Sunteți pe pagina 1din 70

Cuprins

INTRODUCERE...............................................................................................................4
I. PARTEA GENERAL..................................................................................................6
I.1. DATE GENERALE PRIVIND SPECIA CYNARA SCOLIMUS L.
(ASTERACEAE)...............................................................................................................6
I.1.1. NCADRAREA SILEMNATIC A SPECIEI PRODUCTOARE....................6
I.1.2. DATE PRIVIND ORDINUL ASTERALES...........................................................7
I.1.3. GENERALITI PRIVIND FAMILIA ASTERACEAE....................................8
I.1.4. DESCRIEREA SPECIEI CYNARA SCOLIMUS L...........................................10
I.1.5. PRODUSUL VEGETAL CYNARAE FOLIUM..................................................10
I.1.6. AREALUL SPECIEI..............................................................................................11
I.1.7. CERCETRI FARMACOCHIMICE ANTERIOARE......................................11
I.1.8. CERCETRI FARMACOLOGICE ANTERIOARE........................................17
II. PARTEA PRACTIC................................................................................................19
ANALIZA FARMACOGNOSTIC A PRODUSULUI VEGETAL CYNARAE
FOLIUM...........................................................................................................................19
II.1. OBINEREA PRODUSULUI CYNARAE FOLIUM..........................................19
II.2. VERIFICAREA IDENTITII.............................................................................20
II.2.1. EXAMENUL MACROSCOPIC.........................................................................20
II.2.2. EXAMENUL MICROSCOPIC...........................................................................21
II.2.2.1. SECIUNEA TRANSVERSAL.....................................................................21
II.2.2.2. PULBEREA.......................................................................................................23
II.2.3. EXAMENUL CHIMIC........................................................................................25
II.3. DETERMINAREA CALITII PRODUSELOR VEGETALE........................51
II.3.1. DETERMINRI PLELIMINARE.....................................................................52
II.3.1.1. DETERMINAREA PIERDERII PRIN USCARE..........................................52
II.3.1.2. DETERMINAREA SUBSTANTELOR SOLUBILE......................................53
III. DETERMINAREA CONINUTULUI N POLIFENOLI TOTALI PENTRU
PRODUSUL VEGETAL CYNARAE FOLIUM.............................................................54
II.2. PROPUNEREA UNEI SHEME TEHNOLOGICE PENTRU OBINEREA
UNEI TINCTURI CU CYNARAE FOLIUM...............................................................56
II.3. ANALIZA HPLC A COMPUILOR FENOLICI DIN TINCTURA DIN
FRUNZE DE ANGHINARE...........................................................................................60
VI. REZULTATE I DISCUII GENERALE..............................................................68
III. CONCLUZII..............................................................................................................69
BIBLIOGRAFIE..............................................................................................................72

2
INTRODUCERE

Ideea acestei lucrri a venit din faptul c specia de Cynara scolimus L. este
cunoscut pe piaa romneasc asuplimentelor alimentare i a medicamentelor sub
diferite forme farmaceutice.
Obiectivele principale al lucrrii de fa au fost:
Analiza farmacognostic a frunzelor speciei Cynara scolimus L.
Analiza chimic a prii aeriene a frunzelor speciei Cynara scolimus L., pentru
stabilirea compoziiei chimice i n special pentru identificarea unor polifenoli cu
aciune antioxidant;
Determinarea polifenolilor totali din Cynara scolimus L.
Obinerea unei tincturi cu Cynara scolimus L.
Propunerea unei scheme tehnologice de obinere industial a tincturii obinute de
de noi.
Analiza HPLC a compuilor polifenolici ai tincturii;

3
Figura 1. Cynara scolimus L. (Asteraceae)

4
I. PARTEA GENERAL

I.1. DATE GENERALE PRIVIND SPECIA CYNARA SCOLIMUS L.


(ASTERACEAE)1

I.1.1. NCADRAREA SILEMNATIC A SPECIEI PRODUCTOARE

ncadrarea sistematic a speciei Cynara scolimus L. este urmtoarea:

1 www.jardinsdemmarocalles.com
5
I.1.2. DATE PRIVIND ORDINUL ASTERALES

Ordinul Asterales este un ordin ncadrat n clasa Dicotiledonatelor, cuprinde


familia Asteracea, i este cunoscut pentru florile compuse2.
Acest ordin este unul cosmopolit, Plantele se gsesc peste tot n lume, inclusiv n
zonele de deert sau zone reci, i cuprinde n cea mai mare parte specii erbacee, i un
numar mic de arbori i arbuti. Caracteristicile comune ale acestui ordin sunt evideniate
la nivel morfologic i biochimic. Caracterul mprtit de dou sau mai multe grupuri,
prin dezvoltare evolutiv, este prezena oligozaharidelor de tipul inulinei, un nutrient
folosit n loc de amidon, precum i morfologia unic a staminelor, care sunt de obicei
gasite n jurul stilului, fie sub form de agregate, fie rsucite ntr-un tub. Polenizarea este
comun, polenul fiind colectat i stocat pe lungimea pistilului.
Ordinul Asterales cuprinde n prezent unsperezece familii, printre care cele mai
mari fiind Familia Asteraceae, cu 25.000 de specii, i Familia Campanulaceae, cu
aproximativ 2.000 de specii. Familiile rmase au mpreun, mai puin de 500 de specii.
Cele dou familii mari sunt cosmopolite, cu o larg rspandire n emisfera nordic, iar
familiile mici au o rspndire limitat, fiind ntlnite n Australia i zonele adiacente,
precum i n America de Sud.
n comparaie cu celelalte familii, numai Familia Asteraceae prezint flori
compuse, dar exist ns caracteristici, cum ar fii stocarea de inulin, care definesc toate
cele unsprezece clase.
Numele Ordinului Asterales este venerabil botanic, i dateaz din 1926, cnd a
aprut pentru prima dat n siLemnul taxonomic al Plantelor Hutchinson, care coninea
pe atunci doar cinci familii.
Dei cele mai multe specii existente ale Familiei Asteraceae sunt erbacee,
examinarea amnunit a membrilor bazali sugereaz c strmoul comun al familiei a
fost o plan arborescent, un copac sau arbust, adaptat la conditiile climatice, uscate, ale
Americii de Sud.

2 MARIANA ARCU, Botanic farmaceutic - ndrumar de lucrri pactice, Editura Muntenia, Constana,
(2007), p. 7-9.

6
Deoarece toate ncrengturile sunt prezente n emisfera sudic, ns nu foarte
multe n emisfera nordic, este firesc s se presupun c acestea au o origine comun
sudic. Plantele din Ordinul Aterales sunt angiosperme, Plante cu flori care au aprut,
aproximativ, 140 milioane de ani n urm, n zonele n care acum sunt Australia, America
de Sud, Africa, India i Antarctica.
Dovezile fosile ale Ordinului Asterales sunt rare i aparin mai degrab epocii
recente, astfel ncat estimarea exact a varstei acestuia este destul de dificil.

I.1.3. GENERALITI PRIVIND FAMILIA ASTERACEAE

Asteraceae (sau Compositae) este una dintre cele mai mari familii de plante cu
flori, cuprinznd peste 1.500 genuri i circa 23.000 specii rspndite pe tot globul.
Familia Asteraceae sau Compositae cuprinde Plante ierboase cu frunze alterne
sau opuse, nestipelate, simple, ntregi sau penat divizate pn la penat compuse. Unitatea
familiei este exprimat prin gruparea florilor ntr-un calatidiu. Florile sunt inserate sesil
pe partea lait a vrfului tulpinii sau a ramificaiilor sale. Aceast parte lait se numete
receptacul. El poate avea mrimi i forme diferite, reduse ns la trei tipuri: plan, bombat
i concave. Partea extern a calatidiului este protejat de hipsofile foarte variate ca form
i mrime. Ele sunt dispuse n mai multe serii i reprezint periclinul calatidial
caracteristic familiei. Florile calatidiului sunt aezate foarte des pe receptacul i pot fi
bisexuate i unisexuate, uneori prin avortare sterile. De obicei, n fiecare calatidiu se
gsesc att flori bisexuate ct i unisexuate3.
Caliciul este redus la peri sau la epi care la maturitatea fructelor le asigur
rspndirea, ce se face prin vnt sau animale. Acest caliciu transformat se numete papus.
Uneori caliciul lipsete. Corola este pentamer i gamopetal. Dup forma i simetria
corolei deosebim flori actinomorfe, cu corola tubuloas (flori tubuloase) i flori
zigomorfe, cu corol tubuloas numai n partea inferioar, n cea superioar prelungit
ntr-un limb lung 3-5 dinat (flori ligulate). Androceul este alctuit din 5 stamine, cu
filamente prinse de corol i cu anterele unite ntr-un tub (sinanterie), numai excepional

3 PRVU, C., Enciclopedia plantelor, vol. I, Editura Tehnic, Bucureti, 2005;


7
libere. Gineceul este bicarpelar, sincarp, inferior. Fructul este o achen monesperm, cu
sau fr papus. Familia este una din cele mai mari uniti siLemnatice din cadrul
dicotiledonatelor cuprinznd circa 15 mii de specii, ce sunt rspndite pe ntreg globul.
Familia se mparte n trei subfamilii:
1. Subfamilia Tubuliflorae, numai cu flori tubuloase;
2. Subfamilia Radiiflorae, cu flori ligulate marginale i tubuloase centale;
3. Subfamilia Liguliflorae, numai cu flori ligulate.
Asteraceele sunt Plante ierboase, cu un tip de inflorescen specific, numit "calatidiu".
Calatidiul dei este alctuit din nenumrate flori, este o inflorescen asemntoare unei
singure flori. Din aceast asemnare se nasc unele confuzii, vorbindu-se n mod cu totul
eronat, de floarea ppdiei sau de aceea a florii soarelui, de exemplu. Florile care
alctuiesc acest tip de inflorescen, au adesea forma unor petale, fiind tubulare, ligulate
(ca o limb) sau dinate. Ele pot fi unisexuate, bisexuate (hermafrodite) sau sterile [mai
multe despre calatidiu].
Unele specii de Compositae prezint drept inflorescen: un capitul - mueelul
(Matricaria chamomilla), un calatidiu compus - floarea de col (Leontopodium alpinum),
un corimb cu calatidii - coada oricelului (Achilea millefolium)4.I.1.4. Generaliti privind
genul Echinaceae

4http://www.bioterapi.ro/aprofundat/index_aprofundat_sistematica_vegetalelor_regnul_plantae_spermatop
hyta_angyospermae_dicotyledoneae_fam_asteraceae.html

8
I.1.4. DESCRIEREA SPECIEI CYNARA SCOLIMUS L.
Cynara scolymus L. este o plant mediteranian, peren sau bianual, ierbacee, cu
tulpin dreapt, foarte ramnificat, cu frunze mari, penat fidate, spinoase, pubescente.

Figura 2. Cynara scolimus L.

I.1.5. PRODUSUL VEGETAL CYNARAE FOLIUM


Reprezint frunzele plantei Cynara scolymus L., anghinar (Asteraceae), cu un coninut
de cel puin 1% polinoli totali exprimai n cinarin i cel puin 0,35% flavone exprimate
n rutozid5, i 0,8% acid clorogenic6.
Obinere.

5 *** Farmacopeea Romn (ediia X) Editura Medical, Bucureti 2010, p. 334.


9
n primul an de vegetaie se recolteaz numai frunzele mediane ale rozetei
bazilare, iar n anii urmtori frunzele caulinare. Se usuc n straturi subiri la temperatura
ambiant.
Industria de medicamente prelucreaz frunzele proaspete.

I.1.6. AREALUL SPECIEI


Se cultiv n rile mediteraniene, n America de Nord i de Sud, ca plant
medicinal i alimentar.

I.1.7. CERCETRI FARMACOCHIMICE ANTERIOARE


Cynarae folium conine urmtoarele principii active: 1-2% ODP-uri (acid
clorogenic 0,8%7, cinarin), 0,10-0,50% flavone (cinarotriozida, scolimozida,
cinarozida), principii amare azulenogene (cinaropicrina, dehidrocinaropicrina,
grosheimina, cinarotriol), compui triterpenici (lactucerol, taraxasterol), steroli (
sitosterol, stigmasterol) un sapogenol steroidic, taninuri, mucilagii, pectine, aminoacizi,
glucide, acizi organici, enzime (labenzima numit i cheag vegetal)8.

