Proteinele cromozomale specifice esutului testicular i rolul acestora n asigurarea structurii i functiei materialului genetic n spermatogeneza animalelor

LILIANA BURLIBAA, DANA UURELU Institutul de Genetic al Universitii din Bucureti Structura cromatinei rezult din interacia ADN cu proteinele cromozomale. Proteinele cromozomale unt implicate !n meninerea inte"ritii tructurale a cromozomului, prote#area ADN de aciunea dezo$iri%onucleazelor &i re"larea acti'itii "enice. (n timpul permato"enezei, cromatina din celulele tem parcur"e c)te'a tranziii dinamice care unt ade ea a ociate cu c*im%ri importante !n compoziia &i tructura a, !n cele mai multe cazuri, compoziia proteinelor cromozomale din tadiile +inale ale permato"enezei +iind total di+erit de cea din tadiile iniiale. Ace te modi+icri compoziionale altereaz emni+icati' tructura cromatinei. ,a urmare, acea ta de'ine !nalt compactat iar e$pre ia "enic e te complet %locat !n permatozoizi.

1. Proteine cromozomale specifice tesutului testicular

Proteinele cromozomale din permatozoizi prezint o imen 'aria%ilitate tructural. (n ultimii zece ani -au realizat importante pro"re e !n caracterizarea +izic &i c*imic a ace tor proteine la o mare 'arietate de or"ani me. Rezultatele ace tor tudii arat c, !n ciuda enormei 'aria%iliti tructurale, proteinele nucleare peci+ice permatozoizilor pot +i "rupate, !n +uncie de compoziia lor !n trei cate"orii. - Tipul H /*i tone-t0pe1 con t !n proteine cu o compozitie !n aminoacizi imilar cu *i tonele din celulele omatice2 - Tipul P /protamine-t0pe1 con t !n proteine cu ma molecular mic /3.444 - 54.444 daltoni1, %o"ate !n ar"inin /coninut de ar"inin mai mare de 6471. (n cur ul permato"enezei ace te proteine !nlocuie c aproape total *i tonele din celulele tem2 - Tipul PL /protamine-li8e1 con t !n proteine cu o compoziie de aminoacizi intermediar !ntre tipurile de cri e anterior. ,oninutul !n ar"inin &i lizin e te cuprin !ntre 9:-:47 &i ocazional poate +i c*iar mai mare. I.1 Histonele ;i tonele, din punct de 'edere c*imic, unt proteine cu un puternic caracter %azic, deoarece <:7 din aminoacizii con titueni unt %azici, purttori de arcini poziti'e /ar"inin, lizin &i *i tidin1. Sunt complet lip ite de tripto+an, +enilalanin &i tirozin. Din cauza naturii %azice, ele pot +i e$tra e u&or cu acid clor*idric diluat au cu acid ul+uric. ;i tonele unt alctuite dintr-o in"ur caten polipeptidic. Dup coninutul !n ar"inin &i lizin, *i tonele cromozomale unt cla i+icate !n cinci cla e. ;5 /%o"ate !n lizin1, ;<A &i ;<B /moderat %o"ate !n lizin1, ;9 &i ;3 relati' %o"ate
<:

