Curs 25.

Genul Bordetella. Genul Brucella. Genul Listeria

Genul Bordetella
Microorganismele din genul Bordetella sunt cocobacili polimorfi, imobili, nesporulai,
capsulai, gram negativi, asemntori celor din genul Haemophilus, strict aerobi. Specia tip
este reprezentat de B. pertussis agentul etiologic al tusei convulsive; alte exemple sunt
reprezentate de Bordetella parapertussis i Bordetella bronchiseptica. Sunt germeni
pretenioi; pentru a se dezvolta au nevoie de medii de cultur mbogite.
Bordetella pertussis
Bordetella pertussis este patogen numai pentru om. Transmiterea se realizeaz n special
pe cale aerian (picturi Pflgge) ntr-un acces de tuse. Contagiozitatea este maxim n primul
stadiu de boal i la nceputul stadiului al doilea (de tuse paroxistic). Microorganismul ader,
se multiplic rapid, interfer cu activitatea mucociliar normal, apar primele manifestri
clinice care se agraveaz treptat. Substanele toxice elaborate (i n special toxina pertussis /
TP) au urmtoarele aciuni: TP conduce la hipoglicemie, sensibilizare la histamin, reducerea
activitii macrofagelor, diminuarea rspunsului imun umoral (sinteza de anticorpi);
adenilatciclaza pertussis diminu activitatea fagocitar a macrofagelor i leucocitelor; toxina
letal produce necroze locale, citotoxina traheal are efect citotoxic pe celulele ciliate etc.
Diagnosticul de laborator microbiologic n infeciile cu Bordetella pertussis este
bacteriologic, direct; diagnosticul serologic este tardiv i ar putea fi util pentru un diagnosticul
diferenial (post-factum) sau din punct de vedere epidemiologic.
Diagnosticul etiologic este foarte util n primul stadiu al tusei convulsive (pacientul este
foarte contagios iar evoluia bolii poate fi influenat pozitiv prin administrarea de
antibiotice); identificarea B. pertussis la persoanele asimptomatice i respectiv la contaci ar
permite aplicarea unor msuri preventive.
1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd o serie
de reguli (ct mai aproape de debutul bolii, nainte ca pacientului s fi primit antibiotice, ct
mai rapid i corect din punct de vedere al tehnicilor utilizate, respectnd toate normele de
asepsie i antisepsie etc). n infeciile produse de Bordetella pertussis se pot recolta secreii de
la nivelul tractului respirator superior (nazal, faringian); vom realiza recoltarea cu ajutorul
tamponului din alginat de calciu care se las pe loc 30-60 de secunde pentru a favoriza
adsorbia B. pertussis (bumbacul inhib dezvoltarea microorganismelor) sau prin aspirarea
secreiilor traheobronice. Este descris i metoda plcilor tuite (se expune o plac Petri cu
mediul Bordet-Gengou la care s-a adugat antibiotic, deschis, la aproximativ 20 cm n faa
gurii bolnavului n timpul accesului de tuse). Este recomandat prelucrarea imediat a p.p.,
dac este posibil la patul bolnavului (microorganismul fiind foarte puin rezistent n mediul
extern). Nu exist o metod perfect pentru recoltarea p.p. atunci cnd se suspicioneaz o
infecie cu B. pertussis (toate metodele au diferite limite att din punctul de vedere al
sensibilitii sau specificitii ct i din punct de vedere practic).
2. Examinarea microscopic a produsului patologic include realizarea a minim dou
frotiuri din produsul patologic, care se vor colora cu albastru de metilen (AM) i respectiv
Gram. Examinm frotiurile la microscopul optic cu imersie i notm prezena celulelor
inflamatorii (ex. leucocite) i prezena cocobacililor gram-negativi, dispui separat sau n
perechi, rareori n lanuri scurte. Datorit faptului c aceste microorganisme se coloreaz
relativ slab n coloraia Gram ar putea fi necesar colorarea frotiului de rezerv printr-o alt
metod (imunofluorescen direct) sau recolorarea prelungit cu fucsin sau safranin.
3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct s se
poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica. Bordetella
1

