Microbiologie Raspunsuri Examen

Microbiologie. Raspunsuri examen stomatologie.
1)Regulile sanitaro-igienice i regimul antiepidemic n laboratoarele microbiologice n raport cu riscul infecios.

Activitatea n laboratoarele de microbiologie implic riscul contractrii unor infec ii , care pot fi agravate.Prevenirea
infeciilor de laborator i rspndirii lor eventuale n colectivitate impune cunoa terea:*riscul poten ial reprezentat de
microorganismele manipulate, *cilor prin care ele ptrund n organism *metodelor corecte de limitare a accesului acestor
organisme la cile de transmitere i por ile de intrare n organism.Organiza ia Mondial a Snt ii clasific agen ii
infecioi n 4 grupe de risc infecios individual i pentru colectivitate.Primul grup reprezint un risc individual redus i
colectiv redus(microbi nepatogeni pentru adultul sntos, posibil oportuni ti pentru gazda imunocompromis:vaccinuri vii
atenuate,Bacillus subtilis,epidermidis.)Grupul doi reprezint un risc individual moderat i colectiv
redus(nematode,trematode,protozoare parazite pentru om, fungi dermatofi i sau oportuni ti,bacterii,virusuri,
gonococi,meningococi, bacilii tuberculozei, ricketsii,virusul gripal,bacil difteric etc.)Grupul 3 reprezint un risc
individual mare i colectiv redus(rickettsii tifos,febre ptate, bacilii tuberculozei,fungi dimorfi, virusurile hepatitelor
B,C,virusul CML, meningococ, Yersinia pestis etc.) Grupul 4 reprezint un risc individual mare i colectiv
mare(virusurile febrelor hemoragice:Junin,Marburg,Lassa,Ebola, virusul encefalitei acariene de primvar-var).
Un laborator este autorizat s manipuleze microorgaisme cu un anumit grad de risc numai in msura n care
personalul este pregtit, are dotrile necesare i poate aplica metodele de siguran pentru a preveni rspndirea agen ilor
infecioi n mediul unde sunt manipulai sau meninui. Organiza ia Mondial a Snt ii a stabilit 4 niveluri de
exigen.1 i al 2-lea nivel-laboratoarele de bazn care se manipuleaz microorganisme cu risc de gradul 1 sau2, nivelul
3-laboratoare cu regim restrictiv, n care se manipuleaz microorganime cu risc de gradul 3, nivelul 4-laboratoarele cu
regim de maxim restricie, n care se manipuleaz microorganisme cu risc de gradul 4, func ioneaz n regim de exigen
special .
La fel n laboratoarele de microbiologie diferen iem 3 bariere neiinfec ioase:
Bariere primare, care previn rspndirea unui microb n laborator;
Bariere secundare, care protejeaz personalul n cazul dep irii accidentale de ctre microorganisme a barierelor
primare;
Bariere teriare , care previn rspndirea n comunitate a microorganismelor care au dep it barierile primare i
secundare.
2)Tehnica de prelevare, ambalare i condiiile de transportare a materialului recoltat n infeciile sistemului
respirator.
Exudatul nazofaringian se prelev pentru diagnosticul tusei convulsive, a unor pneumonii intersti iale i a portajului de
microbi patogeni cum sunt meningococii,streptococii piogeni, bacilii difterici etc.Mai u oar este prelevarea pernazal.Se
utilizeaz tampon confecionat pe tij din srm de crom nichel cu lungimea de 20 cm i grosimea de 1mm.Una din
extremiti este ndoit, nmuiat n colodiu i nf urat strns cu vat.Extrimitatea liber este ndoit n bucl pentru a
facilita manipularea.Aceste tampoane se pot obine din sec ia de ORL.Capul pacientului este imobilizat i tamponul
introdus blnd n lungul planeului nazal pn atinge peretele posterior al nazofaringelui.Este lsat cteva secunde pe loc,
apoi rotit uor , pentru a-l ncrca cu exudat, i retras.Cantitatea de prelevat cre te cnd tamponul se retrage i se
rensereaz n aceeai poziie, prima tamponare stimulnd secreia de mucus nazofaringian.
Prelevarea pe cale bucal se face cnd abordarea pernazal nu este posibil.Se utilizeaz un tampon obi nuit cu tij de
srm.Extremitatea care poart tamponul este ndoit n unghi drept in momentul scoaterii din tub. Tamponul, introdus
prin gur in faringe, este trecut cu atenie in spatele palatului moale, pentru a terge peretele posterion al nazofaringelui
.La introducere i la scoatere se va evita contaminarea tamponului cu secreii faringiene i bucale.
Moartea microbilor infectani poate fi cauzat de: razele solare directe; deshidratare; modificri de pH; autoliz;
oxigenul atmosferic in cazul anaerobilor strici. De aceea, odat recoltate, probele trebuie examinate in cel mai scurt timp
posibil sau conservate prin refrigerare i medii de transport adecvate.
Refrigerarea. La 0C (container izoterm cu ghea umed) sau la 4C (frigider) majoritatea microbilor patogeni
supravieuiesc cele cteva ore necesare transportului, iar multiplicarea contaminanilor este oprit. De exemplu, semiviaa
majoritii virusurilor (intervalul n care infeciozitatea suspensiei virale scade cu 50%) se msoar n ore la temperatura
camerei, n zile la 4C i n luni la 70C. Puine bacterii nu rezist la refrigerare: meningococul, gonococul,
Haemophilus influenzae.
Mediile de transport asigur supravieuirea microorganismelor prevenind desicarea, variaiile de pH, oxidarea i
autoliza. Un indicator, cum este rou fenol, permite monitorizarea vizual a pH-ului cnd aceast condiie este critic
pentru supravieuirea unor microbi (e.g. virusuri).
Microbii care sunt izolai pe culturi de celule sau embrioni de gin (ca virusurile i chlamidiile) se transport n medii
cu antibiotice (penicilin, streptomicin, nistatin).
3)Microscopul optic. Principiile construciei i tehnica microscopiei.
Examenul microscopic permite depistarea rapid a microbilor, observarea morfologiei, reaciilor de culoare i a unor
detalii structurale necesare identificrii lor. De aceea microscopul optic este indispensabil oricrui laborator de
microbiologie, iar microbiologul trebuie s cunoasc tehnicile de microscopie.
Microscopul este format, in esen, din dou sisteme de lentile cuplate:
obiectivul, sistem de lentile cu distana focal de ordinul mm, situat ctre obiectul examinat;
ocularul, sistem de lentile cu distana focal de ordinul cm, situat ctre ochiul examinatorului.
Obiectivul formeaz imaginea primar, real mrit i rsturnat a obiectului plasat imediat dincolo de distana focal.
Ocularul funcioneaz ca o lup: reia imaginea primar, format imediat nuntrul distanei sale focale, i o transform in
imagine virtual, mult mrit, rsturnat i obinut la distana minim a vederii clare a observatorului (2025 cm), care
corespunde aproximativ nivelului mesei portobiect a microscopului .
Descrierea microscopului optic
Orice microscop are n compunere o parte mecanic, un sistem optic i un sistem de iluminare .Detalii privind forma i
amplasarea diferitelor componente ale acestor sisteme pot varia n raport cu firma productoare.
Partea mecanic
Piciorul suport i asigur stabilitatea aparatului. Pe picior se articuleaz braul microscopului care poart corpul cu
tubul microscopului i masa portobiect .
Micarea tubului n axul optic al microscopului este asigurat prin deplasarea corpului cu ajutorul dispozitivelor de
focalizare grosier i fin acionate prin butoane.Domeniul de lucru al micrii fine este limitat la cca 1,7 mm i este
indicat prin dou repere gravate pe corpul microscopului i un indicator pe culisa micrii fine . Pentru a pstra
capacitatea de deplasare a tubului n cele dou sensuri, indicatorul trebuie adus la mijlocul cursei, marcat de cele dou
repere.
Condensorul este focalizat printr-un buton .
Masa portobiect este prevzut cu deschidere central pentru luminarea obiectului, supori reglabili pentru fixarea lamei
portobiect i butoane care controleaz micrile mesei pe direcie transversal i longitudinal .
Sistemul optic
Sistemul optic este purtat de tubul microscopului. Obiectivele se adapteaz la partea inferioar a tubului prin capul
revolver , care, prin rotire, le aduce dup dorin n axul optic. Un pinten acionat cu un resort face s se perceap un
declic la poziionarea corect a fiecrui obiectiv in axul microscopului. Ocularele se adapteaz prin telescopare la partea
superioar a tubului. Microscoapele moderne sunt prevzute cu cap binocular, care adapteaz ocularele la distana
interpupilar a observatorului i permit corecii pentru ametropiile interoculare.
Sistemul de iluminare
Sursa de lumin. Pentru iluminarea preparatului se poate folosi lumina din surs exterioar dirijat ctre preparat prin
deschiderea mesei portobiect cu ajutorul unei oglinzi . La microscoapele moderne sursa de lumin i dispozitivele de
dirijare a fascicolului luminos (diafragma de cmp, oglinda i butoanele pentru reglarea oglinzii) sunt incluse n piciorul
microscopului.
Condensorul de cmp luminos este un sistem de lentile care focalizeaz lumina asupra preparatului, contribuind esen ial
la luminozitatea imaginii.Un bun condensor este acromat i adaptabil la apertura numeric a obiectivului.
4)Microscopul cu fond ntunecat. Principiile construciei i tehnica microscopiei.
1.
2.
3.
4.
5.
Microscupul cu fond ntunecat este indicat pentru examen electiv pentru depistarea rapid a spirocheilor, organisme
foarte fine, puin refringente i mobile, care nu pot fi observate la preparate microscopice uzuale.
Principiu: n condiii de iluminare obinuit rmn invizibile, cnd se afl n calea unei raze de lumin, care nu este
direcional spre ochiul observatorului (condiie a obscuritii), devin vizibile prin lumina difractat i reflectat difuz pe
suprafaa lor, i indic astfel observatorului traiectoria acestei raze.
Condensorul pentru cmp ntunecat oprete accesul spre obiectiv a razelor de lumin directe (creeaz fondul ntunecat)
i ilumineaz oblic obiectul. Parte din razele difractate i reflectate de ctre obiectul iluminat oblic ptrund in obiectiv i
formeaz imaginea luminoas a obiectului pe fondul negru al cmpului. Microscopia pe fond negru obiectul floteaz intro pelicul de lichid pentru a evita reflexia total a razelor nainte ca acestea s-l lumineze.
Necesar.
Condensor cu oglinzi sferice concentrice, care nlocuiete condensorul pentru cmp luminos la un microscop optic.
Surs de lumin cu mare intensitate i diafragma iris.
Lame de microscop cu grosimea de 1,0 mm. Numai pe asemenea lame preparatul este plasat -in focarul condensorului (distana focal de 1,2 mm).
Ulei de cedru.
Camer obscur.
Procedura:
1.Se centreaz diafragma de cmp folosind condensorul de cmp luminos i obiectivul 10X
2.Se nlocuiete condensorul de cmp luminos cu cel pentru iluminarea cu fond negru.
3.Se depune o pictur de ulei de cedru pe lentila superioar a condensorului, ridicat la nivelul mesei portobiect.
4.Se pune preparatul ntre lam i lamel peste pictura de ulei de cedru de pe lentila condensorului.
5.Se examineaz preparatul cu obiectivul 10X apoi, cu un obiectiv uscat mai puternic, dup necesitate. Cu ct obiectivul
are o apertur mai mare fondul cmpului microscopic este mai puin ntunecat. De aceea pentru examinare cu imersia
trebuie folosit un obiectiv prevzut cu diafragma iris.
Dup examinare, se depune preparatul ntr-un recipient cu soluie dezinfectant. Microscopia pe fond ntunecat se
folosete pentru evidenierea n preparate native a agen ilor cauzali ai sifilisului,tifosului recurent, leptospirozei i altor
boli ,precum i pentru studierea mobilitii microorganismelor.
5) De demonstrat tehnica pregtirii preparatelor native din culturi pure de bacterii. Metodele de studiere.
Aplicarea practic
Frotiul este materialul microbian (produs patologic, cultur) etalat n strat subire pe suprafaa unei lame speciale de
sticl in vederea microscopiei. Pentru frotiuri folosim lame de microscop curate, degresate i marcate la o extremitate cu
indicativul materialului microbian examinat. Efectuarea frotiului cuprinde trei timpi :
1.Etalarea. O ans de produs microbian fluid este ntins n strat ct mai subire i uniform pe o suprafa de 12 cm
ptrai in centrul lamei. Similar, o seciune dintr-o colonie bacterian pe mediu solid, prelevat cu acul, poate fi
suspensionat ntr-o pictur de ap in centrul lamelei. La etalare ansa i acul se manipuleaz cu micri lente pentru a nu
crea aerosoli contaminani la ruperi brute ale peliculei de lichid.
Cu fragmentele de esuturi se efectueaz amprente: pe suprafaa de seciune a probei se aplic lama pentru ca n
poriunea ei central s rmn amprenta subire a esutului.
1.Uscarea frotiului se face la temperatura camerei, dar mai indicat este s fie grbit in aer cald sau pe platin nclzit
la 75C.
3Fixarea face frotiul mai aderent la lam, amelioreaz colorabilitatea structurilor celulare i omoar microorganismele.
Pentru studiul bacteriilor i multor fungi uzual este fixarea prin cldur. Lama, cu frotiul uscat n sus, se nfierbnt
trecnd-o de 23 ori, cca 5 secunde, prin flacra unui bec de gaz. Pentru studiul protozoarelor este indicat fixarea cu
alcool metilic.
La pregtirea frotiului din culturi bacteriene crescute n medii compacte pe lama rcit se aplic o pictur de
soluie izotopic de clorur de sodiu sau ap. Eprubeta cu cultur se fixeaz n mna stng cu degetul mare i cel
indicator. Ansa bacteriologic se sterilizeaz n flacra spirtierei. Dopul de vat se fixeaz cu mezinul de la mna dreapt,
se extrage din eprubet i se pstreaz n aceast poziie. Marginile eprubetei se sterilizeaz prin flambare n flacra
spirtierei, apoi n eprubet prin flacr se introduce ansa. Ansa rcit de suprafaa intern a peretelui eprubetei se atinge de
marginea mediului nutritiv la hotar cu sticla (n caz c ansa nu va fi ndeajuns de rece, va produce un trosnet uor i va
topi mediul). Cu ansa rece se atinge cultura de microorganisme de pe suprafaa mediului. Ansa apoi se extrage, rapid
marginele epmbetei se flambeaz, se astup cu dopul trecut prin flacr i eprubeta se instaleaz n stativ. Toate aciunile
descrise au loc numai deasupra flcrii. Cultura se introduce cu ansa ntr-o pictur de ap pe lam i se extinde uniform
prin micri de rotaie pe o suprafa cu diametrul 1-1,5 cm (aproximativ de dimensiunile monedei de 10-15 cop.), apoi
ansa se flambeaz.
6)De demonstrat tehnica pregtirii frotiurilor din culturi pure de bacterii i colorarea prin metoda Gram.
Frotiul din snge se prepar n modul urmtor. Cu un ac steril se n- eap degetul inelar de la mna sting, n prealabil
dezinfectat. Prima pictur se nltur cu vata uscat, apoi de pictura de snge aprut se atinge suprafaa lamei bine
degresat. Lama imediat se aeaz pe mas fixind-o cu mina sting, se atinge pictura de sge cu marginea altei lame
lefuite i puin mai nguste, sub un unghi de 45 . Cu o micare uoar a lamei lefuite pictura se extinde n sting,
neajungnd 1-1,5 cm de margine. Frotiul pregtit corect este de culoare gl buie, uor transparent.
Frotiuri-amprente se pregtesc din organele interne ale cadavre lor, din produse alimentare de consistent solid (came,
ornai, unc i altele). Suprafaa organelor i a produselor alimentare se arde cu bisturiul incandescent i din acest secte
se taie o poriune de material. Fragmentul, cu suprafaa tiat se atinge de lam n dou-trei locuri.
Uscarea i fixarea frotiului. Frotiuriie subiri se usuc rapid la temperatura camerei, iar cele mai groase se usuc n
termostat sau prin nclzire deasupra flcrii.Pentru ceasta lama se fixeaz de margini cu degetele mare i indicator,iar cel
mijlociu se plaseaz sub lam pentru a dirija gradul de nclzire i evitarea coagulrii proteinei bacteriene i modificarea
structurii celulare.
Frotiuriie uscate snt fixate n flacra spirtierei pentru a inactiva i a fixa bacteriile de lam i a evita eluia lor n
procesul de colorare.
Microorganismele omorte au o capacitate mai pronunat de a asimila coloranii i, totodat, ele nu prezint pericol
pentru cei care lucreaz.
Coloraia Gram. Metoda Gram, propus n 1884, n-a pierdut importanta practic pn n timpul de fa.
Aceast metod de colorare permite divizarea bacteriilor n gram-pozitive i gram-negative, i nlesnete
diagnosticul diferenial al unor boli infecioase.
Pregtirea soluiilor da colorani pentru coloraia Gram. Pentru aceast metod snt necesari urmtorii
colorani: 1-violat de genianA fenicat sau violet de metil, soluie apoas; 2 - soluia Lugol; 3 - sloool 96%; 4 fucsinA Pfaiffer.
Soluia violet de genian fenicat
Violet de genian - 1 g Aloool 95% - 10 ml Fenol cristal - 2 g Ap distilat - 100 ml
Violetul de genian, violetul de metil i violetul cristal snt colorani din seria trifenilmetanului, ceea ce permite
folosirea lor cu acelai succes n coloraia Gram.
Violet de metil n soluia apoas
Violet de metil - 0,2 g Ap destilat - 100 ml Aceast soluie este mai stabil.
Soluia Lugol
lodur de potasiu 2g, lod cristal 1 g Ap distilat - 100 ml
La nceput se pregtete soluia concentrat de iodur de potasiu, n care se dizolv iodul, apoi se adaug ap
distilat.
Coloraia Gram are patru etape.
1) Pe frotiul fixat se aplic soluia apoas a violetului de metil, timp de 1-2 min (la coloraia prin metoda Sinev frotiul se
acoper cu o hrtie de filtru, n prealabil mbibat cu soluia violetului de genian i uscat, pe care apoi se aplic 2
picturi de ap), apoi soluia se vars.
2)Frotiul se prelucreaz cu soluia Lugol (1 mm) i ea se vars fr a-l spla cu ap.
3)Frotiul se decoloreaz cu alcool 95% (0,5-1 min), splnd dup aceasta resturile de alcool cu ap.
4)Frotiul se acoper cu fucsin Pfaiffer i peste 1-2 min colorantul se vars, preparatul se spal cu ap, se usuc cu hrtie
de filtru i se examineaz la microscopul imersic.
Prin aceast metod de coloraie microorganismele gram-pozitive se coloreaz n violet, iar cele gram-negative - n
rou-roz, ceea ce este determinat de particularitile de structur i compoziia chimic a celulei microbiene.
7) De demonstrat tehnica pregtirii frotiurilor din culturi pure de bacterii i colorarea prin metoda Ziehl-Neelsen
nceputul de la ex . 6 +
Coloraia Ziehl-Neelsen se folosete pentru evidenierea mico bacteriilor acidorezistente ale tuberculozei, leprei i unor
actinomicete. Acidorezistena microorganismelor este condiionat de prezena lipidelor, cerii, oxiacizilor n celulele lor.
Astfel de microorganisme se coloreaz greu cu soluiile diluate de colorani pentru a uura ptrunderea colorantului n
celula microorganismului fucsina fenicat Ziehl, aplicat pe frotiu, se nclzete la flacr.
Microorganismele colorate nu se decoloreaz cu soluii slabe de acizi minerali i alcool.
Coloraia Ziehl-Neelsen include urmtoarele etape:
1.Frotiul fixat se acofer cu hrtie de filtru. Pe ea se toarn fucsin fenicat Ziehl (se poate utiliza hrtie de filtru,
preventiv mbibat cu colorant i uscat .)Frotiul se nclzete la flacr pn la apariia vaporilor, apoi se rcete i se
adaug o poriune nou de colorant. nclzirea se repet de 2-3 ori. Dup rcire hrtia de filtru se nltur i frotiul se spal
cu ap.
2.Frotiul se decoloreaz cu soluie de 5% de acid sulfuric i se spal de cteva ori cu ap.
3.Frotiul se recoloreaz cu albatru de metilen - soluie hidroalcoolic - 3-5 min, se spal cu ap i se usuc
Bacteriile acido-rezistente colorate prin metoda Ziehl-Neelsen capy un ro u aprins ,iar restul microflorei se coloreaz
n albastru deschis.
8) De demonstrat tehnica pregtirii frotiurilor din culturi pure de bacterii i colorarea prin metoda Burri-Hinss
nceputul de la ex. 6 +
Coloraia Hinss. Frotiul pregtit dup Burri i uscat la aer se fixeaz, aplicnd 2-3 picturi de alcool, care se arde pe
lam. Pe lama rcit se aplic fucsina Pfaiffer - 3-5 min, se spal cu ap i se usuc. In acest caz bacteriile se coloreaz n
rou, iar capsulele incolore evident contrasteaz pe fondul ntunecat al frotiului. Uneori n jurul bacteriilor colorate
acapsulate se observ zone mici incolore - pseudocap sulate, care apar n urma uscrii i fixrii incorecte a frotiului.
9) De demonstrat tehnica pregtirii frotiurilor din culturi pure de bacterii i colorarea prin metoda Aujeszky
nceputul de la ex. 6 +
Coloraia Aujeszky. Se prepar un frotiu des din cultur, se usuc la aer, se mordeaz cu soluie de 0,5% acid clorhidric
i se nclzete pn la apariia vaporilor. Pe urm frotiul se spal cu ap, se usuc, se fixeaz n flacr i se coloreaz
prin metoda Ziehl-Neelsen. Sporii se coloreaz n rou-roz, iar celula - n albastru.
10) De demonstrat tehnica pregtirii frotiurilor din culturi pure de bacterii i colorarea prin metoda Neisser.
ncepnd de la ex.6+
Metoda Neisser. Coloraia granulaiilor de volutin prin aceast metod include urmtoarele etape.
1.Frotiul fixat se coloreaz cu albastru de metilen acetat - 1 min, colorantul se nltur i se spal cu ap.
2.Se acoper cu soluia Lugol - 20-30 s.
3.Fr a fi splat, frotiul se coloreaz cu vezuvin - 1-3 min, apoi se spal cu ap i se usuc.
Albastru de metilen acetat Neisser

Albastru de metilen - 0,1 g Alcool 95% - 2 ml Acid acetic glacial - 5 mi Ap distilat - 100 ml
Vezuvin
Vezuvin - 12 g Alcool 95% - 60 ml Ap distilat - 40 ml
Amestecul se fierbe i dup rcire se filtreaz.
11.Noiune de sterilizare. Obiectul i regimul sterilizrii prin

cldur umed. Controlul eficienii sterilizrii.
Sterilizarea este distrugerea sau indepartare tuturor microorganismelor,inclusiv a sporilor.
Sterilizarea prin caldura umeda,se face cu ajutorul autoclavului prin vapori sub presiune,care
realizeaza 115C,la 0,5atmosfere,121C la o
atmosfera si 134c la 2 atmosfere.
Autoclavul este un cazan cu pereti rezistenti in care dupa inchiderea cu un capac masiv,presat
cu buloane sau sistem cabestan,vaporii de apa se
comprima la presiunea necesara sterilizarii.
Autoclavele cu peretele simplu pot fi verticale si orizontale.Se sterilizeaza sticlaria pentru culturi
de celule si aparatele de filtrare.
Procedura:
Se toarne apa in cazan,pina la 2-3 cm,prin incinta de sterilizare
Se aseaza pe suport obiectele de sterilizat in ambalajul lor.(flacoane,eprubete,cosuri din
sirma,cutii,casolete...)cu capacele semideschise
Se inchide etans capacul autoclavului
Se conecteaza sursa de caldura
Se deschide robinetul pentru evacuarea aerului.dupa ce aerul este complet evacuat din
incinta de sterilizare...
Se inchide robinetul de evacuare a aerului
Cind presiunea ajunge la valoarea aleasa se regleaza sursa de caldura,pentru a mentine o
presiune constanta,pe toata durata timpului de
sterilizare.
Se intrerupe sursa de caldura,pentru a se raci aparatul,se deschid lent robinetul de
vapori,apoi capacul.
Se lasa materialele pentru uscare in autoclava deschisa
Pentru controlul functionarii sterilizatorului cu vapori intre obiectele ce se sterilizeaza se

pune un tub de sticla sudat,care contine o substanta cu punctul de topire cunoscut
(benzonaftol-110C,acid benzoic-120C) si o cantitate mica de colorant anilinic praf.La
topirea acestor substante are loc colorarea lor uniforma.
Tyndalizarea-este sterilizarea fractionara pentru substantele care se degradeaza si
denatureaza usor la temperatura de 60C(serurile,vitaminele).Incalzirea se repeta timp
de 5-6 zile in aparate speciale cu termoreglatoare sau in baile de apa obisnuita la
temperatura de 56-58C cite o ora.
Pasteurizarea-se foloseste pentru distrugerea formelor asporulate ale
microorganismelor in special a speciilor patogene.Prin pasteurizare are loc asanarea
diverselor produse printr-o singura incalzire la 50-65C timp de 60 min sau la 70-80C 510 min.Laptele se pasteurizeaza cu scopul inactivarii bacteriilor acidolactice si
patogene(tifo-paratifoidice,streptococilor,stafilococilor).
12.Noiune de sterilizare. Obiectul i regimul sterilizrii prin

cldur uscat. Controlul eficienii sterilizrii
Sterilitate este distrugerea sau indepartarea tuturor microorganismelor, inclusiv al sporilor.
Sterilizarea cu aer fierbinte(cald):
Indicatii: Obiecte din sticla (eprubete, flacoane, pipete) sau din portelan (mojare, pistile), seringi
Luer din sticla, instrument chirurgical, substante grase, pulberi termostabile.
Se realizeaza in etuva la temperature de 160-180 grade Celsius timp de o ora. Suplimentar inca
o ora in cazul ambalajelor voluminoase sau obiectelor care se incalzesc greu. Etuva e o incinta
cilindrica cu pereti dubli din table termoizolati.Un thermostat care mentine temperature. Un
sistem de ventilare care uniformizeaza temperature.
Procedura: Obiectele sterilizarii se pun pe rafturi cu spatii intre ele pentru libera circulatie al
aerului cald. Se inchide etuva. Se deschid orificiile de ventilare si se conecteaza la retea. Se
marcheaza timpul de sterilizare. Obiectele se scot numai dupa racirea aparatului.
Controlul eficientei sterilizarii: 3 tipuri de indicatori; fizici (manometru, termometru), chimici
(floare de sulf (autoclave) se topeste la 115 grade C, acid benzoic(autoclava) se topeste la 121122 grade C, tiouree (etuva) se topeste la 180 grade) si biologici: tuburi cu fire de bumbac cu
spori, dupa sterilizare se insemanteaza.
13. Noiune de sterilizare. Sterilizarea chimic. Obiectele i

regimul sterilizrii. Controlul eficienii sterilizrii
Pentru sterilizarea chimica se folosesc gaze.Mai cunoscut este oxidul de etilen,un gaz
incolor,usor solubil in apa si imflamabil.Toxicitatea e moderata.
Indicatii: Sterilizarea echipamentului de plastic termosensibil se efectueaza in
laboratoarele de microbiologie.Mai larg este folosit in serviciile de
endoscopie(sterilizarea cateterelor si componentelor termosensibile ale
endoscoapelor),de chirurgie sau stomatologie.
Se utilizeaza in amestec cu 15% CO2(pentru a preveni explozii).In incinte etanse,la 5560C si 40% umiditatea relativa,in concentratie de 450-800 mg /l oxidul de etilen asigura
sterilizarea in interval de 2,5-3h.
Controlul eficientei sterilizarii: 3 tipuri de indicatori; fizici (manometru, termometru), chimici
(floare de sulf (autoclave) se topeste la 115 grade C, acid benzoic(autoclava) se topeste la 121122 grade C, tiouree (etuva) se topeste la 180 grade) si biologici: tuburi cu fire de bumbac cu
spori, dupa sterilizare se insemanteaza.
14. Mediile de cultur. Cerinele fa de medii. Clasificarea.

