MICROBIOLOGIE APLICAT

Cunoaterea particularitilor microorganismelor permite dezvoltarea unor aplicaii n

diferite domenii ale agriculturii, industriei alimentare, industriei farmaceutice, industriei
chimice, a pielriei, a proteciei mediului .a.m.d. Trebuie remarcat faptul c biotehnologia a
fost mult vreme identificat cu microbiologia industrial, incluznd doar aspectele legate de
cultivarea microorganismelor, conservarea, ameliorarea prin metode convenionale (mutaie i
selecie a mutantelor de interes) i utilizarea lor practic pentru obinerea unor produse
specifice. Ulterior, domeniul biotehnologiei s-a extins, incluznd i plantele, animalele,
virusurile i culturile celulare precum i tehnologia ADN recombinant aplicat n scopuri
industriale. In tabelul 1 sunt redate o parte dintre principalele microorganisme utilizate n
biotehnologii din diferite domenii.

Tabelul 1. Principalele microorganisme cu importan biotehnologic i produii lor (dup Hunter-
Cevera i Belt, 1996)
Domeniul de
aplicare
Organismul Tipul Produsul
Industria
alimentar i a
buturilor
Saccharomyces cerevisiae Drojdie Produse de panificaie, vin, bere, sake
S.carlsbergensis Drojdie Bere slab
S.rouxii Drojdie Sos de soia
Candida milleri Drojdie Pine franuzeasc din aluat acrior (Sour bread)
Lactobacillus sanfrancisco Bacterie Pine franuzeasc din aluat acrior (Sour bread)
Streptococcus thermophilus Bacterie Iaurt
Lb.bulgaricus Bacterie Iaurt
Propionibacterium
shermanii
Bacterie Brnz elveian
Gluconobacter suboxidans Bacterie Oet
Penicillium roquefortii
Fung
filamentos
Brnz tip Roquefort
P.camembertii
Fung
filamentos
Brnz tip Camembert i Brie
Aspergillus oryzae
Fung
filamentos
Sake
Rhizopus
Fung
filamentos
Tempeh
Mucor
Fung
filamentos
Sufu (cheag microbian)
Monascus purpurea
Fung
filamentos
Ang-kak (orez rou)
Industria chimic
S.cerevisiae Drojdie Etanol (din glucoz)
Kluyveromyces fragilis Drojdie Etanol (din glucoz)
Clostridium acetobutylicum Bacterie Aceton i butanol
Xanthomonas campestris Bacterie Polizaharide
Aspergillus niger
Fung
filamentos
Acid citric
Aminoacizi i Corynebacterium Bacterie L-lizin; acid 5inozinic; acid 5 guanilic
nucleotide
aromatizante
glutamicum
Proteine
monocelulare
(single-cell
protein)
Candida utilis Drojdie
Proteine microbiene prin cultivare de deeuri din
industria hrtiei
S.lypolitica Drojdie Proteine microbiene prin cultivare pe alcani
Methylophilus
methylotrophus
Bacterie
Proteine microbiene prin cultivare pe metan sau
metanol
Vitamine
Eremothecium asbyi Drojdie Riboflavin
Pseudomonas denitrificans Bacterie Vitamina B12
Propionibacterium Bacterie Vitamina B12
Enzime
Aspergillus oryzae
Fung
filamentos
Amilaze
A.niger
Fung
filamentos
Glucoamilaze
Trichoderma reesii
Fung
filamentos
Celulaz
S.cerevisiae Drojdie Invertaz
K.fragilis Drojdie Lactaz
S.lipolytica Drojdie Lipaz
Bacillus Bacterie Proteaze
Aspergillus
Fung
filamentos
Pectinaze i proteaze
Endothia parasitica
Fung
filamentos
Cheag microbian
Polizaharide
Leuconostoc mesenteroides Bacterie Dextran
X.campestris Bacterie Gum xantanic
Carotenoizi
Blakeslea trispora
Fung
filamentos
Beta-caroten
Phaffia rhodozyma Drojdie Astaxantin
Industria
farmaceutic
Penicillium chrysogenum
Fung
filamentos
Peniciline
Cephalosporium
acremonium
Fung
filamentos
Cefalosporine
Streptomyces sp. Bacterie
Amfotericin B, kanamicin, neomicin,
streptomicine, tetracicline etc
B.brevis Bacterie Gramicidin S
B.subtilis Bacterie Bacitracin
B.polymyxa Bacterie Polimixina B
Rhizopus nigricans
Fung
filamentos
Transformarea steroizilor
Arthrobacter simplex Bacterie Transformarea steroizilor
Mycobacterium Bacterie Transformarea steroizilor
Escherichia coli (tulpini
obinute cu ajutorul
tehnologiei ADN
recombinant)
Bacterie
Insulin, hormonul uman de cretere, somatostatin,
interferon
Bacterii
entomopatogene
B.thuringiensis Bacterie Bioinsecticide
B.popilliae Bacterie bioinsecticide

Odat ce un microorganism a fost selectat, fie prin metode clasice fie prin folosirea
tehnicilor moleculare de modificare i screening, este necesar cultivarea sa n condiii care

s asigure exprimarea caracteristicilor specifice, utile din punct de vedere practic. In acest fel,
folosirea unui microorganism n biotehnologia modern se bazeaz pe principiile clasice ale
culturilor microbiene, cunoscute i elaborate de mult vreme.
In cadrul biotehnologiei este foarte mult utilizat termenul de fermentaie, acesta avnd
mai multe semnificaii pentru specialiti i nespecialiti:
se refer la orice proces ce implic cultivarea unui microorganism, n condiii de
aerobioz sau de anaerobioz;
orice proces microbiologic ce se realizeaz n absena oxigenului;
contaminarea alimentelor;
producerea buturilor alcoolice;
utilizarea unui substrat organic ca donor sau acceptor de electroni;
utilizarea unui substrat organic ca reductor i a aceluiai substrat parial degradat
ca oxidant (acceptor de electroni);
creterea dependent de nivelul fosforilrii substratului (Prescott i col., 1996).
Pentru aplicaiile industriale, microorganismele pot fi cultivate n tuburi, n baloane de
capacitate mic sub agitare sau n instalaii de mare capacitate (de la 3-4l pn la 100.000 l),
n funcie de scopurile urmrite. Instalaiile industriale de mare capacitate (fig.8.1) necesit
investiii nsemnate i operatori bine instruii. De asemenea, toate etapele de lucru, ncepnd
cu creterea microorganismelor i pn la obinerea i purificarea produsului final presupun
condiii aseptice, strict controlate.
In prezent exist mai multe sisteme de cultivare a micro-organismelor, n
fermentatoare de diferite tipuri, n funcie de microorganismul de interes. De obicei,
instalaiile de cultivare a microorganismelor sunt nsoite de uniti de dializ, care asigur
att ndeprtarea compuilor toxici eliminai n cursul procesului de fermentaie ct i a
produilor finali i care permit ca noi cantiti de mediu proaspt s fie introduse n instalaie
pentru a obine culturi continue.
Alegerea mediului de cultur pentru cultivarea microorganismelor reprezint o etap
cheie deoarece poate influena aspectele economice ale procesului de producie; de obicei se
apeleaz la ingrediente ieftine care s constituie sursa de carbon, azot i fosfor (tabelul 2). De
cele mai multe ori, drept surse complexe de carbon, azot i fosfor sunt utilizate hidrolizatele
vegetale, ca i unele subproduse rezultate n diferite industrii (melas, zeruri etc).


