Universitatea de Stat de Medicin

i Farmacie N. Testemianu
Catedra: Biologie molecular i
Genetic uman

Eritropoietina
Elaborat: Pastusenco Tatiana
Verificat : Rotaru Ludmila
Grupa 1122

Cuprins

Introducere.
Scurt istoric.
Gena Epo.
Expresia genei Epo.
Locul de sinteza.
Structura generala a
proteienei.
Epo R.

Functiile.
Mutaii ale genei
Epo.
EpoietinaEritropoietina
sintetica.
Bibliografie

Erytropoietine (erytros= rou,

poietikos= care face, creeaz)

Este un hormon glicoproteic acid.

Ertiropoietina este unul dintre cele mai cunoscut
i bine studiat factor de cretere specific pentru
celulele hematopoietice comise pentru formarea de
eritrocite (CFU-E colony forming units- Erytrocyte)
factor de stimulare a hematopoiezei.
Studiile efectuate n ultimii ani au mrit
considerabil sfera de utilizare a Epo (n neurologie,
cardiologie, hematologie, oncologie i alte domeniii
ale medicinii clinice).

Acum 100 ani (1906) savanii francezi P. Cornot

i C. De Flandre, au fost primii care i-au expus
presupunerile despre o posibil existen n
organism a factorului hormonal ce controloeaz
eritropoieza i l-au numit Hemopoietin.
n anul 1974, Comisia mondiala a nomenclaturii
biochimice i Comisia mondial a biochimitilor au
introdus termennul de Eritropoietin n noul
nomenclator al hormonilor peptidici.

Structura genei:
reg. codificatoare

Exon 1
Intron 1
Exon 2
Intron 2
Exon 3
Intron 3
Exon 4
Intron 4
Exon 5

Codani

Parial
codani

Structura genei
Situs
poly (A)

+1

Ex 1

Ex 2

Ex 3

Ex 4

Ex 5

Promotor

Terminatorul

GATA -30 oligonucleotide Epo promoter

5-CATGCAGATAACAGCCCCGACCC CCGGCCA-3

Lungimea intronilor 1562 pn

Lungimea exonilor 582 pn
Lungimea total 2144pn
Gena codifica pentru 193 de
aminoacizi.

Capatul 5 i Capatul 3
n promotor lipsete boxa TATA i boxa CAAT.
Regiunea 5 netranscrisa cuprinde proximativ 218
nucleotide ce corespunde regiunii reglatoare
specifice a genei.
Tot la acest nivel se gaseste NRE Negative
Regulatory Element- inhibind expresia genei.
Capatul 3 include 3 secvene de enhaincer (n
regiunea situs HIF 1).
Situs DR-2 care interacioneaz cu HNF 4.
Singura AATAAA secven asemntor este
AAGAAC, gsit 11-13 nucleotide n amonte de situl
poli (A).

La nivel molecular
Codific sinteza eritropoietinei.

La nivel celular
Controleaz i regleaz proliferarea i diferenierea
CFU E (colony forming units erythrocite).
Supravieuirea celular

La nivel de organism
Asigur oxigenarea calitativ a esuturilor.
Meninerea homeostaziei mediului intern

Factorii stimulatori n producerea Epo:

Hemoragii
Fenilhidrazina toxin hemolitic
Sruri de cobalt inhibitor al proceselor
oxidative n esuturi
Aer hipooxigenat
Hormonii androgeni
Aceast interdependen demonstreaz faptul c
cel mai important mecanism sensorial care
determin biogeneza Epo este legat de
metabolismul aerob al cel. productoare de Epo.

Hipoxia stimul pentru sinteza

eritropoietinei
Semnalele despre cantitatea 2 din organism
sunt recepionate de structurile celulare
sensoriale din esutul renal, astfel rinichiul
servete ca un oximetru n cadrul corpului uman.
Alimentarea cu 2 realizeaz o dependen
direct asupra metabolismului celulelor
productoare de Epo. 2 - hemoreceptorii i
producerea Epo n rinichi sunt stimulai n condiii
de hipoxie (cu perturbarea metabolismului
oxidativ n celulele senzoriale).

Hipoxia activeaz o serie de gene, care asigur

adaptarea celulelor i esuturilor la condiii de
insuficien de 2 .
Rspunsul celular la stimulii indui de hipoxie
se bazeaz pe activarea unei proteine HIF- 1
(hipoxia inductible factors), care reprezint un
factor de transcriptie ale acestor gene (cca. 60
de gene), printre care i gena eritropoietinei.
n structura genei Epo, la captul 3, se gasete
situs-ul pentru HIF-1, la cuplarea crora are loc
iniierea transcripiei i sinteza pre- ARNm
pentru Epo.