Mediile uzuale, elective, diferenial-diagnostice, de
mbogire. Aplicarea practic
Mediile de cultura =sunt soluii care asigura nutrientii si conditiile fizico-chimice necesare
cresterii si multiplicarii bacteriilor.
Cerinele fa de Mediile de cultura:
a. necesitile nutritive i energetice bct
b. umiditate optimal
c. pH optimal (7,2-7,4) i constant (caracter de tampon)
d. potenial de oxido-reducere optimal (anaerobi - rH2<5, aerobi rH2>10)
e. izotonic (0,5% NaCl)
f. steril i transparent
Clasificarea Mediilor de cultura:
--Dup provenienta nutrientilor
Empirice, naturale. Au la baz produse de origine animal sau vegetal (snge, ser, lapte,
ou, cartof, extracte din carne, cord, creier,ficat, pete, levuri, etc). Compoziia chimic precis
nu poate fi controlat.
Sintetice includ ingrediente chimice pure, compoziia chimic este cunoscut cu exactitate
-- Dup consistenta
Lichide (bulion) utilizate pentru obinerea biomasei bacteriene i a produselor lor (bulionul
peptonat,glucozat,cu singe si biliat,apa peptonata si laptele)
Solide conin 10-15% gelatin sau 2-3% agar-agar (polizaharid extras din alge roii, t topire
80-100C, solidificare 42C). Placa de geloz n cutii Petri si izolarea culturilor pure; geloza
nclinat (n pant) si acumularea culturilor pure.
Semilichide 0,2 0,5 % agar-agar. Se utilizeaz pentru studierea activitii biochimice sau a
mobilitii bacteriilor.
-- Dup compozitia chimic:
Medii uzuale (universale, simple):
- Ap peptonat (ap+1% pepton+0,5% NaCl)
- Bulion peptonat BP (extract apos din carne + 1% pepton+0,5% NaCl)
- Geloza nutritiv (BP + 2-3% agar-agar)
- Gelatina nutritiv (BP + 10-15% gelatin)
Sunt utilizate pentru creterea bacteriilor nepretenioase la cultivare
Sterilizarea prin autoclavare: 120C, 20 min
Medii complexe:
elective
selective:
- pe mediu solid
-pe mediu lichid = mediu de imbogatire
diferential-diagnostice (DD):
- izolare cultura pura
- multitest, pt acumulare cultura pura si identificare preliminara
- identificare finala
speciale
de transport
Medii elective formate din medii simple cu adaos de componente care permit creterea mi/o
exigente nutritiv (bulion-ser, bulion glucozat,geloz-snge streptococi, neisserii; ser coagulat
corinebacterii, etc)
Mediile de mbogire reprezint medii selective lichide, utilizate pentru mbogirea florei
patogene i inhibarea florei de asociaie dintr-un prelevat plurimicrobian (ex: materii fecale)
a. Mediul Muller (BP+Lugol+CaCO3+hiposulfit)
b. Mediul Kauffmann (mediul Muller+bil+verde de briliant) Salmonella
c. Bulion cu selenit Shigella, Salmonella
d. Ap peptonat alcalin (pH=8) Vibrio cholerae
e. Kitt-Tarrozzi (BP+0,5% glucoz+buci de ficat) pentru anaerobi
Medii diferenial-diagnostice ) permit diferenierea speciilor bacteriene n baza activitii
lor biochimice (zaharolitice, proteolitice,lipolitice, de oxido-reducere)
Sunt construite dup urmtoarea schem: Baz nutritiv+substrat+indicator (la necesitate)
15.Mediile de cultur. Cerinele fa de ele. Mediile selective

i diferenial-diagnostice. Componena, aplicarea practic.
Mediile de cultura =sunt soluii care asigura nutrientii si conditiile fizico-chimice necesare
cresterii si multiplicarii bacteriilor.
Cerinele fa de Mediile de cultura:
a. necesitile nutritive i energetice bct
b. umiditate optimal
c. pH optimal (7,2-7,4) i constant (caracter de tampon)
d. potenial de oxido-reducere optimal (anaerobi - rH2<5, aerobi rH2>10)
e. izotonic (0,5% NaCl)
f. steril i transparent
Medii selective medii solide cu adaos de componente sau cu condiii fizico-chimice
particulare care stimuleaz creterea unor specii i inhib creterea altor specii (geloza salin stafilococi, geloza alcalin - vibrioni, mediul Ploskirev - Salmonella, Shigella, etc)
Medii diferenial-diagnostice (DD) permit diferenierea speciilor bacteriene n baza
activitii lor biochimice (zaharolitice, proteolitice,
lipolitice, de oxido-reducere)
-Medii DD pentru izolarea culturii pure
Studierea proprietilor zaharolitice:
Endo (geloz+lactoz+fucsin+hiposulfit de Na)
Levin (geloz+lactoz+eozin+albastru metilen)
Ploskirev (geloz+lactoz+rou neutru+sruri de acizi biliari+verde de briliant)
Coloniile lactozo-pozitive vor fi colorate (roii pe Endo, Ploskirev, albastru-violete pe Levin)
Studierea proprietilor de oxido-reducere:
Mediul cu sulfit de Bi pentru Salmonella (colonii negre reducerea sulfitului n sulfura de Bi)
Mediul Klauberg (geloz-snge cu telurit de K) pentru Corynebacterium diphtheriae
Studierea proprietilor lipolitice:
Geloza cu glbenu de ou bacteriile cu lecitinaz formeaz un halou opac n jurul coloniei
Studierea proprietilor hemolitice:
Geloza-snge (geloza+5-15% snge defibrinat) in cazul hemolizei n jurul coloniilor apare o
zon clar
-Medii DD multitest pentru acumularea culturii pure i identificare preliminar
Kligler identic Russel+sulfat de Fe (detectarea H2S)
Olkeniki identic Kligler+1% zaharoz+uree
Indicatorul Andrede fucsin+NaOH
Scindarea glucidelor (acid - A, acid i gaz - AG) duce la modificarea pH i virajul culorii
mediului din rou n galben. n pant se apreciaz lactoza/zaharoza (oxidare), n coloan-glucoza
(fermentare).
-Medii DD pentru identificarea final
irul pestri Hiss (lichid sau semisolid): tuburi ce conin soluii 0,5% de diferite glucide i
indicator. Aprecierea dup modificarea culorii (acid -A) i apariia bulelor de gaz (acid i gaz AG)
16.De selectat mediile de cultur i de descris proprietile

biochimice ale microorganismelor.
Activitatea zaharolitic (irul Hiss, coagularea laptelui, etc)
Activitatea proteolitic
Degradarea proteinelor native (lichefierea gelatinei sau a serului coagulat, peptonizarea laptelui,
etc)
Evidenierea enzimelor specifice (ureaz, decarboxilaze, dezaminaze, etc) prin detectarea
produsele finale ale reaciilor: H2S, NH3, indol
o Depistarea producerii H2S: formarea sulfurii de fer de culoare neagr n mediile multitest
Kligler, Olkeniki, etc; plasarea unei benzi de hrtie de filtru mbibat cu acetat de Pb deasupra
n care crete cultura studiat (formarea sulfurii de Pb nnegrete hrtia)
o Depistarea indolului (produs al metabolizrii triptofanului) benzi de hrtie mbibate cu acid
oxalic. n prezena indolului indicatorul vireazn roz.
o Depistarea amoniacului (ureaza) hrtia de turnesol se coloreaz n albastru.
o Depistarea catalazei (H2O2 .... H2O + O2): cultura se amestec cu o pictur de ap
oxigenat apariia bulelor de gaz
o Depistarea oxidazei (detectarea prezenei citocromoxidazei din lanul respirator)
Reactiv di (tetra)metil-parafenilen-diamin (benzi sau rondele de hrtie mbibate cu reactiv,
creioane, etc)
Oxidarea reactivului culoare violet-neagr
Oxidazo+ : Neisseria, Vibrio, Pseudomonas
Oxidazo- : Enterobacteriaceae
o Depistarea lecitinazei mediu cu glbenu de ou 10% - formarea unui halou opac n jurul
coloniilor
o Depistarea lipazei mediu cu Twin 80 1% halou opac n jurul coloniilor (precipitarea acizilor
grai)
o Depistarea hemolizinei geloz-snge 5-10% - zon clar n jurul coloniei
o Depistarea ADNazei, fosfatazei, etc
Probele sunt incubate la 37 C, 18-24 h
17.De demonstrat tehnica de nsmnare pe geloz-snge,

geloz salin cu ou, mediul Hiss i Kligler. De descris
caracterele de cultur. Aplicarea practic.
Geloza singe. La geloza sterila lichefiata si racita pina la 45C,repartizata in eprubete si
flacoane se adauga de la 5 pina la 10% singe defibrinat,20-25% ser sanguin.Geloza in
eprubete se amesteca minutios si se inclina,iar continutul flacoanelor se toarna in
cutiile Petri.La bulionul steril se adauga in aceeasi cantitati(ca si in geloza) singe sau ser
sanguin.In aceste medii dupa controlul sterilitatii se cultiva cocii
patogeni( streptococii,meningococii,gonococii).(pentru mediile de cultura speciale)
Mediul Hiss-servesc pentru evidentierea enzimelor care scindeaza

glucidele.Actualmente mediile uscate cu glucide se pregatesc la fabrici.Ele constau din
geloza,glucid si indicatorul Andrade.Din praf uscat se prepara medii semilichide:2g praf
se dizolva in 100ml de apa distilata,incalzindo pina la fierbere,se repartizeaza in
eprubete sterile,se sterilizeaza 10min la 110C sau cu vapori fluenti.Indicatorul Andrade
in mediul acid capata o culoare rosie,in cel alcalin este incolor,in neutru-roz.(pentru
mediile de cultura diferential-diagnostice)
Mediul Kligler - mediu utilizat pentru diferentierea enterobacteriilor pe baza
fermentarii zaharurilor (glucoza, lactoza) si a producerii de hidrogen sulfurat
18.De demonstrat tehnica de insmnare n bulion

peptonat, geloz n pant, pe placa cu geloz, geloz
semilichid. De descris caracterele de cultur. Aplicarea
practic
Prepararea mediilor de cultura speciale:
1.Bulionul peptonat si geloza cu glucoza si cu alte glucide-Pentru prepararea bulionului
si gelozei glucozate la bulionul peptonat sau geloza lichefiata se adauga de la 0,5 pina
la 1% glucoza.Mediile ,,glucozate se sterilizeaza cu vapori fluenti 3 zile la rind cite 30
min sau sub presiunea de 0,4 atm(110C)-10-15min.Pentru cultivarea streptococilor la
bulionul peptonat sau geloza sterila se adauga solutie de glucoza 10% in apa
distilata,proaspat pregatita si fiarta.La 5ml de mediu se adauga 0,5 ml solutie
glucoza.Pentru controlul sterilitatii bulionul se introduce in termostat pe 24 ore la 37C.
Bulionul cu 2-5% glicerina se prepara analog cu bulionul glucozat,in el se cultiva
agentul tuberculozei si alte bacterii.
19. De selectat mediile de cultur i de descris etapele de

izolare a culturilor pure de bacterii aerobe.
Prelevatul este supus examenului macroscopic (modificarea aspectului, a mirosului, etc) orientare n diagnostic
Dup necesitate, probele sunt supuse pregtirii pentru investigaie (diluare, omogenizare,
centrifugare, etc)
Examinarea microscopic (preparate native, Gram, Ziehl-Neelsen, Burri-Hinss...) prezena mi/o,
forma, cantitatea, G+/-.
I etap IZOLAREA CULTURILOR PURE
Scopul izolrii - de a obine o cultur pur dintr-un melanj de celule bacteriene sau dintr-un
produs patologic.
Tehnici utilizate:
o Prin epuizarea inoculului pe suprafaa gelozei din cutia Petri (nsmnare n striuri paralele,
nsmnare n cadrane, etalarea consecutiv pe trei cutii).
o Metoda diluiilor logaritmice a inoculului n geloz topit i rcit la 50 C apoi turnate n cutii
Petri sau eprubete.
Incubare n termostat la 37 C, 18-24 h .
Metode speciale de izolare n culturi pure: bct sporulate: nclzirea prealabil a prelevatului 80 C
20 min; bct acido-rezistente: tratarea prealabil cu acid a prelevatului i neutralizarea
ulterioar cu o baz; bct din asociaii cu numr minim de mi/o patogene: mbogirea prealabil
a florei patogene utiliznd medii de mbogire; bct cu virulen nalt i pretenioase la
cultivare: inocularea la animalele de laborator sensibile
II etap ACUMULAREA CULTURII PURE
Examinarea macroscopic a coloniilor crescute (form, culoare, dimensiuni, etc)
Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte si confirmarea puritii culturii
Repicarea coloniilor suspecte pe geloz n pant si acumularea culturii pure
Termostat, 37 C, 18-24 ore
III etap IDENTIFICAREA CULTURII PURE
Verificarea puritii culturii (frotiu Gram)
Identificarea culturii pure const n evidenierea unor caractere specifice ale acestei culturi
pentru a o include ntr-o familie, gen, specie, variant
Se studiaz caracterele: Morfologice; Tinctoriale; De cultur; Biochimice; Antigenice
(seroidentificarea); De patogenitate; Sensibilitatea la bacteriofagi (fago-identificarea);
Sensibilitatea la AB
IV etap EVALUAREA REZULTATELOR, FORMULAREA SI ELIBERAREA RSPUNSULUI
Compararea rezultatelor obinute cu caracterele speciilor bacteriene cunoscute pentru a gsi
asemnri.
20.De demonstrat metodele de creare a condiiilor de

anaerobioz pentru cultivarea bacteriilor anaerobe.
EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU CULTURI ANAEROBE (clostridiene, neclostridiene)
Condiia principal cultivare n absena oxigenului
Utilizarea mediilor anaerobe (Kitt-Tarrozzi regenerat - 100 C, 20 min, rcit, acoperit cu vazelin;
nsmnarea n geloz n coloan)
Crearea condiiilor de anaerobioz
Metoda fizic utilizarea anaerostatului
Metoda chimic n exicator se ntroduc substane ce fixeaz oxigenul (pirogalol+baz);
utilizarea gas-pachetelor
Metoda biologic Fortner cultivarea concomitent a aerobilor i anaerobilor
Recoltarea cu precauie, evitnd contactul cu aerul (n seringi, utiliznd medii speciale)
I etap MBOGIREA ANAEROBILOR
nsmnarea prelevatului n 2 eprubete cu mediul Kitt-Tarrozzi regenerat
nclzirea unui tub la 80 C, 20 min distrugerea florei nesporogene
Incubarea la 37 C, 24-48 h (va avea loc nmulirea anaerobilor)
II etap - IZOLAREA CULTURII PURE DE ANAEROBI
Studierea caracterelor de cultur tulburarea mediului, descompunerea bucilor de ficat, etc
Izolarea culturii pure de anaerobi prin metoda Zeissler (nsmnarea a 0,1 ml din mediul K-T pe
3 cutii cu geloz-snge glucozat
consecutiv). Incubarea n anaerostat/exicator/gas-pack, 24-48 h
Metoda Weinberg diluii succesive a culturii n geloz glucozat lichefiat i aspirarea n tuburi
lungi i nguste, nchise ermetic. Incubarea n
termostat, 24 h
III etap - ACUMULAREA CULTURII PURE
Studierea macroscopic a coloniilor
Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte

Repicarea n mediul K-T regenerat pentru acumularea culturii pure
Incubarea n termostat, 24 h
IV etap - IDENTIFICAREA CULTURII PURE DE ANAEROBI
Verificarea puritii culturii pure (frotiu Gram)
Studierea caracterelor culturii pure izolate (cu respectarea condiiilor de anaerobioz)
V etap - EVALUAREA REZULTATELOR, FORMULAREA I ELIBERAREA RSPUNSULUI
21.De selectat mediile de cultur i de descris etapele de izolare a culturilor pure de bacterii anaerobe.
a.
b.
c.
d.
e.
f.
MC = soluii/substrate solide, asigur nutrienii i condiiile fizico-chimice pt cultivarea bct.

Pot fi utilizate pt: cultivarea (izolarea) bacteriilor; testarea sensibilitii la AB; stocarea sau transportul culturilor bacreiene.
Cerinele fa de MC:
necesitile nutritive i energetice bct
umiditate optimal
pH optimal (7,2-7,4) i constant (caracter de tampon)
potenial de oxido-reducere optimal (anaerobi - rH2<5, aerobi rH2>10)
izotonic (0,5% NaCl)
steril i transparent
Clasificarea MC:
Dup provenien
Empirice, naturale. Au la baz produse de origine animal sau vegetal (snge, ser, lapte, ou, cartof, extracte din carne, cord, creier,
ficat, pete, levuri, etc). Compoziia chimic precis nu poate fi controlat.
Sintetice includ ingrediente chimice pure, compoziia chimic este cunoscut cu exactitate
Semisintetice
Dup consisten
Lichide (bulion) utilizate pentru obinerea biomasei bacteriene i a produselor lor (AB, E, toxine)
Solide conin 10-15% gelatin sau 2-3% agar-agar (polizaharid extras din alge roii, t topire 80-100C, solidificare 42C). Placa
de geloz n cutii Petri izolarea culturilor pure; geloza nclinat (n pant) acumularea culturilor pure.
Semisolide 0,2 0,5 % agar-agar. Se utilizeaz pentru studierea activitii biochimice sau a mobilitii bacteriilor.
Dup compoziia chimic (complexitate) i destinaie
Medii uzuale (universale, simple)
Ap peptonat (ap+1% pepton+0,5% NaCl)
Bulion peptonat BP (extract apos din carne + 1% pepton+0,5% NaCl)
Geloza nutritiv (BP + 2-3% agar-agar)
Gelatina nutritiv (BP + 10-15% gelatin)
Sunt utilizate pentru creterea bacteriilor nepretenioase la cultivare
Sterilizarea prin autoclavare: 120C, 20 min
Medii complexe:
elective
selective:
pe mediu solid
pe mediu lichid = mediu de imbogatire
diferential-diagnostice (DD)
izolare cultura pura
multitest, pt acumulare cultura pura si identificare preliminara
identificare finala
speciale
de transport
Medii elective formate din medii simple cu adaos de componente care permit creterea mi/o exigente nutritiv (bulion-ser, bulion
glucozat, geloz-snge streptococi, neisserii; ser coagulat corinebacterii, etc)
Medii selective medii solide cu adaos de componente sau cu condiii fizico-chimice particulare care stimuleaz creterea unor
specii i inhib creterea altor specii (geloza salin - stafilococi, geloza alcalin - vibrioni, mediul Ploskirev - Salmonella, Shigella,
etc)
Mediile de mbogire reprezint medii selective lichide, utilizate pentru mbogirea florei patogene i inhibarea florei de asociaie
dintr-un prelevat plurimicrobian (ex: materii fecale)
a. Mediul Muller (BP+Lugol+CaCO3+hiposulfit)
b. Mediul Kauffmann (mediul Muller+bil+verde de briliant) Salmonella
c. Bulion cu selenit Shigella, Salmonella
d. Ap peptonat alcalin (pH=8) Vibrio cholerae
e. Kitt-Tarrozzi (BP+0,5% glucoz+buci de ficat) pentru anaerobi
Medii diferenial-diagnostice (DD) permit diferenierea speciilor bacteriene n baza activitii lor biochimice (zaharolitice,
proteolitice, lipolitice, de oxido-reducere)
Medii DD pentru izolarea culturii pure
Studierea proprietilor zaharolitice
Endo (geloz+lactoz+fucsin+hiposulfit de Na)
Levin (geloz+lactoz+eozin+albastru metilen)
Ploskirev (geloz+lactoz+rou neutru+sruri de acizi biliari+verde de briliant)
Coloniile lactozo-pozitive vor fi colorate (roii pe Endo, Ploskirev, albastru-violete pe Levin)
Studierea proprietilor de oxido-reducere
Mediul cu sulfit de Bi pentru Salmonella (colonii negre reducerea sulfitului n sulfura de Bi)
Mediul Klauberg (geloz-snge cu telurit de K) pentru Corynebacterium diphtheriae
Studierea proprietilor lipolitice
Studierea proprietilor hemolitice
Geloza-snge (geloza+5-15% snge defibrinat) in cazul hemolizei n jurul coloniilor apare o zon clar
Medii DD multitest pentru acumularea culturii pure i identificare preliminar
Russel geloz+1% lactoz, 0,1% glucoz, indicator
Kligler identic Russel+sulfat de Fe (detectarea H2S)
Olkeniki identic Kligler+1% zaharoz+uree
Indicatorul Andrede fucsin+NaOH
Scindarea glucidelor (acid - A, acid i gaz - AG) duce la modificarea pH i virajul culorii mediului din rou n galben. n pant se
apreciaz lactoza/zaharoza (oxidare), n coloan-glucoza (fermentare).
Producerea H2S nnegrirea mediului
Medii DD pentru identificarea final
irul pestri Hiss (lichid sau semisolid): tuburi ce conin soluii 0,5% de diferite glucide i indicator. Aprecierea dup modificarea
culorii (acid - A) i apariia bulelor de gaz (acid i gaz - AG)
Medii cu AA (lizin, arginin, ornitin) i indicatori
Medii speciale pentru izolarea unor anumite bacterii (Finn, Popescu, Lowenstein-Jensen pentru agenii tuberculozei, Sabouraud
fungi)
Medii de transport transportare/stocare material (prelevat). Menine n via bacteriile, fr a favoriza multiplicarea lor. Mediul cu
glicerin 30%; Soluie tampon-fosfat; Soluie NaCl 3%; Mediul Cary-Blair; Mediul Stuart (NaCl, 0,5% agar, tioglicolat de Na,
albastru de metilen) pentru anaerobi, neisserii, etc
Pentru cultivarea bacteriilor o cantitate mic de material ce conine bacterii (inoculum) se ntroduce ntr-un mediu de cultur
(nsmnare, inoculare), care ulterior va fi incubat n termostat (pentru asigurarea temperaturii optime).
n timpul incubrii (18-24-48 ore..) bacteriile cresc i se divid, formnd o cultur bacterian (totalitatea bacteriilor acumulate
prin multiplicare intr-un mediu).
M.tuberculosis 3-5 sptmni
V.cholerae 6-12 ore
Cultur pur format din bacterii de aceeai specie (indispensabil identificrii)
Cultur mixt compus din bacterii de specii diferite
Tulpin populaie microbian constituit din descendenii unei singure izolri n cultur pur, care va fi studiat ulterior.
Clon populaie care rezult din multiplicarea unei singure celule
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
Manifestarea creterii i multiplicrii bacteriilor

n mediu lichid
Turbiditate uniform
Formarea unei pelicule la suprafaa mediului (vibrioni, yersinia - agentul pestei)
Formarea unui sediment la fundul tubului sau pe perei (streptococi, Bacillus anthracis)
n mediu solid formarea coloniilor
Colonie o aglomerare de bacterii care se dezvolt dintr-o singur celul sau un grup de celule (UFC - unitate formatoare de
colonii) pe suprafaa unui mediu solid. Fiecare specie bacterian formeaz colonii specifice (caracter util n identificare).
Caracteristica coloniilor
Dimensiuni colonii mici (0,1-1mm), medii (1-2mm), mari (2-3mm)
Contur (margini) neted, ondulat, zimat, lobat, etc
Suprafa plat, bombat, convex, ombilicat, etc
Form punctiform, circular, filamentoas, neregulat
Culoare (pigmentaie) alb, galben, aurie, etc
Densitate opac, transparent, etc
Consisten cremoas, untoas, uscat, mucoid
Tipurile de colonii: Colonii S (smouth) rotunde, netede, umede, lucioase; Colonii R (rough) margini neregulate, suprafaa uscat,
rugoas
Caracterele de cultur ale bacteriilor = exigenele nutritive (medii, temperatur, pH, aerare, etc), viteza i manifestarea creterii pe
medii lichide i solide
Dinamica multiplicrii bacteriilor n culturi

n funcie de modul de dezvoltare a culturilor bacteriene se disting:
Culturi discontinue
Culturi continue
Culturi sincrone
Culturile discontinue se obin la cultivarea bacteriilor n volum limitat de mediu. Astfel de culturi sunt obinute i utilizate n
laboratorul microbiologic
Fazele dezvoltrii unei culturi discontinue
I. Faza de lag faza de adaptare la condiiile mediului, bacteriile sunt active metabolic, cresc n dimensiuni, dar nu se divid. Durata
este variabil (2-4 ore); depinde de starea bacteriei, condiiile mediului, etc
II. Faza logaritmic bacteriile cresc i se divid cu vitez maximal constant, curba evolueaz exponenial. Bacteriile sunt foarte
sensibile la ageni antimicrobieni (culturi utile pentru testarea sensibilitii la antibiotice). Durata 8-10 ore.
III. Faza staionar rata celulelor care se multiplic scade treptat, numrul celulelor vii rmne constant mai multe ore. Cauza
consumarea nutrienilor, acumularea metaboliilor toxici. Morfologia bacteriilor este tipic speciei, apar incluziuni, spori (culturi utile
pentru identificare). Sensibilitatea la agenii antimicrobieni scade. Durata 10-12 ore.
IV. Faza de declin (letalitate) bacteriile mor progresiv.
Cultura continu se realizeaz cnd mediul de cultur este continuu rennoit i mbogit cu oxigen cu evacuarea unei cantiti de
cultur. Se realizeaz n chemostate sau turbidostate, cultura aflndu-se permanent n faza exponenial. Se utilizeaz n
microbiologia industrial. n intestin culturi continue.
Culturi sincrone culturi n care bacteriile se divid n acelai timp. ???
22.De descris tehnica de infectare, izolare, indicare a virusurilor n culturi celulare i oul embrionat de
gin.
Oul embrionat de gin (5-13 zile) reprezint un mediu de celule nedifereniate, cu multiplicare activ, steril i lipsit de mijloace
de aprare antiinfecioas. Se utilizeaz n prepararea unor vaccinuri virale (ex.: gripal)
- Iniial se verific viabilitatea embrionului la ovoscop n camera obscur.
- Prelevatul se inoculeaz steril cu seringa n cavitatea amniotic sau alantoidean, sau pe membrana chorioalantoidean (utiliznd
metoda deschis sau nchis).
- Orificiul se parafineaz i se incubeaz la 35-37C timp de 48-72 ore
Indicarea virusului n oul embrionat de gin
Oule se rcesc 18 ore la +4 grade C pentru o vazoconstricie maxim, apoi aseptic se taie coaja, se recolteaz lichidul alantoic sau
amniotic, iar MCA i embrionul se ntroduc n cutii Petri sterile. Se observ:
1. Moartea embrionului
2. Apariia modificrilor (hemoragii, pustule) pe MCA
3. Acumularea de HA n lichide
Virusurile sunt cultivate pentru: Stabilirea diagnosticului etiologic; Testarea infeciozitii virusurilor; Testarea preparatelor
antivirale; Producerea vaccinurilor
SISTEME DE CULTIVARE: Culturi de celule; Ou embrionat de gin; Animale de laborator
Animalele de laborator se utilizeaz limitat (receptivitate selectiv, preexistena infeciilor, cost avansat). Se recurge numai cnd nu
exist alte posibiliti (VHB, HIV, Coxsackie, etc). Constituie modele de cercetare sau de control al vaccinurilor. Animalele utilizate
curent oriceii albi nou-nscui, dar pot fi utilizai obolani, cobai, maimue, etc.
Regulile de lucru cu animalele de laborator (selectare, inoculare, examinare) sunt identice cu cele din infeciile bacteriene.
Oul embrionat de gin (5-13 zile) reprezint un mediu de celule nedifereniate, cu multiplicare activ, steril i lipsit de mijloace de
aprare antiinfecioas. Se utilizeaz n prepararea unor vaccinuri virale (ex.: gripal)
Iniial se verific viabilitatea embrionului la ovoscop n camera obscur.
Prelevatul se inoculeaz steril cu seringa n cavitatea amniotic sau alantoidean, sau pe membrana chorioalantoidean (utiliznd
metoda deschis sau nchis). Orificiul se parafineaz i se incubeaz la 35-37 C timp de 48-72 ore
Culturile de celule. Celulele provenite din esuturi adulte sau embrionare, normale sau tumorale, plasate ntr-un mediu adecvat
(nutrieni, pH, t) rmn viabile i se multiplic. Pentru cultivarea virusurilor se utilizeaz culturile n monostrat celular.
Tipurile de culturi de celule:
Culturi primare (primar tripsinizate). Sunt obinute din esuturi adulte sau embrionare de origine animal sau uman. Suport 4-6
pasaje (subcultivri)
Culturi diploide. Obinute din esut embrionar (MRS5, fibroblaste umane). Pot fi subcultivate 40-50 generaii
Linii continui de celule. Obinute din esut tumoral. Pot fi subcultivate nelimitat.
Obinera culturilor de celule primar tripsinizate:
Prelevarea esutului (ex.: rinichi de maimu)
Fragmentarea i splarea cu sol fiziologic
Dezagregarea tisular cu enzime proteolitice
Separarea celulelor prin centrifugare
Dozarea suspensiei 105 106 celule/ml
ntroducerea celulelor n mediu nutritiv i repartizarea n recipiente sterile
Incubarea pn la formarea monostratului celular (inhibiie de contact)