Tabelul 2. Componente majore ale mediilor de cultur folosite la nivel industrial (dup
Prescott i colab., 1996).
Sursa Materia prim
Carbon i energie Melas, zer, grune, deeuri agricole (tiulei)
Azot
Extract de porumb (corn-steep liquor), fin de soia, sruri de
amoniu, amoniac, nitrai, produi solubili provenii de la distilerii
Vitamine Extracte totale vegetale sau diverse produse de origine animal
Fier Substane anorganice
Soluii tampon Carbonai sau fosfai
Ageni
antispumare
Alcooli, silicon, esteri naturali, uleiuri vegetale

Concentraia i echilibrul ntre elementele minerale i factorii de cretere constituie un
alt punct critic al cultivrii microorganismelor la nivel industrial. De exemplu, biotina i
tiamina, influennd reaciile de biosintez, controleaz acumularea produsului de interes n
numeroase fermentaii. Mediul de cultur trebuie astfel stabilit nct sursele nutritive, dup un
anumit interval de timp, s devin factori limitativi ai creterii, procesul fiind asociat deseori
cu producerea unor metabolii de interes.
Nivelul oxigenului limiteaz deseori procesele fermentative aerobe sau influeneaz
modul de cretere, aa cum se ntmpl n cazul actinomicetelor i al fungilor filamentoi.
In privina seleciei microorganismelor utile pentru procesele biotehnologice, acestea
provin de obicei din medii naturale (probe de sol, de ap, fructe i produse alimentare
contaminate etc). Odat selectate, tulpinile interesante pentru un anumit scop pot fi supuse
unor procese de ameliorare, fie prin metode clasice (mutageneza chimic sau cu radiaii
ultraviolete; fuziunea protoplatilor) fie prin aplicarea tehnicilor moleculare (tehnologia ADN
recombinant). De exemplu, tulpina de Penicillium chrysogenum izolat n 1943 a fost supus
unor tratamente succesive de mutaie i selecie astfel c, n prezent, culturile microbiene
derivate de la tulpina original produc de 55 ori mai mult penicilin dect aceasta. De
asemenea, fuziunea protoplatilor (celule lipsite de perete celular obinute prin tratamentul cu
diferii ageni de degradare a peretelui celular) mediat de polietilenglicol (PEG) poate
asigura obinerea de tulpini recombinate cu proprieti mbuntite sau modificate, avantajul
principal fiind acela c pot fi depite barierele normale de specie. In ultimii ani, aplicarea
tehnologiei ADN recombinant a permis obinerea unor tulpini modificate genetic capabile de

a sintetiza compui pe care, n mod normal, nu i-ar putem produce. Tulpinile microbiene de
interes selectate (naturale sau ameliorate) sunt conservate prin metode specifice (liofilizare,
transfer periodic, conservare sub ulei mineral, uscare etc).

1. Produi majori ai microbiologiei industriale

Metaboliii primari sunt compui legai de sinteza componentelor celulare ce se
realizeaz pe parcursul fazei de cretere (trofofaza). Acest grup de metabolii include
aminoacizii, nucleotidele i anumii produi finali de metabolism de tipul etanolului i acizilor
organici. In plus, n timpul trofofazei mai sunt sintetizate i diferite enzime, mai ales
exoenzime care prezint importan practic deosebit.
Metaboliii secundari se acumuleaz n timpul fazei ce urmeaz etapei de cretere activ,
numit idiofaz. Compuii sintetizai n aceast faz nu au legtur direct cu materialele celulare
eseniale i cu creterea normal. De exemplu, majoritatea antibioticelor i a micotoxinelor sunt
produse pe parcursul acestei faze.
Cultivate n condiii ideale, fr limitri ale mediului, microorganismele tind s
formeze cantiti mari de biomas i mai puin s acumuleze anumii compui. Specialitii au
elaborat o serie de metode de pclire a microorganismelor de interes astfel nct acestea s
produc n exces compusul util, de obicei prin inducerea de mutaii.

1.1. Antibioticele

Reprezint un grup special de metabolii secundari, sintetizai n cea mai mare parte de
bacteriile din genul Streptomyces dar i de specii de fungi filamentoi (3). Majoritatea
antibioticelor cu semnificaie n practica medical includ antibioticele -lactamice de tipul
penicilinei i cefalosporinei, aminoglicozidele i tetraciclinele.
Penicilina este primul antibiotic descoperit de Fleming n 1929; ea este sintetizat de
tulpini de Penicillium chrysogenum, iar producerea sa la nivel industrial este un foarte bun
exemplu de fermentaie n care ajustarea compoziiei mediului asigur obinerea unor cantiti
maxime de antibiotic.


Tabelul 3. Principalele antibiotice sintetizate de microorganisme

Grupul de
microorganism
e productoare
Antibioticul Specia productoare Spectru de aciune
Actinomicete
Amfotericina B
Streptomyces nodosus
Fungi
Carbomicina S.halstedii Bacterii Gram pozitive
Clortetraciclina S.aureofaciens Spectru larg
Cloramfenicolul S.venezuelae Spectru larg
Cicloheximida
S.griseus
Drojdii patogene
Eritromicina S.erythaeus
Majoritatea bacteriilor
Gram pozitive
Kanamicina S.kanamyceticus Bacterii Gram pozitive
Oleandomicina S.antibioticus Stafilococi
Oxitetraciclina S.rimosus Spectru larg
Neomicina B S.fradiae Spectru larg
Novobiocina S.niveus Bacterii Gram pozitive
Nistatin S.noursei Fungi
Streptomicina S.griseus
Bacterii Gram negative,
Mycobacterium
tuberculosis
Alte bacterii
Polimixina B Bacillus polymyxa Bacterii Gram negative
Bacitracina B.licheniformis Bacterii Gram pozitive
Fungi
Cefalosporina
Cephalosporium
acremoniium
Spectru larg
Fumigilina Aspergillus fumigatus Amoebe
Griseofulvina
Penicillium griseofulvum
Fungi
Penicilina P.chrysogenum Bacterii Gram pozitive

Cultivarea fungului n mediu bogat n glucoz stimuleaz creterea vegetativ dar nu i
producerea de penicilin; n schimb, utilizarea drept surs de carbon a lactozei i limitarea
concentraiei surse de azot determin o acumulare nsemnat a antibioticului dup ce procesul
de cretere a fost stopat. Atunci cnd se dorete sinteza unui anumit tip de penicilin, la
mediul de fermentaie sunt adugai precursorii corespunztori. Fermentaia este complet
dup 6-7 zile de cultivare dup care biomasa micelial este separat de mediul de cultur,
acesta din urm fiind apoi prelucrat prin adsorbie, precipitare i cristalizare pentru a obine
produsul de interes. Materialul brut obinut poate fi apoi supus unor tratamente chimice n
urma crora au loc anumite transformri ale penicilinei iniiale, cu formarea penicilinelor
semisintetice.

Streptomicina este un metabolit secundar sintetizat de tulpini de S.griseus n condiii
de mediu strict controlate. Utilizarea finii de soia att ca surs de carbon ct i de azot,
asigur producerea unor cantiti mari de antibiotic n timpul fazei staionare de cretere. De
asemenea, trebuie remarcat faptul c, n prezent, exist adevrate programe de identificare a
noi tulpini de streptomicete sau de fungi productoare de antibiotice sau de alte substane
biologic active, cum ar fi cele cu aciune antitumoral.

1.2. Aminoacizii
Aminoacizii, aa cum sunt lizina i acidul glutamic, sunt utilizai n industria
alimentar drept suplimente nutriionale n producerea pinii sau ca stimulatori ai aromelor
(aa cum este glutamatul de sodiu). Biosinteza aminoacizilor este realizat, n scopuri
industriale de mutante reglatorii la care, calea metabolic de biosintez a anumitor compui
este blocat ntr-o anumit etap, corespunztoare celei ce asigur producerea aminoacidului
de interes. De exemplu, lizina este produs de tulpini mutante de Corynebacterium
glutamicum care prezint blocat calea de biosintez a homoserinei n etapa ce permite
acumularea de lizin. In acest fel, pe parcursul unei fermentaii ce dureaz trei zile se obin
44g lizin/l cultur.

