ATENIE BOBOCEL!!!

23

decembrie ultima zi a semestrului Atestarea la BM:

Totalizarea I @ II Zero absene nerecuperate (prelegeri i !"# $aietul de BM completat "roiectul % porto&oliul prezentat

Examenul la BM
ADMIS

de la decanat Partea practic Te!te

Orice etap c"mpr"mi! anulea# pr"m"$area examenului

N"ta%

&'(M! ) *'(PP ) +'(T !!! C"piatul , cale de -inali#are prematur a !tudiil"r la .SM/

'( "rocese moleculare de baz): * * * * +eplicarea A,+eparaia A,Transcripia I. Translaia I.

2( .enele umane: * * Tipuri "aticularit)i de organizare

3( /0presia genelor * * /tapele e0presiei 1unciile genei la ni2el mol cel org ,e la celul) la celulele &iice ,e la p)rini la descendeni

3( Transmiterea I. * *

ADN 0 +ADN ADN 0 A1N ADN 0 preA1Nr 2&S ADN 0 preA1Nr &S ADN 0 preA1Nm ADN 0 preA1Nt A1Nm 0 p"lipeptid p"lipeptid 0 pr"teina

ADN cu dimer 0 ADN ADN cu 4 0 ADN ADN 0 ADNcu dimer ADN 0 ADNcu 4 preA1N 0 A1Nm preA1N 0 A1Nt preA1N 0 A1Nr A1Nt 0 Met3A1Nt

1eplicarea ADN

4ADN 0 +ADN

,e&iniie

"roprietatea unical) a mol de A,- de a se dubla prin sintez) matricial)5 semiconser2ati2) M5 $5 65 A5 B5 +((( A,- 7 ori Enzime P, H, T, P, L + SSB T dNTP, NTP ADNp"limera#ele I5 II5 III $!

"rincipii (&iecate caracterizat#

Aparat de replicare (&iecare element moti2at#

+ol biologic

!a ni2el molecular sinteza A,- 8dublarea A,!a ni2el celular dublarea I. 8transmiterea e0act) I. !a ni2el de organism autoreproducerea 8suportul eredit)ii

1epara6ia ADN

,e&iniie "roprietatea unical) a mol de A,- de a9 i restabili structura iniial) prin identi&icarea erorilor5 :l)turatrarea lor i re&acerea structurii primare "rincipii (&iecate caracterizat# 65 M5 $((( Aparat de reparaie (&iecare element moti2at# A,- 7 eventual erooare Proteine de recunoatere a leziunii Endonucleaze GL Helicaze A N!"olimeraza Li#aza dNTP +ol biologic !a ni2el molecular Identi&icarea erorilor cu restabilirea structurii iniiale a A, !a ni2el celular pre2enirea acumul)rii mutaiilor !a ni2el de organism stabilitatea I. 8suportul eredit)ii

Tran!crip6ia I7

,e&iniie

"rocesul de copieire a sec2 nucl din mol de A,- cu sinteza mol A+M5 $5 A5 45 de no2o5 n+((( 6ec2 A,Promotor Secv codi$icatoare terminator

"rincipii (&iecate caracterizat#

Aparat de transcripie (&iecare element moti2at#

Enzime A%N!"olimeraza NTP &actori de tran'cri"(ie #enerali i '"eci$ici !a ni2el molecular sinteza A+- 8copierea I. !a ni2el celular dublarea I. 8etap) a e0presiei I. !a ni2el de organism posibilitatea realiz)rii I.5 sintezei proteinelor i &orm)rii caracterelor

+ol biologic

Tran!la6ia I7

,e&iniie

"rocesul de decodi&icare a sec2 nucl din mol de A+-m cu sinteza polipeptidului M5 $5 45 de no2o5((( A+-m A%Nt %i)ozomi A*a A*a!A%Nt!'inteteze &actori de tran'la(ie "*u +, E, T ATP, GTP !a ni2el molecular decodi&icarea A+-m 8sinteza polipeptidului !a ni2el celular desci&rarea I. 8etap) a e0presiei I. !a ni2el de organism posibilitatea realiz)rii I.5 sintezei proteinelor i &orm)rii caracterelor

