Curs 23.

Genul Campylobacter.
Genul Helicobacter. Helicobacter pylori
Genul Campylobacter
1. Definiie. ncadrare
Microorganismele descrise n acest curs erau anterior grupate mpreun cu vibrionii i erau
cunoscute ca patogeni ai unor variate specii animale la care produceau septicemii, avorturi sau
enterite (1963, vibrioni microaerofili). Ulterior s-a identificat specia Campylobacter jejuni ca
agent etiologic al diareei umane iar aceti vibrioni au fost ncadrai, avnd la baz
secvenierea ARNr 16S, precum i caracterele de cultur i biochimice diferite n genurile
Campylobacter, Arcobacter, Helicobacter i Wolinella.
Genul Campylobacter conine 18 specii i subspecii, iar genul Arcobacter conine 4.
2. Caractere generale
2.1. Habitat
Habitatul natural al microorganismelor din genul Campylobacter cuprinde psrile, att cele
domestice, ct i cele slbatice, acestea reprezentnd principalele surse ale infeciei pentru
oameni.
2.2. Caractere morfotinctoriale
Bacteriile din genul Campylobacter sunt bacili gram negativi curbai, mobili, iar majoritatea
speciilor au un singur flagel polar. Dup cultivarea prelungit sau dup expunerea la oxigen,
microorganismele dobndesc o form cocoid (ceea ce ar putea preta la confuzii de
interpretare).
2.3. Caractere de cultur
Sunt bacterii microaerofile, spre anaerobe. Se dezvolt cel mai bine ntr-o atmosfer srac n
oxigen (5-10%) i mbogait cu CO2 (10%). n mod obinuit, sunt utilizate medii de cultur
selective, de exemplu mediul Skirrow care conine vancomicin, polimixin B i trimetoprim
cu scopul de a inhiba creterea altor bacterii. Temperatura optim de dezvoltare pentru
C. jejuni, C. coli i C. lari este de 42C (bacterii fiind cunoscute sub numele de grupul
termofil, dei nu sunt bacterii termofile n sensul strict al cuvntului). Coloniile sunt incolore
sau gri i pot fi convexe i rotunde sau apoase cu tendin la confluare.
2.4. Caractere biochimice
Sunt oxidaz i catalaz-pozitive. Nu fermenteaz carbohidraii.
2.5. Rezistena fa de factori fizici i chimici
Sunt mult mai sensibile n comparaie cu majoritatea bacteriilor. Sunt distruse de procedeele
obinuite de pasteurizare ale laptelui. C. jejuni supravieuiete n ap la 4C timp de cteva
sptmni, dar acest timp este mult scurtat la temperaturi de peste 15C.
2.6. Structura antigenic
Structura antigenic a bacteriilor din genul Campylobacter este similar cu cea a tuturor
microorganismelor Gram negative. Menionm lipopolizaharidul (de fapt un lipooligozaharid)
cu activitate de endotoxin i porinele membranei externe. De asemenea, exist i antigenul
flagelar.
2.7. Rspunsul imun
Anticorpii serici de tip IgG i IgM nregistreaz un maxim la 2-4 sptmni dup infecie,
apoi scad rapid. Pacienii expui frecvent la bacterii din genul Campylobacter au concentraii
1

crescute de IgA care sunt nsoite de imunitate. Pacienii care au infecie cu Campylobacter
pot avea un test fals pozitiv pentru anticorpi anti-Legionella.
2.8. Caractere de patogenitate.
Caracterele de patogenitate specifice genului Campylobacter reprezint subiectul unor
cercetri aflate nc n desfurare. Pe scurt, cele mai importante sunt:
1. Variabilitatea genetic caracterizeaz C. jejuni i este cauzat de mecanisme intragenomice
(variaii de faz, duplicri i deleii de gene, mutaii punctiforme) precum i de schimbul
genetic ntre tulpini (transfer orizontal de plasmide i de ADN cromozomal). Acest transfer
are loc att in vitro ct i n timpul colonizrii psrilor.
2. Lipooligozaharidul are rol n aderena la celula epitelial i n invazivitate. Unele
componente ale sale, datorit asemnarii structurale cu prti ale mielinei, declaneaz un
rspuns imun ncruciat cu acestea.
3. Flagelul: motilitatea este important pentru colonizarea gazdei de ctre bacterie. C. jejuni
prezint chemotaxie pentru aminoacizii i alte componente ale mucusului tractului intestinal.
4. Toxina CDT (Cytolethal Distending Toxin) este produs i de alte bacterii (E. coli,
Haemophilus ducreyi, Helicobacter hepaticus). Aceasta cauzeaz oprirea ciclului celular n
celulele-gazd. Mecanismele precise prin care CDT ajunge la nivelul nucleului sunt nc n
studiu.
5. Molecule de adezivitate: sunt utilizate diferite proteine de adezivitate cum ar fi CadF, JlpA,
Peb1.