1.3. Acizii organici
Producerea acestor substane de ctre microorganisme prezint o mare importan
practic i ilustreaz efectele urmelor de metale asupra proceselor de sintez i excreie. Cei
mai importano acizi produi prin fermentaie microbian sunt: acidul citric, acidul acetic,
acidul lactic, acidul fumaric i acidul gluconic. Pn la descoperirea biosintezei microbiene, o
principal surs de acid citric era reprezentat de fructele citrice (de obicei din Italia). In
prezent, cea mai mare parte a acidului citric este de origine microbian, el fiind utilizat n
proporie de 70% n industria alimentar i a buturilor i de 20% n industria farmaceutic.
Caracteristic procesului de fermentaie pentru producerea acidului citric prin utilizarea
tulpinilor de Aspergillus niger este limitarea concentraiei de mangan i fier pentru a
mpiedica creterea vegetativ peste un anumit punct. Succesul unei asemenea fermentaii
depinde de reglarea i funcionarea cii glicolitice i a ciclului acizilor tricarboxilici.

Producerea acidului citric se realizeaz n mod similar cu orice metabolit secundar: in
trofofaza fermentaiei, o parte a substratului glucidic este utilizat pentru producerea de
miceliu fungic iar o alta este convertit la CO
2
n cursul procesului respirator. In timpul
idiofazei, restul substratului glucidic determin creterea activitii citrat sintetazei i scderea
activitii aconitazei i a izocitrat dehidrogenazei, ceea ce conduce la acumularea i excreia
de acid citric de ctre microorganismul aflat n condiii de stress. Din punct de vedere istoric,
producerea acidului citric prin proces submers reprezint primul exemplu de fermentaie
industrial aerob.
Acidul acetic este un alt acid obinut prin fermentaii microbiene, utilizrile sale fiind
mai ales n domeniul industriei alimentare, ca oet. Obinerea i utilizarea oetului se cunosc
de aproximativ 10.000 de ani. Oetul este produsul rezultat din conversia alcoolului etilic din
vin la acid acetic cu ajutorul bacteriilor acetice din genurile Acetobacter i Gluconobacter.
Producerea la nivel industrial a oetului se realizeaz n instalaii speciale, printr-o fermentaie
continu (substratul se adaug continuu n fermentator pentru a susine dezvoltarea bacteriilor,
iar n aceeai msur se ndeprteaz produsul de fermentaie). Concentraia maxim de acid
acetic obinut prin acest procedeu este de 13-14%, fermentaia realizndu-se la 30
o
C timp de
35 de ore. Cele mai utilizate sortimente de oet sunt: oetul alb obinut din etanol distilat
(etanolul folosit ca materie prim este fie de origine fermentativ fie chimic); oet din cidru
(produs din suc de mere fermentat); oet din vin (produs din vin de calitate sczut supus
oxidrii aerobe); oet din mal (produs din alcool obinut prin fermentaia porumbului sau a
orzului, pretratate cu enzime pentru eliberarea glucidelor necesare dezvoltrii bacteriilor
acetice).
1.4. Enzimele
Aa cum s-a prezentat pe parcursul capitolelor anterioare, microorganismele produc o
gam larg de enzime, dintre care unele prezint importan practic deosebit. Intre cele mai
utilizate enzime microbiene se numr proteazele i amilazele. Proteazele, de exemplu, sunt
utilizate n industria detergenilor; multe dintre acestea sunt sintetizate de tulpini alcalifile
aparinnd mai ales speciei B.licheniformis. Asemenea enzime au pH optim de aciune ntre
9,0 i 10,0, rmnnd astfel active n condiiile alcaline ale soluiilor de detergeni.
Un alt grup important de enzime l reprezint amilazele i glucoamilazele implicate n
procesele industriale de obinere a glucozei pornind de la amidon. Majoritatea enzimelor de

acest tip, utilizate n diferite procese industriale, sunt de origine fungic. Glucoza produs n
urma aciunii enzimatice poate fi apoi folosit pentru producerea fructozei prin utilizarea
glucozo-izomerazei, rezultnd n final un ndulcitor foarte eficient (sirop de glucoz i
fructoz). Materia prim utilizat este reprezent de amidonul din porumb, gru sau cartof.
Amidonul este supus unor procese de prelucrare secveniale ce presupun utilizarea mai multor
tipuri de enzime microbiene: mai nti -amilaza care fragmenteaz amidonul; urmeaz
glucoamilaza care asigur formarea glucozei i apoi glucozo-izomeraza care convertete
glucoza la fructoz, iar produsul final este un sirop cu concentraie mare de fructoz utilizat
mai ales pentru ndulcirea buturilor rcoritoare.
O categorie mai nou de enzime dar cu aplicaii practice deosebite este reprezentat de
enzimele produse de microorganismele extremofile, discutate ntr-un capitol anterior. Dintre
acestea, sunt de menionat enzimele cu rezisten la temperaturi foarte mari, aa cum este
pululanaza produs de Thermococcus litoralis a crei activitate enzimatic optim se
desfoar la 118
o
C, sau feredoxina sintetizat de Pyrococcus furiosus care nu este denaturat
la 140
o
C. Aplicaiile practice ale enzimelor sintetizate de bacteriile termofile au fost
prezentate ntr-un capitol anterior.

1.5. Bioinsecticide microbiene
O serie de specii microbiene manifest proprieti inhibitorii fa de diferite categorii
de insecte sau de nematode. Biopreparatele insecticide obinute pe baz de bacterii, fungi sau
virusuri pot nlocui cu destul succes tratamentele cu diferite substane chimice toxice.
Cele mai cunoscute bioinsecticide au la baz utilizarea bacteriei Bacillus thuringiensis
capabil s produc, n cursul sporulrii, o protein cu efecte toxice pentru insecte. Studiile
efectuate asupra acestei specii au dovedit c exist mai multe varieti cu aciune specific
fa de anumite tipuri de insecte: B.thuringiensis var.kurstaki activ pe coleoptere i
lepidoptere, B.thuringiensis var.israeliensis activ pe diptere, B.thuringiensis var.tenebrionis
cu efect specific mpotriva gndacului de Colorado etc (Schnepf i col., 1998). Pentru
obinerea biopreparatului bacteriile sunt cultivate n fermentatoare pn n faza n care sunt
eliberai sporii prin liza celular, moment n care n mediu este eliminat i proteina cristal (-
endotoxina) (aproximativ 30 de ore). Dup depunerea prin centrifugare a sporilor i a

cristalelor proteice, sedimentul este uscat i inclus ntr-un material inert astfel nct se obine o
pulbere umectabil care poate fi aplicat pe plante.
O serie de biopreparate se bazeaz pe virusuri patogene pentru insecte
(baculovirusuri), existnd o mare specificitate fa de insecta combtut. Cele mai moderne
folosesc baculovirusuri de tip slbatic sau variante modificate genetic care acioneaz foarte
eficient mai ales pe larvele de insecte.

1.6. Biopolimerii
Biopolimerii (de tipul polizaharidelor) sunt produi de numeroase microorganisme, ei
avnd numeroase utilizri n industria farmaceutic i alimentar datorit capacitii lor de
gelificare i de a modifica caracteristicile de curgere ale lichidelor. Avantajele utilizrii
polizaharidelor microbiene este aceea c producerea lor este independent de scderea
resurselor naturale, de condiiile climatice sau de evenimente politice care influeneaz de
obicei aprovizionarea cu materii prime. In acest caz utilajele de producie a bipolimerilor pot
fi localizate n apropierea surselor de substraturi nutritive ieftine (de exemplu, n apropierea
zonelor agricole). Cel puin 75% dintre polizaharidele microbiene sunt utilizate ca
stabilizatori, pentru dispersia particulelor, drept ageni de formare a filmelor sau pentru a
reine apa din produse variate (tabelul 4).
Tabelul 4. Caracteristicile i utilizrile biopolimerilor microbieni (dup Prescott i col., 1996)
Tipul de
biopolimer
Organismul productor i aplicaii
Stadiul
de
aplicare
Dextran
Produs de specii ale genurilor Klebsiella, Acetobacter, Leuconostoc; este un glucan
cu legturi de tip utilizat n medicin ca absorbant i ca diluant pentru snge
(blood expander); poate forma un strat hidrofilic la suprafaa esuturilor arse
P
Xantan
Produs de Xanthomonas campestris; folosit n industria alimentar i n
programele de recuperare secundare a ieiului
P
Microfibrile
de celuloz
Produs de o tulpin de Acetobacter; utilizare n industria alimentar D
Pululan
Sintetizat de drojdia Aureobasidium pullulans; poate servi drept material
biodegradabil util pentru mpachetarea alimentelor, putnd nlocui amidonul n
anumite aplicaii
D
Alginat
microbian
Principalul productor este Azotobacter vinelandii; poate nlocui alginaii produi
de alge; poate fi folosit pe scar larg ca stabilizator alimentar
D
Poliesteri
Tulpini de Pseudomonas oleovorans produc poliesteri optic activi n condiiile
limitrii sursei de azot; folosit pentru obinerea unor materiale plastice speciale
D
Scleroglucan
Produs de fungi din genul Sclerotium; formeaz un gel vscos ce manifest
pseudoplasticitate fiind utilizat n industria petrolului
D
P = producie; D =dezvoltare