"rincipii (&iecate caracterizat#

Aparat de translatie (&iecare element moti2at#

+ol biologic

Processingul A1Nm
,e&iniie

"rocesul de maturizare a A+-m prin modi&icarea speci&ic) a capetelor i combinarea necesar) a e0onilor(splicing#

Aparat

de processing (&iecare element moti2at#

preA+-m Guanilat!tran'$eraza + GTP "oliA!"olimeraza + ATP,-S"liceo'oma ./!.0

+ol

biologic

!a ni2el molecular maturizarea A+-m !a ni2el celular etap) a e0presiei I. !a ni2el de organism posibilitatea realiz)rii I.5 sintezei proteinelor i &orm)rii caracterelor

7enele umane nucleare

Tpuri

.ene de clasa I p%u A+-r ';65 <5;6 i 2;6 cu 'ute de co"ii Gene de cla'a ++ "*u "roteine
1a2oritatea

unice3e45 #ena 6elicazei, #ena catalazei7 8u c9teva co"ii 3e45 #enele tu)ulinei, #enele actinei7 8u 'ute de co"ii 3e4: #enele "entru 6i'tone7

.ene de clasa III p%u A+-r <6 i A+-t cu mii de co"ii Mutaii :n gena A+-r ';6 Mutaii :n gena =elicazei Mutaii :n gena catalazei Mutaii :n gena =istonei >2A Mutaii :n gena serA+-t

;;;

7enele umane nucleare

"articularit)i de organizare ale genelor de clasa II

"romotor cu numeroase bo0e reglatoare

p%u identi&icarea genei p%u iniierea transcripiei /0oni Introni +eglez) terminarea transcripiei $onine situsul de poliadenilare

+egiunea codant)

Terminatorul

???

Mutaie :n promotorul genei 9 globinei

Blocarea transcripiei genei Modi&icare :n regiunea codant) de un domeniu structural al 9 globinei Modi&icare :n regiunea codant) de un domeniu &uncional al 9 globinei Modi&icare :n regiunea necodant) ,e&ect de splicing Mutaie :n situsul de poliadenilare

Mutaie :n e0onul ? al genei 9 globinei

Mutaie :n intronul ? al genei 9 globinei

Mutaie :n terminatorul genei 9 globinei

Expre!ia 8enel"r de cl II
.ena (((((((((((((((((((
Transcripi a ARN-polimeraza II + TAFs+TFIID,A,B,F,H... G-transferaza + PolyApolimeraza + U -U! "#portine

preA+-m A+-m

"rocessingul

Trans&erul din -u :n $t

A+-m pe ribozomi
Translaia ARNt

polipeptid
Maturizarea $%aperone

"roteina &uncional)

/unc6ia 8enei 9elica#ei

!a

ni2el molecular
$odi&ic) pentru sinteza =elicazei

!a

ni2el celular
,etermin) posibilitatea replic)rii i reparaiei A,-

!a

ni2el organismic
Asigur) posibilitatea proli&er)rii celulelor Asigur) stabilitatea genomului uman

/unc6ia 8enei A1N3p"limera#ei I

!a

ni2el molecular
$odi&ic) pentru sinteza A+-9polimerazei

!a

ni2el celular
,etermin) posibilitatea e0presiei genelor de cl I

!a

ni2el organismic
Asigur) posibilitatea realiz)rii I.5 sintezei proteinelor

/unc6ia 8enei pr"tea#ei acide

!a

ni2el molecular
$odi&ic) pentru sinteza proteazei acide

!a

ni2el celular
,etermin) posibilitatea &uncion)rii lizozomilor

!a

ni2el organismic
Asigur) =omeostazia tisular)