HO COOH
O

OH O
HO
HO O
OH
acid cafeic OH

OH

OH
acid clorogenic

Figura 3. Acizi polifenolicarboxilici din Cynarae folium

6 ***Convention on the Elaboration of a European Pharmacopoeia, European Pharmacopoeia, Council of


Europe, Strasbourg, 6th ed, supplement; 2006: 1219-1220.

7 ***Convention on the Elaboration of a European Pharmacopoeia, European Pharmacopoeia, Council of


Europe, Strasbourg, 6th ed, supplement; 2006: 1219-1220.

8 VIORICA ISTUDOR, Farmacognozie, Fitochimie, Fitoterapie, vol. I, Editura medical, Bucure ti, 1998,
p. 113-115.

10
Figura 4. Principii amare din Cynarae folium

Figura 5. Flavonozide din Cynarae folium

Principiile active care sunt coninute n Cynarae folium sunt prezentate n tabelul
urmtor:
Tabel. 1. Compoziia chimic a speciei Cynara scolimus L9.
Principiu activ Organ Minimum Maximum
Plant ppm ppm
1,3-DI-O- ACID CAFEOILCHINIC Flori
1,5- ACID-DI-O-CAFEOILCHINIC Flori
1- ACID CAFEOILCHINIC Flori
11,13-DIHIDROXI-8-DEOXIGROSHEIMIN Frunze
13-CLORO-11-HIDROXI-8-DEOXIGROSHEIMIN Frunze
3,5- ACID DI-O-CAFEOILCHINIC Frunze
3- ACID CAFEOILCHINIC Flori
4,5- ACID DICAFFEOILCHINIC Frunze
4- ACID CAFEOILCHINIC Flori
5- ACID CAFEOILCHINIC Flori
8-EPIGROSHEIMIN Frunze
AESCULETIN-6-O-BETA-D-GLUCOZID Frunze
ALFA-CADREN Flori
APIGENOL Frunze
APIGENOL-4',7-DIGLUCOZID Flori

9 http://sun.ars-grin.gov:8080/npgspub/xsql/duke/plantdisp.xsql?taxon=344
11
APIGENOL-7-O-RUTOZIDOZID Frunze
APIGENOL-7-O-RUTOZIDOZID Lemn
APIGENOL-7-RUTOZIDOZID Flori
APIGENOL-7-RUTOZIDOZID Frunze
APIGENOL-7-RUTOZIDOZID Lemn
ACID ASCORBIC Flori 0 828
BETA-CAROTEN Flori 1 20
BETA-SELINEN Ulei volatil
BETA-SITOSTEROL Frunze
BETA-TARAXASTEROL Plant
ACID CAFFEIC Flori
ACID CAFFEIC Frunze
ACID CAFFEOIL-4-CHINIC Flori
CALCIU Flori 120 5286
CARBOHIDRATI Flori 105000 755000
CARIOFILEN Ulei volatil
ACID CLOROGENIC Flori
ACID CLOROGENIC Mldie
ACID CLOROGENIC Frunze
CUPRU Flori 2 24
COSMOZID Frunze
COSMOZID Flori
COSMOZID Lemn
ACID CRIPTOCLOROGENIC Frunze
CIANIDOL-3,5-DIGLUCOZID Flori
CIANIDOL-3-CAFEILGLUCOZID Plant
CIANIDOL-3-CAFEILSOFOROZID Plant
CIANIDOL-5-GLUCOZID-3-CAFEOILSOFOROZID Flori
CIANIDOL-5-GLUCOZID-3-CAFEILSOFOROZID Plant
CIANIDOL-DICAFEILSOFOROZID Plant
CIANIDOL-GLUCOZID Plant
CIANIDOL-SOFOROZID Plant
CINANOPICRIN Frunze
CYNARA-SCOLYMUS-GUAIANOLID-I Frunze
CYNARA-SCOLYMUS-GUAIANOLID-II Frunze
CINARAGENIN Frunze
CINARAPICRIN Frunze
CINARATRIOL Flori
CINARATRIOL Frunze
CINARIN Frunze 200 1000
CINARIN Mldie
CINAROGENIN Frunze
CINAROLID Frunze 330
CINAROLID Plant
CINAROPICRIN Frunze
CINAROPICRIN Plant
CINAROPICRIN Mldie
CINAROZID Flori
CINAROZID Lemn
CINAROZID Mldie
CINAROZID Frunze

12
CINAROTRIOZID Frunze 12
DECANAL Ulei volatil
DEHIDROCINAROPICRIN Frunze
ACID DICAFEOILCHINIC Frunze
ACID DICAFEOILCHINIC Rdcin
EUGENOL Ulei volatil
LIPIDE Flori 1000 20000
ACID FERULIC Plant
FIBRE Flori 11400 224000
FLAVONOIDE Flori 1000 10000
FOLACIN Flori 0.7 4.7
ACID GLICERIC Flori
ACID GLICERIC Frunze
ACID GLICERIC Flori
ACID GLICERIC Frunze
GROSHEIMIN Frunze
GROSHEIMIN Mldie
GROSHEIMIN Plant
GROSULFEIMIN Frunze
GUAIANOLIDE Flori
HESPERETIN Frunze
HESPERIDIN Frunze
HETEROZID-B Flori
HEX-1-EN-3-ON Flori
INULIN Flori
INULIN Frunze
FIER Flori 11 101
ISOAMBERBOIN Frunze
ISOAMERBOIN Plant
ACID ISOCLOROGENIC Frunze
ACID ISOCLOROGENIC B Frunze
KILOCALORII Flori 470 3120
ACID LAURIC Flori 20 135
ACID LINOLEIC Flori 460 3055
ACID LINOLENIC Flori 170 1130
LUTEOLIN Frunze
LUTEOLIN-4',7-DIGLUCOZID Flori
LUTEOLIN-4-BETA-D-GLUCOZID Flori
LUTEOLIN-7-BETA-D-GLUCOZID Flori
LUTEOLIN-7-BETA-RUTOZIDOZID Flori
LUTEOLIN-7-GENTIOBIOZID Frunze
LUTEOLIN-7-O-ALFA-L-RHAMNOZIL-GLUCOZID Frunze
LUTEOLIN-7-O-GLUCOZID Frunze
LUTEOLIN-7-O-RHAMNOGLUCOZID Frunze
LUTEOLIN-7-O-RUTOZIDOZID Flori
LUTEOLIN-7-O-RUTOZIDOZID Lemn
LUTEOLIN-7-RUTOZIDOZID Flori
LUTEOLIN-7-RUTOZIDOZID Frunze
LUTEOLIN-7-RUTOZIDOZID Lemn
MAGNEZIU Flori 555 4275
MARITIMEIN Frunze

13
POLIHOLOZIDE Plant
MYRISTIC-ACID Flori 20 135
NARINGENOL Flori
NARINGENOL-7-O-BETA-D-GLUCOZID Flori
NARINGENOL-7-O-RUTOZIDOZID Flori
NARINGENOL-7-RUTOZIDOZID Flori
ACID NEO-CLOROGENIC Frunze
NIACIN Flori 10 82
NON-TRANS-2-EN-AL Flori
O-DIFENOLI Flori 20000
OCT-1-EN-3-ON Flori
ACID OLEIC Flori 50 330
OXIDAZ Frunze
ACID PALMITIC Flori 290 1925
ACID PANTOTENIC Flori 3 23
FENOLI Plant 20000
PHENIL-ACETALDEHID Flori
FOSFOR Flori 860 6240
FITATI Flori 90 900
POTASIU Flori 3500 29780
PROTEINE Flori 31000 276000
PSEUDOTARAXASTEROL Frunze
QUERCETOL Frunze
RIBOFLAVIN Flori 0.6 7
RUTOZID Frunze
SCOLIMOZID Frunze
SCOLIMOZID Flori
SCOLIMOZID Frunze
SCOLIMOZID Mldie
SCOPOLETIN Frunze
SODIU Flori 850 6840
ACID STEARIC Flori 30 200
STIGMASTEROL Frunze
SYRINGOZID Frunze
TANINURI Plant
TARAXASTEROLI Frunze
TIAMINA Flori 0.7 6
TRIDEC-1-ENE-3-5-7-9-11-PENTAIN Rdcin
TRIDECA-1-11-DIENE-3-5-7-9-TETRAIN Rdcin
APA Flori 773000 854870
ZINC Flori 4 36
VIT-B-6 Flori 1 8
LUTEOLIN-4'-O-BETA-D-GLUCOZID Flori
LUTEOLIN-4'-O-BETA-D-GLUCOZID Frunze
LUTEOLIN-4'-O-GLUCOZID Frunze
LUTEOLIN-3'-O-BETA-D-GLUCOZID Flori
LUTEOLIN-7-RUTOZIDOZID-4'-GLUCOZID Plant
1,4 ACID DICAFEOILCHINIC Flori

14
I.1.8. CERCETRI FARMACOLOGICE ANTERIOARE

Aciune: antioxidant10,11 prin captarea i degradarea radicalilor liberi, coleretic-


colagog, hepatoprotectoare12 (datorit derivailor cafeic i a altor polifenoli) prin
captarea i degradarea radicalilor liberi, hipolipemiant13 (scade concentraia lipidelor
totale i a colesterolului din ser prin cinarin) fiind un inhibitor al lipolizei de tip acid
nicotinic (fr efectele secundare ale acestuia), antialergic prin inhibarea
complementului seric (derivaii acidului cafeic - cinarina), febrifug, tonic amar,
bacteriostatic fa de germenii Salmonella i Staphylococcus, antifungic14, diuretic
(flavone)15.
ntrebuinri: afeciuni hepato-biliare, alergii pe fond hepatic, hiperlipidemii,
hipercolesterolemii, ateroscleroz, obezitate, afeciuni renale, reumatism.

10 Llorach, Rafael, et al. "Artichoke (Cynara scolymus L.) byproducts as a potential source of health-
promoting antioxidant phenolics." Journal of Agricultural and Food Chemistry 50.12 (2002): 3458-3464.

11 Jimnez-Escrig, Antonio, et al. "In vitro antioxidant activities of edible artichoke (Cynara scolymus L.)
and effect on biomarkers of antioxidants in rats." Journal of agricultural and food chemistry 51.18 (2003):
5540-5545.

12 Adzet, Toms, Jorge Camarasa, and Juan Carlos Laguna. "Hepatoprotective activity of polyphenolic
compounds from Cynara scolymus against CCl4 toxicity in isolated rat hepatocytes." Journal of Natural
products 50.4 (1987): 612-617.

13 Gebhardt, Rolf. "Inhibition of cholesterol biosynthesis in primary cultured rat hepatocytes by artichoke
(Cynara scolymus L.) extracts." Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 286.3 (1998):
1122-1128.

14 Zhu, Xianfeng, Hongxun Zhang, and Raymond Lo. "Phenolic compounds from the leaf extract of
artichoke (Cynara scolymus L.) and their antimicrobial activities." Journal of agricultural and food
chemistry 52.24 (2004): 7272-7278.

15 VIORICA ISTUDOR, Farmacognozie, Fitochimie, Fitoterapie, vol. I, Editura medical, Bucure ti,
1998, p. 115.

15
II. PARTEA PRACTIC

ANALIZA FARMACOGNOSTIC A PRODUSULUI VEGETAL CYNARAE


FOLIUM

Analiza farmacognostic i fitochimic urmrete stabilirea identitii produselor folosite


n fitoterapie ca atare sau ca materie prim, a puritii i calitii lor.
Metodele de analiz cuprinse n aceast metodologie, dup natura lor, pot fi
grupate n calitative i cantitative.
Cu ajutorul metodelor calitative se urmrete determinarea identitii produselor
vegetale analizate, cu ajutorul caracterelor macroscopice i microscopice precum i prin
decelarea principalelor grupe de principii active.
Prin metodele de analiz cantitativ se urmrete stabilirea puritii produselor
vegetale i determinarea calitaii acestora, prin determinri preliminare (pierdere prin
uscare, substane solubile, cenua etc) i determinarea coninutului n principii active.
Metodele de analiz menionate se aplic n mod difereniat, n funcie de
produsele vegetale cunoscute (verificarea indentitii) sau necunoscute, adic
produsevegetale noi (stabilirea identitii).
In cazul unui produsului vegetal puin studiat se efectueaz determinrile enunate
mai sus, ca fiind necesare pentru verificarea identitii, stabilirea puritii i determinarea
calitii acestuia.

