CURS 1 GENETICA UMAN I IMPORTANA EI N MEDICINA MODERN

Ereditatea nsusirea organismelor vii de-a produce urmai asemntori genitorilor. se asigur continuitatea speciei, diversitatea tipurilor individuale n populaie, 2 laturi contradictorii: conservatorismul i variabilitatea, proces informaional: (stocarea,expresia i transmiterea inform.genetice.) Variabilitatea Ansamblul fenomenelor care produc diferenele genetice interindividuale i ntre diferite populaii. Condiionat genetic i mezologic. Surse: - mutaiile, recombinrile genetice, migraiile. Fiecare individ este UNICAT BIOLOGIC ! Genetica uman Studiaz fenomenele ereditii i variabilitii fiinelor umane. Disciplin fundamental: studiaz structurile, mecanismele, legile ereditii Disciplin clinic: rolul mutaiilor n producerea bolilor/predispoziiei la boal. Genetica medical - specialitate clinic distinct: - diagnostic +ngrijirea pacienilor cu BG, - sfat genetic pentru familii, - diagnostic +screening prenatal, - diagnostic presimptomatic. Disciplin medico- social. Domenii desprinse din genetica uman Genetica formal studiaz modul de transmitere a caracterelor Genetica molecular studiaz ereditatea la nivel molecular Citogenetica analizeaz rolul cromozomilor n evoluie i patologie Radiogenetica analizeaz efectele radiaiilor ionizante: mutagene,teratogene,carcinogene Psihogenetica fundamentele genetice ale comportamentului uman normal sau patologic Farmacogenetica studiaz rspunsul individual la medicamente Impactul bolilor genetice 15% din indivizi au un handicap fizic, motor, mental determinat genetic; 30-50% din paturile de pediatrie afeciuni genetice; 10% din internrile n spitalele de aduli - cazuri genetice; 22% din mortalitatea infantil se datoreaz anomaliilor genetice si congenitale; 30% din cazurile de sterilitate; Sunt cauzate de tulburri genetice 50% din cazurile de avorturi spontane Clasificarea afeciunilor genetice 1. Boli monogenice: AD, AR, HR, HD. 2. Boli multifactoriale: anomalii congenitale izolate, bolile comune ale adultului. 3. Boli cromozomiale: anomalii de numr sau structur cromozomial. 4. Boli genetice ale celulelor somatice: cancere, boli autoimune. 5. Boli mitocondriale.

CURS 1

Fenotip/Genotip genotip structura genetic unic i caracteristic unui individ, care se stabileste n momentul fecundrii i rmne stabil n cursul dezvoltrii, totalitatea caracterelor specifice produse prin interaciunea dintre ereditate (Genotip) i mediu se numete individualitate biologic sau Fenotip. Clasificarea etiopatogenic a bolilor I. Boli cu determinism exclusiv genetic: -factorul genetic uor identificabil, -factorul de mediu nu intervine nici n debutul bolii, nici n agravarea ei, -distribuie familial caracteristic, -mortalitate ridicat, ex: bolile cromozomiale II. Boli determinate genetic dar la care factorul de mediu contribuie la precipitarea debutului sau agravarea bolii: -debut la natere sau n prima copilrie, -severitate variat, -agravare cu vrsta, -distribuie familial caracterisitic, ex.: deficitul de G-6 PD, galactozemie,fenilcetonurie. III. Boli cu etiopatogenie complex, la care contribuie att factorul genetic ct si cel de mediu: - factorul genetic = predispoziia genetic, - pot avea distribuie familial dar nu caracterisitic, - exist numeroase variaii cantitative, ex.: HTA, boala coronarian, DZ tip II, ulcerul gastric, descpicturile labio-maxilopalatine, MCC. IV. Boli determinate de un agent patogen (infecii),uor de evideniat, avnd rol predominant. - componenta genetic = rezistena fa de aciunea patogen a agentului cauzal, - fiecare individ prezint un rspuns particular, specific la agresiune, - rol important: sistemul HLA de supraveghere, alarm i aprare a organismului V. Boli n care factorul determinant este un singur factor de mediu, cu aciune deosebit de energic, uor de identificat: -nu se permite implicarea unor factori genetici -letalitate 100% ex.: intoxicaii cu cianuri, toxina botulinic, venin de cobr, encefalita rabic. Omul obiect de studiu al geneticii Dezavantaje: - diversitatea genetic a indivizilor mare i necontrolat, - studii genealogice greu de efectuat, - numr mic de subieci obsevai, - dispersia geografic, - prevalen redus a bolilor genetice. Omul este cea mai bine studiat fiin. Genom definiie Iniial definea setul haploid de cromozomi din gamei

