STRUCTURA I

ORGANIZAREA
CELULAR A ADN

Conf. dr. Cristina RUSU

U.M.F IAI

STRUCTURA ADN
1953 - J.D. WATSON i F.
CRICK au propus un model
al structurii ADN (Premiul
Nobel 1962):

dou catene
polinucleotidice (A,T,G,C),

legate complementar prin

bazele azotate: A-T; G-C,

nfurate ntr-o elice dubl,

rsucit spre dreapta.

-A-T-C-G-C-G-A-T-T-A-C-G-A-T-T-A-G-C-G-C-T-A-A-T-G-C-T-A-

U.M.F IAI

STRUCTURA PRIMAR A ADN

1.1. STRUCTURA PRIMAR

ADN este un macro-polimer de

dezoxiribonucleotide;

[P 5dR1 - N]n
Grup fosfat
(ac.ortofosforic)

Baz azotat:
Pentoz

D-2-dezoxiriboza

dR N = nucleozid;

P - dR N = nucleotid;

Pur A, G
Pir T, C

U.M.F IAI

1.1. Structura primar a ADN

Polimerizarea nucleotidelor: legturi

covalente (puternice) 3- 5 fosfodiester*

Se formeaz o caten (lan):

- continu,
- linear (neramificat!)
o parte "constant" (ax) fosfoglucidic i
o parte variabil bazele
azotate *,
- polaritate 5 3

Catena = structura PRIMAR a ADN deine informaia ereditar codificat

U.M.F IAI

Structura primar a ADN

Informaia genetic codificat - secvena (ordinea) nucleotidelor

determin ordinea aminoacizilor n proteine.
5'- ATGCCTAGATCA - 3'
aa1- aa2-aa3- aa4

alfabet nucleic = patru "litere": A, T, G, C

"cuvinte"

asamblate ntr-o "fraz" = o gen = unitatea de informaie

genetic; secvena nucleotide secvena AA n protein.

de trei litere = triplet sau codon aminoacid

ATG Met

ATG TGT AAA CCA

met cis lys pro

Sensul de "citire" al informaiei genetice este determinat de polaritatea 5' 3'

a catenei de ADN

5'- ATGCCTAGATCA - 3'

aa1- aa2 -aa3-aa4

U.M.F IAI

STRUCTURA SECUNDAR a ADN

dou catene
polinucleotidice,

legate ntre ele prin

bazele azotate,

n mod complementar :

b. purin. b. pirimid.
A T i G C *

cele dou catene sunt

strict codeterminate.
De exemplu:
5'-ACGTCAG-3
3'-TGCAGTC-5 *

U.M.F IAI

Structura secundar a ADN

Legea complementaritii bazelor explic

mecanismele prin care se realizeaz funciile
genetice ale ADN:

transcripia,
replicarea,
repararea leziunilor,
recombinarea

Pentru aceste funcii catenele se pot desface parial

matrie pt sinteza unor noi molecule complementare
(ARNm sau ADN).

U.M.F IAI

Structura secundar a ADN

catenele ADN sunt antiparalele ();

catenele ADN se nfoar plectonemic

dubl spiral elicoidal coaxial dextrogir;

Structura ADN este perfect regulat ! ( 2 nm;

pas=3,4nm);

Dou anuri laterale:

mic (histone)
mare ( proteine reglatoare);

n condiii fiziologice - molecula ADN are o mare

stabilitate metabolic.

U.M.F IAI

Denaturarea i hibridizarea ADN

n condiii experimentale (tratare termic sau

chimic) ruperea (desfacerea) legturilor de
hidrogen = denaturare monocatene *.

monocatenele de ADN rcite lent se pot reasocia pe

baza complementaritii = renaturare sau hibridizare.

rcire brusc monocatene separate

U.M.F IAI

DENATURAREA I HIBRIDIZAREA ADN

Monocatenele ADN separate se pot uni, pe baz

de complementaritate, cu alte monocatene de ADN
sau ARN formnd hibrizi moleculari;
moleculari

HM folosii n diagnostic i tratament:

hibridizare ntre o monocaten de ADN nativ i o

"sond de ADN (secven de ADN obinut artificial) ce
corespunde unei gene, marcat fluorescent:
fluorescent
- hibridizarea sondei prezena semnalului
prezena genei;
- absena semnal = deleia genei

del

U.M.F IAI

HM folosii n tratamentul unor boli

hibridizarea ntre o molecul de ADN nativ i un

oligonucleotid antisens produce un heteroduplex
care blocheaz funcia genei (oncogen, genom HIV).
oligonucleotid
antisens

A
T

Oncogen
sau
Genom HIV

Proteina
anormal

BOALA

AT
TA

Blocare
expresie

VINDECARE
Oncogen
sau
Genom HIV

U.M.F IAI

STRUCTURA GENOMULUI UMAN

Genomul uman (GU) =

coninutul ADN celular

sau

25 de molecule diferite de ADN

24 n nucleu: 22 autosomi + X + Y
1 n mitocondrii,
= 3,2 miliarde de perechi de baze (pb)

GU = genom nuclear (complex, 99,5% ADN)

+ genom mitocondrial (simplu i mic, 0,5%).