E:% /unc6ia 8enei T/IID

!a

ni2el molecular
$odi&ic) pentru sinteza T1II,

!a

ni2el celular
,etermin) posibilitatea transcripiei genelor de clasa II

!a

ni2el organismic
Asigur) posibilitatea realiz)rii I.5 sintezei proteinelor

/iecare celul a "r8ani!mului c"n6ine !etul c"mplet de 8ene ;*'32'''' perec<i 8ene pentru 2= m"l> ADNnuclear?
Expre!ia 8enic numai 4'( din t"ate 8enele Expre!ie c"ntinu 7ene A1Nr 7ene A1Nt 7ene <"u!e @eepin8 Expre!ie temp"ral dependent % 3 de 6e!utA 3 de peri"ada "nt"8enetic A 3 de peri"ada ciclului celularA 3 de -act"rii de mediu !!! Exi!t mecani!me de re8lare a expre!iei 8enel"r N"n3expre!ie p!eud"8ene

Or8ani!m pluricelular% Pe!te +'' de tipuri de celule di-erite 6e!uturi "r8ane T"ate celulele !"matice ale unui "r8ani!m *!unt 8enetic identice *au aceeaBi cantitate de ADN *aceleaBi 8ene *pr"$in de la celula #i8"t prin mit"#e !ucce!i$e

$I$!4! MIT@TI$
*$re terea organismului pluricelular *+e:nnoirea esuturilor *+egenerarea esuturilor

* ,ublarea M. nuclear * $ondensarea M. * 6egregarea M. dublat

CCC Cum !e re8lea# N1 de celule nece!are "r8ani!mului Prin ap"pt"#

Moarte

celular) programat) "roces &iziologic ,etermin) =omeostazia tisular): AAA/c=ilibrul dintre proli&erare % moarte

6emnal

DEFGH FGIGEIJF

$elul) nedorit)

$re terea acti2it)ii endonucleazelor &ragmentarea A,-5 condensarea cromatinei i citoplasmei

1ragmentarea nucleului i celulei cu &ormarea corpilor apoptotici

1agocitoza corpilor apoptotici de celulele 2ecine

T+A-6MIT/+/A I. de la p)rini la copii *,i&erenierea celulelor germinale *Maturaia gameilor =aploizi AAA @2ule i spermatozoizi *$ontopirea gameilor cu re&acerea setului diploid de crs :n zigot

*,ublarea M. nuclear *,i2iziunea reducional) a gametocitului I *,i2iziunea ec2aional) a gametocitului secundar *1ormarea gameilor =aploizi

CCC 1"lul mei"#ei

"rosesul

ce asigur) recombinarea M. "rocesul ce asigur) Bariabilitatea genetic)

"olimor&ism genic5 &)r) mani&est)ri &enotipice "olimor&ism &enotipic normal +)spuns di&erit la aciunea unor &actori de mediu (medicamente5 alimente5 to0ine (((# 6usceptibilitate di&erit) la anumite in&ecii "redispoziia la anumite boli ($+C BI$5 diabet (((# Mani&estarea unor boli recesi2e :n succesiunea generaiilor

Mit"#a $! mei"#a
2= cr! MC
replicare

2= cr! MC
replicare

2= cr! BC
mitoza

2= cr! BC
meioza

2= cr! MC

2= cr! MC

+* cr! BC

I II

+* cr! BC

8elule 'omatice +* cr! MC

+* cr! MC

+* cr! MC

+* cr! MC

8elule 'e4uale < #ame(i

2=cr! MC 0 2= cr!BC 2=cr! BC 0 L+ cr!BC 2=cr! MC 0 +M2= cr!MCN 2=cr! BC 0 +M2= cr!MCN 2=cr! BC 0 +M+* cr!BCN 2=cr! MC 0 +M+* cr!BCN 2=cr! MC 0 2M+* cr!MCN