LILIANA BURLIBAA, DANA UURELU

!n ar"inin12 !n cadrul +iecrei cla e e$i t c)te'a u%tipuri care di+er prin 5-< aminoacizi. E$i t &i *i tonele ;: &i ;6 prezente numai !n nucleii eritrocitelor de p ri /*ematii circulante nucleate1 unde !nlocuie c *i tona ;5. Proprieti +izico-c*imice ale *i tonelor Histona H1 e te cea mai mare /=>?<5.444 daltoni1, conine circa <5: aminoacizi &i e prezint u% +orm de monomer2 lizina e " e&te !n cea mai mare proporie /<@71. Prezint cea mai mare 'aria%ilitate de ec'en &i e te implicat !n interaciunile cu componentele 'aria%ile ale cromatinei /non-*i tone, re"iuni 'aria%ile ale altor *i tone1. Aiind le"at de ADN lin8er dintre doi nucleozomi, poate +i u&or !ndeprtat prin di"e tie enzimatic. Histona H2A e te +ormat din 5<B de aminoacizi, are =>?53.444 daltoni &i e prezint u% +orm de oli"omeri. ,onine 557 lizin, B7 ar"inin &i leucin !n cantitate mare. Histona H2B conine 5<: de aminoacizi, are =>?59.@@: daltoni &i +ormeaz oli"omeri. ,onine 567 lizin, 6,:7 ar"inin &i un procent ridicat de erin &i prolin. Histona H3 e te +ormat din 59: de aminoacizi, are =>?5:.9<4 daltoni &i conine 5:7 ar"inin, 5<7 lizin, +iind in"ura +racie !n compoziia creia intr &i ci teina. Histona H4 e te +ormat din 54< aminoacizi &i are =>?55.<C4 daltoni. E te %o"at !n ar"inin /5371 &i "licin /5:71. ;9 &i ;3 +ormeaz un tetramer /< ;9 - < ;31, care !mpreun cu oli"omerii ;<A &i ;<B con truie c cilindrul turtit, proteic al nucleozomului. ;3, +iind cea mai mic *i ton, are de ci+rat complet ec'ena de aminoacizi. re"iunea terminal N;< cuprinde cei mai muli aminoacizi %azici, a')nd &i un caracter %azic +oarte pronunat, pe c)nd re"iunea terminal ,DD; reprezint e"mentul *idro+o% &i e te numai u&or %azic. Se con ider c re"iunea terminal N;< e te implicat !n le"area la ADN, iar re"iunea terminal ,DD; !n le"turi inter*i tonice au cu alte componente ale cromatinei. ,oninutul *i tonelor !n aminoacizi %azici /ar"inin, lizin, *i tidin1, purttori de arcini poziti'e, e$plic le"area lor la ADN. Acea ta e realizez prin +ormarea de puni ionice /electro tatice1 !ntre "rupele +o +at !ncrcate ne"ati' ale ADN &i "rupele amino /N;<1 !ncrcate poziti' ale catenelor laterale ale aminoacizilor %azici din catena polipeptidic a *i tonelor. Inten itatea le"turii la ADN a di+eritelor +racii de *i tone e te di+erit. A t+el, lizina e lea" pre+erenial la perec*ile A-E, !n timp ce ar"inina e lea" pre+erenial la perec*ile =-,. Ace te le"turi e realizeaz la ni'elul ad)nciturii mari, !n timp ce ad)ncitura mic prezint itu uri de recunoa&tere pentru ARN-polimeraz. ,omponena %azic a *i tonelor prote#eaz ADN de denaturarea termic. Ace t rol !l !ndepline c cationii care reduc +orele de repul ie ce apar !ntre "ruprile +o +at cu arcini ne"ati'e. Eemperatura de denaturare termic a ADN e te !n +uncie de concentraia cationic a moleculelor de *i tone, ace tea +iind policationi. ;i tonele u+er anumite modi+icri c*imice cum unt. metilarea, acetilarea &i +o +orilarea di+eriilor aminoacizi. Ace te modi+icri duc la c*im%area arcinii moleculelor *i tonice &i unt corelate cu acti'itatea "enelor, cu replicarea ADN &i cu di+erenierea celular. >odi+icrile *i tonelor, cu e$cepia metilrii, unt a ociate cu e'enimente cromozomale di tincte &i unt c*im%ri re'er i%ile. Ao +orilarea &i acetilarea in+lueneaz interaciunea *i tonelor cu celelalte componente cromozomale. >odi+icarea teric a *i tonelor are loc datorit +aptului c "ruprile +o +at &i acetil unt 'oluminoa e. Re"iunile de prindere unt re"iuni +oarte 'oluminoa e, +iind de alt+el, cele mai a+ectate de modi+icrile amintite. Deci, metilarea, +o +orilarea &i acetilarea a+ecteaz, !n e en, interaciunea ADN *i tone &i anume tructura +i%rei nucleozomale. ;i tonele unt proteine de tructur cu rol de ta%ilizator al +i%rei de cromatin. ADN nati' e te oarecum in ta%il deoarece apar +ore de repul ie !ntre "ruprile +o +at !ncrcate ne"ati', ceea ce duce la e$ten ia moleculei &i e'entual, la epararea catenelor. (ntre "ruprile
<6

Proteinele cromozomale peci+ice e utului te ticular &i rolul ace tora !n a i"urarea tructurii &i +unctiei materialului "enetic !n permato"eneza animalelor