Reglarea expresiei genei este dependent de

cantitatea 2 n snge i esuturi, nivelul Ht, precum
i de concentraia eritropoietinei n snge.
Feedback ul n expresia genei
Concentraia Epo n vasele renale
Revenirea la norm a nivelului Ht

Inhibiia producerii Epo endogen

1. Receptorii membranari ai celulelor secretoare
primesc semnal despre conc. Epo i l transmit
2. Ribozomilor (particip la biogeneza Epo)
3. Exportinele din anvelopa nuclear regleaz
viteza de transport a ARN-urilor din nucleu n
citoplasm.

Expresia genei Epo

Expresia genei Epo este esut specific i n
dependen de perioada ontogenetic.

Exist 2 elemente reglatoare de iniiere a

expresiei genei:
Element reglator pozitiv : HIFs i HNF 4
Element reglator negativ: elemnte de restricie.
HIF- 1 i 1 , 2 identific enhaincer-ul i se
leag cu acesta la nivelul secvenei
5'-TACGTGCT-3
Proteina p300 leaga aceste 2 subunitati si
formeaza complexul de initiere a transcriptiei TIC
care se leaga de promotor.
Dup formarea complexului de iniiere a
transcripiei vine ARN polimerazaII i ncepe
sinteza pre ARNm.

 CAP- are - G-transferaza, GTP

Poliadenilare - Poly- A- polimeraza
Splecing constitutiv recunoaterea i
nlturarea intronilor de ctre ribozimele
-

Eritropoietin ARNm
ERBP proteina Eritropoietin ARNm de legare (bogat n pirimidine)
se leag specific de o regiune la captul 3. Epo ARNm (120 pb).
Acest complex are scopul de a mentine stabilitatea Epo ARNm.

Transferul Epo ARNm din nucleu

n citoplasm de ctre exportine

La nivel de translaie expresia Epo este reglat

de uORF (upstream open reading frame). Acest
element de reglare poate funciona doar dup
ce a avut loc recunoaterea subunitii
ribosomale 40 S de ctre CAP-ul Epo ARNm i
asocierea factorilor de iniiere a translaiei.
eIF
eEF
RF
Epo ARNm
ARNt ribozomi ataai
Aminoacil- ARNt-sintetaza aminoacizi

Locul biosintezei
Eritropoietina se sintetizeaz pe ribozomii ataai
REr n celulele esutului renal i anume n stratul
cortical.
Celulele epiteliale ale aparatului
juxtaglomerular
Celulele endoteliale din capilare glomerulului.
Celulele epiteliale ale canaliculelor
Precum i n stratul medular de ctre celulele
interstiiale.

Sinteza extrarenal (5- 15 %)

Celulele Ito hepatice (10 %) hepatocitele din
jurul venelor centro- lobulare ale ficatului fetal
Macrofagele maduvei osoase (per. embrionara)
Encefal Epo avind rol local nu poate trece
bariera hemato-encefalica.
Splin, plmni, testiculi, intestin, uter
Unele tipuri de tumori.
Hormonul se menine n snge cu o
concentraie de 15-30 miliuniti / ml de ser.

Conformatia proteinei
Maturizarea proteinei are loc n ap. Golgi unde
enzimile specifice glicoziltransferaze,
catalizeaz legarea resturilor de carbohidrai la
lanul polipeptidic i formarea glicoproteinei.
Glicozilarea este indispensabil n activitatea
biologic.
Serina 126 este un site de O-glicozilare.
Asparaginele: Asn-24, Asn-38 i Asn-83, sunt
3 regiuni de N-glicozilare.

Structura primar a eritropoietinei

Epo este o glicoproteina din familia citokinelor din

clasa I.
Din punct de vedere chimic,reprezint un lan
polipeptidic unit prin legturi covalente cu
monozaharide.Poriunea carbohidrailor corespunde
40%.
Aceast structur asigur stabilitatea termic i
solubilitate specific a hormonului.
Epo este o molecul foarte stabil, rezist la :
0 80 , pH- uri extreme, diferii ageni denaturani.

Structura teriar

 Structura tridimensionala prezinta 4 lanturi helix

(helix A, helix B, helix C, helix D) antiparalele.
Aceasta structura este stabilizata printr-o punte
disulfurica intre grupa amin si carboxil terminal al
moleculei.
S-au determinat 2 domenii distincte care
reprezinta zonele de fixare cu receptorul R Epo.
Proteina matura- functionala este alcatuita din 166
aa. cu masa molecular de cca 30,4 kDa.