pertussis este un microorganism foarte pretenios care nu se poate dezvolta pe medii de

cultur obinuite; este inhibat de acizi grai, peroxizi organici etc. Izolarea B. pertussis n
culturi este dificil, dar eforturile sunt necesare pentru a putea fi evaluat variaia genetic (de
faz) i respectiv pentru a putea supraveghea fenomenul apariiei rezistenei la antibiotice i
chimioterapice.
Bordetella pertussis necesit pentru cultivare nicotinamid sau acid nicotinic i o
temperatur optim de 35-37C, cu incubare timp de 3-7 zile, n aerobioz i atmosfer
umed. Cel mai cunoscut mediu de cultur este mediul Bordet-Gengou care conine agar,
macerat de cartof, snge, glicerol i devine selectiv prin adugare de penicilin / meticilin
sau cefalexin. Albuminele plasmatice din acest mediu leag acizii grai i permit dezvoltarea
microorganismelor. Dezavantajul principal al mediului clasic Bordet-Gengou este reprezentat
de timpul scurt n care poate fi utilizat (1-7 zile).
Actualmente se recomand utilizarea unui mediu folosit iniial ca mediu de transport, care
include geloz nutritiv, crbune activat i este suplimentat cu 10% snge de cal. Acest mediu
poate fi utilizat pe parcursul a 1-2 luni, iar coloniile de B. pertussis apar mai rapid.
n vederea izolrii primare este necesar mediul Bordet-Gengou sau mediul cu crbune
activat, ns prin treceri repetate coloniile se pot dezvolta i pe geloz-snge sau chiar i pe
geloz simpl. Microorganismul se va multiplica mai rapid, coloniile vor fi mai opace i vor
aprea modificri morfologice (pleomorfism), alterri structurale, virulena fiind sczut.
4. Identificarea microorganismului implicat patogenic se va realiza pe baza mai multor
caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: sunt cocobacili gram negativi, mici, cu dimensiunea de 0,2-0,5
m / 0,5-2 m, imobili, dispui separat sau n perechi, rareori n lanuri scurte, cu tendina de
a deveni pleomorfi n urma subcultivrilor (pot aprea i forme filamentoase). Utiliznd
coloraii speciale, n coloniile rezultate din primoculturi se pot evidenia structurile capsulare.
Dac frotiul se coloreaz cu albastru de toluidin, se pun n eviden granule metacromatice
situate bipolar. Imunofluorescena direct este util i pentru identificarea microorganismului
dup cultivare.
b) Caractere de cultur: produc colonii de tip S sau M. Dup 3-7 zile de incubare la 37C pe
mediul Bordet-Gengou se pot dezvolta colonii de tip S mici, convexe, uor transparente, cu
strlucire metalic, foarte aderente, nconjurate de un halou de hemoliz (faza I). n lumina
transmis oblic coloniile seamn cu picturile de mercur. Pe mediul cu crbune activat
coloniile apar mai repede, sunt tot de tip S, mici, convexe, negre, cu suprafaa perlat.
c) Caractere biochimice:
Bordetella pertussis este hemolitic, oxidazo-pozitiv, ureazo-negativ.
Se pot utiliza truse comerciale manuale care identific specii de bacili gram negativi (ex. API
20 E, API 20 NE), fiind de regul necesare i teste adiionale de identificare.
d) Caractere antigenice:
Se utilizeaz seruri cu anticorpi cunoscui pentru identificarea tulpinilor de Bordetella
pertussis, prin reacia de aglutinare pe lam.
e) Alte teste de identificare utilizate n laboratoare de referin: se poate utiliza amplificarea
genetic folosind diferite amorse (primeri); tehnica PCR are o bun specificitate i
sensibilitate dezavantajul principal fiind reprezentat de costul ridicat.
5. Antibiograma (verificarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice n vederea
stabilirii tratamentului) poate fi necesar n scopul supravegherii apariiei fenomenului de
rezisten la antibiotice i se realizeaz prin metode difuzimetrice.
Diagnosticul serologic este tardiv. Din punct de vedere tehnic au fost utilizate RFC,
reaciile de aglutinare, hemaglutinare i hemaglutinoinhibare sau tehnicile de tip ELISA.
Anticorpii apar din a 2-a sau a 3-a sptmn de boal. Diagnosticul serologic ar putea fi util
pentru un diagnosticul diferenial (retrospectiv) sau din punct de vedere epidemiologic.

