Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Secu
CELULA PROCARIOT
1. Noiuni generale
2. Organizarea general a celulei procariote
2.1 Particularitile peretelui celular:
2.1.1 Bacteriile Gram+
2.1.2 Bacteriile Gram2.2 Flagelii i pilii:
3. Genomul bacterian:
3.1 Funciile materialului nuclear :
4. Noiuni despre expresia genetic la procariote:
5. Elemente mobile la procariote:
6. Plasmidele:
7. Reproducerea bacteriilor
8. Mutaiile. Recombinarea bacterian.
9. Antibioticele
9.1 Mecanisme generale de aciune a antibioticelor:
9.2 Mecanisme generale de rezisten a bacteriilor la antibiotic:
CELULA PROCARIOT
1. Noiuni generale
Procariot ( pina i nucleu): organism primitive (bacterii,unele alge) cu structura
celular simpla la care nucleul nu este delimitat .
Plasmid: Elemente genetice (molecule circulare de ADN) extracromosomiale, capabile de
replicare autonom. Confer bacteriei caractere suplimentare.
Nucleoid: Echivalentul nucleului la procariote.
Protoplasma: Citoplasma i nucleul celulei.
Mureina (peptidoglacan): Structur particular rigid a peretelui celular bacterian.
Spatiul periplasmic: este considerat un compartiment pericelular adaptativ, in care are loc
degradarea enzimatica a nutrientilor (eficien mai mare a procesului de nutriie).
Genofor: cromosomul bacterian.
Transcripie: Process de sintez ARN, folosind ca matrice, ADN.
Translaie: Proces de sintez a unui peptid n ribozom, utiliznd ca matrice ARNm, iar ca
material de construcie aminoacizi.
Transpozon: Secven de ADN ce poate migra n genom.
2. Organizarea general a celulei procariote
Celulele procariote, dei au o organizare relativ mai simpl, posed toate nsuirile
organismelor vii i se supun postulatelor celulare. O deosebire esenial a procariotelor este
faptul c nu posed membrane celulare interne, ci doar extern ce le delimiteaz de mediul
nconjurtor, ca consecin n structura acestor celule nu se intlnesc organite ca: mitocondrii,
aparat Golgi etc., tot de aici reiese i faptul ca nucleul nu este bine conturat (lipsa membranei).
Materialul genetic este reprezentat de o molecul inelar de ADN numit nucleoid. Procariotele
sunt organisme foarte mici, iar reprezentani ai acestora sun bacteriile i algele cianofite.
Figura 3.
2.1.2 Bacteriile GramPeretetele celular are grosimea de 10-12nm, este neomogen, format din straturi distincte.
Stratul intern este format din peptidoglicanul mureina (1-10% din masa uscat),
lipsesc acizii teihoici, lipsesc i punile interpeptidice, ceea ce d o structur bidimensional.
Membrana extern (ME): dublu strat lipidic cu proteine nserate (proteine majore
70%, minore 30%).
Proteine majore: Porine (formeaz pori) i nonporine(receptori, asigur
adeziunea etc.)
Proteinele minore: Enzime implicate in captarea unor substane i
transportul specific transmembranar.
ME este permeabil pentru ioni i mici molecule hidrofile i impermeabil
pentru molecule hidrofobe sau amfipatice
Figura 5
3.
Genomul bacterian:
Figura 6
Nucleoidul (analogul nucleului eucariot) dup cum s-a menionat este compus dintr-o
molecul circular de ADN. De specificat terbuie faptul c:
o ADN este asociat cu proteine; dar mecanismul de condensare a ADN-ului difer de modelul
eucariotic (nu se cunoate mecanismul exact, ns se presupune implicarea moleculelor de
ARN specific). Una din ipoteze despre compactizarea acestuia ar fi modelul de mpachetare
propus de Stonington i Pettijohn, 1971 ce demonstreaz c prin nchiderea moleculei,
aceasta i reduce diametrul la 350 m, apoi sub aciunea topoizomerazelor molecula sufer o
pliere (engl. folding) n ~ 50 domenii sau bucle, diametrul reducndu-se la 30-35m, prin
suprarsucirea (supercoiling) domeniilor diametrul se reduce la 3 m, iar prin suprapunerea
acestora la 1m. Spiralizarea moleculei se realizeaza cu ajutorul topoizomerazelor.
