Curs 9

Industria medicamentelor i biotehnologii

farmaceutice

ASIGURAREA CALITII
MEDICAMENTELOR
VALIDAREA PROCESELOR
TEHNOLOGICE

BIOTEHNOLOGICE. ROLUL CERCETRII

FUNDAMENTALE N BIOTEHNOLOGIE

Cunoaterea tiinific i strategia de

dezvoltare economic actual se bazeaz
pe o nou abordare a fenomenelor, acestea
conducnd la o adevrat revoluie
biotehnologic. Se apreciaz c n viitor cea
mai mare parte a industriei se va baza pe
procedee
de
fermentaie,
inginerie
biochimic, biologie molecular, aceasta din
urm
imprimnd
un
salt
tehnologic
corespunztor

Ingineria genetic este considerat a fi

tehnica ideal capabil s amelioreze
cantitativ i calitativ capacitatea de
biosintez a celulelor de microorganisme,
animale sau vegetale, n scopul obinerii
unor produse utile.

Natura interdisciplinar a biotehnologiei

este evident dac se ine seama de
etapele unui. proces biotehnologic complet.
Dac se ia ca exemplu obinerea unui
produs nou ADN-recombinant, cum ar fi
insulina,
hormonul
de
cretere
sau
interferonul, atunci, de la idee pn la
obinerea unui produs comercial, se parcurg
mai multe faze care implic cunotine
aparinnd unor domenii tiinifice foarte
diferite.

Treptele unui proces biotehnologic complet de obinere a noi produse aplicam

tehnica ADN-recombinant

1 - substane chimice; 2 - esut animal; 3 - cromozom animal; 4 - gen tiat dini ui

cromozom; 5 - microorganism, ca de exemplu E. coli; 6 - plasmid; 7 - plasmid secionata
8 - plasmid recombinant; 9 - introducere n microorganism; 10 - multiplicarea plasmidei
expresia genei; 11 - diviziune celular; 12 - cultivare n laborator; 13 - bioreactor din
laborator; 14 - bioreactor pilot; 15 - operare la scar industrial; 16 - recuperarea
produsului;17 - condiionare i vnzare.

Prima treapt de dezvoltare a bioprocesului se refer la

manipularea genetic a organismului gazd; n acest caz, o
gen din ADN-ul animal este clonat ntr-o celul de
Escherichia coli. Aceste operaii aparinnd domeniului
ingineriei genetice sunt realizate n laborator de ctre
oameni de tiin instruii n domeniu biologiei moleculare
i biochimiei. Instrumentele utilizate n aceast faz
constau n plci Petri, micropipete, microcentrifuge, enzime
de restricie n cantiti foarte mici de ordinul nano- ori
microgramelor), goluri de electroforez pentru separarea
identificarea ADN-ului. Parametrii cei mai importani n
acest stadiu al cercetrii fundamentale sunt: stabilitatea
tulpinii recombinant obinute i nivelul de expresie al
produsului dorit.

Dup clonare, caracteristicile de cretere i producie

ale celulelor trebuie msurate n funcie de condiiile
de cultivare. Este necesar s se aplice tehnicile de
cultivare obinuite n microbiologic n vederea stabilirii
parametrilor optimi: compoziia mediului, pH,
temperatur, concentraie de oxigen dizolvat, astfel
nct productivitatea n produsul urmrit s fie
maxim.
Se
pornete
prin
cultivarea
microorganismului la scara mic, n flacoane agitate
de 250 ml pn la un litru capacitate. Performanele
organismului sunt descrise prin calcularea ratei de
cretere, productivitatea specific, randamentul n
produs finit.

Dup cunoaterea condiiilor de cultivare n

laborator se pornete procesul de ridicare la
scar pilot i industrial. Prima treapt
poate fi un bioreactor de 1; 2 sau 5 1
echipat cu instrumente de msur i control
al temperaturii, pH-ului, concentraiei
oxigenului dizolvat, vitezei de agitare.
Culturile pot fi monitorizate mai bine n
bioreactor dect n flacoane agitate.

Se pot culege mult mai multe informaii

referitoare la necesarul de oxigen al
microorganismului sau la caracteristicile de
spumare ale mediului sau ali parametri. De
asemenea, pot fi identificate limitrile impuse
de tipul bioreactorului. De exemplu, dac
acesta nu poate asigura necesarul de oxigen,
celulele sunt nfometate. In mod similar, dac
agitarea mediului de cultur nu este adecvat,
aceasta poate conduce la spargerea celulelor
i devierea procesului de cultivare.

n bioreactor se stabilesc condiiile pentru o

anumit activitate a celulelor. In aceast faz
se calculeaz diferii parametrii cum ar fi:
coeficienii de transfer de mas, timpul de
agitare, viteza de dizolvare a oxigenului,
puterea de agitare i muli alii. Aici se decide
dac cultura de celule poate fi operat cel
mai bine n sistem batch, semicontinuu sau
continuu. De asemenea, pot fi ncercate
diferite tipuri de bioreactor. Se realizeaz, de
asemenea, un calcul economic de fezabilitate.

