Stadiul conidian Botrytis cinerea a agentului patogen Botryotinia fuckeliana
Profesor coordonator: Student: Prof. univ. dr. Catlin Tnase Dumbrveanu Cristiana
Putregaiul cenuiu al strugurilor
Putregaiul cenuiu al strugurilor este o boal ce se manifest n toate rile n care se cultiv vi de vie, determinnd pagube deosebite n anii cu toamne ploioase. De asemenea, n ara noastr este o boala larg raspandit i cunoscut, a crei intensitate i frecven depinde de precipitaii i temperatur. n unele podgorii pagubele s-au estimat pn la 70-80% din recolt. Boala este frecvent la strugurii de mas n timpul depozitrii i transportului, precum i n serele de forat viele altoite, pepinierele viticole.
Genul Bortytis, din care face parte i ciuperca studiat, prezint o importan practic deosebit, fiind cercetat att din punct de vedere al taxonomiei, al bioecologiei, biologiei moleculare, ct i al prevenirii i combaterii bolilor pe care le produce la numeroase plante gazd. Aceast specie a fost studiat de numeroi micologi din strintate (Hennebert, 1973; Jarvis, 1977; Coley-Smith i colab., 1980; Verhoeff i colab., 1992; Have Ten, 1999; Kerssies, 1999; Boff, 2001; Khl i colab., 2003; Elad i colab,. 2004 .a.), dar i n Romnia (Prvu, 1993; tefan, 2001, 2002, 2003; esan, 2003, 2006; esan i tefan, 2003; tefan i colab., 1998; esan i colab., 2003; Pucau, 2003, 2007; Tnase i esan, 2006; esan i Tnase, 2006) .a. Pn n prezent s-au derulat 13 simpozioane internaionale dedicate acestui gen (Verhoeff i colab., 1992; Kamoen, 2004): primul a avut loc n Scoia (1966); apoi n Belgia (1968); Suedia (1971); Polonia (1973); Frana (1976); Olanda (1979); Marea Britanie (1982); Italia (1985); Germania (1989); Grecia (1992); Olanda (1996); Frana (2000); Turcia (2004).
Planta gazd
Vitis vinifera (Via de vie) este o specie din genul Vitis, familia Vitaceae, originar din regiunea mediteranean, Majoritatea speciilor se ntalnesc din Europa Central pn n Maroc i Spania, dar i Asia. Vi de vie este o lian, care poate atinge o lungime de 35 m. Frunzele alterneaz, sunt lobate palmat i au o lungime i lrgime de 520 cm. Fructul este o boab, acestea dezvoltndu-se ntr-un ciorchine cunoscut sub numele de strugure. Boabele, la specia slbatic au un diametru de circa 6 mm, iar cnd se coc dobndesc o culoare purpurie nchis spre negru; la speciile cultivate, de regul, boabele sunt mult mai mari, de pn la 30 mm lungime i pot avea diverse culoari: albe, alb-verzui, roii sau purpurii. Specia slbatic crete de obicei n pduri umede i pe malurile apelor curgtoare. Strugurele slbatic este deseori clasificat ca V. vinifera, subsp. silvestris (n unele clasificri considerat Vitis silvestris), cu V. vinifera, subsp. vinifera restricionat la formele cultivate. Via-de-vie cultivat are flori hermafrodite, dar subsp. silvestris este dioecic (are flori masculine i feminine pe plante separate) i pentru ca fructul s se dezvolte este necesar polenizarea.
Agentul patogen: Botryotinia fuckeliana (De Bary), Whetz., din fam. Sclerotiniaceae, ord. Helotiales, Cl. Ascomycetes; forma conidiana: Botrytis cinerea Ciuperca prezint un miceliu septat, ramificat , care se dezvolt n spaiile intercelulare ale esuturilor atacate. Miceliul ciupercii triete saprofit pe diferite substraturi organice, sau ca parazit. Pe miceliu se formeaz conidiofori ( Fig. 1.) lungi, septai, monopodial ramificai n poriunea terminal. Conidioforii au 1-2 mm lungime si sunt bruni-oliacei la baz i aproape hialini la vrf. Pe ramificaiile conidioforilor se gsesc sterigme scurte, care poart conidii unicelulare, ovoide, aglomerate sub forma de ciorchine 9-15 6-10 m. La maturitate, conidiile se desprind cu uurin si sunt rspandite de vnt pe organele snatoase, unde germineaz uor n picturile de ploaie, dar mai ales n sucul zaharat al boabelor, la temperaturi de 25-29 C (perioada de incubaie extrem de scurt- 2 zile). Din cercetrile efectuate de C. Sandu- Ville, Al. Lazr si M. Hatman (1960, 1962), rezult c ciuperca se dezvolt cu uurina pe bobiele care au o
concentraie n zahr cuprins ntre 14-22%; peste acest procent nu se mai formeaz conidiofori si conidia, sucul zaharat comportandu-se ca o soluie hipertonic.
