Curs 24.

Genul Vibrio. Genul Haemophilus

1. Definiie. ncadrare
Speciile din genurile Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Campylobacter, Helicobacter sunt
larg rspndite n natur i fceau iniial parte din aceeai familie. Vibrionii se gsesc n apele
marine i de suprafa. Aeromonas se gsete predominant n apa proaspt i ocazional
contamineaz animalele cu snge rece. Plesiomonas se gsete la animalele cu snge cald, dar
i la cele cu snge rece. Aeromonas i Plesiomonas au fost asociate cu boli diareice la om.
Helicobacter pylori se asociaz cu gastrit i ulcer gastroduodenal.
Genul Vibrio face parte din familia Vibrionaceae (1965), alturi de Aeromonas,
Photobacterium i Plesiomonas. Genul Vibrio include mai mult de 48 de specii (12 dintre
acestea fiind potenial patogene pentru om). Vibrionul holerei produce o enterotoxin care
determin holera. Vibrionii sunt bacili Gram-negativi, drepi sau uor ncurbai, foarte mobili,
necapsulai, nesporulai.
2. Caractere generale
2.1. Habitat
Habitatul natural al vibrionilor include sursele de ap dulce i srat, unde exist liberi sau
n asociaie cu diferite vieti acvatice. Vibrio cholerae se gsete n intestinul i n materiile
fecale ale omului bolnav de holer. Prezena vibrionului holeric n mediul extern este
explicat prin contaminarea fecal i supravieuirea vibrionilor, existnd i posibilitatea unui
ciclu de via extraintestinal.
2.2. Caractere morfotinctoriale
La izolarea primar, V. cholerae este un bacil Gram-negativ, curbat (forma de virgul a
devenit mai mult o reprezentare istoric), lung de 2-4 m, mobil cu ajutorul unui flagel
polar.
2.3. Caractere de cultur
Sunt germeni puin pretenioi i se pot dezvolta pe medii de cultur simple, inclusiv n
apa peptonat, ceea ce este util n izolarea primar (formeaz un vl la suprafaa mediului).
V. cholerae se dezvolt bine la un pH alcalin (9-9,5), mediile cu un astfel de pH avnd rolul de
medii de mbogire.
V. cholerae produce pe mediile de cultur solide colonii convexe, rotunde, de tip S cu un
aspect opac. Se dezvolt foarte bine la 37C pe multe tipuri de medii, inclusiv pe medii ce
conin sruri minerale i asparagin ca surse de carbon i azot. Crete bine pe TCBS (tiosulfatcitrat-bil-sucroz-agar), pe care produce colonii galbene.
2.4. Caractere biochimice
V. cholerae fermenteaz de obicei sucroza i manoza. Fermenteaz glucoza. n funcie de
fermentarea zaharurilor vibrionii se pot submpri n grupe. Au metabolism respirator i
fermentativ. Sunt aerobi, facultativ anaerobi.
Testul oxidazei (pozitiv n cazul vibrionului holeric) este un test cheie n identificarea
preliminar. Majoritateavibrionilor sunt halotolerani i adesea prezena NaCl le stimuleaz
creterea prin alcalinizarea mediului.
2.5. Rezistena fa de factori fizici i chimici
Vibrionii holerici sunt foarte sensibili la lumina solar i la aciunea cldurii (la 100C
sunt distrui aproape instantaneu); sunt sensibili la antiseptice. n alimente triesc (cu unele

excepii) pn la 7 zile. n ap supravieuiesc un numr de zile, n funcie de eficacitatea