Urmtoarea treapt de ridicare la scar (notat

cu 14 n fig. 1.1) este aceea de bioreactor pilot. n
aceast faz se implic specialitii instruii n
ingineria bioproceselor i n ridicarea la scar
industrial a acestora. Acum se construiesc
bioreactoare de 100-1000 1 dup specificaiile
prototipului de laborator. Scopul fazei pilot este
acela de a examina rspunsul celulelor cultivate
la o scar mai mare. n aceast treapt de
operare, rezultatele pot fi mai bune sau mai
sczute fa de cele obinute n bioreactorullaborator.

n funcie de aceste rezultate se hotrte

dac se trece la producia industrial sau nu
(treapta 15). Aceast parte a procesului
tehnologic aparine n ntregime ingineriei
bioproceselor. Acum se proiecteaz att
bioreactorul industrial, ct i facilitile
auxiliare: echipamente de sterilizare aer i
mediu, generator de abur, utilaje necesare
preparrii mediilor de cultur, sistem de ap
de rcire, aparatur de automatizare i
control.

O importan deosebit acord faptului c

instalaia trebuie s asigure condiii aseptice
pe ntreg fluxul l producie. O parte
important a unui proces biotehnologic o
constituie faza de recuperare a produsului din
mediul de producie i anume izolarea i
purificarea acestuia pn la produsul finit.
Aceast faz este adesea foarte dificila
pentru produsele ADN-recombinate, astfel
nct costurile reprezint 80-90% din costul
total al bioprocesului.

. Procedeul aplicat pentru izolare i

purificare depinde i de natura produsului i
cuprinde metode fizice, chimice, biologice.
Multe metode ncercate n laborator i care
au dat rezultate bune nu pot fi aplicate la
scar
industrial.
n
aceast
faz,
biochimitii, inginerii chimiti, tehnologii au
contribuie important n recuperarea i
purificarea substanei active.

Procedeele
elaborate
includ:
filtrri,
centrifugri pentru separarea celulelor de
lichid, metode mecanice de distrugere a
membranei celulare, dac produsul este
intracelular; extracii cu solveni, metode
cromatografice, separri prin membrane,
cristalizri i uscri. Toate aceste procedee
sunt testate mai nti la scara mic i apoi
la scar pilot i industrial.

Dup ce produsul a fost purificat pn la

standardele
cerute
de
normele
internaionale, acesta poate fi ambalat i
vndut (treapta 17). Pentru produsele
farmaceutice noi este necesar i testarea
eficacitii acestora, mai nti pe animale i
apoi pe oameni. Pentru produsele de uz
alimentar sunt cerute alte teste specifice.

Pentru toate produsele obinute pe cale

biotehnologic
se
cer
avize
oficiale
conforme cu standardele existente pentru
fiecare tip de produs. Din acest exemplu se
poate vedea c ntr-un bioproces sunt
implicate multe discipline diferite, att
tehnice ct i fundamentale. Specialitii din
domeniul biotehnologiei se confrunt n
mod constant cu probleme aparinnd
domeniilor: biologie, chimic, fizic, inginerie
i medicin.

Preparatele enzimelor

Fermentii sunt o grupa specifica de

proteine,ce intra in componenta celulelor si
tesuturilor organismelor animaliere si au
rolul de catalizatori biologici.Ei utilizeaza
reactiile biochimice,care in lipsa lor s-ar fi
petrecut cu o viteza foarte mica.

Dintre propietatile cele mai caracteristice

ale fermentilor se deosebesc
termolabilitatea,fidelitatea catre schimbul
mediului reactiv si o actiune specifica
exprimata esential.La incalzirea de circa
50C actiunea fermentilor scade simtitor ,iar
la 80C ei de obicei pierd definitiv
proprietatile lor de catalizatori.Gradul
inactivitatii fermentului depinde si de durata
actiunii termice.

Pentru majoritatea fermentilor,separati din

celulele si tesuturile animalelor temperatura
optima
este
de
37-40C.Activitatea
fermentilor scade brusc in dependenta de
pH-ul mediului.Pentru fiecare ferment exista
o marime optima a mediului pH.Fiecare
ferment,de regula,actioneaza la un anumit
substrat sau tip de legatura chimica in
molecula.