Fig. 1. Botryotinia fuckeliana: a. conidioforul anamorfei Botrytis cinerea; b. conidii
Fig. 2.- Botrytis cinerea (400X), Niall Hamilton
Agentul etiologic supravieuiete de la un an la altul n sol, pe resturile vegetale de plante atacate de la suprafaa solului. Cnd condiiile exterioare devin nefavorabile dezvoltrii ciupercii, aceasta formeaz organe de rezisten (scleroi) sub forma crora ierneaz. n primavar, n urma germinrii scleroilor rezult de regul forma conidian (conidiofori i conidia) sau apotecii cu asce si ascospori (mai rar). Forma cu scleroi poart numele de Sclerotium durum. Apoteciile se prezint sub forma unor cupe cornoase, de 1,3-3 mm diametru, alb-glbui, susinute de un pedicel, n acestea dezvoltandu-se asce cu cate 8 ascospori unicelulari, elipsoidali, hialini, de 8-10 3,5-4 m. Ascele sunt nsoite de parafize filamentoase. Putregaiul cenuiu al strugurilor se manifest cu o intensitate deosebit n anii cu toamne calde i bogate n precipitaii, dar i ca urmare a atacului unor insecte sau a petelor de man ce favorizeaz dezvoltarea bolii. Ca urmare a atacului producia este mult micorat i depreciat. Vinurile obinute din strugurii atini de putregaiul cenuiu sunt de calitate inferioar, slabe si cu gust neplcut. Vinurile roii, datorit oxidazei secretat de ciuperc, se decoloreaz, se tulbur si se brunific. Diferite soiuri de vi se comport deosebit fa de aceast boal. n general sunt mai atacate plantaiile amplasate n vi umede unde nu circul curenii de aer, soiurile cu boabe ndesate i butuci cu frunzi mai bogat. Soiurile de vi cu boabe dese si pielia subire au mai mult de suferit de pe urma acestui atac dect cele cu boabele rare i pielia groas. Foarte sensibile sunt soiurile: Alogot, Feteasc alb, Riesling Italian, Gras de Cotnari, Tmaioas romneasc, Galben de Odobeti, Regina viilor, Pinot noir, Pinot gris, Chasselas, Cramposie, Afuz-Ali, Cadarca s.a. Mai rezistente s-au dovedit a fi soiurile Cabernet Sauvignon, Coarna neagra s.a.
Recoltare si examinare
Identificarea agentului fitopatogen al unei plante prezint o importan att teoretic, dar mai ales practic. Via de vie prezint un desvrit interes pentru un numr mare de persoane datorit avantajelor i beneficiile pe care ni le ofer. Pentru determinarea corect a agentului fitopatogen este necesar examinarea microscopic a acestuia. n acest sens am recoltat materialul necesar din gradina proprie, detand de pe planta gazda- Vitis vinifera, un ciorchine.
Cu ajutorul unui ac spatulat am prelevat direct de pe substrat un fragment de miceliu. Prelevarea s-a efectuat de pe ciorchine unde simptomele erau mai evidente. Fragmentul respectiv l-am etalat pe o lam de sticl sterilizat, ntr-o picatur de ap, iar apoi l-am acoperit cu o lamela. n urma examenului microscopic am identificat forma conidian Botrytis cinerea a agentului patogen Botryotinia fuckelina, denumit popular Putregaiul cenuiu.