Genul Helicobacter
1. ncadrare
Genul cuprinde 18 specii, cum ar fi: Helicobacter pylori, Helicobacter heilmannii (a fost
identificat la pisici, cini, unele primate; atunci cnd afecteaz oamenii, cauzeaz doar o
gastrit moderat, dei infectia cu H. heilmannii este ntlnit deseori n asociere cu Limfomul
de tip MALT (Suerbaum), Helicobacter fennelliae i Helicobacter cinaedi.
Ultimele 2 specii se comport din punct de vedere clinic asemntor cu Campylobacter
jejuni.
2. Caractere generale
2.1. Habitat
Helicobacter pylori colonizeaz stomacul n 60-70% din dispepsiile fr ulcer i mult mai
frecvent n ulcerul peptic. Este identificat la polul luminal al celulelor epiteliului gastric, sub
stratul de mucus sau n zonele profunde ale acestuia, fr a invada mucoasa gastric. Ureea
reprezint un important element nutritiv, iar amoniacul produs de ureaz i asigur pH-ul
optim necesar multiplicrii.
Prima cultur de H. pylori a fost obinut n anul 1982. Germenii izolai de la pacienii cu
gastrite i ulcer duodenal au primit iniial numele de Campylobacter like, apoi Campylobacter
pyloridis, Campylobacter pylori, iar din 1989 fac parte din noul gen, genul Helicobacter cu
specia tip H. pylori.
2.2. Caractere morfotinctoriale
Helicobacter pylori are aspect de vibrion Gram-negativ, cu o lungime de 2,5 m i o grosime
de 0,5 m, cu unul sau mai muli flageli polari, mobil, cu micri caracteristice, uneori cu
form de spiril, necapsulat, nesporulat. Poate prezenta i cili laterali. S-au descris i forme
cocoide despre care se crede c reprezint o form de rezisten.

2.3. Caractere de cultur

Se dezvolt n 2-7 zile pe medii de cultur neselective (agar-chocolate, medii cu infuzie de
creier i inim sau agar-Brucella suplimentat cu 5-7% snge de cal) sau pe medii selective n
care se adaug de exemplu amfotericin B i polymixin sau cefsulodin, n condiii de
umiditate relativ ridicat i un procent de 5-10% CO2.
2.4. Caractere biochimice
H. pylori nu reduce nitraii, nu desface hipuratul de sodiu; unele tulpini produc H 2S pe mediul
TSI, elaboreaz ureaz i catalaz. Pe abilitatea H. pylori de a produce ureaz se bazeaz mai
multe teste diagnostice.
2.5. Rezistena fa de factori fizici i chimici
H. pylori este foarte susceptibil la deshidratare; rezist relativ puin n mediul extern. Este
dotat cu capacitatea de a supravieui i de a se multiplica la nivelul mucoasei gastrice.
2.6. Structur antigenic
Componentele morfologice ale H. pylori contureaz i structura antigenic, respectiv un
antigen somatic O (termorezistent), antigenul H flagelar (termolabil), un antigen de colonizare
(aderare) precum proteinele membranei externe. Porinele sunt printre cele mai bine
caracterizate familii de proteine ale membranei externe, incluznd mai multe canale care
permit difuzarea pasiv a nutrienilor.
2.7. Rspuns imun
Pacienii infectai cu H. pylori prezint un rspuns imun ce const n producerea de IgM
specifici. Sunt produi de asemenea anticorpi de tip IgG i IgA, acetia persistnd sistemic i
la nivelul mucoasei gastrice, cu un titru mai ridicat n cazul infeciilor cronice.
O dat colonizat stomacul unui individ, ntrebarea care se impune este: cum este realizat
persistena acestei infecii? De ce sistemul imun al individului respectiv nu reuete s
combat infecia? Rspunsul este c de-a lungul timpului H. pylori a reuit s evite sistemul
imun prin mai multe mecanisme care vor fi detaliate n continuare.
n primul rnd, H. pylori st sub stratul de mucus, fr a invada epiteliul gastric, dincolo de
locul de aciune al celulelor sistemului imun. Cu toate acestea, rspunsul imun al gazdei
este activat de ataarea bacteriei de celulele epiteliale. H. pylori se poate ataa de MHC II
(complexul major de histocompatibilitate) de pe suprafaa celulelor epiteliale, declannd
apoptoza acestora. Pentru a evita rspunsul imun nnscut, este necesar neutralizarea
receptorilor Toll-like (prescurtai n continuare TLR). Acetia recunosc PAMPs (pathogen
associated molecular patterns), adic recunosc anumite molecule specifice pentru o mare
varietate de ageni patogeni care sunt diferite din punct de vedere structural de moleculele
organismului gazd. Astfel, receptorii TLR-5 recunosc flagelina caracteristic mai multor
specii bacteriene, ns nu i pe cea coninut de H. pylori. TLR-9 recunosc ADN nemetilat al
majoritii bacteriilor, dar H. pylori are un ADN puternic metilat. LPS (lipopolizaharid) a
suferit modificri, astfel nct este recunoscut doar de TLR-4 de pe macrofage, nu ns i de
receptorii aflai pe celulele epiteliale gastrice. Unul din puinele mecanisme ale imunitii
nnscute care nc este activat de catre H. pylori este calea acid diaminopimelic NOD1
stimularea NFkB secreie IL8 neutrofile ( NOD like receptors sunt un alt tip de pattern
recognition receptors, receptori care recunosc PAMPs).
Pentru imunitatea dobndit sunt necesare prezentarea antigenelor i proliferarea LT,
evenimente inhibate de ctre vacA.
n timpul rspunsului imun dobndit, limfocitele Th0 (naive) se pot diferenia fie n Th1 (care
secret IL2 i IFN), fie n Th2 (care secret IL4, 5 i 10). Th2 stimuleaz LB care produc
anticorpi mpotriva patogenilor extracelulari, n timp ce Th1 stimuleaz rspunsul imun

