Introducere Gossypium hirsutum (bumbac mexican ). Populaii slbatice de G.

hirsutum se gsesc n vegetaia de coast din Europa Central i de Nord i America de sud au fost, de asemenea, ntlnite pe insule din Indiile de Vest si insule din Pacific. Bumbacul dateaz de la 3500 .Hr. a fost gsit n Peterile Tehuacan n Mexic. Exploratorii spanioli n 1500 au gsit bumbac cultivat n ntreaga cmpie mexican i America Central. Odat cu alte sosirea pri ale spaniolilor lumii i n America, formele anuale de bumbac mexican s-au rspndit n

n ultimii 200 de ani, bumbac comerciale au fost derivate n principal din bumbac mexican. Gossypium arboretum (bumbac pakistaneze-indian ). Nativ la Nord-Vest India i Pakistan. Unele soiuri sunt arbuti nali perene, altele scurte anuale. Unul dintre soiuri perene a fost introdus la Africa de Est i de acum 2000 de ani era crescut de oameni Meroe de Nubia, care sunt considerate a fi primul tesatorii de bumbac n Africa.Aceasta varietate de bumbac a fost extins n alte pri din Africa, inclusiv Kano din Nigeria, care din secolul al noualea a devenit un centru de producie de bumbac. Gossypium herbaceum ( subsaharian bumbac de Africa de Vest, Asia ). Nativ pentru Africa i Arabia n semi-deert i savana unde crete ca un arbust peren.Acesta a fost,

probabil, domesticit n Etiopia sau sudul Arabiei Saudite i sa rspndit n Persia, Afganistan, Turcia, Africa de Nord, Spania, Ucraina, Turkestan i China (cultivarea prima dat n China a fost n aproximativ 600 d.Hr.). Domesticirea a inclus selectarea de soiuri care au crescut ca anuale. Gossypium barbadense ( bumbac America de Sud). Probabil c o dat pe scar larg de-a lungul coastelor Pacific i Oceanul Atlantic din America de Sud, populaii slbatice ale acestei specii sunt acum cunoscute doar de coast din Ecuador. Cele mai vechi textile din bumbac nregistrate din America de Sud sunt de la spturile arheologice n deertul chilian de nord data de la 3600 .Hr. Bumbacul a devenit tot mai larg rspndit n America de Sud i rspndit n
2

Indiile de Vest, unde Columb le-a ntlnit. n aproximativ 1670, plantarea de G. barbadense a nceput n Marea Britanie de Nord, atunci cnd coloniile americane plantat bumbac au fost adui din Barbados. Bumbac este din genul Gossypium care se cultiv pe fiecare continent major i pe Indiile de Vest i insulele din bazinul Pacificului . Exist aproximativ 39 de specii de Gossypium la nivel toat mondial, nativ la tropice i regiunile calde temperate. Patru au fost lumea comercial. domesticite i din acestea, Gossypium hirsutum din Mexic a devenit specia dominant n producia de bumbac n Bumbacul este cultivat n zonele de cldur intens. n climatele

uscate irigarea produce bumbac de inalta calitate. Este una dintre cele mai vechi culturi agricole cultivate,datnd de la aproape 5000 de ani.
Caracteristicile de Gossypium hirsutum L. (bumbac)
Centrul de origine
se crede c provin din Mezo-America (regiune din PeruEcuador-bolivian).

Reproducerea
General autogame, dar poate fi cu polenizare ncruciat, n prezena a polenizatori adecvat insecte (albine). n SUA, specii compatibile includ G. hirsutum, barbadense G., i tomentosum G.

Toxinele
gosipol n mas bumbac.

Alergenicitate

1. Bumbacul Modificat Genetic Linia de bumbac 281-24-236 a fost dezvoltat folosind tehnici de recombinare a ADN-ului pentru a rezista atacului de insect lepidoptere duntoare i a demonstrat rezistenta la viermele de tutun (Heliothis virescens), Spodoptera exigua, Pseudoplusia includens, i vierme de bumbac (Helicoverpa Zea ). Aceast linie produce, n esuturile sale, o versiune sintetic a proteinei insecticide Cry1F, o delta-endotoxin, iniial derivat din Bacillus thuringiensis. Proteinele Cry se leag de site-uri specifice situate n epiteliul intestinul mediu al speciilor de insecte sensibile. n mod obligatoriu, porii specifici cationilor sunt formai astfel c perturba fluxul de ioni n intestinul mediu, provocnd astfel paralizia i moartea. Cry1F este o protein insecticid doar pentru insectele lepidoptere i specificitatea de aciune este direct atribuit n mod obligatoriu, prezenei de site-uri specifice n aceste insect. Celule din epiteliul intestinal al mamiferelor nu dispun de site-uri cu caracter obligatoriu pentru delta-endotoxine de B. thuringiensis, prin urmare, oameni i animale de cresctorie nu sunt sensibile la efectele nocive ale acestor proteine.