II.1. OBINEREA PRODUSULUI CYNARAE FOLIUM

Obinerea produsului proaspt de cercetat s-a fcut de la Mnstirea Vladimireti


din cultur proprie, August 2014.
Frunzele s-au desprins dup tulpini i s-au sortat. Materialul vegetal sortat a fost
supus uscrii la umbr, timp de 3 - 4 sptmni, pn cnd a devenit friabil, dup care a
fost ambalat n pungi de hrtie i conservat ntr-un spaiu aerisit. Mai multe exemplare se
gsesc n colectia exicata, plastifiate n laboratorul de Farmacognozie.
16
II.2. VERIFICAREA IDENTITII

II.2.1. EXAMENUL MACROSCOPIC

Material i metod

Acest examen este prima etap n investigarea produselor vegetale cunoscute sau
nc nestudiate.
Se efectueaz prin examinarea cu ochiul liber a frunzelor sau cu o lup observnd
aspectul, fractura, dimensiunile, culoarea, gustul i mirosul lor.

Rezultate

Examenul macroscopic a permis observarea urmtoarelor caractere:


tulpin dreapt foarte ramnificat;
frunze mari penat fidate, spinoase, pubescente.

Concluzii

Produsul vegetal analizat Cynarae folium corespunde celor descrise n flora


R.P.R. pentru frunzele speciei Cynara scolymus L. Astfel, putem afirma c produsul
vegetal a fost identificat din punct de vedere macroscopic.

17
II.2.2. EXAMENUL MICROSCOPIC

II.2.2.1. SECIUNEA TRANSVERSAL

Material i metod

n vederea realizrii examenului microscopic s-au efectuat seciuni transversale


prin tulpin i frunz. Clarificarea seciunilor s-a fcut cu ap de Javel, iar colorarea cu
verde de iod i carmin - alaun.
Materiale folosite:
- material biologic (frunz provenit de la specia Cynara scolymus L.)
- microscop Novex (Olanda), Camer Euromex (Olanda) (10 / 0,25);
- ace spatulate;
- brici;
- pense;
- cutii Petrii;
- spirtier sau bec de gaz;
- rjni electric;
- ageni de clarificare, ap de Javel (soluie apoas de hipoclorit de sodiu), cloralhidrat
70%;
- colorani (verde de iod, carmin alaunat);
- agent de fixare (mas gelatinoas);
- lame i lamele16.

Prepararea seciunilor transversale


Cu ajutorul briciului s-au efectuat seciuni transversale ct mai fine prin frunza proaspt
de Cynara scolymus L.

16 Ciulei I., Istudor V., Palade M., Albulescu D., Grd C. E. Analiza farmacognostic i fitochimic a
produselor vegetale Tehnoplast Company, Bucureti 1995, vol. I., (pag. 4 22, 78 82, 83 86, 96
100, 141 146, 221 227);

18
Seciunile obinute s-au reinut ntr-un cristalizator cu soluie Javel (aproximativ
60 minute pentru tulpin i 30 minute pentru frunz), dup care s-au cltit cu ap distilat
pn nu s-a mai perceput mirosul de clor.
Colorarea seciunilor clarificate s-a realizat mai nti cu verde de iod, apoi cu
carmin - alaun. Seciunile s-au meninut timp de 3 minute n soluia de verde de iod (R),
apoi s-au splat cu ap distilat de mai multe ori pn cnd lichidul de splare nu a mai
fost colorat.
n continuare s-au inut seciunile 10 minute n soluie de carmin alaunat (R), dup
care s-au splat pentru ndeprtarea excesului de colorant. Carminul coloreaz celuloza
n roz, iar verdele de iod coloreaz lignina i suberina n verde, albastru sau albastru-
violet (suberul, sclerenchimurile, celulele pietroase, fibrele lignificate, vasele de lemn).
Montarea seciunilor s-a realizat astfel: pe o lam de microscop s-a adus un
fragment mic de mas gelatinoas care se topete prin meninere ntr-o flacr potrivit.
n pictura astfel obinut s-au depus seciunile cu ajutorul unei pense. Deasupra s-a
aezat o lamel i s-a lsat preparatul n repaos pentru solidificare prin rcire.

Rezultate i discuii

Examinarea seciunilor transversale prin frunz a condus la observarea urmtoarei


structuri. Seciunea transversal prin frunz, prezint n zona limbului o structur
heterogen asimetric. Pe ambele epiderme, dar mai ales pe epiderma inferioar, sunt
prezeni peri tectori uni- sau pluricelulari subiri, cu celula terminal alugit i ondulat.
Perii glandulari caracteristici familiei (scurt pedicilai sau sesili, cu glanda pluricelular
etajat, biseriai) sunt rari. n dreptul nervurii se observ numeroase (5-7) fascicule
libero-lemnoase colaterale protejate de cte dou calote cu pericilu colanchimatos (fig. 6,
fig 7).

19
Epiderm
inferioar

Fascicol libero
lemnos colateral
Druze de
oxalat de
Fascicol calciu
libero-lemnos

peri tectori

Figura 6 - Seciune prin frunz, ocular 20x Figura 7 - Seciune prin frunz, ocular 40x

Concluzii

Structurile microscopice ale seciunilor transversale prin frunz ne permite s


observm carcterele microscopice pentru Cynare folium, descrise n literatura de
specialitate.

II.2.2.2. PULBEREA

Material i metod

Cu ajutorul unei pipete s-a pus o pictur de cloralhidrat 70% pe o lam de


microscop, dup care cu ajutorul unui ac spatulat s-a presrat produsul vegetal pulverizat,
n strat suficient de subire pentru a permite o bun examinare la microscop. S-a trecut
apoi lama pe deasupra flcrii unei spirtiere, pn la perceperea unui miros uor de
cloralhidrat. S-a adugat apoi o pictur de fluoroglucin, iar peste preparatul atfel
pregtit s-a aezat lamela n aa fel, nct s nu prind bule de aer.

Rezultate i discuii
20
Examenul microscopic al preparatului microscopic n pulbere permite observarea
urmtoarelor elemente: peri tectori pluricelulari sub form de bici, stomate, vase de lemn
de calibru mic inelat, fragmente de parenchim (fig. 8).

Peri tectori Vas lemn


pluricelulari inelat

a b

stomate

stomate

c d
Figura 8 Elemente anatomice din preparatul microscopic din pulverea de Cynarae folium (10 x 2,5)
peri tectori pluricelulari (figura 10 a), vas de lemn inelat (figura 10 b), stomate (figura 10 c si d).

Concluzii

21
Elementele anatomice prezentate constituie alturi de caracterele morfologice
elementele care stau la baza examenului de stabilire a identitii produsului vegetal luat n
studiu.

II.2.3. EXAMENUL CHIMIC

Analiza chimic calitativ presupune extracia succesiv a produselor vegetale, cu


solveni de polariti diferite i separarea cu ajutorul metodelor chimice, urmate de
efectuarea unor reacii specifice cu ajutorul crora s poat fi identificate diferite grupe
de principii active sau anumii constituieni chimici.

Material i metod

n scopul efecturii analizei chimice globale se realizeaz mai nti extracia


principiilor active din produsul vegetal pulverizat cu un solvent nepolar (eter etilic, eter
de petrol, benzen, hexan, cloroform etc.), apoi cu un solvent polar (etanol, metanol) i n
cele din urm apa. Se obin urmtoarele fraciuni:

1. sol. extractiv eteric (A)


2. sol. extractiv alcoolic (B)
3. sol. extractiv apoas (C)
n extractul eteric se gsesc compuii chimici lipofili, iar n celelalte dou
compuii chimici hidrofili.
Pentru identificarea compuilor chimici din cele trei extracte acestea sunt
analizate separat, folosind metode corespunztoare propietilor fizico-chimice ale
fiecrui grup de principii active.

Materiale necesare:
produsul vegetal pulverizat: Cynarae folium

22
vesel de laborator: pahare Erlenmayer; eprubete, pahare Berzelius, plnii de diferite
dimensiuni, baghete de sticl, hrtii de filtru, baloane cu fund rotund, cilindrii gradai,
pipete, plnii de separare, capsule de porelan, spatule, baloane cotate,

solveni: ap distilat, alcool metilic, eter etilic, eter de petrol, aceton, cloroform;

reactivi de analiz: acid sulfuric concentrat (R), acid sulfuric 1N, acid sulfuric 0,05 N,
acid clorhidric 10 % (R), acid clorhidric 5 % (R), acid clorhidric 1N (R), acid clorhidric
0,5 N (R), acid clorhidric 10% (R), acid clorhidric 5% (R), acid clorhidric 2% (R), acid
nitric 10% (R), acid acetic glacial (R), alcool etilic concentrat (R), metanol 50% (R),
anhidrid acetic acid sulfuric concentrat (R), amoniac concentrat (R), amoniac 10%
(R), amoniac 2% (R), hidroxid de sodiu 30% (R), hidroxid de sodiu 10% (R), hidroxid de
sodiu 1 N (R), hidroxid de sodiu 0,5 N (R), hidroxid de potasiu 10% (R), soluie alcoolic
0,5 N de hidroxid de potasiu (R), hidroxid de potasiu 1N (R), hidroxid de potasiu 10% n
soluie alcoolic (R)soluie alcoolic de hidroxid de potasiu 1N (R), reactiv Tollens
(azotat de argint amoniacal) (R), reactiv Carr-Price (clorur de stibiu (III) soluie
cloroformic) (R), acetat de sodiu 10%, clorur de stibiu (III) n acid acetic glacial i
metanol, sulfat de sodiu anhidru, reactiv Mayer (tetraiodomercuriat de potasiu) (R),
reactiv Marquis (R), reactiv Bertrand (acid silico-wolframic soluie) (R), reactiv Deniges
(reactiv sulfomercuric) (R), pan de magneziu, clorur feric 1% (R), soluie Fehling (I +
II) (R), clorur de sodiu, soluie acetonic de ninhidrin 1% (R), soluie clorhidrat de
hidroxil amin 0,5 N (R), clorur feric 3% (R), sulfat de cupru (II) 5%, soluie 1% de
acid 3,5-dinitrobenzoic (R), Sudan III (R), soluie alcoolic 1% de timol (R), reactiv
Lugol (iod n iodur de potasiu) (R), acetat bazic de plumb (R), acetat de plumb 5% (R),
clorur de fier (III) 25% (R), clorur de stibiu (III) 0,4% (R), hexacianoferat (III) de
potasiu 5% (R), , reactiv Arnow (R), reactiv Bouchardat (R), reactiv CarrPrice (R),
reactiv DragendorfMunier (R), reactiv Fehling (R), reactiv Styassny (R), sulfat de cupru
(II) 5% (R), vanilin sulfuric (R), clorur de psulfonbenzen diazoniu (acid sulfanilic
diazotat) (R)

23
Indicatori: albastru de toluidin (R), ap de amidon, metilorange17,

Analiza soluiei extractive eterice

Modul de lucru

S-au cntrit 20g de produs vegetal proaspt pulverizat, care s-au extras mai nti
cu eter etilic (2 x 50mL), prin agitare la rece timp de 15 minute (baia electric gradaia 2).
Dup decantare i filtrare soluiile se reunesc i se concentreaz pe baia de ap pn la 50
ml. S-a obinut soluia A. Aceasta a fost folosit pentru efectuarea reaciilor caracteristice
compuilor lipofili (schema I)18. Produsul vegetal epuizat cu eter s-a pstrat pentru
extraciile ulterioare cu ali solveni.
Din extractul eteric se pot identifica compui chimici lipofili ca: uleiuri volatile,
substane grase, acizi grai i rezinici, alcaloizi baze, agliconi flavonici, antrachinonici i
cumarinici, steroli, triterpene i carotenoide.