U.M.F IAI

1. PROIECTUL GENOM UMAN

(1990 2005)

Obiectivele majore ale PGU:

descifrarea secvenei nucleotidice i structurii GU

(harta genetic a omului),

identificarea genelor umane (cartea vieii).

U.M.F IAI
U.M.F IAI
U.M.F IAI

PROIECTUL GENOM UMAN

(1900 2005)

februarie 2001:
schia iniial a GU,

octombrie 2004:
versiunea finisat,
de nalt precizie, a
secvenei nucleotidice
aproape complete a GU
(2,85 miliarde de pb sau ~
99% din eucromatin).
GENOMICA STRUCTURAL

U.M.F IAI

GENOMIC STRUCTURAL
( patru comentarii majore)

1.

Numrul genelor umane

este surprinztor de mic
(~25.000).
Genele reprezint mai
puin de ... 5 % din GU
Genele sunt distribuite
inegal ntre i n
interiorul cromozomilor

Cine face diferena dintre

OM i alte specii * ?

Poziia genelor n genom

Structura mai complex

(modular) a genelor i
proteinelor.

Modul n care lucreaz

genele (mai intens, mai
complex);

U.M.F IAI

GENOMIC STRUCTURAL

Genomul a dou
persoane nenrudite,
din populaii diferite,
are n comun 99,9%
din secvenele nucleotidice din ADN.

Se spulber definitiv
ideea raselor umane

Ce deosebete atunci un
om de altul, fcndu-ne pe
fiecare dintre noi UNIC?
diferena de 0,1% (3 mil
pb) = POLIMORFISM
INDIVIDUAL

U.M.F IAI

POLIMORFISMUL INDIVIDUAL al ADN

O,1 % din genom = 3 milioane pb.
Aceast mic parte din genom este alctuit din
diferite secvene polimorfice de ADN:

CNV: copy number variation = secvene mari de ADN

MINISATELIII HIPERVARIABILI: secvene foarte scurte (1465 pb),

SNPs ( single nucleotid polymorphism) 1 pb la fiecare 1000 pb

(n total 1,4 miliarde)

Numrul, secvena i poziia acestor markeri

polimorfici sunt caracteristice fiecrui individ

U.M.F IAI

POLIMORFISMUL INDIVIDUAL al ADN

O,1 % din genom = 3 milioane pb.
IMPORTAN:

Markerii genetici individuali determin

(dar nc nu tim cum):

rspunsul la agresiuni (boal), predispoziia /

vulnerabilitatea la boal;

efectele medicamentelor (farmacogenomica);

coordonarea fizic, abilitile, memoria,

creativitatea

U.M.F IAI

GENOMIC STRUCTURAL (1900-2005)

3.

Descifrarea secvenei
GU i identificarea
genelor nu explic:

cum este structurat i

funcioneaz o fiin
uman;

rolul genelor n
starea de sntate i
boal.

Ce se va ntmpla n
epoca postgenomic
(2006?) ?
se va stabili funcia
precis a fiecrei gene
(adnotare funcional)
Se vor descifra relaiile
funcionale dintre gene:

la nivelul trasnscripiei
(transcriptom)
la nivelul proteinelor
(proteom)

GENOMIC FUNCIONAL

U.M.F IAI

4. Care vor fi consecinele descifrrii GU

asupra medicinii clinice ?
MEDICINA GENOMIC
...publicarea schiei GU va schimba cu siguran practica
medical n urmtoarele decenii;
medicina genomic va transforma profund medicina clinic

(Getting Ready for Gene-based Medicine

H. Varmus, N.Engl.J.Med, 2002)

U.M.F IAI

Medicina genomic (molecular)

O nou TAXONOMIE (clasificare a bolilor)
pe subtipuri genotipice

Elucidarea
mecanismelor
moleculare ale
bolilor

DIAGNOSTIC MOLECULAR
(presimptomatic; predispoziie genetic)
NOI INTE I METODE TERAPEUTICE
TERAPIE INDIVIDUALIZAT
(farmacogenomic)

PREDICIE I PROFILAXIE PERSONALIZAT

(riscul individual)

U.M.F IAI

PRECIZRI:

1. Transformrile practicii clinice se fac

TREPTAT, sunt lente, dar profunde.
2. Traversm o perioad de TRANZIIE ce
implic dou categorii de aciuni:
a)

mbuntirea trainingului medical s fim

pregtii s nelegem i aplicm medicina
genomic.
... n stadiul actual avem nevoie de cunotine,
vocabular i, mai ales, de un concept larg despre
rolul genomicii pentru a evita RISCUL DE A NU
NELEGE MEDICINA VIITOARE
(Dumont-Driscoll - 2002)

