Biosinteza unor toxine microbiene

Introducere
Termenul de toxine este larg utilizat de ctre mass-media, fiind atribuit unui numr mare
de substane i factori din mediu, cum ar fi: aditivi alimentari, substane poluante, substane
iritante i ali ageni. Aceast utilizare a termenului de toxina este incorect, innd cont c din
punct de vedere tiinific, toxinele sunt substane secretate doar de organismele vii, substane
care prin structura lor antigenic declaneaz o reacie imun.
Toxienele sunt substane antigenice periculoase produse de ctre organismele vii.
Structura lor este format din lanuri de aminoacizi, fiind o structur organic proteic ce le
confer caracter antigenic de non-self. Toxinele sunt produse de foarte multe microorganisme
precum bacterii, fungi, alge i diverse specii de plante. Majoritatea toxinelor sunt extreme de
periculoase, chiar i o cantitate mic putnd determina decesul organismului cu care au intrat n
contact.

Toxinele microbiene
Toxinele microbiene reprezint produsul unei evoluii pe termen lung care acioneaz sub
form unor mecanisme n procesele vitale ale microorganismelor. Acestea sunt facori majori de
virulent ai microorganismelor, determinnd infecii i boli prin degradarea esutului gazd i
slbirea imunitii.
Toxinele microbiene sunt capabile s ntrerup sau s hiperstimuleze funcii sau cai
eseniale ale celuleor eucariote, atac componente ale echipamentului de sintez a proteinelor,
polimerizarea actinei, cile de transductie a semnalelor, traficul intracelular de vezicule, precum
i rspunsurile imune i inflamatorii.
Din acest motiv, toxinele microbiene au devenit din ce n ce mai mult utilizate c
instrumente de valoare n cercetarea fiziologiei celulare i n medicin pentru tratamentul unor
boli. Potenialul aplicabilitii a toxinelor se extinde dincolo de simpl combatere a virulentei
agenilor patogeni, i include utilizarea acestora c noi medicamente anticancer, dar i a altor
medicamente de prima linie, instrumente n neurobiologie i biologie celular.
Toxinele bacteriene sunt substane cu efect toxic asupra organismului. Ele se mpart n
exotoxine, pe care bacteriile le secret n mediul nconjurtor c un produs al metabolismului

propriu, i endotoxine, care fac parte din structura peretelui celular la bacteriile gram-negative i
sunt eliberate n mediu numai dup moartea bacteriei.
Exotoxinele bacteriene sunt proteine biologic active cu o toxicitate de regul foarte
ridicat. Unele dintre ele sunt cele mai puternice otrvuri cunoscute.
Endotoxina este lipopolizaharidul (LZP) din membran extern a peretelui celular al
bacteriilor gram-negative i joac un rol important n patogenia infeciilor produse de aceste
microorganisme. Ea se elibereaz numai numai dup distrugerea bacteriilor.
Din momentul n care toxina difteric a fost izolat de ctre Roux i Yersin n 1888,
toxinele microbiene au fost recunoscute c fiind factori de virulent primar a multor bacterii
patogene. Toxinele bacteriene au fost definite c substane solubile ce altereaz metabolismul
normal al celulelor gazd i care determina efecte nocive asupra gazdei.
ntr-adevr, majoritatea simptomelor asociate bolilor cauzate de Corynebacterium
diphtheriae (dipteria), Bordetella pertussis (tusea mgreasc), Vibrio cholerae (holer), Bacillus
anthracis (antrax), Clostridium botulinum (botulism), Clostridium tetani (tetanus), i
Escherichia coli (sindromul hemolitic uremic) sunt legate de activitatea toxinelor secretate de
aceste organisme.