Figura 7
o Celula bacterian nu posed microtubuli, ceea ce face imposibil diviziunea de tip mitoz, iar
rolul de segregator al materialului genetic n timpul diviziunii celulare -i revine membranei
plasmatice.
o Segvene repetitive sunt foarte puine sau nu sunt deloc, majoritatea segvenelor fiind
codante, unice.
o Dimensiunile difer de la un procariot la altul.
Spre exemplu genomul E. Coli const din 4,6 Mb pe cnd genomul unei celule umane conine
3200Mb.
n general genomul procariot conine 139 Kb-13,000 Kb.
7
Conform unor studii, genomul bacterian are un nivel foarte mare de organizare, contrar ideei
nalt acceptat c acesta ar avea o organizare aleatorie.
3.1 Funciile materialului nuclear :
1) Conine informaia genetic esenial existenei bacteriilor n mediul natural (pentru
arhitectura celulei, metabolism, sinteza enzimelor ce intervin n reaciile de biositez i n
metabolismul energetic);
2) Codific structura factorilor de reglare prin structuri operaionale de tip operon;
3) Conine informaia necesar pentru replicare i ereditate, cu asigurarea potenialului de
cretere i diviziune celular;
4) Asigur potenialul de variabilitate i evoluie prin ci complexe:
capacitatea de mutagenez, de reparare a erorilor,
prin mecanisme de transfer de material genetic si de integrare a plasmidelor (prin
conjugare), a genelor fagice (prin transductie), a fragmentelor de ADN nucleoidal
/plasmidial (transformare) si a elementelor genetice transpozabile (secvente de
insertie si transpozoni).
4. Noiuni despre expresia genetic la procariote:
Reglarea sintezei enzimatice la procariote este controlat prin mecanismul induciei i
represiei enzimatice care a fost explicat pe modelul operon, elaborat de Jacob i Monod (distini
cu premiul Nobel pentru Medicin n 1965). n general genele structurale care codific enzimele
care intervin ntr-o cale metabolic sunt supuse controlului unei regiuni de reglare mpreun cu
care alctuiesc un operon:
Regiunea promotor: adiacent regiunii operator, corespunde zonei n care are loc
iniierea transcrierii informaiei genetice realizat de ARN-polimeraza, care se
leag de aceast regiune.
Astfel pentru procariote, specific este operonul, acesta reprezentnd un lan de gene ce nu au
spaii ntre ele sau acestea sunt foarte mici i care de regula codifica pentru un lan metabolic, ca
exemplu poate fi adus operonul lactozei la E. Coli
Transcripia i Translaia la procariote este cuplat, adic aceste procese pot avea loc
simultan, ceea ce este imposibil n celula eucariot (datorit membranei nucleare).
Figura 10
1.
2.
3.
4.
5.
Figura 11
Translaia la procariote nu difereniaz mult de cea ntlnit la eucariote, nsa sunt cteva
particulariti: ribozomul la procariote 70) este compus din 2 subuniti, cea mare, 50S, compus
din ARNr 23S, ARNr 5S i 31 proteine, iar subunitatea mic, 30S, conine ARNr 16S i 21
proteine.
Viteza de translaie este de 12-17 aminoacizi pe secund.
10
Figura
14.
Transpozon
de
tip:
noncomposite ce codific B-lactamaza
(rezistena la antibiotice ca penicilina,
ampicilina)
11
6. Plasmidele:
Plasmidele sunt structuri intracitoplasmatice, invizibile la microscopul optic care conin
informaie genetic extranucleoidic, accesorie, de confort sau de lux, imbunatatind conditiile de
viata ale bacteriilor si adaptarea la mediu; reprezinta 1-5 % din genomul bacterian.
Plasmidele se difereniaz n:
plasmide propriu-zise (cu control relaxat), care confer rezistena la antibiotice, sunt
libere n citoplasm i se nmulesc autonom de ADNul nucleoidic dar nu se transfer
dintr-o celula n alta (neconjugative) si
episomii (cu control strict), elemente genetice neeseniale formate din molecule
circulare coninnd cateva mii de perechi de baze. In celula pot exista n dou stri
alternative autonomi n citoplasm sau nserai n cromozomi. De fapt, episomii pot
fi considerai nite minicromozomi ce pot favoriza conjugarea i recombinarea
natural.