+o +at ale catenelor de ADN &i "ruprile N;< ale *i tonelor e +ormeaz le"turi ionice, care dau ta%ilitate moleculei. (n a+ara rolului tructural, *i tonele !ndepline c &i +uncia de repre ori "eneralizai !n re"la#ul "enetic. A ocierea *i tonelor cu ADN imprim tarea conden at a cromatinei, deci !mpiedic tran crierea ADN. ,romatina celulelor permatice e te upu unor rearan#amente tructurale !n timpul di+erenierii permato"oniei !n permatozoid matur. (n timpul tadiului *aploid din permato"eneza mami+erelor, *i tonele unt !nlocuite treptat mai !nt)i de proteine de tranziie &i apoi de protamine. Aracia *i tonic din cromatina celulelor permatice e te compu din u%tipuri peci+ice e utului te ticular, a emntoare cu izo+ormele *i tonice care e " e c !n e uturile omatice. Pattern-urile u%tipurilor pentru toate cla ele *i tonice /cu e$cepia *i tonei ;31 e modi+ic !n timpul permato"enezei mamaliene !ntr-o manier peci+ic, depinz)nd de tadiul de dez'oltare al permatocitelor. Acea ta implic e$i tena mecani melor de control care re"leaz e$pre ia "enelor pentru u%tipurile *i tonice !n celulele peci+ice. Ace t control poate +i e$ercitat la ni'el tran cripional /e$empli+icat prin tudiul +uncionalitii promotorului ;5t1. Re"larea poate a'ea loc de a emenea, &i la ni'el po ttran laional, prin poliadenilarea unei +racii de ARNm din celulele permatice /Doe*ner, D. F Dra%ent, B., 5BB:1. Pattern-urile proteinelor *i tonice au +o t monitorizate !n timpul permato"enezei la un lar" pectru de or"ani me eucariote in+erioare &i uperioare /tabelul 11. Tabelul 1. E$pre ia "enelor *i tonice !n permato"eneza mami+erelor. Prezena u%tipurilor *i tonice !n di+eritele tadii de dez'oltare ale permatocitelor, !nainte de !nlocuirea ace tora de proteinele de tranziie &i, !n +inal, de protamine. Subtipul histonic ;5a-e ;54 ;5t ;<A ;<A.G ;<A.H E;<A ;<B E;<B ;9 E;9 ;9.9 ;3 Stadiul celular n care este prezent histona toate tadiile2 unt !nlocuite !n parte, de ctre ;5t !n permatocitele a+late !n pac*iten permato"onii /dup ace t tadiu, concentraia ace tora !ncepe de crea c1 permatocitele pac*itenice toate tadiile, !n parte !nlocuite de E;<A Spermato"onii permato"onii, e o% er' o u&oar cre&tere !n permatocitele pac*itenice Spermatocitele pac*itenice, parial !nlocuind ;<A toate tadiile, !n mare parte !nlocuite de E;<B2 e$i t un u%tip peci+ic !n permatide Spermatocitele pac*itenice toate tadiile Spermato"onii2 a% ent !n tadiile t)rzii toate tadiile p)n la permatide2 prezent !n pecial !n permato"onii toate tadiile2 !n permatocitele pac*itenice "ena pentru ;3 e te tran cri !mpreun cu "ena pentru ;5t
<@

LILIANA BURLIBAA, DANA UURELU

Su%tipurile *i tonice te ticulare Aamilia de *i tone lin8er ;5 cuprinde c)te'a 'ariante izo+orme. ,ele mai detaliate analize ale complementului ;5 au +o t realizate pe cromatina uman &i murin de la c)te'a tipuri de celule &i e uturi. La om au +o t de cri e cinci tipuri "enice pentru *i tona ;5, !n plu +a de "enele ce codi+ic ;54, care e te o *i ton !nt)lnit doar !n tipurile celulare !nalt pecializate, &i ;5t care e e$prim doar !n celulele te ticulare /e te o "en !nalt con er'at1. Prezena proteinei ;5t e te limitat la celulele liniei "erminale ma cule, ea ne+iind o 'ariant "eneral meiotic. (n permatocitele pac*itenice &i !n tadiile t)rzii, ;5t e a+l !n cantitate +oarte mare. ;u* &i cola%oratorii a de cri prezena unei perec*i de "ene cu e$primare te ticular, con t)nd !ntr-o "en ;<A &i o "en ;<B. Ace te "ene ar putea codi+ica pentru u%tipurile E;<A &i E;<B /proteine cu localizare te ticular1. (n plu , au +o t de cri e dou u%tipuri ;<A cu replicare independent - ;<A.H &i ;<A.G. ;<A.G e te a%undent !n cromatina te ticular, !n timp ce ;<A.H e te uni+orm r p)ndit !n cele mai multe e uturi omatice. Un u%tip te ticular de *i ton ;9 /E;91 a +o t izolat din te ticulul de &o%olan. ,ompoziia a unic de aminoacizi /incluz)nd 9 reziduuri de ci tein1 indic di+erene tructurale, comparati' cu celelalte u%tipuri ;9 cuno cute, dar !nc nu a +o t identi+icat "ena pentru E;9 !n nici un "enom mamalian. Su%tipul ;9.9 a +o t " it a +i e$primat !n timpul permato"enezei at)t !n tadiul de permatid c)t &i !n tadiile timpurii ale permato"enezei. ;i tona ;3 e te cea mai con er'at dintre toate cla ele de *i tone. Sec'ena a de 54< aminoacizi a +o t meninut la toate peciile de mami+ere. (n di+eritele tadii ale permato"enezei e modi+ic pattern-ul *i tonic. Pattern-ul *i tonei !n di+eritele tipuri de celule omatice au !n celulele "erminale nu e te uni+orm, 'ariind !n compoziia u%tipurilor ;5. La numeroa e pecii de mami+ere au +o t de cri e cinci u%tipuri *i tonice ;5 /;5a-e1. (n cazul u%tipurilor *i tonei ;5, -a con tatat c de&i ;5t e te mai %o"at !n ar"inin /ar"inina e te implicat !n capacitatea de conden are a +i%rei de cromatin1 are o capacitate mai mic de conden are dec)t celelalte u%tipuri ;5. >ai de"ra% ;5t poate a'ea un e+ect de acti'are !n cromatina celulelor "erminale !n cur de di+ereniere, dec)t de repre ie a acti'itii nucleare /Doenec8e, D. F Dra%ent, B., 5BB:1. (n timpul pro+azei meiotice au +o t detectate c*im%ri ma#ore &i !n compoziia cla ei de *i tone ;<AI;<B. Am%ele u%tipuri E;<A &i E;<B unt detectate mai !nt)i !n permatocitele pac*itenice de &o%olan &i &oarece. (ntr-o %anc de ADNc realizat pe %aza ARN din permatide, a +o t o% er'at o ec'en ADNc ;<B imilar cu o alt ec'en "enic ;<B de &oarece, dar codi+ic)nd pentru 5< aminoacizi adiionali din care @ *idro+o%i. Analiza Nort*en %lottin" cu ARN din alte e uturi a demon trat c ace t tran cript e te peci+ic e utului te ticular. Similar, a +o t detectat un ARNm ;<A !n permatidele de &oarece. Eranziia *i tonelor !n protamine !n cur ul permato"enezei umane nu con t !ntr-o !nlocuire total a *i tonelor. Apro$imati' 5:7 din ADN-ul din permatozoizi pare a rm)ne a ociat cu miezul *i tonic, !n pecial cu ;<A, ;9.5, ;9.9 &i ;3 care e te !nalt acetilat. (n contra t cu ace tea, nu a +o t detectat *i tona ;5 !n cromatina permatozoidului matur. Sc*im%area "radat a *i tonelor lin8er &i a celor din miezul nucleozomal pe parcur ul dez'oltrii celulelor "erminale ma cule, modi+icarea mor+olo"iei cromatinei &i a acti'itii "enice, atri%uie un rol +uncional important u%tipurilor *i tonice.