2=cr! BC 0 +* Ki$alenti 2=cr! MC 0 +* tetrade

$rs M$

$rs B$

$rs bi2alent

7ena 9E:A
!ocus:

4&O+*3O+2 ,imensiuni: *+ =+= pb de la: P' 2++ Q*+ bp de la "ter p:na la: P' 2&& 2&P bp de la "ter

Structura 8enei 9E:A

>/DA are '3 e0oni si '3 introni En urma transcripiei i processingului se obine un A+-m cu lungimea de 2 33F pb

/unc6iile 8enei 9E:A

Nivel

molecular ! codi$ic 'inteza 'u)unit(ii = a 6e4ozaminidazei A Nivel celular 'cindarea #an#liozidelor din cito"la'ma neuronilor Nivel or#ani'mic $unctionarea normala a neuronilor i "rin con'ecin(, a 'i'temului nervo' 9n 9ntre#ime:

Pr"teina R39ex A>

!anul polipeptidic conine <2G aminoacizi( $on&ormaia lanului are loc in Aparatul .olgi prin -9glicozilarea :n poziia Asn ''< Tot :n A. are loc unirea subunit)ilor H i I i &ormarea unei proteine comple0e 9 <ex"#aminida#a A

>e0 A cristalizat)

/unc6ia pr"teinei 9ex A

Nivel

molecular de'com"une G1, #an#liozidele Nivel celular "revine acumularea 9n e4ce' a #an#liozidelor 9n celule Nivel or#ani'mic a'i#ur $unctionarea normala a neuronilor i "rin con'ecin(, a 'i'temului nervo' 9n 9ntre#ime:

Muta6ii Sn 8en
"este

'FF de mutaii di&erite au &ost identi&icate :n gena >/DA i noi mutaii continu) a &i raportate( Aceste mutaii includ mutaii puncti&orme5 insertii i deleii5 mutaii ale situsurilor de splicing (a( 1iecare din aceste mutaii altereaz) productul proteic al genei5 ast&el in=ib:nd &uncia enzimei(

"opulaie /2rei As=Jenazi

1uta(ie in HE>A '2K;7TAT$5 e0on '' IB6'27'.M$5 intron '2 mutaie in situs de splicingNM deleia a 3< pb .2OG65 e0on K +23KP sau +23GP5 e0on K

&recven(a K<9;FL '<9';L 3L 2L ? <L populatia canadiana 2FL populatie europeana ;FL din populaia de pro2enien) &rancez) din sudul Ruebecului "opulaia /uropei $entrale i de -ord

Tip Moarte in&antil) Moarte in&antil) T6, adult (timpuriu# "seudode&icien) de enzim) Moarte in&antil) Moarte in&antil) Moarte in&antil) AAA "rima mutaie T6, descoperit) T6, B'

/2rei -on9As=Jenazi -on9/2rei

del13F35 e0on ; '2K;7TAT$5 e0on '' <Q4T+del5 K(O9Jb deleie (lipsa A+-m# +'K;> +'K;! /0on < .2<F,5 e0on K ,2<;>5 e0on K +3GG>5 e0on '3 +<F3>5 e0on '3 .2OG65 e0on K +23KP sau +23GP e0on K

S <L "opulaia !ebanez) Armean) si /st9/uropean) <L populaia American) si /uropean) 3<L

T6, Tu2enil

T6, Adult "seudode&icien) de enzim)

C"n!ecin6ele muta6iil"r Sn 9E:A

':

6e4ozaminidazei A de$ect 'au a)'ent ,: Nivel celular acumularea #an#liozidelor in cito"la'ma neuronilor ?: Nivel or#ani'mic A"o"toza neuronilor, de#enerarea "ro#re'iv a creierului Boala TaU96ac=s