Genul Brucella
Genul Brucella cuprinde 7 specii, cu numeroase biotipuri, care infecteaz animalele i se
pot transmite de cele mai multe ori accidental omului de ex. Brucella melitensis (capre, oi),
Brucella abortus (vaci), Brucella suis (porci), Brucella canis (cini). Sunt cocobacili
Gram-negativi (de multe ori colorai bipolar), cu dimensiuni de 0,5-0,6 m/ 0,6-1,5 m,
imobili, prezentnd eventual o structur capsular, nesporulai, localizai n mod caracteristic
intracelular, aerobi facultativ anaerobi, catalazo pozitivi, relativ inactivi metabolic, care se
dezvolt relativ dificil pe mediile de cultur intrnd n categoria bacteriilor pretenioase cu
necesiti nutritive complexe, sunt bacterii fastidioase (mai ales atunci cnd se realizeaz
cultivarea iniial, din p.p.).
Brucelele sunt microorganisme parazite pentru o serie de animale sau pentru om, capabile
s determine infecii acute, cronice sau infecii inaparente. Cronicizarea depinde de
capacitatea de multiplicare n celule fagocitare. Formele cele mai grave apar ca urmare a
infeciei cu Brucella melitensis, urmat de infecia cu Brucella suis, Brucella abortus i
respectiv Brucella canis.
Transmiterea la om poate fi realizat pe cale digestiv, cutanat i mai rar pe cale
respiratorie. De la nivelul porii de intrare, microorganismele ajung la nivelul ganglionilor
limfatici regionali, depesc aceast barier i pe calea ductului toracic ajung n snge iar pe
cale sangvin n organele cu sistem reticulohistiocitar i la nivel osos. Incubaia este n medie
de 2-3 sptmni, ns uneori pot trece cteva luni ntre momentul infectrii i apariia
fenomenelor clinice. Debutul este de obicei insidios, manifestat prin astenie, indispoziie,
cefalee, artralgii, febr moderat, transpiraii abundente.
n perioada de stare simptomele sunt polimorfe, bruceloza fiind una din bolile extrem de
greu de recunoscut clinic. Febra ondulant (care crete n cursul dup amiezii i scade n
timpul nopii) nsoit de frisoane are o valoare istoric. n realitate, curba febril are un
aspect variabil. Transpiraiile abundente nocturne, cu un miros caracteristic, astenia, durerile
sub diverse forme reprezint alte elemente care pot fi comune n cursul bolii. S-au descris
circa 200 de semne clinice care pot apare n bruceloz.
Durata bolii poate fi de 3-4 sptmni, dar cel mai frecvent depete 3 luni, ajungnd n
formele cronice la ani de zile. n formele cronice diagnosticul se stabilete foarte dificil.
Diagnosticul brucelozei
n principiu, n realizarea diagnosticului se pornete de la aspecte clinice i
epidemiologice, ns diagnosticul de laborator este esenial, reprezentnd unica metod cert
pentru un diagnostic pozitiv.
Diagnosticul de laborator n bruceloz poate fi bacteriologic (direct) sau serologic.
Diagnosticul bacteriologic include urmtoarele etape.
1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd regulile
cunoscute, n special ct mai rapid dup debutul bolii i nainte de iniierea antibioterapiei.
Produsul patologic este reprezentat cel mai frecvent de snge, dar s-ar putea recolta i prin
puncie ganglionar, puncie medular (rata de izolare crete), puncie hepatic sau splenic,
sau ar putea fi reprezentat de LCR, urin, bil, lapte, materiale necroptice etc n funcie de
simptomatologie i stadiul bolii. n continuare vom discuta situaia n care se realizeaz o
hemocultur prin metode clasice sau n sisteme de cultivare rapide, de tipul BactAlert,
Bactec sau Septi-Chek.
2. Examinarea microscopic a produsului patologic nu aduce de regul informaii utile
diagnosticului, n special dac este vorba de snge. Se poate folosi tehnica imunofluorescent
care uneori duce la rezultate pozitive.
3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct s se
poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica. Toate speciile au