celular, caracteristic pentru infeciile cu microbi intracelulari. n mod paradoxal H. pylori

genereaz un rspuns predominant Th1. Studiile pe oareci au artat ca acest raspuns
predominant Th1 este asociat cu apariia gastritei, n timp ce un rspuns Th2 este protector
fa de inflamaia gastric (gastrita se pare c este cauzat de secreia de IFN, o citokin
caracteristic rspunsului imun tip Th1). Studiile epidemiologice la om au artat o polarizare
mai puin pronunat a rspunsului imun.
2.8. Caractere de patogenitate
H. pylori prezint structuri cu rol n patogenitate, respectiv antigenul de suprafa (de
colonizare, aderare), antigenul somatic O (endotoxina), toxina citotoxic care iniiaz
inflamaia local acionnd asupra celulelor din epiteliul gastric i duodenal i toxina care
inhib secreia acidului clorhidric la nivelul celulelor parietale gastrice.
Se pare c un rol destul de important n patogenitate l au ureaza, ca i prezena cililor.
3. Patogenie i patologie specific. Principalele afeciuni produse
Helicobacter pylori poate fi agent etiologic al gastritei, al ulcerului gastric i duodenal, al
cancerului gastric (este considerat carcinogen clasa I, adic n mod sigur cauzeaz cancer) i
al limfomului MALT (Mucosal associated lymphoid tissue). S-a demonstrat relaia de dubl
cauzalitate ntre H. pylori i limfom, n sensul c att infecia cu H. pylori crete riscul de
limfom, ct i eradicarea infeciei cu H. pylori conducela regresia limfomului MALT n
majoritatea cazurilor.
Pentru inelegerea evoluiei ulterioare a infeciei cu H. pylori, este necesar explicarea rolului
bacteriei n homeostazia secreiei acide. Astfel, H. pylori acioneaz asupra celulelor de tip D
cauznd scderea nivelului de somatostatin, ceea ce duce la creterea cantitii de gastrin.
n acest moment, devine important localizarea infeciei cu H. pylori, i implicit localizarea
rspunsului inflamator. n cazul gastritei, rspunsul inflamator de la nivelul celulelor parietale
inhib funcia acestora cu suprimarea produciei de acid, iar secreia gastric este caracterizat
de nivele crescute ale pH-ului. Hipoacidemia crete suplimentar gastrina care reprezint un
stimul proliferativ pentru epiteliile gastrice. Inflamaia i proliferarea continu duc la
pierderea glandelor gastrice i instalarea gastritei atrofice. Atrofia gastric reprezint unul
dintre cei mai importani factori de risc pentru cancerul gastric, mai multe ipoteze fiind
formulate pentru a explica trecerea de la atrofie la cancer. Cea mai cunoscut dintre acestea
cuprinde secvena atrofie metaplazie intestinal displazie adenocarcinom.
Gastrita predominant antral se caracterizeaz prin hipergastrinemie care de aceast dat
acioneaz prin stimularea celulelor parietale care vor crete secreia de acid, rspunsul final
fiind reprezentat de ulcerul duodenal. Ulcerul duodenal este asociat cu scderea pH-ului
secreiei gastrice, n timp ce ulcerul gastric este asociat cu scderea mijloacelor de aprare ale
mucoasei stomacului.
4. Diagnosticul de laborator n infeciile produse de Helicobacter pylori
Avnd n vedere particularitile acestor infecii, abordarea acestui subcapitol va fi puin
diferit i vom ncepe prin discutarea unor teste care par a nu avea legtur cu materia studiat
n anul 2, ns trebuie avute n vedere ca atare.
Este important o clasificare a metodelor de diagnostic pentru infecia cu H. pylori aa cum
sunt ele utilizate de medicul clinician, n colaborare cu medicul microbiolog i medicul care
efectueaz testele paraclinice.
n diagnosticul infeciilor produse de H. pylori, pornindu-se de la elementele clinice, se vor
realiza urmtoarele teste:

