Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure LP10

Diagnosticul hepatitelor virale

- Hepatita viral A Produs patologic snge, saliv - pentru evidenierea anticorpilor materiile fecale, biopsie din ficat pentru evidenierea virusului

Examen direct nu se practic de rutin evidenierea virusului din materii fecale prin ME evidenierea antigenelor virale Izolare nu se practic de rutin dei virusul poate crete pe linii celulare, nu produce efect citopatic din biopsie hepatic prin reacii imunohistochimice din materii fecale prin reacii antigen-anticorp - greu evideniabile la nceputul bolii

Diagnostic serologic Dinamica apariiei anticorpilor: o IgM: apar odat cu primele simptome de boal ajung la titru maxim n 1-3 sptmni, dispar n 3-6 luni o IgG: apar dup aproximativ o lun de la infecie, ajung la titru maxim n 3-6 luni, apoi persist la un nivel detectabil toat viaa o anticorpii se detecteaz prin ELISA

-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP10

- Hepatita viral B Produs patologic snge pentru detectarea markerilor virali (antigene i anticorpi) esut hepatic detectarea antigenelor virale virusul se mai elimin prin secreii genitale, saliv. Izolare virusul nu este cultivabil Diagnostic Markeri virali detectabili din snge prin ELISA: o Ag HBs, Ac anti HBs o Ag HBe, Ac anti HBe o Ag HBx, Ac anti HBx (cercetare) o Ac anti HBc o din snge se mai poate evidenia ADN-ul viral prin PCR, polimeraza (cercetare). Markeri virali detectabili din biopsie hepatic prin imunohistochimie o Ag HBs o Ag HBc o AgHBx (markerul cronicizrii i al malignizrii - cercetare) o ADN viral Dinamica apariiei markerilor virali n snge: 1. AgHBs: se evideniaz primul, apare n perioada de incubaie (la 1-2 sptmni de la infecie), scade n convalescen; dispare odat cu apariia anticorpilor antiHBs; detectarea lui dup 6 luni de la infecie semnific cronicizare. 2. AgHBe: se evideniaz nc din perioada de incubaie, imediat dup apariia AgHBs; dispare n convalescen odat cu apariia anticorpilor antiHBe; detectarea lui indic infectivitatea persoanei.
-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP10

3. Anticorpi antiHBc primii anticorpi produi, apar odat cu simptomele bolii i persist mai muli ani; se determin IgM sau Ig totale (IgG+IgM); detectarea IgM indic replicare viral.

4. Anticorpi antiHBe apar dup anticorpii antiHBc

5. Anticorpi antiHBs apar la cteva luni sau ani de la infecie, dup anticorpi antiHBe; detectarea lor indic instalarea imunitii.

Ac anti HBc (IgG) AgHBs AgHBe Ac anti HBs

Ac anti HBe

Ac anti HBc (IgM) 2-3 spt 3-6 luni > 20 ani

Profiluri serologice posibile n hepatita viral B Prezena AgHBe = infectivitate o AgHBs + IgM antiHBc = hepatit acut o AgHBs + Ig totale antiHBc (> 6 luni) = infecie persistent o AgHBs + Ig totale antiHBc + AgHBe (> 6 luni) = hepatit cronic Prezena Ac anti HBs = vindecare o Ac anti HBs + IgM anti HBc (titru crescut) = infecie recent, vindecat o Ac anti HBs + Ig totale antiHBc (titru sczut) = infecie n antecedente, vindecat o Ac anti HBs (fr ali markeri) = imunitate postvaccinal Persistena AgHBs dup 6 luni = infecie persistent
-3-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP10

- Hepatita viral C Produs patologic snge esut hepatic

Examen direct evidenierea acidului nucleic din snge (viremie) sau din ficat prin PCR.

Izolarea nu se practic Diagnostic serologic detectarea anticorpilor anti VHC prin ELISA, metode radioimune, folosind antigene recombinate detectarea imunoglobulinelor prin metode Western-blot

- Hepatita viral D Produs patologic snge esut hepatic

Virusul hepatitei D este un virus defectiv, infecia apare doar n prezena virusului hepatitei B. Examen direct evidenierea virusului n nucleul hepatocitelor prin ME, metode imunohistochimice; evidenierea ARN-ului viral din snge, dup tratarea serului cu detergeni pentru a ndeprta AgHBs care nvelete virusul. Diagnostic serologic evidenierea anticorpilor anti VHD prin ELISA.

- Hepatita viral E Virusul hepatitei E se transmite enteral, determinnd forme uoare de boal, cu excepia femeilor gravide la care boala poate avea o evoluie letal. Boala evolueaz epidemic n Asia, n nord-vestul Africii i n Mexic. Foarte rar apare n SUA. Nu s-au descris cazuri la noi n ar.
-4-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP10

Nu se fabric reactivi comerciali pentru diagnosticul de laborator de rutin. n scop tiinific: o se evideniaz antigenele virale din celula hepatic prin IME; o se evideniaz ARN-ul viral prin PCR; o se evideniaz anticorpii anti VHE.