Monostratul poate fi infectat cu virus sau servete drept surs de celule pentru o nou cultivare (pasaj)
Mediile de cultur pentru culturi de celule conin AA, Vit, factori de cretere, sruri minerale (Eagle, Hanks, 199, hidrolizat de
lactalbumin, etc), rou fenol pentru monitorizarea pH (vireaz n galben n mediu acid)
Mediile de cretere sunt mbogite cu ser sangvin (uman, animal) pentru cultivarea CC
Mediile de ntreinere se utilizeaz pentru meninerea monostratului n procesul reproducerii virale. Nu conin ser.
CC reprezint sistemul virus-gazd predilect n virologia clinic i cercetare.
Inocularea CC; Se aleg tuburi cu monostrat bine format; Se nltur mediul de cretere, se spal cu sol. Hanks
Se inoculeaz 0,1 0,2 ml de prelevat; Peste 30-60 min n tuburi se toarn cte ; 1 ml mediu de ntreinere
Se ntroduc n termostat la t adecvat 3-4 zile
23.Componentele i tehnica determinrii CMI a antibioticelor prin metoda diluiilor succesive. De

interpretat rezultatele.
Metoda diluiilor
ntr-un ir de tuburi cu 1 ml BP se efectueaz diluia AB (256 UA, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, etc). Se adaug n fiecare tub (cu
excepia celui martor) 0,1 ml de suspensie bacterian 105/ml. Termostat - 24h.
Lectura cea mai mic doz de AB care inhib creterea culturii dup 24h de incubare (mediu clar) constituie Concentraia Minim
de Inhibiie (CMI) a AB pentru tulpina testat. CMI msoar efectul bacteriostatic.
Concentraia Minim Bactericid (CMB) cantitatea minim de AB care omoar 99,9% din inoculum dup 18h de incubare.
Determinarea CMB din ultimele tuburi fr cretere se repic 0,1 ml de mediu pe placa cu geloz. Dup 24h se compar numrul
celulelor ce au supravieuit cu nr iniial de bacterii (105/ml).
Corelaia dintre studii in vitro i rezultate in vivo
n studii in vitro parametrii (densitatea suspensiei bacteriene, concentraia AB, etc) nu se modific n timp. In vivo, la pacieni,
concentraia AB variaz n timp i n funcie de esut.
Pentru a stabili dac tulpina izolat este sensibil sau rezistent la un AB se cere cunoaterea Concentraiei Terapeutice (CT)
(cantitatea de AB prezent n focarul infecios n cursul tratamentului cu doze terapeutice) a fiecrui AB testat.
Tulpini Sensibile CMI/CT <1, ex.: 2/8, 2/16 - efect terapeutic posibil cu doze uzuale
Tulpini Rezistente CMI/CT>1, ex.: 8/2, efect terapeutic imposibil
Tulpini Intermediare CMI/CT=1, efect terapeutic imprevizibil. Pot fi utilizate doze maxime de AB sau administrarea lor local
Testarea CMI / CMB este indicat n tratamentul infeciilor grave : meningite, septicemii, endocardite, infecii cronice sau la
persoane cu imunosupresie.
24.Componentele i tehnica determinrii sensibilitii bacteriilor la antibiotice prin metoda

difuzimetric. Interpretarea rezultatelor.
Metoda difuzimetric (rondelelor).
Utilizat uzual n infecii banale.
Condiii: mediu standard, concentraie standard de mi/o (105/ml), rondele/discuri (comprimate) cu % standarde de AB, condiii
standarde.
Mediul este inoculat cu suspensia bacterian. Dup uscare n termostat se aplic rondelele 24h, 37C.
Lectura diametrul zonei de inhibiie a creterii culturii bacteriene este comparat cu diametrele standarde pentru fiecare AB. Valori
sub acest diametru tulpina este R, dac este depit S.
25.Componentele i tehnica determinrii rapide a sensibilitii bacteriilor la antibiotice prin metoda

diluiilor succesive. Interpretarea rezultatelor.
Metoda diluiilor
ntr-un ir de tuburi cu 1 ml BP se efectueaz diluia AB (256 UA, 128, 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, etc). Se adaug n fiecare tub (cu
excepia celui martor) 0,1 ml de suspensie bacterian 105/ml. Termostat - 24h.
Lectura cea mai mic doz de AB care inhib creterea culturii dup 24h de incubare (mediu clar) constituie Concentraia Minim
de Inhibiie (CMI) a AB pentru tulpina testat. CMI msoar efectul bacteriostatic.
Concentraia Minim Bactericid (CMB) cantitatea minim de AB care omoar 99,9% din inoculum dup 18h de incubare.
Determinarea CMB din ultimele tuburi fr cretere se repic 0,1 ml de mediu pe placa cu geloz. Dup 24h se compar numrul
celulelor ce au supravieuit cu nr iniial de bacterii (105/ml).
Corelaia dintre studii in vitro i rezultate in vivo
n studii in vitro parametrii (densitatea suspensiei bacteriene, concentraia AB, etc) nu se modific n timp. In vivo, la pacieni,
concentraia AB variaz n timp i n funcie de esut.
Pentru a stabili dac tulpina izolat este sensibil sau rezistent la un AB se cere cunoaterea Concentraiei Terapeutice (CT)
(cantitatea de AB prezent n focarul infecios n cursul tratamentului cu doze terapeutice) a fiecrui AB testat.
Tulpini Sensibile CMI/CT <1, ex.: 2/8, 2/16 - efect terapeutic posibil cu doze uzuale
Tulpini Rezistente CMI/CT>1, ex.: 8/2, efect terapeutic imposibil
Tulpini Intermediare CMI/CT=1, efect terapeutic imprevizibil. Pot fi utilizate doze maxime de AB sau administrarea lor local
Testarea CMI / CMB este indicat n tratamentul infeciilor grave : meningite, septicemii, endocardite, infecii cronice sau la
persoane cu imunosupresie.
26.Determinarea concentraiei antibioticelor n umorile organismului (snge, urin etc.). Importana

practic.
-
Indicaii:
Utilizarea unui AB toxic
n caz cnd bolnavul sufer de deficiene metabolice sau excretoare (renale, hepatice)
Se compar concentraiile obinute cu CMI a antibioticului testat (sau cu CT).
. Studiul activitii inhibitorii a lichidelor biologice (NEI)
Indicaii: infecii grave care nu rspund rapid la tratament.
Efectuarea: la diluii duble (1/2, ...) ale lichidului examinat (ser, LCR, urin) se adaug suspensia bacterian (din tulpina izolat de
la bolnav).
Lectura: dup 24h de incubaie la 37 C se apreciaz diluia maxim cu efect bacteriostatic/cid.
NEI 1:8 reflect eficiena antibioticoterapiei .
Importanta practica : se foloseste pentru monitorizarea tratamentului cu AB si pentru verificarea eficientei antibioterapiei.
27.Bacteriofagul. Titrarea bacteriofagului prin metoda Appelman. Importana practic. Aplicarea

bacteriofagului n scopuri terapeutice i profilactice.
Bacteriofagi = virusuri ce infecteaz bacteriile. Parazii intracelulari obligatorii ai bct.
Toate bacteriile pot fi infectate de ctre bacteriofagi.
In majoritatea cazurilor, un fag anume infecteaz doar celulele unui singur gen, unei anumite specii sau a unei tulpini specificitatea fagului prezena R pt acest fag la suprafaa bct-gazd.
Structura bacteriofagului
Structura fagilor corespunde regulilor generale ce se refer la structura virusurilor.
1. Acid nucleic (ADN sau ARN, mai frecvent dublucatenar).
2. Inveli proteic = capsid protecie a materialului genetic. Poseda R la suprafa infecia gazdei. Capsida este constituit din
subuniti proteice, capsomere, aranjate simetric ntr-o ordine distinct, conferind forma fagului.
3. Unii fagi pot conine i enzime (ex.: lizozim, neuraminidaza).
Exist 3 forme morfologice principale de fagi:
Fag icosaedric: form sferic, 20 fee triungiulare, 30 muchii i 12 vrfuri (simetrie cubic a capsidei).
Fag cilindric: bastonae proteice formate din capsomere, asamblate ntr-o structur tubular (simetrie helicoidal a capsidei).
Fag complex: constituit din cap icosaedric ataat la o coad helicoidal. Coada este format din doua tuburi concentrice, un tub
intern rigid - canalul axial, care este inconjurat de teaca cozii, un manon contractil. Gulerul cozii (colul) se afl la jonciunea
capului cu coada. La partea distal a cozii se afl o plac hexagonal, placa bazal, la fiecare apex fiind ancorate cte un croet i o
fibr. Ele reprezent sistemul de fixare a fagului pe bacteria receptoare i contribuie la injecia materialului genetic n celul.
Nu toi fagii au o astfel de morfologie. Unii au coad lunga i non-contractila, alii - coada scurt, sau far coad. Exist i fagi
filamentoi.
TITRAREA BACTERIOFAGILOR
Este utilizat pentru determinarea numrului de fagi viruleni n prelevat sau cultur.
Metodele de titrare a bacteriofagului
Titrarea bacteriofagului n mediu lichid (metoda Appelman)
Titrarea bacteriofagului n mediu solid (metoda Gratia)
APPELMAN la diluii logaritmice a culturii de fag (10-1.....10-10) n bulion peptonat se adaug suspensie bacterian omolog
fagului examinat. Dup 24 ore de incubare la 37 C se apreciaz titrul fagului: diluia maxim a fagului care nc mai provoac liza
bacteriilor (mediu clar).
GRATIA. Dup diluia logaritmic a fagului i adugarea culturii bacteriene, coninutul fiecrui tub se amestec cu geloz topit i
amestecul se toarn n cutii Petri. Dup 24 ore de incubare la 37C se numr plajele formate (coloniile negative de fagi). Numrul
plajelor corespunde cu nr de fagi viruleni din materialul de examinat.
APLICAREA PRACTIC A FAGILOR
n domeniul terapeutic
Tratamentul i profilaxia maladiilor infecioase
n domeniul diagnostic
Fago-identificarea identificarea tulpinilor bacteriene necunoscute cu ajutorul fagilor omologi (metoda Otto, Furt, etc)
Lizotipizarea (fagotipajul). Permite diferenierea unor tulpini din cadrul aceleeai specii (subdivizarea speciei n
lizotipuri/fagovaruri). Este utilizat pentru tulpini de Staphylococcus aureus, Salmonella Typhi, .a.
Lizotipul reprezint un marker epidemiologic.
Fagii reprezint un model de studiu pentru geneticieni, fagii temperai se utilizeaz n ingineria genetic (ei pot asigura
transferul de material genetic prin transducie).
28.Bacteriofagul. Metodele de evidenietre a bacteriofagului: Otto, Furt i Fisher. Aplicarea practic a

bacteriofagului
filamentoi.
INDICAREA BACTERIOFAGILOR
Metoda OTTO. Pe placa de geloz din cutia Petri se nsmneaz n gazon suspensia de bacterii omologe fagului. n continuare se
aplic o pictur de filtrat care conine fag (cutia poate fi nclinat ca pictura s se preling). Cutia se incubeaz la 37 C timp de 24
ore.
Aprecierea: dac n filtrat se aflau fagi omologi culturii bacteriene, n locul aplicrii filtratului se observ o zon de liz (colonie
negativ de fag).
Metoda FURT. Filtratul ce conine fagi se amestec cu geloz topit i se toarn n cutia Petri. Suprafaa cutiei se mparte n 4
sectoare. n fiecare sector se nsmneaz n striuri culturi cunoscute de diferite bacterii. Incubare la 37C 24 ore.
Aprecierea: lipsa creterii bacteriilor ntr-un sector indic prezena fagului omolog.
Metoda FISHER
Similar cu metoda Furt, doar c suprafaa cutiei se mparte n 10 cadrane, astfel pot fi nsmnate 10 culturi bacteriene i pot fi
indicai concomitent mai muli fagi.
29.Bacteriofagul. Fagotipajul i fagoidentificarea culturilor bacteriene. Importana practic. Aplicarea

practic a bacteriofagului.
filamentoi.
30.De descris etapele metodei biologice de diagnostic i de demonstrat tehnica necropsiei animalelor de
laborator experimental infectate.
biologic (experimental) inoculare produs patologic la animale de laborator, provocare maladie tipica
Metoda biologica de examinare consta in infectarea animalelor pentru obtinerea (izolarea)culturilor de
microorganism ,agenti cauzali ai bolilor cu studierea uterioara a patogenitatii si virulentei lor.
Etapele:
1.Alegerea animalelor.experietele se fac doar pe animale sanatoare cu blana neteda si lucioase,active mobile si
cu alimentatie buna .Se recomanda de a folosi animale de aceeasi virsta ,sex,greutate.
2.Marcarea.Consta in colorarea diverselor sectoare ale blanii cu solutii de coloranti anilinici ,acid picric sau
prin aplicarea semnelor de marcare la urechi.Numarul si marcarea fiecarui animal se indica in protocol .
3.Fixarea animalelor.Impobilizare animalelor in timpul experientei se face cu dispozititve special ,masa de
fixare,cutii sau ,manoperi ,prin care asistentul fixeaza animalul in pozitia necesara.
4.Inocularea.se face cu seringi si ace de marimi adecvate ,sterile ,dupa prealabila antiseptizare a tegumetului
cu alcool.
La infectarea experimentala a animalelor materialul de studiat se inoculeaza pe diferite cai
cutanata,subcutanata,intadermica,intramusculara,intravenoasa,per os si in diferite organe si tesuturi-in
encefal,membrane mucoasa,prin caile respiratorii.
5.Necropsia.Animalele trebuie necropsiate in maxim o ora dupa moarte sau sacrificate ,pentru a Evita
invadarea tesuturilor cu flora de putrefactive.
Necesar:
Tava de tabla cu margini perforate ,pentru fixarea cobaielor sau iepurilor ;mica planseta de lemn pentru
fixarea soarecilor;
Instrumente sterile ;3bisturie,4foarfece,4pense anatomice ,cleste mic pentru oasele craniului,daca se impune
accesul la creer;
Pipete Pasteur;cutii Petri,ieprubete sterile ,lame de microscop;
Placi si tubii cu medii de cultura adecvate.
Procedura :
1.se fixeaza animalul cu fata ventral in sus ,iar pu accesul la creer cu fata vetrala in jos
2.se badijoniaza insistent toata fata ventral a animalului cu o solutie 3 % de dezinfectanta fenolic .animalele
mici ,pot fi cunfundate complet in solutie dezinfectanta
3.cu un rind de instrumente sterile se face o incizie tegumantara sub mentopubiana prelungita spre radacina
fiecarui membru,si se decoleaza pielea pina la flancuri.
4.se inspecteaza tesutul cellular subcutanat ,masele musculare si ganglionii limfatici in regiunea de inoculare.
5.cu un nou rind de instrumente sterile se deschide cavitatea ,periotoniala si se reflecta lateral
planul,musculoaponevrotic.
Cu foarfece sterile adecvate se sectioniaza prin 2 incizii laterale cartilajele costale,apoi diafragmul si se
indeparteaza plastronul sternal.
6.pentru hemocultura se punctioniaza cordul cu o pipeta Pasteur prevazuta cu tetina de cauciuc .Daca
necropsia este ingrijita nu este necesara cauterizarea suprafetei punctionale .se insaminteaza single extras in
medii de cultura adecvate .
7.cu un nou rind de intrumente sterile se preleva si se depune in cutii Petri sterile ,pu examinarea ,splina
,ficatul,rinichii si pulmonii ,atentie la prelevare pu a nu deschide tubul digestive.
8.Se examineaza macroscopic,se sectioneaza cu instrumente sterile organelle prelevate,se inseminteaza in
medii adecvate mici fragmente de tesut si se efectueaza amprente pu microscop.
9.Se acopera carcasa animalului cu o bucata de hirtie igienica imbibata cu solutie dezinfectanta.Se
autoclaviaza carcasa impreuna cu tava apoi se incinereaza carcasa animalului.
10.Se dezinfecteaza prin fierbere sau chimic instrumentarul in vederea splarii.Cadavrele animalelor pierite de
infectii extreme de contagioase se supun autopsiei in incaperi special cu respectarea regulilor de Securitate.
31 Reacia de aglutinare pe lam i n tuburi cu scop de seroidentificare. Ingredientele

necesare, tehnica efecturii, citirea i interpretarea rezultatelor.
REACIA DE AGLUTINARE
Din latin agglutinatio - ncleiere
Reacia Ag-Ac se poate manifesta prin aglutinare atunci cnd determinantele antigenice sunt purtate de particule
figurate (Ag insolubile, corpusculare), iar Ac specifici sunt complei (cel puin bivaleni).
Aglutinarea este determinat de formarea unei reele ntre Ag i Ac, ce permite apropierea unui numr suficient de
particule figurate pentru a constitui aglutinate vizibile cu ochiul liber. Ac IgM cu 10 epitopi poteniali aglutineaz mai
activ dect Ac IgG.
Clasificarea reaciilor de aglutinare
Aglutinare activ
sau direct
, n care particula figurat (Ag corpuscular) este el nsui purttor de
activ
direct,
determinante antigenice specifice (hematii, leucocite, trombocite, spermatozoizi, bacterii)
Aglutinare pasiv
sau indirect
, n care particula servete doar de suport pentru un determinant antigenic
pasiv
indirect,
solubil fixat artificial pe suprafaa sa. Frecvent sunt utilizate ca suport hematii formolate, particule de latex sau
microcristale de colesterol.
Reactii
Reactii de
de aglutinare
aglutinare activa
activa (directa
(directa)
Aspect calitativ.
alitativ. Reactia
eactia poate
poate fi efectuata
efectuata pe lama
lama de sticla sau in
in tuburi
tuburi..
Reacia de aglutinare pe lamel: pe lamela degresat se aplic cu pipeta Pasteur cteva picturi de ser n diluii
mici (1:10 1:20) i o pic de sol izotonic de clorid de natriu pentru control. n fiecare pictur de ser, nclusiv n cea
de control se introduce o ans de cultur vie de microorganisme de 24 ore de pe suprafaa mediului solid sau se
adaug cu pipeta Pasteur cte o pic de suspensie de microorganisme omorte (diagnosticum). Cultura aplicat se
amestec minuios pentru a obine o suspensie tulbure omogen. Reacia decurge la temperatura camerei. Rezultatul
ei se citete cu ochiul liber peste 5-10 min, uneori este folosit lupa. Dac lamele se introduc n camera umed
nchis, pentru a evita uscarea picturilor rezultatul reaciei se citete i peste 30-40 min.
La reacia pozitiv n pictura de ser apar flocoane (mari sau mici), uor vizibile la cltinarea lamei. La reacia
negativ lichidul rmne tulbure omogen. Dac cantitatea de microorganisme este mic i citirea rezultatului reaciei
este dificil, pictura de ser cu amestecul de cultur se usuc, preparatul se fixeazse coloreaz cu fuxin Pfaiffer si
se examineaz la microscop. La reacia pozitiv toate cmpurile de vedere sunt libere. Aceasta este reacia de
microaglutinare.
Reacia de aglutinare n tuburi se folosete pentru determinarea serogrupului i serovarului microorganismelor.
Toate ingredientele se repartizeaz succesiv n eprubete. Serul este diluat n proporiile 1:100, 1:200, 1:400 etc. n
fiecare tub cu serul diluat se adaug 1-2 picturi de antigen (suspensie de 1-2mlrd de microorganisme la 1ml), se
agit energic i se incubeaz n termostat la 37C-2 ore, apoi se citesc rezultatele prealabile ale reaciei, ncepnd cu
cele de control(al serului i antigenului). Absena aglutinrii n tuburile de control i prezena de flocoane suspendate
n tuburile de experien se apreciaz ca reacie pozitiv. Tuburile se menin la temperatura camerei 18-20 de ore i
dup aceea se constat rezultatul definitiv al reaciei. Intensitatea reaciei se exprim prin semne de plus. La
aglutinarea complet (++++) lichidul este absolut transparent, iar la fundul tubului se depune sediment din flocoane
de microorganisme aglutinate. Cu ct mai puine microorganisme snt aglutinate, cu att este mai tulbure lichidul i cu
att mai puin sediment floconos se nregistreaz la fundul eprubetei (+++, ++, +). La reacia negativ (-) sedimentul
lipsete, suspensia rmne uniform tulbure i dup aspect nu difer de coninutul de control al antigenului. RA se
utilizeaz pentru diagnosticul serologic al bolilor infecioase febrelor tifo-paratifoide (reacia Widal), brucelozei
(reacia Wright, Huddleson), tularemiei i altor boli.
Aprecierea:
Aprecierea: cea mai mare dilutie a serului in care se manifesta aglutinare de cel putin 3 + (+++) se numeste
titrul anticorpilor aglutinanti (titrul serului aglutinant).
aglutinant).
Aglutinarea
se
glutinarea directa
directa este
este utilizata
utilizata pent
pentrru determina
determinarea grupelor
grupelor sangv
sangvine
ine sau
sau in diagnosticul
diagnosticul unor maladii
maladii infectioa
infectioase
(seroidentificarea Ag sau depistarea i titrarea Ac din serul bolnavilor) .
Reactile
Reactile de
de aglutinare
aglutinare pasiva
pasiva (indirecta
(indirecta)
Aglutinarea
u al unui Ac) pe un suport corpuscular inert,
glutinarea pasiva
pasiva consta
consta in fixa
fixarea unui
unui Ag solubi
solubil (sa
(sau
inert, care nu intervi
intervine
in reactia
reactia Ag-Ac. In calitate de suport inert pot servi hematiile, particule de latex, cristale
ristale de colesterol. Suspensia
uspensia de
particule sensibilizate cu Ag sau Ac este
este pusa in contact cu serul
serul imun (respectiv
(respectiv cu Ag), ca si in cazul aglutinarii
directe.
Avantajele reactiilor
ea lecturii
ea inalta.
reactiilor indirecte:
indirecte: facilitat
facilitate
lecturii si sensibilitat
sensibilitate
inalta.
32 Reacia de aglutinare pe lam i n tuburi cu scop de serodiagnostic. Ingredientele

REACIA DE AGLUTINARE
Din latin agglutinatio - ncleiere
Reacia Ag-Ac se poate manifesta prin aglutinare atunci cnd determinantele antigenice sunt purtate de particule
figurate (Ag insolubile, corpusculare), iar Ac specifici sunt complei (cel puin bivaleni).
Aglutinarea este determinat de formarea unei reele ntre Ag i Ac, ce permite apropierea unui numr suficient de
particule figurate pentru a constitui aglutinate vizibile cu ochiul liber. Ac IgM cu 10 epitopi poteniali aglutineaz mai
activ dect Ac IgG.
Clasificarea reaciilor de aglutinare
Aglutinare activ
sau direct
, n care particula figurat (Ag corpuscular) este el nsui purttor de
activ
direct,
determinante antigenice specifice (hematii, leucocite, trombocite, spermatozoizi, bacterii)
Aglutinare pasiv
sau indirect
, n care particula servete doar de suport pentru un determinant antigenic
pasiv
indirect,
solubil fixat artificial pe suprafaa sa. Frecvent sunt utilizate ca suport hematii formolate, particule de latex sau
microcristale de colesterol.
Reactii
Reactii de
de aglutinare
aglutinare activa
activa (directa
(directa)
Aspect calitativ.
alitativ. Reactia
eactia poate
poate fi efectuata
efectuata pe lama
lama de sticla sau in
in tuburi
tuburi..
Reacia de aglutinare pe lamel: pe lamela degresat se aplic cu pipeta Pasteur cteva picturi de ser n diluii
mici (1:10 1:20) i o pic de sol izotonic de clorid de natriu pentru control. n fiecare pictur de ser, nclusiv n cea
de control se introduce o ans de cultur vie de microorganisme de 24 ore de pe suprafaa mediului solid sau se
adaug cu pipeta Pasteur cte o pic de suspensie de microorganisme omorte (diagnosticum). Cultura aplicat se
amestec minuios pentru a obine o suspensie tulbure omogen. Reacia decurge la temperatura camerei. Rezultatul
ei se citete cu ochiul liber peste 5-10 min, uneori este folosit lupa. Dac lamele se introduc n camera umed
nchis, pentru a evita uscarea picturilor rezultatul reaciei se citete i peste 30-40 min.
La reacia pozitiv n pictura de ser apar flocoane (mari sau mici), uor vizibile la cltinarea lamei. La reacia
negativ lichidul rmne tulbure omogen. Dac cantitatea de microorganisme este mic i citirea rezultatului reaciei
este dificil, pictura de ser cu amestecul de cultur se usuc, preparatul se fixeazse coloreaz cu fuxin Pfaiffer si
se examineaz la microscop. La reacia pozitiv toate cmpurile de vedere sunt libere. Aceasta este reacia de
microaglutinare.
Reacia de aglutinare n tuburi se folosete pentru determinarea serogrupului i serovarului microorganismelor.
Toate ingredientele se repartizeaz succesiv n eprubete. Serul este diluat n proporiile 1:100, 1:200, 1:400 etc. n
fiecare tub cu serul diluat se adaug 1-2 picturi de antigen (suspensie de 1-2mlrd de microorganisme la 1ml), se
agit energic i se incubeaz n termostat la 37C-2 ore, apoi se citesc rezultatele prealabile ale reaciei, ncepnd cu
cele de control(al serului i antigenului). Absena aglutinrii n tuburile de control i prezena de flocoane suspendate
n tuburile de experien se apreciaz ca reacie pozitiv. Tuburile se menin la temperatura camerei 18-20 de ore i
dup aceea se constat rezultatul definitiv al reaciei. Intensitatea reaciei se exprim prin semne de plus. La
aglutinarea complet (++++) lichidul este absolut transparent, iar la fundul tubului se depune sediment din flocoane
de microorganisme aglutinate. Cu ct mai puine microorganisme snt aglutinate, cu att este mai tulbure lichidul i cu
att mai puin sediment floconos se nregistreaz la fundul eprubetei (+++, ++, +). La reacia negativ (-) sedimentul
lipsete, suspensia rmne uniform tulbure i dup aspect nu difer de coninutul de control al antigenului. RA se
utilizeaz pentru diagnosticul serologic al bolilor infecioase febrelor tifo-paratifoide (reacia Widal), brucelozei
(reacia Wright, Huddleson), tularemiei i altor boli.
Aprecierea:
Aprecierea: cea mai mare dilutie a serului in care se manifesta aglutinare de cel putin 3 + (+++) se numeste
titrul anticorpilor aglutinanti (titrul serului aglutinant).
aglutinant).
Aglutinarea
se
glutinarea directa
directa este
este utilizata
utilizata pent
pentrru determina
determinarea grupelor
grupelor sangv
sangvine
ine sau
sau in diagnosticul
diagnosticul unor maladii
maladii infectioa
infectioase
(seroidentificarea Ag sau depistarea i titrarea Ac din serul bolnavilor) .
Reactile
Reactile de
de aglutinare
aglutinare pasiva
pasiva (indirecta
(indirecta)
Aglutinarea
u al unui Ac) pe un suport corpuscular inert,
glutinarea pasiva
pasiva consta
consta in fixa
fixarea unui
unui Ag solubi
solubil (sa
(sau
inert, care nu intervi
intervine
in reactia
reactia Ag-Ac. In calitate de suport inert pot servi hematiile, particule de latex, cristale
ristale de colesterol. Suspensia
uspensia de
particule sensibilizate cu Ag sau Ac este
este pusa in contact cu serul
serul imun (respectiv
(respectiv cu Ag), ca si in cazul aglutinarii
directe.
Avantajele reactiilor
ea lecturii
ea inalta.
reactiilor indirecte:
indirecte: facilitat
facilitate
lecturii si sensibilitat
sensibilitate
inalta.
33 Reacia de hemagluinare indirect. Ingredientele necesare, tehnica efecturii, citirea