tratamentului aplicat apelor uzate. n intestinul bolnavilor netratai se pot menine cteva
sptmni.
2.6. Structur antigenic
Vibrionul holeric prezint la nivel parietal antigenul O (lipopolizaharid). n funcie de
structura antigenului somatic de grup O, vibrionii holerici au fost mprii n 6 serogrupe;
vibrionul holeric clasic i biotipul El Tor fac parte din grupul O:1, ceilali vibrioni fiind
non-O:1NAG (non-aglutinabili cu seruri anti-O:1); aceste microorganisme nu pot fi distinse
biochimic de vibrionul holeric O:1. Abordri taxonomice au demonstrat c Vibrio cholerae
O:1 i non-O:1 reprezint de fapt aceleai specii. Antigenul serogrupului O:1 are determinani
care fac posibil diferenierea serotipurilor. mprirea vibrionului holeric n serotipuri i
biotipuri este util n studii epidemiologice, dar testele se fac numai n laboratoare
specializate.
Exist antigene la nivelul pililor.
Fiind mobil, vibrionul prezint antigenul H la nivel ciliar.
Vibrionul holeric i vibrionii nrudii produc o enterotoxin labil fa de cldur, cu masa
molecular de 84.000 Da, alctuit din dou subuniti A i B (activ i de legare).
2.7. Rspuns imun
Aciditatea gastric furnizeaz o oarecare protecie n cazul ingerrii unui numr mic de
vibrioni.
Dup holer apare imunitate fa de reinfecie, dar durata i gradul acesteia nu sunt
cunoscute. La animalele de experien apar anticorpi specifici de tip IgA n lumenul intestinal.
Anticorpii fa de antigenul O protejeaz animalele de laborator fa de infectare. Anticorpi
similari apar n serul uman dup infecie i se consider c sunt asociai (ntr-o oarecare
msur) cu protecia fa de colonizarea cu vibrioni patogeni. Prezena anticorpilor antitoxin
nu se asociaz cu protecia.
2.8. Caractere de patogenitate
Microbiologia medical este interesat n cunoaterea urmtorilor vibrioni patogeni sau cu
patogenitate condiionat, potenial periculoi pentru sntatea omului: Vibrio cholerae O:1,
cu biotipurile cholerae i El Tor (fiecare din aceste biotipuri putnd fi clasificat n serotipurile
Inaba, Ogawa, Hikojima); Vibrio cholerae grup non O:1; Vibrio mimicus; Vibrio
parahemolyticus; V. damsela; V. furnissii; Vibrio vulnificus; V. fluvialis.
Mecanismul patogen al germenilor din familia Vibrionaceae const n aderarea la epiteliul
celular (adezine/pili), urmeaz colonizarea i apoi invadarea mucoasei, care permit infiltrarea
germenilor cu producerea unor variate substane biologic active, incluznd enzime
extracelulare, enterotoxine, citotoxine, hemolizine, factori asociai cu virulena bacterian.
Capacitatea chemotactic fa de epiteliile mucoase este mai evident la formele
monotriche, depinznd i de cantitatea i calitatea mucusului.
Majoritatea germenilor ce colonizeaz esutul uman posed pe suprafa componente
proteice numite adezine care se leag stereochimic de structurile moleculare complementare
tisulare. Aceti factori de adezivitate par a fi asociai cu fimbriile sau pilii. Factorii de
virulen implicai n colonizare sunt sintetizai n paralel cu producerea enterotoxinei n cazul
Vibrio cholerae (toxina holeric) i sunt sub coordonarea aceleiai gene. Se presupune c pilii
(proprietate important asociat virulenei germenilor din mediu) se pierd o dat cu instituirea
infeciei.

