BIOSENZORI PENTRU MONITORIZAREA

MEDIULUI

Coordonator: Prof.Univ. Dr. Constantin Gheorghie

Student: Ctlina Ranga, MMM, An II, Sem. II

CUPRINS

1.INTRODUCERE...................................................................................................3
2. BIOSENZORI......................................................................................................5
2.1. BAZELE SI CLASIFICAREA BIOSENZORILOR...............................................6
2.1.1.Traductoare electrochimice.....................................................................................6
2.1.2. Traductoarele optice...............................................................................................6
2.1.3. Senzori sensibili de masa.............................................................................................7
2.1.4. Senzori termometrici.............................................................................................8
2.2. BIOSENZORI PENTRU MONITORIZAREA MEDIULUI.................................8
2.2.1. Biosenzori de tip enzime.......................................................................................8
2.2.2. Imunosenzori.........................................................................................................9
2.2.3. Biosenzori de tp ADN..........................................................................................10
2.2.4. Biosenzori celulari.....................................................................................................10
2.3. Retele wireless autonome de biosenzori...........................................................................11
3. VIITOARE TENDINTE SI CONCLUZIILE................................................................12
BIBLIOGRAFIE....................................................................................................14

1.INTRODUCERE
Tehnologia biosenzorilor se bazeaza pe un element specific de recunoatere biologica n
combinaie cu un traductor de procesare a semnalului. nc de la nceputul
folosirii biosenzorilor s-a ateptat ca acestia s joace un rol semnificativ n metodele analitice de
monitorizare a mediului. Utilizarea datelor biologice pentru a completa analizele
chimice, precum i dezvoltarea unor biosenzori i alte abordri biologice, a crescut
constant n ultimii ani. Cu toate acestea, comercializarea tehnologiei biosenzorilor a
rmas n urma n mod semnificativ dup cum se reflect printr-o serie de publicaii i
activiti de brevetare. Motivul din spatele transferului lent de tehnologie i limitat ar
putea fi atribuit considerentului de cost i unele bariere tehnice cheie.
n decursul ultimilor 15 ani, un sprijin relevant a fost furnizat de ctre
instituiile publice pentru cercetarea biosenzorilor din Statele Unite ale Americii, Japonia
i, mai ales,din Europa. n plus, biomonitorizarea este un instrument esenial pentru monitorizarea
rapid i rentabil a mediului. Din acest motiv, tehnologia biosenzorilor a fost considerata
3

ca un instrument-cheie pentru implementarea noilor directive in Uniunea Europena (UE),

cum ar fi Directiva Cadru privind Apa (DCA), i alte directive relationate, cum ar fi
recenta Directiva-cadru privind strategiile marine.
Chimia

analitic

s-a

schimbat

considerabil,

condusa

de

automatizare,

miniaturizarea i integrarea unui sistem cu randament ridicat de sarcini multiple. Astfel

de cerine reprezint o mare provocare n tehnologia biosenzorilor unde biosenzorii sunt
deseori conceputi pentru a detecta un singur sau cateva substane int. Pentru a avea
succes, biosenzorii trebuie s fie versatili pentru a suporta biorecunoasterea elementelor
interschimbabile i, n plus,miniaturizarea trebuie sa fie realizabila, pentru a permite
automatizarea senzorului in paralel cu usurinta de operare, la un cost acceptabil. O investiie
semnificativ n cercetare i dezvoltare este o condiie prealabil n comercializarea de
biosenzori. Progresul n astfel de eforturi este incrementat cu un succes limitat, astfel,
intrarea pe pia pentru o noua incercare este foarte dificila daca un produs de ni nu poate fi
dezvoltat cu un volum considerabil de pia. Evoluiile tehnologice recente n miniaturizarea
aparatelor electronice si a comunicarii wireless au dus la apariia Retelelor Senzorilor
pentru Mediu (ESN). Acestea vor spori foarte mult monitorizarea mediului natural i, n unele
cazuri, vor deschide noi tehnici de a efectua msurtori sau vor permite implementari de senzori anterior
imposibile.
Aici vom prezenta principiile, avantajele i limitrile tehnologiei biosenzorilor
pentru diagnostice de mediu, cu accent special pe cele pe baz de nanomateriale si
tehnologii pentru biosensing la distan dezvoltate cu sprijinul oferit de ctre instituiile
publice pentru cercetare din Statele Unite ale Americii, Japonia i Europa.
Din cauza dificultii de a prevedea efectele colective ale numrului tot mai mare de poluani
n ecosistemele receptoare, este nevoie de metode de screening n monitoriza
reamediului. Punerea n aplicare a programelor de siguran necesit o analiz de mediu care
cuprinde dou pri: metode de screening bazata pe analiza de mare de transfer i
capabila de monitorizare continu on-line pe site-uri cu costuri reduse, i analiza probelor pozitive cu
tehnici analitice de confirmare. Analiza Bioraspuns combin dou procese, recunoaterea
biologica- iniierea unui efect biologic, i analize chimice. Componentele biomoleculare sunt
folosite ca tinte pentru substanele active. Dei este posibil s se aplice, de exemplu, teste
obligatorii care asigur efecte echivalente, informaii cu privire la contaminani

responsabili sunt accesibile doar prin analiz chimic. Prin urmare, o etap ulterioar este
furnizata de analiza chimic a substanelor care sunt legate de biorecunoasterea componentelor i
care sunt, prin urmare, bio-eficiente. Biosenzorii sunt de obicei clasificati fie n funcie de elementul
transductor (de exemplu: electrochimic, piezoelectric, optic sau termic), fie n conformitate
cu principiul de biorecunoastere (enzimatic, recunoaterea imunoafinitatii, senzori
ntregi,sau ADN) (a se vedea figura 1).