i interpretarea rezultatelor.
Uneori Ag folosite n reacia de aglutinare sunt att de microdispersate c complexul aglutinogen-aglutinin nu se
observ cu ochiul liber. Pentru ca aceast reacie s poat fi vzut s-au propus diferite ci de absorbire a acestor Ag
pe particule mai mari cu aglutinarea lor ulterioar cu Ac specifici. Ca adsorbani se folosesc diferite specii de bacterii,
corpuscule de talc, dermatol, colodii, coalin, carmin, latex .a. Aceast reacie a cptat denumirea de reacie de
aglutinare indirect sau pozitiv. O capacitate mai pronunat de adsorbie au eritrocitele. Reacia n care se folosesc
eritrocitele se numete hemaglutinare indirect sau pasiv (RHAI sau RHAP). Pentru efectuarea RHAI se folosesc
eritrocite de berbec, cal, iepure, gin, oarece, om .a. care n prealabil sunt prelucrate cu formalin sau
glutaraldehid. Capacitatea de adsorbie a eritrocitelor crete la prelucrarea lor cu soluie de tanin sau clorid de
crom.
n RHAI ca antigene pot servi Ag polizaharidice, extractele vaccinurilor bacteriene, Ag virusurilor i rickettsiilor i alte
substane de natur proteic.
Eritrocitele sensibilizate cu antigene se numesc diagnosticumuri eritrocitare. Pentru prepararea diagnosticumurilor
eritrocitare se folosesc frecvent eritrocite de berbec, care au o capacitate mare de adsorbie.
RHAI se efectueaz mai uor n micropanourile aparatului Tacaci, folosind pentru diluia materialului microtitratorul.
Serurile de examinat se nclzesc 30min la temperatura de 56C, pentru a nltura hemaglutininele nespecifice, se
prepar diluii duble n serie n soluie stabilizant i cte o pictur de suspensie de 1% de eritrocite sensibilizate, n
rndul 2 aceeai cantitate de eritrocite de control. Plcile se agit minuios i se introduc n termostat pentru 30-40
min la temperatura 37C.
Rezultatele reaciei se citesc dup prezena hemaglutinrii. Ea este pozitiv (umbrel inversat de culoare brun la
fundul godeurilor) n cazul, c titrul de hemaglutinare cu eritrocite de experien predomin cel puin de 4 ori fa de
titrul cu eritrocitele de control. E obligatoriu controlul cu eritrocitele sensibilizate pentru excluderea aglutinrii
spontane.(conform compendiului)
Conform la cartea mic neagr(Cerkes):
Metodica: serul cercetat se nclzete 30 min la t 56C, se dilueaz consecutiv n coraport de 1:10 1:1280 i se
toarn cte 0,25ml n eprubete sau alveole, unde apoi se adaug cte 2 picturi de diagnosticum eritrocitar. n calitate
de control servesc: suspensia de diagnosticum eritrocitar cu ser imun; suspensia de diagnosticum cu ser normal;
suspensia de eritrocite normale cu serul cercetat. n primul control urmeaz s aib loc aglutinarea, iar n controalele
doi i trei aglutinarea va lipsi.
Cu ajutorul la RHAI poate fi determinat Ag necunoscut, dac pe suprafaa eritrocitelor vom adsorbi anticorpii deja
cunoscui.
Reacia de hemaglutinare poate fi efectuat i n volume mai mici 0.025ml (micrometoda), folosind microtitratorul
Tcaci.
34 Reacia de hemagluinare indirect inversat. Ingredientele necesare, tehnica

efecturii, citirea i interpretarea rezultatelor.
Uneori Ag folosite n reacia de aglutinare sunt att de microdispersate c complexul aglutinogen-aglutinin nu se

observ cu ochiul liber. Pentru ca aceast reacie s poat fi vzut s-au propus diferite ci de absorbire a acestor Ag
pe particule mai mari cu aglutinarea lor ulterioar cu Ac specifici. Ca adsorbani se folosesc diferite specii de bacterii,
corpuscule de talc, dermatol, colodii, coalin, carmin, latex .a. Aceast reacie a cptat denumirea de reacie de
aglutinare indirect sau pozitiv. O capacitate mai pronunat de adsorbie au eritrocitele. Reacia n care se folosesc
eritrocitele se numete hemaglutinare indirect sau pasiv (RHAI sau RHAP). Pentru efectuarea RHAI se folosesc
eritrocite de berbec, cal, iepure, gin, oarece, om .a. care n prealabil sunt prelucrate cu formalin sau
glutaraldehid. Capacitatea de adsorbie a eritrocitelor crete la prelucrarea lor cu soluie de tanin sau clorid de
crom.
n RHAI ca antigene pot servi Ag polizaharidice, extractele vaccinurilor bacteriene, Ag virusurilor i rickettsiilor i alte
substane de natur proteic.
Eritrocitele sensibilizate cu antigene se numesc diagnosticumuri eritrocitare. Pentru prepararea diagnosticumurilor
eritrocitare se folosesc frecvent eritrocite de berbec, care au o capacitate mare de adsorbie.
RHAI se efectueaz mai uor n micropanourile aparatului Tacaci, folosind pentru diluia materialului microtitratorul.
Serurile de examinat se nclzesc 30min la temperatura de 56C, pentru a nltura hemaglutininele nespecifice, se
prepar diluii duble n serie n soluie stabilizant i cte o pictur de suspensie de 1% de eritrocite sensibilizate, n
rndul 2 aceeai cantitate de eritrocite de control. Plcile se agit minuios i se introduc n termostat pentru 30-40
min la temperatura 37C.
Rezultatele reaciei se citesc dup prezena hemaglutinrii. Ea este pozitiv (umbrel inversat de culoare brun la
fundul godeurilor) n cazul, c titrul de hemaglutinare cu eritrocite de experien predomin cel puin de 4 ori fa de
titrul cu eritrocitele de control. E obligatoriu controlul cu eritrocitele sensibilizate pentru excluderea aglutinrii
spontane.(conform compendiului)
Conform la cartea mic neagr(Cerkes):
Metodica: serul cercetat se nclzete 30 min la t 56C, se dilueaz consecutiv n coraport de 1:10 1:1280 i se
toarn cte 0,25ml n eprubete sau alveole, unde apoi se adaug cte 2 picturi de diagnosticum eritrocitar. n calitate
de control servesc: suspensia de diagnosticum eritrocitar cu ser imun; suspensia de diagnosticum cu ser normal;
suspensia de eritrocite normale cu serul cercetat. n primul control urmeaz s aib loc aglutinarea, iar n controalele
doi i trei aglutinarea va lipsi.
Cu ajutorul la RHAI determin Ac necunoscut, iar pe suprafaa eritrocitelor se adsorb Ag deja cunoscui.
Reacia de hemaglutinare poate fi efectuat i n volume mai mici 0.025ml (micrometoda), folosind microtitratorul
Tcaci.
35 Reaciile de co-aglutinare, latex aglutinare. Ingredientele necesare, tehnica efecturii,

citirea i interpretarea rezultatelor.
Reacia n care se folosesc eritrocitele se numete hemaglutinare indirect sau pasiv (RHAI sau RHAP).
Reacia de latex-aglutinare este utilizata in identificarea factorului reumatoid la bolnavi suspecti de poliartrita
reumatoida, in bacteriologie pentru identificarea rapid a mi/o sau Ag lor n prelevate, sau identificarea tulpinilor
izolate, de asemenea pentru serodiagnosticul unor infecii.
reacia de latex-aglutinare reacia de latex-aglutinare Ac sau AgAsunt fixai pe particule de latex. Reacia se efectueaz
pe lama de sticl.
Reacia de Co-aglutinare. La baza acestei reacii se afl proprietatea unei bacterii Staphylococcus aureus
(tulpina Cowan) - ce are n componena peretelui celular proteina A - s fixeze Ig G prin intermediul fragmentului Fc.
Astfel se formeaz diagnosticuri cu Ac, cu ajutorul carora pot fi identificare Ag respective necunoscute. Reacia se
efectueaz pe lam.
36 Reacia antiglobulinic Coombs. Principiul. Componentele. Tehnica efecturii. Citirea

i interpretarea rezultatelor.
Unii Ac (monovaleni) nu sunt aglutinai n condiii normale, fiind monovaleni (ex. Ac anti-Rh, responsabili de
incompatibilitatea materno+fetal n sistemul Rh). Ei pot fi depistai graie testelor Coombs. sunt posibile 2 tehnici, n
funcie de prelevat: snge de la nou-nscut sau de la femeia gravid.
Tehnica Coombs direct: la un nou-nscut se caut prezena Ac materni anti-Rh fixai pe hematii, dac mama
este Rh- . La aceste hematii suspecte se adaug un ser anti-Ig uman. Acest ser nu aglutineaz hematiile normale, din
contra, el provoac aglutinarea hematiilor pe care sunt fixai Ac anti-Rh.
Tehnica Coombs indirect: la o femeie gravid Rh- Ac anti-Rh sunt prezeni n ser. Iniial la acest ser se adaug
hematii Rh+ (ptr formarea complexului Ag-Ac), apoi se aplic serul anti-Ig.
Demonstrarea prezentei de imunoglobuline sau a complementului pe suprafata hematiilor sustine diagnosticul de
distructie eritrocitara mediata imun.
Exista doua clase majore de anticorpi care reactioneaza cu eritrocitele. Anticorpii completi sau salini aglutineaza
eritrocitele suspendate in solutie salina; acestia sunt de obicei de tip IgM (cel mai bun exemplu de aglutinare salina la
temperatura camerei este cea utilizata in grupajul ABO). In vivo anticorpii IgM fixeaza complementul si produc
hemoliza imediata intravasculara. Anticorpii care nu reactioneaza vizibil in mediu salin si produc reactii de aglutinare
numai prin utilizarea de tehnici speciale sunt numiti aglutinine incomplete si sunt de obicei de tip IgG (cel mai bun
exemplu sunt anticorpii anti-Rh, care, daca sunt prezenti in serul primitorului de sange incompatibil, produc o reactie
hemolitica transfuzionala intarziata, extravasculara).
Pentru a certifica faptul ca hematiile unui pacient sunt invelite (sensibilizate) cu imunoglobuline, complement sau
ambele, se adauga la o suspensie de eritrocite provenite de la pacient antiser cu reactivitate fata de moleculele de Ig
si/sau complement umane, care va determina aglutinarea acestora. Initial testarea se face cu antiseruri polispecifice,
care contin anti-IgG, anti-C3d si ocazional si activitate anti-lant usor. Reactivii monospecifici diferentiaza in continuare
intre IgG, C3d, existand si seruri monospecifice pentru C3b, C4b, C4d si lantul greu al IgG. Antiseruri specifice pentru
IgM sau IgA sunt rar utilizate, deoarece IgM nu mai sunt gasite de obicei inca atasate pe suprafata celulara, iar IgA
sunt foarte rar intalnite pe suprafata eritrocitelor.
Utilizand sange recoltat pe EDTA sau pe citrat activarea in vitro a complementului de catre autoanticorpii la rece
benigni este inhibata. Spalarea eritrocitelor indeparteaza globulinele solubile sau atasate nespecific, ceea ce permite
detectia imunoglobulinelor si factorilor complementului specific legate de eritrocite in vivo. Se foloseste metoda de
hemaglutinare pe lama. Specimen recoltat - sange venos. Stabilitate proba - testul se efectueaza
imediat, daca acest lucru nu este posibil, proba se pastreaza 48 ore la 2-8 o C. Prelucrare necesara dupa
recoltare - o parte din eritrocite se spala de trei-patru ori cu solutie salina normala, urmata de prepararea
unei suspensii eritrocitare in ser fiziologic steril 5 %.
37 Reaciile de inhibare a hemadsorbiei (RIHAds) i hemaglutinrii (RIHA).

Componentele. Evaluarea i interpretarea rezultatelor.
In practica de laborator se ntrebuineaz dou tipuri de reacii de hemaglutinare (RHA), care se deosebesc dup
mecanismul de aciune.
Prima RHA face parte din reaciile serologice. In aceast reacie eritrocitele se aglutineaz la interaciunea cu anticorpi corespunztori (hemaglutinine). Aceast reacie se aplic pe larg pentru determinarea grupelor de snge.
A doua RHA nu este serologic. In aceast reacie aglutinarea eritrocitelor e condiionat nu de anticorpi, ci de substane deosebite, formate n cazul infeciei virotice. De exemplu, virusul gripei aglutineaz eritrocitele de gin i
cobai, iar virusul poliomielitei eritrocitele de berbec. Aceast reacie permite de a constata prezena unui sau altui
virus n materialul de cercetat.
Metodica. Reacia se efectueaz n eprubete sau pe plci speciale cu adncituri. Materialul de cercetat se dilueaz n
soluie izotonic de la 1:10 pn la 1:1280; 0,5 ml din fiecare diluie se amestec cu volum egal de suspensie de l2%
de eritrocite. In control, 0,5 ml suspensie de eritrocite se amestec cu 0,5 ml de soluie izotonic Eprubetele se
amplaseaz n termostat pe 30 min, iar plcile se in la temperatura camerei timp de 45 min.
Evidena rezultatelor. In cazul rezultatului pozitiv al reaciei, pe fundul eprubetei sau al adnciturii din plac se
formeaz sediment de eritrocite n form de umbrel, care astup tot fundul. In cazul rezultatului negativ,
eritrocitele formeaz un sediment compact cu margini netede, care se aseamn cu un nasture. Sediment asemntor
se formeaz i n control. Intensitatea reaciei se indic cu ajutorul semnului plus. Titrul virusului indic diluia
maxim a materialului, n care mai are loc aglutinarea.
Reacia de inhibare a hemaglutinrii. Aceasta reprezint o reacie serologic, n care anticorpii antivirotici
specifici, interacionnd cu virusul (antigenul), asigur neutralizarea acestuia i exclud capacitatea de a aglutina
eritrocite, adic inhib reacia de hemaglutinare. Specificitatea nalt a reaciei de inhibare a hem aglutinrii (RIHA)
permite de a determina, cu ajutorul ei specia i chiar tipul de virusuri nregistrate n timpul RHA
Metodica. 0,25 ml de ser antiviral se dilueaz consecutiv de h; 1:10 pn la 1:2560 i se amestec cu volume egale
de material ci conine virus i este diluat de 4 ori n comparaie cu titrul determina prin RHA. Amestecul se agit i se
termostateaz 30 min, dup cars se adaug cile 0,5 ml suspensie de l2% de eritrocite. Reacia e nsoit de 3
controale. Evidena rezultatelor se efectueaz dup incubarea repetata i termostat, n decurs de 30 min, sau
meninerea timp de 45 min 1; temperatura camerei. La pregtirea corect a experienei, n controlu serului i
eritrocitelor trebuie s se formeze nasturele, deci lipseti factorul ce condiioneaz aglutinarea eritrocitelor, iar n
controlul anti genului se formeaz umbrela, deci virusul a dus la aglutinare; eritrocitelor. In experien, dac serul
este omolog cu virusul cercetat. s< formeaz nasturele, deci serul a neutralizat virusul, n acest caz titrul serului
reprezint diluia maxim, n care se mai nregistreaz inhibarea hemaglutinrii.
.
38 Tehnica efecturii, citirea i interpretarea rezultatelor reaciilor de precipitare

inelar, n gel cu scop de seroidentificare.
Reacie de precipitare (R.P.) se numete sedimentarea antigenului (pretipitinogenului) din soluie la aciunea
serului imun (precipitinei) i a electrolitului asupra lui. Cu ajutorul reaciei de precipitare antigenul poate fi evideniat
n aa cantiti minime, care nu se determin pe cale chimic.
In reacia de precipitare se folosesc antigene lichide i transparente, care prezint corpuscule ultramicroscopice
ale soluiei coloidale de protein, polizaharide etc.n calitate de antigene se folosesc extracte din celulele microbiene,
organe i esuturi, produsele dezintegrrii celulelor rnicrobiene - lizate, filtrate . a. Rezistena precipitinogenelor la
temperaturi nalte se folosete la obinerea antigenelor din agenii cauzali ai antraxului, pestei . a. (metoda de
fierbere). Serurile precipitante se pregtesc centralizat prin hiperimunizarea animalelor (iepurilor) cu suspensie de
bacterii, filtrat al culturilor bulionice, autolizate, extracte saline ale microorganismelor, proteine serice etc.
Titrul serului precipitant, spre deosebire de titrul altor seruri diagnostice, se determin prin diluia maxim a
antigenului care se precipit cu serul dat. Aceasta se explic prin faptul, c antigenul care particip n R.P. are
dimensiune ultramicroscopic i se conine ntr-o unitate de volum n cantiti mai mari dect anticorpi n acelai volum
de ser. Serurile precipitante se elaboreaz cu titru nu mai mic de 1:100000.
Reacia de precipitare inelar. In eprubeta de precipitare, cu ajutorul pipetei Pasteur, se toarn 0,20,3 ml (5
6 picturi) de ser (serul nu trebuie s nimereasc pe peretele eprubetei). Pe peretele eprubetei, n ser, foarte atent, cu
ajutorul pipetei subiri Pasteur, se adaug acelai volum de antigen. In acest timp eprubeta se ine n poziie nclinat.
La stratificarea corect ntre ser i antigen se distinge o limit clar. Atent, pentru a evita amestecarea straturilor,
eprubeta se trece n stativ, n caz de reacie pozitiv, la hotarul dintre antigen i anticorp se formeaz un inel tulbure,
care reprezint precipitatul Reacia este nsoit de un ir de controale.Un rol deosebit de important aparine
consecutivitii introducerii ingredienilor reaciei n eprubeta. Nu se admite stratificarea serului pe suprafaa
antigenului (n control pe soluia izotonic), deoarece densitatea serului este mai mare dect cea a antigenului i el
se va aeza la fundul eprubetei, iar hotarul dintre antigen i anticorp nu se for-eaz.
Evidena rezultatelor se efectueaz peste 530 min, iar n unele cazuri peste o or, ntotdeauna ncepnd cu controlul. Inelul din eprubeta a doua inidic capacitatea serului imun de a intra n reacia specific cu antigenul corespunztor, n eprubetele nr. 35 nu trebuie s apar inele de precipitare, deoarece lipsesc anticorpii i
antigenii omologi. Prezena inelului n eprubeta nr. l indic rezultatul pozitiv al reaciei i faptul c antigenul cercetat
corespunde serului imun folosit n reacie. Lipsa inelului (inelul e prezent doar n eprubeta nr. 2) indic
necorespunderea antigenului cu anticorpul, deci a fost obinut rezultatul negativ al reaciei.
Reacia de precipitate se folosete pe larg n practica de laborator pentru diagnosticul bolilor infecioase
bacteriene (antrax, pest, tularmie . a.) i de natur virotic (variol, infecia respiratorie acut . a.),
In medicina judiciar R.P. se folosete pentru determinarea apartenenei de specie a proteinei (pete de snge, sperm
etc.).
Cu ajutorul R.P. se va determina att specificitatea de specie, ct i de grup a proteinei. Prin intermediul ei s-a
determinat, de exemplu, gradul de nrudire a diverselor specii de animale i plante.
39 RIF direct i indirect. Ingredientele necesare, tehnica efecturii, citirea i

interpretarea rezultatelor.
Marcanii utilizai uzual: fluorocromi(rodamina, fluoresceina), care emit respectiv o lumin rou-oranj sau verdegalben la tratarea lor cu raze UV.
Reacia de imunofluorescenta direct este folosit numai n scop de seroidentificare. Din materialul ce conine
Ag (material nativ, cultura pur, biopsie tisular) se prepar un frotiu, peste care se aplic serul imun specific cu Ac
marcai cu fluorocrom. Peste 20 min de incubare ntr-o camer umed, preparatul este studiat la microscopul
luminescent. n caz de reacie pozitiv se observ luminiscen local. Inconvinient:necesitatea de a avea seruri
imune marcate specifice ptr fiecare Ag.
Are la baz folosirea fluorocromilor, chimic conjugai cu anticorpii. Anticorpii marcai i pstreaz specificitatea
imunologic si reacioneaz strict cu anumite antigene. Complexele antigenelor cu anticorpii marcai se evideniaz
uor dup intensitatea de luminiscen galben-verzuie la studierea frotiului n microscopul luminiscent.
R.I.F. direct prevede folosirea serurilor imunofluorescente fa de fiecare antigen examinat.
R.I.F. poate fi aplicat pentru examinarea diferitor antigene: culturi de bacterii, ciuperci, protozoare; frotiuri din
materialul bolnavului; celulelor infectate, seciuni de esut . a. Materialul de examinat se aplic pe lam i se fixeaz
(deseori n aceton (10 min) la temperatura camerei), apoi ss usuc 20 min la temperatura de 37C. Prelucrarea
preparatelor n continuare depinde de varianta R.I.F. folosite.
Preparatul n R.i.F. direct se coloreaz cu antiser specific marcat n camer umed 30 min la temperatura 25C,
apoi se spal cu soluie tampon (pH 7,2) 10 min a temperatura de 25C.
Pentru a evita rezultate fals-pozitive reacia este nsoit de un ir de controluri, printre care un rol deosebit i revine
controlului cu antigen eterogen
RIF indirect poate fi utilizat ptr seroidentificare i serodiagnostic. pe frotiul ce conine Ag se aplic Ac
corespunztori nemarcai. Peste 20 min se spal minuios preparatul, apoi se adaug anti- Ig fluorescent, care se va
combina cu Ac din complex. Acest reactiv poate fi utilizat n numeroase reacii. Anti-Ig se obine prin imunizarea
iepurilor(sau altor animale) cu Ig umoane.
R.I.F. indirect are la baz folosirea a dou antiseruri diferite. La nceput se aplic anticorpii nemarcai fa de
antigenul studiat, iar n etapa a doua a reaciei complexul format antigen-anticorp este prelucrat cu antiser marcat cu
F.I.T.C (fluresceinizotiocianat., ce conine anticorpi contra gama-globulinelor acelui animal, de la care s-au obinut
antiserurile folosite n prima etap a reaciei (ser antigen de specie).
40 Reacia de fixare a complementului cu scop de seroidentificare. Ingredientele

RFC se bazeaz pe fenomenul , conform cruia complexul specific dintre Ag i Ac ntotdeauna leag complementul.
RFC cu scop de serodiagnostic prevede identificarea Ac cu ajutorul Ag.
componentele: ptr sistemul de baz: antigen (de regul lizat), extract, hapten, mai rar suspensia de
microorganisme, anticorp: serul bolnavului, complement: serul cobaiului. ptr sistemul hemolitic: antigen: eritrocite de
berbec; anticorp: hemolizina fa de eritrocitele berbecului; soluie izotonic.
REACIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUI (RFC). Este o reacie complex, constituit din 2 sisteme Ag-Ac i cu
participarea C. n RFC particip Ig capabile s fixeze C IgM i IgG. RFC se utilizeaz n diagnosticul virozelor,
infeciilor bacteriene, etc Toate componentele RFC sunt utilizate n acelai volum fiind titrate n prealabil pentru
aprecierea dozelor de lucru. Reacia este nsoit de martori ai tuturor componenilor
Reacia se efectueaz n 2 etape utiliznd 2 sisteme.
I etap Sistemul de baz este constituit din Ag1 (diagnosticuri sau Ag necunoscute), Ac1 (serul bolnavului sau
serul imun) i complement n doza de lucru. Amestecul este incubat 1h la 37
37 C sau meninut 16-18 ore la 4
4 C. Dac
Ac se combin cu Ag omolog va avea loc i fixarea C (efect frecvent invizibil).
II etap la sistemul de baz se adaog sistemul indicator (hemolitic), constituit din hematii de berbec (Ag2)
combinate cu Ac specifici (Ac2). Peste 1h incubare la 37
37 C reacia este terminat.
Evaluarea rezultatelor dac complementul a fost fixat de primul sistem Ag-Ac hemoliza nu se observ (rezultat
pozitiv). Dac Ag1 nu corespunde cu Ac1, complementul rmne disponibil pentru fixare pe sistemul indicator Ag2Ac2, provocnd hemoliza (rezultat negativ)
41. Reacia de bacterioliz. Componentele. Tehnica efecturii reaciei in vivo. Citirea i interpretarea rzultatelor.
L i z i n e numim nite anticorpi specifici care provoac dizolvarea bacteriilor, celulelor de plante i animale. Citoliza
bacteriilor se produce prin concursul a dou ingrediente: anticorpului specific, coninut n serul imun, i substanei
nespecifice, coninute n orice ser normal sau imun, numite complement.
Uzinele au capacitate^ de a dizolva bacteriile : treponemele, lep- tospirele (bacteriolizine), precum i de a produce
leziuni brutale n structura hematiilor (hemolizine), leucocitelor i altor celule (citolizine). Ele posed toate proprietile
principale ale anticorpilor, cu unica diferen c acioneaz asupra antigenului exclusiv n prezena complementului.
Reacia de liz este polisistemic, indirect, tricomponenial. Dat fiind c complementul este labil, n reaciile de liz se
folosete un complement conservat obinut de obicei din serul de cobai. Conservarea complementului se face prin adiie
de clorur de sodiu n concentraii de 10%, sau acid boric 4%, su sulfat de sodiu 5%, precum i prin uscare la
temperatur joas n vid (liofilizare).
n caz de imunizare a iepurilor cu suspensie de hematii de berbec n sngele lor se acumuleaz anticorpi capabili s
modifice hematiile, de pe urma crui fapt legtura de adsorbie dintre hemoglobin i stroma lor se rupe, hemoglobina
ptrunde lesne din hematii n lichidul nconjurtor i el se coloreaz n roz. nclzirea serului imun la temperatura de 56C
timp de 30 min. este nsoit de pierderea proprietilor hemolitice de pe urma inactivrii complementului, n adiia de
ser proaspt de ja un nimal chiar neimunizat restaureaz caracterele hemolitice ale serului imun. Dac n eprubet
introducem n anumite proporii ser hemolitic (anticorpi), hematii de berbec (antigen) i complement, peste cteva minute
se va produce modificarea amestecului: din rou opalescent el va deveni roz (cu aspect de lac).
42. Reacia de bacterioliz. Componentele. Tehnica efecturii reaciei in vitro. Citirea i interpretarea
rezultatelor.
Reaciile de liz Snt cele de dizolvare a antigenului unit cu anti-corpi n prezena complementului. In dependen de
antigenele care particip l reacia de liz; ea poart denumirea de vibrioliz, bacterioliz, hemoliz . a. m. d. Anticorpii
ce particip sint numii respectiv spirochetolizie, vibriolizie, hemolizine . a. Lizinele i manifest aciunea numai n
prezena complementului.
Majoritatea microorganismelor, excluznd vibrionul boierie si treponemele, snt rezistente la aciunea litic a
anticorpilor. De aceea reacia de liz nu este larg rspndit n practica de laborator...
| La efectuarea reaciei de liz (tab. 2) serul imun se nclzete timpB de 30 min la temperatura de 56C pentru
inactivarea complementului Suspensia de microorganisme se prepar din cultura de 24 ore (1 ml) diluat suspensie de
microorganisme i 0,1 ml de complement nediluat. In alt tub - martor al complementului, inactivat n serul imun,
complement nu se adaug. In al treilea tub martor al complementului la' lipsa Uzinelor n el, serul imun se nlocuiete cu
soluie izotonic de dorid de natriu.
Tuburile se menin n termostat 2 ore la temperatura de 37C. Apoi se facnsmnri cu ansa din fiecare tub pe mediu
nutritiv soUd n cutii Petri.
H nsmnrile snt ncubate 24 ore la temperatura de 37C i se numr coloniile. In caz c serul examinat conine
lizine, numrul de co- I Ionii pe mediul nutritiv, nsmnat cu material din tubul de experien, va fi de multe ori mai mic
dedt n cutiile nsmnate cu materialul din ; tuburile de control.
Reacia de hemoliz este folosit n calitate de sistem indicator n I reacia de fixare a complementului.
43. Reacia de neutralizare a exotoxinelor in vivo. Principiul. Componentele. Tehnica efecturii. Citirea i
interpretarea rezultatelor.
La baza acestei reacii se afl capacitatea serului antitoxic specific de a neutraliza exotoxina. Pentru efectuarea reaciei
materialul de examinat n care se presupune prezena exotoxinei se amestec cu ser antitoxic, se pstreaz n termostat i
se inoculeaz animalelor (cobai, oarece). Animalelor de control li se injecteaz filtratul materialului de examinat
neprelucrat cu ser. In caz c are loc neutralizarea exotoxinei de ctre serul antitoxic, animalele din grupul de experien
supravieuiesc. Animalele de control pier n urma aciunii exotoxinei. O variant a reaciei de neutralizare este testul de*
seroprotecie, in care se urmrete capacitatea unei antitoxine, inoculate n prealabil la un animal receptiv, de a preveni
efectele specifice ale unei toxine.
Frecvent folosit n laboratorul clinic este dozarea antistreptolizinei O bazat pe neutralizarea efectului hemolitic al
streptolizinei O, o citotoxin produs de. streptococii grup A, C i G.
Prin teste intradermice poate fi urmrit neutralizarea toxinelor difterice, cu efect dermonecrotic (testul Schick) sau a
eritrotoxinei streptococice (testul Dick).
44. Reacia de imobilizare a bacteriilor. Componentele. Tehnica reaciei. Citirea i interpretarea.