Plasmidele propriu-zise sunt de mai multe tipuri:
a. Factorul R, ce deine mai multe gene ce codific rezistena la antibiotice (din
care una RFT este capabil de a transfera rezistena, chiar n lipsa factorului
F);
b. Factorul F, independent de citoplasm;
c. Factorul COL, ce detine informaii pentru sinteza unor compui cu aciune
antibacterian (colicine).
Episomii sunt plasmide cu control strict i se gsesc n stare autonom, libere in citoplasm, cnd
se pot nmuli indepndent de genofor i n stare integrat ntr-un anumit punct n genofor,
replicndu-se simultan cu genoforul. Episomii au mai multe funciuni i au denumiri ce provin
din funcia deinut:
a. Factorul F (Fertility), coninnd 11 gene, ce codific sinteza unor componente ale
unor pili sexuali, (el putnd fi de tip mascul F+ , donator i de tip femel F- ,
primitor);
b. Factorul Hfr (high frequency recombination), care ofer o frecven de
recombinare de sute de ori mai ridicat ca a factorului F, pe care il conine;
c. Factorul Ti (tumour inducing), agentul inductor al convertirii celulei normale n
celul tumoral (gsit prima oar n 1907 de Smith si Townscad n bacteria
Agrobacterium tumefaciens);
d. Factorul Vhf (very high frequency of recombination), are calitatea, n opoziie cu
factorul Hfr , de a transfera, cu o frecven mult mai mare, markerii terminali ai
cromozomului, etc.
12
7. Reproducerea bacteriilor
Particulariti generale ale replicrii:
Dei mecanismul de replicare procariotic nu se difereniaz mult de cel eucariot, acesta totui are
nite particulariti:
o Nucleoidul bacterian este un replicon unic, adic are o singur secven de origine a
replicrii.
o Nucleoidul bacterian are o structur circular i, ca urmare, cele 2 bifurcaii de
replicare se ntlnesc la nivelul secvenei ter spre deosebire cromozomul de tip
eucariot are o structur linear, iar capetele lui (denumite telomere) se replic diferit
de restul cromozomului.
Complexul primozom:
Complexul primozom este format dintr-o serie de proteine ce determin iniierea
replicrii ADN. Cele mai importante proteine sunt:
Primaza: la bacterii este denumit DnaG i este codificat de gena dnaG; aceast enzim
sintetizeaz scurte fragmente de ARN ce au funcie de primeri, adic ofer capul 3-OH liber
pentru polimerizare.
Proteinele de iniiere: n, n, n, DnaA, DnaB, DnaC i DnaT Iniierea replicrii
presupune detaarea secvenei oriC de membrana plasmatic, dup ce, n prealabil, a fost atins o
anumit mas celular (denumit mas de iniiere) i n urma acumulrii unei cantiti
substaniale de fosfolipide acide pe faa intern a membranei plasmatice.
Secvena oriC din nucleoidul de E.coli are 245 bp i prezint 2 regiuni importante:
- o regiune cu 4 cutii dnaA (sunt formate din cte 9 bp) la care se va ataa proteina
DnaA
- o regiune cu 3 cutii, bogate n adenin-timin, la care se vor ataa complexe proteice
DnaB-DnaC Zece pn la 12 molecule de DnaA se leag la cutiile dnaA, determinnd
buclarea moleculei de ADN i, ca atare, desfacerea dublului helix n cutiile dnaB.
13
Replicarea plasmidelor:
Indiferent dac confer bacteriei gazd caractere eseniale sau neeseniale, toate
plasmidele au n structura lor o regiune foarte important pentru replicarea i meninerea stabil
a plasmidului respectiv n populaia bacterian. n prezent se consider c aceast regiune
esenial ar conine secvene de origine a replicrii plasmidiale, denumite convenional oriV (fata
de oriC (originea replicrii nucleoidului bacterian). O secven oriV trebuie s indeplineasca
urmatoarele conditii:
regiunea ADN minimal, cu activitate n cis, ce poate susine replicarea
plasmidial
regiunea ADN n care cele 2 catene se despart pentru a iniia procesul de
replicare
nucleotidul/nucleotidele la care incepe sinteza catenei lider
gene implicate n controlul replicrii plasmidiale (multe plasmide codific
o protein implicat n iniierea replicrii plasmidiale, denumita proteina
de tip Rep).