Simptome
n funcie de locul i fenofaza de vegetaie a plantelor de vi de vie, ct i de evoluia condiiilor anului i simptomele bolii difer. Boala se manifest ncepand cu luna august-septembrie, n special pe ciorchini i boabe, mai puin ns pe frunze i lstari. O forma de atac pagubitoare se ntalnete n serele de forat vie,unde butaii altoii prezint la nivelul scoarei un puf cenuiu, alctuit din conidiofori i conidiile ciupercii. Scoara este putrezit i pe suprafaa acesteia apar numeroi scleroi. Alteori, prezena ciupercii determin formarea scleroilor n jurul zonei de altoire sau acetia se interpun ntre altoi si portaltoi, mpiedicand sudarea acestor componente. Pe frunzele de via, n verile rcoroase i umede sau n serele cu aerisire slab se observ apariia unor pete glbui care mai apoi devin roietice. Aceste pete cuprind poriuni mari din suprafaa limbului, iar n dreptul petelor, pe ambele fee, se formeaz un mucegai cenuiu purverulent (conidioforii i conidiile ciupercii). Frunzele puternic atacate se rsucesc, se desprind i cad de pe lstari. Pe lstari, boala se ntalnete mai rar, i anume atunci cnd acetia sunt debilitai de man i ger. Infecia ncepe de la noduri i se distinge prin petele brune sau cenuii, care ulterior se alungesc de-a lungul internodurilor. n condiii de umiditate mare, esuturile atacate se acoper cu mucegai cenuiu. Pe ciorchinii tineri aceast boal nu este frecvent. La maturitate ns, i n condiii de vreme ploioas ciorchinii pot fi atacai aproape n ntregime, fiind acoperii de un mucegai brun-cenuiu. Atacul cel mai cunoscut de viticultori apare toamna pe boabe (Fig. 3.), dup ce se acumuleaz suficient zahr n celule. Distrugerea fructelor de strugure este mult favorizat de o ploaie puternic, de grindin i de nepaturile cauzate de Cochylis si Eudemis.Prin rnile cauzate apar la suprafaa boabelor picturi de suc,
mediu foarte prielnic germinrii conidiilor ciupercii. Filamentele de infecie ptrund n interiorul esuturilor prin rni sau prin strpungerea cuticulei. Dup contaminare , la suprafaa boabelor se observ pete mici, care se mresc repede, ptrunznd totoadat i n interiorul pulpei. Culoarea acestor pete poate fi galben- cenuie sau roie-violacee. Boabele bolnave se nmoaie, crap, se zbrcesc. Pielia se brunific, se desprinde uor de pulpa i ntreaga boab se acoper cu un mucegai abundent cenuiu- bruniu, purverulent. Acest mucegai se ntinde cu repeziciune de la o boab la alta,cuprinznd ntregul ciorchine, mai ales la soiurule cu boabe ndesate. Ca urmare a atacului, o parte din tanin i unele substane colorate i aromatice sunt distruse de ctre enzimele secretate de ciuperc, n special de oxidaz, care determin schimbarea culorii vinurilor roii. n cele din urm, boabele bolnave se usuc, se detaeaz parial de pedicel, putnd rmne ns fixate mult timp de ciorchine.
Fig. 3- Botryotinia fuckeliana - atac pe boabele de struguri
n condiii de umiditate mare, aceast form de atac produce pagube care se pot ridica la estimari majore. Pe lang aciunea dunatoare, n anumite condiii aceast ciuperc poate afecta n sens pozitiv strugurii, producnd aa numitul putrgai nobil. Astfel, n urma infeciilor trzii i n toamnele calde i uscate, miceliul ciupercii se dezvolt n pulp i la suprafaa boabelor, ns acestea nu se mai acoper de mucegai (conidiofori), nu mai crap, ci se stafidesc i se ndulcesc. Miceliul ciupercii consumand o parte din ap i acizi determin mbogairea relativ a boabelor n substane zaharoase. Prin urmare, vinul rezultat din astfel de struguri este de o calitate superioar, avnd un gust i o arom special. Acest mucegai nobil, dorit de viticultori, scade ns producia cu peste 40%. Condiiile care determin apariia putregaiului nobil sunt ntrunite n special la Bordeaux, n Frana, i pe valea Rinului (Germania). n unele toamne secetoase, pe colinele expuse insolaiei se constat acelai fenomen n podgoriile din ara noastr, obinndu-se astfel vinuri licoroase din soiurile: Gras de Cotnari, Tmiaos romneasc etc. Este recunoscut calitatea vinurilor obinute n Podgoria de la Cotnari, care cu Grasa de Cotnari, Tmiosa romneasc a obinut mai multe medalii internaionale la concursurile la care a participat. Dimitrie Cantemir a lsat posteritii urmtoarele versuri care sunt afiate la intrarea n cram, scond n eviden nc de atunci calitatea vinului de Cotnari:
"Puin ca tot ce este bun i bun ca tot ce este rar Aa e vinul de Cotnar."