<C

Proteinele cromozomale peci+ice e utului te ticular &i rolul ace tora !n a i"urarea tructurii &i +unctiei materialului "enetic !n permato"eneza animalelor

Au +o t o% er'ate modi+icri po ttran laionale ale *i tonelor din tadiul de permatide. ,ea mai impre ionant modi+icare a *i tonelor !n timpul permato"enezei e te *iperacetilarea ace tora. Acea t modi+icare a tructurii *i tonei ;3 e te corelat cu un pectru lar" de proce e celulare incluz)nd controlul tran cripional &i a am%larea cromatinei. ;iperacetilarea ;3 are loc !n permatidele !n cur de elon"are. Ace ta e te tadiul !n care are loc !nlocuirea *i tonelor de ctre proteinele de tranziie. I. ! P"#T$%I&'L' (n timpul maturrii permatozoidului, *i tonele unt !nlocuite cu un "rup de proteine !nalt %azice, cu "reutate molecular czut /3.444-54.444 daltoni1, %o"ate !n ar"inin, denumite protamine. Deoarece primele tudii pe ace te proteine peci+ice permatozoidului au +cut pe material izolat din pecii di+erite de pe&ti au primit denumiri ce decur" din numele peciilor. Salmon - almine, Salmo irideus - iridine. (n contra t cu tructura !nalt con er'at a *i tonelor pe parcur ul e'oluiei, proteinele %azice peci+ice permatozoidului 'ariaz enorm !ntre pecii. Protaminele de pe&te conin 9499 de aminoacizi, unt +oarte %o"ate !n ar"inin /pn la @:7 din aminoacizii lor1, dar lip ite de lizin2 cele de la Bufo unt de a emenea, %o"ate !n ar"inin. Protaminele de la mami+ere unt neo%i&nuite deoarece conin &i re turi de ci tein. De e$emplu, din perma de taur -a izolat o protamin %o"at !n ar"inin, de 6.<44 daltoni, care conine 6 reziduuri de ci tein. Ace tea par +ie implicate !n +ormarea punilor di ul+*idrice pentru a produce o tructur +oarte compact !n interiorul permatozoidului. Protamina 5 de la &oarece conine :4 aminoacizi din care <B unt reprezentai de ar"inin. E$i t un in"ur tip de protamin !n "eneral, dar la om au +o t identi+icate <-9 tipuri codi+icate de "ene di+erite. Protaminele unt intetizate !n citopla ma permatidelor !n cur de +ormare, dup care e depla eaz !n nucleu pentru a !nlocui *i tonele. (nlocuirea *i tonelor cu protamine nu e realizeaz direct, ci are loc o !nlocuire "radat a ace tora. Iniial, *i tonele %o"ate !n lizin unt !nlocuite cu *i tone %o"ate !n ar"inin /proteine de tranziie1. Ulterior, *i tonele %o"ate !n ar"inin unt !nlocuite cu protamine. (n comparaie cu modelul nucleozomal de le"are al *i tonelor, modelul de le"are al protaminelor ituate !n &anurile minore ale du%lului *eli$ de ADN, a i"ur o cptu&ire aproape complet a ADN, cu +oarte puine zone li%ere. De aceea, +a de nucleii celulelor omatice, !n nucleii permatozoizilor e pierde tructura nucleozomal &i uper*elicitatea ne"ati', c)&ti")ndu- e o alt or"anizare peci+ic. I.(. P"#T$%I&')LI*' Sunt proteine cu o compoziie de aminoacizi intermediar !ntre tipurile de cri e anterior. ,oninutul !n ar"inin &i lizin e te de 94-:47 &i ocazional, poate +i c*iar mai mare /tabelul !1. (n cele mai multe cazuri, ace te proteine pot +i tructural !nrudite cu *i tona ;5. (n tadiile +inale ale permato"enezei, proteinele PL /protemine-li8e1 prezint un "rad emni+icati' de *etero"enitate tructural cu ma e moleculare cuprin e !ntre :.444 &i 94.444 daltoni. A t+el, ace t tip de proteine perm- peci+ice au +o t cla i+icate !n dou cate"orii PL-I /proteine cu ma a moleculara mai mare de 5:.444 Da1 &i PL-II au PL /proteine cu ma a molecular mai mic de 5:.444 Da1
<B