CURS 1
Ulterior a fost folosit pentru a desemna ansamblul genelor unui organism Definiie actual Ansamblul complex al secvenelor de ADN a unui individ sau specie. Genetica si rolul su n practica medical Diagnosticul genotipic: - tehnici de citogenetic i genetic molecular, - sonde specifice ptr. detectarea genomurilor virale, bacteriene. Farmacologia genomic i terapia genic: - fabricarea industrial a unor produse cu valoare terapeutic (GH, insulin, streptokinaz, eritropetin), - farmacologia genomic: blocarea funcionrii genelor mutante sau a genomurilor exogene ale unor virusuri, - terapia genic: fabricarea i introducerea de gene normale la bolnavii cu afeciuni genetice. Profilaxia personalizat i medicina preventiv: - identificarea unor gene de susceptibilitate la sntoi, - studiul unor markeri genetici individuali.

STRUCTURA I ORGANIZAREA CELULAR A ADN

STRUCTURA PRIMAR A ADN ADN este purttorul informaiei genetice la aproape toate organismele vii, cu excepia unor virusuri ARN. 98% din ADN se afl n cromozomi nucleari i 2% la nivel mitocondrial Cantitatea de ADN variaz cu specia dar, e constant la indivizii aceleasi specii i n toate celulele somatice ale unui individ. Acizii nucleici sunt macropolimeri alctuii din uniti mai simple denumite nucleotide. Nucleotidul este alctuit din trei elemente distincte: 1. Baz azotat, 2. Glucid cu 5 atomi de carbon, 3. Grup fosfat (sarcini negative, neutralizate in vivo prin fixarea proteinelor). Polimerizarea nucleotidelor ntr-o succesiune caracteristic speciei duce la formarea configuraiei monocatenare, Legturi internucleotidice covalente 3- 5 fosfodiesterice, Grad mare de flexibiliate, Monocatenele au: o unitate nespecific invariabil (axul glucido fosforic) i una variabil (bazele azotate), Nu exist nici o restricie legat de ordinea bazelor ataate la C 1 al dezoxiribozei. Polaritate 5 3 Structura secundar a ADN (1) - Are la baz studiile difraciei cu raze X a moleculei de ADN (M. Wilkins, R. Franklin) precum i analizele chimice ale ADN. - Configuraia bicatenar, dublu elicoidal format prin asamblarea complementar, coaxial i antiparalel, a celor dou monocatene. Structura secundar a ADN (2) Complementaritatea are la baz:
3

CURS 1
mperechere riguroas a: A cu T (dou legturi de H legturi electrostatice slabe) i C cu G (trei legturi de H) A+G/C+T=1; n schimb A+T/G+C diferit de 1, la om este1,7

Structura secundar a ADN (3) Cele dou catene nu sunt identice ci complementare i strict codeterminate, Cunoasterea structurii unei catene permite determinarea secvenei celeilalte, de ex: 5-ATGCCAG-3 3-TACGGTC-5 Legea complementaritii st la baza mecanismelor prin care se realizeaz replicarea, transcripia, recombinarea, repararea leziunilor, Se asigur stabilitatea dublului helix si o structur regulat. Structura secundar a ADN (4) Asamblarea antiparalel: - Orientarea celor dou catene se face n sensuri opuse, ascendent i respectiv descendent, - Apare ca urmare a legturilor stereochimice/spaiale necesare respectrii complementaritii. - Cele dou catene se nfsoar plectonemic (una n jurul alteia), - Se formeaz o dubl spiral elicoidal coaxial ADN de tip B 1) Sens de rsucire dextru, 2) Diametrul moleculei=2nm, 3) Dou tipuri de incizuri (mic i mare) 4) 10 pb /tur de spir, 5) Pasul elicei de 3,4 nm, 6) Distana internucleotidic 0,34 nm, 7) Planul de nclinaie al bazelor perpendicular pe axul imaginar al moleculei, 8) Se poate transforma reversibil n forma A sau Z, 9) Prezint stabilitate metabolic. Polimorfismul structural al moleculei de ADN - S-au descris alte conformaii, izoforme: A i C mai frecvente, D si E mai rare, - Au acelasi plan general de structur: elice dubl, orientat spre dreapta, - Se deosebesc de forma B prin particulariti fizice: numr de baze pe un tur de spir, pasul elicei etc - Forma A este mai scurt i mai groas dect forma B, restul sunt mai lungi i mai subiri, - n anumite regiuni ADN, se pot produce treceri A B C, care permit recunoasterea de ctre molecule exogene. ADN de tip Z - Descoperit n 1979, Rich, Dickerson. - Molecul dublu elicoidal, orientat spre stnga, - Axul glucido-fosforic form neregulat, n zig-zag, - Molecula ADN apare deformat i alungit, - Un sigur fel de incizuri,
4