Toxinele bacteriene in medicina si cercetare

Odat cu aprecierea rolului central pe care l ocup toxinele n cazul acestor boli, dar nu
numai, a fost studiat aplicabilitatea toxinelor inactive n calitate de vaccinuri datorit
proprietilor adjuvante ale acestor molecule. Asemena vaccinuri au avut ulterior un important
impact pozitiv asupra sntii publice.
Exotoxinele sunt puternic imunogene i se transform prin nvechire i sub aciunea
formolului n diveri imunogeni, dar netoxici, numite anatoxine sau toxoizi. Acestea i pstreaz
ns capacitatea de a declana un rspuns imun dac sunt introduse ntr-un organism
imunocompetent. Fiind netoxice, dar imunogene, anatoxienele stau la baza vaccinarii mpotriva
bolilor produse de bacterii toxigene (tetanus, difterie).
Prima meniune despre atenuarea virulenei unei toxine dateaz din 1923, cnd Alexander
Glenny i Barbara Hopkins arat c virulena toxinei difterice se poate elimina prin tratarea
acesteia cu formol. n acelai an, Gaston Ramon descoper c produsul obinut prin tratarea
chimic a toxinei difterice cu formaldehid este lipsit de toxicitate, dar i pstreaz puterea

imunogen specific. Vaccinurile obinute prin acest procedeu chimic de eliminare a virulentei
toxinelor sunt cunoscute sub numele de anatoxine (n rile de limba englez se folosete
denumirea de toxoid).
Primele vaccinuri cu anatoxin au fost introduse de Gaston Ramon (medic veterinar i
biolog francez): vaccinul antidifteric (1923) i vaccinul antitetanic (1927). Utilizarea
anatoxinelor s-a extins ulterior i la alte tipuri de vaccinuri.
Vaccinuri antitoxice cu anatoxine
o Vaccinul antitetanic
o Vaccinul antidifteric
o Vaccinul cu anatoxin stafilococic
o Vaccinul cu anatoxin streptococic
o Vaccinuri cu anatoxin pertussis
o Vaccinuri conjugate cu anatoxine
Anatoxinele se folosesc n prezent i pentru a mari rspunsul imun fa de antigenele
neproteice din vaccinurile fracionate care conin doar anumite componente microbiene.
Fraciunile din nveliul polizaharidic extern al anumitor bacterii sunt prea puin imunogene.
Legnd aceste fraciuni de anatoxine proteice, sistemul imunitar poate fi determinat s
recunoasc polizaharidul c i cum ar fi un antigen proteic. Vaccinurile care ncorporeaz
anatoxine n acest scop se numesc vaccinuri conjugate. Exemple din aceast categorie sunt:
vaccinul conjugat mpotriva Haemophilus influenzae tip B (care folosete anatoxin tetanic),
vaccinul pneumococic heptavalent conjugat (care folosete tipul CRM197 de anatoxin
difteric), vaccinul meningococic C conjugat (cu anatoxin difteric) etc. Conjugarea cu
anatoxine proteice le confer acestor vaccinuri imunogenicitate ncepnd de la vrst de 2 luni,
permind astfel imunizarea sugarilor i copiilor mici, la care vaccinul neconjugat nu este
imunogen.
Anatoxinele se utilizeaz i pentru hiperimunizarea animalelor de laborator, n scopul
obinerii de seruri antitoxice (seruri imune), care se utilizeaz fie pentru imunizare pasiv prin
seroterapie n anumite boli infecioase (tetanos, difterie, botulism etc.), fie c reactivi pentru
anumite metode de diagnostic de laborator.