LILIANA BURLIBAA, DANA UURELU

Tabelul !. ,ompoziia !n aminoacizi /mol71 a protaminelor PL-I la di+erite or"ani me /modi+icat dup Juan Au io, 5BB:1 /c.i ? cantiti in+ime1 Dr"ani m Metridium senile S isula solidissima !"el#soma roductum Mullus $ar$atus ;i tona ;5 din timu de 'iel <6.C 5.C <.: :.6 :.6 B.< @.< <3.9 :.3 5.: 3.: 4.B 4.B ;i tona ;: din eritrocitele de pa re <9.6 5.B 5<.3 5.@ 9.< 55.B 3.@ :.9 56.9 3.< 4.3 9.< 3.@ 5.< 4.6 -

L0 ;i Ar" A$ E*r Ser Pro =l0 Ala Kal >et Ile Leu E0r P*e Erp

55.4 4.: <:.3 <.C 3.9 55.< <.: C.6 55.6 @.6 <.9 9.6 5.3 5.C -

<3.C <9.5 4.6 3.9 <5.@ <.3 9.4 53.< <.9 4.3 4.: 5.@ 4.9 4.9 4.9

5@.9 5.C <4.C :.4 <.5 6.C 5.B 5C.@ 6.@ <.B 4.: 9.3 :.C 5.6 5.< -

<3.< <<.5 :.5 3.: B.< 6.C :.3 55.B 3.B c.i c.i :.C c.i c.i -

Proteinele PL-I au +o t detectate !n permatozoizii maturi de la numeroa e pecii de molu&te. (n , prezena ace tui tip de protamine nu e te re tr)n la "rupul molu&telor. Proteinele PL-I au +o t identi+icate la numeroa e "rupuri +ilo"enetice inclu i' cordate &i 'erte%rate. Domeniile non-"lo%ulare N &i , terminale ale ace tor molecule unt e$trem de 'aria%ile. Proteinele PL cu ma a molecular mic /PL-II au PL1 au e'oluat pre protamine %o"ate !n ar"inin /figura 11. Ace t tip de proteine e te !nt)lnit la ramuri aparin)nd deutero tomienilor &i proto tomienilor, a+late pe treptele mai !nalte ale e'oluiei. Prin proce ul eleciei, ar"inina a +o t pre+erat lizinei datorit potenialului u ridicat de a +orma le"turi de *idro"en. Da'id Bloc* /5B6B, a pu%licat primul catalo" al proteinelor peci+ice permatozoizilor1 a anticipat importana +ilo"enetic a ace tui "rup de proteine. El nota. LM a emnrile dintre proteinele intermediare ale permatozoizilor maturi la or"ani me a+late pe o treapt +ilo"enetic in+erioar &i proteinele intermediare din permatide la pecii de %oli&o &i Salmo /care, am%ele conin protamine !n permatozoizii maturi1 u"ereaz o relaie !ntre onto"enie &i +ilo"enie.L De&i relaia preci !ntre proteinele intermediare din timpul dez'oltrii permatozoizilor &i proteinele protamine-li8e nu a +o t !nc %ine ta%ilit, ipoteza lui Bloc* e do'ede&te a +i un e$celent model pentru cla i+icarea %ioc*imic a permato"enezei !ntr-un conte$t +ilo"enetic.
94

Proteinele cromozomale peci+ice e utului te ticular &i rolul ace tora !n a i"urarea tructurii &i +unctiei materialului "enetic !n permato"eneza animalelor

A N NN

NN

NNN

NN

NNNN PL-I

N NN

NN

NNN

NN

NNNN PL

PRE,URSDR ;ISEDNI,

;ISEDNA ;5

PRDEEINA PL-I

PRDEEINE PL ,U >ASA >DLE,ULARO >I,O /proteine permatice de tranziieP1 P PRDEA>INE

+igura 1. Un po i%il model al e'oluiei proteinelor nucleare perm- peci+ice /B12 unele din proteinele PL cu ma a molecular mic ar +i putut apare ca urmare a proce rilor po t-tran laionale /cli'are1 a precur orilor PL-I /A1.

!. ,ondensarea $-& n nucleii spermatozoizilor

Dup analiza 'aria%ilitii proteinelor perm- peci+ice, urmtoarea !ntre%are pertinent pe care am putea ne-o punem e te. acea ta 'aria%ilitate imen a proteinelor permpeci+ice determin &i 'aria%ilitatea tructurii cromatinei pentru +iecare tip de protaminP S-a peculat e$i tena a patru tipuri de or"anizare a cromatinei !n timpul permato"enezei /tipurile I-IK1.