2. Metoda Modificarii Linia de bumbac 281-24-236 a fost produs prin metoda mediat de Agrobacterium- de transformare a celulelor de plante din soiul de bumbac "GC510 Germain Acala." Plasmid
3

pAGM281 a fost folosit pentru transformare. Acesta coninea gena Cry1F, care codeaz proteina Cry1F (delta-endotoxin) pentru o lungime complet himeric, care confer rezisten la insecte lepidoptere, un promotor mannopine sintetaza conine patru copii ale octopinei- sintetazei ((4OCS) delta-mas2 ") de la A. tumefaciens tulpina LBA pTi15955 4404, i un Terminator bidirectional (ORF25polyA) din aceeai tulpin A. tumefaciens ca promotor.(Tabel 1) Plasmid pAGM281 coninea, de asemenea, o versiune sintetic a genei Pat, care codeaz proteina pentru tolerana la glufosinat de amoniu, i folosit ca un marker de selecie. Expresia genei Pat a fost sub controlul unui promotor Zea maysubiquitin (UbiAm1). (Tabel 2.)Plasmida derivat din plasmida Rk2, coninea o gena rezistent la eritromicin, pentru a permite selectarea de bacterii care conin pAGM281. Transformari de succes au fost detectate ca cele tolerante la glufosinat de amoniu. Rezisten la insecte lepidoptere, a fost testat prin efectuarea unui biotest folosind discuri de frunze de transformate cu succes. Cu aceste frunze au fost hrnite larvele de viermi de bumbac, o int pentru lepidopterele duntoare. Un eveniment de succes a fost cnd genotipul de elita a fost desemnat o cultur cu o adaptare a larg din sudul Statelor Unite.
Tabel 1 .Rezumatul Elemente genetice introduse

Code Numele
cry1F Cry1F deltaendotoxin (Bacillus thuringiensis var.aizawai)

Tipuri

Promotor, alte

Terminator

Copii

Form de baz

IR

sintetazei mannopine (d mas 2 "), promotor de la pTi15955 patru copii ale sintazei octopin (4OCS), potenator de la pTiAch5

Semnal de 3 " poliadenilare din ORF25 ) (Agrobacterium tumefaciens)

1 funcional ;

Cry1F insecticid i poriuni active nontoxice ale proteinelor Cry1Ab1 i Cry1Ca3. Secven modificate pentru a optime n planta exprimare.

pat

Nfosfinotricin acetiltransfer az (viridochrom ogenes S.)

SM

ubiquitin (Ubi) Z M (Zeamays) promotor i exon prima i intron

3'polyadenylation signal from ORF25 (Agrobacterium tumefaciens)

1 funcional ; 1 parial, nonexprimat;

Alterarea secvenei de codificare pentru expresia optim n celulele plantelor.

Tabel 2. Organism donator Caracteristici

Numele latin
Bacillus thuringiensis var.aizawai Streptomyces viridochromogenes

Gene Patogenitate
cry1F n timp ce insecte int sunt sensibile la doze orale de proteine Bt, nici o dovad a efectelor toxice n laborator mamifere sau psri. pat S. viridochromogenes este omniprezent n sol. Lanuri spori sunt Spirales i suprafaa sporul este spinoase. Masa spori este albastru, verde i invers este pigmeni sale sunt pH-ul sensistive. Acesta prezint activitate antimicrobian foarte uoar, este inhibat de streptomicin, i nu au existat rapoarte de efecte negative asupra oamenilor, animalelor, sau plante.