Diviziunea celulei procariote:
n condiii favorabile de via, n prezena mediului nutritiv, bacteriile reacioneaz rapid
i are loc creterea, proces prin care se produce mrirea coordonat a tuturor componentelor
celulei, rezultat prin acumularea de substan nou-format prin biosintez. n cazul n care prin
cretere se produce o modificare n raportul optim stabilit genetic ntre suprafaa care asimileaz
i volumul care acumuleaz, se declaneaz reproducerea prin sciziune, care va restabili raportul
vital. n prima etap, o dat cu biosinteza componentelor celulare, are loc replicarea nucleoidului
bacterian, dublarea numrului de mezozomi care vor lega moleculele de ADN i le vor deplasa
spre polii celulei. n zona median ncepe biosinteza unui perete despritor, nct celula
parental se regsete n cele dou celule rezultate prin sciziune, celule identice ca form,
dimensiune i structur genetic.
14
Figura 18.
15
Figura 19.
n fine, cea de-a treia metod de transfer i recombinare genetic o constituie conjugarea, care
reprezint un proces ce determin unirea (sinapsa) unor cromozomi n meioza de la materialul
donor la acceptor prin episomi F+ si F(plasmide autonome libere n citoplasm cu funcii
sexuale).
Celula
donoare
posed factorul F+ pe care l
trece n celula receptoare care
conine factorul F-, prin pilii
sexuali. Spre deosebire de
celulele fiinelor superioare, la
care zigotul se formeaz din
genoamele integrale ale celor
doi parteneri, la bacterii,
donorul las, de obicei, numai o
parte
din
genomul
sau
acceptorului. n acest caz,
fenomenul de transfer parial
genetic se numete meromixis,
iar zigotul parial merozigot.
Figura 20
16
9. Antibioticele
Antibiotic: substan organic solubil, produs de unele microorganisme animale i
vegetale, care are capacitatea de a distruge anumii microbi sau de a le opri dezvoltarea, fapt
pentru care se utilizeaz n tratamentul bolilor infecioase.
9.1 Mecanisme generale de aciune a antibioticelor:
Pornind de la descoperirea penicilinei de ctre Fleming, n 1928, au urmat alte molecule noi:
cefalosporine,
streptomicina,
tetracicline,
cloramfenicol
etc.
Antibioticele au fost clasate i in funcie de modul lor de aciune distingem patru categorii de
molecule:
antibiotice care inhib sinteza peretelui bacterian;
antibiotice care inhib sinteza proteinelor;
antibiotice care inhib functionarea acidului dezoxiribonucleic (ADN);
antibiotice care antreneaz distrugerea membranei citoplasmice.
Exist mai multe mecanisme prin care acest fenomen se poate manifesta:
Inactivarea sau distrugerea antibioticului - de exemplu inactivarea Penicilinei prin producerea
unor enzime (beta-lactamaze) care rup o legtur beta-lactamic din molecula acesteia;
Modificarea intei (locului de legare a antibioticului) asftel nct molecula antibioticului s nu
mai poat reaciona cu componentele celulare - de exemplu ribozomi sau enzime implicate n
sinteza peretelui bacterian;
Modificarea cilor metabolice la nivelul crora acioneaz antibioticele - cazul unor bacterii
rezistente la sulfamide, care n loc s sintetizeze acidul folic pornind de la acid paraaminobenzoic, folosesc acid folic preformat, ca celulele mamiferelor;
Inhibarea ptruderii antibioticului n celul prin modificarea membranei externe (deficit de
expresie a porinelor)- de exemplu mecanismul de rezisten a E. coli la macrolide;
Eliminarea antibioticului (efluxul activ, gena norA codifica o pompa de eflux, iar expresia
acesteia se intensific) - observat la unele specii de E. coli i S. aureus;
Operonul MAR (Multirezistenta la antibiotice).
Aceste mecanisme sunt nlesnite de specifice de recombinare genetic a bacteriilor, dar i de
necesitatea sporit de a supraveui a acestora n urma utilizrii foarte intense a antibioticelor n
scopuri curative, iar rezultatul este c la momentul actul un numr foarte mari de bacterii posed
rezisten la un spectru foarte larg de antibiotice.
Bibliografie/Webografie:
1. Galechi P., Buiuc D., Plugaru .. Ghid practic de microbiologie medical. Chiinu, Bucureti,
1997.
2. Universitatea din Bucureti, Facultatea de biologie, Curs: Microbiologie general, 2014
18
19