Identificarea uleiului volatil

Uleiurile volatile sunt compui ai metabolismului secundar vegetal secretai de celule


specializate n acest scop, repartizai n diferite organe i depozitai n vacuole, pungi sau
canale secretorii, ori peri glandulari, sub form de lichide uleioase, volatile, cu miros
plcut, aromat. Ele sunt amestecuri de diveri constituieni chimici dotai cu interesante
propieti terapeutice.
Uleiurile volatile sunt amestecuri complexe (5000 7000 constituieni chimici) n
care predomin constituienii mono- i sesquiterpenici, dar conin i compui aroamatici,
frecvent derivai fenil-propanici; foarte rar se ntlnesc diterpene (sclareol n Salvia
sclarea L.). Compuii terpenici pot fi hidrocarburi sau derivai oxigenai (oxizi, alcooli,
aldehide, cetone, acizi) sau produi de reacie ai acestora (eteri, esteri).

17 CIULEI I., ISTUDOR V., PALADE M., ALBULESCU D., GRD C. E. Analiza farmacognostic i
fitochimic a produselor vegetale Tehnoplast Company, Bucureti 1995, vol. II, (pag. 409 418);

18 Ibidem.

24
Mod de lucru
Se evapor pn la sec un volum de 20 mL extract eteric. Reziduul se reia cu
cantiti mici de alcool. Dac dup evaporarea alcoolului se percepe un miros plcut
aromat se poate spune c produsul vegetal conine ulei volatil.n prezena a 1 2 picturi
tinctur Alkanna sau Sudan III (R) uleiul volatil se coloreaz n rou.

Identificarea sterolilor i triterpenelor

Fitosterolii liberi (stigmasteroli i ergosteroli) sunt steroli care la C17 au o caten


de 8-10 atomi de carbon iar la C 10 i C13 cte un metil. Tot n grupa sterolilor intr
sapogenoli saponozidelor sterolice i glicoalcaloizii (derivai sterolici de tip spirosolan).
Aceste clase reprezint principalele surse vegetale pentru semisinteza industrial a
hormonilor steroizi.
O CH3

H
O

HO sarsapogenol
H (25S, H-5

Figura 9 - Sapogenol sterolic

Triterpenele sunt agliconi ai saponozidelor triterpenice, de obicei pentaciclici, mai


rar tetraciclici i n mod excepional triciclici, alctuii din 30 de atomi de carbon.

25
COOH COOH COOH

HO HO HO

Figura 10 - Tipuri de acizi triterpenici (de la stnga la dreapta: ac. ursolic, ac. oleanolic, ac. betulinic)

Ele pot avea structur -, - amirinic, lupeolic (cele pentaciclice) sau


damaranic (cele tetraciclice).
Structura nucleului sterolic se identific cu ajutorul reaciei Liebermann-Burchard
conform reaciei urmtoare.

R1 R1 R1
CH3 CH3 CH3
H2SO4conc
R R R
-4 H 2O
OH
HO
genol dimer verde

Figura 11 - Reacia Liebermann-Burchard

Mod de lucru.
3 mL extract eteric (E) se evapor ntr-o capsul de porelan pe baia de ap (la
ni) dup care se dizolv apoi reziduul obinut n 5 mL cloroform i se adug 0,5 mL
anhidrid acetic. Se trece soluia rezultat ntr-o eprubet, dup care cu ajutorul unei
pipete se aduce la fundul unei eprubete, 2 mL acid sulfuric concentrat (R). La zona de
contact a celor dou lichide apare un inel rou brun iar dup cteva minute stratul
superior se coloreaz n verde intens, dac exist steroli sau violet dac exist triterpene.

26
Identificarea carotenoidelor

Carotenoidele sunt substane de natur terpenoidic, cu un numr de 40 atomi de


carbon n molecula lor, de culoare galben, portocalie sau roie datorit unui sistem de
duble legturi conjugate i care fiind n general insaponificabile, sunt dotate cu propieti
puternic lipofile.
Structura caracteristic carotenoidelor provine, n primul rnd, din nsuirile
moleculei format din cei 40 atomi de carbon i coninnd un numr considerabil de
duble legturi conjugate. De regul, capetele moleculei pot fi diferite structural i aceasta
constituie i caracterul diferenial ntre diferitele specimene carotenoidice, dar marea lor
majoritate conin alctuit din 18 atomi de carbon i 4 grupri metilice laterale, simetric
plasate.

(1)

(2)

Figura 12- Structura carotenoidelor -iononice, (1) caroten, (2) caroten.

n aceast zon se afl plasate dublele legturi conjugate i care constituie


sistemul cromofor al moleculei. Prin nchiderea captului catenei polienice, datorit
structurii pseudociclice i ca urmare unui proces de ciclizare, se formeaz structura -
iononoc, tipic pentru grupa carotenoidelor.

Mod de lucru.
Se evapor 3 mL extract eteric (E) pe baia de ap (la ni) apoi se trateaz
rezidduul cu 3 picturi reactiv Carr-Price (R). Pigmeni carotenoidici dau cu acest reactiv

27
o culoare albastr care trece n rou. La adugare de acid sulfuric concentrat,
carotenoidele se coloreaz n albastru intens sau n verde-albastru.

Identificarea agliconilor flavonici

Flavonele, n sens larg, sunt substane fenolice naturale, de tip C 6-C3-C6, derivai
ai 2-fenilbenzopiranului (flavanului) sau 3-fenilbenzopiranului (izoflavanului), substituii
cu diferii radicali: OH, OCH3, CH3, C2H5, isopentenil etc.

1 3I
8
7 O 2
B 4I
A
6 3 5I
5 4

FLAVAN

O O

R R
O O
R R

flavon H flavanon H
flavonol OH flavanolol OH
Figura 13 - Structura chimic a flavonelor

n funcie de gradul de nesaturare a segmentului C 2-C3 i de prezena gruprii OH


la C3, se deosebesc: flavone, flavonoli, flavanone, flavanololi.
Pn n prezent se cunosc aproximativ 3000 de astfel de compui, dintre care circa
500 se gsesc n stare liber, n plantele superioare (criptogame vasculare, gimnosperme,
angiosperme); foarte rar se ntlnesc la alge (ex. peonidolul n specii de Chlamidomonas).
Au fost semnalate n insecte i la fluturi unde provin din polenul sau nectarul florilor cu

28
care acetia se hrnesc. Cele mai rspndite sunt flavonozidele, antocianozidele i
catecholii.
Flavonoidele se gsesc att sub form de agliconi, ct i sub form glicolizat.
Partea glucidic poate fi alctuit din una sau mai multe oze legate C-O-C la oricare OH
de pe nucleu sau C-C.
Agliconii flavonozidelor sunt solubili n alcool, acetat de etil, solveni apolari,
insolubili n ap. Datorit hidroxizilor fenolici sunt solubili i n soluii alaline.
Heterozidele sunt solubile n ap, alcool concentrat i diluat, solubile specific n acetat de
etil, aceton, insolubile n solveni polari.

Heterozidele se gsesc dizolvate n sucul celular, iar agliconii predomin n


esuturile lignificate (vase de lemn, fibre, ideoblaste, cuticul etc.)

Identificarea flavonozidelor poate fi efectuat datorit:


reducerii gruprii ceto de la C4 (reacia cianidolului sau Shibata);
formrii chelailor ntre gruparea ceto de la C 4 i oxidrilii vicinali, n poziiile
,,orto i ,,para sau ntre dou grupri OH fenolice, de pe nucleul B (poziia
para);
transformrii fenolilor n fenoxizi, cu itensificarea culorii galbene .

OH OH
OH - OH
Cl
HO O +
+ HO O
H

OH Mg + HCl
OH
OH O OH

Figura 14 - Reacia Shibata

29
O Me
O
O
O
O

O
O O
O Me Me O
(I) (II) (III)
Figura 15 - Structura chelailor

Mod de lucru
S-a evaporat 3 mL extract eteric ntr-o capsul de porelan pe baia de ap (la ni).
S-a dizolvat apoi reziduul n 2 mL metanol 500C la cald (pe baia de ap). Soluia care a
devenit de culoare galben, s-a adus ntr-o eprubet i s-au adugat apoi 2-3 buci de
pan de magneziu i 10 picturi de acid clorhidric concentrat (R). Apariia unei coloraii
roii-portocalii indic prezena agliconilor flavonici (reacia Shibata sau reacia
cianidolului).

Identificarea cumarinelor

Cumarinele sunt substane lactonice naturale, cu structur -benzopironic, rezultate


prin deshidratarea acizilor o-hidroxi-Z-cinamici, glicozidate sau neglicozidate. n funcie
de structura lor chimic, cumarinele se pot clasifica n:
- cumarine simple i dimeri;
- furanocumarine;
- piranocumarine;
- izocumarine;
- cumestani.
Cu excepia cumarinei, majoritatea acestor compui sunt derivai de substituie ai -
benzopironei cu grupri hidroxil, metoxil, izoprenil, fenil etc. Cumarinele pot prezentao
structur simpl, uneori dimerizat, sau o structur mai complex, rezultat prin sudarea
la nucleul benzenic a unui heterociclu (furan sau piran).

30
O O O O O O O

cumarin furanocumarin piranocumarin


Figura 16 - Structura chimic a diferitelor tipuri de cumarine

Furanocumarinele sunt compui triciclici lactonici naturali n urma sudrii unui


ciclu furanic poziiile (1, 5) sau (2, 3) la un benzopiren poziiile, (6,7) pentru a
forma stucturi lineare (psoralen, bergapten, xantotoxin) i n poziiile (7,8) pentru a
forma structuri unghiulare (izopsoralen sau angelicin, izobergapten).
Dup modul de nchidere al ciclului furanic se cunosc trei tipuri de structuri
furanocumarinice i anume:
Seria normal (6,7-furanocumarina = psoralen);
Seria izo (7,8-fuanocumarina = izopsoralen);
Seria allo (5,6-furanocumarina = allopsoralen)
Substituia se face de obicei la C5, C8, dar i la C3 sau pe nucleul furanic cu
hidroxil, metoxi, dimetialil sau alte terpene.
Cumarinele n general sunt substane solide, cristalizate, sublimabile, cu miros
caracteristic, aromat care emit radiaii caracteristice n UV (fluoresce verzuie, albastr
sau violet, mai intens dup alcalinizare).
Furanocumarinele (psoralen, bergapten, xantotoxin, imperatorin,
izopimpinelin) fiind compui hidroxilai i neglicozidai sunt solubili n solveni apolari.
Nucleul benzenic le confer ns i un grad redus de hidrofilie fiind deci solubili i n
alcool. Toate cumarinele, propriu zise prezint spectre de absorbie n UV caracterizate
printr-o larg band n zona lungimii de und de 320 nm, pe cnd furanocumarinele
prezint o deplasare a benzii caracteristice ctre 300-310 nm n IR benzile de absorbie
caracteristice sunt plasate la 1740 i 1620 cm 1.

31
O O O O O O

psoralen izopsoralen
(angelicina)

OCH 3
O O O O

O O
allopsoralen
bergapten

OCH 3
O O O
O O O

OCH 3
OCH 3
xantotoxina
isopimpinelina
Figura 17 - Structura unor furanocumarine

Extracia cumarinelor glicozidate se efectueaz cu ap sau alcool diluat. Soluia


extractiv se concentraz pn la reziduu.
Cumarinele nehetozidice pot fi extrase cu eter, cloroform, benzen, alcool sau
NaOH soluie 1N (R) la cald. n acest caz se purific prin precipitare cu HCl (pH-4 , 5) i
dizolvarea precipitatului n eter sau alcool.
Identificarea cumarinelor se poate face prin determinarea fluorescenei n UV prin
reacia Feigl-Anger-Frehden sau prin cuplare cu compui aromatici diazotai.

32
Determinarea fluorescenei n UV.
Prin alcalinizare (pH=9-10) datorit scindrii lactonei, cumarinele genereaz
sruri ale hidroxiacizilor aromatici solubile n ap intens fluorescente n UV.

+ 2 KOH
sau R-COOK
- H 2O COOK
O O OK
cumarin sare a acidului hidroxamic
Figura 18 - Transformarea cumarinei n sare a acidului hidroxamic

Mod de lucru
Soluia extractiv eteric, se aduce la sec pe baia de ap (la ni). Reziduul
rezultat se dizolv n 2-3 ml de ap fierbinte. Dup rcire se aduce cte 1 ml de soluie n
2 eprubete. Una din eprubete servete ca prob martor. n cealalt eprubet se adaug 0,5
ml hidroxid de sodiu 1N (R). Apariia unei puternice fluorescene violet confirm
prezena derivaiillor cumarinici.