CURS 1
Diametrul 1,8 nm. Pasul elicei 4,5 nm. 12 pb/tur de spir. Aceiasi componen a bazelor cu mperechere complemnetar. Conformaia Z este o conformaie normal, exist in vivo. Apare n anumite condiii fizico-chimice n regiunile bogate n perechile de baze G-C. Se formeaz prin tranziia formei B, sub aciunea unei topoizomeraze i prin rotirea bazelor cu 180. Tranziia B Z este REVERSIBIL Forma Z intervine n inactivarea unor gene (controlul expresiei informaiei genetice) Conversia B Z se poate realiza prin: - fixarea intens a histonelor - metilarea citozinei - concentraii crescute de MgCl (in vitro) Prin tranziia spre forma Z se evideniaz unele situsuri ADN unde se fixeaz mai uor diferii ageni mutageni sau cancerigeni. Mutaiile apar mai frecvent la nivelul secvenelor GC care adopt conformaia Z.

Relaiile dintre structura i funciile ADN 1. Molecula de ADN ntrunete urmtoarele funcii: 2. Stocheaz o cantitate mare de informaie, ntr-o form stabil, 3. Reproduce informaia pentru transmiterea cu maxim fidelitate de la o generaie la alta, 4. Poate repara corect informaia genetic n cazul unor leziuni, 5. Exprim informaia genetic prin sinteza unor proteine specifice, 6. Este capabil de variaie.

PROPRIETI FIZICO-CHIMICE ALE ADN CU IMPORTAN BIOLOGIC DEOSEBIT

1. Absorbia radiailor UV 2. Denaturarea-renaturarea 1. Absorbia radiaiilor UV Determinat de prezena bazelor purinice si pirimidinice, Maxim pentru lungimea de und de 260 nm (care exercit o activitate mutagen maxim, cu apariia de alterri structurale sau funcionale), Efectul hipercromic- structurile monocatenare prezint o absorbie mai mare dect cele bicatenare (efect hipocromic) UV determin apariia dimerilor de timin 2. Denaturarea- renaturarea Fiziologic, molecula ADN are o stabilitate metabolic, n condiii naturale sau experimentale, cele dou catene se pot desface parial, pe segmente limitate Denaturarea Denaturarea termic = TOPIRE. Depinde de temperatura medie de topire (Tm= valoarea la care 50% din ADN dc este denaturat). Tm mai ridicat n cazul prezen)ei unui numr crescut de mperecheri de tip G-C.

CURS 1
Renaturarea Reasocierea pe baz de complementaritate a structurilor monocatenare, Iniial are loc o nucleaie legarea complementar a ctorva baze C-G, Ulterior asocierea rapid a bazelor azotate dependent de concentraia lor n soluie i de timpul de contact, ! NU depinde de sursa monocatenelor ci numai de gradul de complementaritate. Aplicaii practice 1) Stabilirea indirect a hrilor de denaturare-renaturare. 2) Hibridizarea molecular asocierea pe baz de complementaritate a unor secvene nucleotidice de origine diferit. Hibridizarea molecular Permite obinerea unor molecule bicatenare hibride: ADN-ADN; ADN-ARN; ARN-ARN. Stabilitatea heteroduplexurilor este direct proporional cu gradul de omologie a secvenelor monocatenare. Hibridizarea molecular aplicaii practice 1. Evidenierea gradului de nrudire a speciilor prin compararea omologiei acizilor nucleici provenii de la diferite specii. Astfel: - ADN om +ADN cimpanzeu= renaturare aproape complet; - ADN om + ADN soarece= renaturare 25%; - ADN om + ADN viral= renaturare la nivelul unor secvene comune (oncogene). 2. Prin identificarea catenei ADN complementare din heteroduplexul ADN-ARN se permite: - precizarea regiunii cromozomiale transcrise, - date despre starea funcional a unei gene, - date despre rata transcrierii, 3. Evidenierea localizrii i extinderii deleilor (bucla de deleie) 4. Realizarea hibridizrii moleculare in situ Hibridizarea molecular in situ Se realizeaz prin introducerea deliberat n mediul de renaturare a unor SONDE sau PROBE (catene ADN sau ARN la care s-a atasat un marker), Markerul poate fi: - izotopic ( I125, P32), - nonizotopic (biotin, digoxigenin). Reacia de hibridizare are o sensibilitate i specificitate ridicate, Constituie etap intermediar n multe tehnici de diagnostic molecular.