3. Caracteristicile Modificrii 3.1 .Introducera AND-ului Analiza ADN-ului genomic de la linia 281-24-236 a indicat ncorporarea de exemplare unice de gene Cry1F i pat, mpreun cu secvene lor de reglementare respective. Analiza ulterioar a demonstrat un al doilea ,parial exemplar a genei Pat mpreun cu un al doilea exemplar al promotorului Zm1 Ubi, totui, acest fragment genei Pat nu a fost asociat cu terminator ORF25 Poly A. Nu a fost detectat expresia proteic de la fragmentul de gena. Gena Cry1F este o gena sintetic, o gen optimizat pentru Cry1F, o versiune a lungimeicomplete himeric de Cry1Fa2, originar de la Bacillus thuringiensis. n aceast versiune sintetic, primii 694 aminoacizi sunt din partea toxic a Cry1Fa2; partea rmas este format din secvene C-terminal de la Cry1Ca3 (Bt var aizawai PS81I.), i Cry1Ab1 (Bt var.berliner 1715). Aceste ultime dou fragmente fac parte din poriunea C-terminal al proteinei cristalizate, care este desfcut de proteaze n intestinul lepidopterelor. Greutatea molecular a proteazei a proteinei Cry1F a plantelor expresate este 65kDa. Dup inserarea genei de rezisten la insecte, a fost evaluat stabilitatea acesteea n cadrul i ntre generaii cu ajutorul analizei Southern blot. Prima generaie de plante , generate de backcrosses cu una dintre liniile parentale, a segregat ntr-un raport de 1:1, de plante rezistente i non-rezistente. Descendena rezultat din autopolenizarea plantelor din prima generaie au segregat ntr-un raport de 3:1 de plante rezistente i non-rezistente. Aceste rezultate nu au fost diferite semnificativ de raporturile ateptate dup segregare mendelian i a confirmat motenirea stabil a trsturii dominante unice.

3.2.Expresia Materialului Niveluri de proteina Cry1F i PAT, n esuturile i produsele prelucrate din semine de bumbac au fost cuantificate prin metode pe baza test enzime-linked immunosorbant (ELISA).
5

Probele pentru analiz au fost obinute din studiile de teren la 6 locatii diferite in 2001. Coninuturile medii de proteina Cry1F, pe o baz de substan uscat, au fost 6.46-7.67 ng / mg n frunze, 5.71 ng / mg n flori, 4.02 ng / mg n capsulele, 5.13 ng / mg n semine , i 3.3 ng / mg n seminele de bumbac (baza greutate proaspt). Nivelul mediu al Cry1F n polen a fost sub nivelul de cuantificare (0,09 ng / mg). Concentraia de Cry1F din pleav a fost 0.22 ng / mg, i nu a fost detectat n fin, ulei rafinat sau bumbac. Nivelurile medii de proteina PAT au fost considerabil mai mici dect cele din proteina Cry1F. Nivelurile medii de proteina PAT, pe o baz de substan uscat, au fost 0.21 la 0.43 ng / mg n frunze, 0.22 ng / mg n capsulele, 0.47 ng / mg n seminte, i 0.42 ng / mg n seminele de bumbac (greutate proaspt). Nivelul mediu al Cry1F n polen (0,09 ng / mg) a fost, de asemenea, sub nivelul de cuantificare, i nici nu a fost detectabil n ulei de bumbac rafinat. 4. Consideraii Privind Sigurana Mediului 4.1.Testarea n Cmp Linia de bumbac 281-24-236 fost testat pe teren n Statele Unite, 2000-2002, Puerto Rico n 2000-2001. Aceste studii au fost efectuate pentru a i n evalua performanele

agronomice i de calitate a culturilor, i pentru a determina potenialul de risc la duntori al plantei. Comparaiile au fost fcute ntre linia modificat i una din liniile sale parentale, PSC355. Dei au existat vegetativ, acestea au fost fost observate diferene ateptat pentru a conferi diferene mici, dar semnificative ale parametrilor de cretere au

observate n intervalul de soiuri comerciale. De asemenea,

mici,

dar semnificative ale unor parametrii de reproducere (de i fibre de calitate. Aceste mici diferene nu ar fi de la linia 281-24-236.Susceptibilitatea liniei 281-24-

exemplu,reinerea la sut din capsulele) caracteristicile

236 de bumbac la boli , cum ar fi seminele de putregai, a fost evaluat i determinat similar cu cea a PSC355 liniei parentale. Rezultatele de la aceste studii de teren demonstreaz c creterea economic, de similar cu performan agronomic i convenional. susceptibilitatea la Aceast linie de boala a liniei 281-24-236 este bumbac , prin urmare, nu

cea din bumbac

se ateapt s devin un risc pentru duntorii plantelor, nici n a deveni o gazd mai potrivit pentru bolile plantelor.