1. Reacia Feigl-Anger-Frehden
Hidroxiacizii formeaz cu hidroxilamina n prezena clorurii ferice acizi
hidroxamici colorai n violet.

O O

C NH2-OH C OH H2 O
R OH R N
H
Figura 19 - Reacia Feigl-Anger-Frehden

Mod de lucru
nr-o capsul, la 4-5 mL soluie extractiv metanolic se adaug 4,5 picturi
hidroxilamin clorhidric (R) i 4-5 mL potas alcoolic (R) (pH= 9-10). Se evapor la
sec pe baia de ap (la ni). Se rcete i se aciduleaz cu acid clorhidric soluie 1N (R)
(pH= 3-4). La adugarea a 2-3 picturi de clorur feric (R) se obine o coloraie violet
ceea ce denot prezena derivailor cumarinici n planta luat n studiu.

33
2. Cuplarea cu compuii aromatici diazotai:
Cumarinele se mai pot identifica i prin cuplare cu compuii diazoici aromatici
(clorur de p-nitrobenzen-diazoniu sau clorur de p-sulfobenzen-diazoniu) cnd rezult
compui colorai n rou.
n lucrarea de fa a fost ales ca reactiv de cuplare clorura de p-sulfobenzen-
diazoniu).

Modul de lucru
La 1-2 mL soluie obinut n urma dizolvrii n ap cald a reziduului soluiei
eterice, se adaug 2-3 picturi de clorur de p-sulfobenzen-diazoniu (R) i 0,5 mL
hidroxid de sodiu 1N (R).
Se obine o coloraie roie n cazul reaciei pozitive.

Analiza soluiei extractive alcoolice

Modul de lucru

S-a folosit produsul vegetal epuizat cu eter care s-a adus pe baia de ap pentru
ndeprtarea urmelor de eter. Produsul vegetal a fost extras cu metanol (2 x 100 mL) prin
refluxare timp de jumtate de or (baia electric gradaia 3).
Soluia metanolic reunit se concentreaz la 50 mL prin distilarea solventului i
se imparte n 2 pri. O parte folosete la identificarea principiilor active pe soluia
nehidrolizat (25 mL) iar a doua parte se supune hidrolizei cu 15 mL HCl 10% pe cuibul
electric gradaia 3, timp de 30 minute. Produsul vegetal epuizat cu metanol se pstreaz
pentru extracia ulterioar (schema II).
Reacii efectuate n extractul alcoolic nehidrolizat

Identificarea taninurilor

34
Taninurile sunt substane organice polifenolice (derivai ai 3-hidroxiflavanului,
poliesteri sau glicozide ale acidului galic), cu o mas molecular cuprins ntre 500 i
5000 de daltoni.
n funie de structura chimic i originea lor biosintetic se disting:
- taninuri catcehice;
- taninuri galice;
- taninuri mixte.
Taninurile catechice sunt derivai flavanici, mono- sau polimeri, constituii din
entiti flavan-3-ol legate C-C.
Dup orientarea oxidrilului de la C3 se deosebesc dou serii de compui:
seria 2-R, 3-S (cu OH-ul de la C 3 orientat ) care cuprinde afzelecholul,
catecholul i galocatecholul;
seria 2-R, 3-R (cu OH-ul de al C 3 orientat ) sau epi, incluznd epiafzelecholul,
epicatecholul i epigalocatecholul.
Dintre acetia, catecholul i epigalocatecholul, galocatecholul i
epigalocatecholul sunt uniti structurale de baz ale oligo- i polimerilor, care se
formeaz prin condensarea succesiv a monomerilor. Legtura interflavanic este, n
majoritatea cazurilor, de tip C4-C8 i aproape ntotdeauna trans n raport cu hidroxilul de
la C3 (12).

R
R
HO O
OH HO O
OH
H
R1 H
OH R1
OH OH
OH
R R1 R R1
catechol OH H epicatechol OH H
galocatechol OH OH epigalocatechol OH OH
Figura 20 - Structura chimic a taninurilor catechice

Taninurile galice sunt esteri ai acizilor galic i hexahidroxidifenic de configuraie


(R) (acid elagic, acid luteolic), sau (S) (eugenin, pedunculagin, geraniin), cu oze
(glucoz, hamameloz).

35
OH
COOH
HO COOH
HO OH
COOH
COOH

HO

HO OH
OH
COOH
HO OH
OH HO OH

OH
OH

acid galic acid (R)/hexahidroxidifenic acid (S)-hexahidroxidifenic

OH
HO

HO
HO O OH

O O OH
HO O O
O O
OH
O O
HO
OH O OH
O

OH OH

HO
OH

Pentagaloilglucoza
Figura 21 - Structura galotaninurilor

Taninurile mixte sunt esteri ai acidului galic cu catecholul, epicatecholul,


galocatecholul i epigalocatecholul (galatul de catechol sau de epicatechol i galatul de
galocatechol sau de epigalocatechol). Monomerii flavanici se pot lega i cu acidul cafeic,
cu formare de lactone.
Taninurile se gsesc localizate n toate organele plantei; se acumuleaz n cantiti
foarte mari n scoare (Cinchona sp., Quercus sp., Salix sp., Castanea sp.), organe

36
subterane (Krameria triandra Ruiz et Pav.), lemn (Acacia catechu Willd.), frunze
(Hamamelis virgiana L.), flori (Rosa centifolia L., Rosa galica L.), fructe imature (Sobus
acuparia L., Rhamnus catharthica L.), semine (Cola nitida Schott et Endl., Cola
acuminata Schott et Endl.), formaiuni patologice (Gallae). Sunt dizolvate n sucul
celular (vacuolar), libere sau combinate cu proteine, alcaloizi, mucilagii.
Taninurile sunt substane solide amorfe. Combinaiile cu mas molecular mic
pot cristaliza, fiind incolore. Taninurile se dizolv n ap la cald (mai greu la rece,
formnd soluii coloidale, solubilitatea variind cu gradul de condensare), n alcool,
aceton, acetat de etil; sunt insolubile n eter, cloroform, benzen, eter de petrol, sulfur de
carbon i n ali solveni organici apolari. Fiind fenoli, au caracter reductor (reduc
reactivii Tollens, Fehling, KMnO4, H2O2, etc.) i dau coloraii cu srurile de fer (III):
verde negricioas taninurile catechice, albastr negricioas taninurile galice.
Caracterul acid se datoreaz gruprilor COOH i OH fenolice libere .

Reacia cu clorura feric:


Mod de lucru
Se dilueaz 1ml extract alcoolic cu 2 ml de ap distilat i se adug apoi trei
picturi de clorur feric 1% (R) diluat 1:10. Apariia unei coloraii albastre-nericioase
indic prezena taninurilor galice, iar o coloraie verde atest prezena taninurilor catehice
(13).

Identificarea compuilor reductori

Compuii reductori sunt reprezentai de heterozidele fenolice de tip C6-C3 i C6-C3-C6.

Mod de lucru
Se dilueaz 1 mL extract alcoolic cu 2 mL ap distilat i se adaug 1 mL soluie
Fehling (I + II) (R). Se nclzete la fierbere timp de 30 minute. La fundul eprubetei se
observat apariia unui precipitat rou-crmiziu (oxidul cupros) care indic prezena
compuilor reductori.

Reacii efectuate n extractul alcoolic hidrolizat

37
1) Extractul eteric (40 mL). n acesta se pot identifica urmtoarele grupe de
principii active: antracenozide, cumarine, glicozide sterolice i triterpenice (prin reacii
caracteristice agliconilor obinui n urma hidrolizei).
2) Soluia apoas acid. n acesta fraciune se pot identifica antocianozidele

Identificarea flavonozidelor

Mod de lucru
Se evapor 5 ml extract eteric ntr-o capsul pe baia de ap. Se dizolv apoi
reziduul n 2 mL metanol 50% la cald. Soluia se aduce ntr-o eprubet i se adug pan
de magneziu i 10 picturi acid clorhidric concentrat.
Apariia unei coloraii roii sau portocalii indic prezena agliconilor
flavonozidelor.

Analiza soluiei extractive apoase

Modul de lucru

S-a folosit produsul vegetal rmas de la extracia cu alcool care a fost uscat i apoi
extras cu 50 mL ap, pe baia de ap la 600 C timp de 30 de minute (schema III).
Identificarea poliuronidelor (mucilagii, pectine i gume)

Poliuronidele sunt compui naturali macromoleculari, ozidici, alctuii din


pentoze sau hexoze i acizi uronici. n contact cu apa poliuronidele formeaz soluii
coloidale sau geluri, din care cauz mai sunt numite i hidrocoloizi vegetali sau
polizaharide vegetale.
Poliholozidele sunt amestecuri neomogene care se formeaz prin condensarea
oxidrilului glicozidic al unei oze cu un oxidril alcoolic, mai rar glicozidic, al altei oze sau
al unui acid uronic, n poziiile 1-3, 1-4 sau 1-6, - sau -glicozidic.
n funcie de locul i modul de formare al acestor derivai, ct i de propietile lor
fizico-chimice, poliholozidele mixte (heteroglicanii) pot fii: pectine, mucilagii i gume.
Identificarea pliholozidelor mixte se poate face prin precipitarea mucilagiilor n
alcool concentrat i colorare cu hematoxilin.

38
HO OH HO O

- H2

OH
HO O HO O
OH OH
hematoxilin hematein
Figura 22- Oxidarea hematoxilinei la hematein (violet)

Mod de lucru
ntr-o eprubet ce conine 5 mL etanol s-a turnat n fir subire i sub agitare
continu soluia de mucilag concentrat. Dup un repaus de 10 minute se constat apariia
unui precipitat voluminos. Se adug apoi 2-3 picturi albastru de toluidin (R), i se
filtreaz prin hrtie. Pe filtru se obine un precipitat colorat n albastru. Ali reactivi
pentru colorare sunt: hematoxilina (R), rou de ruteniu (R), tu de China, albastru de
metilen etc. Hematoxilina, substana incolor se extrage din Hematoxylon campechianum
L. (lemnul de bacan), familia Leguminoase transformndu-se n hematein, compus
colorat n rou. Acesta coloreaz mucilagiile n violet.

Identificarea compuilor reductori

La compuii reductori din soluia alcoolic se adaug i ozele.

Mod de lucru
ntr-o eprubet se aduce 1 ml soluie extractiv apoas i se adug 5 picturi
reactiv Fehling (I + II). Se nclzete la fierbere. n cazul reaciei pozitve se constat
apariia unui precipitat rou cramiziu.

Identificarea unor glucide (oze i polioze)


39
Glucidele simple, cunoscute i sub numele de oze simple sau monozaharide, sunt
compui de oxidare a poliolilor alifatici simpli n care gruparea alcoolic primar este
oxidat la aldehid (aldoze) sau gruparea alcoolic secundar, la ceton (cetoze).
Gruparea carbonilic formeaz cu una din grupurile din molecul un semiacetal ciclic
(lactol) prin adiie intramolecular, transformndu-se n hidroxil glicozidic.
Acesta confer ozelor proprieti deosebite: structura furanozic i piranozic,
izomerie (anomerie), mutarotaie, proprieti reductoare, reactivitate. Dup
numrulde atomi de carbon din molecul se cunosc trioze, tetroze, pentoze, hexoze etc.
Datorit carbonilor asimetrici se formeaz izomeri optic activi. n funcie de orientarea
gruprii hidroxilie de la penultimul atom de carbon (la dreapta sau la stnga) rezult oze
aparinnd seriei D sau seriei L.
Ozele frecvent ntlnite n structura compuilor naturali sunt:
aldopentoze: D-xiloz, L-arabinoz;
6 desoxipentoze: 2 dezoxiriboza (intr n constituia ADN);
aldohexoze: D-glucoza, D-alloza, D-guloza, D-galactoza, D-manoza;
cetohexoze: D-fructoza;
6-dezoxihexoze: L-ramnoza, L-fucoza;
6-dezoxihexoze-3-metoxilate: D-digitaloz, L-tevetoz (sunt specifice
heterozidelor cardiotonice);
2,6-dezoxihexoze: D-digitoxoz, dintre care unele sunt 3-metoxilate ca de
exemplu L-oleandroz, D-cimaroz (specifice heterozidelor cardiotonice);
aminoze (aminozaharide), de obicei constituieni ai poliholozidelor bacteriene sau
ai glicoproteinelor animale: D-glucozamina (chitozamina), 2-dezoxi-2-
metilamino--L-glucopiranoza (ntlnit n strucura streptomicinei), L-
glucozamina, desozamina i 3-dimetil-amino-3-dezoxi-D-digitopiranoza (intr n
strucura eritromicinei), neosamina B i C (din neomicina B) .a.