Prin observarea tulpinilor virulente la microscopul electronic s-a observat existena unui
strat adiional S extern fa de peretele celular, care ofer protecie fa de agenii litici
(bacteriofagi, proteine serice).
Enterotoxina holeric este principala cauz a diareei secretorii din holer. De exemplu, la
voluntarii care au ingerat mai puin de 10 g de toxin purificat, n 2 zile a aprut diareea, cu
un volum de peste 20 l, cu caracter exploziv.
Toxina holeric (la fel ca i enterotoxina produs de E. coli) este compus dintr-o
subunitate A i 5 subuniti B, totaliznd aproximativ 84.000 daltoni. Subunitile B au o mare
afinitate pentru receptorii gangliozidici GM de pe suprafaa celulelor int. Dup legare,
subunitile A intr n citoplasm i catalizeaz transferul ADP-ribozei la NAD, fiind astfel
activat o protein reglatoare asociat membranei, numit Gs. Rezultatul este un nivel crescut
al AMPc n celulele mucoase ale intestinului subire, urmat de hipersecreia clorurilor i
bicarbonatului care va determina un eflux important de ap.
Fiind germeni Gram-negativi, dup distrugerea acestora din peretele celular se elibereaz
endotoxina.
3. Patogenie i patologie specific. Principalele afeciuni produse
n condiii naturale vibrionul holeric este patogen numai pentru oameni. S-a dovedit c
pentru realizarea infeciei i bolii este necesar ingerarea a 1081010 microorganisme.
Holera nu este o boal invaziv. Germenii nu ajung n torentul circulator, ci rmn
cantonai la nivelul tractului intestinal. Vibrionii colonizeaz marginea n perie a celulelor
epiteliale, apoi se multiplic i elibereaz toxina holeric (iar atunci cnd sunt distrui
elibereaz i endotoxina).
Dup o perioad de incubaie de 1-4 zile apar brusc grea, vrsturi, diaree abundent
(20-30 litri/zi) i crampe abdominale. Scaunele apoase, riziforme (ap de orez) conin
mucus, celule epiteliale i un mare numr de vibrioni. Exist o pierdere rapid de fluide i
electrolii care duce la deshidratare, colaps circulator i anurie. Rata mortalitii n lipsa
tratamentului este 25-50%.
Infeciile cu Vibrio cholerae grup non O:1sunt asociate cu cazuri de gastroenterit i cu
infecii extraintestinale. Sepsisul datorat grupului non O:1 a fost mai rar raportat (ex. la aduli
cu imunitate deficitar). Totui, a fost raportat un caz de sepsis cu Vibrio cholerae grup non
O:1 plus gastroenterit la un copil de 8 ani, pacientul prezentnd diaree cu snge, febr i
deshidratare sever; vibrionii non O:1 au fost izolai din snge i din materiile fecale.
4. Diagnosticul de laborator n infeciile produse de microorganisme din genul Vibrio
Genul Vibrio include mai multe specii dintre care 12 sunt potenial patogene pentru om.
Vibrionii sunt bacili gram-negativi, drepi sau uor ncurbai, foarte mobili, necapsulai,
nesporulai. Specia principal este reprezentat de Vibrio cholerae (vibrionul holeric), aerob
facultativ anaerob, oxidazo pozitiv, rezistent la pH alcalin i sruri biliare. Vibrionul holeric
produce o enterotoxin i determin holera.
n condiii naturale vibrionul holeric este patogen numai pentru om. Doza infectant este de
1081010 microorganisme. Holera nu este o boal invaziv. Germenii nu ajung n torentul
circulator ci rmn cantonai la nivelul tractului intestinal; colonizeaz marginea n perie a
celulelor epiteliale, se multiplic i elibereaz toxina holeric. Dup o perioad de incubaie
de 14 zile apar brusc grea, vrsturi, diaree abundent (20-30 litri/zi) i crampe
abdominale. Scaunele apoase, riziforme (ap de orez) conin mucus, celule epiteliale i un