Receptorul Epo
Receptorii Epo-transmembranari aparin superfamiliei de
receptori ai citokinelor.
La nivelul membranelor CFU- E, BFU- E stimulnd
proliferarea i diferenierea cel. Eritrocitare, precum i
mrete rata supravieuirii, blocnd apoptoza prin producerea
proteinei BCL XL.
1000 EpoR la 1 celul:

Nervoas
Ovarelor
Testiculelor
Musculare netede
Vaselor sangvine

Cardiomiocite
Endoteliocite
Epiteliu renal,
pulmonar

Funciile

EPO regleaz producia de aproximativ 2,3

milioane de celule pe secund.
Controleaz i regleaz proliferarea i
diferenierea CFU E (colony forming units
erythrocite , colonii formatoare de eritrocite)
Frneaza apoptoza
Grbete sinteza Hb n reticulocite i celulele
eritrocitare, precum i a spectrinei
Mrete VSC n esuturile eritropoietice
(mduva hematogen) i ieirea n patul
vascular a reticulocitelor.

Sub aciunea Epo are loc scurtarea perioadei

intermitotice a celulelor, astfel grbind
maturizarea eritrocitelor. Pe parcursul
diferenierii celulelor liniei eritrocitare are loc
micorarea numrului de receptori, precum i
scderea sensibilitii la Epo.

Au fost demonstrate i efectele neuroprotectorii ale

Epo, aciunea asupra statutului afectiv i
psihofiziologic, hemostazei, starea funcional a
endoteliocitelor fiind legate de efectul antiapoptotic,
antihipoxic,trofic, dezintoxicant i antioxidant.
Epo are efect de stimulare a diferenierii i a celulelor
din linia megacariocitar, monocitar i granlocitar.
Epo realizeaz efecte mitogen i chimotaxic asupra
endoteliului, ce presupune capacitatea de a induce
neo angiogeneza

Eritropoietina este implicat n diferite modificri

cantitative ale eritropoiezei.
1.Anemia determinat de anomalii de producere a
Epo: eritropatii
2.Policitemia
Mutaiile aminoacizilor cuprinse ntre 99- 118 i 111129 determin inhibarea activitatii biologice a Epo.
Regiunea critic n funcia biologic este la aa. 99- 110.
Dou poziii diferite de Arg (Arg103 i Arg 14 ,
implicate n site-ul 2 de legare cu R- Epo) sunt
foarte sensibile la mutaii care au ca rezultat
pierderea bioactivitii.

Eritropoietina exogen
n anul1986-1987, au fost efectuate
primele teste clinice de studiere a efectului
eritropoietinei recombinant produs pe
celule de mamifere n organismul uman
pentru tratamentul anemiei secundare
patologiilor renale.
n prezent, Eritropoietina este utilizat pe larg
n tratamentul pacienilor ce sufer de anemie
de diferit etiologie.
Preparatele ale Eritropoietinei recombinate :
Epoietina i Epoitina

Eritropoietina v mulumete
pentru atenie!

Bibliografie
Nonrenal regulation of EPO synthesis
Alexander Weidemann and Randall S Johnson,
Division of Biology, University of California, San
Diego, La Jolla, CA, USA
Hepatic Erythropoietin Gene Regulation by GATA-4,
Christof Dame, Martha C. Sola, Kim-Chew Lim, Kelly
M. Leach, Joachim Fandrey, Yaluan Ma, Gisela
Knpfle, James Douglas Engel and Jrg Bungert
The molecular mechanism of erythropoietin action
Mark J. KOURY and Maurice C. BONDURANT
Division of Hematology, Vanderbilt University School of
Medicine and Veterans Administration Medical Center,
Nashville, USA (Received July 2, 1992) - EJB 92 0929
http://humbio.ru/humbio/physiology/0019321d.htm


, ..,
.., .., .., ..
.
2012. 6;

,..
Erythropoietin: Structure, Control of Production,
and Function ,Wolfgang Jelkmann
Erythropoietin: a model system for studying oxygendependent gene regulation, H. Franklin Bunn*, Jie
Gu, L. Eric Huang, Jong-wan Park Andhao Zhu

 Rgulation de lrythropose :applications

physiopathologiques en nphrologie par Y.
Zermati, F. Fakhouri, R. Delarue, J. A. Ribeil, B.
Knebelmann, O. Hermine
, . .,
. ., 1987