OH CH2OH
HOH2C OH
O
O OH HO
HO O OH OH
HO CH2OH
OH H
OH
OH OH

D-glucopiranoza D-glucopiranoza D-fructofuranoza

40
OH
CH3
O O
OH HO O
OH HO HO
HO OH
OH

HO OH OH

L-arabinofuranoza D-xilopiranoza D-fucoza


OH
CH3 OH
HO O
O
H3C O
OH H3 C
HO HO
OH HO OH
OCH3

D-digioxoza L-ramnoza L-oleandroza


Figura 23 - Structura chimic a unor oze (1)

Ozele sunt substane solide incolore cristalizate, inodore, de obicei cu gust dulce,
uor solubile n ap, metanol, piridin, dioxan mai puin solubile n etanol insolubile n
eter, cloroform i benzen i n ali solveni organici.
Prin reducere, se transform n alcoolii corespunztori, iar prin oxidare, n funcie
de agent, se obine acizi uronici (cnd se oxideaz gruparea alcool primar), acizi aldonici
(oxidarea are loc la gruparea carbonilic) sau acizi zaharici (acizi bibazici, cnd se
oxideaz ambele grupri) n acest ultim caz fiind necesar prezena oxidanilor puternici;
din cetoze se obin acizi cu un numr mai mic de atomi de carbon. Acizii aldonici prin
tratare cu baze organice, la cald, se epimerizeaz. Astfel, acidul D-gulonic se transform
n acid D-manonic.
Acizii uronici sunt uniti structurale ale poliholozidelor mixte (poliuronide,
heteroglicani). Ca i ozele din care provin, prezint izomerie (anomerie), au caracter
reductor, pot forma glicozide i ali derivai ai funciei hidroxil glicozidice, iar datorit
gruprii carboxilice formeaz sruri, esteri, lactame.

41
CHO COOH COOH COOH

H C OH H C OH H C OH H C OH

HO C H HO C H HO C H HO C H

H C OH H C OH H C OH HO C H

H C OH H C OH H C OH H C OH

COOH CH2OH COOH COOH

ac. D-glucuronic ac. D-gluconic ac. zaharic ac. mucic

Figura 24 Structura unor acizi uronici

n mediul slab alcalin se izomerizeaz, iar sub aciunea bazelor puternice,


hexozele se pot scinda n trioze.
n prezena acizilor minerali concentrai se deshidrateaz i formeaz furfural sau
hidroximetil-furfural care ulterior poate fi cuplat cu fenoli forme cetonice (timol,
rezorcinol, orcinol) cnd se obin compui colorai.
Majoritatea hexozelor (D-glucoza, D-manoza, D-fructoza) sunt fermentesceibile,
D-galactoza este greu fermentesceibil, iar pentozele nu sunt fermentesceibile.
La identificarea ozelor se folosesc propietile reductoare ale acestora (reacia
Fehling, Tollens), transformarea lor n furfural sau n hidroximetilfurfural i cuplarea cu
antron sau fenoli forme cetonice, precum i condensarea cu amine aromatice.

O O
+ R1
R CH OH
O CHO R O
HO

R = H rezorcin (form cetonic) produs de condensare


R = CH3 orcin

Figura 25 - Reacia de cuplare a furfuralului sau hidroximetilfurfuralului cu fenoli forme cetonice

Reacia Molish

42
Mod de lucru
Se evapor 2 ml soluie extractiv apoas ntr-o capsul. Reziduul obinut se
trateaz cu 3 picturi acid sulfuric concentrat. Dup 3 minute se adug 3 picturi soluie
alcoolic 1% de timol (R). Apariia unei coloraii roii indic prezena ozelor sau
poliozelor (reacia Molish) (5).
Pentru identificarea amidonului, se trateaz 1 mL soluie extractiv apoas cu 2
picturi reactiv Lugol (R). Apariia unei coloraii albastre atest prezena amidonului.

Identificarea taninurilor

Mod de lucru
Se trateaz 1 mL soluie extractiv apoas cu 2 picturi clorur feric 1% (R)
diluat 1:10. Apariia unei culori albastre indic prezena taninurilor galice, iar apariia
unei coloraii verde nchis confirm prezena taninurilor catehice19.

Rezultate i discuii

n urma efecturii reaciilor de identificare discutate mai sus, s-au obinut


urmtoarele rezultate:

19 Ibidem.
43
44
Schema I Analiza chimic calitativ a soluiei extractive eteric

45
n soluia alcoolic s-au identificat: tannin catehic, compui reductori in fraciunea nehidrolizat (schema II).

Schema II Analiza chimic calitativ a soluiei extractive alcoolice

46
n soluia extractiv apoas s-au identificat: poliuronide, compui reductori, oze i polioze, tannin catehic.

Schema III - Analiza chimic calitativ a soluiei extractive apoase

47
Datele analizei chimice generale sunt centralizate n tabelul 2.
Tablel. 2. Analiza chimic general

Nr. Soluia Reacia practicat Intensitate Principii active identificate


cercetat
1. Eteric Shibata + agliconi flavonici
H2SO4 conc. + carotenoide
Libermann + steroli
Burchardt
FeCl3 + tanin catehic
2. Alcoolic Fehling + compui reducatori
Shibata + flavonozide
Fehling + compui reducatori
3. Apoas Molish + oze i polioze
precipitare n + Poliuronide
alcool

Concluzii

n urma rezultatelor obinute la efectuarea reaciilor de identificare pe extractele eterice


alcoolice i apoase din frunzele speciei Cynara scolimus L. se poate afirma c sunt prezente
urmtoarele grupe de compui naturali (principii active): flavone (agliconi flavonici,
flavonozide), carotenoide, steroli i triterpene, oze, poliholozide i tanin catehic.

II.3. DETERMINAREA CALITII PRODUSELOR VEGETALE


Const n determinarea coninutului de ap, a substanelor volatile (pierdute prin uscare),
a substanelor solubile, a uleiului volatil precum i n dozarea principiilor active.

48
II.3.1. DETERMINRI PLELIMINARE

II.3.1.1. DETERMINAREA PIERDERII PRIN USCARE

Prin procedeele prevzute n monografia Pierdere prin uscare din Farmacopeea


Romn-ediia a-X-a, se stabilete masa compuilor volatili de orice natur din substanele
farmaceutice, produse vegetale sau preparate farmaceutice, pierdut n anumite condiii de
temperatur, presiune i timp, specificate n monografiile respective.

Material i metod
Principiul metodei const n determinarea masei de produs vegetal nainte i dup uscarea la
etuv la 1050 C, pn la pondere uscat. Pierderea nregistrat se raporteaz la 100 g produs
vegetal.
Materialele necesare:
Proba de analizat: Cynarae folium;
foarfeci;
rjni pentru marunirea produsului vegetal;
fiole de cntrire;
spatule;
etuv, exicator;

Modul de lucru

Primul pas n efectuarea acestei determinri a fost aducerea la greutatea constant a


fiolelor de cntrire. Aceast operaie s-a realizat prin uscarea la etuv (1050 C), a fiolelor timp de
trei ore. Dup ce s-au scos fiolele din etuv s-au rcit la exicator timp de 30 de minute. S-au
cntrit din nou la balana analitic, notnd datele obinute apoi s-au inut din nou n etuv la
1050 C, timp de 30 de minute s-au rcit i cntrit. Aceaste operaii s-au repetat (uscare n etuv ,
rcire n exicator, cntrire) pn cnd greutatea a rmas constant.

49
Dup mrunirea produsului vegetal cu ajutorul rjniei electrice s-a cntrit n cele trei
fiole de cntrire cca. 5,0000 g de produs vegetal. Cantitatea de produs vegetal a fost aleas de
aa manier nct coloana de pulvere s nu depeasc 1 cm nlime.
Fiolele de cntrire cu cele trei probe de produs vegetal s-au inut n etuv la 105 0C, timp
de trei ore, dup care s-au rcit n exicator (30 minute) i s-au cntrit la balana analitic.S-au
notat datele obinute.
Operaiile de uscare n etuv i rcire n exicator s-au repetat de mai multe ori pn cnd
s-au obinut valori constante ale masei probelor.

II.3.1.2. DETERMINAREA SUBSTANTELOR SOLUBILE

Material i metod
Prin dozarea substanelor solubile din produsele vegetale se nelege dozarea acelor
substane care se pot extrage, n anumite condiii, cu solveni prevzui n monografia respectiv.
n lucrarea de fa am determinat substanele solubile folosind extracia la rece, iar ca
solvent apa.
Materiale necesare:
Proba de analizat: Cynarae folium;
foarfeci;
rjni pentru marunirea produsului vegetal;
flacoane cu dop rodat;
pahare Erlenmayer;
plnii;
baghete, spatule;
hrtie de filtru;
fiole de cntrire;
produsul vegetal pulverizat;
etuv, exicator;

50
Modul de lucru
S-au cntrit la balana analitic cte 5,0000 g de produs vegetal pulverizat care s-au adus
cu 100 g de ap n trei flacoane cu dop rodat. S-a agitat coninutul flacoanelor de cteva ori i s-a
lsat la macerat timp de 23 de ore. Dup acest timp s-a agitat din nou i s-a filtrat, ndeprtnd
apoi primele poriuni din filtrat.
S-au introdus apoi cte 20 g de filtrat n cele trei fiole de cntrire, n prealabil aduse la
mas constant. S-a evaporat la sicitate pe baia de ap, dup care s-au uscat cele trei fiole cu
reziduu la etuv, la 1050 C, timp de trei ore. S-au rcit la exicator i apoi s-au cntrit.
Cantitatea de substan extractiv s-a raportat la 100 g produs vegetal.

Rezultatele determinrilor preliminare

Rezultatele determinrilor preliminare au fost centralizate n tabelul 3.

Tabel 3. Rezultatele determinrilor preliminare

Determinarea preliminar Cantitate % g/g produs vegetal


Perdere prin uscare 4,7256%-5,0123%
Substane solubile n ap 4,2153%-4,5213%

Concluzie
Produsul cercetat conine n medie 4,7256%-5,0123% compui volatili.
Substanele solubile n ap se ncadreaz n intervalul 4,2153%-4,5213% ceea ce denot
c nu exist n produsul vegetal principii active hidrofile n cantitate mare.

III. DETERMINAREA CONINUTULUI N POLIFENOLI TOTALI PENTRU


PRODUSUL VEGETAL CYNARAE FOLIUM

Soluia de analizat. 1 g de produs vegetal Cynarae folium s-a pulberizat i s-a refluxat
timp de 30 de minute cu 150 de mL ap (soluia 1 - ceai) alcool etilic 50% (v/v) (solu ia 2 -

51
tinctur). Soluiile s-au filtrat printr-un material filtrant (vat) ntr-un balon cotat de 250 mL. S-a
completat la semn prin splarea cu ap a produsului vegetal (soluia A).

ntr-un balon cotat de 25 mL s-a adus 5 mL din soluia A (ambele solu ii), filtrate prin
hrtie de filtru, i s-au completat la semn cu ap (soluia B). ntr-un balon cotat de 25 mL s-a
adus 2 mL din soluia B (ambele soluii) peste care s-a adugat 1 mL reactiv Folin-Cioclteu, 10
mL ap i Na2CO3 290g/L la 25 de mL. S-a format o coloraie albastr. S-a las n repaus 30 de
minute i se citete absorbana (A i A1) la lungimea de und = 760 nm, folosind ca lichid de
compensare apa.