95

LILIANA BURLIBAA, DANA UURELU

I. III II

-----------------------------------------------------------------+igura !. Eranzitiile proteinelor nucleare !n cele patru tipuri de permio"enez - tipul de proteina nuclear P2 - tipul PL2 - tipul ;1.

Dup cum e o% er' !n figura !, la !nceputul permato"enezei, !n toate tipurile de or"anizare a cromatinei unt prezente *i tonele ce con+er cromatinei or"anizarea %ine cuno cut, con+orm modelului nucleozomal. Ulterior, toate modi+icrile ce apar !n compoziia proteinelor nucleare perm- peci+ice din cele patru tipuri ipotetice de or"anizare a cromatinei, au un in"ur o%iecti'. completa repre ie a acti'itii "enice !n permatozoidul matur. A t+el, o po i%il modalitate ar +i pierderea complet a or"anizrii cromatinei /inclu i' nucleozomi &i alte proteine re"latoare ale cromatinei1 Q tipul I de permio"enez. D cale alternati' ar putea +i cre&terea raportului dintre *i tonele lin8er &i *i tonele ce alctuie c miezul nucleozomal, ce ar a'ea ca rezultat %locarea cromatinei !ntr-o tructur inert +uncional. Ace t model ar core punde tipului II de permio"enez. A treia po i%ilitate /Eipul III1 ar putea +i reprezentat de !nlocuirea proteinelor de tipul ; /*i tone1 cu proteine PL, au !n cazul tipul IK, !n +inalul permato"enezei proteinele PL unt !nlocuite cu protamine /tipul P1 !nalt %azice. >odelul cel mai %ine tudiat e te cel de la mami+ere &i 'a +i de cri !n cele ce urmeaz. (nlocuirea *i tonelor cu protamine are loc !n permio"enez &i e te re pon a%il de !mpac*etarea ADN-ului permatozoidului, ADN care e te de 6 ori mai conden at dec)t !n cromozomii meta+azici. (nlocuirea *i tonelor cu protamine are loc !n dou etape. 5. ;i tonele %o"ate !n lizin unt !nlocuite cu *i tone %o"ate !n ar"inin <. ;i tonele %o"ate !n ar"inin unt !nlocuite cu protamine. Un alt a pect e te acela c a% ena complet au aproape complet a uper piralizrii ADN !n nucleii permatozoizilor core punde cu inacti'itatea cromatinei ace tora. Nede +&ur)ndu- e proce ele de replicare &i tran criere, nu e te nece ar uper*elicitatea ne"ati' con+erit de *i tone. (n comparaie cu modelul nucleo omal de le"are al *i tonelor, modelul de le"are al protaminelor ituate !n &anurile minore ale du%lului *eli$ de ADN, a i"ur o cptu&ire aproape complet a ADN, cu +oarte puine zone li%ere. (n +elul ace ta, protaminele nu au e+ectul de poziionare pe care !l au *i tonele. De aceea, +a de nucleii celulelor omatice, !n nucleii permatozoizilor e pierde tructura nucleozomic &i uper*elicitatea ne"ati', c)&ti")ndu- e o alt or"anizare peci+ic. Dup Rard /5BB9, 5BB31 citat de ,)rlan >. /5BB61, ni'elele de or"anizare ADN !n nucleii permatozoizilor cuprind. du%lul *eli$ ADN, comple$ul ADN-protamine u% +orma toroidal, ec*i'alentul olenoidic &i domeniile %uclate.
9<

Proteinele cromozomale peci+ice e utului te ticular &i rolul ace tora !n a i"urarea tructurii &i +unctiei materialului "enetic !n permato"eneza animalelor

Du%lul *eli$ ADN e te aproape identic cu cel al ADN din celulele omatice, dar e remarc dou di+erene. lun"imea mai mare a ec'enelor telomerice &i e$tinderea *ipermetilrii ADN. ,omple$ul ADN-protamine e te omolo" cu +i%ra nucleozomal din nucleii celulelor omatice. Unitatea +undamental de !mpac*etare a ADN le"at cu protamine nu e te nucleozomul, ci un toroid cu diametrul de B4 nm conin)nd apro$imati' 64 S%. Acea t tructur care di+er complet de orice tructur cromatinic din nucleii celulelor omatice a +o t de cri de ;ud &i col. 5BB9.

+igura (. Unitatea +undamental de !mpac*etare a ADN-ului cu protamine din nucleii permatozoizilor /dup ,)rlan >, 5BB61. A

+igura /. ,omparaie !ntre modelul de or"anizare nucleozomal din celulele omatice /A1 &i modelul toroidal de or"anizare a cromatinei !n permio"eneza /B1 /;5 Q *i tona ;5 lin8er, N Q nucleo om, PL-I Q proteine nucleare permatice protamin-li8e tipul I /dup Juan Au io, 5BB:1.