4.1. Teste non-endoscopice

A. Testarea serologic se refer la determinarea nivelurilor de anticorpi prin tehnici de tip
ELISA. Se utilizeaz antigene cunoscute ca fiind specifice H. pylori (fie celule ntregi, fie
celule sonicate sau extracte antigenice purificate) pentru a determina dac pacientul are sau nu
anticorpi-anti Helicobacter. Nivelele crescute de IgG se menin pe perioade mari de timp care
variaz de la o persoan la alta, din acest motiv acest tip de testare nu va fi utilizat pentru
evaluarea post-tratament, dei este un test care poate fi util n screeningul iniial al infec iei cu
Helicobacter pylori.
B. Testul respirator la uree: reprezint standardul n testarea non-invaziv a infeciei cu
H. pylori. Pacientul va bea un lichid care conine uree marcat cu C 13 (izotop nonradioactiv)
sau cu C14 (utilizat mai rar din cauza radioactivitii). Ureaza produs de H. pylori va
descompune ureea n amoniac i CO2 marcat care va fi msurat din aerul expirat de pacient.
Cantitatea de CO2 din aerul expirat este un indicator al cantitii de uree aflat n stomac.
Testul respirator la uree poate fi folosit att pentru diagnosticarea iniial, ct i pentru
monitorizarea rspunsului la tratament.
C. Testul antigenelor din materiile fecale: se utilizeaz tot un test de tip ELISA, ns spre
deosebire de cel de la punctul 1 suntem n situaia invers: n kit avem anticorpii, ceea ce
trebuie s determinm este prezena sau absena antigenelor din fecale. Testul antigenelor din
fecale este unul care certific infecia activ (daca nu mai sunt microorganisme n stomac,
acestea nu vor mai fi eliminate pe cale digestiv), deci reprezint un test eficace att pentru
screeningul iniial, ct i pentru evaluarea post-terapie.
4.2. Teste endoscopice
Cu ajutorul endoscopiei se preleveaz biopsii de esut gastric care vor fi analizate prin una din
modalitile urmtoare:
A. Metode bazate pe ureaz: esutul biopsiat se plaseaz ntr-o soluie de uree i un indicator
de pH. Prezena ureazei va descompune ureea i va crete pH-ul ceea ce va determina virarea
culorii indicatorului de pH.
B. Teste care in de diagnosticul de laborator microbiologic : fragmentele bioptice obinute
din corpul i antrul stomacului sunt strivite pe o lam (amprentare), fixate cu alcool metilic
timp de 1 minut, uscate i apoi colorate timp de 20 de minute cu soluie Giemsa1/10 preparat
extemporaneu. Se poate utiliza i impregnarea argentic Warthin-Starry (aceasta a fost metoda
orginal de evideniere a Helicobacter de ctre Warren i Marshall n 1983) Apare morfologia
caracteristic de vibrioni sau spirili.
Cultivarea, dei reprezint o modalitate foarte specific i prezint n plus avantajul de a putea
permite testarea sensibilitii la antibiotice nu se realizeaz n mod curent din cauza unor
dificulti tehnice i a sensibilitii reduse (un numr relativ mare de infecii cu H. pylori nu
au fost validate utiliznd aceast modalitate de diagnostic). H. pylori este un microorganism
pretenios, cu cretere lent, care are nevoie de condiii speciale pentru a se dezvolta. Totu i,
considerm c ar fi necesare mai multe eforturi n acest sens.
BIBLIOGRAFIE:
Popa G.L., Nodea M., Genul Campylobacter. Genul Helicobacter. Helicobacter pylori, n Popa M.I.
(coord.), Microbiologie Medical, vol 1 - curs UMF Carol Davila, 2010.