1.7. Biosurfactanii
Numeroi surfactani care sunt utilizai n scopuri comerciale sunt produi de sintez
chimic. In prezent exist un interes crescut n utilizarea biosurfactanilor mai ales n
domeniul proteciei mediului unde biodegradarea constituie o condiie esenial.
Biosurfactanii sunt folosii pentru emulsifiere, umezire i dispersia fazelor ca i pentru
solubilizare, proprieti eseniale n bioremediere i recuperarea ieiului.
Majoritatea biosurfactanilor microbieni sunt glicolipide care prezint regiuni
hidrofobe i regiuni hidrofile dar structura final i caracteristicile lor depind de condiiilor
speciale de cretere i de sursa de carbon folosit. Dintre cele mai cunoscute specii
productoare sunt de menionat Pseudomonas aeruginosa (sintetizeaz ramnolipidul R3) i
B.subtilis (produce surfactin)(fig.1).


Fig.1. Aciunea la nivel de laborator a unui surfactant de tip glicolipidic (EM) produs de
P.aeruginosa asupra petrolului aflat ntr-o soluie (dup Prescott i col., 1996).

O aplicaie important a biosurfactanilor este aceea de ageni de dispersare ai unor
compui, aa cum este petrolul, ea fiind probat n cazul polurii cu petrol ca urmare a avariei
tancului petrolier Exxon Valdez. polurii cu petrol ca urmare a avariei tancului petrolier
Exxon Valdez.

2. Procese de bioconversie microbian
Una dintre cele mai spectaculoase descoperiri din domeniul microbiologiei industriale a
fost aceea a faptului c microorganismele pot realiza o serie de reacii chimice care nu pot fi
realizate de chimia organic. Utilizarea microorganismelor pentru realizarea unor asemenea reacii
poart denumirea de bioconversie sau biotransformare i implic creterea unui microorganism
(bacterii, actinomicete, drojdii i fungi filamentoi) la nivel de fermentator. In mediul de cultur se
adaug, la anumite intervale de timp, compusul (sau compuii chimici) ce se dorete a fi modificat.

In anumite variante, biotransformarea poate fi realizat prin utilizarea enzimelor izolate din celulele
microbiene, libere sau imobilizate pe diferite suporturi.
Cel mai cunoscut proces de bioconversie mediat de microorganisme este cel al
producerii steroizilor, compui cu semnificaie medical deosebit. Astfel, n producerea
hidrocortizonului i cortizonului, steroizi utilizai n tratarea anumitor afeciuni (cum ar fi
unele ale pielii), sunt folosii fungii filamentoi din specia Rhizopus nigricans care realizeaz
hidroxilarea stereospecific a unui precursor al cortizonului. Majoritatea bioconversiilor
steroizilor implic hidroxilri de acest tip, ele putnd fi realizate de diferite specii de fungi,
astfel c producia anual a unor asemenea compui steroidici ajunge la peste 800 t/an.

3. Biodegradarea i biodeteriorarea
Biodegradarea este un proces ce acioneaz n sens pozitiv att n natur ct i n
economia societii umane. Pe plan global, procesele biodegradadative au o contribuie
major n circuitul elementelor chimice n natur, mpiedicnd acumularea compuilor
reziduali sau contaminani n mediu. Biodeteriorarea constituie un termen general ce se refer
la efectul nedorit al aciunii microorganismelor asupra diverselor produse agroalimen-tare sau
a altora nealimentare, cum ar fi: hrtia, picturile, metalele, textilele, betoanele i a alte
materiale. In acest caz, aciunea microorganismelor poate determina asupra substratului
diferite alterri fizice (modificarea consistenei vopselei, sfrmarea lemnului, perforarea
conductelor metalice etc), modificri chimice, impurificri (ptarea esturilor prin producerea
unor pigmeni) sau modificri funcionale.
Biodeteriorarea produselor agroalimentare prezint o mare importan practic prin
pagubele pe care le genereaz. Efecte negative asupra acestor produse au att bacteriile ct i
fungii.
Astfel, fungii cresc rapid pe produsele cerealiere atunci cnd acestea sunt inute n
condiii de umezeal. De exemplu, infectarea boabelor de orz cu ascomiceta Claviceps
purpurea este asociat cu acumularea unor alkaloizi cu efecte halucinogene, alterarea strii
generale i chiar cu moartea organismului animal, inclusiv uman, care a consumat produse
contaminate.

Carcinogenii de origine microbian includ aflatoxinele i fumosinelor. Aflatoxinele au
fost descoperite n 1960 cnd 100.000 de pui de curc au murit datorit consumului de fin
de arahide contaminat c fungul filamentos din specia Aspergillus flavus. Microorganismele
de acest tip produc toxine ce acioneaz asupra ADN al celulelor contaminate (de obicei
celule din ficat), efectul fiind mutagen i carcinogen. Aflatoxinele pot fi separate
cromatografic i evideniate n lumin UV datorit fluorescenei lor caracteristice. Asemenea
compui toxici au fost identificai nu numai n grne ci i n lapte, bere, cacao, stafide i fin
de soia etc.
Mai recent, n 1988 a fost identificat o alt toxin cu efect carcinogen, numit
fumosin. Ea este sintetizat de Fusarium moniliforme i determin efecte grave la animalele
i la oamenii care consum produse contaminate (de obicei porumb sau produse derivate de la
acesta).
Carnea i produsele lactate, datorit valorii nutriionale ridicate i a prezenei unor
compui uor metabolizabili constituie un mediu ideal pentru diverse microorganisme
contaminante care determin, n principal, procese de proteoliz i putrefacie.
Microorganismele de degradare pot fi att bacterii ct i fungi: ele descompun acidul
lactic produs de bacteriile lactice, astfel c aciditatea este treptat eliminat ceea ce permite
dezvoltarea bacteriilor proteolitice. Acestea determin apariia unui miros putrid i a gustului
amar al produsului contaminat.
Degradarea se produce i n cazul alimentelor procesate minimal sau concentrate. In
primul caz, principalele efecte nedorite sunt determinate de bacteriile din genurile
Lactobacillus i Leuconostoc care produc un gust sau un miros caracteristic, nedorit. Sucurile
concentrate pot fi alterate prin contaminarea cu drojdii din genurile Saccharomyces i
Candida.
Fructele pot fi contaminate cu o mare varietate de microorganisme. Sursele posibile de
contaminare pot fi aerul, insectele, animale slbatice i cele domestice, omul, solul i apa.
Datorit compoziiei chimice, fructele reprezint un mediu propice pentru creterea i
multiplicarea mai ales a drojdiilor i mucegaiurilor i mai puin a bacteriilor (doar cele
rezistente la valori sczute ale pH se pot dezvolta i n fructe).
Dintre mucegaiurile care determin reducerea duratei de conservabilitate a fructelor i
produselor din fructe pot fi amintite genurile: Cladosporium, Alternaria, Penicillium,

Phomopsis, Diplodia, Phytophthera, Sclerotinia, Fusarium, Gleosporium, Aspergillus, iar
dintre genurile de drojdii: Saccharomyces, Hanseniaspora, Torulopsis, Torula, Mycoderma,
Candida, Pichia, Kloeckera, Hansenula, Debaromyces etc.
Dintre bacteriile care se pot gsi n fructe (genurile Bacillus, Staphylococus,
Enterobacter, Escherichia i Lactobacillus) cel mai frecvent se ntlnesc lactobacilii datorit
toleranei lor la pH sczut.
Procesul de contaminare i degradare a produselor agroalimentare, inclusiv a fructelor,
poate fi prevenit prin utilizarea unor metode variate de conservare (tabelul 5).