cerine nutritive complexe necesitnd pentru dezvoltare medii mbogite cu substane

nutritive (aminoacizi, proteine serice, glucoz, sruri, vitamine, ser, snge etc). Se recomand
efectuarea hemoculturilor n mediul bifazic (solid-lichid), ex. tip Castaneda. Cultura se
incubeaz n atmosfer de 5-10% CO2, la 37C pentru o perioad de minim 2-3 zile; culturile
negative trebuie urmrite pn la 4 sptmni. n cazul mediului bifazic, vom nsmna panta
de mediu solid la fiecare 2-3 zile, fr a deschide flaconul.
4. Identificarea microorganismului implicat patogenic se va realiza pe baza mai multor
caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: Sunt cocobacili gram-negativicu cu dimensiuni de 0,5-0,6 m/
0,6-1,5 m, dispui izolat sau n perechi, lanuri scurte, grupat. Se pot colora bipolar. Poate fi
necesar o prelungire a timpului de recolorare cu fucsin, altfel sunt palid colorai.
b) Caractere de cultur:
Pe mediile mbogite corespunztoare nutritiv, pot produce dup 2-3 zile colonii de tip S, cu
un diametru de circa 1 mm; dimensiunea coloniilor se mrete astfel nct la 1 sptmn de
incubare diametrul poate fi de 6-7 mm; pot fi identificate (n special dup incubare prelungit)
colonii de tip R sau M
Examinate folosind o surs de lumin la 45, coloniile apar transparente, galben-deschis,
asemntor picturilor de miere n timp ce n lumina reflectat prezint o transparen
cenuiu-albstruie
c) Caractere biochimice:
Brucella spp. dup repicare pe un mediu neselectiv prezint un metabolism oxidativ
Microorganismele sunt catalazo pozitive, n timp ce testarea reaciilor oxidazei, ureazei i
producerii de H2S pot da rezultate variabile; se pot utiliza sisteme clasice de testare, dar este
posibil i utilizarea galeriilor API (ex. API 20E)
Testm necesitatea n CO2, pentru izolare.
Se mai pot verifica metabolizarea glucozei, lactozei precum i sensibilitatea la diferii
colorani inclui de ex. n medii de cultur (ex. tionin sau fucsin bazic)
d) Caractere antigenice:
Utilizm seruri imune anti-Brucella adsorbite, prin reacii de aglutinare pe lam (exist reacii
ncruciate); n cazul unei reacii pozitive, la nivelul laboratoarelor de referin se pot realiza
reacii de aglutinare pe lam cu seruri imune monospecifice (anti-A, M sau anti-R n cazul
coloniilor de tip R)
Testarea sensibilitii la bacteriofagi (lizotipia) se poate utiliza n studii epidemiologice sau n
scop de cercetare, fiind rezervat laboratoarelor de referin; spre exemplu fagul Tbilisi
lizeaz tulpinile de B. abortus, poate liza la concentraii crescute tulpinile de B. suis, dar nu
lizeaz tulpinile de B. melitensis, B. canis sau tulpinile n form R
e) Alte teste utilizate n identificare la nivelul centrelor de referin:
- tehnici ale biologiei moleculare (exist sonde nucleotidice specifice pentru diferite biotipuri
izolate mai frecvent, de ex. 1 i 3 aparinnd B. melitensis; se ncearc punerea la punct a
PCR, pentru diagnosticul brucelozei).
5. Antibiograma (verificarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice) se realizeaz
prin metoda difuzimetric standardizat, i este util att n scopul supravegherii apariiei unor
tulpini rezistente la medicamentele antimicrobiene ct i pentru stabilirea tratamentului
corespunztor n cazul unei maladii infecioase n general dificil de tratat.
Diagnosticul serologic
Este de multe ori necesar, innd cont de dificultile ntlnite n cursul diagnosticului
bacteriologic. Utilizm antigene cunoscute i ncercm s determinm prezena anticorpilor
specifici n sngele pacientului, valoarea titrului anticorpilor i respectiv evoluia acestui titru
n dinamic. Trebuie s menionm c anticorpii de tip IgM cresc n infecia acut (n cteva
sptmni) dar persist i n infecia cronic sau chiar i dup tratamentul antibiotic realizat

