LP 17. Identificarea streptococilor hemolitici i a bacilului difteric.

Examenul de laborator al exsudatului faringian

Obiective :
1. Condiia microbiologic a tractului respirator; microbiota indigen a cilor respiratorii
superioare
2. Entitile nosologice i etiopatogenice.
3. Prelevarea exsudatului faringian.
4. Diagnosticul de laborator al anginelor streptococice. Identificarea streptococilor beta
hemolitici.
5. Diagnosticul de laborator al anginei difterice. Identificarea bacilului difteric.
1.Microbiota indigen a cilor aeriene superioare :
- nrile gzduiesc stafilococi i difterimorfi
- orofaringele cuprinde mai mult de 200 de specii diferite cu predominena bacteriilor anaerobe,
dintre facultativii anaerobi cei mai frecveni sunt steptococii viridans;
2.Infeciile tractusului respirator superior se manifest ca : faringite, angine (faringo-amigdalite),
nazofaringite, rinite, sinuzite, otite, laringite i epiglotite.
Etiologia anginelor:
Viral n 70% din cazuri
Bacterian 30%
Streptococcus pyogenes,
Streptococi grup C si G
Corynebacterium diphtheriae,
Arcanobacterium haemolyticum
Neisseria. gonorrhoeae

3.Recoltarea exsudatului faringian:

Materiale necesare: tampon steril, apstor de limb, surs de lumin, masc.

Indicaii: diagnosticul faringitelor streptococice, diagnosticul altor angine bacteriene,

confirmarea suspiciunii de difterie, depistarea portajului S. pyogenes, C. diphtheriae,

Metoda:
- se recolteaz nainte sau dup 3 ore de la ingestia de alimente, ori toaleta gurii.
- se aeaz pacientul cu faa ctre sursa de lumin cu ceafa sprijinit i cu gtul n extensie.
- se stpnete limba cu apstorul steril i n momentul n care pacientul pronun vocala A se terge
viguros peretele posterior al faringelui i amigdalele.
- se urmresc zonele cu ulceraii, depozite purulente pentru a recolta de la acest nivel.

Transportul i conservarea: tamponul faringian trebuie prelucrat n maxim 3 ore de la

prelevare. Dac se temporizeaz prelucrarea este necesar folosirea unui mediu de
transport sau descrcarea pe hrtie de filtru.
Diagnosticul de laborator al anginei streptococice

Uzual, examenul exsudatului faringian vizeaz evidenierea streptococilor beta hemolitici.

Metode rapide: latexaglutinare, ELISA, coaglutinare (pentru prezena S. pyogenes direct n
tamponul faringian)
- nlocuiesc cultura doar cnd rezultatul este pozitiv;
Examenul microscopic nu se face doarece nu aduce informaii utile. S pyogenes are aceleai
caractere microscopice ca i streptococii viridans, ntotdeauna prezeni (microbiota indigen a
orofaringelui).
Cultivarea:
Se descarc tamponul pe geloz snge i se epuizeaz cu ansa n cele 4 cadrane apoi se
secioneaz mediul (in cadranul 3 si 4, cu ansa dupa ce pentru a crea condiii microaerofile.
Incubare: 24 ore la 37 C, cu prelungire pn la 48 ore la temperatura camerei.
Citirea culturilor: se urmrete prezena coloniilor mici, hemolitice (colonii nconjurate de o
zon clar de hemoliz).
Identificarea streptococilor hemolitici (A, C, G)
Caractere de cultur: colonii mici nconjurate de o zon larg de hemoliz clar.
Caractere microscopice: coci gram pozitivi aezai n lanuri
Identificarea (vezi schema):
testul catalazei: negativ pentru genul Streptococcus
testul de sensibilitate la bacitracin i cotrimoxazol: difereniaz prezumptiv streptococii
de grup A de cei de grup non A
latexaglutinarea: identific grupul antigenic Lancefield cu certitudine
Antibiograma :
S. pyogenes i-a pstrat nemodificat sensibilitatea la penicilin. Antibiograma se face i se
comunic doar pentru pacienii cu sensibilizare la penicilin.
Comunicarea rezultatului:
prezent streptococ hemolitic grup A sau non-grup A (C, G):
absent streptococ hemolitic.
Diagnosticul de laborator al anginei difterice

Prelevare:
- 3 tampoane faringiene (TF);
- un tampon nasofaringian.
Examen microscopic
TF 1: frotiu colorat Gram sau cu albastru de metilen alcalin Loffler
Cultivare:
TF 2: nsmnare pe:
- mediu Tinsdale (mediu selectiv) - dup 24 ore coloniile negre se repic pe mediul Loeffler (mediu
electiv pentru bacil difteric) pentru a obtine cultura pur
-geloz snge: - informaii despre calitatea prelevrii
- uneori angina streptococic poate evolua cu false membrane mimnd difteria sau
S. pyogenes poate fi asociat bacilului diteric.
TF 3: nsmnare pe mediul Loeffler (mediu neselectiv care favorizeaz cultivarea
bacilului difteric cu morfologia caracteristic), apoi se descarc pe un mediu de
mbogire O.S.T. (ou ser telurit);
tamponul nasofaringian se descarc pe O.S.T.- dupa 24 ore se repic pe Tinsdale.
Identificarea Corynebacterium diphtheriae

Caractere microscopice:
o bacilli gram pozitivi, fini, cu granulaii intracitoplasmatice, uneori au aspect
mciucat, aezai izolat sau n perechi, sub forma literelor unghiulare, palisade si
litere chinezeti.
o Doar n frotiul din produs patologic sau de pe mediul de cultur Loeffler

Caractere de cultivare:
-geloz nutritiv: cultiv greu sau deloc;
-izolare din produsul patologic: medii cu snge sau ser, cu sau fr ados de telurit de potasiu;
mediul Tinsdale: colonii negre nconjurate de un halou brun;
mediul Loeffler: crete caracteristic n 10 18 ore de la nsmnare - colonii albe,
lucioase, bombate (picturi de spermanet).
Identificarea biochimic:
-diferenierea C. diphtheriae de alte specii Corynebacterium;
Demonstrarea toxigenezei:
1. testul Elek in vitro
2. testul de neutralizare in vivo;
3. toxicitatea pe culturi de celule.
4. PCR

Identificarea streptococilor beta hemolitici

Coci gram pozitivi
Testul catalazei (-)
Cultivare pe geloz snge
Streptococ hemolitic

Testarea sensibilitatii la

Grup A

Grup B

Bacitracina

Sensibil (S)

Rezistent (R)

Biseptol

Rezistent (R)

Rezistent (R)
Test CAMP pozitiv

non-A, non-B
( C,G,F)
Rezistent (R)
Sensibil (S)

n sal se gsesc:
1.Cultura exsudat faringian pe geloz snge: prezent SBH
2. Cultura exsudat faringian pe geloz snge: absent SBH
3. Testul catalazei: apa oxigenat, lame, beioare, pipet, cristalizor
4. Testul de sensibilitate la Bacitracina i Biseptol.
5. Frotiuri cultur streptococ, ulei de cedru, tifon
6. Frotiuri cultur mediu Loeffler bacil difteric