Deoarece permatidele &i permatozoizii nu !&i replic ADN dup cum nici nu &i-l tran criu, nu e te nece ar ca ADN +ie uprar ucit. Pre iunea de ti'uire a proteinelor &i
99

LILIANA BURLIBAA, DANA UURELU

+orele Kan der Raal conden eaz "enomul permatocitelor !ntr-o tare de !mpac*etare care-l prote#eaz !n 'ederea tran portului pentru +ecundare. ADN e di pune !n cercuri concentrice uprapu e ca un colac de )rm au toru . Pentru a e$plica modul !n care protaminele +aciliteaz o a t+el de !mpac*etare -a propu urmtorul model. prile centrale ale protaminelor %o"ate !n Ar" unt localizate !n ad)nciturile minore ale macromoleculei de ADN a t+el !nc)t, "ruparea Ar" neutralizeaz arcinile electrice ne"ati'e ale ADN &i elimin repul ia electro tatic !ntre e"mentele 'ecine. ,ozile protaminelor unt localizate !n ad)nciturile ma#ore ale ADN adiacent, ceea ce permite le"area paralel a moleculelor de ADN.

+igura 0. (n nucleii permatozoizilor, du%lul *eli$ ADN e te cptu&it !n lanurile minore cu protamine, comple$ul ADN-protamine con tituind ec*i'alentul +i%rei nucleozomale din nucleii inter+azici ai celulelor omatice /dup2 ,rlan >.,5BB61.

Ec*i'alentul olenoidic nu a +o t !nc pe deplin clari+icat. Actualul model admite c, deoarece !ntr-o tur a olenoidului e$i t 59 upra!n+&urri ale ADN, c)te < pentru +iecare din cei 6 nucleozomi &i una pentru olenoidul !n u&i, 55 din cele 5< !ncolciri nucleozomale unt tran +ormate !n !ncolciri imple, rezult)nd < cercuri !n piral pentru +iecare tur a olenoidului. Domeniile %uclate reprezint urmtorul ni'el de or"anizare !nt)lnit &i la celulele omatice, dar !n nucleii permatozoizilor de la mami+ere /om, *am ter1 %uclele au o dimen iune mai redu . Domeniile %uclate reprezint aproape #umtate /3@ S%1 din dimen iunile %uclelor din celulele omatice ale *am terului /@6 S%1. S-a con tatat c domeniile %uclate de *am ter &i om, dar &i de la p ri, unt ata&ate de matricea nuclear prin ec'ene peci+ice. >atricea nuclear e te un element tructural propriu nucleului, +iind alctuit din mai puin de 547 din totalul proteinelor nucleare &i p treaz dimen iunea &i +orma ori"inal a nucleului c)nd ace ta e te izolat. (n nucleii permatozoizilor nu e$i t tructuri ec*i'alente cromozomilor mitotici deoarece permatozoizii nu u+er di'iziuni. Eotu&i ADN din permatozoizi poate +i prematur conden at !n cromozomi monocromatidici cu prezena aceluia&i model de %andare = ca &i la cromozomii mitotici din celulele omatice. (n ceea ce pri'e&te teoria lui Ra%l re+eritoare la localizarea !n poziii +i$e, peci+ice a di'er&ilor cromozomi !n interiorul nucleilor inter+azici omatici, !n nucleii permatozoizilor cartarea ec'enelor telomerice /EEA===1n a artat c poziia telomerelor 'ariaz de la nucleu la nucleu. Ace t lucru u"ereaz c di+eriii cromozomi nu ocup poziii preci e !n timpul permio"enezei &i c e$i t o anumit pla ticitate a aran#rii paiale a cromozomilor !n interiorul nucleilor permatozoizilor. Pe de alt parte -a artat c ec'enele repetate ale telomerelor unt a ociate tr)n cu matricea nuclear.
93

Proteinele cromozomale peci+ice e utului te ticular &i rolul ace tora !n a i"urarea tructurii &i +unctiei materialului "enetic !n permato"eneza animalelor