Unele dintre aceste toxine ce produc boli destul de periculoase au fot studiate mai n
detaliu pentru utilizarea acestora n scop medical sau n biologia celular. De exemplu toxina
holerei i labil-toxin de Escherichia coli, precum i toxina de Bordetella pertussis au fost folosite
c instrumente biologice pentru a nelege mecanismul de activare al adenilat ciclazei i rolul de
AMP ciclic c al doilea mesager n celul eucariot.
n mod similar, activitatea mai multor citotoxine puternice a fost valorificat c terapii
poteniale pentru anumite tipuri de cancer. Astfel de toxine pot fi foloite fie direct n tratament
sau c i componente ale unor imunotoxine.
Toxinele bacteriene ntr-o oarecare msur au fost deja testate n tratamentul cancerului.
Toxinele bacteriene pot distruge celule sau la un nivel mai redus pot modifica procesele celulare
care controleaz proliferarea, apoptoza i diferenierea. Aceste alterri sunt asociate cu
carcinogenez i pot stimula fie aberaii celulare sau inhib comenzile celulelor normale.
Inhibitorii ciclului celular, asemeni toxinei citoletala distensiva i a factoruuil ciclului de inhibare
blocheaz mitoz, considerndu-se pentru a inhib expansiunea clonal a limfocitelor. n schimb,
stimulatorii ciclului celular, cum ar fi factorul citotoxic necrozant contribuie la proliferarea
celular i intervine n diferenierea celular. Toxinele bacteriene n combinaie cu medicamente
anticancer sau iradiere ar putea crete eficacitatea tratamenului pentru cancer.
Tulpina de Clostridium perfringens de tip A, agentul patogen ce determina gastroenterit
produce enterotoxin Clostridium perfringens (CPE). Studiile au artat c CPE purificat
exercit un efect citotoxic acut asupra celulelor cancerului de pancreas i a dus la necroza
tumorii i inhibarea creterii tumorii n vivo . Acesta este cercetat de asemeni pentru cancerul de
colon, cancerul de sn i cancerul gastric . Mai mult dect att, nainte de a evalua CPE pentru
tratamentul cancerului sistemic, eficiena pe termen lung i lipsa de toxicitate n vivo trebuie s
se demonstreze.
Studiile din ultimii ani au demonstat c neurotoxina botulinum (BoNT) deschide vasele
tumorale permind distrugerea mai eficient a celulor canceroase prin radioterabie i
chimioterapie. n acest mod s-a dorit c BoNT s acioneze asupra micromediului tumorii dect
printr-un efect citotoxic asupra celulelor tumorale.
De exemplu Stx se leag de suprafa glicolipidului CD77 care este exprimat de celulele
B n anumite limfoame cu celule B. Aceast constatare a condus la studii care au artat c Stx

poate cura murine ale mduvei osoase de celulele maligne CD77+B naintea unui transplant
autolog de mduva osoas.
Alte toxine care inhib sintez proteinelor, precum toxina difteric, exotoxin A
Pseudomonas sunt frecvent proiectate c i componente cell-killing ale imunotoxinelor. Aceste
magic bullets, hibrizi ai unei poriuni enzimatic active a moleculei de toxina i a anticorpilor
monoclonali au fost supuse studiilor clinice pentru tratamentul de limfoame cu celule B,
leucemie i transplant de mduva osoas.
Mai multe aplicaii clinice au fost gsite i pentru neurotoxin botulinica de tip A
(BoNT/A). Tulburrile care rspund la BoNT/A implic hiperactivitate muscular. O cantitate
mic de toxina purificat injectat n anumite regiuni duce la reducerea activitii musculare.
Aceasta toxina interfera cu transmisia neuronal prin blocarea eliberarea de acetilcolinei,
principalul neurotransmitor de la nivelul jonciunii neuromusculare, provocnd paralizie
muscular. Acest lucru va slabi eficient musculatura pentru o perioada de timp. Prima dat
BoNT/A a fost folosit pentru a trata strabismul, iar valoarea s terapeutic a fost demonstrat
mai trziu i n cazul distoniei cervicale, spasm hemifacial, tremur, ticuri, dureri de cap, tulburari
determinate de hipersecretia glandelor.
Utilizarea in scop cosmetic a toxinei botulinice (Botox) a cunoscut un mare avnt
in ultimii ani si presupune injectarea toxinei botulinice pentru tratamente estetice, reducerea
ridurilor si a cutelor, dar dermatologice, cum ar fi hiperhidroza. Injectiile cu toxina botulinica
sunt in general bine tolerate, iar efectele secundare sunt putine.
Unele toxine bacteriene (toxina alfa de la Stapylococcus aureus, toxina AC de la
Bordetella pertussis, toxina shiga like, i toxina holerei) sunt supuse cercetrii pe dou linii de
celule: celule mezoteliom i celule mici ale cancerului pulmonar. Rezultatele preliminarii au
artat c toxina AC prezint o cretere a toxicittii odat cu mrirea dozei pentru ambele linii
celulare, iar toxina holerei nu induce apoptoza.
O alt abordare este de a produce toxine modificate genetic sau recombinante . Prin
tehnica ADN- recombinat, genele care codific proteinele (antigenele) componente ale
vaccinului sunt selecionate, izolate i introduse n genomul unei celule vector: bacterie (E.coli),
levur (Saccharomices cerevisiae) capabile apoi s le sintetizeze n cantiti industriale. Acest