mare numr de vibrioni. Exist o pierdere rapid de fluide i electrolii care duce la
deshidratare, colaps circulator i anurie. Rata mortalitii n lipsa tratamentului este 25-50%.
Diagnosticul de laborator n holer este bacteriologic, direct, trebuie realizat ct mai rapid
posibil (urgen din punct de vedere epidemiologic) i include etapele cunoscute.
Diagnosticul unui caz grav de holer este uor de realizat, n special n contextul unei
epidemii. Cu toate acestea, cazurile uoare sau cazurile izolate sunt relativ dificil de
difereniat de alte boli diareice acute.
1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd regulile
cunoscute, n special recoltarea ct mai rapid dup debutul bolii i nainte de iniierea
antibioterapiei. Produsul patologic este reprezentat cel mai frecvent de materii fecale, dar
s-ar putea recolta i lichid de vrstur. Din punct de vedere macroscopic materiile fecale
sunt apoase, riziforme (ap de orez), de culoare verzuie, cu miros fetid, conin flocoane de
mucus. Transportul trebuie s fie realizat rapid, n maxim 1-3 ore. Se poate folosi ca mediu de
transport mediul bacteriostatic Cary-Blair. Mediul ap peptonat alcalin (pH 9-9,5) poate fi
utilizat att n calitate de mediu de transport ct i de mediu de mbogire.
2. Examinarea microscopic a produsului patologic include realizarea unui preparat proaspt
ntre lam i lamel (nu se efectueaz frotiuri din produsul patologic). Preparatul se
examineaz la microscopul optic cu obiectivul 40x. Esenial este faptul c nu se evideniaz
prezena leucocitelor. Vibrionii sunt n numr mare i prezint micri active, de rostogolire
sau micri haotice. Suplimentar, p.p. ar putea fi tratat cu Ac specifici; dac mobilitatea este
stopat, se confirm diagnosticul.
3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct s se
poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica. Abordarea
diagnosticului de holer se realizeaz n mod difereniat, respectiv prezumtiv (la nivelul unui
laborator periferic) i de certitudine (la nivelul laboratorului de referin). Este recomandat
utilizarea att a unui mediu moderat selectiv (ex. Bile Salts Agar / BSA) ct i a unui mediu
nalt selectiv (ex. Thiosulphate-Citrate-Bile salts-Sucrose / TCBS).
Lund n considerare situaia n care se ridic suspiciunea unei infecii cu V. cholerae se
recomand nsmnarea p.p., direct sau dup transportul n mediul Cary Blair, n ap
peptonat alcalin (APA). Dup incubare pentru o durat de 6-8 ore la 35-37, facem trecerea
pe mediul selectiv (TCBS i / sau BSA) lund 2 anse de la suprafaa APA (n acest interval, la
suprafaa APA poate s apar un vl, respectiv cultura de vibrioni).
Examenul microscopic al vlului (preparat proaspt, ntre lam i lamel: vibrioni foarte
mobili, cu micri de rostogolire sau haotice) precum i utilizarea unor anticorpi specifici
(reacie antigen-anticorp) pot grbi diagnosticul.
4. Identificarea microorganismului implicat patogenic se va realiza pe baza mai multor
caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: sunt bacili gram-negativi cu cu dimensiuni de 1-3 m/0,5-0,8
m
b) Caractere de cultur:
Produc colonii de tip S, galbene, mari, cu diametrul de 2-4 mm (pe TCBS)
Pe mediul BSA, V. cholerae produce colonii de tip S rotunde, strlucitoare, transparente ca
picturile de rou (spre deosebire de coloniile de E. coli care sunt mate).
c) Caractere biochimice:
V. cholerae este oxidazo-pozitiv
Testul uviei de ADN se poate utiliza pentru a diferenia tulpini care sunt oxidazo-pozitive
i formeaz colonii cu aspect asemntor (V. cholerae i Aeromonas spp.); n acest scop

suspensionm o colonie suspect ntr-o pictur de soluie 0,5% dezoxicolat de sodiu, pe o

lam de microscop. n cazul n care este vorba de o colonie de vibrioni, acetia sunt lizai i
elibereaz ADN-ul care poate fi tras cu ansa ca o uvi
Alte teste biochimice, prin metode clasice sau utiliznd galeriile manuale sau automate (ex.
API 20E, ID 32E), se efectueaz la nivelul unui laborator de nivel superior sau la nivelul
centrului naional de referin; testele biochimice pot diferenia biotipul clasic de biotipul El
Tor (se apreciaz c V. cholerae O:139 este un mutant al biotipului El Tor)
d) Caractere antigenice:
Se utilizeaz ser anti-holeric O:1 i se practic reacia de aglutinare pe lam. La nivelul
centrului de referin se confirm reacia pozitiv i se identific serotipul (Ogawa, Inaba sau
Hikojima) iar n cazul unei reacii negative se realizeaz o reacie de aglutinare pe lam
folosind ser anti-holeric O:139
Testarea sensibilitii la bacteriofagi (lizotipia) se poate utiliza n studii epidemiologice sau n
scop de cercetare, fiind rezervat laboratoarelor de referin. Exist sisteme de lizotipare care
definesc peste 140 de lizotipuri diferite.
e) Alte caractere / teste utilizate n identificare la nivelul centrelor de referin:
- testul sensibilitii la agentul vibriostatic cu O/129 (10 g i 50 g)
- determinarea toxinogenezei tulpinilor de V. cholerae prin reacia VET-RPLA (latex
aglutinare pasiv inversat)
- tehnici de tip ELISA pentru identificarea unor structuri caracteristice V. cholerae
- tehnici ale biologiei moleculare (ribotipie, PCR etc).
5. Antibiograma (verificarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice) se realizeaz prin
metoda difuzimetric standardizat, n special n scopul supravegherii apariiei unor tulpini
rezistente la medicamentele antimicrobiene.