corespunztor (timp de 1-2 ani). Anticorpii de tip IgG apar dup circa 3 sptmni de la
debutul brucelozei, ating o valoare maxim la 6-8 sptmni i persist n cazul unei infecii
cronice.
n special din punct de vedere istoric discutm i putem practica n cadrul lucrrilor
practice, aglutinarea pe lam (Huddleson, reacie calitativ, de screening). Cea mai cunoscut
i utilizat tehnic de diagnostic serologic este reacia de aglutinare n tuburi (Wright) prin
care putem determina att titrul anticorpilor de tip IgM ct i cel al anticorpilor de tip IgG.
Avnd n vedere faptul c n bruceloz apar i anticorpi blocani (Ac de tip IgA care
blocheaz activitatea aglutinant a Ac IgM sau IgG), care pot persista ani de zile, exist
dificulti i n ceea ce privete interpretarea rezultatelor obinute n diagnosticul serologic.
Pentru a simplifica, considerm c un titru 1/160 este sugestiv, n timp ce o cretere de 4
ori n dinamic a titrului, poate confirma diagnosticul de bruceloz.
Exist o serie de variante tehnice care permit reducerea erorilor de interpretare:
- diluarea suplimentar a serurilor de cercetat
- testul de blocare (adugm tuburilor n care reacia Wright este negativ cte 1
pictur de ser imun anti-Brucella; dac reacia rmne negativ i nici n acest caz nu apare
aglutinarea, concluzionm c n serul de cercetat exist anticorpi blocani)
- testul Coombs
- utilizarea unei tehnici de tip ELISA pentru detectarea Ac de tip IgM i IgG care apar
fa de proteinele membranei externe etc.
Diagnosticul imunobiologic
Datorit faptului c n infecia cu Brucella spp. este stimulat n special rspunsul imun
mediat celular, diferii autori menioneaz utilizarea intradermoreaciei cu brucelin n
investigarea unui caz suspect de bruceloz. IDR cu brucelin poate identifica existena unei
stri de hipersensibilitate de tip IV, fa de antigenul brucelos.