lucru a fcut posibil producerea unor incredibile toxine care distrug celule pe baza unei noi
activiti dobndite.
n ultimii ani, s-a cercetat recombinarea exotoxinei interleukin-4-Pseudomonas (L4-PE)
pentru tratamentul de glioblastoma. Experimentele n vivo pe oareci au demonstrate c L-4-PE
are activitate antitumoral semnificativ mpotriva unui tip de glioblastom ntlnit la oameni.
Administrarea intratumoral de L-4-PE este investigat pentru tratamentul de astrocitom malign
ntr-un studiu clinic.
Insecticidele chimice sintetice ofer multe beneficii n producia alimentar i sntate
public dar cu toate acestea prezint unele dezavantaje i riscuri. n multe cazuri, metode
alternative de gestionare a insectelor ofer niveluri adecvate de combatere a duntorilor i
prezint mai puine riscuri . O astfel de alternativ este utilizarea de insecticide microbiene,
insecticide care conin microorganism sau producii ale acestora, cum ar fi toxinele. Insecticidele
microbiene sunt deosebit de valoroase datorit toxicittii lor asupra oamenilor i a animalelor
extreme de sczut.
Organismele utilizate n insecticidele microbiene sunt n esen nontoxice i nepatogene
pentru fauna, oameni i alte organisme, activitatea for fiind strns firectionata asupra
duntorilor. De asemenea, aciunea toxic a insecticidelor microbiene este adesea specific unui
singur grup sau unei specii de insecte, i aceast specificitate se refer la faptul c cele mai multe
insecticide microbiene nu afecteaz n mod direct insectele benefice (inclusive parazii sau
prdtori ai duntorilor) prezente n zonele tratate.
Aceast metod este avantajoas deoarece rezidurile lor nu prezint nici un fel de pericol
pentru om sau animale, insecticdele microbiene pot fi applicate chiar i atunci cnd o cultur este
aproape gata de recoltare.
Bacteriile patogene utilizate pentru contolul insectelor sunt specii din genul Bacillus ce
formeaz spori. Ele se ntlnesc de regul n sol iar tulpinele cele mai insecticide au fost izolate
din probe de sol. Bacillus thuringiensis este o bacterie gram-pozitiva, facultative aeroba.
Caracteristica sa principal este sinteza in timpul sporularii a unei incluzii cristaline ce contine
proteine cunoscute ca endotoxine sau cry proteins ce au proprietati insecticide. Diversitatea
considerabila a acestor toxine, eficacitatea lor si obinerea lor relativ convenabil financiar au
facut ca Bt sa fie cel mai utilizat pe scara larga biopesticid in lume. Este folosit in lupta impotriva

daunatorilor culturilor agricole (in special lepidoptere si larve de coleoptere) in special in crearea
unor plante noi care poarta expresia genor Cry Bt.
Insecticidele bacteriene trebuie s fie consumate pentru a fi eficiente. Insecticidele care
cuprind o singur specie de Bacillus pot fi active mpotriva unui ordin ntreg de insect, sau pot fi
eficiente mpotriva doar a uneia sau cteva specii. De exemplu , produsele care conin Bacillus
thuringiensis var . kurstaki ucide o gama larg de fluturi i molii aflai n stadiul de omid. n
schimb, Bacillus papillae distruge larvele gndacului japonez, dar nu este eficace n cazul
anualelor larve albe (genul Cyclocephala ) cu care este nrudit.
Insecticidele microbiene utilizate cel mai des n USA nc din anii 1960 sunt preprate
folosind bacteria Bacillus thurungiensis (Bt). Produsele Bt sunt obinute n scop commercial n
rezervoare de fermentaie. Deoarece bacteriile triesc i se multiplic n condiii potrivite, fiecare
celul produce (intern) un spor i o toxina proteic cristalin numit endotoxin. Cele mai
comerciale produse obinute cu ajurorul Bt conin toxina proteic i spori, dar unele sunt
cultivate ntr-un mod prin care se produce doar component toxic.