Genul Haemophilus
Microorganismele din genul Haemophilus sunt cocobacili polimorfi, imobili, nesporulai,
gram negativi, aerobi, facultativ anaerobi. Sunt germeni pretenioi; pentru a se dezvolta au
nevoie de prezena factorilor de cretere prezeni n snge (de unde i numele genului). Exist
mai multe specii, dintre care cele mai cunoscute sunt Haemophilus influenzae i Haemophilus
ducreyi; multe dintre tulpinile de H. influenzae sunt capsulate.
Haemophilus influenzae
Haemophilus influenzae este patogen prin multiplicare i invazivitate. Microorganismul
ptrunde pe cale respiratorie. Boala debuteaz ca o rinofaringit acut, probabil n asociere cu
o infecie viral la nivelul tractului respirator. Aceasta poate fi urmat de epiglotit,
laringotraheit, otit, sinuzit, mai rar de pneumonie dar i de celulit sau de meningit acut
purulent la copiii mici precolari. Sinusurile sau urechea medie pot fi afectate prin extensie
local (se poate nota faptul c Haemophilus influenzae b i pneumococul se numr printre
agenii etiologici foarte comuni ai otitei medii bacteriene i ai sinuzitelor acute). Dac
microorganismul ptrunde n torentul sanguin, pe aceast cale poate infecta meningele.
Ocazional infecia cu H. influenzae poate duce la o laringotraheit obstructiv fulminant care
necesit traheotomie sau intubare prompt a copilului respectiv. n vederea discutrii
examenului de laborator vom avea n vedere meningita produs de H. influenzae.
Diagnosticul de laborator microbiologic n infeciile cu Haemophilus influenzae este
bacteriologic, direct, incluznd etapele care vor fi prezentate n continuare.

n meningita produs de H. influenzae este urgent (risc de evoluie cu sechele i / sau

deces), de importan maxim fiind recoltarea i transportul rapid al LCR ctre laborator. Este
de preferat realizarea unei cultivri la patul bolnavului, chiar dac pentru concentrarea
germenilor ar putea fi necesar centrifugarea LCR. Analiza citologic i biochimic a LCR
este util n stabilirea etiologiei.
1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd o serie
de reguli (ct mai aproape de debutul bolii, nainte ca pacientului s fi primit antibiotice, ct
mai rapid i corect din punct de vedere al tehnicilor utilizate, respectnd toate normele de
asepsie i antisepsie etc). n infeciile produse de Haemophilus influenzae se pot recolta
secreii de la nivelul tractului respirator superior sau inferior, secreii din sfera ORL, lichide
recoltate prin puncie, snge, LCR etc. n continuare vom discuta cazul n care p.p. este
reprezentat de LCR. Recoltarea LCR prin puncie (dup verificarea presiunii din artera
central a retinei prin examinarea fundului de ochi) trebuie fcut pe ct posibil la patul
bolnavului, avnd la dispoziie tot ce este necesar pentru pregtirea frotiurilor, cultivarea pe
diferite medii de cultur, repartizarea unei cantiti de LCR pentru examenul citologic i
biochimic. n cazul n care p.p. urmeaz a fi transportat ctre laborator, transportul trebuie
realizat fr ntrziere (la o temperatur apropiat de 37C, refrigerarea este contraindicat).
H. influenzae ar putea fi izolat i prin hemocultur, cultivarea secreiilor nazale sau faringiene
etc. Din punct de vedere macroscopic, LCR poate avea aspect purulent.
2. Examinarea microscopic a produsului patologic include realizarea a minim dou
frotiuri din produsul patologic recoltat i transportat corespunztor, care se vor colora cu
albastru de metilen (AM) i respectiv Gram. Dac LCR este franc purulent frotiurile se pot
executa direct din p.p., n caz contrar realizm iniial centrifugarea LCR. Frotiurile se
examineaz la microscopul optic cu imersie i se noteaz prezena celulelor inflamatorii (ex.
leucocite) i prezena cocobacililor gram-negativi, fini, capsulai, dispui separat sau n
grmezi aranjate n aceeai direcie, uneori dispui n lanuri scurte, situai intra- sau
extraleucocitar. Datorit faptului c aceste microorganisme se coloreaz relativ slab n
coloraia Gram ar putea fi necesar colorarea frotiului de rezerv printr-o alt metod sau,
recolorarea prelungit cu fucsin.
3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct s se
poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica. Haemophilus
influenzae este un microorganism foarte pretenios care nu se poate dezvolta pe medii de
cultur obinuite. Unele tulpini de Haemophilus influenzae necesit pentru iniierea creterii
5-10% CO2. Este necesar pentru incubare o atmosfer umed, la 35-37C, i o durat de
minim 24-48 de ore. Pentru cultivare sunt necesari factori de cretere precum hemina (factor
X) i factorul V care poate fi nlocuit prin NAD, NADP sau alte coenzime. Ambii factori se
obin din eritrocite, ns este necesar eliberarea coninutului acestora n mediu (de exemplu
prin cldur, sau prin digestie peptic). Factorul V este sintetizat i de stafilococul auriu, astfel
c pe geloz snge coloniile de Haemophilus influenzae sunt mai numeroase i de dimensiuni
mai mari n apropierea unei linii pe care a fost nsmnat o tulpin hemolitic de
Staphylococcus aureus (fenomenul de satelitism). Coloniile sunt de tip S sau M i ating un
diametru de 0,5-0,8 mm dup 24 de ore, respectiv 1-2 mm la 48 de ore, avnd aspectul unor
picturi de rou pe geloz chocolat. Pe geloz-snge cu infuzie de inim-creier apar colonii
mici, rotunde, convexe, de tip S, care n primele 24 ore prezint irizaii puternice,
caracteristice. Nu apare hemoliz.
4. Identificarea microorganismului implicat patogenic se va realiza pe baza mai multor
caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: sunt cocobacili gram negativi, mici (1-1,5 m/ 0,3 m), dispui
separat sau n grmezi, uneori dispui n lanuri scurte. n medii complexe, la 6-8 ore,