Tabelul 5. Principalele metode de conservare a produselor alimentare

Tehnica general Exemple de procesare i conservare
Asepsie, ndeprtarea
microoganismelor
Prevenirea contaminrii microbiene prin filtrare sau centrifugare
Scderea temperaturii Refrigerare, congelare
Temperaturi nalte
Inactivarea termic parial sau total a microorganismelor (pasteurizare i
conservare n cutii)
ndeprtarea apei Liofilizare sau uscare n dispozitive speciale
Scderea accesibilitii
apei
Adugarea unor soluii ce conin concentraii ridicate de sare sau zahr pentru a
scdea valoarea a
w

Conservarea chimic
Adugarea unor substane inhibitoare specifice (de exemplu, acizi organici,
azotai, dioxid de sulf, bacteriocine)
Radiaii Utilizarea radiaiilor ionizante (radiaii gamma) sau neionizante (UV)

Pentru a micora ct mai mult influenele negative pe care le pot avea
microorganismele asupra fructelor este necesar ca prin aplicarea tehnologiilor frigorifice, s
se ia msuri, dac nu de reducere a numrului de microorganisme, cel puin de micorare a
posibilitilor de multiplicare a acestora. Din acest punct de vedere, tratamentele preliminare
(de exemplu splarea cu ap clorinat) i eliminarea surselor de contaminare au o importan
deosebit. De asemenea este esenial prercirea, mai ales atunci cnd fructele urmeaz a fi
congelate n ambalaje de dimensiuni mari. De asemenea, adugarea de zahr reprezint o cale
de a se reduce aciunea microorganismelor n timpul congelrii i depozitrii unor fructe.
Ca temperaturi minime de cretere, citate n literatura de specialitate, se menioneaz
cele de 12C... 18C n cazul mucegaiurilor, 10C ... 15C n cazul drojdiilor i 5C ...
12C n cazul bacteriilor. n fructele congelate se pot gsi totui spori de mucegaiuri, celule
de drojdii i unele bacterii rezistente n medii acide. Dup decongelare, acestea pot influena

negativ calitatea fructelor dac nu are loc o depozitare n mod corespunztor pn la utilizare
(Niculi i Popa, 2002).
Legumele, ca i fructele pot fi contaminate cu o mare diversitate de microorganisme,
avnd aproximativ aceleai surse de contaminare. Dintre microorganismele prezente pe i n
legume pot fi amintite: bacterii (genurile Micrococcus, Staphylococcus, Achromobacter,
Pseudomonas, Alcaligenes, Xanthomonas, Streptococcus, Leuconostoc precum i bacterii
lactice), mucegaiuri (genurile Botrytis, Rhizopus, Alternaria, Penicillium, Sclerotinia,
Fusarium, Aspergillus, Trichothecium, Cladosporium) i drojdii (genurile Saccharomyces,
Pichia etc).
Pentru inactivarea microorganismelor, operaia de blanare are o mare importan n
tehnologia de congelare a legumelor. Rcirea ct mai rapid dup blanare, precum i
eliminarea surselor de recontaminare cu microorganisme sunt elemente tehnologice de mare
importan. Tratamentul termic de fierbere cu o durat de cel puin cteva minute la care sunt
supuse legumele congelate, nainte de a fi consumate, distruge aproape toate
microorganismele rmase n stare vegetativ dup congelare (Niculi, 2000).
Contaminarea microbian se produce chiar i n cazul alimentelor conservate (a
conservelor), fenomenul realizndu-se de obicei n cursul prelucrrilor din timpul conservrii
(materia prim sau apa au fost contaminate). Alimentele conservate alterate prezint culoare,
textur, miros i gust modificate datorit fermentaiei acide i a producerii de CO
2
i H
2
S. In
anumite cazuri, contaminarea cu anaerobi determin un aspect caracteristic al conservelor
(bombarea lor) datorit producerii i acumulrii de gaze, iar dac n acest proces de
contaminare a fost implicat bacteria Clostridium botulinum atunci n produsul alimentar
conservat se acumuleaz i toxina botulinic ce poate determina moartea persoanelor care o
ingereaz accidental.
De asemenea, prin intermediul alimentelor contaminate cu microorganisme pot fi
transmise diverse boli, unele produse de microorganismele din alimente (food-borne
infections) iar altele de tipul intoxicaiilor alimentare. In primul caz este vorba de ingerarea
unui microorganism patogen aflat la nivelul unui produs alimentar: de exemplu, salmonelioza
determinat de ingerarea de bacterii din genul Salmonella, listerioza produs de Listeria
monocytogenes, gastroenteritele produse de contaminarea cu Campylobacter jejuni sau
colitele hemoragice (unele mortale) determinate de tulpina E.coli 0157:H7, etc. Toate aceste

exemple de boli sunt asociate cu nerespectarea unor msuri de igien. In privina intoxicaiilor
alimentare acestea sunt produse de toxinele acumulate n alimentele alterate i sintetizate de
diferite specii bacteriene, cum ar fi: Staphylococcus aureus, Clostridium botulinum,
C.perfringens sau Bacillus cereus.
Elaborarea unor mijloace eficiente i rapide de detectare a microorganismelor
patogene din produsele alimentare prezint o importan major n domeniul controlului
calitii produselor agroalimentare i o cerin esenial pentru comercializarea anumitor
produse perisabile. Metodele clasice de cultivare a eventualilor patogeni necesit un timp
ndelungat pentru a obine rezultate iar identificarea este deseori complicat. In ultimii ani au
fost puse la punct metode moderne ce se bazeaz, pe de o parte, pe tehnici imunologice i, pe
de alt parte, pe cele moleculare. Tehnicile imunologice presupun utilizarea anticorpilor
specifici marcai fluorescent, ca n cazul tehnicii ELISA (enzyme-linked immunosorbent
assay) sau radioactiv ca n cazul tehnicilor de radioimunodetecie.
Metodele moleculare sunt utile pentru:
detectarea prezenei unui singur patogen specific;
detectarea virusurilor care nu pot fi cultivate n mod corespunztor;
identificarea patogenilor ce cresc greu pe medii de cultur sau a celor care nu pot fi
cultivai in vitro.
Patogenii pot fi identificai n prezent prin utilizarea unor fragmente de ADN sau ARN
specifice (numite probe), complementare cu anumite secvene din genomul unor anumitor
patogeni. Probele pot fi formate din 10-10.000 pb marcate radioactiv sau neradioactiv, ele
fiind specifice pentru fiecare tip de patogen n parte.
In alte variante, folosirea tehnologiei PCR (reacia de polimerizare n lan prin
folosirea unor ADN polimeraze termostabile i a unor primeri specifici) permite amplificarea
unor fragmente de ADN specifice pentru un anumit tip de patogen i apoi evidenierea lor
electroforetic.
Biodeteriorarea altor produse, nonalimentare. Aa cum s-a artat mai sus, n afar
de alterarea produselor agroalimentare, microorganismele pot s determine modificri
nedorite i asupra altor categorii de produse.
O aciune nedorit exercitat de microorganisme este asupra combustibililor pentru
avioane. Astfel, n rezervoarele i n instalaiile de pstrare a kerosenului pot exista urme de