Reacia de imobilizare este monosistemic, indirect, tricomponenial. n afeciunile provocate de treponemele
patogene n sngele oamenilor bolnavi se formeaz anticorpi care mpiedic micarea treponemelor i produc dezintegrarea lor.'Efectul imobilizant al anticorpilor se realizeaz n prezena complementului, dei nu are loc fixarea lui
sauifenomenul se produce n grad minim. Apariia reaciei de imobilizare a fost constatat nu numai fa de treponeme, ci
i fa de alte microorganisme (agentul amibiazei, unele bacterii mobile etc.a.
45. Testul ELISA metoda direct. Principiul. Componentele. Tehnica efecturii. Citirea i interpretarea
rezultatelor.
ELISA una dintre cele mai folosite metode de indentificare si apreciere cantitativa pentru anticorpi, antigene,
hormone, cytokine si o paleta larga de molecule, inclusiv peptide sintetice.
Principul :
Se bazeaza pe antigen-anticorp. Antigenul sau anticorpul de captura este fixat pe un support solid dupa care este pus in
contact cu o immunoglobulina sau un antigen. O enzima cuplata fie direct de imunoglobulina sau de un alt anticorp
antiimunoglobulina degradeaza un substrat cromogen inccolor producind un compus colorat ce poate fi detectat
spectrofotometric la o lungime de unda corespunzatoare.
- RIE direct (metoda sandwich). Utilizat doar n seroidentificarea Ag. n godeurile din placa de polistiren n care sunt
fixai Ac cunoscui se toarn soluia de Ag necunoscut. Se incubeaz 1h. Dup o splare minuioas a godeurilor se
adaug Ac marcai cu enzime, care se fixeaz pe epitopii liberi ai Ag polivalent. Dup incubare de 30 min-1h se spal
iari godeurile. Prezena complexului Ac-Ag-Ac-marcat se depisteaz cu ajutorul substratului cromogen (substan iniial
incolor, dar care se coloreaz sub aciunea enzimei, ex. apa oxigenata si orthofenilendiamina).
Interpretarea rezultatelor:
Consta in aprecierea culorii probei. Intensitatea culorii se apreciaza mai intii visual, pentru determinarea virarii de
culoare dupa adaugarea substratului si stabilirea timpului de mentinere a lui pina la stoparea reactiei. Densitatea se
apreciaza la stecrofotometru.
46.Testul ELISA metoda indirect. Principiul. Componentele. Tehnica efecturii. Citirea i interpretarea
rezultatelor.
Utilizat n serodiagnostic.
ELISA una dintre cele mai folosite metode de indentificare si apreciere cantitativa pentru anticorpi, antigene,
hormone, cytokine si o paleta larga de molecule, inclusiv peptide sintetice.
Principul :
Se bazeaza pe antigen-anticorp. Antigenul sau anticorpul de captura este fixat pe un support solid dupa care este pus in
contact cu o immunoglobulina sau un antigen. O enzima cuplata fie direct de imunoglobulina sau de un alt anticorp
antiimunoglobulina degradeaza un substrat cromogen inccolor producind un compus colorat ce poate fi detectat
spectrofotometric la o lungime de unda corespunzatoare.
Ag cunoscut este fixat la fundul godeurilor. Ac (serul testat) se ntroduce n godeu, dup 1h se spal totul i se adaug
ligandul marcat cu enzim (anti-Ig sau proteina A cuplate cu enzim). Acest ligand se fixeaz pe Ac testai. Se adaug
apoi substratul cromogen. Cantitatea de Ac se msoar dup densitatea optic a lichidului din godeuri.
Interpretarea rezultatelor:
Consta in aprecierea culorii probei. Intensitatea culorii se apreciaza mai intii visual, pentru determinarea virarii de
culoare dupa adaugarea substratului si stabilirea timpului de mentinere a lui pina la stoparea reactiei. Densitatea se
apreciaza la stecrofotometru.
47.Testul imunoblot. Principiul. Componentele. Tehnica efecturii. Citirea i interpretarea rezultatelor.

Acest test este util pentru a confirma prezenta anticorpilor IgG specifici fata de virusul hepatitei C in probele de ser care
au dat rezultate reactive. Testul utilizeaz 6 antigene HCV recombinate purificate, relevante serologic, care sunt separate
pe baza greutii moleculare prin electroforez n gel de poliacrilamid n prezen de sodium dodecil sulfat (SDS-PAGE)
i transferate ulterior electroforetic pe o membran de nitroceluloz (Western blotting). Situsurile de legare libere de pe
membran sunt saturate cu o soluie de proteine, dup care matricea este splat i tiat n fii (strip-uri). Antigenele
sunt reprezentate, n ordinea fixrii pe strip, de:
Core 1 i Core 2: proteine structurale provenite din regiunea core care formeaz cea mai mare parte a
nucleocapsidei virale;
Helicaz: protein nonstructural/parte din NS3 cu activitate de helicaz viral;
NS-3: protein nonstructural cu activitate de helicaz viral i proteaz;
NS-4: protein nonstructural;
NS-5: protein nonstructural.

ntr-o prim etap strip-ul ncrcat cu antigenele HCV este incubat mpreun cu serul diluat al pacientului. Dac n ser
sunt prezeni anticorpi specifici acetia se vor lega de antigenele corespunztoare de pe strip. Dup o etap de splare,
strip-ul este incubat cu un conjugat anti-IgG uman marcat cu peroxidaz. Conjugatul se va ataa la poriunea IgG a
complexului antigen-anticorp. Dup ndeprtarea prin splare a conjugatului nelegat se adaug soluia de colorare un
sistem de detecie enzimatic colorimetric care conine peroxid de hidrogen i 4-cloro-1-naftol. Dac este prezent
conjugatul legat reacia enzimatic va genera un produs colorat albastru-nchis la nivelul benzilor ocupate de anticorpi
specifici. Astfel, benzile vizualizate la nivelul stripului sunt rezultatul legrii anticorpilor specifici de antigenele
individuale recombinate de la nivelul strip-ului.
Prin acest test sunt detectai anticorpii specifici fa de cele 6 genotipuri HCV 4.
Valori de referin i interpretarea rezultatelor
Intensitatea benzilor probelor este comparat cu cea a benzii controlului cut-off prezent pe fiecare strip. Sunt posibile
urmtoarele exprimri semicantitative:
Nici un antigen --------- negativ
Core 1 izolat, Helicaza izolata sau alte 2 antigene ------------- echivoc
Core 1 si Core 2; Core 2 si un alt antigen; 3 antigene --------------- pozitiv.
48. Reacia opsono-fagocitar. Componentele. Tehnica reaciei. Citirea i interpretarea. Determinarea indicelui
opsono-fagocitar.
O p s o n i n e (din gr. opson - hran) se numesc 1 anticorpii serurilor normale i imune, care modific microorganismele
i le 1 prepar n vederea unei fagocitri mai intense. Sub influena opsoninelor se . produce modificarea suprafeei
microorganismelor, mai ales a potenialului lor electric, de pe urma crui fapt ele se preteaz mai lesne la fagocitoz.
Opso- ninele condiioneaz sensibilizarea specific i sporirea sensibilitii bacteriilor I fa de fagocitoz.
Opsoninele snt alctuite din substane termolabile ale serului sangvin i ^includ trei fracii ale complementului (C3b) i
termostabile, ce conin IgG.
La nceput, n prima faz se produce opsonizarea particulelor,. n a doua | fixarea lor pe suprafaa celulelor fagocitate.
4Gradul de activitate a opsoninelor se obinuiete a-1 exprima prin i n d i ce o p son i c, cre reprezint raportul indicelui
fagocitar al serului imun la indicele fagocitar al serului de om sntos. Indice fagocitar se numete rezub tatul de la
mprirea numrului de bacterii fagocitate de 100 de fagocite la numrul de fagocite. Indicele opsonic trebuie s fie mai
mare dect 1,0.
49.Diagnosticul microbiologic al infeciei stafilococice (medii pentru izolare i unele teste mai importante pentru
identificare).
1. Prelevate patologice (puroi, singe, probe alimentare, urina, mase fecale)
2. Microscopia direct
Se efectueaz i se coloreaz Gram frotiuri, care sunt examinate prin obiectivul cu imersie
3. Izolarea i identificarea
Etapa I. Se epuizeaz o ans din prelevatul patologic sau tamponul de prelevare pe mediul de izolare:
geloz-snge: prelevate necontaminate sau cu contaminare redus ca puroi, lichid cefalorahidian, tampon riazal etc.;
6.
7.
8.
9.
10.
--- hiperclorurat cu lapte i ou, hiperclorurat cu manitol (Chapman): prelevate hiper- contaminate ca materii fecale,
alimente, sput.
Etapa II . Dup incubare aerob peste noapte la 37C, stafilococii formeaz colonii S, cu diametrul de 12 mm,
bombate, opace, pigmentate auriu, alb sau galben, cu sau fr hemoliz complet pe geloz-snge i cu halou opac
determinat de lecitinaz pe geloza cu lapte i ou.
Pe mediul Chapman coloniile de S. aureus sunt manitopozitive (galbene prin fermentarea manitei). Ali stafilococi sunt
manitonegativi.
Etapa III . Cultura pur, verificat microscopic, este supus testelor de identificare.
Depistarea coagulazei legate (dumping factor). Pe o lam de microscop, ntr-o pictur de ap, se omogenizeaz o ans
din cultura pur pentru a obine o suspensie lptoas. Se nmoaie un fir drept n plasm de iepure i se agit, prin micare
circular continu, timp de 5 secunde, n suspensie bacterian. Aglutinarea stafilococilor din pictur n interval de 10
secunde semnific un test pozitiv. Testul negativ, absena aglutinrii, trebuie confirmat prin testul coagulazei libere, n tub.
Testul coagulazei libere. ntr-un tub 10/100 mm cu 0,5 ml plasm citratat de iepure diluat 1/4 se suspensioneaz o ans
plin din cultura pur. Se incubeaz n baie de ap la 37C i se verific, prin nclinarea tubului, dup 30 minute i 4 ore
apariia cheagului. n caz de rezultat negativ n acest interval, se las tubul pn a doua zi la temperatura camerei i se
urmrete din nou apariia cheagului.
Se epuizeaz cultura pe geloz cu 0,01% fosfat de fenolftalein i se incubeaz peste noapte la 37C. Se expune cultura
vaporilor de amoniac (o bucat de hrtie de filtru mbibat cu amoniac i fixat pe capacul plcii Petri). n interval de 1
2 minute coloniile stafilococilor productori de fosfataz devin roz-roii.
Fermentarea sau oxidarea zaharurilor sunt urmrite prin testul O/F.
Rezistena la novobiocin poate fi testat o dat cu antibiograma tulpinii semnificativ clinic supus identificrii.
50.Diagnosticul microbiologic al infeciei streptococice (medii pentru izolare i unele teste mai importante pentru
identificare).
1. Prelevate patologice
Exsudat oro- sau nazofaringian, puroi, lichid cefalorahidian, raclat uterin, sput in |feciile localizate, recoltate, dup
caz, pe tampon, cu seringa sau pipeta.
2. Microscopia direct
colorare Gram i cu albastru de metilen, depisteaz coci grampozitivi dispui in perechi sau lanuri n context inflamator
cu polimorfonucleare.
3. Izolarea i identificarea
Hemoculturile.
Etapa I. Sngele n cantitate de 510 ml, recoltat aseptic din vena cubitl, este nsmnat n proporie de 1:10 n
bulion glucozat i n bulion Kitt-Tarrozzi cu incubare de 721 zile la 37C aerob i, respectiv, anaerob in atmosfer cu
1020% 02.
Etapa II. Hemoculturile se examineaz n zilele 1; 2; 3; 5; 7; 10; 15; 21 microscopic i prin repicare pe plac cu gelozsnge.
Etapa III. Identificarea izolatelor n cultur pur se face prin:
Streptococii sunt pretenioi nutritiv, facultativ pe medii Imbogatite. Pc geloz-snge formeaz colonii hemolitice sau
nehemolitice in funcie de specia implicata.
Testul catafaza difereniaz aceste bacterii fiind negativ pentru i pozitiv pentru mkfocori.
Pe o lam de microscop, se amestec* o pictur din cutunMii Pam Qt o pic tur din soluia 10% de H2O2. Se
urmrete efectul timp de 13 rest negativ: absenta bulelor de gaz; test pozitiv: apariia bulelor de gaz.
Testul de sensibilitate la bacitracin. Pe un sector al unei plci cu geloz-snge confluent cu tulpina testat se depune
un microcompriraat cu 0,5 UI bacitracin peste noapte la 37C.
| Identificarea streptococilor nongrup A se face prin criteriile Sherman
I I Pentru Identificarea S. agalactiae (grup B) este util testul CMP, bazat pe capacitatea acestei specii de a stimula
activitatea hemolitic a streptococului auriu. Pe o plac cuigeloz-snge nsmnm tulpinile de streptococ testate n
striuri perpendiculare pn la 1 cm distan de un striu prensmnat cu Staphylococcus aureus i incubm pn p doua zi
la 37C. Zona de hemoliz a stafilococului se lrgete n dreptul striului de Bpeptococ grup B.
I Etapa IV. Comunicm rezultatul: specia sau grupul serblogic al streptococului izolat.
S. ipyogenes este printre puinele specii care i-au pstrat marea sensibilitate natural la penicilin. Pentru toi ceilali
streptococi se efectueaz i se comuni antibiograma. n cazul pacienilor sensibilizai la penicilin, la fel se procedeaz
i cu S. pyogenes, care a dobndit rezisten la alte antibiotice, inclusiv la eritromicin.
51. Diagnosticul microbiologic al infeciei meningococice (medii pt izolare i unele teste m.import pt identificare ).
Prelevate: exsudatul nasofaringean, hemocultur, exsudat prelevat aseptic prin scarificarea pete iilor, lichid
cefalorahidan.
Graie fragilitii meningococilor, examinarea probelor (cel mult 1-2h) evitarea refrigerrii.
Examenul bacteriologic
Sedimentul din LCR se nsemneaz pe medii de cultur mbogite, cum sunt geloza-snge, geloza-ciocolat, mediul
Mueller-Hinton prenclzite la 37 C.
Exsudatul nazofaringean se nsemneaz imediat dup recoltare pe medii cu adaos de antibiotice (lincomicin,
vancomicin, ristomicin) pentru inhibarea cre terii bacteriilor G+
Hemoculturile se nsemneaz n bulion glucozat 2% (un volum sange pentru 10 volume mcdiu). Examinrile se fac
zilnic timp de 5-7 zile prin subculturi.
Identificarea
Studiul earacterelor morfotinctoriale: diplococi gramnegativi in boabc de cafea; in culturile vechi apar forme atipice
variate.
Studiul curacterelor de cultur prin repicare pe geloza nutritiva i geloza-ser cu incubare la 37C i la 22C.
Mcningococul crete numai pc geloza-ser la 37C.
Studiul caracterelor biochimice. Meningococii produc oxidaza i catalaza, iar pc mcdiul Hiss formeaza acid din glucoz
i maltoza, dar nu scindeaza zaharoza, lactoza i fructoza
1
Diagnosticul de laborator al gonoreei: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.

Prelevate: secreiile uretrale,exsudat endocervical, vulvovaginal, din endocol, anorectal, conjunctival, nazofaringian,
articular.
Recoltare - tampon de alginat de Ca (sau ansa bacteriologic), care este apoi trimis imediat n laborator pentru testare
(dupa necesitate se foloseste mediul de transport Stuart cu tioglicolat i crbune activat).
Daca eliminrile sunt srace, se apeleaz la stimularea secreiei sau inflamaiei din focare : Alimentar (cu bauturi
alcoolice bere); Chimic (instilaii cu nitrat de Ag sol. 1% in uretr, 10% n colul uterin); Biologic (inocularea
gonovaccinului, recoltarea secreiilor imediat dupa menstre la femei); Mecanic (masaj al prostatei); Termic (diatermie
sau inductotermie edine 30min-3zile)
Examenul microscopic (elocvent doar n cazul uretritelor acute la brbai).
In frotiuri din puroiul uretral colorate Gram sau cu albastru de metilen se observ diplococi gram negativi n boabe de
cafea situai intra- sau extracelular. RIF
Examenul bacteriologic (este obligator n forme asimptomatice sau cronice)
Etapa I. Prelevatele patologice sunt epuizate pe medii special imbogtite (Thayer-Martin).
Pentru izolare in mediul de cultur se include i un amestec selectiv format din colimicina sau polimixin B 10-20 U/ml
(inhib bacilii gramnegativi) i ristomicin sau vancomicin (inhib flora grampozitiv).
Culturile trebuie incubate 24-48 ore la 37C in atmosfer cu 5-10% CO2 i umiditate crescut asigurat de hrtie de
filtru umectat.
Etapa II. Coloniile suspecte (mici, transparente, S, oxidazopozitive) sunt repicate, pentru a obtine cultura pur necesar
identificrii.
Etapa III. Se procedeaz la identificarea culturii pe baza urmtoarelor caractere:
diplococi caracteristici gramnegativi; oxidazopozitivi; care cultiv numai la 37C pe medii special imbogtitc cu
ser; formeaz acid numai din glucoz i sunt inactivi asupra maltozei, lactozei i zaharozei Identificarea antigenic
poatc fi facuta cu seruri antigonococice prin agiutinarc, coaglutinare sau rcactie imunofluorescenta.
Antibiograma este necesara pentru ca exista tulpini producatoarc de b-lactamaz i multirezistente la antibiotice.
Etapa IV. Interpretarea rezultatelor i completarea bulctinului de analiz..
Diagnosticul serologic - RFC. Titrurile mai mari de 1:10 sunt sugestive, dar specificitatea i sensibilitatea reactiei sunt
nesati-sfctoare.
1. Diagnosticul de laborator al antraxului: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.

Prelevate (n funcie de forma clinic): exsudat din leziunea cutanat, sput, snge, LCR, materii fecale, bioptate din
ganglioni limfatici, probe necroptice, probe de la animalul suspect i elemente din mediul extern
Examenul microscopic: direct, RIF. Pe frotiuri sau amprente de organe coIorate cu albastru de metiten policrom i
Gram se observ bacili mari cu morfologia caracteristic, capete retezate, izolai sau n lanuri scurte. Sporii sunt rareori
prezeni.
Prin coloraia cu albastru de metilen policrom capsula se observ mai bine, colorat metacromatic in roz, ca un inveli
continuu in jurul baciIilor
Examenul bacteriologic Prelevatele monomicrobiene se nsmneaz pe geloz i geloz-snge, iar cele
polimicrobiene se nclzesc n prealabil 10 min la 75 grade C. Incubarea la 37 C timp de 24h.
Sngele n bulion glucozat, repicri zilnice timp de 7 zile pe geloz-snge.

Examinarea coloniilor crescute, selecia celor suspecte i acumularea lor : Coloniile de B. Anthracis sunt mari, rugoase,
cu aspect de sticl pisat, nehemolitice, cu circumferinj neregulat, inconjurat cu prelungiri laterale ondulate in coama
de leu
Identificarea culturii pure acumulate i diferenierea de antracoizi.
Examenul biologic - Se inoculeaz prelevatele la cobai sau oareci, care sunt foarte sensibili la infecie. Dup moartea
lor (36-48h) bacilii sunt depistai n frotiuri din snge i organe. Depistarea Ag polizaharidice termostabile n prelevate
(reacia de precipitare inelar Ascoli)
Diagnosticul serologic. Ac anti-antrax pot fi depistai la convalesceni n RP sau RFC
Diagnosticul imunologic (proba cutanat alergic). Se pune n eviden starea de hipersensibilizare prin inocularea
intradermic a 0,1 ml de antraxin (extract din tulpina vaccinant de B.anthracis). Reacie pozitiv edem i hiperemie
cu diametrul de peste 8 mm.
2. Diagnosticul microbiologic al pestei (medii pentru izolare i unele teste mai importante pentru identificare ).
Examenul direct
Examenul microscopic frotiuri din exsudat, aspirat ganglionar, puroi, snge, sput colorate Giemsa, cu albatstru de
metilen sau albastru toluidin depisteaz Y. pestis sub form de cocobacili colorati bipolar, dispui izolat sau in perechi
printre celuiele inflamatorii.
Examenul bacteriologic
Se insmnteaz prelevate necontaminate (aspirat ganglionar, probe bioptice) pc geloz-snge hemolizat i hiposulfit de
sodiu (1:4000) ca stimulatori de cretere.
Prelevatcle contaminatc (sput, probe de la cadavre, probe de sol) sc epuizeaz pc mcdii selective prin adaos de violet de
gentian (1:100000-1:200000).
Hemoculturile sunt indicatc in fiecare form clinic a bolii cu insmntarea sngelui in bulion glucozat. Se incubeaz
culturile minimum 30 ore la 28C.
-Se urmrete pe mediile solide apariia de colonii mici (0,1-1 mm diametru) cu centrul opac, perifcria transparenta i
marginile ondulate. In bulion Y. pestis determin turbiditate minim, creterea fiind sub aspect de pelicula superficial cu
ex-tindere de filamente in profunzimea mediului i depuneri la fundul recipientului.
- Examenul ulterior al caracterelor de cultur (creterea progresiv a coloniilor, for marea in bulion a unui val cu
prelungiri sub form de stalactite in profunzimea mediului, care rmnc relativ clar), biochimice i patogenitatea pentru
oarece, obolan sau cobai diferentiaza izolatele de alte yersinii i le confirm ca Y. pestis.
3. Diagnosticul de laborator al botulismului: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.
Prelevate: ser sangvin, extract din alimente, mase vomitive,splturi stomacale, mase fecale, urin.
Diagnostic microbiologic
Pn la nsmnare materialulde examinat n prealabil se frmi eaz n mojar.
Se Insmineaz 10-12 ml material in rnediul Kitt-Tarrozzi, in mediul cazeinic acid sau cazein-micetic.
Una din probe se insminteaz in 4flacoane, 2din care se nclzesc unul la temperatura de 60C,15min pt seelctarea
Cl.botulinum de tipul E), altul - la temperatura de 80C, 20 min
mbogirea cuIturiIor clostridiene de tipul E i F are loc in termostat la 28C, iar pentru creterea clostridiilor de tipul A,
B, C insmintrile se cultiv la temperatura de 37C, 48 ore.
Pentru activarea toxinei E din protoxin, n mediul nutritiv se adauge tripsin, pin la concentraia final (0,1%).
Resturile din probele materialului de cercetat sInt pstrate in frigider pin la sfiritul analizei.
Peste 24-48 ore de pstrare a insminrilor in termostat se fixeaz turbiditatea mediului de imbogire i gaz. Din mediul
unde se depisteaz cresterea se pregtesc frotiuri, care se coloreaz dup metoda Gram. Dac sint evideniate clostridii
tipice cu spori (In form de palet), se efectueaz reinsminarea pe medii nutritive solide pentru cptarea coloniilor
separate. Izolarea culturii pure prezint greuti din cauz, c clostridiile botulinice deseori se gsesc n asociaii cu unele
bacterii aerobe. Uneori numai Insminrile repetate de mai multe ori permit obinerea culturii pure.
Pe geloza singe glucozat Cl.botulinum formeaz colonii neregulate cu o suprafa neted sau rugoas, inconjurate de o
zon de hemoliz. In profunzimea coloanei de geloz glucozat aceste colonii amintesc fulgi de vat sau boabe de linte.
Pentru identificare cultura pur obinut se insminteaz in rre diile irului "pestri" Cl.botulinum posed caractere
proteolitice: lichifiaz gelatina, serulcoahulat, descompune ovalbumina, segmente de carne.
Majoritatea tulpinilor fermenteaz glucoza, manita, maltoza i alte glucide cu formare de acid i gaz.
4. Diagnosticul de laborator al gangrenei gazoase. Prelevatele. Metodele de diagnostic
Prelevate : serozitate din profunzimea plgii, probe bioptice din leziune, snge, probe necroptice din leziune i organe.
Microscopia direct : Pe sectiunile histopatologice, pe amprentele tisulare sau pe frotiurile serozitii din plag,
C.perfringens apare ca bacili grampozitivi, uneori capsulati, sporulai sau nesporulati.
Diagnostic microbilogic
-Sc epuizeaza cte o ansa din proba pe o placa cu geloza-sange glucozata i una cu geloza-galbenus de ou lactozata. Daca
frotiul direct a atestat prezenta bacteriilor sporulate i numeroase alte bacterii nesporulate, se procedeaza la imbogatirea
clostridiilor dupa cum urmeaza: se insamanteaza restul probei in mai multe tuburi cu bulion Kitt-Tarrozzi regenerat.
Se incalzeste cate un tub in baie de apa la fierberc timp de 5,10, 20 min(termorezistenta sporilor clostridiali este diferit).
Se incubeaza anaerob la 37C si se urmarete zilnic mediile insamantate. C. perfringens, specie care sporuleaza rar e
mbogit prin incubarea anaeroba a tuburilor cu bulion la 45-46C sau prin incubare in bulion cu 100 g neomicina/ml.
-Se urmrete aspectul coloniilor dczvoltate, caracterele hemolizei i, pe placa cu geloza-galbenus de ou lactozata,
producerea de lecitinaza sau lipaza i fermentarea lactozei.
Sc repic colonii sugestive pe gcloza-sange, pentru acumularc de cultur pura.
-Se identifica izolatele pc baza caracterelor:
Microscopice: prezenta, forma i pozitia sporului.
Aspectul coloniilor: colonii S sau R hemolitice. C. perfringens produce hemoliza de tip caldrece: o prima zona de
hemoliza completa aparuta la 37C se inconjoara cu a doua zon, mai putin clar, dupa mentinerea culturii la frigider.
Coloniile unor specii mobile tind s invadeze suprafala mediului (C. septicum, C. sporogenes, dar mai ales C. novyi). In
coloan de geloz moale specia imobil, C. perfringens, formeaz colonii compacte biconvexe (lenticulare), iar speciile
mobile colonii arborescente sau pufoase (cu aspectul pufului de ppdie).
Biochimice. Pe geloz-glbenu de ou se urmrete producerea de lecitinaz i lipaz (opacifiere i, respectiv, strat
perlat in jurul coloniilor). Proteoliza se evidentiaz prin digerarea plasmei, a serului coagulat sau lizarea fragmentelor de
organe (ficat, carne tocat), din bulionul Kitt-Tarrozzi. Insmntarea in lapte degresat i turnesolat permite urmrirea
coagulrii i digestiei cheagului. Activitatea zaharolitic se studiaz prin insmntare in baterie de mediu Hiss regenerat i
incubat sub ulei de parafin steril.
Metoda rapida de depistare a C. perfringens
Se insmnteaz proba de examinat n cte dou tuburi cu urmtoarele trei medii de cultur: bution Kitt-Tarrozzi, lapte
degresat turnesolat, bulion VF cu sulfit. Se inclzeste cte un tub cu fiecare mediu la 80C timp de 20 minute pentru
omorrea formelor vegetative, apoi sc incubeaz toatc tuburile anaerob la 37C. La intervale de 3-6 Ore urmresc
rezultatele sugestive:
crestere de bacili grampozitivi;
innegrire in bulionul cu sulfit;
producere de chcag alveolar in laptele turnesolat.
5. Diagnosticul de laborator al tetanosului: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.
Prelevate: puroi, secreii din plag,pansamente, medicamente.
Microscopia direct : bastonae lungi i subiri cu spori terminali sferici gram pozitivi Cl.tetani
Diagnostic bacteriologic Prelevatele sunt incalzite 30 minute la 80C pentru omorrea florei nesporulate dc asociaie,
apoi sunt mbogtite prin incubare n bulion Kitt-Tarrozzi.
Se epuizcaz proba imbogtit pe dou plci cu geloz-snge Zeissler (agarizat 5% pentru a preveni creterea invaziv a
bacilului tetanic) dintre care una cu ser antitetanic.
Dup incubare anacrob se urmarete apariia coloniilor transparente, cu tendint invaziv, uzual hemolitice.
Pe placa cu ser antitetanic hemoliza este inhibat.
Sc repic cteva colonii tipice in bulion Kitt-Tarrozzi pentru acumulare de cultur pur necesar identificrii.
ldentificarea rapid include studiul:
Caracterelor microscopice: bacili gramvariabiti cu spor sfcric terminal (aspect de bolduri sau bele de tob).
Caracterelor de cultivare: organism anaerob cu cretere invaziv3 pc inediile cu concentratie normal (2%) de agar.
Palogenittii. Se injectcaz, intramuscular, in membrul posterior, cultura plus 5 mg Cl2Ca la 2 oareci dintre care unul
protejat cu ser antitetanic. Dup cca 4 zile oarecele neprotejat moare cu semne de tetanos.
6. Diagnosticul de laborator al difteriei: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.
Material de examinat: peliculele difterice sau secreia membranelor mucoase afectate ale faringelui, nasului, uneori ale
organelor sexuale externe i conjunctivei ochiului, de la purttori - secretul faringian i nazal.
Secretul faringian se recolt pe nemncate sau peste 2 ore dup mas. Nu se recomand folosirea substanelor
dezinfectante i a anti-bioticelor pn la recoltarea materialului. Materialul din faringe i nas este recoltat cu 2 tampoane
sterile, care apoi se introduc n eprubete i se transmit de urgen n laborator. Dac transportarea dureaz mai mult de 3-4
ore, se folosesc tampoane mbibate cu soluie de glicerin de 5% n soluie izotonic de natriu clorid.
Examen bacterioscopic: secretul membranei mucoase se recolteaz cu 2tampoane: unul se foloseste pentru
insminare, altul -prepararea frotiurilor. Frotiu-rile pot fi colorate prin metoda Gram cu metil violet, acetat albastru de
metilen Loeffler, albastru toluidin dup Neisser. In frotiuri preparate din pelicul corinobacteriile au form de bastonase
separate, situate sub un unghi asemntor V, mai rar formeaz aglomera ii gram + care amintesc o grmad de bolduri
imprstiate.
La colorarea cu metil violet acetat i albastru Loeffler se evideniaz granule de volutin intensiv colorate. Bacteriile
pseudodifterice i difteroizii se aranjeaz paralel "in form de palisad", i, de regul, snt lipsite de granulaii de volutin.
Examenul bacteriologic. Insminarea materialului se efectueaz pe unul din mediile elective: n eprubete cu ser
coagulat i in cutii Petri cu geloz-singe si telurit, geloz-ser cu cistin i telurit (Tinsdale-Sadkova), mediul cu hinozol
Bucin.
Insmnarea materialului este efectuat cu un tampon prin friciune la suprafaa mediului.
Pe serul coagulat corinebacteriile difterice cresc naintea altor mi/o, formind colonii mici separate (cretere agrenat).
Peste 8-12 ore de incubare se pregtesc frotiuri, n caz de rezultat negativ examenul microscopic se repet peste 18-24
ore. Dac corinebacteriile difterice nu sint depistate, insminrile se menin in termostat 48 ore, dup ce se poate formula
un rspuns negativ.
La depistarea corinebacteriilor tipice se izoleaz cultura pur, care se identific dup caracterele fermentative si toxigene.
Dup 24-48 ore se studiaz coloniile n cutii. Pe mediile cu telurit de kaliu corinebacteriile difterice de tipul gravis
formeaz colonii mari de culoare neagr-surie, plate, rugoase, cu striaii radiale si margini festonate, cu aspect de
margarete; coloniile de tip mitis - mici, bomba-te, lucioase, negre, cu suprafaa neted i margini regulate. Difteroizii
cresc formnd colonii netede, bombate de culoare surie sau cafenie. Bacteriile pseudodifterice formeaz colonii mici,
uscate, mucoase, de o culoare surie.
Pe mediul Tinsdale-Sadkova coloniile din corinebacteriile difterice sint inconjurate de o aureol cafenie nchis, pe
mediul Bucin sint de culoare albastr, difteroizii pe acest mediu formeaz colonii incolore, iar bacteriile pseudodifterice colonii de o culoare albastr-deschis.
Pentru cptarea culturii pure i determinarea toxigenezei coloniile suspecte se microscopeaz i se rensmneaz pe
mediul cu ser cutii cu geloz-peptonat-fosfat. Culturile pure se nsmneaz n mediile irului "pestri" - (glucoz,
zaharoz, amidon), mediul cu cis-tein - proba la cistinaz (Pizu), mediul cu uree (proba la ureaz).
Examenul biologic se efectueaz pentru determinarea toxigenezei culturilor izolate in vito
Metoda intradermic Se pregtete o suspensie din cultura cercetat de 100-200 mln i se administreaz intradermic cte
0,2 ml de fiecare sus-pensie la doi cobai pregtii
Dup. 4 ore cobaiului de control infectat i se administreaz intraperitoneal 100 UJ ser antitoxic difteric. Dac cultura este
toxigen, la cobaiul experimentat n locul inoculrii materialului apare hiperemie, edem, apoi necroz. Rezultatele finale
se nregistreaz dup 72 ore.
7. Diagnosticul de laborator al tusei convulsive: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.
Prelevate ct timp pacienii sunt contagioi (primele 3-4 saptmni de boat) se prelev mucozit ile nazofaringiene cu
un tampon pernazal. Sputa, picaturile Flugge prelevate pe placa tuita, sunt mai puin satisfacatoare.
Dat fiind marca sensibilitate a B.pertussis la desicare, exsudatul nazofaringian il prelevam pe tampon imbibat cu mediul
de transport Kuzneov (soluie de tampon fosfat, cu pH 7,0, cu 0,5% agar-agar i 0,2% carbune de lemn activat). Pentru
transport, tamponul imersat in mediul Kuzneov permite supravieuirea bordetelelor pana la 5-6 ore.
Microscopia directa pe frotiuri din mucozitile nazofaringiene sau sputa colorate cu ser imun fluorescent anti-pertussis
i anti-parapertussis permite depistarea i identificarea rapid a speciilor respective.
Examen bacteriologic
-Se cpuizeaza tamponul cu exsudat nazofaringian sau sputa pe mediul Bordet-Gengou sau geloza-cazeina-snge-carbune
activat, care contin 4-6 Ul penicilina pcntru inhibilia bactcriilor gram pozitive de contaminare, cu incubare la 37C, in
atmosfera umeda, timp dc 7 zile.
-Se urmarestc zilnic aparitia coloniilor caracteristice. Coloniile de Bordetella sunt bombate, perlate cu aspectul picturi r
de mcrcur, cu hemoliza fr linnte, precise.
B. pertussis crete cel mai lent, abia du 3z ile, cu colonii mici.
B. parapertussis creste in 1-2 zile i formeaza colonii mai mari.
Coloniile dc B. broncluseptica apar a doua sunt cele mai mari.
Se repic 3-15 colonii tipice sau suspecte, pentru a se obine cultura stock pc pant n vederea identificarii.
-Se identifica izolatele pe baza caracterelor:
a) Microscopice: cocobacili gramnegativi cu sau fra capsul.
B. pertussis B parapertussis sunt imobile. B. bronchiseptica este mobil.
b) Caractere de cultur: La izolarea din organism. B. pertussis nu crete pe mediu cu pepton; celelalte specii cresc,
inclusiv pe mediul Mac Conkey, care conine i srur biliare.
c) Teste biochimice. Caractere de gen: ineria fermentativ.
Caractere diferenialc intre specii: scindarea tirozinei, utilizarea citratului, producerca de ureaza, reducerea nitrailor n
nitrii, producere de catalaz, oxidaza.
8. Diagnosticul de laborator al tuberculozei: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.