predomin formele cocobacilare, care au i capsul. n culturile vechi se caracterizeaz prin

pleomorfism i pierderea capsulei (dificulti de diagnostic diferenial microbiologic).
b) Caractere de cultur: Produc coloniile de tip S sau M care ating un diametru de 0.5-0,8 mm
dup 24 de ore, respectiv 1-2 mm la 48 de ore, avnd pe geloz chocolat aspectul unor
picturi de rou. Necesit prezena n mediul de cultur a factorilor de cretere (X i V).
Factorul V este sintetizat i de stafilococul auriu, astfel c pe geloz snge coloniile de
Haemophilus influenzae sunt mai numeroase i de dimensiuni mai mari n apropierea unei
linii pe care a fost nsmnat o tulpin hemolitic de Staphylococcus aureus (fenomenul de
satelitism). Pe geloz-snge cu infuzie de inim-creier apar colonii mici, rotunde, convexe, de
tip S, care n primele 24 ore prezint irizaii puternice, caracteristice. Nu apare hemoliz.
b) Caractere biochimice:
Majoritatea tulpinilor (70%) sunt indol pozitive (transform triptofanul n indol).
Fermenteaz inconstant diferii carbohidraii. Pe baza unor teste biochimice specia a putut fi
mprit n biotipuri.
Utiliznd galeria API NH(manual) putem identifica specii de Neisseria, Haemophilus i
Branhamella catarrhalis, n numai 4 ore.
c) Caractere antigenice:
Se utilizeaz seruri cu anticorpi cunoscui pentru identificarea tulpinilor de Haemophilus
influenzae, prin tehnici imunologice, n funcie de Ag K. Tipurile (a-f) se pot diferenia prin
reacii de umflare a capsulei i de imunofluorescen.
Tulpinile capsulate (Ag K) se pot identifica n p.p. (LCR sau urin dup centrifugare) prin
contraimunoelectroforez, latex aglutinare sau ELISA.
Tulpinile necapsulate se pot identifica i tipiza prin Multilocus Enzyme Electrophoresis
(MLEE).
d) Alte teste: exist sonde nucleotidice produse comercial pentru identificarea H. influenzae.
5. Antibiograma (verificarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice n vederea
stabilirii tratamentului) este necesar i se realizeaz de obicei prin metode difuzimetrice.
Este recomandat utilizarea unui mediu special, respectiv Haemophilus test medium (HTM).
Se pot utiliza i truse automate pentru testare (ex. ATB HAEMO cu citire i interpretare dup
18-24 ore sau rapid ATB E 4 cu citire i interpretare dup 4-5 ore incubare). Determinarea
CMI i CMB poate fi necesar i se realizeaz prin metode clasice sau cu ajutorul testului E.
Identificarea rspunsului imun fa de Haemophilus influenzae.
Identificarea prezenei de anticorpi fa de H. influenzae ar putea fi util pentru verificarea
rspunsului imun n urma vaccinrii. n acest scop au fost utilizate RIA i ELISA.
Haemophilus ducreyi
Haemophilus ducreyi este strict patogen pentru specia uman fiind agentul patogen al unei
boli cu transmitere sexual, ancrul moale. n regiunea genital apare ancrul moale (iniial se
formeaz o papul sensibil, cu eritem n jur, urmat de apariia unei pustule i apoi a unei
eroziuni care ulcereaz), dureros, cu eritem i edem. Pot exista ancre multiple. Ganglionii
regionali sunt mrii, dureroi i pot supura. Diagnosticul diferenial se face cu sifilisul,
infecia cu virusul Herpes simplex i limfogranulomatoza venerian.
Diagnosticul de laborator este n special microbiologic (bacteriologic, direct).
1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd o serie
de reguli (ct mai aproape de debutul bolii, nainte ca pacientului s fi primit antibiotice, ct
mai rapid i corect din punct de vedere al tehnicilor utilizate, respectnd toate normele de
asepsie i antisepsie etc). n infeciile produse de Haemophilus ducreyi se pot recolta secreii
de la nivel genital (raclarea secreiei de sub marginea ancrului; puroi din abces).
2. Examinarea microscopic a produsului patologic include realizarea a minim dou
frotiuri din produsul patologic recoltat i transportat corespunztor, care se vor colora cu
albastru de metilen (AM) i respectiv Gram. Putem vizualiza intra sau extra celular bacili de