Genul Listeria
Genul cuprinde mai multe specii dintre care cea mai important specie este Listeria
monocytogenes, care poate produce infecii variate, umane i animale. Mai rar au fost izolate
tulpini din speciile L. ivanovii i sau L. seeligeri. Sunt bacili fini Gram-pozitivi, aerobi
facultativ anaerobi, mobili la 25C, care se dezvolt preferenial la 30C dar se poate
multiplica i la temperatura frigiderului (mbogire la rece).
Listeria monocytogenes
Listeria monocytogenes este patogen prin multiplicare i invazivitate (prezint o
structur asemntoare proteinei M streptococice, produce diferite substane cu rol n
invazivitate, inclusiv lecitinaza, fosfolipaza C i listeriolizina O, cu efect hemolitic).
Infecteaz probabil iniial celulele intestinale, supravieuiete intracelular i se multiplic
intramacrofagic.
Listerioza este o zoonoz. Infecia uman apare accidental i foarte frecvent evolueaz
inaparent. Dintre manifestrile clinice grave amintim listerioza perinatal, probabil o infecie
intrauterin (avort spontan, natere prematur, sepsis cu deces nainte sau relativ repede dup
momentul naterii etc). La aduli pot aprea meningoencefalit, bacteriemie urmat de
metastaze septice (mai ales la imunodeprimai) i mai rar, diferite infecii focalizate.
Dintre toate tipurile antigenice, 90% dintre tulpinile izolate la om aparin tipurilor Ia, Ib i
IVb. Putem meniona c tipul IVb a fost mai frecvent asociat cu consumul de brnz fcut din
lapte nepasteurizat. Asocierea unor epidemii de listerioz cu consumul de alimente
contaminate sugereaz calea gastrointestinal drept cea mai important cale de ptrundere.

Diagnosticul de laborator microbiologic n infeciile cu Listeria monocytogenes este

bacteriologic, direct.
1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd regulile
cunoscute (ct mai aproape de debutul bolii, nainte ca pacientului s fi primit antibiotice, ct
mai rapid i corect din punct de vedere al tehnicilor utilizate, respectnd toate normele de
asepsie i antisepsie etc). Diagnosticul de laborator se bazeaz pe izolarea i identificarea
microorganismului, n special din snge i / sau din LCR. n infeciile produse de Listeria
monocytogenes se mai pot recolta lichid amniotic, placent, esut fetal, dar i prelevate
patologice contaminate cu ali germeni precum materii fecale, secreii genitale, alimente,
probe din mediul extern etc.
2. Examinarea microscopic a produsului patologic include realizarea a minim dou
frotiuri din produsul patologic recoltat i transportat corespunztor, care se vor colora cu
albastru de metilen (AM) i respectiv Gram. Listeria monocytogenes se prezint ca bacili sau
cocobacili gram pozitivi, cu dimensiuni de 0,5 - 5 m / 0,5 - 0,8 m, dispui izolat, n perechi
sau n lanuri scurte, intra sau extracelular.
3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct s se
poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica. De menionat c
se poate multiplica la temperaturi ce variaz ntre 2-45C (temperatura optim fiind de
20-30C); n culturile iniiale, temperatura sczut favorizeaz multiplicarea L.
monocytogenes (mbogire la rece); tolereaz o atmosfer de 5 - 10% CO 2 precum i
concentraii de peste 5% NaCl.
n cazul p.p. necontaminate (snge, LCR etc) vom utiliza spre ex. agar glucozat sau
triptozat, suplimentat cu 5% snge de berbec. Atunci cnd dorim s realizm izolarea pornind
de la p.p. contaminate (alimente, materii fecale etc.) este necesar s folosim medii de cultur
selective spre exemplu nsmnm iniial o parte p.p. n 9 pri de bulion pepton-tripton cu
extract de carne i drojdie, suplimentat cu cu acid nalidixic i acriflavin iar dup 2-7 (sau
chiar 30) zile de incubare la temperatura frigiderului, incubm nc 18-24 de ore la 35-37C.
Ulterior realizm o repicare pe medii selective (ex. agar, acriflavin, polimixin B, clorur de
litiu, ceftazidim etc). Exist i alte strategii folosite pentru izolarea L. monocytogenes.
4. Identificarea microorganismului implicat patogenic se va realiza pe baza mai multor
caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: Sunt bacili fini sau cocobacili gram pozitivi, cu dimensiuni de
0,5-5 m / 0,5 - 0,8 m, dispui separat sau grupai n palisade, n perechi sau n form de
litere (asemntor corynebacteriilor). n culturile tinere predomin formele cocobacilare n
timp ce n culturile vechi se caracterizeaz prin pleomorfism i pot aprea forme filamentoase.
n preparatul proaspt se poate demonstra mobilitatea, n special dac s-a meninut cultura la
18-25C (sau la temperatura camerei).
b) Caractere de cultur: Cultura degaj un miros de lapte acidulat. L. monocytogenes formeaz
colonii de tip S. Dup 1-2 zile de incubare la 35-37C pe agar glucozat, coloniile ating un
diametru de 1-1,5 mm (mai mici pe agarul triptozat); pot s aib aspect de picturi de rou. Pe
agar-snge, coloniile sunt nconjurate de o zon discret de b-hemoliz. Dac nsmnm
prin nepare o coloan de mediu semisolid, datorit mobilitii va aprea creterea n
umbrel, caracteristic pentru L. monocytogenes. Multiplicarea la temperaturi extreme (245C) poate fi util pentru identificare.
c) Caractere biochimice:
L. monocytogenes produce o zon discret de beta-hemoliz.
Utilizarea unor tulpini standard de Staphylococcus aureus (pentru L. monocytogenes i
L. seeligeri) sau de Rhodococcus equi (pentru L. ivanovii) n cadrul testului CAMP este util
pentru identificare.