Nivel molecular 'u)unitatea = a

Extra8erea ADN

Pre8 tirea c"mp"nentel"r pentru PC1

Ampli-icarea ADN36int

Electr"-"re#a pr"duBil"r PC1

C"l"rarea Bi $i#uali#area pr"duBil"r PC1

Aut"radi"8ra-ia Bi interpretarea re#ultatel"r

Analiza Southern-blot

Extragerea ADN

Restriia ADN

Electroforeza ADN

Denaturarea i transferul ADN pe membrane

Hibridare cu sonda

Autoradiografia

izualizarea i interpretarea rezultatelor

Sec$en6ierea ADN

Extragerea ADN

Te<nici de anali# a 8enel"r

"$+

Ampli&icare selecti2) a unei gene "rin replicare repetat) ciclic $u aVutorul ap(replicare arti&icial

6ec2eniere dideo0i

6out=ern9blot

TaW9 polimeraza 2 primeri d-T" termociclor

6ec2enierea unei mol A,"rin sinteza repetat) de A,-5 dar stopat) :ntr9o anumit) poziie dependent) de incorporarea dd-T" 3 serii de reacii cu dd-T" di&erii 6epararea &ragmentelor obinute la /1

Analiza "!1+ (+1!"s# $li2area enzimatic) a A,- de cercetat Analiza A,-9 int) dup) /15 bloting 9 prin =ibridizare cu sonde complementare marcate

Te=nica(((((((((((((((((((( +ezultatul: 7<(((

Te=nica(((((((((((((((((((( Te=nica(((((((((((((((((((( +ezultatul: I 9 aa B 9 AA " 9 Aa +ezultatul:

I9' aa I92 Aa II9' aa II92 aa II93 Aa II93 aa III 9' aa III 92 Aa

Te<nici de anali# a 8enel"r

"$+ .ena insulinei .ena catalazei .ena 9 globinei '( 2( '( 2( '( 2( 6ec2eniere '( 2( '( 2( '( 2( 6out=ern9blot '( 2( 3( '( 2( 3( '( 2( 3(
7gel agaroz)C 6ol( Alcalin) 1iltru nailonC "elicul) radiosensibil)

7TaW9polimeraz)C 7A,-9polimerazaC d-T"C soluie d-T"5 dd-T"C tampon soluie tampon

E%Alu + 8 6+ A.$T T$.A

1/LP! , p"lim"r-i!mul lun8imii /1 la d"u per!"ane : Bi T

1"l practic
"$+

'(

2(

3(

Te=nic) de analiz) a A, Ampli&icarea selecti2) a unei gene care permite: ,epistarea genelor mutante p%u diagnosticul B. ,epistarea '( polimor&ismului indi2idual p%u 2( dactiloscopia genomic) ,epistarea A,- 3( str)in p%u diagnosticul BI

6ec2eniere dideo0i
Te=nic) de analiz) a A,6tabilirea e0act) a ordinii nucleotidelor :ntr9o gen) care permite:
$unoa terea structurii primare a genei ,epistarea mutaiilor puncti&orme p%u diagnosticul B. ,epistarea polimor&ismului indi2idual p%u dactiloscopia genomic)

6out=ern9blot

Te=nic) de analiz) a A,Analiza +1!"s care permite:

,epistarea mutaiilor p%u diagnosticul B. 6tabilirea genotipului persoanelor pentru depistare Aa purt)tori de gene patplogice ,epistarea polimor&ismului indi2idual p%u dactiloscopia genomic)

'( 2(

3(

G( $ompletai tabelul i analizai 2aloarea practic) a te=nologiei A,-recombinant Pr"ceduri de laK"rat"r Principii 8enerale 1"l aplicati$

Izolarea A-, genomic pentru analiza unei gene umane Izolarea A+-m speci&ic unei gene umane @binerea &ragmentelor de restricie @binerea A,-c @binerea A,-rec 6epararea &ragmentelor de A-, dintr9un amestec de &ragmente Aprecierea lungimii &ragmentului de interes $lonarea unei gene umane in vivo $lonarea unei gene umane in vitro ,enaturarea A,- in vivo ,enaturarea A,- in vitro