Prelevate patologice: sputa, aspirat sau spltur bronica, spltur gastric, exsudate aspirate prin punctia cavitilor
seroase afectate (Pleura, meninge, articulaii), puroi din abcese reci, probe biopsice, urina, secreie menstrual, materii
fecale. Probele care nu sunt examinate imediat, pot fi conservate la +4C pana a doua zi. Detectarca bacililor tuberculozei
este ameliorata daca se procedeaz la concentrarea lor prin centrifugare timp de 30 minute la 3000-5000 rpm (urina, lichid
cefalorahidian) sau prin ultrafiltrare (lichid cefalorahidian). Pentru centrifugare prelevatele vscoase (ca sputa) sunt in
prealabil omogenizate. Metodele de omogenizare realizeaz i decontaminarea probelor.
Mai frecvent se recurge la omogenizare i decontaminare prin tratarea probelor cu soluie 4% de NaOH la 37C, cu
agitare repetata timp de 30 minute, urmat de neutralizare cu solutie 10% de HCI.
Aceasta tehnica omoar bacteriile neacidorezistente de contaminare care au cretere rapid i ar invada mediul, facand
imposibil izolarea micobacteriilor cu cretere lent sau foarte lent.
Examenul bacterioscopic.
Sputa se toarn n cutia Petri, care se pune pe suprafaa ntunecat a mesei, se aleg globule compacte de puroi, care se
fricioneaz. ntr-un strat subire Intre dou lame. Lichidul cefalorahidian se pstreaz la rece. Peste 18-24 ore n el se
formeaz o pelicul fin de fibrin, care conine micobacterii tuberculoase i elemente celulare. Aceast pelicul se aplic
pe lam.
Urina se centrifugheaz atent i din sediment se pregtesc frotiuri.
Frotiurile se coloreaz prin metoda Ziehl -Neelsen. Micobacteriile tuberculoase colorate n rou-aprins (rubiniu) prezint
nite bastonae alungite, subiri, puin Incovoiate sau scurte i drepte; uneori n ele se observ granulaii.
Examenul bacteriologic La materialul de cercetat se adaug un,volum dublu de acid sulfuric de 6%, care inactiveaz
mi/o acidosensibile, i se agit 10 min. Amestecul materialului cu acid sulfuric se centrifugheaz eprubet steril, lichidul
se vars, sedimentul se neutralizeaz adugnd 1-2 picturi NaOH de 3% sau se spal de cteva ori cu soluie izotonic de
natriu clorid i se insmineaz. Materiile fecale sint prelucrate cu soluie NaOH 4%, amestecul se introduce n termostat
pentru 3 ore, se centrifugheaz, sedimentul se neutralizeaz cu acid clorhidric i dup aceea se insmineaz pe medii
speciale.
-Probele decontaminate le nsmntm pe panta mediilor solide cum sunt: Lowenstein-Jensen, Popescu, Finn, care,prin
compoziia lor complex asigur creterea micobacteriilor i inhib flora de asociaie eventual rmasa dup
decontaminare.
Culturile, in tuburi ermetic Inchise, sunt incubate difereniat la temperaturi Intre 22 i 42C cu urmrire sptmnal
timp de dou luni.
-Citirea culturilor : Coloniile de M. tuberculosts apar dupa 2-3 saptamni de incubare la 37C, sunt rugoase, mamelonate,
alb-bej i cresc progresiv in volum -(cretere eugonic) pna iau aspect conopidiform. Sunt greu emulsionabile. M. bovis
crete mai lent (dup 4 saptamni) i formeaza colonii mici (cretere disgonic) albe, S, uor emulsionabile.
-Identificarea speciilor dup caractere
a> Aspectul coloniilor Si pigmentogeneza
b> Temperatura de incubare Si viteza creterit. la
c) Activitatea biochtmic: testul catalazei: bacilii tuberculozei produc o catalaz termosensibil (inactivat in 30 de
minutc la 68C), micobacteriile atipice produc o catalaz termorezistent; sinteza de niacin (pozitiv la M.
tuberculosis); testele ureazei, arilsulfatazei
d) Patogenitalea experimentala pentru diferite gazdw: cobai, iepure, oarece, psri. tt
e) Spectrul de sensibilitate la antibiotice Si chimioterapice antituberculoase.
Intradermoreacia la tuberculin (reacia Mantoux). Se cerceteaz starea de hipersensibilitate cutanat la tuberculin.
Tuberculina reprezint un filtrat dintr-o cultur bulionic autoclavat de M.tuberculosis.
Pe faa anterioar a antebraului se injecteaz i/dermic 2, 5 sau 10 UI de tuberculin n volum de 0,1 ml. Lectura peste
72 ore. Reacia pozitiv se manifest printr-o induraie i congestie cu diametrul superior sau egal cu 5 mm. Interpretarea
se efectueaz n funcie de contextul clinic
Reacia + indic c subiectul a fost infectat cu micobacterii (primoinfecie), a fost vaccinat cu BCG sau este bolnav de
tuberculoz (n acest caz diametrul depete 10 mm).
Reacia negativ exclude diagnosticul de tuberculoz.
61.
Diagnosticul de laborator al spirochetozelor: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de
diagnostic.
CLASIFICAREA SPIROCHETELOR
Spirochetele Familii : Spirochaetaceae(gen Treponema:pallidum,endemicum,carateum), Leptospiraceae (gen
Leptospira:interrogans,biflexa,parva.) gen.Borrelia
Diagnosticul spirochaetaceae(sifilis):
Prelevate: serozitatea din leziunile primare sau secundare, puncii din ganglioni
limfatici, serul sangvin, LCR .
Recoltarea:Ulceratia formata in locul inocularii spirochetelor se trateaza cu tampon
imbibat in sol izotonica de clorura de natriu.Lichidul colectat se aplica pe lama pt
examinare.
Singele se recolteaza din vena cubitala cu seringa sterila 4-7ml.
Metode de diagnostic
1.Examenul microscopic
-Microscopia pe fond negru.2-3 picaturi e lichid colectat se aplica pe lama portobiect,ce
se acopera cu lamela de acoperire.Se examineaza pe fundal negru.Agentul patogen are
aspect de spirala.
O alta metoda- frotiul se coloreaza dupa R-Giemsa si se examineaza la microscop.In
preparat se observa spirochete roz-pal.
2)RIF este putin accesibila dar evita riscul confundarii T.pallidum cu treponeme
genitale comensale.Se trateaza frotiuri cu conjugat fluorescent al anticorpilor specifici
anti T.pallidum.
3) Diagnostic serologic:- reactia Wassermann se efectueaza pe principiu reactiei de fixare a

complementului. ca antigeni se folosesc :cardiolipina,antigen proteic de grup/specific biotipurilor de
t.palidum.Lipsa hemolizei indica reactia pozitiva-o confirmare serologica a sifilisului.
-Reactia de precipitare :serul bolnavului se inactiveaza la 56 C timp 30 min.la antigen se adauga 0,6 % de
colesterol pt marirea sensibilitatii reactiei.
4)reactia de imobilizare a treponemelor:este cea mai specifica.In eprubeta se toarna 1,7 ml
de suspensie de treponema tisulara ,se adauga 0,2 ml de ser cercetat si 0,1 ml de complement
proaspat.Se trece in aerostat eprubeta si se umple cu amestec de gaze si se termostateaza la 37
C.Apoi materialul se examineaza.
Leptospiraceae:
Prelevate: snge, LCR (prima sptmn), urin (din sptmna II de boal), probe necroptice (seciuni histologice renale, hepatice)
Metode de colectarea amterialului:singe-5 ml se recolteaza din vena cubitala cu seringa sterila.Urina-se colecteaza cu ajutorul
cateterului steril in vas steril.LCR- se obtine cu ajutorul unui ac special steril in eprubeta.
Metode de diagnostic
- Examenul microscopic singe- 1-2 ml se amesteca cu 2 ml de citrat de natriu si se exponeaza in decurs de 1 h.Cu pipeta pasteur se
aplica pe lama portobiect ,se acopera cu lamela,si se examineaza la microscop cu fundar negru.
Urina/LCR- se centrifugheaza si sedimentul obtinut se examineaza la microscop .
-Examenul bacteriologic
Probele sunt nsmnate n cte 3-5 tuburi cu mediu de cultur, incubate n aerobioz la 28 grade pn la 1-3 luni. Creasterea se
controleaza la fiecare 5-6 zile.Identificarea se va face n baza caracterelor: -Microscopice -De cultur -De patogenitate -Serologice
(RFC, RAL)
Examenul biologic- inocularea de singe intraperitoneal la cobai. Peste 6-10 zile animalul se imbolnaveste.observatiile se duc timp
de o luna.
-Diagnocticul serologic se efectueaza reactia de microaglutinare (RMA).Serul se dilueaza de la 1;50- 1;1600.In calitate de antigen
se foloseste cultura vie de leptospira crescuta pe mediu lichid .Evidenta rezultatelor se face pe fon intunecat.
62.
Diagnosticul microbiologic al escherichiozelor (medii pentru izolare i unele teste mai
importante pentru identificare).
Pt diagn se examineaza:mase fecale,voma,urina,exsudate purulente,sputa,biopsii,LCR.

Metoda de colectare:mase fecale/ varsatura se aduna in vas steril si se amesteca cu sol izotonica de clorura de natriu.
Medii pt izolare:Endo ,Levin,medii selective- Leifson,Ploskirev;Olkenitkii,
-Microscopia directa:pe frotiu colorat giemsa,
-Izolarea si indentificarea: Etapa 1; se pune prelevatul pathologic pe o placa cu un mediu Endo/Levin.Se incubeaza placile peste
noapte la 37 C.
Et 2: se urmaresc coloniile Et 3:se confirma identitatea izolatelor suspecte si a serovarurilor. Et 4:se analizeaza si se interpreteaza
rezultatele.
-Diagnosticul serologic:exceptional se recurge la autoserodiagnostic prin reactia de aglutinre in tuburi,folosind ca antigen tulpina
izolata de la bolnav.
-Hemocultura este un test calitativ pentru detectarea microorganismelor prezente in sange. Sangele, prelevat in conditii de stricta
asepsie, este insamantat in flaconul de hemocultura a carui compozitie favorizeaza dezvoltarea germenilor aerobi, anaerobi si
microaerofili
63.
Diagnosticul de laborator al dizenteriei: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de
diagnostic.
Prelevate: mase fecale fara contaminare cu urina,se selecteaza fragmente mucopurulentsangvinolente din scaun. Material
necropic,produse alimenatre.
Recoltarea:mase fecale-se recolteaza din 1 zi a imbolnavirii,se ia 3-5 g de mase se spala bine ,dezinfecteaza ,se trec in amestec
glicerinic .colecatarea masei se face cu o ansa dubla de aluminiu ce se introduce in rect.
Material necropic-2-3 fragmente de intestin gros se macereaza cu piulita,se adauga sol izotonica de clorura de natriu.suspensia
obtinuta se insaminteaza .
Metode de diagnostic:
1 Microscopia directa- pe preparat umed intre lama si lamela sau pe frotiu Gram depisteaza reactia inflamatorie.Microscopia pe
preparate colorate imunofluorescent cu seruri antidizenterice permite rapid in 1-2 h diagn.etiologic al dizenteriei bacteriene.
2 izolarea si identificarea:- se epuizeaza probele de scaun pe mediile selective-diferentiale Endo ,ploskirev,Levin,Se insaminteaza in
mediul de imbogatire cu selenit acid de sodium.Se incubeaza mediile peste noapte la 37C.Se urmaresc pe placi coloniile suspecte de
shigella.Identificam cultura pura .Se analizeaza si se interpreteaza rezultatele .
3 Diagnostic serologic-se folosesc reactia de aglutinare,reactia de hemaglutinare indirecta,Elisa. Identificarea se face cu ser
adsorbit.
4 In calitate de metode express se foloseste Microscopia luminiscenta si proba biologica asupra cobailor.
64.
Diagnosticul microbiologic al infeciei cu Salmonella spp. (medii pentru izolare i unele teste
mai importante pentru identificare).
Prelevate:se examineaza singe,mase fecale, urina, continut al duodenului.Medii pt izolare:Olkenitkii din geloza
uscata,Rassel,Ploskirev,geloza bismut-sulfit.
-Microscopia directa
-Izolarea si identificarea- se insaminteaza single prelevat in bullion biliat/peptonat glucozat.Se incubeaza culturile aerob la 37 C si
se examineaza microscopic pe medii Endo,Kliger,Olkenitki.Identificam cultura pura studiind caractrerele microscopice /
biochimice.Se analizeaza ,se interpreteaza rezultatele,se apreciaza agentul etiologic .
-Diagnostic serologic: prin reactia Widel se depisteaza anticorpii anti-O si anti-H,iar prin reactia RHAI anticorpii anti-O.Pentru
depistarea antigenului patogen se cerceteaza serul bolnavului in reactia de aglutinare.ca antigen se folosesc culturi moarte de
salmonela.Singele 2-3 ml se recolteaza din pulpa degetului/vena cubitala in eprubeta sterila si se transporta in laborator si se
termostateaza 20-30 min la rece.
-Bacteriologica- 1 zi se colecteaza si se pregateste materialul.Se insaminteaza pe mediile de diferentiere si de acumulare. 2 zi dupa
18-24 h de incubare ,cutiile insemintate se scot din termostat si se examineaza cu ochiul liber/lupa.Citeva colonii se inseminteaza pe
mediul olkenitkii sau Rassel. 3 zi eprubetele insamintate se scot din termostat si se analizeaaza particularitatile. 4 zi s determina
proprietatile morfologice ,culturale si fermentative ale culturii izolate.
65.
Diagnosticul de laborator al holerei: produsele patologice i recoltarea lor, metodele de
diagnostic.
Prelevate:mase fecale,voma, material necroptic. Pt depistare este indicata prelevarea din scaunul obtinut dupa administrarea unui
purgativ salin saau a aspiratului duodenal. Prelevare,ambalarea si transportul se va face cu maxima atentie pt a nu raspindi infectia.
Recoltarea:mase fecale- 10-20 mg se aduna cu lungurita de metal/lemn/carton si se trec in borcanase de sticla.Sub dop se pune hirtie
de pergament. Sau pot fi colectate masele fecale cu ansa dubla din sirma.
Voma- 10-15 g se aduna cu lingurita metalica sterila si se trec o in borcan cu git larg
Material necroptic- cu o pensa se apuca citeva regiuni ale intestinului si cu foarfece se sectioneaza fragmente.Se introduc in borcan.
-Metoda rapida de diagn:se bazeaza pe microscopie.ce permite depistarea vibrionilor holerici in scaunul apos.Include urmatoarele
tehnici de examinare a prelevatelor:
1 frotiul colorat gram
2 preparatul intre lama si lamella
3 coloratia imunofluorescenta directa
4 reactia de microaglutinare si imobilizare- pe lama portobiect se aplica 2 picaturi de mase fecale .la prima picatura se adauga ser O
,la a 2 picatura se adauga sol izotonica de clorura de natriu.Se amesteca cu pipeta,se acopera cu lamela de acoperire si se examineaza
la microscop.
-izolarea si identificarea:se efect.cu utilizarea mediilor elective de imbogatire si a mediilor selective-diferentiale .Et 1:se
insaminteaza proba de examinat pe apa peptonata alcalina 1:10 si totodata se epuizeaza pe o placa cu mediu diferential-selectiv.Dupa
6 h de incubare apare opalescenta.Apoi se urmareste si se identifica vibrionii .Se citesc rezultatele.
-diagnosticul serologic:are importanta orientativa pt investigarea starii de purtator sanatos.sunr indicate reactia de aglutinare si
reactia anticorpilor vibriocizi
66.
Diagnosticul de laborator al gripei. Prelevatele. Metodele de diagnostic.
Prelevate:exsudat nazofaringian,in caz de deces-fragmente de tesut pulmonary,raclat de pe mucoasa

traheobronsica, singe.
-Diagnosticul rapid:se bazeaza pe depistarea antigenului viral,mai efficient prin imunofluorescenta.Se
utilizeaza Ig fluorescente comerciale.Frotiul amprenta se prelucreaza cu anti-serul imunofluorescent
specific.Prezenta virusului conditioneaza fluorescenta galben-verzuie.
-Rinocitodiagnostic:se preleva amprente de pe mucoasa cornetelor nazale pe lame inguste.Se coloreaza cu
romanovskii si se examineaza la microscop.Se observa epiteliul cilindric schimbat in gripa.
-Elisa: pune in evidenta antigenii specifici de tip.
-Izolarea virusului:se bazeaza pe infectarea embrionului de gaina.Se injecteaza prelevate 0,2 ml n cavitatea
amniotica si alantoidiana la 5 embrioni,care se incubeaza la 37C timp te 3-4 zile.Dupa incubare se racesc 2-4 h
in frigider,apoi se aspira lichidul amniotic cu seringa sau pipeta .Acumularea virusului se testeaza prin
RIHA,RN,RFC.
-Diagnostic serologic:este o metoda retrospective.Se examineaza seruri pereche,primul in faza acuta,alta dupa
10 zile de boala.Se efect.RFC,RIHA,Elisa.In calitate de antigen serveste antigenul gripei.
67.
Diagnosticul de laborator al hepatitei virale B, C, D. Prelevatele. Metodele de diagnostic.
Markerii i semnificaia lor diagnostic.
Diagnosticul virusologic: HBV- 1) la etapa acuta diagnosticul se efectuaeaza pe calea depistarii antigenului
HBs in serul sangvin al bolnavului. 2) determinarea anti-HBs cu ajutorul metodei RFS.Anti- HBs apare in
singe doar dupa 2-4 saptamini de la inceputul bolii. 3) Diagnosticul retrospectiv al hepatitei B se eefctueaza pe
calea determinarii anti HBs in seruri pereche ale singelui bolnavilor in reactie de precipitare in gel.
68.
Diagnosticul de laborator al HIV infeciei. Prelevatele. Metodele de diagnostic.
Prelevate:se examineaza in functie de manifestarea clinica- singe,sperma,LCR,material biopatic.
-Diagnostic serologic:este cel mai accesibil care permite depistarea anticorpilor specifici .Se utilizeaza testul Elisa.se separa
proteinele virale prin electroforeza cu gel,apoi transferarea acestora pe membrane de nitroceluloza,care se trateaza cu serul de
examinat.Complexul anticorp-antigen se developeaza cu ser antiglobulinic marcat cu peroxidaza. Aceasta reactie inlude 2
faze:specifica (formarea complexului antigen-anticorp) si nespecifica ( in aceasta faza complexul specific dintre antigen si anticorp
interactioneaza cu factorii nespecifici ai mediului,in care are loc reactia.)
-Detectarea virusului se face prin RIF,Elisa,ARI
-Reactia de aglutinare reprezinta alipirea si sedimentarea in precipitat a microorganismelor sau a altor celule sub actiunea
anticorpilor in prezenta electrolitului.Pt efectuarea reactie este necesar;anticorp,antigen si solutie izotonica .Poate fi efectuata pe
lamele sau tubmiuri.
-Reactia de imunofluorescenta RIF-in reactie se aplica microscopia fluorescenta .Reactie este bazata pe faptul ca serurile umane la
interactiunea cu antigenii corespunzatri formeaza complex specific fluorescent,care devine vizibil in microscop.metoda nu necesita
izolarea culturii.Rezultatul poate fi obtinut dupa 30 min de la aplicarea pe preparata serului luminiscent.
-Pt izolarea HIV se utilizeaza culture de limfocite T activate cu interleuchina-2 pe culture de cellule T-helperi.Urmarim formarea de
sincitii si moartea rapida a celulelor
69.
Microbiologia i diagnosticul de laboratora al infeciei herpetice. Prelevatele. Metodele de
diagnostic.
Prelevate:se examineaza cotinutul veziculelor,cruste,saliva,LCR,frotiuri din exsudatul veziculelor de pe mucoasa cavitatii bucale sau
organe genital.,singe,probe de creie si maduva spinarii in cazuri letale.
-Diagnostic rapid: frotiuri sau amprente din vezicule se coloreaza Giemsa si se examineaza la microscopia optica.Prezenta celulelor
gigante polinucleate cu incluziuni indica infectia herpetica.Virionii pot fi detectati prin RIF,ELISA.
-Izolarea virusului: cu material de examinat pathologic se infecteaza embrionii de gaina si se incubeaza la 37 C.Se urmareste dupa
48 h .Herpes simplex poate fi izolat si in organismal soriceilor sugari infectati intracerebral sau intraperitoneal.Identificarea virusului
izolat se efectueaza prin RN pe soricei,culture de cellule sau embrioni de gaina cu seruri specific standartizate.
Examenul virusologic : *Izolarea virusului pe animale sensibile, ou embrionat de gin sau culturi celulare * Indicarea virusului:
manifestri clinice la animal, apariia veziculelor pe membrana chorio-alantoica a oului embrionat, ECP specific pe culturile de celule
(celule gigante sincitiale cu incluzii intranucleare) *Identificarea virusului cu ajutorul serurilor imune specifice (RN, RIF, ELISA)
-Diagnosticul serologic:Se urmareste cresterea cel putin 4 ori a titrului de anticorpi prin axaminarea serurilor pereche in RN si RFC..
-Tehnicile citologice sunt deosebit de rapide pt stabilirea diagnosticului etiologic ,utilizind material biologic din leziunile
ulcerative .Astfel cu ajutorul coloratiilor speciale,pot fi evidentiate celulele gigante precum si incluziunile intranucleare.
70.
Microbiologia i diagnosticul de laboratora al infeciilor provocate de enterovirusuri.
Prelevatele. Metodele de diagnostic.
Enterovirusurile: virusuri acid-rezistente ce ptrund pe cale digestiv, replicndu-se cel mai bine n condiii de pH sczut i la 37.
Clasificare: de interes pentru patologia umana sunt:
Enterovirusurile Rhinovirusurile Heparnavirus: gen separat pentru virusul hepatitei A (VHA).
Diagnosticul infeciilor determinate de enterovirusuri.
Cultivarea este cea mai util metod de diagnostic
Produse patologice:
LCR pentru diagnosticul meningitei (dar nu i pentru diagnosticul poliomielitei);
materii fecale sau tampon rectal ;
exsudat faringian;
-deoarece eliminarea de virus este intermitent se prefer recoltarea a cel puin 2 probe, 2 zile consecutiv, ct mai precoce n timpul
bolii (de preferat n primele 5 zile de boal);
-post-mortem se recolteaz probe ct mai precoce.
-Teste serologice: nu au valoare foarte mare n diagnosticul infeciilor cu enterovirusuri.Se examineaza seruri perechi:primul obtinut
la debutul bolii si al 2 peste 3-4 saptamini.
Se pot utiliza
RFC pentru antigene specifice de grup
Reacia de neutralizare
RIH
-Izolarea virusului :se face in culturi de cellule din rinichi de maimute,embrion uman,pe cellule Hela.Prezenta virusului de urmareste
dupa proba culorii si efectul citopatic .Identificarea se face prin RN pe culturi de cellule ,utilizind seruri standart specific de serovar.
71. Tehnica recoltrii probelor de ap din robinet. Determinarea NTG, indecelui

