelor. Radiaiile UV pot produce ruperi de legturi chimice i r eacii fotochimice. Dintre efectele radiaiilor UV se pot meniona urmtoarele: - Dimerizarea unor perechi de baze azotate (ex. dimerizarea timinei) cu sudura lanurilor de ADN n locul respectiv. Aceast sudur mpiedic copierea informaiei de pe ADN pe ARN. Una din consecinele dimerizrii este aciunea bactericid al UV, prin mpiedicarea transcripiei este oprit diviziunea celular. Demonstrarea acestui lucru se poate face prin fotoreactivare: bacteriile iradiate cu UV sunt imediat iradiate cu radia ii vizibile (380-450 nm). Se activeaz prin aceasta o enzim care desface dimerii timinei. Reactivarea nu se face ns 100%, eficacitatea procesului fiind determinat prin intermediul unei curbe doz-efect. - Efecte asupra ADN: formare de dimeri, hidratarea bazelor pirimidinice, ruperea legturilor de H, ruperea lanului de ADN, formarea unor legturi cu proteinele (ADN-protein cross-links). - Producere de eritem (arsuri tegumentare) UV-B (290-320 nm). - Pigmentarea pielii (UV-A, 320-420 nm). n melanocite are loc transformarea tirozinei n melanin cu ajutorul enzimei tirozinaz. Pigmentul absoarbe apoi 90-100% radiaiile UV realiznd o protecie contra insolaiei. - Transformarea ergosterolului n vitamina D2 (antirahitic). Spectrul de aciune are un maximum la 280 nm. - Inflamaia corneei ( de aceea se recomand ochelari din sticl special pentru protecie). Protecia cea mai important fa de aciunea nociv a UV de energii mari este realizat prin stratul de ozon (O3) din partea superioar a atmosferei. Oxigenul absoarbe radiaiile UV-C i se produc reaciile: O2 + h O + O O + O2 O3 O - radicali liberi foarte nocivi i activi

Ozonul rezultat absoarbe radiaiile UV-B cu lungimi de und mai mici de 300 nm care sunt foarte duntoare pentru organismele vii.
h + O3 O2 + O Fotoproduii rezultai reintr n reaciile anterioare. n acest fel radiaiile UV duc la formarea de ozon n straturile superioare ale atmosferei.