ap care, acumulndu-se, pot forma o interfa ap-hidrocarburi la nivelul creia se dezvolt
microorganismele. Cea mai frecvent specie ntlnit n asemenea condiii este Cladosporium
resinae, numit i fungul de kerosen care, prin formarea de biomas poate bloca orificiile
instalaiilor de pompare. Depirea acestor inconveniente provocate de creterea unor
microorganisme poate fi realizat prin utilizarea unor inhibitori i prin msurile de curare
frecvent a rezervoarelor de depozitare a combustibililor.
Degradarea materialului vegetal din depozitele fabricilor de hrtie conduce la
pagube nsemnate deoarece aciunea microorganismelor poate determina scderea calitii hrtiei,
nglbenirea sa i chiar deteriorarea produsului final. Microorganismele care cresc la nivelul
soluiilor utilizate n procesarea materiei prime lemnoase formeaz un strat mucos la nivelul
instalaiilor i scad eficiena tratamentelor chimice, afectnd cantitatea i calitatea produsului final.
Folosirea unor compui chimici pe baz de mercur, denumii biocide, poate limita pagubele din
domeniu dar, n acelai timp, poate avea efecte poluante asupra apelor ce primesc deversrile de la
asemenea fabrici.
Una dintre cele mai spectaculoase provocri pentru specialitii n biodeteriorare este
controlul creterii microorganismelor de la nivelul operelor de art i al picturilor n mod
special. Originea microorganismelor contaminante se afl n vopseaua utilizat: ele pot infecta
vopseaua att nainte ct i dup folosire. Dintre microorganismele implicate n asemenea
proces sunt de menionat diverse specii de bacterii i fungi:
bacterii: Alcaligenes sp., Bacillus cereus, B.mycoides, Flavonobacter invisibile,
Micrococcus albus, Sarcina flava
fungi: Alternaria dianthicola, Aspergillus flavus, Cladosporium sp., Fusarium sp.,
Pullularia pullulans etc.
Pentru a elimina posibilitatea contaminrii se utilizeaz o serie de compui toxici cu
efect antibiotic, de cele mai multe ori pe baz de mercur, dar care sunt poluante.
Coroziunea microbian a metalelor ridic o serie de probleme economice deoarece pot
fi afectate diverse instalaii industriale sau reele de evi. Microorganismele implicate n
asemenea procese sunt de obicei anaerobe, ele aparinnd genurilor Desulfovibrio
(arhebacterie metanogen capabil s utilizeze fierul drept surs de electroni n metabolismul
ei), Enterobacter i Clostridium (bacterii sulfat reductoare sau productoare de acizi

organici). Microorganismele implicate n procesele de coroziune determin mai nti formarea
unor umflturi la nivelul metalului i apoi perforarea evilor de fier. Pn n prezent, metodele
de prevenire a contaminrii microbiene a instalaiilor nu s-a dovedit a fi eficient fiind
necesar elaborarea de noi strategii de aciune.
In privina betoanelor, i acestea pot fi degradate n urma aciunii unor
microorganisme. Majoritatea problemelor de biodeteriorare de la nivelul autostrzilor sau a
conductelor de ape reziduale sunt datorate bacteriilor din specia Thiobacillus concretivorus
(redenumit ca T.thiooxidans).

3.1. Aspecte pozitive ale proceselor de biodegradare
In ciuda numeroaselor probleme pe care microorganismele le pot produce ca urmare a
capacitilor degradative, unele specii prezint interes practic deoarece pot conduce la
ndeprtarea unor compui poluani sau xenobiotici din mediu, restabilind calitatea mediului.
Acest fenomen a primit denumirea de bioremediere.
Este cunoscut faptul c deversrile accidentale de iei cauzeaz grave probleme
mediului nconjurtor. Tieiul este un amestec foarte complex de hidrocarburi nsumnd sute
de compui individuali cu structur chimic i greutate molecular diferite. Clasele de
hidrocarburi atacabile de microorganisme sunt:
fraciunea alifatic (saturat) alctuit din alcani, izoalcani i clicloalcani. Se
consider c hidrocarburile cu lanul lung sunt cel mai uor degradate de
microorganisme;
fraciunea aromatic reprezentat de compui aromai nesaturai, aa cum este
benzenul. Acetia sunt greu atacai de microorganisme dei au fost identificate
unele specii de bacterii capabile s degradeze compui de tipul benzenului sau
toluenului;
fraciunea asfaltic include componeni cu structur complex, foarte greu de
degradat (Zarnea, 1994).
De aceea, realizarea unui amestec corespunztor de microorganisme capabile s
degradeze compuii aromatici, policiclici i alifatici din petrolul poluant constituie un scop
major al cercetrilor n domeniu. De exemplu, n 1974, A.M.Chakrabarty a brevetat primul
microorganism, o tulpin de Pseudomonas care coninea mai multe plasmide la nivelul crora

erau localizate gene implicate n degradarea hidrocarburilor. Aceast bacterie prezenta unele
avantaje n privina degradrii unor reziduuri petroliere. Adugarea n mediu a unui asemenea
microorganism i funcionarea sa optim depinde de o serie de factori:
factori ce in de particularitile microorganismului: capacitate de a degrada
hidrocarburile; capacitate de a fi meninut n culturi n laborator; supravieuire i
activitate n condiiile mediului marin (temperatur sczut i salinitate ridicat);
participare la procesul de bioemulsifiere; absena unor efecte secundare toxice etc:
factori de in de condiiile de mediu: prezena alturi de hidrocarburi a unor surse
suplimentare de nutrieni (surse de N, P, K sau Fe); absena unor compui toxici
(fenoli, metale grele) care pot afecta microorganismele; existena unei aerri
corespunztoare care s permit desfurarea normal a proceselor metabolice;
posibilitatea ca microorganismele de interes s intre n contact cu hidrocarburile de
degradat.
In prezent s-a stabilit c microorganismele capabile s degradeze hidrocarburile
aparin la 30 de genuri i 100 de specii diferite, dintre acestea cele mai frecvente fiind:
bacterii: Achromobacter, Alcaligenes, Arthrobacter, Bacillus, Corynebactwerium,
Brevibacterium, Micrococcus, Nocardia, Pseudomonas, Spirillum, Vibrio etc;
cianobacterii: Anabaena, Nostoc, Oscillatoria;
levuri: Candida, Rhodotorula, Saccharomyces;
fungi filamentoi: Aspergillus, Acromonium, Cladosporium, Fusarium,
Penicillium, Trichoderma etc.
Chiar dac n laborator tehnologiile de utilizare a culturilor pure de microorganisme de
degradare au dat rezultate foarte bune, utilizarea lor n condiii in vivo nu s-a ridicat la
nivelul ateptrilor. Cea mai important testare de acest tip a fost realizat n 1989 cu ocazia
accidentului tancului petrolier Exxon Valdez care a determinat poluarea cu petrol a coastelor
peninsulei Alaska. Ulterior au fost realizate i alte testri care au presupus o serie de variante
ale tehnologiei, incluznd adausul de nutrieni, de dispersani chimici, de biosurfactani etc
(Scragg, 1999).
Biodegradarea microbian a petrolului poate asigura decontaminarea unor soluri
poluate sau a unor sedimente; n acest caz se utilizeaz populaii mixte de microorganisme
(consorii) capabile s realizeze degradarea eficient a mai multor compui poluani. De

