Modulul 1

Ingineria genic
1.1 Bazele ingineriei genice
1.2 Aplicaiile ingineriei genice

1.1 Bazele ingineriei genice

Inginerie genetic manipulri la nivel de

genom n scopul perfecionrii genetice a unui
organism. Ex. Mutageneza experimental,
obinerea hibrizilor.
Ingineria genic manipulri la nivel de
ADN, pentru a obine molecule recombinante
de ADN i transferul lor n alte organisme. Ex.
Obinerea organismelor modificate genetic.

1.1 Bazele ingineriei genice

1.1.1 Apariia i dezvoltarea ingineriei genice

Etape:
Descoperirea mecanismelor de transmitere a

informaiei ereditare
- Transformaia ( Griffits 1928, Avery .a. 1944)
- Sexducia (Lederberg, Tatum 1946)
- Transducia ( Tsinder, Lederberg 1952)
Descoperirea structurii ADN
- (Waston, Crick 1953)
Descoperirea sistemului enzimatic
- restrictaze, ligaze= foarfece i ac (anii 50-60 sec
XX)
Descoperirea fenomenului de transcripie invers
- (Temin, Baltimor, Mizutani 1970)

1.1.1 Apariia i dezvoltarea ingineriei genice

Etape (continuare):
Descoperirea sintezei artificiale a genei

- ( H. Corana .a. 1970-1976)

Obinerea primei molecule recombinante de ADN
- (P. Berg 1972)
Tierea ADN cu emzima Eco RI

Virusul
SV 40

Fagul
Legarea
fragmentelor

Molecul recombinant de ADN

o

Obinerea pe cale artificial a insulinei- (1982)

1.1 Bazele ingineriei genice

1.1.2 Baza tehnico-material

Sistem enzimatic

Sistem de transport (= vectori)

Organismele gazd

Ingineria genic se bazeaz pe izolarea

fragmentelor de ADN, clonarea n sisteme
vectoriale ce se replic autonom n celulele
gazd.

1.1.2 Baza tehnico-material

I. Sistemul enzimatic
1. Restrictaze

- Utilizate pentru a tia molecula de ADN

Endonucleaze
- nu produc fragmente specifice
Endonucleaze site-specifice
- produc fragmente specifice
2. Ligaze
- Utilizate pentru a lega fragmentele de
ADN/ARN

Proprietile restrictazelor utilizate

n ingineria genic
1.

Pot tia molecula de ADN n fragmente

discrete.

2.

Formeaz margini lipicioase.

3.

Posibilitatea restriciei succesiunilor de

nucleotide similare cu restrictazele
diferitor microorganisme.

4.

Specificitate nalt de aciune

Ex.EcoRI GAATTC
CTTAAG

1.1.2 Baza tehnico-material

II. Sistemul de transport (vectorial)

Vector = molecul specializat pentru transferul
informaiei ereditare a moleculei recombinante
de ADN n organismul gazd.Ex. Plasmide, fagi,
virusuri, cosmide, .a.

Cerine:
Inofensivitate
Multiplicare rapid n celula gazd, lipsa n alte
organisme
Nr. restrns de situsuri de recogniie
Obinere relativ uoar.
Clonarea i expresia n celulele strine

II. Sistemul de transport (vectorial) (continuare)

1. Plasmide ~ clonarea a cteva mii pb
-

Molecule de ADN dublucatenar extracromozomial

Prezente n mai multe copii
Tipice pentru bacterii
Se multiplic independent
Ex. pBR 322, pSC101

ADN bacterian

Plasmide

II. Sistemul de transport (vectorial) (continuare)

2.

Fagi ~ 10-20 mii pb

Virusuri bacteriene
Obinerea vectorilor n baza fagilor:
Prin inserii (un site de recogniie);
Prin substituii (2 /m multe site-uri
de recogniie,poriunea intern a
ADN fagic este nlocuit cu un
fragment strin);

Ex. Fagul

3. Cromozomi artificiali ~ sute de mii de pb

1.1.2 Baza tehnico-material

III. Celulele gazd (cerine)

1. Capacitate nalt de valorificare n cadrul cercetrilor
2.
3.
4.
5.

tiinifice
Lipsa apariiei proprietilor protectoare n afara
laboratorului
Posibilitatea degradrii ADN n afara laboratorului
Lipsa posibilitii transferului materialului genetic altor
organisme
Lipsa polurii mediului ambiant

n calitate de celule gazd servesc:

Bacterii, celule de drojdii, culturi de celule i
esuturi vegetale i animale.

III. Celulele gazd (exemple)

1. Escherichia coli

Bacterie gram negativ

Avantaje:
Diversitate mare a plasmidelor
Varietate nalt a tulpinilor
Metode accesibile de cultivare
Posibilitatea transformrii
Posibilitatea manipulrii
-

Dezvantaje:
Organism procariot
Organism din microflora intestinal a omului
Probleme de realizare a informa iei genetice de la
organismele eucariote
Probleme de biosecuritate

III. Celulele gazd (exemple)

2. Saccharomyces cerevisiae
Drojdia de bere
Avantaje:
Rareori este un patogen uman
Organism monocelular eucariot
Mecanisme de reglare a realizrii
informaiei ereditare, tipice
eucariotelor
Dezvantaje:
Dificil de transformat
Productivitatea este mai joas
Nu exist plasmide

Mulumesc pentru atenie!