CURS 5

EXPRESIA INFORMAIEI GENETICE

MECANISMELE MOLECULARE ALE EXPRESIEI GENICE.
REGLAREA EXPRESIEI GENELOR
Conf. dr. Cristina RUSU
MECANISMELE MOLECULARE
ALE EXPRESIEI GENICE
Expresia informaiei genetice flux informaional,
unidirecional i universal:

ADN genic ARNm PROTEIN
transcripie translaie

NUCLEU i MITOCONDRII R I B O Z O M I
Procesul este supus unui control riguros care regleaz:
tipul de celul n care are loc sinteza proteinei,
momentul,
cantitatea i ritmul
U.M.F IAI
U.M.F IAI
T R A N S C R I P I A - DATE GENERALE
(1). Transcripia:
procesul de copiere
a informaiei unei
gene - sub form
codificat,
complementar i
antiparalel
ntr-o molecul de
ARN
(2). ARN = polimer de ribonucleotide:
[P R N]n
ARN ADN:
riboz n loc de deoxiriboz,
uracil n loc de timin,
micropolimer,
monocatenar.
ARN:
codant = ARNm
necodant ( gene ARN) cu roluri multiple:
- n translaie (ARNr i ARNt);
- n reglare (ARNmi; ARNsi; ARNa);
- n procesarea altor molecule ARNsn),
- parazit (retrovirusuri; retrotranspozoni)
ADN ARNm
Numr de catene 2 1
Coninut de gene Sute de gene O singur gen
Structura genei Exoni i introni Numai exoni (fr
introni)
Baze azotate Purine: A, G
Pirimidine: T, C
Purine: A, G
Pirimidine: U, C
Sinteza Se copie ambele catene
(35 continuu, 53
discontinuu)
Se copie numai
catena 35
Comparatie ADN ARNm matur
U.M.F IAI
A) TRANSCRIPIA: DATE GENERALE
(3) Pentru sinteza ARNm
sunt necesare:
o caten (3 5) ADN
ca matri;

ARN polimeraza II
face sinteza ARNm;

factori de transcripie
(fixeaz i poziioneaz
ARNpol la promotor);

un mediator leag
factorul de transcripie
la ARNpolimeraz;

ribonucleotide activate.
5'...ATGTTACGACGT... 3' catena "sens"
3'...TACAATGCTGCA... 5 catena "antisens"
(transcris)
Transcripie

5'...AUGUUACGACGU... 3' ARNm
U.M.F IAI
TRANSCRIPIA: DATE GENERALE
(4). Transcripia 2 etape:
Formarea ARNm precursor
(transcriptul primar)
prin transcrierea integral a regiunii centrale a
genei (Ex+In);

Procesarea ARNm precursor i formarea ARNm
matur, ce prsete nucleul.
U.M.F IAI
1. FORMAREA ARNm PRECURSOR
a). Decondensarea regiunii din ADN care
conine gena / genele ce vor fi transcrise prin:
acetilarea histonelor din nucleozomi reduce
condensarea fibrei cu nucleozomi;

repoziionarea nucleozomilor

Ambele mecanisme - implicate n REGLAREA
expresiei genelor
U.M.F IAI
ETAPELE DE FORMARE A ARNm PRECURSOR
b). Transcripia propriu zis
(1). Iniierea transcripiei :
fixarea i poziionarea ARN polimerazei II n
regiunea promotor (pe secvenele TATA sau GC)
astfel ca transcripia s nceap (la SIT) cu nucleotidul
1;
se realizeaz cu ajutorul unor factori de
transcripie (FT) i a unui mediator care leag FT
la ARNpolimeraz .
U.M.F IAI
(2). Transcripia propriu-zis (elongaia) prin:
Separarea celor dou catene ale ADN;
Fixarea secvenial i complementar a
ribonucleotidelor activate pe catena matri n sensul
35 !!!;
Polimerizarea ribonucleotidelor (n sensul 5 3);
Transcripia - codificat, complementar i antiparalel
catenei matri.
Copierea integral a exonilor + intronilor transcriptul
primar
U.M.F IAI
(3). Terminarea transcripiei:
Cand ARNpol ntlnete situsul de terminare a
transcripiei se semnaleaz clivarea 3 a
transcriptului primar;
ARNm precursor va fi secionat (de nite nucleaze)
n dreptul situsului de poliadenilare (de adaugare a
cozii poliadenilice)
U.M.F IAI
2. MATURAREA ARNm
PRECURSOR
a) Modificarea extremitilor:
- 5 CAP se adaug
7-metil- guanozin;
- 3 poli A se adaug coada poliadenilica (~ 200
adenine);
Rol: crete stabilitatea, faciliteaz transportul ARNm
i fixarea la ribozom

b) Procesarea (matisarea) ARN precursor:
- decuparea precis i eliminarea intronilor:
- legarea cap la cap a exonilor ARNm matur
TRANSCRIPIA INVERS
ADN ARN

transcripie invers

T. Invers = transcrierea unei molecule de ARN
monocatenar ntr-o caten de ADNc, care va deveni apoi
bicatenar (prin sinteza unei catene complementare).

