LP 11

TEHNOLOGIA OBTINERII VITAMINEI B12

Facbricarea industriala a vitaminei B12 prin biosinteza cu prinde urmatoarele faze:

sterilizarea aerului si mediului de cultura;

fermentatia,

separarea;

purificarea;

cristalizarea vitaminei B12;

Se utilizeaza in practica Streptomyces olivaceus, Propioni shermanii, Propioni

freudenreichii si Propioni technicum.

Procesul de biosinteza este influentat de:

temperatura;

pH;

compozitia mediului de cultura;

gradul de aerare;

precursori;

modul de sterilizare a mediului de cultura.

Se utilizeaza un mediu de cultura bogat in aminoacizi esentiali, saruri de cobalt,

dimetilbenzimidazol, zaharuri. Biosinteza are loc la 30C, in conditii de aerare minima si la
pH 6,8-7 si dureaza aproximativ 70-120 de ore, pana la epuizarea surselor de carbon.
Se lucreaza cu glucoza sau zaharoza(sursa de carbon si energie), extract de porumb
sau faina de soia in cantitati mari(sursa de azot), autolizat de drojdii sau hidrolizat de cazeina.
Cresterea biomasei este stimulata de biotina si de anumiti aminoacizi: glicina, serina, valina,
acid aspartic. Introducerea clorurii de calciu se face de la inceputul procesului, iar
benzimidazolul se introduce dupa 50-60 de ore.
In faza de inocul si prefermentare are loc cresterea biomasei si formarea acidului
aminolevulinic. In absenta ionilor
concentratii suficiente de

se formeaza in mediul de cultura porfirine, iar la

, acidul aminolevulinic nu mai trece in mediu, ci se transforma

in acid cobirinic in interiorul celulelor.

Cobalamina este continuta in biomasa. Dupa coagularea termina, cu electrolit sau
bazica se filtreaza si se obtine un prim concentrat. In biomasa uscata de Propioni shermanii,
1

concentratia vitaminei ajunge la 1500 /g in conditiile fermentarii aerobe si 2500 /g in

fermentatii anaerobe. Biomasa filtrata se trateaza la 90-95C cu acid azotos, cand se pune in
libertatea aquacobalamina si hidroxicobalamina din complecsii proteici ce le contin.
Vitamina eliberata se transforma, sub actiunea acidului azotos obtinut in vasul 1 dintro solutie de azotit de sodiu 0.5% si acid clorhidric adaugat din dozatorul 2, in
nitrozocobalamina, mai stabila. Se filtreaza pe un filtru de presa 3, se spala pe filtru cu apa
calda (85-95C). Dupa reuniunea filtratului cu apa de spalare se salefiaza in vasul 4 cu NaCl
si se filtreaza din nou, apoi se trimite la extractie(figura 1).
Pentru izolarea vitaminei B12 se foloseste cel mai mult metoda extractiei selective.
Din faza apoasa se extrage aqua si hidroxicobalamina cu un anume butanol/fenol 1:1.
Extractul organic ce contine vitamina B12 se trateaza cu apa (raportul 20:1) cand vitamina se
reextrage din solvent in apa. Solutia apoasa obtinuta dupa seprararea fazelor, se trateaza cu
NaCN la pH 7,5-8 cand are loc obtinerea ciancobalaminei care se supune purificarii.
Purificarea consta in extracte cu solvent organic si cromatografiere. Se extrage cu
amestec de crezol/
butanol/

din solutia rezultata de la cianurare, apoi se adauga un amestec de

pentru modificarea polaritatii extractului si de reextrage cu apa distilata. Se

obtine un concentrat de peste 10.000 /ml. Acesta se concentreaza sub vid, cand cristalizeaza
amestecul de vitamine brute, sau se aplica o cromatografie preparativa pe coloane de
partial activata, silicagel activat. Eluarea se face cu acetona, amestec acetona/fenol, sau
acetona/apa.
La rece cristalizeaza ciancobalamina. O purificare suplimentara se poate face prin
recristalizare din apa deionizata. Concentrarea succesiva de la 25 /ml la sfarsitul biosintezei
la 5.000-10.000 /ml dupa cromatografie, face ca o buna parte din operatii sa se execute la
nivel de laborator. Sarjele industriale de vitamina B12 sunt de 5-50 g.

Figura 1. Extractia in apa a vitaminei B12 din masa bacteriana

1- reactor; 2 dozator HCI; 3 filtru presa; 4 vas de salefiere