Diagnosticul de laborator n afeciuni respiratorii

Diagnosticul de laborator n grip
gripa este o boal infecioas acut foarte contagioas, obinuit autolimitat, febril, cauzat de virusul gripal A sau B, care apare n izbucniri epidemice de severitate variat, aproape n fiecare iarn virusurile gripale A, B, C fac parte din familia Orthomyxoviridae Evoluia gripei este endemic, cu manifestri epidemice la interval de 2-3 ani pentru virusul de tip A i 4-6 ani pentru virusul de tip B. Pandemiile care apar datorit unor tulpini complet noi a virusului, provenite de obicei din Extremul Orient, intervin la 10-20 ani. Gripa prezint periodicitate sezonier, cazurile aprnd n sezonul rece, de obicei iarna-primvara incubaia: 18-36-72 de ore; debutul este brusc, uneori brutal cu frisoane, febr 39-40C, mialgii, cefalee, astenie perioada de stare este dominat de semne toxice generale; sunt prezente: o febra nalt 3-5 zile, faciesul uor congestionat, cefalee, dureri n globii oculari, mialgii, astenie marcat, tulburri de somn, apatie, iritabilitate; o manifestri respiratorii: catar nazal, enantem difuz, durere sau arsur retrosternal (traheite); tuse uscat o manifestri viscerale diverse: cardiovasculare, digestive perioada de convalescen n care persist manifestri ca astenie, subfebrilitate, tuse, irascibilitate. Diagnosticul virusologic este necesar n cazul unei epidemii ntr-o colectivitate (institut) sau cnd rezultatul poate influena decizia terapeutic.

-5-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP10

Produs patologic
secreie faringian, nazal sau nazofaringian lichid de spltur nazofaringian aspirat bronic esut pulmonar diagnostic postmortem snge

Examen direct
evidenierea antigenelor virale o prin RIF, ELISA (RHA-HAI) se pot diferenia tipurile A i B

o prin metode rapide (15-30 minute) imunocromatografice rezultatele negative se verific prin metoda de cultivare

evidenierea acizilor nucleici virali RT - PCR

Izolare i identificare
Izolarea virusului este singura metod care permite caracterizarea specific a subtipurilor circulante. cultivare pe OGE - inoculare intra-amniotic o se determin prezena hemaglutininelor (hemadsorbie) cultivare pe culturi de celule o efect citopatogen discret o replicarea viral se evideniaz prin hemadsorbie o RIF difereniaz i tipurile A i B

Diagnostic serologic
evidenierea seroconversiei: RFC reacia de hemaglutinoinhibare

-6-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP10

Diagnosticul de laborator n infeciile cauzate de rhinovirusuri

agentul etiologic al rcelii comune

Produs patologic
lichidul de spltur nazal recoltat n perioada de inceput a bolii, cnd excreia viral este maxim

Examen direct
detectarea antigenelor virale n lichidul de spltur nazal reacia ELISA

Izolarea i identificarea
linii celulare HeLa sau culturi de fibroblati umani efectul citopatic rotunjirea celulelor

Diagnostic serologic
detectarea anticorpilor prin: o reacia de virus-neutralizare o reacia ELISA

-7-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP10

Diagnosticul de laborator n infeciile cauzate de virusul sinciial respirator (VSR)

virusul sinciial respirator face parte din familia Paramyxoviridae afecteaz persoane de toate vrstele, n special copii pn la 2-3 an produce epidemii iarna cel mai frecvent determin o simptome asemntoare rcelii o pneumonie o broniolit (grav la pacieni imunodeprimai)

Produs patologic
lichid de spltur nazofaringian snge

Examen direct
evidenierea antigenelor virale prin RIF, ELISA evidenierea ARN prin RT-PCR

Izolare i identificare
cultivare pe linie HeLa sau HEp-2 evidenierea efectului citopatogen

Diagnostic serologic
evidenierea seroconversiei: RFC, ELISA

-8-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP10

Diagnosticul de laborator n infeciile cauzate de adenovirusuri

deternin apariia unor infecii cu localizri multiple o infecii respiratorii inferioare i superioare o conjunctivit o cistit hemoragic o gastroenterite o infecii la pacieni cu transplant de organe

Produs patologic
exsudat faringian, nazal, nazofaringian sput secreie conjunctival urin materii fecale snge

Diagnostic direct
detectarea antigenelor virale prin RIF

Izolare i identificare
linii celulare: efect citopatogen (aglomerarea celulelor n ciorchine), incluzii nucleare unele adenovirusuri enterice nu sunt cultivabile

Diagnostic serologic
determinarea seroconversiei o RFC detecteaz anticorpi specifici de grup o RHAI anticorpi specifici de tip

-9-