asemenea, spargerea unor conducte de petrol pot determina pagube nsemnate prin deversrile
ce se produc. Solurile conin n mod natural aproximativ 1% bacterii sau fungi ce pot utiliza
hidrocarburile, alturi de cianobacterii sau unele alge. In cazul solurilor contaminate cu
hidrocarburi s-a dovedit c numrul micro-organismelor din respectivul habitat crete, dar
diversitatea acestora este redus (Mesarch i Nies, 1997).
Biodegradarea hidrocarburilor este asociat cu creterea microbian, cu metabolismul
acestora i, prin urmare cu factorii ce afecteaz creterea i metabolismul microbian. Dac
microorganismele nu pot utiliza hidrocarburile drept unic surs de carbon, este necesar
adugarea unor substane care s poat fi folosite drept surs nutritiv. In asemenea situaii se
utilizeaz tratamente mixte, cu inocul microbian i cu diferite substane chimice (cum ar fi
sulfatul de amoniu i fosfatul mono- i disodic).
Un microorganism cu proprieti degradative speciale este fungul din specia
Phanaerochaete chrysosporium. Denumit i fungul putregaiului alb datorit faptului c este
capabil s degradeze lignina din lemn, aceast specie manifest n plus i capaciti de
degradare enzimatic a numeroi compui xenobiotici (benzen, toluen, etilbenzen, compui
clorurai cum ar fi triclorfenolul etc). In afara acestei specii, n procesele de degradare a
compuilor xenobiotici mai pot fi implicate bacterii din genurile Flavobacterium,
Arthrobacter sau Rhodococcus (Lo i col., 1998) In asemenea procese degradative intervin
enzime extracelulare de tipul lignin-peroxidazelor, mangan-peroxidazelor, glioxal oxidazelor
.a.m.d.
Un exemplu de compus xenobiotic larg utilizat este atrazina, erbicid folosit de peste 40
de ani pentru distrugerea buruienilor. De-a lungul timpului s-a dovedit c acest erbicid este
rezistent la degradare dar, n ultimii ani, au fost izolate consorii microbiene i chiar culturi
bacteriene pure capabile s distrug atrazina pn la CO
2
i NH
2
, pe parcursul mai multor
etape, (Mandlebaum i col., 1995). La procesul de degradare al atrazinei pot participa bacterii
din genurile Clavibacter (acioneaz n primele dou etape ale procesului) i Pseudomonas
(conin gene plasmidiale ce codific enzimele implicate n ultimele etape de degradare).
O alt aplicaie important a capacitilor degradative ale microoganismelor este
recuperarea metalelor din minereuri srace sau din deeurile miniere (depozitele de steril).
Biosolubilizarea se refer la ansamblul de procedee tehnice i tehnologice care duc la
eliberarea metalelor de interes, acestea incluznd sfrmarea minereului, extracia i selecia

categoriilor de minerale i de concentrate, solubilizarea propriu-zis i extracia metalelor.
Procedeele respective se ncadreaz n domeniul hidrometalurgiei microbiene. Printre
microorganismele implicate n realizarea acestor procese de biosolubilizare sunt de menionat
speciile de bacterii chemolitotrofe: Thiobacillus ferroxidans, T.thioxidans, Leptospirillum
ferrooxidans, Sulfolobus acidocaldarius, Thermothrix thioparus etc.
Una dintre aplicaiile majore ale acestui fenomen este reprezentat de recuperarea
cuprului din minereurile srace cu ajutorul populaiilor naturale de T.ferrooxidans. Dei
procedeul este foarte lent, biosolubilizarea bacterian constituie o alternativ biotehnologic
eficient pentru recuperarea metalelor preioase din minereuri srace, din sisteme acvatice sau
care sunt rezistente la alte metode de ndeprtare. Utilizat n diferite ri pentru recuperarea
cuprului, uraniului sau aurului, procedeele de biosolubilizare pot fi adaptate i pentru alte
metale, cum ar fi zincul (din blend ZnS), plumbul (galen PbS), nichelul sau cobaltul.
Deseori, celulele microbiene pot fi utilizate pentru concentrarea unor metale preioase
din ape reziduale diluate. Acesta este cazul celulelor algei Chlorella vulgaris care sunt
folosite n tehnologii de recuperare a aurului sau argintului, alga fiind capabil s acumuleze
intracelular respectivele metale.

4. Produse alimentare obinute cu ajutorul microorganismelor
Obinerea de produse alimentare prin utilizarea microorganismelor poate mbrca diferite
aspecte: pe de o parte microorganismele ca atare pot constitui un produs alimentar (de exemplu,
macromicetele), iar pe de alt parte, acestea realizeaz convertirea unor materii prime de origine
vegetal sau animal (lapte, carne, legume etc) pentru realizarea unui produs caracteristic.
Folosirea biomasei microbiene ca surs nutritiv pentru animale sau om este cunoscut de
mult vreme, existnd chiar practici tradiionale n diferite zone ale lumii de utilizare a unor
microorganisme drept surs de hran. Acesta este cazul unor populaii africane pentru care
cianobacteria Spirulina platensis reprezint o surs de hran. In prezent, n numeroase ri ale lumii
se produce biomas de Spirulina care, datorit coninutului n proteine, vitamine sau ali factori
nutritivi, este folosit la supliment nutritiv sau chiar ca medicament. De asemenea, biomasa de
drojdii (single cell protein) obinut n instalaii speciale prin cultivare pe diverse substraturi
ieftine (metanol, deeuri vegetale etc) poate fi utilizat drept supliment nutritiv mai ales pentru
animale, iar n unele situaii, chiar i pentru om (tabelul 5). Obinerea biomasei microbiene se

realizeaz n fermentatoare de mare capacitate (40.000-200.000 litri) care permit asigurarea
condiiilor optime de cultivare.

Tabelul 8.5. Utilizrile industriale ale drojdiilor i produsele obinute
Domeniul de utilizare Produsul
Producerea de biomas
de drojdii
Drojdie pentru panificaie
Produs liofilizat folosit ca supliment nutritiv
Produs liofilizat utilizat n hrana animalelor
Derivate din drojdii
Extract de drojdii pentru mediile de cultur
Vitamine din complexul B; vitamina D
Enzime pentru industria alimentar (invertaz, galactozidaz)
Substane chimice pentru cercetare (ATP, NAD
+
, ARN)
Produse de fermentaie
Etanol
Glicerol
Buturi alcoolice
Bere
Vin
Buturi distilate
Whiskey
Vodka
Coniac
Rom

Macromicetele sunt fungi filamentoi capabili de a forma corpi de fructificaie
comestibili, cunoscute i folosite n alimentaia uman de foarte mult vreme. Cele mai cunoscute
specii de macromicete cultivate n condiii controlate sunt Agaricus bisporus, Pleurotus ostreatus
i Lentinus edulus. Ciupercile comestibile au valoare nutritiv relativ redus dar ele furnizeaz
anumite cantiti de proteine, de grsimi libere i chiar vitamine din complexul B.
Produsele lactate sunt variate att n privina particularitilor fizico-chimice i nutriionale
ct i a tipurilor de microorganisme implicate n obinerea lor (tabelul 6).
Brnzeturile sunt cunoscute de foarte mult vreme (exist informaii despre obinerea
brnzeturilor nc de acum 8000 ani), n prezent existnd aproximativ 2.000 de sortimente
rspndite n ntreaga lume, grupate n 20 de categorii majore. Fabricarea brnzeturilor presupune o
serie de etape succesive: coagularea laptelui n prezena cheagului de origine animal sau
microbian; separarea zerului de laptele nchegat; introducerea n forme speciale care s permit
producerea de acid i dobndirea consistenei specifice; maturarea preparatului pentru

dobndirea aromei i texturii caracteristice. In diferitele etape ale procesului de fabricaie sunt
utilizate tulpini selecionate de bacterii, iar n anumite cazuri de fungi.