4.2.ncruciri Bumbacul (G. hirsutum) este n principal o plant autogam, dar polenul este de asemenea transferate i de ctre insecte, n special bondarii i albinele melifere.Polenul este greu i lipicios i gama natural de trecere este limitat. Au fost observate rate ale ncrucisari de pn la 28% la bumbac fa de alte soiuri cultivate n mod direct cu aceeai sursa de polen n
6

condiii de cmp, atunci cnd polenizatori insectele au fost prezente. Rata de ncrucisari scade rapid proporional cu creterea distanei de la sursa de polen.Rezultatele studiilor de cercetare privind ncrucirile n Statele Unite au artat c micarea polenului scade rapid de la 12 metri de la sursa de polen. Cu toate acestea, cultivatorii de semine de bumbac certificate n Statele Unite trebuie s menin o distan de izolare de 202 de metri ntre cmpuri . n cazul n care linia de bumbac 281-24-236 urmau s fie cultivate n apropierea cu alte soiuri de bumbac, i insectele polenizatoare ar fi prezente i active, gena Cry1F ar putea fi introdus , eventual, n aceste soiuri. n caz de formare de hibrizi, nu ar exista niciun avantaj concurenial conferit orice de descenden hybrid, n absena infestrii speciei de insecte lepidoptere. n Statele Unite, specii genetic compatibile cu 281-24-236 bumbac includ G. hirsutum i G. i G. tomentosum.Incrucisari ntre G. hirsutum

(slbatice sau cultivate), G. barbadense

barbadense este posibil n condiii corespunztoare,cum ar fi prezena de polenizatori. G. thurberi este un alt specie slbatic gsit n Statele Unite, dein genomul AADD), posibilitatea transferului dar este genetic incompatibil cu G.hirsutum . n timp ce G. hirsutum i G .tomentosum sunt compatibile genetic (ambele de gene este puin probabil ca urmare pentru a perioadelor de non-sincron a nflorirei(zi pentru G. hirsutum i timp de noapte G.tomentosum ), i lipsa de polenizatori comuni. apar n sudul Floridei (G.hirsutum), Hawaii (G. tomentosum), Puerto Rico i Insulele G. hirsutum include G. mustelinum n Brazilia, i G. lanceolatum n Mexic. 4.3. Potenialul de Buruieni Gossypium hirsutum cultivat nu este considerat, de obicei, o specie de buruieni n Statele Unite sau alte ri, dar estenscris ca o buruian potenial n sudul Floridei.Dei planta de bumbac este cultivat ca o cultur anual, se comport ca o planta perena n medii de iernat n sudul Floridei, Hawaii, i Puerto Rico. n comparaie cu alte linii de bumbac, linia de bumbac 281-24-236 nu a fost conferit un alt avantaj competitiv dect producerea de proteinei insecticide Cry1F. Nivelurile de expresie a proteinei PAT, la aceast linie de bumbac nu confer toleran la aplicaii erbicide glufosinat de amoniu. Scopul de a introduce genei Pat a fost de a oferi un mecanism de selectare a transformrilor. Nu a fost de ateptat ca linia de bumbac 281-24-236 s devin buruienoas sau invaziv n habitate naturale, ntruct niciuna dintre caracteristicile de reproducere sau de cretere a acestei linii nu au fost modificate n mod substanial. Dei nu s-au observat diferene
7

Populaiile de Gossypium specii slbatice Virgine

SUA. n alte zone de cretere a bumbacului ale lumii, specii care ar putea fi ncruciate cu

neperturbate

condiii climatic adecvate. Bumbac nu tolereaz condiii de frig, limitnd astfel potenialul

semnificative n unele caracteristicile de cretere vegetativ (numr de ramuri

vegetative i

muguri vegetativi) i parametrii de reproducere (procentaj de retenie la capsule), acestea au fost n intervalele normale observate i la soiurile de bumbac convenional. Stare latent de seminte, germinarea, stabilirea plantulelor, nu au fost semnificativ modificate la linia 281-24236, n comparaie cu linia parental. Potenialul de reproducere, n ceea ce privete numrul de semine pe capsul , deasemenea nu se deosebea semnificativ la aceast linie de bumbac. 5. Efectele Adverse Secundare i Non-int