coli i titrului coli. Normativele.
Probele de ap se recolteaz n flacoane sterile cu dop.
Apa de robinet se recolteaz n volum de 500 ml. n prealabil orificiul robinetului se flambeaz cu un tampon de
vat mbibat cu alcool, apoi se deschide complet i se las s curg apa timp de 10 min. Se deschide flaconul, se
fixeaz sub jetul de ap i se umple pn la aproximativ 1 cm sub dop. Flaconul se astup cu dopul, peste care se
pune un capac de hrtie. n fia de nsoire se indic locul recoltrii, data (ora, ziua, luna, anul), scopul analizei i
numele persoanei care a prelevat proba
Transportarea apei se efectueaz n frigidere portative la temperatura de 1-2 grade C. Analiza probelor trebuie
efectuat n cel mult 2 ore de la prelevare (sau 6 ore cu pstrarea probei n frigider).
In raport cu prevederile standardelor de stat, apa de robinet urmeaza sa contina cel mult 100
microorganisme\ml, indecele coli sa fie de cel mult 3 si titrul coli mai mare de 333.
Determinarea bacteriilor din grupul coli(bacteriilor coliforme)
Acest grup include reprezentani ai familiei Enterobacteriaceae din genurile Escherichia, Klebsiella,
Citrobacter, Enterobacter, etc.
Reprezint bastonae G-, asporogene, care fermenteaz glucoza i lactoza pn la acid i gaz (la 37 C timp de
24 ore). Aceste mi/o ptrund n mediul ambiant, inclusiv n ap, cu masele fecale ale omului i animalelor, de
aceea depistarea lor indic o poluare fecal a mediului i pericolul unor infecii intestinale.
Determinarea bacteriilor coliforme se realizeaz prin 2 metode:
Metoda membranelor filtrante
Metoda titrrii (fermentrii)
Metoda membranelor filtrante

Se bazeaz pe capacitatea membranelor filtrante de a reine bacteriile din apa de examinat cu izolarea lor pe
medii de cultur i identificarea lor.
Se utilizeaz membrane filtrante din nitroceluloz nr 2 i 3. Ele se fierb n prealabil timp de 10 min n ap
distilat. Filtrarea se efectueaz n filtrul Seitz cu utilizarea a 2-3 membrane. Apa din apeduct se filtreaz n
volum de 333 ml, iar din fntni, izvoare 100 ml. Membranele se scot cu pensa steril i se aplic pe mediul
Endo cu suprafaa pe care se afl bacteriile n sus. Cutiile se ncubeaz la 37 C timp de 24 ore.
Bacteriile din grupul coli vor forma colonii tipice roii cu luciu metallic. Pentru confirmare se pregtesc
frotiuri, colorate Gram i se monteaz testul oxidazei (Gram-, oxidaza-)
Aceast metod permite determinarea indicelui coli cantitatea de bacterii din grupul coli care se conine n 1 l
de ap. Pentru determinarea indicelui coli numrul de colonii tipice se nmulete cu 1000 i se mparte la
volumul de ap filtrat (ex.: 6x1000:333 =18).
Titrul coli reprezint volumul minim de ap n care se conine o singur bacterie coliform
Metoda titrrii
Prin aceast metod are loc iniial mbogirea coliformilor m medii cu glucoz, izolarea lor pe mediul Endo i
identificarea culturilor pure izolate. Apa potabil se nsmneaz n volum de 333 ml: 3 volume cte 100 ml, 3
cte 10 ml i 3 cte 1 ml. Se incubeaz la 37 C timp de 24 ore. Din tuburile cu cretere (turbiditate, acid i gaz)
se repic pe cutii cu mediul Endo. La etapa urmtoare creterea coloniilor lactoza+, constituite din bastonae G-,
oxidaza-, permite formularea unui rspuns pozitiv. Pentru determinarea coli-indicelui i coli-titrului se consult
tabele speciale.
Din grupul coliformilor se difereniaz coliformii fecali (bacterii coli-fecale), capabili s fermenteze lactoza cu
producere de acid i gaz la temperatura de 44,5 C n 24 ore. Prezena lor indic o poluare fecal recent.
Indice coli cantitatea de bacterii din grupul coli care se conine n 1 l de ap. Pentru determinarea indicelui coli
numrul de colonii tipice se nmulete cu 1000 i se mparte la volumul de ap filtrat (ex.: 6x1000:333 =18).
Titrul coli reprezint volumul minim de ap n care se conine o singur bacterie coliform
Numrul total de germeni mezofili, NTG (care se dezvolt la 37 0C si respectiv 220C) este un indicator
global care permite aprecierea ncrcrii apei cu flor de diverse origini care sunt responsabile de
transmiterea infeciilor pe calea apei.
Analiza de determinarea a NTG-ului (numar total de germeni se efectueaza la 2

temeperaturi la 37 0C si respectiv 220C) la apa potabila se executa in cadrul laboratoului
propriu conform standardului national SR EN ISO 6222/2004.
Principiul metodei:
Determinarea NTG-ului la apa potabila se efectueaza cu ajutorul sistemului de filtrare
prin membrana folosind drept mediu de cultura agar nutritiv in mediu aerob.
72. Tehnica recoltrii probelor de aer. Determinarea NTG, streptococilor i

stafilococilor. Normativele.
Analiza bactereologica sanitara a aerului permite aprecierea igienica si epidimiologica a mediului aerian, pe baza careia
putem stabili un complex de masuri pentru profilaxia infectiilor aaerogene.
Probele de aer pentru investigaie din ncperi nchise se recolteaz din 5 puncte (n coluri i n centru), la o distan de
0,5 m de la perei i la o nlime de 1,6-1,8 m (n ncperi de locuit) sau la nivelul patului (n saloane de spital).
Recoltarea se efectueaz prin metoda de sedimentare sau de aspiraie
Analiza microbiologica a aerului presupune studierea diversitatii speciilor microbiene precum si cuantificarea
indicatorilor microbiologici.
Aprecierea starii sanitarie a aerului din incaperile inchise se efectueaza pe baza concentratiei indicatorilor microbiologici
ca stafilococii si streptococii alfa si beta hemolitici, precum si nr total de microorganism per m3 de aer. In clinicele
chirurgicale se determina flora potential patogena care cauzeaza deseori infectii nazocomiale (Pseudomonas, Klebsiella,
Protesu)
Normative:
In sala de operatii in saloanele postoperatorii in sectiile de reanimare, in Sali de pansament in sala de nastere concentratia
admisa la 1 m3 de aer de streptococci si stafilococi este 0 . In saloane de spital: stafilococi iarna<52 ; vara <24,
streptococi iarna <36, vara <16
73. Infecia ncruciat n cabinetul de stomatologie i consecinele ei. Sursele i

cile de transmitere a infeciei spre gazda receptiv. Msuri de combatere.
Conceptul de infecie ncruciat n cabinetul de stomatologie presupune vehicularea microorganismelor de la
personalul medical(medic,asistent) spre pacient sau invers dar i vehicularea microbilor de la un pacient la altul prin
instrumente sau obiecte,aer,instalaii sanitare din cabinetul stomatologic i anexele sale:sala de a teptare,grup sanitar.
Eventualele mocroorganisme patogene putnd fi vehiculate.
- Pe cale aerogen-(virusurile gripale i alte virusuri respiratorii)
-
Prin snge(virusul hepatitei B,virusul imunodeficienei umane
Prin saliv-(virusul hepatitei B,virusurile herpetice)
Prin contact direct ntre minile personalului i leziunea mucoasei bucale(treponema pallidum,candida
albicans)
Se pot transmite: varicela, gripa, sida,sifilisul, tuberculoza,hepatita,herpesul,rubeola,rujeola etc.

Pentru prevenirea vehicularii microorganismelor e necesar de respectat regulile de asepsie si antisepsie. (Medicul trbuie
sa fie echipat cu costum chirurgical, manusi, masca, boneta, ecran sau ochelari, Instrumentele -sterilizate si suprafetele
-dezinfectate dupa fiecare pacient.)
Msuri de combatere a infeciei ncruciate n cabinetul stomatologic. (mai detaliat)
-Minile pot fi neutralizate ca surs ,cale de transmitere sau poart de intrare a infeciei , prin:
Unghii tiate scurt,bijuterii ndeprtate n timpul lucrului,splarea cu ap i pun lichid nainte i dup fiecare
pacient(cu peria 10 secunde),uscarea minilor dup splare cu aer cald sau prosoape de unic
folosin,antiseptizarea minilor,portul mnuilor e necesar, sunt observate leziuni ale mucoasei orale,asistentele
trebuie s poarte mnui atunci cnd colecteaz instrumentarul sau materialul dispozabil contaminat cu
snge,saliv,puroi, mnuile se schimb dup fiecare pacient
-protecia feei i cilor respiratorii prin masc de tifon sau cea dispozabil,care trebuie s acopere mentonul i
piramida nazal, trebuie schimbat la 1-2 ore sau odat ce s-a umezit sau murdrit de snge,saliv...
-protejarea ochilor contra leziunilor mecanice i infeciei poate fi realizat prin portul ochelarilor de protec ie sau
cnd e cazul a ochelarilor de vedere, acetia trebuie de decontaminat ct mai des
-protecia prului i a hainelor prin echipament specific compus din halat lung, ncheiat i bonet ce acoper
fruntea i cea mai mare parte din pr. Halatul i boneta pot fi de unic folosin,dar cel mai des sunt confecionate
din bubac i sunt reutilizate, trebuie schimbate la maxim 2 zile, trebuie splate cu ap i detergent , iar apoi trebuie
dezinfectate cu compui de clor
-vaccinarea personalului mpotriva virusului hepatitei B a redus sectaculos prevalena infeciei n rndul acestei
grupe ocupaionale cu risc
-profilaxirea inoculrii acute vizeaz 2 infecii grave, transmise prin snge-infecia cu virusul hepatitei B i infecia
cu virusul imunodificienei umane
Pacienii care sufer de vreo maladie contagioas-sunt programai spre sfritul zilei de lucru , se face curarea,
splarea i sterilizarea corect a instrumentelor, dezinfecia riguroas a piesei de la unit, dezinfecia suprafe elor din
cabinetul stomatologic, dezinfecia aeruluii igienizarea aerului.
74.Dezinfecia i sterilizarea n practica stomatologic. Metodele de sterilizare

utilizate n practica stomatologic.
Dezinfectia- proces fizic sau chimic prin care agentii patogeni sau microorganismele producatoare a diferitor maladii
pot fi distruse.
Sterilizarea- proces prin care toate formele de viata sunt distruse prin actiunea agentilor fizici si chimici.
Dezinfecia i sterilizarea n cabinetul stomatologic trebuie strict respectate, dup fiecare pacient instrumentele cu care
s-a lucrat la el trebuie nlocuite cu altele sterile,toate suprafetele care au fost in contact cu pacientul si medicul se
dezinfecteaza , iar cele dispozabile sunt colectate n pungi din plastic speciale ce vor fi autoclavate.
Dezinfecia unitului se face dupa fiecare pacientcu dezinfectante sub form de spray i prosoape de hrtie, sau se
folosesc dezinfectantele n soluie i burei din voal cu dimensiunile 10*10cm.este preferat hipocloridul de sodiu i
formal contraindicai iodoforii.
Mobilierul cabinetului trebuie dezinfectate zilnic , obligatoriu la sfritul zilei, se folosesc: iodoforii,deriva ii
fenolici,hipocloridul de sodiu
Duumeaua trebuie splat zilnic cu ap cald i detergent, iar n apa de cltire se adaug un dezinfectant.
Pereii acoperii cu vopsea sau var lavabil sunt decontaminai lunar prin splare cu ap i detergeni. Echipamentul
de curenie (glei,burete,lavete) este separat pentru fiecare funcie de destinaie
Dezinfecia aerului se realizeaz cu lmpi germicide, generatoare de radiaii ultraviolete, sau dezinfec ia chimic a
aerului cu sprayuri ce conin hexilresorcinol,acid lactic sau propilenglicol.
Metodele de sterilizare:
Autoclavarea( prin caldura umeda) - pentru instrumentar metalic ,obiecte din bumbac sau cauciuc termorezistent,
instrumentele sunt grupate dup destinaie i mpachetate n cmpuri de bumbac,hrtie,nylon sau folie de aluminiu i
plasate n casolete. Presiunea in autoclav- 1-2 atmosfere, timp de 30 min
Sterilizarea n pupinel (prin caldura uscata)- se folosete pentru sterilizarea instrumentelor metalice n special a
celo confecionate din metale oxidabile. 170grade-60min,160grade-120min,150grade-150min.Instrumentele sunt
ambalate n cutii metalice sau folie de aluminiu.
Sterilizarea prin vapori chimici nesaturai-amestecul de formaldehid,alcool,keton,ap,aceton, nclzite sub
presiune degaj vapori ce acioneaz ca agent de sterilizare. Dispozitivul chemiclav 132 grade 1,5-2 atm,timp 20
min. Se mai practic sterilizarea cu oxid de etilen i cu glutaraldehid.
75. Factorii care controleaz condiia microbiologic a gurii. Succesiunea

microbiotei orale umane. Succesiuni normale i succesiuni disbiotice ale
microbiotei orale.
Factorii ce controleaz condiia microbiologic a gurii.
1. Ptrunderea mi/o n gur
2. Retenia mi/o
-aderena (fimbrii, capsula, polizaharide extracelulare)
-situs-urile protectoare (fosete/fisuri ocluzale, spaii interdentare, s.papilar a limbii, proteze)
3.Eliminarea microorganismelor
- descuamarea continua e epiteliului
- splarea continu prin fluxul salivar,
- masticaia, deglutiia,
- micrile limbii i a prilor moi orale,
- aciunea abraziv a alimentelor.
4. Multiplicarea bacteriilor orale
pH meninut ~ neutralitate (6,7 7,3) prin secretia salivara.
Placa bacterien supragingival - scade pn sub 5,0 - supravieuiesc S. mutans i L.acidophilus,
specii adaptate la oc acid.
Sulcusul gingival - 7,5 8,5 ;
*direct influeneaz sistemele enzimatice
*indirect genereaz molecule n mediu
Potenial de oxido-reducere (Eh) - proporia compuilor oxidai sau redui in cursul reaciilor
enzimatice.
E influenat de prezena O2 molecular - cel mai comun acceptor de electroni.
Bacteriile anaerobe necesit pt cretere un mediu reductor (Eh negativ) n timp ce bacteriile aerobe
au nevoie de un mediu oxidativ(Eh pozitiv).
Nivelul Eh - variaz n funcie de biotop,de la +150 _+540 mV n saliv, pn la 300 mV n sulcusul
gingival
Temperatur: ~ constanta 34 -36C
Creterea t-39C la nivelul pungilor paradontale inflamate poate modifica expresia genelor
bacteriene i eventual, competitivitatea unei anumite specii.
Nutrieni provin din
-sursa exogena: alimentele ingerate
-sursa endogena: saliva, fluid cervicular, celule descuamate, bacteria
Succesiunea microbiotei orale umane. Succesiuni normale i disbiotice.
Succesiuni normale:
Sugarul edentat
Prezint numai suprafee epiteliale i primele specii de colonizare aparin genurilor Streptococcus,
Lactobacillus, Neisseria, Stapyilococcus, Veillonella, Actinomyces, Fusobacterium;
Streptococii - bacterii dominante numeric n primul an de via.
Speciile pionier de streptococ care predomin n prima lun de via sunt: S. Mitis biovar I, S.oralis,
S.salivarius, S.anginosus, S.mitis biovar II i S.sanguinis;
Dupa erupie, pe smal ader i se multiplic bacterii productoare de matrice adeziv.
S.sanguinis, S.mutans i A.viscosus sunt specii de colonizare definitiv din momentul erupiei.
La adolesceni se constat creterea n placa bacterian subgingival a bacililor gram-negativi
anaerobi pigmentogeni i a treponemelor orale.
Succesiuni disbiotice:
Pe msura naintrii n vrst, se acumu-leaz diferii factori care destabilizeaz comunitatea climax
oral i determin apariia unor comuniti microbiene anormale, disbiotice.
Disbiozele legate de diet i obiceiuri alimentare:
Consumul crescut de zaharuri rafinate favorizeaz selecia bacteriilor acidogene i acidurice,
S.mutans i lactobacili, implicate n iniierea bolii carioase
Disbioze ale plcii bacteriene subgingivale :
Bacilii gram-negativi strict anaerobi, bacilii microaerofili din grupul HACEK i treponemele orale
care domin n placa bacterian subgingival in boala paradontal, invadeaz esutul conjunctiv i
determin leziuni att prin mecanism direct(constitueni celulari, toxine, enzime, produi de
metabolism bacterian) ct i indirect.
Disbioze legate de edentaie i protezare:
edentaia se nsoete de scderea numrului de specii anaerobe capabile s antagonizeze levurile;
scderea aprrii antiinfecioase, n special a imunitii celulare duce la apariia candidozelor orale
proteza total perturb mecanismele fiziologice de curire a mucoasei orale i de ndeprtare a
bacteriilor.
76. Placa dentar. Formarea. Colonizarea precoce i succesiuni bacteriene.
Placa Dentara este un depozit format din agregate bacteriene ce adera la suprafetele dentare sau alte suprafete solide din
cavitatea bucala prin intermediul unei matrice .Apare ca un depozit mat,acumulat in special in zona marginii
gingivale,intre spatiile interdentare,fostele ocluzale.Pentru determinarea prezentei placii bacteriene se folosesc revelatori
de placa .Placa veche acumulata pe suprafetele dintilor se calcifica si formeaza tartrul in special pe suprafetele dentae din
zona canalelor salivare majore.Deosebim placa supragingivala si subgingivala..
Formarea PD prevede citeva etape:
-formarea peliculei,
-colonizarea bacteriana precoce,
-succesiunile bacteriene pina la maturizarea placii.
Formarea peliculei: Microorganismele orale ca provatella melaninogenica ,P.oralis,fusobacterium produc neuroamidaze
sub actiunea careia glicoproteinele salivare pierd acidul sialic si precipita.Glicoproteinele insolubilizate se adsorb prin
intermediul ionilor de Ca pe suprafetele dentare ,in urma caror se adsorb si fosfoproteine,sulfoglicopeptide,incit grosimea
peliculei creste de la 100nm pina la 500-1000 nm dupa 48h.
Colonizarea si succesiunile: Bacteriile din saliva se adsorb pe pelicula glicoproteica in formare.Primii adera la pelicula
streptococii orali, si cocii gram negative ca Neisseria si Moraxella.Apoi in interval de 24 h la ele mai adera
corinebacterii ,bacterii anaerobe Veillonella,Lactobacillus apoi si actinomicete anaerobe.Astfel Are loc sinteza de matrice
polizaharidica , scade potentialul de oxido-reducere ,se modifica Ph si se acumuleaza cataboliti si alti produsi bacterieni
care pregatesc urmatoarea succesiune bacteriana cu maturarea placii ulterior.
Placa matura: Odat formata, placa bacterian, continu s se populeze cu bacterii secundare, s se
maturizeze, astfel nct n final, se concentreaz n structura sa o cantitate foarte mare de germeni. n 30 de
zile de la colonizarea peliculei primare cu microorganisme, apare placa bacterian matur. Ali constitueni ai
plcii bacteriene mature ,pe lng microorganisme sunt: celule epiteliale, leucocite, eritrocite, particule
alimentare i protozoare. Placa matur are capacitatea de a metaboliza foarte rapid zaharoza din aportul
alimentar prin lanul glicolitic, producnd acizi organici care asigur o scdere profund i prelungit a
pH-ului plcii, smalul ncepe s sufere procesul de demineralizare. De aceea, este necesar ndeprtarea
constant a plcii bacteriene de pe structurile orale prin respectarea unor reguli de igien i alimentaie care
ne vor pstra dinii sntoi
77.Tartrul dentar. Consideraii generale.
Tartrul dentar este un depozit organo-mineral aparut in urma calcifierii placii dentare cu ioni
de calciu , ntlnit la dinii, lucrrile dentare fixe i mobile, la implanturile i aparatele
ortodontice intilnite in cavitatea bucala.
Viteza de formare a tartrului dentar reprezinta o caracteristica individulala si este influentata
de o serie de factori favorizanti:
-retentivitati anatomice
-cantitatea si compozitia salivei secreate
-fumatul
-igiena cavitatii orale
Compozitia tartrului dentar:
-substante anorganice- 75-85% (ioni de calciu, fosfat si carbonat, ioni de sodium,
magneziu)
-substante organice 15% ( resturi de microorganisme moarte, cellule epiteliale

descuamate, leucocite)
-apa 8%
Exist dou tipuri de tartru: supragingival i subgingival.
78. Caria dentar. Etiologia i patogenia cariei dentare.Determinarea activitii

cariogenice a salivei.
Caria dentara:este o distructie a tesutului dentar dur cu formarea de cavitati,care poate
progresa spre inflmatie si devitalizarea tesutului pulpar.Rol in declansarea proceselor carioase il
au bacteriile,insa progresarea leziunilor carioase este influentat si de interactiunea factorului
microbian cu factorii care tin de gazda ,de regimul alimentar cu factorul timp.Bacteriile implicate
in initierea cariei sunt acidogene.Etiologic,rol essential in cariogeneza il are streptococii din
grupul mutans,sobrinus.Implicarea altor specii ca Actinomices ,Eubacterum ,Nocardia nu este
sufficient argumentata.Dupa patogeneza,caria este initiate prin demineralizarea acida a
smaltului cauzata de activitatile metabolice ale bacteriilor din placa ce creaza conditii favorabile
pentru dezvoltarea altor bacteria
.Teoria clasica placa-gazda substrat demonstreaza ca dupa o alimentatie bogata in
hidrocarbonati,Ph scade su 5,5 pntru perioade lungi de timp si acizii organic actioneaza asupra
fosfatului de calciu din dinte,demineralizind smaltul.
Cariile dentare de obicei sunt detectate prin sondarea zonelor suspecte.Deseori leziunile
incipiente de pe suprafetele meziale si distal a dintilor laterali sunt evidentiate prin examen
radiografic.Examenul microbiologic al leziunilor carioase nu este efectuat de rutina.astfel de
examene pot fi practicate pentru evaluarea riscului cariogen la un individ sau intr-o anumita
colectivitae sau in cadrul studiilor de cercetare a cariogenezei.
Cunoasterea etiopatogeniei cariei dentare a facut posibila conceperea unor teste de
masurare a receptivitatii individuale la aparitia cariei.Unul din teste este bazat pe
determinarea indicelui de corelatie dintre factorul microbian si incidenta cariei cum ar fi
Determinarea cantitativa a lactobacililor din saliva.
O metoda mai simpla este Cuantificarea nefelometrica a lactobacililor sau Depistarea
cantitativa a S .Mutans in placa dentara. Testul Snyder apreciaza cantitatea de acid
produsa de bacteriile din placa dentara intr-o perioada de 3 zile.
79. Boala parodontal. Etiopatogenia bolilor parodontale. Microorganismele

asociate bolilor parodontale. Diagnosticul de laborator al bolilor parodontale
Bolile parodontale reprezinta cea mai frecventa conditie inflamatorie cu caracter
distructiv din patologia umana.Sunt initiate de microorganismele din placa dentara
dezvoltata pe suprafata dura a dintelui din vecinatatea tesururilor moi parodontale.Pot
fi limitate la gingie(gingivite) sau se extind si la structurile profunde de suport al dintelui
,cu distrugerea ligamentelor parodontale si a osului alveolar(parodontite).Pierderea

tesuturilor de sustinere a dintilor duce in cele din urma la mobilitatea si pierderea lor.
Rolul primordial in producerea afectiunilor parodontale apartine bacteriilor din placa
dentara.Acumularea si componenta placii variaza insa de la un individ la altul.De aceea
cind placa creste sau apar specii microbiene noi ori cele deja existente isi pot manifesta
virulenta,homeostazia placii e tulburata si apare infectia.
Microorganisme asociate bolilor parodontale
-Gingivita ulcero-necrotica acuta prevotella intermedia,spirochete
-Gingivita din sarcinaprevotela intermedia
-Parodontita juvenila localizata Actinobacillus actinomycetemcomitans
-Parodontita juvenila generalizata Porphyromonas gingivalis,Prevotella
intermedia,Actinobacillus actinomycetemcomitans.
-Parodontita prepubertara Frecvent : specii ale genurilor
Fusobacterium,Selenomonas,Wolinella
-Parodontita cronica marginala-Prevotella intermedia,Porphyromonas
gingivalis,Bacteroides forsythus,Prevotella melaninogenica,Fusobacterium nucleatum.
Colonizarea spatiului subgingival presupune aderarea bacteriilor la placa supragingivala
si apoi migrarea in profunzime,e favorizata de traumatisme minore ale gingiei.
Invazia esuturiloe e asigurata prin actiunea unor constituienti
celulari,toxine,enzime,produsi ai metabolismului bacterian .Principalele bacterii asociate
bolilor parodontale sunt bacterii capsulate,fiind astfel la adapost de actiunea
fagocitelor.Atit bacteriile gram-pozitive cit si cele gram-negative anaerobe produc o
serie de metaboliti cu actiune nociva asupra tesutului gazda.
Majoritatea bacteriilor din spatiul subgingival produc hialuronidaza ce are ca efect
cresterea permeabilitatii epiteliului gingival prin largirea spatiilor intercelulare.Specii de
Prevotella si Porphyromonas,Actinobacillus actinomycetemcomitans produc
colagenaze,aminopeptidaze,fosfolipaza A,fosfata acida si alcalina fiind responsabile de
resorbtia osoasa.
Diagnosticul de laborator al bolilor parodontale