Realizat de ctre transcriptaza invers / revers
transcriptaz (H. Temin i D. Baltimore, Pr. Nobel, 1975).

Utilizat de: virusurile ARN; retrotransposoni, telomeraz
precum i n tehnologiile ADN, pentru obinerea de gene
U.M.F IAI
Retrovirusurile (HIV; hepatit C,unele virusuri
oncogene)
au genom ARN
sintetizeaz transcriptaz invers:
transcrie genomului viral ARN ntr-o copie ADN complementar
care apoi se integreaz n genomul ADN al gazdei i se
reproduce odat cu acesta.
Tratament = molecule ce inhib transcriptaza
invers viral (ex. Retrovir; viramune etc).

Retrotransposoni
secvene repetitive de ADN uman,
transcrise n ARN i apoi retrotranscrise ntr-o copie
ADN ce se va insera n alt loc n genom (amplificare;
mutaii).
U.M.F IAI
U.M.F IAI


B) TRANSLAIA
Translaia = procesul de decodificare a
informaiei genetice din ARNm ntr-o secven
specific de aminoacizi i polimerizarea lor ntr-
o caten polipeptidic.
Necesit:
Un dicionar = CODUL GENETIC;
Un APARAT DE TRANSLAIE (ce include
traductorul = ARNt i ribozomii)
U.M.F IAI
CODUL GENETIC = un sistem de corespondene ntre o secven
de 3 nucleotide (codon) i un anumit amino acid (Khorana i
Nirenberg - Pr. Nobel, 1968)
Cunoasterea codului genetic permite intelegerea mecanismului mutatiilor !
PROPRIETI:

1. TRIPLET- 1 codon = 3 baze azotate succesive;

2. 64 CODONI:
- 1 CODON INIIATOR (AUG=met) inceperea sintezei proteice;
- 3 CODONI STOP (UAA, UGA, UAG) (nonsens) terminarea sintezei proteice;
- 61 codoni sens semnifica diferiti aminoacizi

3. DEGENERAT (4
3
= 64 codoni 20 AA) : 1 AA 2-6 codoni sinonimi;
sistem TAMPON/ protecie contra efectelor mutaiilor m.
silenioase;

4. NESUPERPOZABIL + FR VIRGULE (adiaceni); codonii sunt aezai
unul dup altul, fr suprapuneri sau pauze intre codonii vecini;

5. LIPSIT DE AMBIGUITATE: un codon totdeauna acelai AA;

6. UNIVERSAL: un codon nseamn acelai AA la toate fiinele (cteva mici
excepii n CG mitocondrial)
U.M.F IAI
APARATUL DE TRANSLAIE
a) RIBOZOMII (Palade, Pr. Nobel, 1974) = platformele de
asamblare a AA n Pr;
- Alctuii din ARNr + Pr;
- 2 subuniti.

b) ARN de transfer (ARNt) = translatorul care leag i
transport AA la codonul corespunztor din ARNm

c) ENZIMELE i COFACTORII PROTEICI ai translaiei
U.M.F IAI
PROCESUL DE TRANSLAIE
a) Iniierea translaiei plasarea primului AA n
dreptul codonului iniiator AUG din ARNm;

b) Elongaia aezarea secvenial a AA (pe baza
ordinii codonilor din ARNm) + polimerizarea lor =
polipeptid;

c) Terminarea translaiei oprirea sintezei la codonul
STOP
U.M.F IAI
AMPLIFICAREA SINTEZEI DE PROTEINE
O celul poate produce cantiti mari dintr-o
anumit protein pe baza informaiei unei
singure gene.

Explicaiile amplificrii:
Prin transcripie se pot produce copii multiple a unui
ARNm;
Fiecare ARNm poate fixa zeci de ribozomi copii
multiple protein
Aceste procese presupun o reciclare rapid a
materialelor folosite: ARN, ribozomi, enzime etc
U.M.F IAI
LOCALIZAREA sau SORTAREA PROTEINELOR
Dup sintez proteinele sunt orientate spre un anumit
compartiment celular sau sunt secretate la exteriorul
celulei:
Sortarea proteinelor exportate la exteriorul celulei prin
reticulul endoplasmic sau aparatul Golgi de cele ce vor
rmne n celul;
Transportul proteinelor intracelulare n: nucleu, mitocondrii,
lizozomi, peroxizomi, membran.