A fost investigat impactul liniei 281-24-236 de bumbac asupra organismelor non-tinta . Au fost efectuate studiile ecologice de toxicitate cu specii reprezentative terestre i acvatice care ar putea fi afectate din neatenie cu Cry1F. Organismelor non-int includ alte insecte din lepidoptere, de exemplu, albinele, gandaci ,buburuze , viespi parazite; artropode din sol, rme, i specii reprezentative terestre i acvatice, cum ar fi oareci, prepeli de Virginia, pstrvul curcubeu i dafnie . Efectele toxicologice au fost determinate prin studii hrninduse organismele non-int. Pstrvul curcubeu i prepelia de Virginia au fost hrnite cu Cry1F, fiind exprimat prin fin din semine de bumbac. Studiile rmase au fost efectuate cu lungimea complet de Cry1F dintr-o su microbien (Pseudomonas fluorescens). Datele au fost furnizate pentru a demonstra echivalena ntre Cry1F vegetal i microbian , n limitele biochimiei si bioactivitatii. Rezultatele acestor studii cu hrnire nu au artat efecte adverse observabile de care ar putea fi atribuite proteinei Cry1F. Proteina Cry1F n linia de bumbac 281-24-236 s-a dovedit a fi eficace mpotriva insectelor lepidoptere- int. Cu toate c nu au fost evaluate direct n cmp, efecte insecticide asupra lepidopterele non-int, cum ar fi Fluturele monarh, nu a fost de ateptat s dea o expresie att de redus a proteinelor Cry1 n polen.Pe baza rezultatelor studiilor dietetice de larve ale fluturelui monarh cu proteina Cry1F, concentraia estimat de Cry1F necesar pentru a reduce creterea larverelor cu 50%, este de 450 de mii de ori mai mare ca concentraia n polen a acestei protein de la linia 281-24-236. Acest lucru, combinat cu volumul redus de polen produs, ar fi un risc foarte mic pentru lepidopterele non-int, cum ar fi Fluturele monarh. n timp ce bumbacul este cea mai mare parte plant autogam, orice polenizare ncruciat ar fi realizat de ctre insecte lepidoptere non-int, precum albinele, care nu sunt afectate de proteine Cry. Pe baza acestor informaii, s-a concluzionat c, n comparaie cu soiurile convenionale de bumbac, cultivarea liniei 281-24-236 nu ar prezenta nici un risc mai mare pentru interaciunea organismelor, cu excepia duntorilor specifici bumbacului, insectele lepidoptere.
8

6. Impactul Asupra Biodiversitii Linia de bumbac 281-24-236 nu au avut caracteristici fenotipice noi care ar fi putut crete i supravieui n nici un habitat negestionat, sau n zone n afara intervalului geografic actual al produciei de bumbac. Avnd n vedere c potenialul de transfer de gene la rudele slbatice n Statele Unite este destul de minim, riscul de a transfera trasatura de rezisten la insecte a speciilor n habitatele negestionate este nesemnificativ.n rile (de exemplu, Brazilia, Mexic), n cazul n care ar putea forma hibrizi cu rudele slbatice de bumbac, transferul sporit la atacul unor insecte lepidoptere. 7. Considerente de Siguran cu Privire la Produsele Alimentare trasaturii rezistenei insectelor n aceste specii slbatice nu ar conferi niciun alt avantaj dect rezisten

Nu a fost de ateptat ca modificarea genetic a liniei 281-24-236 de bumbac s duc la o schimbare n consumul de produse de bumbac. Seminele, uleiul i fraciunea de fibre de bumbac de la aceast linie nu au avut caracteristici noi care ar modifica consumul.Acest lucru a fost confirmat prin compararea nivelurilor de acizi grai n linie 281-24-236 debumbac i soiuri convenionale, non-MG. Numai uleiul rafinat de semine de bumbac i celuloz din fibrele prelucrate de bumbac sunt consumate de oameni. n uleiul de bumbac de la linia 281-24-236 nu s-au detectat proteine . Fibrele de bumbac prelucrate sunt compuse din celuloz pur (> 99%), iar fiind tratate cu cldur i un solvent ar fi de ateptat ndeprtarea i distrugerea a orice reziduu de proteine.