Diagnosticul de laborator este necesar:
1.Pentru precizarea etiologiei parodontitelor,in special in formelor intricate de
boala:parodontita prepubertara,parodontita rapid progresiva,a caror manifestare clinica
este apropiata de cea din parodontita juvenila.
2.Pentru precizarea sensibilitatii la antibiotice a principalilor patogeni parodontali
Exista numeroase teste utile pentru precizarea etiologiei unei boli parodontale :
1.Tehnici bazate pe examenul microbiologic al produsului prelevat din punga
parodontala:
-examenul microscopic direct
-cultivarea,izolarea si identificarea bacteriilor din leziune
-identificarea unor enzime specifice in prelevatul subgingival
-teste imunofluorescente
-PCR
2.Tehnici serologice
-ELISA
-Tehnici imunofluorescente
Insa cea mai sigura desi nu cea mai rapida si mai eftina ramine examenul bacteriologice direct al
prelevatului din leziunea parodontala.Pentru examenul direct este prelevat exsudatul din crevasele
gingivale sau punga parodontala.Cind punga parodontala lipseste si exista doar detasarea gingiei
marginale prelevarea se face cu ajutorul conurilor din hirtie. Cnd punga parodontal lipsete i exist doar
detaarea gingiei marginale, prelevarea se face cu ajutorul conurilor din hrtie de filtru sterile, care sunt introduse cu
blndee in sulcusul gingival i sunt meninute cca. 1 minut. Apoi, sunt retrase cu grij din cavitatea oral i introduse n
tubun cu mediu de transport reductor fluid pentru a asigura viabilitatea bacteriilor anaerobe i microaerofile.
Cnd este prezent punga parodontal, este prelevat coninutul acesteia cu ajutorul unei chiurete sterile. Punga chiuretat
este introdus intr-un tub cu mediu de transport reductor.
Pentru examenul bacteriologic, tuburile coninnd probele de la pacieni sunt centrifugate, supernatantul ndeprtat, iar
din sediment sunt efectuate:
11. Preparat umed ntre lam i lamel, ce va fi examinat la microscopul cu fond ntunecat pentru evidenierea
treponemelor orale asociate.
12. Frotiu colorat Gram, pentru examenul cito-bacterioscopic (prezena i intensitatea reaciei inflamatorii, categorii
microscopice prezente n prob).
nsmnarea pe medii de cultur selective pentru bacilii gram-negativi anaerobi
80. Infeciile pulpare. Etiopatogenie. Microorganismele asociate infeciilor

endodontice. Diagnosticul microbiologic al infeciilor pulpare
Infecia pulpei dentare, pulpita, i cea a esuturilor periapicale, abcesul dento-alveolar sau parodontita apical acut, sunt
deseori reunite sub denumirea de infecii endodontice deoarece apariia i evoluia uneia dintre entiti influeneaz
hotrtor dezvoltarea celeilalte afeciuni.
Rolul principal in producerea pulpitelor l au bacteriile anaerobe, dar bacterii facultative au fost, de asemenea, izolate din infecii ale
canalelor radiculare
Microorganismele pot invada pulpa dentar pe 3 ci principale:
13. acces direct;
14. calea pulpo-parodontal;
15. calea sanguin.
-Accesul direct al microbilor n camera pulpar deschis, cel mai frecvent ca

urmare a unei leziuni carioase profunde. Alte condiii care expun pulpa direct
aciunii microorganismelor orale sunt: eroziuni, fisuri ale structurilor dentare i
fracturi ale dintelui, consecutive unui traumatism important. Supravieuirea
pulpei n aceste cazuri este o eventualitate rar.
-Calea pulpo-parodontal de acces al microbilor spre pulpa dentar are dou

vanante: prin
canale laterale i prin foramenul apical. Canalele laterale pot aprea aproape oriunde
pe suprafaa rdcinilor dentare sau in ariile de bifurcare. Colonizarea microbian a
acestor structuri poate fi consecina unei boli parodontale, tratamentului parodontal sau
traumatismelor parodoniului.
Microorganisme din pungi parodontale profunde, din procese inflamatorii de vecintate
sau de pe mucoasa gingival pot migra prin foramenul apical spre esutul pulpar.
-Pe cale sanguin, microorganisme variate ajung la nivelul pulpei ca urmare a
bacteriemiilor. Descrcri tranzitorii ale bacteriilor din diverse esuturi i organe sunt
frecvente dup intervenii chirurgicale, dar i dup periajul dentar brutal, chiuretarea
pungilor parodontale, extracii dentare i chiar dup un prnz bogat n alimente solide,
dure
Diagnosticul:e bazat pe examenul clinic si radiologic precum si pe testarea vitalitatii
pulpei dentare prin aplicarea de stimuli termici,electrici.
81 Abcesele periapicale. Etiopatogenie. Diagnosticul microbiologic al abceselor

periapicale
Abcesele periapicale-manifestri frecvente ale infeciilor orale acute si trebuie considerate urgene
stomatologice.
Aspectele clinice variaz in funcie de severitatea inflamaiei si poziia dintelui afectat, dar durerea i
tumefacia regiunii periapicale sunt semne constante.
Etiopatogenie-Bacteriile izolate din abcesele dento-alveolare fac parte, din microbiota indigen a
cavitii orale. Ele provin fie din pulpa dentar necrozat, prin foramenul apical, fie din pungi
parodontale profunde, prin obturare sau traumatizare accidental.
Rolul major n producerea infeciei u au bacilii gram-negativi deoarece:
-au endotoxin;
-sunt bacterii capsulate ce pot determina fagocitoza;
-elibereaz n mediu enzime precum colagenaze, hialuronidaz, fibrinolizin, cu ajutorul crora
distrug esutul conjunctiv;
-poseda, antigene capabile s induc rspuns imun umoral i celular.
Studii recente au artat c formele severe ale abceselor periapicale sunt determinate mai frecvent de
Porphyromonas endodontalis i Porphyromonas gingivalis, n timp ce din formele benigne au fost izolate
preponderent Prevotella oralis i Prevotella intermedia.
Bacterii anaerobe
Bacterii
aerobe/facultative
Prevotella intermedia
Streptococi
alfa_hemolitici
Prevotella denticola
Streptococi
beta_hemolitici
Prevotella melaninogenica
Enterococi
Porphyromonas endodontalis
Staphylococcus
epidermidis
Porphyromonas gingivalis
Staphylococcus
aureus
Porphyromonas asaccharolytica Neisserii
nepretenioase
Fusobacterium nucleatum
Bacili difteroizi
Fusobacterium mortiferum
Capnocytophaga
spp.
Propionibacterium. spp.
Eikenella coirodens
Actinomyces spp.
Enterobacteriaceae
Bifidobacterium spp.
Eubactenum spp.
Villonella
Peptostreptococcus
Spirochete
Diagnosticul abceselor periapicale
Prelevarea puroiului este fcut prin aspiraie cu ac i sering sterile, dup antiseptizarea regiunii cu
alcool etilic sau alcool izopropilic 50%.
Deoarece principalele bacterii implicate sunt anaerobe, este recomandat sistemul "sering anaerob
Alternativ, produsul poate fi descrcat imediat dup prelevare intr-un mediu de transport reductor.
In laborator, prelevatul este omogenizat i nsmnat pe trei tipuri de medii agarizate: medii
mbogite pentru incubare aerob, medii mbogite pentru bacterii anaerobe i medii selective
pentru barilii gram-negativi anaerobi. Plcile incubate aerob sunt citite dup 2-3 zile, dar cele
incubate anaerob sunt urmrite zilnic timp de 7 zile. Din coloniile izolate sunt practicate teste
biochimice de identificare i antibiograma.
Dei accesibil, diagnosticul microbiologic al infeciilor periapicale nu este efectuat curent deoarece:
16. mediile de cultur i sistemele de identificare a anaerobilor sunt scumpe, conducnd la o
relaie cost-beneficiu negativ;
17. principalii ageni etiologici - Prevotella i Porphyromonas, cultiv lent, astfel c rezultatele
sunt obinute dup 2-3 sptmni, cnd nu mai pot fi utile pacientului investigat.
Din aceste motive, astfel de teste sunt fcute periodic, n cadrul studiilor de supraveghere
epidenmiologic a rezistenei la antibiotice a bacteriilor implicate in infecii periapicale.
82 Prelevatele i principiile diagnosticului microbiologic a stomatitei gonococice.

Agentul cauzal Specii patogene Neisseria gonorrhoeae (gonococul)
Principala investigatie este reprezentata de efectuarea culturilor microbiologice pentru gonococ. Se recolteaza probe de
pe mucoasa orala care vor fi apoi insamantate pe medii speciale, unde se asteapta dezvoltarea coloniilor de gonococ.
Culturile sunt apoi incubate in mediu bogat in dioxid de carbon si se urmareste placa de cultura. Se analizeaza apoi la
microscop si se stabileste daca au crescut sau nu gonococi pe ea(coc Gram-negativ, reniform,
nesporulat,Asezati in diplo, de regula, se gasesc intracelular si extracelular.)
Manifestari orale.
Mucoasa bucala prezinta o rezistenta specifica fata de infectia gonococica. Stomatita gonococica s-a
observat frecvent la persoane, in particular la homosexuali, cu practici aberante (orogenitale). Periooada de
incubatie in cavitatea bucala variaza de la 1 2 zile pana la o saptamana. Pot apare variate tipuri de leziuni
locale si generale. Se descrie o membrana aderenta rugoasa. Aceasta membrana prezinta puncte de
eroziune. Infectia intereseaza gingia, limba si palatul moale si se asociaza cu o halena fetida. Bolnavii cu
infectii prezinta febra de peste 40sC. Se descriu cazuri de faringite gonococice asimptomatice cu toate ca sau izolat gonococi din secretiile faringo-amigdaliene. Manifestarile clinice ale leziunilor locale in stomatita
gonococica pot stimula angina Vincent. Diagnosticul poate fi dificil si se realizeaza prin datele anamnestice.
Diferentierea de neisseriile, ce compun flora normala a cailor respiratorii superioare si cavitatii bucale, se
face prin tehnicile de izolare bacteriana
83 Particularitile diagnosticului de laborator a sifilisului cu localizare primar a

agentului n diverse regiuni a cavitii bucale.
Imposibilitatea cultivrii
T. pallidum in vitro, precum i natura tranzitorie a leziunilor, fac ca i diagnosticul
sfi e i m p o s i b i l d e r e a l i z a t p r i n m e t o d e b a c t e r i o l o g i c e d e r u t i n . D e i
s p i r o c h e t e l e s u n t d e t e c t a b i l e p r i n microscopie, n stadiile primare i secundare,
diagnosticul se bazeaz pe simptomatologia clinic i pe testeleserologice.
Examen microscopic:
Sifilisul primar i secundar pot fi diagnosticate rapid prin examinare la microscopul cufond ntunecat
a produselor proaspete recoltate din leziuni cutanate sau mucoase. Testul este concludent, numaidac
produsul patologic conine spirochete mobile, iar preparatul este examinat de ctre un
microbiolog cuexperien, deoarece spirochetele nu supravieuiesc transportului la
laborator, iar debriurile tisulare pot fi confundate cu spirochetele. Identificarea specific a T.
Pallidum poate fi facut utiliznd anticorpi marcai cu fluorescein. Bacteriile mai pot fi observate i
prin impregnarea argentic a preparatelor histologice efectuate din leziunile cutanate.
Diagnostic serologic:
Reprezint metoda de elecie n diagnosticul sifilisului. Exist 2 tipuri de teste
(specificei nespecifice), ambele cu o sensibilitate mai mic n sifilisul primar,
dar avnd o sensibilitate de 100% n celsecundar.
Testele nespecifice (netreponemice)

Msoar anticorpii Ig G i Ig M (numii i reagine) formai mpotriva lipidelor
eliberate din celulele lezate ncursul primului stadiu al bolii i prezente pe
suprafaa treponemelor. Antigenul utilizat pentru aceste teste estecardiolipinul,
obinut din cordul de bou. Cele mai utilizate teste sunt VDRL (Venereal
Disease
ResearchL a b o r a t o r y ) i R P R ( Ra p i d P l a s m a Re a g i n ) . A m b e l e m s o
a r fl o c u l a re a c a rd i o l i p i n u l u i d e c t re s e r u l pacientului,
sunt rapide i se pozitiveaz precoce. Sunt mai puin specifice i se utilizeaz ca
teste screening, pentru depistarea n mas a cazurilor de sifilis. Numai VDRL
poate fi utilizat pentru testarea LCR la pacieniisuspectai de neurosifilis.Reacii
fals pozitive pot apare n: boli acute febrile, vaccinare recent, sarcin, boli
autoimune sau de colagen,infecii hepatice cu distrucie tisular, pacieni
n vrst.
Testele specifice (treponemice)

Detecteaz anticorpi specifi ci fa de antigenele treponemice. Sunt
utilizate pentru confi rmarea rezultatelor pozitive ale VDRL sau RPR. Testele
specifice pot fi pozitive naintea celor nespecifice, sau pot rmne pozitivela
pacienii cu sifilis teriar, la care testele nespecifice s-au negativat. Antigenele
utilizate n cadrul acestor teste, provin de la spirochetele izolate din leziuni

testiculare ale iepurelui. Cele mai utilizate teste specifice sunt:
-FTA-ABS( Fluorescent treponemal antibody absorbtion) i
-THPA(Treponema pallidum hemagglutination). Este mai simpl din punct de vedere tehnic i mai
uor de interpretat dect FTA-ABS
84 Tehnica de recoltare a prelevatelor n stomatitele bacteriene. Diagnosticul

microbiologic a stomatitelor stafilo-streptococice.
se caracterizeaza prin vezicule mici, care se rup imediat lasand o mica pierdere de substanta superficiala inconjurata de
un guleras. Acestea sunt localizate in diferite zone ale cavitatii bucale, produc usturimi si chiar dureri ale mucoasei
bucale, impiedica alimentatia, sunt insotite de salivatie abundenta, marirea ganglionilor submandibulari si uneori si de
febra.
DIAGNOSTIC SI INVESTIGATII NECESARE
Teste ale sangelui;
Examen de cultura a leziunilor;
Biopsia ulceratiilor: se ia o mica parte de tesut din leziune si se examineaza la microscop
85 Prelevatele i principiile examenului microbiologic n descifrarea etiologic a

stomatitei ulcero-necrotice (fusospirochetozei).
Stomatita ulcero-necrotica este forma cea mai grava produsa de flora bacteriana, pe fondul scaderii puterii de aparare
antiinfectioasa. Apare sub form unor ulceratii (leziuni prin distrugeri si pierderi de substanta) de intindere variabila,
avand fundul murder cenusiu prin necroza produsa la acest nivel, vizibila in diferite zone ale mucoasei bucale,
extreme de dureroase, urat mirositoare, impiedicand complet alimetatia, sunt insotite de salivatie abundenta, marirea
ganglionilor submandibulari, febra ridicata si stare toxico-septica.
86
Teste ale sangelui;
Diagnosticul
de
(mrgritrelului).
laborator
al
candidozei
pseudomembranoase
Stomatita albicans (muguet, margaritarel) este produsa de Candida Albicans. Apare la nou-nascuti , la sugari cu
rezistenta antinfectioasa scazuta, dar si la varste mai mari in cazuri tratate vreme indelungata cu antibiotice sau la
persoanele cu imunitate scazuta, cum ar fi cei cu SIDA. Aspectul stomatitei candidozice este al unor depozite albe, de
intindere diferita, care se observa pe mucoasa interna a obrajilor, limba si uneori pe amigdale. Incomodeaza pe sugar la
supt.
Tratamentul local consta in administrarea, in cavitatea bucala a Glicerinei boraxate 10% la care se adauga pulbere
de
In cazurile cu extindere mai mare si rezistente la tratament, se administreaza Nistatin pe cale orala.
Teste ale sangelui;
Nistatina.
87 Diagnosticul de laborator al infeciilor cauzate de germeni anaerobi endogeni.
Bacili gram negativi anaeorbi

Bacilii gram negativi strict anaerobi sunt cuprini n fam
ilia
Bacteroidaceae
. E i f a c p a r t e d i n f l o r a c o m e n s a l a m u c o a s e i respira
torii, a tractului digestiv i a tractului genital. Din cele 20
deg e n u r i , i m p o r t a n t e n p a t o l o g i a u m a n s u n t g e n u r i l e
Bacteroides
,
Prevotella
,
Prophyromonas
i
Fusobacterium
. S p e c i i l e a c e s t o r g e n u r i sunt implicate n etologia bolii periodontale.
Diagnosticul
infeciilor produse d e b a c i l i i g r a m n e g a t i v i a n a e r o b i const n izolarea i
identificarea lor din produsele patologice. ntructfac parte din flora normal a organismului,
produsele contaminate cuaceast flor nu pot fi prelucrate. Diagnosticul este foarte
laborios,dureaz mult (4 sptmni) i implicaia lor etiologic trebuie
corelatc u r e a l i t i l e c l i n i c e . I z o l a r e a l o r d i n p r o d u s e n o r m a l s t e r i l e a r e
ntotdeauna semnificaie patologic.S e n s i b i l i t a t e a l a a n t i b i o t i c e a b a c i l i l o r g r a m
n e g a t i v i a n a e r o b i e s t e diferit constituind un criteriu de identificare
88 Stabilirea numrului total de lactobacterii din lichidul bucal: metoda clasic i

metodele rapide.
Lactobacilii sunt frecvent izolai din cavitatea bucal, n special din placa dentar i de pe limb.
L. casei, L. rhamnosus, L. fermentam, L acidophilus, L. salivarius, L. plantarum, L. paracasei,
L.gasseri, L oris
18. Reprezint mai puin de 1 % din flora cultivabil a cavitii bucale
19. Prevalena lor crete n cazul pacienilor cu carii
20. Fermenteaz glucoza cu producere de lactat sau lactat i acetat
21. Se folosesc medii selective pentru estimarea numrului de lactobacili din saliv
22. Test pentru aprecierea activitii cariogene a microflorei bucale
o Cu toate ca aceste teste nu sunt foarte relevante, ele ofer informaii n legtur cu dieta pacientului
Nivelul de lactobacili se coreleaz cu aportul de carbohidrai din dieta persoanei
Metoda clasic
Recoltarea lichidului bucal
23. n seara anterioar recoltrii pacientul efectueaz o igien riguroas a cavitii bucale, apoi nu
mai consum alimente, lichide,.
24. Dimineaa, nainte de a mnca, se cltete cavitatea bucal cu ser fiziologic steril
25. Dup un repaus de 30 minute, se cltete din nou gura cu 20 ml ser fiziologic steril timp de 2
min.
o Serul va fi colectat n recipient steril
Tehnica de lucru
Se efectueaz diluii succesive 1/10, 1/100, 1/1000, 1/10000

Din fiecare diluie se nsmneaz 1 ml prin nglobare n 10 ml mediu fluidificat
Se numr coloniile de lactobacili
- Colonii R, cu margini neregulate
- Se numr plcile n care s-au dezvoltat cel puin 20-30 colonii i cel mult 300 colonii
- Se corecteaz cu factorul de diluie i se apreciaz numrul de lactobacili/ml. lichid bucal
Metode rapide
CRT bacteria
26. Se folosete pt determinarea numrului de streptococi mutans i de lactobacili din saliv
27. Utilizeaz medii selective
28. Contraindicaii :
*Tratament antibiotic
Testul se poate utiliza doar dup 2 sptmni de la ncetarea tratamentelor antibiotice
*Utilizarea apei de gur cu efect antibacterian
Testul se poate utiliza dup 12 ore
Metoda de lucru
29. Stimularea secreiei salivare prin mestecarea unor granule de parafin
30. Se recolteaz saliva n recipient steril
31. Se umezesc ambele pri ale mediului cu saliv
* Saliva se va picura cu pipeta pentru a evita zgrierea mediului
32. Se scurge excesul de saliv
33. estul se plaseaz n recipient, se nchide ermetic
34. Se incubeaz la 37 C, 48 ore, n poziie vertical
35. Citirea se face n comparaie cu etalonul
89 Metoda de determinare a efectului antimicrobian al pastelor dentare.

S. mutans, S. sanguis, S. sobrinus i S. mitis - principalii agentii patogeni in timp ce S.
salivarius e un iniiator al infeciei dentare. Aceti streptococi oral prezint riscuri
semnificative pentru sntate n cazul n care intr n fluxul sanguin, prin intermediul rnilor,
infectiilor orale, putnd cauza endocardita.n urma invadatorilor primari, cavitatea oral e
vulnerabil ctre invadatori secundari : C.albicans i Actinomyces, Spirochete i
Lactobacillus.
Agentii patogeni bacterieni au fost identificai i izolai.
Efectul antimicrobian din 11 paste de dini disponibile la nivel local au fost evaluate n
raport cu izolate de agar.
Rezultat:
Infecii Monomicrobial au fost observate n toate cazurile.
Agentii patogeni bacterieni s-au dovedit a fi S.mutans S. salivarius S. Sanguis S. sobrinus S.
mitis.
Colgate Total, Colgate, Anchor White coninnd triclosan au demonstrat efectul
antimicrobian. Fiind sigure pentru esuturile orale moi i dini, prin faptul c nu influeneaz
microflora, nici prin dezvoltarea unor tulpini rezistente i nici prin virarea florei ctre specii
oportuniste
Triclosanul este un agent antibacterian cu spectru larg, activ mpotriva bacteriilor grampozitiv i gram-negativ..
La concentraii bacteriostatice, triclosanul mpiedic aportul de aminoacizi eseniali;
La concentraii bactericide, provoac dezorganizare a membranei citoplasmatice bacteriene,
i pierderea coninutului celular
90 Metoda de determinare a efectului antimicrobian al substanelor antiseptice

utilizate n igiena cavitii orale.
Evaluarea intensitii aciunii antisepticelor i dezinfectantelorse face prin determinarea :

-concentraiei minime inhibitoare (CMI), care determin indicele fenolic.Substanele dezinfectante
prezint o CMI pentru bacteriile sub form planctonic,dar CMI crete foarte mult cnd bacteriile se afl
ncorporate ntr-un biofilm.
-concentraiei minime bactericide (CMB) cantitatea cea mai mic desubstan care asigur un efect
bactericid, stabilit n condiii sandard.
- spectrului de aciune a unei substane antiseptice sau dezinfectante: lista speciilori variantelor bacteriene sensibile la
substana respectiv cu precizarea CMIstabilite n condiii standard. Sunt cuprinse i speciile insensibile
(cu rezistennatural).
Modul de aciune al antisepticelor i dezinfectantelor este:
germicid = oprirea ireversibil a multiplicrii germenilor patogeni.
Omorrea (inactivarea) acestora este dovedit de absena creterii germenilordup nlturarea substanei
germicide i introducerea germenilor n mediifavorabile multiplicrii lor.
n funcie de tipul microorganismului asupra cruia se acioneaz, aciunea este:
- bactericid - se intervine letal asupra bacteriilor;
- sporicid - se intervine letal asupra sporilor
- virucid - se intervine letal asupra virusurilor;
- fungicid - se intervine letal asupra fungilor;
- amoebicid - se intervine letal asupra amoebelor

Microbiologie Raspunsuri Examen

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Microbiologie Raspunsuri Examen

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Microbiologie. Raspunsuri examen stomatologie.

1)Regulile sanitaro-igienice i regimul antiepidemic n laboratoarele microbiologice n raport cu riscul infecios.

Albastru de metilen acetat Neisser

11.Noiune de sterilizare. Obiectul i regimul sterilizrii prin

Pentru controlul functionarii sterilizatorului cu vapori intre obiectele ce se sterilizeaza se

12.Noiune de sterilizare. Obiectul i regimul sterilizrii prin

13. Noiune de sterilizare. Sterilizarea chimic. Obiectele i

14. Mediile de cultur. Cerinele fa de medii. Clasificarea.

15.Mediile de cultur. Cerinele fa de ele. Mediile selective

16.De selectat mediile de cultur i de descris proprietile

17.De demonstrat tehnica de nsmnare pe geloz-snge,

Mediul Hiss-servesc pentru evidentierea enzimelor care scindeaza

18.De demonstrat tehnica de insmnare n bulion

19. De selectat mediile de cultur i de descris etapele de

20.De demonstrat metodele de creare a condiiilor de

Examinarea microscopic (frotiu Gram) a coloniilor suspecte

MC = soluii/substrate solide, asigur nutrienii i condiiile fizico-chimice pt cultivarea bct.

Manifestarea creterii i multiplicrii bacteriilor

Dinamica multiplicrii bacteriilor n culturi

Incubarea pn la formarea monostratului celular (inhibiie de contact)

23.Componentele i tehnica determinrii CMI a antibioticelor prin metoda diluiilor succesive. De

24.Componentele i tehnica determinrii sensibilitii bacteriilor la antibiotice prin metoda

25.Componentele i tehnica determinrii rapide a sensibilitii bacteriilor la antibiotice prin metoda

26.Determinarea concentraiei antibioticelor n umorile organismului (snge, urin etc.). Importana

27.Bacteriofagul. Titrarea bacteriofagului prin metoda Appelman. Importana practic. Aplicarea

28.Bacteriofagul. Metodele de evidenietre a bacteriofagului: Otto, Furt i Fisher. Aplicarea practic a

29.Bacteriofagul. Fagotipajul i fagoidentificarea culturilor bacteriene. Importana practic. Aplicarea

31 Reacia de aglutinare pe lam i n tuburi cu scop de seroidentificare. Ingredientele

32 Reacia de aglutinare pe lam i n tuburi cu scop de serodiagnostic. Ingredientele

33 Reacia de hemagluinare indirect. Ingredientele necesare, tehnica efecturii, citirea

34 Reacia de hemagluinare indirect inversat. Ingredientele necesare, tehnica

Uneori Ag folosite n reacia de aglutinare sunt att de microdispersate c complexul aglutinogen-aglutinin nu se

35 Reaciile de co-aglutinare, latex aglutinare. Ingredientele necesare, tehnica efecturii,

36 Reacia antiglobulinic Coombs. Principiul. Componentele. Tehnica efecturii. Citirea

37 Reaciile de inhibare a hemadsorbiei (RIHAds) i hemaglutinrii (RIHA).

38 Tehnica efecturii, citirea i interpretarea rezultatelor reaciilor de precipitare

39 RIF direct i indirect. Ingredientele necesare, tehnica efecturii, citirea i

40 Reacia de fixare a complementului cu scop de seroidentificare. Ingredientele

44. Reacia de imobilizare a bacteriilor. Componentele. Tehnica reaciei. Citirea i interpretarea.

47.Testul imunoblot. Principiul. Componentele. Tehnica efecturii. Citirea i interpretarea rezultatelor.

Helicaz: protein nonstructural/parte din NS3 cu activitate de helicaz viral;

NS-3: protein nonstructural cu activitate de helicaz viral i proteaz;

NS-4: protein nonstructural;

NS-5: protein nonstructural.

Diagnosticul de laborator al gonoreei: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.

1. Diagnosticul de laborator al antraxului: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.

Sngele n bulion glucozat, repicri zilnice timp de 7 zile pe geloz-snge.

8. Diagnosticul de laborator al tuberculozei: produsele patologice i recoltarea lor; metodele de diagnostic.

3) Diagnostic serologic:- reactia Wassermann se efectueaza pe principiu reactiei de fixare a

Pt diagn se examineaza:mase fecale,voma,urina,exsudate purulente,sputa,biopsii,LCR.

Diagnosticul de laborator al gripei. Prelevatele. Metodele de diagnostic.

Prelevate:exsudat nazofaringian,in caz de deces-fragmente de tesut pulmonary,raclat de pe mucoasa

71. Tehnica recoltrii probelor de ap din robinet. Determinarea NTG, indecelui

Probele de ap se recolteaz n flacoane sterile cu dop.

Determinarea bacteriilor din grupul coli(bacteriilor coliforme)

Determinarea bacteriilor coliforme se realizeaz prin 2 metode:

Metoda membranelor filtrante

Metoda titrrii (fermentrii)

Metoda membranelor filtrante

Analiza de determinarea a NTG-ului (numar total de germeni se efectueaza la 2

72. Tehnica recoltrii probelor de aer. Determinarea NTG, streptococilor i

73. Infecia ncruciat n cabinetul de stomatologie i consecinele ei. Sursele i

Prin snge(virusul hepatitei B,virusul imunodeficienei umane

Prin saliv-(virusul hepatitei B,virusurile herpetice)