Tabelul 6. Principalele produse lactate fermentate i microorganismele care le produc
Produsul
fermentat
Microorganismele implicate Descriere
Lapte
acidulat
Lactobacillus acidophilus Lapte sterilizat i apoi inoculat cu tulpinile microbiene corespunztoare
Kefir
Lactococcus lactis,
Lb.bulgaricus,
Saccharomyces sp.
Produs n urma fermentaiei mixte, lactice i alcoolice; conine 1% alcool
Kumiss
Lb.bulgaricus,
Lb.leichmanii, Torula sp.
Produs din lapte de iap; conine 2% alcool
Smntn
fermentat
Lactococcus sp.,
Leuconostoc sp.
Smntna este inoculat i incubat pentru dezvoltarea aciditii
corespunztoare
Iaurt
Streptococcus thermophilus,
Lb.bulgaricus
Produs obinut din lapte degresat sau cu coninut sczut n grsimi; conine
stabilizatori de tipul gelatinei
Unt Lactococcus lactis
Smntna este incubat pn cnd se obine un grad de aciditate
corespunztor dup care este btut, iar produsul obinut este splat i srat
Brnza
proaspt de tip
Mozzarela
Streptococcus thermophilus,
Lb.bulgaricus
Nu se utilizeaz cheagul
Brnza
fermentat de
tip cacaval
L.lactis, L.cremoris
Laptele este inoculat cu tulpinile bacteriene i se adaug cheagul, iar n
fazele finale se pot aduga alte tulpini bacteriene, pentru arom i aspect
(Lb.casei, Lb.plantarum, Propionibacterium sp)
Brnza tip Brie
sau Camembert
L.lactis, L.cremoris
In fazele finale ale preparrii se adaug tulpini specifice de fungi
(Penicillium sp.) i de bacterii (Brevibacterium linens) pentru aspect i
arom
Brnza tip
Roquefort
L.lactis, L.cremoris
In fazele finale ale preparrii se adaug tulpini specifice de fungi
(Penicillium roquefortii) pentru aspect i arom.

Dintre speciile bacteriene folosite sunt de menionat Lactococcus lactis, L.cremoris,
L.diacetylactis, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus, ele fiind implicate mai ales
n etapa de acidifiere i de maturare, iar dintre fungii utilizai n industria brnzeturilor cele mai
importante specii sunt Penicillium roquefortii i P.camemberti. In cazul fungilor, adugarea lor
determin un aspect caracteristic (sporii deP.roquefortii asigur formarea unor zone de culoare
albastr n interiorul produsului) sau o textur special (P.camemberti produce proteaze care
determin o consisten cremoas preparatului i o arom specific). In cazul unor sortimente
speciale de brnz, aa cum este cea de tip Switzer, gurile i aroma caracteristice sunt produse n
urma inoculrii cu tulpini bacteriene din speciile Propionibacterium shermanii i
P.freundenreichii.

Iaurtul i alte produse lactate fermentate sunt obinute prin utilizarea unui amestec de
bacterii aparinnd speciilor Streptococcus thermophilus i Lb.bulgaricus, prima asigurnd
aciditatea corespunztoare iar cea de-a doua conferind gustul i aroma specific a produsului.
Numrul optim de bacterii din produs variaz: de exemplu, iaurturile proaspete conin 10
9
bacterii
per gram. De asemenea, n ultimii ani, firmele de prestigiu utilizeaz pentru obinerea iaurturilor
tulpini bacteriene capabile s formeze polizaharide; prezena acestora reduce fenomenul de
sinerezis, polizaharidele imobiliznd apa, iar consistena iaurtului este n acest caz mult mai
cremoas.
De asemenea, n multe ri ale lumii, este foarte apreciat de consumatori un sortiment de
lapte fermentat, obinut prin utilizarea unor tulpini de Lb.acidophilus asociate uneori i cu tulpini
de Bifidobacterium sp. Un asemenea produs poate modifica flora intestinal, mbuntind starea
de sntate, el fiind recomandat n diferite diete.
Produsele fermentate din carne, aa cum sunt crnaii, salamurile sau unele preparate din
pete sunt obinute prin utilizarea unor tulpini de Pediococcus cerevisiae i Lb.plantarum sau a
unor tulpini alcalifile de Bacillus sp.. Uneori, n cazul unor specialiti tradiionale japoneze pot fi
folosite i tulpini de Penicillium sau de Aspergillus (A.glaucus).
Obinerea pinii i a altor produse de panificaie se bazeaz pe utilizarea
microorganismelor, n special a drojdiilor aparinnd speciei S.cerevisiae. Pinea ca aliment este
cunoscut de foarte mult vreme, existnd dovezi c ea se producea nc din anul 2100 .C. In
procesul tehnologic de producere a pinii, creterea drojdiilor se realizeaz n condiii de aerobioz
ceea ce determin creterea concentraiei de CO
2
i reduce producerea i acumularea de etanol.
Fermentaia se realizeaz n mai multe etape: mai nti amidonul este hidrolizat sub aciunea i -
amilazelor, eliberndu-se maltoz i sucroz, dup care sunt adugate drojdiile care produc enzime
specifice (maltaz i invertaz) cu ajutorul crora metabolizeaz glucidele eliberate. In cursul
procesului de fermentaie se produce CO
2
i o serie de ali produi implicai n aroma pinii.
Utilizarea unui amestec de microorganisme a permis obinerea unor sortimente specifice
de pine aa cum este cea obinut din aluat acru (n acest caz se folosesc tulpini de
Sacchoaromyces exiguus i de Lactobacillus sp.). In afara produselor fermentate menionate, sunt
de amintit i altele aa cum sunt: murturile (proces realizat de bacterii cum ar fi Leuconostoc
mesenteroides, Lb.plantarum, Pediococcus cerevisiae, Lb.brevis), varza murat (n acest caz,
fermentaia lactic este produs de intervenia bacteriilor Leuconostoc mesenteroides, Lb.brevis i

Lb.plantarum), tofu (obinut din lapte de soia prin fermentaie cu ajutorul fungilor din speciile
Actinimucor elegans i Mucor sp.) etc.
Buturile alcoolice fermentate sunt produse, n ntreaga lume, pornindu-se de la diverse
materii prime vegetale ce conin cantiti nsemnate de glucide.
Producerea vinului reprezint o adevrat tiin, oenologia (de la cuvintele greceti oenos
= vin i logos = tiin), cunoscut de mii de ani. Procesul de producere a vinului presupune
parcurgerea mai multor etape, pe parcursul crora sunt utilizate diverse microorganisme: drojdii
din speciile S.cerevisiae i S.ellipsoideus care fermenteaz mustul i determin acumularea de
alcool i bacterii lactice care fermenteaz acidul malic rezidual la acid lactic i CO
2
. In cazul
ampaniei, procesul de fermentaie este continuu i se realizeaz direct n sticl, pe parcursul mai
multor luni.
Deseori ns vinurile se pot deprecia datorit contaminrii cu diverse microorganisme.
Astfel, contaminarea vinului cu bacterii din genurile Acetobacter sau Gluconobacter conduce la
oxidarea alcoolului etilic la acid acetic i obinerea oetului din vin.
O alt butur alcoolic produs cu ajutorul microorganismelor este berea. Materia
prim este de obicei orzul dar, pentru anumite sortimente de bere se mai poate folosi grul sau
orezul. Amidonul coninut n materia prim este degradat cu ajutorul malului (obinut n
cursul procesului de ncolire al orzului) dup care se adaug hameiul, amestecul obinut fiind
apoi inoculat cu drojdiile corespunztoare. Astfel, majoritatea tipurilor de bere se obin prin
inocularea cu tulpini de S.carlsbergensis care realizeaz fermentaia la baza vasului de
fermentaie (procesul se desfoar la 6-12
o
C), n timp ce tulpinile de S.cerevisiae care produc
fermentaia la suprafa (timp de 5-7 zile la o temperatur de 14-23
o
C) sunt utilizate la
obinerea berii englezeti. Si n acest caz poate aprea contaminarea cu tulpini microbiene
nedorite (bacterii lactice i acetice), inclusiv levuri slbatice (S.pasteurianus, S.diastaticus).
Buturile spirtoase (whiskey, gin, vodca etc) se obin printr-o tehnologie ce reprezint o
extensie a tehnologiei de obinere a berii. De obicei se folosete o past pornind de la materie prim
vegetal (orez, orz, porumb sau orz) care este inoculat cu bacterii homolactice din specia
Lb.delbreuckii ce determin scderea valorii pH la 3,8 n timp de 6-10 ore, ceea ce limiteaz
dezvoltarea altor microorganisme nedorite. Lichidul de fermentaie obinut este apoi supus
fierberii, iar compuii volatili sunt condensai pentru a se obine un produs cu un coninut n alcool
mai mare dect berea.