dimensiuni mici, pleomorfi, gram negativi, dispui n perechi sau lanuri paralele (n iruri),
frecvent n asociere cu alte microorganisme. Se pot colora bipolar.
3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct s se
poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica. Cultivarea H.
ducreyi este dificil. Necesit pentru cultivare factorul X. Se poate dezvolta dac produsul
patologic este recoltat de la baza ancrului i cultivat pe geloz chocolat plus vancomicin 3
mg/ml la 33C n atmosfer de 5-10% CO2.
4. Identificarea microorganismului se va realiza pe baza mai multor caractere:
a) Caractere morfotinctoriale: Sunt bacili de dimensiuni mici, pleomorfi, gram negativi,
dispui n perechi sau lanuri paralele. Se pot colora bipolar.
b) Caractere de cultur: Produc coloniile de tip S de dimensiuni mici, dup 3-7 zile de la
cultivare. Pe geloz-snge pot produce hemoliz.
c) Caractere biochimice:
Necesit prezena n mediul de cultur a factorului de cretere (X).
Haemophilus ducreyi este catalazo-negativ.
5. Antibiograma (verificarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice n vederea
stabilirii tratamentului) este necesar i poate realiza prin metode difuzimetrice.
Diagnosticul de laborator imunologic
ancrul moale este singura afeciune produs de microorganisme din genul Haemophilus
n care diagnosticul serologic ar putea fi util. Identificare prezenei anticorpilor este util i n
scop epidemiologic. Se pot utiliza tehnici de tip ELISA pentru identificarea anticorpilor IgG
sau IgM care apar fa de H. ducreyi.
Este nc n discuie utilitatea IDR cu Ag extrase din cultur de bacili Ducreyi.
BIBLIOGRAFIE:
1. Popa G.L., Popa M.I., Genul Vibrio, n Popa M.I. (coord.), Microbiologie Medical, vol 1 i vol
2 - curs UMF Carol Davila, 2010.
2. Popa M.I. (coord.), Diagnosticul de laborator n infeciile produse de microorganisme din genul
Haemophilus, Microbiologie Medical, vol 2 - curs UMF Carol Davila, 2010.