Standard de pirogalol. ntr-un balon cotat de 100 mL s-a adus 50 de mg de pirogalol i s-a
dizolvat n 50 mL de ap. S-a completat apoi la semn cu ap (soluia stoc). ntr-un balon cotat de
100 mL s-a diluat cu ap 5 ml din soluia stoc de pirogalol i s-a completat la semn cu acelai
solvent (soluie pirogalol diluat). ntr-un balon cotat de 25 mL s-au adus 2 mL din soluia de
pirogalol diluat peste care s-a adugat 1 mL reactiv Folin-Cioclteu, 10 mL ap i Na 2CO3
290g/L la 25 de mL. S-a format o coloraie albastr. S-a lsat n repaus 30 de minute i s-a citit
absorbana (A2) la lungimea de und = 760 nm folosind ca lichid de compensare apa.

Tabel. 4. Protocol de lucru

Determinare Soluia Reactiv Folin Ap Carbonat de Absorbana


utilizat Cioclteu sodiu
290g/Roscoe
Polifenoli 2 ml sol. B 1 ml 10 ml la 25 mL A = 0,8892
totali soluia 1
Polifenoli 2 ml sol. B 1 ml 10 ml la 25 mL A1 = 0,9582
totali soluia 2
Standard - 2 ml sol. 1 ml 10 ml la 25 mL A2 = 0,3515
Pirogalol Pirogalol
diluata

Coninutul procentual n polifenoli totali se calculeaz dup urmtoarea formul:

52
62,5 A1 m 2

% polifenoli totali = A2 m1

m1 = masa probei luate n lucru, n grame

m2 = masa de pirogalol, n grame (0,05 g)

Rezultate i discuii

S-au obinut 7,9433 g% polifenoli totali n soluia apoas (ceaiul de anghinare) i 8,5188
% n tinctura de anghinare.

Coninutul n polifenoli totali din ghimbir este mare, comparativ cu alte produse vegetale.
n soluia alcoolic de ghimbir (tinctura de anghinare) am determinat o cantitate mai mare de
polifenoli totali ceea ce nseamn c polifenolii existen i sunt mai bine solubili n alcool etilic
50%.

II.2. PROPUNEREA UNEI SHEME TEHNOLOGICE PENTRU OBINEREA


UNEI TINCTURI CU CYNARAE FOLIUM

Pentru obinerea unei tincturi cu Cynarae folium s-a propus i aplicat urmtorul flux
tehnologic (figura 26).

53
Figur
a 26. Fluxul tehnologic pentru obinerea unei tincturi de Cynarae folium

Pentru purificarea i concentrarea extractului se propune utilizarea tehnicilor


membranare, care se realizeaza la temperatura camerei, evitand astfel pierderea principiilor
active termolabile. Utilajele i aparatura necesare procesului sunt:
- balanta tehnica 6-12 kg;
- sita cu latura interioara a ochiului de 3 mm.
- balanta analitica 500-1000 g;
- filtre cu material filtrant;
Utiliti : energie electrica, apa curenta.

54
Operaiile tehnologice
RECEPTIE - Materia prima se receptioneaza pe loturi, functie de provenient i calitate,
pe baza de buletin de analiza, bon de predare, transfer, restituire din gestiunea de materii prime,
bon de consum in procesul de productie. Receptia calitativa se face prin verificarea urmatorilor
parametrii:
- autenticitatea;
- umiditate;
- continut in corpuri straine organice i minerale;
- continut in impuritati.
Conditiile tehnice de receptie sunt:
Cynarae folium: frunze brunificate sau ptate, cel mult 5%; fragmente de frunz care trec
prin sita I cel mult 3%, prti din alte plante cel mult 0,5%, substante minerale max. 1% 20
(conform farmacopeei Romne), cenu max. 20%, umiditate max. 12% (conform
Farmacopeei Europene21).
CONDITIONARE - se indeparteaza impuritatile (definite conform specificatiei tehnice a
materiei prime), corpurile straine organice i minerale. La sfarsitul operatiei se preleveaza probe
din produsul vrac i se verifica indicii calitativi mentionati in specificatia tehnica a produsului.
Rezultatele se inregistreaza in buletinul de analiza i trebuie sa se incadreze in limitele prevazute.
Deseul nevalorificabil se distruge conform normelor in vigoare.
PULVERIZARE/SITARE Produsul vegetal se introduce in siLemnul de tocare, daca
rezultatele analizei de laborator confirma recuperarea produsului util se face in conditii de
eficienta economica. Deseul nevalorificabil (fragmentele cu dimensiuni mai mici) se distruge
conform normelor in vigoare.
EXTRACTIA PRINCIPIILOR ACTIVE - se realizeaza intr-un extractor din inox sau
sticla, utilizand ca solvent un amestec de apa-alcool (alcool 70% - tincturi). Timpul de extractie
este de 7-14 zile prin macerare la rece. Tictura se agita prin amestecare n fiecare zi a axtractiei si
se pastreaza recipientul la intuneric in timul extractiei.

20 *** - Farmacopeea Romn (ediia X) Editura Medical, Bucureti 2010, p. 334-335.

21 ***Convention on the Elaboration of a European Pharmacopoeia, European Pharmacopoeia, Council of Europe,


Strasbourg, 6th ed, supplement; 2006: 1219-1220.

55
FILTRAREA - Solutia extractiva rezultata se filtreaza pentru indepartarea impuritatilor
solide. Datorita continutului ridicat de particule solide din extract se utilizeaza in general
siLemne de filtre cu placi. Pachetul filtrant este constituit din placi i rame realizate din material
plastic sau din otel inox. Filtrarea se face cu ajutorul panzei filtrante sau cartoanelor speciale
pentru filtrare. Inchiderea ansamblului filtrant este realizata cu piston oleodinamic. Deseul
nevalorificabil se distruge conform normelor in vigoare.
PURIFICAREA I CONCENTRAREA SOLUTIEI EXTRACTIVE - se propune a se
realiza prin metode moderne implicand tehnologiile membranare: microfiltrarea i ultrafiltrarea.
Prin microfiltrare se indeparteaza compusii coloidali, precum i suspensiilor de particule de
dimensiuni cuprinse intre 0,02 i 10 m (virusuri, bacterii, drojdii) asigurandu-se in aceasta etapa
clarificarea i sterilizarea extractului. Prin ultrafiltrare se realizeaza concentrarea extractului prin
retinerea de catre membrana a claselor de compusi cu mase moleculare mai mari decat porii
membranei; prin alegerea membranei adecvate se poate realiza concentrarea extractului in
compusii bioactivi de interes. Pentru aceste operatii tehnologice se poate utiliza o instalatie
automatizata care are in componenta un cartus de microfiltrare i 1-2 cartuse de ultrafiltrare.
Avantajele utilizarii acestor procese membranare sunt: procesarea extractelor la temperatura
mediului ambiant (cca. 20C) evitand denaturarea i distrugerea unor compusi biologic activi
termolabili, fara interventia unor reactivi chimici i un consum de energie foarte scazut.
REGULI DE IGIENA - Spariile de producie, mesele de lucru, vasele (recipientele) i
obiectele utilizate pentru realizarea unei sarje de produs se elibereaza i se curata pentru
eliminarea riscurilor de impurificare, contaminare sau confuzie cu materialele sau materiile
prime necesare realizarii unui alt produs.
PROTECTIA MUNCII - Se respecta regulile de protecia muncii specifice punctelor de
lucru i disciplina de productie.
CONTROLUL INTERFAZIC se propun identificri de principii active i determinri
cantitative:
identificarea polifenilor (reacia cu reactiv Arnow);
identificarea flavonozidelor (Reacia Schibatta);
identificarea taninurilor (reacia cu FeCl3);
determinarea polifenolilor totali Folin Cioclteu;
analiza HPLC a compuilor fenolici.
56
II.3. ANALIZA HPLC A COMPUILOR FENOLICI DIN TINCTURA DIN
FRUNZE DE ANGHINARE

Pentru separarea, identificarea i cuantificarea compuilor fenolici s-a adaptat o metod


HPLC standardizat de determinare a polifenolilor totali, descris de monografia USP 30-
NF2522.
Materiale i metod
Aparatur: HPLC Agilent 1200, cu pomp cuaternar, DAD, termostat, siLemn de
degazare, autosampler.
Condiii de lucru:

coloan cromatografic tip C18, 250 mm 4,6 mm; 5 m (Zorbax XDB sau echivalent);
faz mobil:
- soluia A acid fosforic 0,1%,
- soluia B acetonitril;
eluie n gradient conform tabelului 5.
Tabel 5. Gradient de lucru HPLC

Nr. Timp, Soluia A, Soluia B,


crt. Min. % %
0-13 90 10
13 78 22
13 78 22
14 60 40
17 60 40
17,5 90 10
22 90 10
temperatur: 350C;
debit: 1,5 mL/min;
detecie: UV 310 nm;
volum de injecie: 20 L;
timpul de analiz: 22 minute.
22 *** United States Pharmacopeia and National Formulary (USP 30-NF 25). vol 28 (4), Rockville, MD: United
States Pharmacopeia Convention; 2007, p. 914.

57
Proba de analizat este o tinctur din Cynarae folium i a fost preparat astfel: 1000 g de
produs vegetal (cu umiditatea 7,5896) s-au extras cu 1000 mL etanol 70%, timp de 7 14 zile
prin macerare la rece i la ntuneic. Soluia extractiv obinut s-a filtrat i s-a completat la balon
cotat de 1000 mL, cu etanol 70%.
Substane de referin (soluii n metanol 70%): E-resveratrol = 37 mg/mL, Z resveratrol = 0,22
mg/mL (obinut prin expunerea soluiei de trans resveratrol radiailor UV la =254 nm, timp de 12 ore),
acid cafeic = 0,36 mg/mL, acid clorogenic = 0,37 mg/mL, acid cinamic = 0,58 mg/mL, vanilin = 0,42
mg/mL, acid galic = 0,39 mg/mL, acid ferulic = 0,50mg/mL, Substanele de referin au fost injectate
de 6 ori (20 L).
Timpii de retenie corespunztori substanelor de referin sunt redai n tabelul 6. Pentru
simplificarea determinrilor s-a lucrat cu amestecul acestora.
Tabelul 6. Timpii de retenie ai compuilor fenolici, substane de referin

Nr. crt. Compus fenolic Timp de retenie DS


1 E - resveratrol 14,467 0,017
2 Z - resveratrol 15,751 0,058
3 acid cafeic 4,598 0,036
4 acid clorogenic 3,501 0,015
5 acid cinamic 15,867 0,007
6 vanilin 6,919 0,051
7 acid galic 0,990 0,025
8 acid ferulic 8,565 0,058
9 acid elagic 15,303 0,027
10 acid p-cumaric 7,187 0,019
11 acid 3 -metil galic 2,606 0,008

Deviaia standard s-a obinut n urma prelucrrii statistice a celor 6 injecii (soft SPSS 10).
Identificarea i determinarea cantitativ a principiilor active din soluia de analizat s-a efectuat
prin compararea cromatogramelor amestecului de standarde (fig. 27-32) i a soluiei de analizat.
Reproductibilitatea metodei s-a apreciat prin ptratul coeficienilor de corelare (table 7).