Realizat pe baza unor secvene semnal (din structura
proteinei), un veritabil cod potal, ce indic adresa
sa de destinaie (Blobel, Pr. Nobel, 1999);

Sortarea corect este esenial pentru celul; erorile
vor genera boli (ex. adrenoleucodistrofie)
U.M.F IAI
MODIFICRILE POST-TRANSLAIONALE ALE
PROTEINELOR
Determin funcia proteinelor
Dup sintez se produc:
Configuraia spaial, tridimensional specific;
Modificri reversibile: fosforilarea serinei sau
acetilarea lyzinei;
Modificri permanente:
Structurale: puni disulfidice; clivare enzimatic a unui
precursor inactiv (pro-hormon; pro-ferment);
Adiia unor grupri funcionale; ex., glicozilare,
adugare de lipide etc
Adugarea altor proteine
U.M.F IAI
Conformaia unei proteine este crucial pentru
celul;

Exist sisteme de control de calitate care:

asigur c proteina este corect plicaturat;
distrug proteinele eronat plicaturate nainte ca ele s
omoare celula BOAL

Perturbarea acestor sisteme boli; ex. boli ale
SNC: b. Huntington; g. Alzheimer; scleroza
lateral amiotrofic; b. Parkinson
U.M.F IAI
REGLAREA EXPRESIEI GENELOR
Toate celulele corpului posed aceeai informaie
genetic (rezult prin mitoze succesive din zigot).
Expresia genelor este diferit, datorit unor mecanisme
complexe de reglare a expresiei genice.
Unele gene (constitutive) exprimate continuu, n toate tipurile
celulare produc proteine permanent necesare metabolismului
celular.

Alte gene (autorizate):
au o expresie limitat la anumite esuturi specifice difereniere
celular.
Expresia genelor autorizate s se exprime poate fi limitat temporal
(stadii diferite ale dezvoltrii) i adaptat la stimulii extracelulari (ex).

Multe alte gene sunt complet i permanent inactivate.
U.M.F IAI
REGLAREA PRE-TRASNCRIPIONAL
(EPIGENETIC)
A EXPRESIEI GENELOR
Vizeaz expresia spaial a anumitor gene n
anumite esuturi i tipuri celulare:
selecia unor gene n celulele embrionare nedifereniate i
meninerea expresiei lor la celulele descendente
(difereniate).

Se realizeaz prin modificarea configuraiei
cromatinei (despiralizare) care permite accesul
ARN pol + factorilor de transcripie la promotorul
genelor transcripie.
U.M.F IAI
Modificrile conformaiei cromatinei NU
intereseaz secvena de nucleotide
(informaia genetic) i se numesc modificri
epigenetice:

Acetilarea histonelor decondensarea cromatinei
expresie genic;

Dezacetilarea histonelor condensarea cromatinei
represie (blocare) genic;

Metilarea ADN condensarea cromatinei represie
genic; ex.
Amprentarea genomic una din genele alele de pe o
pereche de cromozomi omologi este represat
Inactivarea unui cromozom X
U.M.F IAI
REGLAREA TRASNCRIPIONAL
A EXPRESIEI GENELOR
Vizeaz reglarea activitii ARN polimerazei II
(transcriptaza).
Se realizeaz prin interaciunea

unor FACTORI DE TRANSCRIPIE
cu anumite SECVENE ALE PROMOTORULUI
determin transcripia
anumitor gene
n anumite esuturi,
ntr-un anumit moment
cu o anumit intensitate.
U.M.F IAI
REGLAREA POST-TRASNCRIPIONAL
A EXPRESIEI GENELOR
Vizeaz moleculele de ARN sintetizate prin
transcripie.
Mai multe mecanisme din care importante sunt:
Matisarea alternativ o gen produce mai multe molecule
de ARNm diferite (prin selecia exonilor) mai multe
proteine diferite; de ex, calcitonina i neuropeptidul nrudit
cu calcitonina (v. cursul precedent);

Interferena ARN (RNAi) A. Fire i C.Mello Pr. Nobel 2006
U.M.F IAI
INTERFERENA ARN
ARNi mecanismul prin care se inhib expresia
genic cu ajutorul unor molecule mici de ARN
complementar intei:
Genomul ARN al unor virusuri (HIV, polio, hepatita C etc)
sau ARNm produs de genele virale;

Gene din genomul ADN al celulei.

Rolul cheie n acest proces l au:
ARNsi (small interfering RNA) acioneaz n citoplasm
unde recunosc i cliveaz enzimatic moleculele de ARN
int (virale);

ARNmi (microRNAs) produs prin transcripia unor gene
ADN reglatorii acioneaz n nucleu i prin metilare
blocheaz transcripia altor gene (n special n procesul de
difereniere celular)
U.M.F IAI
REGLAREA EXPRESIEI GENICE: CONCLUZII
Proces foarte complex care se realizeaza in fiecare
etapa a fluxului informational:
ADNARNmPROTEINA

Regleaza expresia anumitor gene in anumite tesuturi;

Genele autorizate se exprima in anumite momente ale
dezvoltarii si in anumite etape ale ciclului celular , cu o
anumita intensitate, determinata de stimulii
extracelulari