Dup +uziunea "ameilor, nucleul permatozoidului a#un !n citopla ma o'ocitei e conden eaz tran +orm)ndu- e !n pronucleu ma cul. (n continuare, ace t pronucleu rm)ne eparat de pronucleul +emel, propriu o'ocitei, &i u+er modi+icri tructurale &i %ioc*imice, reacti')ndu- e "enetic. Spermatozoizii maturai !n epididim unt capa%ili e depla eze, dar nu au capacitatea de a +ertiliza o'ulul. Acea t proprietate e te do%)ndit !n tractul reproductor +emel. Eotalitatea modi+icrilor +iziolo"ice u+erite de permatozoid la trecerea prin tractul reproductor +emel e nume te capacitare. (n timpul capacitrii nucleii pierd ionii de zinc a t+el !nc)t, "ruprile -S; rm)n li%ere, unt o$idate &i dau na&tere punilor di ul+*idrice. De a emenea, au loc modi+icri ale mem%ranei pla matice a permatozoidului. Dup +uziunea celor dou mem%rane, permatozoidul ptrunde !n citopla ma oului. Re"iunea po terioar a capului &i coada permatozoidului unt !n"lo%ate pa i' datorit +uziunii mem%ranelor iar re"iunea anterioar a capului permatozoidului e te !n"lo%at printrun proce +a"ocitic. Nucleul ptrunde !n citopla ma oului, are loc dezor"anizarea an'elopei nucleare, care, pre deo e%ire de celulele omatice nu prezint pori dec)t !n re"iunea po terioar. Deconden area nucleului e te determinat de ruperea le"turilor di ul+*idrice !n protamine &i !nlocuirea ace tora cu *i tone. Reducerea e te realizat de ctre "lutation care e te +oarte a%undent !n citopla ma oului. (nlocuirea protaminelor cu *i tone are loc !n : minute de la intrarea permatozoidului !n ou &i e %azeaz pe competiia dintre nucleopla min &i ADN pentru protamine. $-&)P"#T$%I&' 1S)S2 $-&)P"#T$%I&' 1)SH2 $-&)P"#T$%I&' 1)SH2 $-& 3 &5,L'#PL$S%I&6 3 4L5T$TI#&

&5,L'#PL$S%I&6)P"#T$%I&' 1)SH2 HIST#&'

$-&)HIST#&' 7 &5,L'#S#%I -',#&-'&S$"' Auziunea nucleilor la mami+ere dureaz apro$imati' 5< ore. ,)nd nucleul permatozoidului e deconden eaz, nucleul o'ulului u+er a doua di'iziune meiotic. Dup ace te proce e, pronucleii mi"reaz unul pre cellalt, timp !n care !&i replic ADN-ul. Recon tituirea nucleozomilor are loc deci, !naintea +azei S care precede prima di'iziune mitotic a nucleului. In concluzie, modi+icrile !n compoziia %ioc*imic a cromatinei din timpul permio"enezei au ca o%iecti' principal rearan#amente de ordin ar*itectural ce e oldeaz cu
9:

LILIANA BURLIBAA, DANA UURELU

repre ia total a acti'itii "enice !n permatozoizii maturi, ace&tia put)nd +i con iderai ca reprezent)nd doar Tcru&iU ai in+ormaiei "enetice !n de cenden.

8ibliografie9
5. $usio :. ; ;i tone ;5 t*e e'olution o+ t*e Nuclear Sperm Speci+ic Protein 2 Ad'ence in Spermatozooal P*0lo"en0 and Ea$onom0 566. 33@-36<, Pari 5BB:. <. $usio :. < Suau P.=) Structural *etero"enit0 o+ recon titued comple$e o+ DNA Vit* t0pical and intermediate protamine. Biop*0 ical ,*emi tr0, 5C, <:@-<6@, 5BC9. 9. 8loch -., ) ;i tone o+ perm. In R.,.Sin", ;and%oo8 o+ =enetic . NeV Wor8, Plenum Pre . 59B-56@, 5B@6. 3. ,asas %.T.= $usio :. < Subirana :.$. Q ,*romatin +i%re Vit* di++erent protamine and *i tone compo ition. E$perimental ,ell Re earc*, <43, 5B<-5B@, 5BB9. :. ,rlan %.- Elemente de "enetic animal normal2 Edit. Polirom, Ia&i, 5BB6. 6. ,hi>a %., *asins?i H.= %ann %. < Subirana :.$.) Dn t*e di'er it0 o+ perm %a ic protein in t*e 'erte%rate . J. o+ E$perimental Hoolo"0, <3:.943-95@, 5BCC. @. -oenec?e -., -rabent 8.- ;i tone =ene E$pre ion Durin" >ammalian permato"ene i . Structural and Aunctional A pect 2 Ad'ence in Spermatozooal P*0lo"en0 and Ea$onom0, 566. :<:-:9:, Pari , 5BB:. C. 4arcia)"amirez %.= < Subirana :.$. ;,onden ation o+ DNA %0 protein doe not depend on protein compo ition. Biopol0mer , 93, <C:-<B<, 5BB3. B. *noch "., Lambert ,. ; Ultra tructure o+ Sperm, Spermio"ene i and Sperm-E"" Interaction in Selected Inter'erte%rate and LoVer Kerte%rate V*ic* U e E$ternal Aertilization2 J. o+ Electron >icro cop0 Eec*niXue, 56. 55:-5:3, 5BB4. 54. *@oun $.= Lee A.H.),omparati'e Spermatolo"0 o+ Annuran Vit* Special Re+erence to P*0lo"en02 Ad'ence in Spermatozooal P*0lo"en0 and Ea$onom0, 566. 9<5-999, Pari , 5BB:. 55. %acgregor H.,. ; An Introduction to Animal ,0to"enetic 2 ,*apman F ;all, 5BB9. 5<. Sommer>ille :., 8aird :.= Turner 8.%. Q;i tone ;3 acetilation and tran cription in amp*i%ian c*romatin 2 Journal o+ ,ell Biolo"0, 5<4/<1.<@@-<B4, 5BB9.

96