8. Date Privind Compoziia Nutriional Componentele nutriionale ale liniei 281-24-236 de bumbac, boabe, fin, pleav i uleiul au fost comparate cu cele de control non-transgenice (un segregat nul rezult din mai multe backcrosses de 281-24-236 cu ambele linii parentale ). Analiza seminelor de bumbac a artat c acestea includ protein brut, celuloz brut, cenu ,grsime, ap ,minerale, aminoacizi, acizi grai i anti-nutrieni. Analiza uleiului menioneaz c include grsime brut, protein brut, ap,acizi grai, anti-nutrienti si anti-oxidanti. Compoziia uleiului de bumbac, de asemenea, a fost comparat cu cel non-transgenice i cel comerciale de bumbac. Nivelurile anti9

nutrienti din 281-24-236 au fost similare cu cele non-transgenice i fa de valorile publicate n literatura de specialitate. 9. Toxicitatea i Alergenitatea Potenialul de toxicitate i alergenitatea al proteinelor Cry1F i PAT n linia 281-24-236 a fost evaluat de urmtoarele date i informaii: rezultatele cercetrii asemnrii secvenelor de aminoacizi ntre proteinele Cry1F i PAT i toxinele i alergeni cunoscui; analiz pentru

glicozilare posibil a Cry1F, studii privind digestibilitate in vitro folosind fluid gastric simulat; evaluarea stabilitii termice; studiile de toxicitate oral i acut cu oareci. Att proteina Cry1F ct i cea PAT nu au prezentat secvena asemntoare de aminoacid la alergenii cunoscui. Ambele aceste proteine au fost degradate n termen de un minut de expunere la fluid gastric simulate. Proteina Cry1F nu a mai fost biologic activ dup expunerea la temperaturi mai mari de 75 C. Niveluri de toxine natural din bumbac (de exemplu, gossypol) nu au fost semnificativ diferite n 281-24-236 bumbac, comparativ cu control non-transgenice i soiuri convenionale de bumbac. Rezultatele studiilor privind hrnirea mamiferelor, psrilor, nevertebratelor din sol, organismele acvatice, i insectele non-int nu au artat efecte adverse observabile. n general, pentru majoritatea speciilor testate, a existat cel puin o marj de siguran de 5 ori ntre cel mai mic efect observat i cea mai mare concentraie estimat la care aceste specii ar putea fi expuse. Proteine Cry n formulele biopesticide Bt au o lung istorie de utilizare n condiii de siguran, cu nici o dovad de efecte adverse, n afar de activitatea de insecticid fa de insecte lepidoptere duntoare. Proteina Cry1F, de asemenea, a fost exprimat la niveluri foarte sczute n diferite esuturi ale liniei 281-24-236 de bumbac. Pe baza acestor informaii, precum i rezultatele studiilor diferite de siguran i investigaiile omolage de secvene, a fost fcut o constatare c linia 281-24-236 de bumbac nu a demonstrat potenial de toxicitate sau alergenitate, comparativ cu soiuri convenionale de bumbac.

10

Referine:
1. Referin USDA-APHIS Nr 95 - 256-01P. 2. Willrichsiebert,M; Babock,JM; Nolting,S; Santos,AC; Adamczyk,JJ; Neese,PA; King,JE; Jenkins,J.; McCarty,J.; Lorenz,G.M.; Fromme,DD; Lassiter,RB (2008). Efficacy of Cry1F insecticidal protein in maize and cotton for control of fall armywork (Lepidoptera: noctuidae). Florida Entomologist91(4): 555-565. 3. Betz, F.S., Hammond, B.G. & Fuchs, R.L. (2000). Safety and advantages of Bacillus thuringiensis-protected plants to control insect pests. Regulatory Toxicology 32, 156173. 4. US Food and Drug Administration (1994). Secondary Food Additives Permitted in Food for Human Consumption; Food Additives Permitted in Feed and Drinking Water of Animals; Aminoglycoside 3'-Phosphotransferase II; Final Rule. Federal

Register, 59:26700-26711. 5. US Food and Drug Administration (1994). Secondary Food Additives Permitted in Food for Human Consumption; Food Additives Permitted in Feed and Drinking Water of Animals; Aminoglycoside 3'-Phosphotransferase II; Final Rule. Federal

Register, 59:26700-26711. 6. Compositional Analysis Hamilton, K.A., Pyla, P.D., Breeze, M., Olson, T., Li, M., Robinson, E., Gallagher, S.P., Sorbet, R. and Chen, Y. (2004). Bollgard II cotton: compositional analysis and feeding studies of cottonseed from insect-protected cotton (Gossypium hirsutum L.) producing the Cry1Ac and Cry2Ab2 proteins. J Agric Food Chem. 52(23):6969-6976.

11