U.M.F IAI

PRECIZRI:
b)

Schimbarea treptat a gndirii clinice i ngrijirii

medicale
(3 concepte fundamentale):

n medicina clasic pe primul plan este BOALA,

n medicina genomic important este BOLNAVUL
(medicina personalizat)
Se va trece de la diagnostic i tratament la
predicie i profilaxie personalizat
bazate pe susceptibilitile genetice individuale;
...pstrarea sntii va deveni mai important dect
tratarea bolii.
MEDICINA SECOLULUI XXI VA FI:

PERSONALIZAT, PREDICTIV, PREVENTIV

U.M.F IAI

STRUCTURA GENOMULUI UMAN

GU = un genom nuclear (complex, 99,5% ADN) +
un genom mitocondrial (simplu i mic, 0,5%).

25.000 gene

U.M.F IAI

GENOMUL NUCLEAR

Enorm (3,2 miliarde pb),

Fragmentat: (22 A + X + Y) molecule de ADN + proteine

cromozomi

Complex, heterogen:

ADN nerepetitiv
ADN moderat repetitiv
ADN nalt repetitiv

ADN genic (25%) + ADN extragenic (75%)

U.M.F IAI

Genomul nuclear - ADN GENIC (25%)

Gena = unitatea de
informaie genetic
codific un produs
primar specific
(proteine sau ARN)
Genele structura foarte
complex:

ADN codant = exoni (10%)

ADN necodant (90%) =

Introni
Secvene de reglare,
Gene nefuncionale
(pseudogene)
Fragmente de gene

- Gene ce codific proteine (1,5%),

- Gene ce codific ARN

U.M.F IAI

ADN EXTRAGENIC (75%)

Secvene netranscrise (necodante);

Funcii puin cunoscute:

- tampon al mutaiilor;
- mperecherea corect a cromozomilor omologi n meioz
i schimbul egal (CO) de segmente cromozomiale
recombinare genic surs de variabilitate !!!

Alctuit din:
ADN nerepetitiv = secvene unice / nr mic de copii
(60%)
- ADN repetitiv (40%).

U.M.F IAI

ADN EXTRAGENIC

NEREPETITIV (60%)

SECVENELE UNICE sau

SECVENE NTR-UN NUMAR MIC DE
COPII

DUPLICAII SEGMENTALE (5% GU)

blocuri (~10Kb) ce flancheaz genele
(pe acelai cromozom) ;
rol n sinapsa corect a omologilor
in meioz * .

Importan:
fiind identice - pot genera erori de
mperechere a cromozomilor omologi
CO inegal mutaii: duplicaii
/deleii genice BOLI GENOMICE

gen

U.M.F IAI

ADN EXTRAGENIC REPETITIV (40%)

ADN moderat repetitiv (~30%): secvene scurte repetate de

sute de mii de ori, dispersate n genom

(ex SINEs i LINEs)

ADN nalt repetitiv (~10%): secvene foarte scurte, repetate n

tandem , de milioane de ori; 3 tipuri:

ADN satelit
(blocuri heterocromatin la centromer, telomere) = rol
structural;
ADN minisatelit
(minisatelii hipervariabili), dispersat n toi cromozomii =
markeri genetici individuali = folosii n amprenta genetic
ADN microsatelit

U.M.F IAI

GENOMUL MITOCONDRIAL

ADNmt cteva mii de copii per celul = 0,5%

Genomul mitocondrial difer de genomul nuclear:
mic (16.569 pb);
circular;
neasociat cu proteine;
fr ADN repetitiv;
compact: 97%=secvene codante
37 de gene:

contigue,
fr introni.
Codul genetic mitocondrial difer puin de cel nuclear

U.M.F IAI

GENOMUL MITOCONDRIAL

Genomul mitocondrial al zigotului provine, prin ovul,

exclusiv de la mam.

ADNmt poate suferi mutaii germinale sau somatice

Mutaiile germinale produc o serie de boli

degenerative ce afecteaz sistemul nervos, muchii
etc,
care se transmit maternal:
de la mam la toi descendenii;
brbaii bolnavi nu transmit boala

U.M.F IAI

GENOMUL MITOCONDRIAL

ADNmt poate suferi mutaii somatice, dup

natere:

produse de radicalii liberi de O2

(generai n mitocondrii);

favorizate

de structura ADNmit
(absena histonelor; densitate mare de gene; etc)

Mutaiile se acumuleaz rapid datorit absenei

mecanismelor de reparare

Determin scderea produciei de energie boli

degenerative, cancer i senescen

U.M.F IAI

CONCLUZII

1953: descifrarea structurii

ADN a permis n mare
msur elucidarea
enigmelor i mecanismelor
ereditii i vieii.

ADN (elicea vieii)

devenit o icoan
a tiinei / medicinii
moderne

2003: descifrarea structurii

genomului uman a
revoluionat medicina
medicin genomic
(molecular)

V mulumesc !
abcrusu@gmail.com