58
15.793
m
22A
5U
0
2000
1750
1500 cisresveratrol
1250
1000 transresveratrol

14.457
750
500
250
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15
Figura 27. Cromatograma HPLC trans resveratrolului dup expunere la UV 17.5 20 m
in

D
AD1A
,S
ig=310,4R
ef=360,100(FE
R
ULIC
15M
CL.D
)
8.578

mA U
1600
1400 acidferulic
1200
1000
800
600
400
200
0
0 2.5 Figura 5 28. Cromatograma
7.5 10 HPLC 1
2.5 15
a acidului ferulic
17.5 20 m
in

59
AUD
AD1A
,S
ig=310,4R
ef=360,100(A
C
IDPC
U
MA
RIC20M
C
L.D
)

7.187
m
35
30
25
20
15
10
5
2

8.310
0..2
1 76
99

0
0 2 4Figura 29.6Cromatograma
8 HPLC10 a acidului
12p cumaric
14 16 m
in

AUD
AD1A
,S
ig=310,4R
ef=360,100(A
C
IDE
LA
GIC20M
C
L.D
)

15.303
m
14
12
10
8
6
4
1.289

2
0
0 2 4 Figura630. Cromatograma
8 10 12 14
HPLC a acidului elagic
16 18m
in

60
2.606
AUD
m AD
1A
,S
ig=310,4R
ef=360,100(M
E
TILG
A
LA
T25.D
)
6
5 m
etilgalatul
4
3
2
1
0 2.2 2.4 2.6 2.8 3
Figura 31. Cromatograma HPLC a acidului 3 metil galic 3.2 m
in

DAD
1A,Sig=310,4R
ef=360,100(AM
ESTECSTAN
DAR
DE2.D
)
6.898

m
A U
700
600
500
14.409
4.578

400
300 15.844
3.475

8.608

200
2.610

100
0
0 2 Figura 4 6 8 10 12 14
32. Cromatograma HPLC a amestecului de standarde
16 m
in

61
Tabel 7. Ptratul coeficientului de corelare al curbelor de calibrare

Nr. Crt. Compus fenolic r2


1 trans resveratrol 0.99965
2 cis resveratrol 0.99729
3 acid clorogenic 0.99999
4 acid cafeic 0.99619
5 acid cinamic 0.99845
6 vanilin 0.99691
7 acid galic 0.99537
8 acid ferulic 0.99863
9 acidul elagic 0.99885
10 acidul p cumaric 0.99798
11 acid 3 - metil galic 0.99563

Rezultate i discuii

Dintre substanele identificate n urma analizei HPLC, au fost cuantificate doar cteva
substane: acid clorogenic, acid cafeic, acid galic, acid cinamic, acid p cumaric (tabel 8, fig. 33).
Tabelul 8. Compuii identificai i concentraiile lor n mg/L tinctura

Acid clorogenic Acid cafeic Acid galic Acid cinamic Acid p cumaric
mg/L mg/L mg/L mg/L mg/L
707,953 7,660 1843,106 102,367 6,676

62
mAUDAD1D
,S
ig=310,16R ef=360,100(A
N
GH IN
AR ETINCTUR
A.D
)

1.070

3.522
1400
1200 a cidgalic
1000 acidclorogenic
800
600
400

15.951
200
acidcinam
ic
4.397

0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 m
in

AUD
m AD
1D
,S
ig=310,16R
ef=360,100(A
N
GHIN
A
RETIN
C
TU
RA
.D
)
60

50
acidcafeic
4.651

40 acidpcum
aric
7.169

30

20
4.5 5 5.5 6 6.5 7 7.5 8 8.5 m
in

63
AUDAD
1D
,S
ig=310,16R
ef=360,100(A
N
GHIN
A
RETIN
CTU
R
A.D
)

15.951
m
175
150
acidcinam
ic
125
100
75
50
25
0
14 Figura 14.533. Cromatogramele
15 1HPLC
5.5 a tincturii
16 din frunzele
16.5 speciei17Cynara scolimus
17.5 L. m
in

64
VI. REZULTATE I DISCUII GENERALE

n urma studiului preliminar efectuat asupra frunzelor speciei Cynara scolimus L. se pot
desprinde urmtoarele aspecte:
examenul macro- i microscopic (n seciune i pulbere) confirm caracterele menionate
n literatura de specialitate.

Prin analiza chimic s-au identificat urmtoarele grupe de compui naturali (principii
active): flavone (agliconi flavonici, flavonozide), carotenoide, poliholozide, compui
reductori, oze, i tanin catehic.

produsul cercetat conine 4,7256%-5,0123% compui volatili i 4,2153%-4,5213%


substane solubile n ap;

Produsul vegetal conine o cantitate apreciabil de polifenoli toatali 7,9433 g% polifenoli


totali n soluia apoas (ceaiul de anghinare) i 8,5188 % n tinctura de anghinare.
Prin analiz HPLC a tincturii s-au cuantificat urmtoarele principii active (mg/L): acid
galic 1843,106, acid cinamic 102,367, acid cafeic 7,660, acid p cumaric 6,676, acid
clorogenic 707,953;

65
III. CONCLUZII

n urma studiului efectuat asupra frunzelor speciei Cynara scolimus L. se pot desprinde
urmtoarele aspecte:
Analiza farmacognostic prin examenul macro i microscopic confirm identitatea
speciei.
analiza chimic global a evideniat prezena urmtoarele grupe de compui naturali
(principii active): flavone (agliconi flavonici, flavonozide), carotenoide, poliholozide,
compui reductori, oze, i tanin catehic.

n lucrarea de fa s-a propus o schema tehnologic industrial de obinere a unei tincturi;


S-a obinut o tinctur din Cynarae folium;
Prin analiz HPLC a tincturii s-au cuantificat urmtoarele principii active (mg/L): acid
galic 1843,106, acid cinamic 102,367, acid cafeic 7,660, acid p cumaric 6,676, acid
clorogenic 707,953;
S-a standardizat tinctura n urmtoarele principii active: acid galic, acid cafeic, acid
clorogenic, acid p cumaric n cantitate de (mg/L): acid galic 255,505, acid cinamic
214,966, acid cafeic 11,096, acid p cumaric 4,656, acid clorogenic 16,090.
Tinctura obinut de noi, standardizat n principii active poate fi folosit n terapie
pentru aciunile: antioxidant prin captarea i degradarea radicalilor liberi, coleretic-
colagog, hepatoprotectoare, hipolipemiant, febrifug, tonic amar, bacteriostatic,
antifungic, diuretic.
ntrebuinrile tincturii de anghinare for fi urmtoarele: afeciuni hepato-biliare
(colecistite, infecii biliare, icter, ciroz hepatica, carcinom hepatic), anorexie, alergii n
special pentru cele pe fond hepatic, constipaie, hiperlipidemii, hipercolesterolemii,
ateroscleroz, obezitate, afeciuni renale (insuficien renal, pielonefrite, infecii
urinare), aterosleroz, reumatism.
Modul de administrare al tincturii propus de noi va fi urmtorul:
INTERN

66
Aduli i tineri peste 15 ani: 1 linguri de tinctur diluat n 100 mL de ap (jumtate de
pahar), administrat, de 3-4 ori pe zi, cu jumtate de or nainte de mas.
Copii 7-14 ani: cte 10-30 de picturi diluate n 100 mL de ap (jumtate de pahar), de
trei ori pe zi, cu jumtate de or nainte de mas.
Se propune urmtorul prospect pentru tinctura obinut de noi:

67
Tinctur de ANGHINARE

Extract hidroalcoolic 100% natural din Cynare folium Frunze de anginare din cultur proprie.

Tinctura de Anhinare este o soluie hidroalcoolic obinut prin macerare la rece din frunzele
speciei Cynara scolymus L. din cultur proprie. Extractul hidoalcoolic este standardizat n
urmtoarele principii active (mg/L): acid galic 1843,106, acid cinamic 102,367, acid cafeic
7,660, acid p cumaric 6,676, acid clorogenic 707,953.

INGREDIENTE: MOD DE ADMINISTRARE:

Ap distilat; alcool etilic (70%); Cynarae folium Aduli i tineri peste 15 ani: 1 linguri de tinctur
(Frunze de anghinare Cynara scolymus L. (g/g). diluat n 100 mL de ap (jumtate de pahar),
Raport plant/alcool etilic (70%) 1:1. administrat, de 3-4 ori pe zi, cu jumtate de or
nainte de mas.
Produsul nu conine conservani sau colorani
artificiali. Copii 7-14 ani: cte 10-30 de picturi diluate n 100
mL de ap (jumtate de pahar), de trei ori pe zi, cu
jumtate de or nainte de mas.
ACIUNI:

PRECAUII:
Antioxidant prin captarea i degradarea radicalilor
liberi, coleretic-colagog, hepatoprotectoare,
Se administreaz cu pruden la persoanele cu
hipolipemiant, febrifug, tonic amar,
gastrit hiperacid sau ulcer gastric i duodenal (din
bacteriostatic, antifungic, diuretic.
cauza principiilor amare i a alcoolului care pot
crete aciditatea gastric).
NTREBUINRI: afeciuni hepato-biliare
(colecistite, infecii biliare, icter), anorexie, alergii n
ATENIONRI:
special pentru cele pe fond hepatic, constipaie,
hiperlipidemii, hipercolesterolemii, ateroscleroz,
A nu se lsa la ndemna copiilor mici. A se citi
obezitate, afeciuni renale (insuficien renal,
prospectul nainte de ntrebuinare. A se pstra
pielonefrite, infecii urinare), aterosleroz,
flaconul nchis, ferit de lumin, umiditate i cldur.
reumatism.
A nu se depi doza zilnic recomandat.
CONTRAINDICAII: Din cauza coninutului n
AMBALAJ:
alcool nu se administreaz n: hepatite virale, toxice
sau metabolice, steatoz hepatic, ciroz hepatic,
Flacon de sticl de 50 de mL.
sarcin i alptare, alergie la plante din familia
Asteraceae, tratamente care restricioneaz consumul
de alcool.

68
BIBLIOGRAFIE

1 - *** Farmacopeea Romn (ediia X) Editura Medical, Bucureti 2000.


2 *** United States Pharmacopeia and National Formulary (USP 30-NF 25). vol 28 (4),
Rockville, MD: United States Pharmacopeia Convention; 2007.
3 ***Convention on the Elaboration of a European Pharmacopoeia, European
Pharmacopoeia, Council of Europe, Strasbourg, 6th ed, supplement; 2006.
4 ADZET, TOMS, JORGE CAMARASA, AND JUAN CARLOS LAGUNA.
"Hepatoprotective activity of polyphenolic compounds from Cynara scolymus against
CCl4 toxicity in isolated rat hepatocytes." Journal of Natural products 50.4 (1987): 612-
617.
5 CIULEI I., GRIGORESCU E., STNESCU U. ntreaga Plante medicinale.
Fitochimie i fitoterapie Editura Medical, Bucureti 1993, vol. II.
6 CIULEI I., ISTUDOR V., PALADE M., ALBULESCU D., GRD C. E. Analiza
farmacognostic i fitochimic a produselor vegetale Tehnoplast Company, Bucureti
1995.
7 FAHIMA ABDELLATIF1, HADJIRA BOUDJELLA, ABDELGHANI ZITOUNI,
AICHA HASSANI, CHEMICAL COMPOSITION AND ANTIMICROBIAL ACTIVITY
OF THE ULEI VOLATIL FROM LEAVES OF ALGERIAN CYNARA SCOLIMUS L.,
EXCLI Journal 2014;13:772-781 ISSN 1611-2156 , Received: June 28, 2014, accepted:
July 09, 2014, published: July 17, 2014, p. 772-781.
8 GEBHARDT, ROLF. "Inhibition of cholesterol biosynthesis in primary cultured rat
hepatocytes by artichoke (Cynara scolymus L.) extracts." Journal of Pharmacology and
Experimental Therapeutics 286.3 (1998): 1122-1128.
9 http://sun.ars-grin.gov:8080/npgspub/xsql/duke/plantdisp.xsql?taxon=344
10 ISTUDOR VIORICA, Farmacognozie, Fitochimie, Fitoterapie, vol. I, Editura medical,
Bucureti, 1998.
11 JIMNEZ-ESCRIG, ANTONIO, et al. "In vitro antioxidant activities of edible artichoke
(Cynara scolymus L.) and effect on biomarkers of antioxidants in rats." Journal of
agricultural and food chemistry 51.18 (2003): 5540-5545.
12 LI H.B., WONG C.C., CHENG K. W., CHEN F., Antioxidant properties in vitro and
total phenolic contents in methanol extracts from medicinal Plants, LWT 41 (2008), p.
388.
13 LLORACH, RAFAEL, et al. "Artichoke (Cynara scolymus L.) byproducts as a potential
source of health-promoting antioxidant phenolics." Journal of Agricultural and Food
Chemistry 50.12 (2002): 3458-3464.
14 SVULESCU TR. I COLABORATORI - Flora Republicii Socialiste Romnia
Editura Academiei 1950, vol. XII (pag. 613 619, 631, 632, 637).
15 ZHU, XIANFENG, HONGXUN ZHANG, AND RAYMOND LO. "Phenolic
compounds from the leaf extract of artichoke (Cynara scolymus L.) and their
antimicrobial activities." Journal of agricultural and food chemistry 52.24 (2004): 7272-
7278.