Msuri de combatere
Cunoaterea modului de evoluie a agentului patogen n funcie de condiiile climatice, st la baza stabilirii prognozei apariiei bolii, precum i a sistemului adecvat de combatere. n funcie de condiiile ecologice i economice a zonei de cultur, necesitaile viticulturii moderne, impun aplicarea unor sisteme de combatere raional prin mbunatairea tehnologiilor de fitoprotecie i limitarea polurii cu pesticide. Pentru a reduce pagubele produse de aceasta boal se recomand ca n toamnele ploioase s se faca culesul mai devreme. Dup recoltare se vor distruge ciorchinii si frunzele atacate.
De asemenea, n combaterea agentului patogen se recomand o serie de msuri preventive, precum: cultivarea de soiuri de vi de vie rezistente; combaterea insectelor ce produc rni pe fructe; evitarea rnirii plantelor n timpul lucrrilor de ntreinere; alegerea terenului: se va evita plantarea viei de vie pe locuri joase, excesiv de umede si reci, unde umiditatea aerului se menine ridicat, evitndu-se astfel nu numai atacul putregaiului cenuiu, ci i a altor boli; aplicarea corect a tierilor: excesul de producie duce la sensibilizarea plantei fa de atacul agentului patogen, pe de o parte, iar pe de alt parte frunziul prea bogat confer un microclimat favorabil dezvoltrii acestuia; aplicarea raional a ngramintelor: excesul sau carena de elemente nutritive pot cauza modificri n rezistena viei de vie, mrind sensibilitatea la boli; tierea anual a vielor de vie cu o normare a numrului de ochi pe butuc; efectuarea lucrrilor n verede (plivit, dezfrunzit) la timp; legarea si dirijarea (aerisirea) corect a lstarilor.
Combaterea chimic a putregaiului cenuiu este dificil, avnd n vedere faptul c n perioada maturrii strugurilor multe din substanele chmice nu pot fi folosite din cauz c mai apoi pot trece n vin. n general, conidiile ciupercii sunt rezistente, pastrandu-i viabilitatea chiar ntr-o zeam bordeleaz de 3%. N.A. Naumov recomand ca toamna, ndata dup apariia bolii, s se stropeasc via cu o soluie de spun verde 0,5-1%, tratament care se repeat de mai multe ori, n funcie de condiiile climatice.
Tratamente cu fungicide mpotriva putregaiului viei de vie Fungicide eficiente n combaterea putregaiului viei de vie: Agrocarb 50 SC(500 g/l carbendazim); Alizee (50 % procimidon); Teldor 500 SC; Rovral 75 WG; Switch 62,5 WG; Cabrio Top; Pyrus 400 SC .a.
Aplicarea de tratamente contra putregaiului cenuiu al strugurilor Tratamente preventive se fac alternnd aplicarea fungicidelor prezentate mai sus (produse din grupe diferite). T1. Primul tratament se face la sfaritul nfloritului i este numit tratament de siguran" T2. Al doilea tratament se face atunci cand boabele au marimea bobului de mazre T3. Al treilea tratament se face la intrarea n prg (momentul cel mai vulnerabil). T4. Ultimul tratament se face cu 1-3 sptamani naintea recoltrii strugurilor.
Concluzii Via- de- vie este atacat n tot cursul perioadei de vegetaie, dar toamnele ploiose, cu temperaturi moderate i cu un grad ridicat de umiditate determin apariia putregaiului cenuiu la nivelul organelor sensibile,cu precdere pe ciorchini i boabe. Agentul etiologic supravieuiete de la un an la altul sub forma unor organe de rezisten (scleroi) n sol sau pe resturile vegetale de plante atacate de pe suprafaa solului. De aceea este nevoie de cunoaterea unor msuri preventive de protecie a culturilor afectate n cmp sau n sere. Cu toate acestea, viticultorii valorific aceast form de atac, obinnd un must cu o aroma deosebit de plcut. Concentraia ridicat n zahr duce la realizarea unor vinuri licoroase, tari de o calitate aparte.
Bibliografie
E. Rdulescu, E. Docea, Fitopatologie, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1967, paginile 748-751
I. Comes, Al. Lazr, A. Drcea, I. Bobe, M. Hatman, Fitopatologie, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucurti, 1977, paginile 653- 655
Tatiana Eugenia esan, Ctlin Tnase, Ciuperci anamorfe ftopatogene, Editura Universitii din Bucureti, 2007, paginile 44-52
Suport curs Fitopatologie Id anul II - Facultatea de Agricultura, Craiova