L. monocytogenes este catalazo-pozitiv i fermenteaz o serie de carbohidrai (fr

producere de gaz).
Se pot utiliza truse comerciale manuale (ex. API Listeria sau API 20 Strep) i respectiv truse
automate (ex. rapid ID 32 Strep) care permit identificarea L. monocytogenes n 4-24 de ore, n
funcie de trusa utilizat.
d) Caractere antigenice:
Se utilizeaz seruri cu anticorpi cunoscui pentru identificarea tulpinilor de Listeria
monocytogenes, prin tehnici imunologice, n funcie de Ag somatice sau flagelare. Serotiparea
este util n scop epidemiologic. Exist 13 serotipuri (serovaruri) majoritatea tulpinilor izolate
la om aparinnd tipurilor Ia, Ib i IVb.
Sensibilitatea la bacteriofagi: Lizotiparea este foarte util n scop epidemiologic; exist tulpini
care nu pot fi testate prin aceast metod.
e) Caractere de patogenitate: n general, tulpinile de Listeria monocytogenes izolate de la
pacieni sunt virulente. n laboratoare de referin pot fi efectuate ns i teste de patogenitate.
Dintre acestea o variant este reprezentat de cultivarea n bulion timp de 24 de ore, urmat de
inocularea unei picturi de cultur n sacul conjunctival la iepure sau cobai; tulpina virulent
va determina apariia unei conjunctivite purulente n 1-3 zile. Alte modaliti de studiere a
virulenei tulpinilor izolate sunt reprezentate de inoculri la oareci imunocompromii
(inoculare intraperitoneal) sau de inocularea membranei chorioalantoidian a oului
embrionat de gin.
f) Alte teste rezervate centrelor de referin: n scop epidemiologic sau n cadrul unor studii
taxonomice se pot utiliza Multilocus Enzyme Electrophoresis (MLEE), analiza
macrorestriciei ADN, RFLP sau RAPD-PCR.
5. Antibiograma (verificarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice n vederea
stabilirii tratamentului) poate fi necesar i se realizeaz de obicei prin metode difuzimetrice.
n cazul infeciilor grave se vor determina CMI i CMB.
BIBLIOGRAFIE:

1.

Popa M.I. (coord.), Diagnosticul de laborator n infeciile produse de microorganisme din

genul Bordetella, Microbiologie Medical, vol 2 - curs UMF Carol Davila, 2010.
2. Popa M.I. (coord.), Diagnosticul de laborator n infeciile produse de microorganisme din genul
Brucella, Microbiologie Medical, vol 2 - curs UMF Carol Davila, 2010.
3. Popa M.I. (coord.), Diagnosticul de laborator n infeciile produse de microorganisme din genul
Listeria, Microbiologie Medical, vol 2 - curs UMF Carol Davila, 2010.