Controlul sintezei i a eliberrii de toxine

Reglarea sintezei i secreia de toxine bacteriene este strns controlat de elemente de
reglare care sunt sensibile la semnalele din mediu. De exemmplu producerea de toxina difteric
este total reprimat de prezena unor cantiti necesare de fier n mediul de dezvoltare a
bacteriilor. Numai n condiiile n care cantitile de fier sunt limitate n mediu producia de
toxine devine facilitat. Expresia toxinei holerei i factorii de virulent afereni sunt controlai de
osmolaritatea de mediu i de temperature. Atunci cnd are loc infecia, n cazul B. pertussis,
inducerea diferitelor elemente de virulent este ealonat, astfel nct mai nti factorii de atasare
sunt produi iniial pentru a stabili infecia iar mai apoi toxinele sunt sintetizate i eliberate
pentru a contracara rspunsul de aprare al gazdei.
Procesele prin care toxinele proteice sunt ansamblate i secretate de celulele bacteriene
sunt variabile. Multe dintre exotoxinele clasice sunt sintetizate cu o secven NH terminal leader
(semnal) care const din civa (1-3) aminoacizi i o poriune de aminoacizi hidrofobi (14-20).
Secven semnal se poate lega i insera n membrane citoplasmatic n timpul translatiei astfel
incat polipeptida este secretat n timp ce este sintetizat.

Concluzii
Toxinele microbiene sunt capabile sa modifice echilibrul normal al unui organism
datorita hiperstimularii sau intreruperii unor functii vitale. Cu toate acestea, activitatile toxinelor
microbiene au fost exploatate ca probe in scopul aplicabilitatii in medicina.
Nevoia de tratamente alternative anticancer a aparut din cauza rezistenei tumorilor, sau a
acelor tumori avansate la terapia convenional aplicat. Multi ani dupa cercetarea si studiul lui
Coley o multitudine de bacterii nepatogene modificate genetic sunt analizate ca poteniali ageni
antitumorali. Vii, attenuate sau modificate genetic, speciile de bacterii nepatogene sunt capabile
de a se multiplica selectiv i de a inhiba creterea. Datorit selectivitii lor pentru esuturile
tumorale, aceste bacterii i spori sunt vectori ideali pentru furnizarea de proteine terapeutice
tumorilor. Toxinele bacteriene reprezint o strategie promitoare n tratamenul cancerului.
Utilizarea toxinelor microbiene a revoluionat tratamentul diferitelor tulburri i boli. O
cunoatere precis i nelegerea fiziologiei umane este absolut necesar n utilizarea toxinelor in
practica clinic. n viitor, dezvoltarea de noi toxine si creterea eficienei va ajuta n continuare
la expansiunea acestui domeniu.

Bibliografie
1. Patyar S. et all., 2010 Bacteria in cancer therapy: a novel experimental strategy, Journal of
Biomedical Science
http://www.jbiomedsci.com/content/17/1/21
2. Schmitt Clare K. et all., 1999 Bacterial Toxins: Friends or Foes?, University of the Health
Sciences, Bethesda, Maryland, USA
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2640701/pdf/10221874.pdf
3. Hunsberger Adrian, 2000 Bt (Bacillus thuringiensis), A Microbial Insecticide
http://miami-dade.ifas.ufl.edu/pdfs/fyn/bt.pdf
4. Nigam P. K. et all., 2010 Botulinum Toxin, Indian J Dermatol.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2856357/
5. Sachis Vincent et all., 2008 Bacillus thuringiensis: applications in agriculture and insect
resistance management
https://hal.archives-ouvertes.fr/hal-00886454/document
6. http://textbookofbacteriology.net/proteintoxins.html
7. http://anatomie.romedic.ro/toxinele
8. http://www.dspjneamt.ro/informatii-utile/prevenire-si-control-bolitransmisibile/vaccinarea/definitii/definitii-vaccinari/anatoxina