Fig.1
Principalele avantaje ale biosenzorilor sunt: timpul scurt de analiza , teste cu cost
scazut i portabilitatea, msurtori n timp real i control de la distan. Aceste noi tehnologii au fost
aplicate n mod egal analizei cantitative a analitilor int i n msurtori ecotoxicologice.
n prezent, biomonitorizarea este un instrument esenial pentru punerea n aplicare adirectivelor UE, cum
ar fi Directiva Cadru privind Apa (DCA), precum i Directiva Cadru privind strategia pentru
mediul marin. Cu toate acestea, multe dintre aceste noi tehnologii sunt nc n curs de
dezvoltate i se bazeaz pe eforturi combinate din diverse domenii tiinifice. n Europa, Comisia
European (CE) a fost deschiztorul de drumuri pentru dezvoltarea acestor noi tehnologii
n analiza de mediu. Sub Programele Cadru 3,4,5 si 6 (PC),un numr mare de proiecte de
cercetare finanate au fost dedicate pentru dezvoltarea de noi instrumente analitice, i mai mult de 300 de
proiecte au fost efectuate pe senzori, biosenzori i tehnici biologice.
Mai multe revizuiri pe biosenzori, senzori optici pentru diferite domenii de analiz,sau tehnici
biologice pentru analiza de mediu au fost publicate n ultimii ani. Aici ne propunem s prezentm
principiile, avantajele i limitrile tehnologiei biosenzorilor pentru monitorizarea mediului, i
s rezumam progresele obinute n acest domeniu n conformitate cu sprijinul acordat de
instituiile publice.

2. BIOSENZORI
Biosenzorii pot fi definiti ca un dispozitiv integrat al receptorilor-traductor, care
suntcapabili s ofere informatii analitice selective cantitative sau semi-analitice folosind
unelement de recunoatere biologic. Un biosenzor transform un eveniment biologic ntrun semnal detectabil prin aciunea unui traductor i a unui procesor. Automatizarea i
miniaturizarea tehnicilor biologice analitice, precum i dezvoltarea de echipamente de
msurare de la distan online, pot fi realizate prin tehnologia biosenzorilor. n ultimii ani, un numr tot
mai mare de aplicatii de biosenzor au fost dezvoltate pentru analiza de mediu, pentru analize
tinta i pentru monitorizarea tuturor efectelor biologice, cum ar fi toxicitatea.

2.1. BAZELE SI CLASIFICAREA BIOSENZORILOR

Biosenzorii pot fi clasificati n funcie de elementele bioreceptoare implicate n
recunoatere i n funcie de elementele fizico-chimice ale transductorului. Principalele
clase de bio-receptori aplicati n analiza polurii organice a mediului sunt: enzimele,
anticorpii, ADN-ul i celule ntregi .Pe de alt parte, exist patru grupuri de elemente de baz ale
transductorului: electro-chimice, optice, senzori de mas sensibili i termici, cei mai mult biosenzori
descrisi n literatura de specialitate fiind biosenzorii electrochimici. In continuare se vor
discuta principalele clase de biosenzori n funcie de elementul transductor.

2.1.1.Traductoare electrochimice
Senzorii electrochimici msoar schimbrile electrochimice care apar atunci cnd
substanele chimice interacioneaz cu o suprafata sensibila a electrodului de detectare
.Schimbrile electrice se pot baza pe o schimbare n tensiunea msurat ntre
electrozi(poteniometric), o schimbare n curentul msurat la o tensiune aplicat data
(ampermetrica),sau o schimbare n capacitatea materialului sensibil la transport
(conductometrica ). Astfel de efecte pot fi stimulate electric sau pot rezulta in urma unei

interaciuni spontane la starea de curent-zero. Senzori de gaze cu electrolit solid care se

disting sunt: voltmetrice, ampermetricesi potentiometrice. Principiul de funcionare al
biosenzorilor ampermetrici este definit de un potenial constant aplicat ntre un electrod lucru i
un electrod de referin. Potenialul impus promoveaz o reacie redox, care produce un curent.
Amploarea acestui curent este proporional cu concentraia de specii electro active prezente
n soluie. Biosenzorii poteniometrici se bazeaz pe monitorizarea potenialului la un
electrod de lucru, cu privire la un electrod de referin.

2.1.2. Traductoarele optice

Traductoarele optice se bazeaz pe diferite tehnologii de fenomene optice, care
sunt rezultatul unei interaciuni a unui analit cu partea receptorului. Transducia optica
poate implica fenomene optice liniare, inclusiv adsorbie, fluorescen, fosforescen,
polarizare, rotaie, interferena, etc, sau fenomene neliniare, cum ar fi generarea armonicii
a doua. Tehnicile reflectometricele se bazeaz pe o lumina alba incidenta care trece la
interfaa, dintre indici de refracie diferiti, care se vor reflecta n parte. Aceste reflectii se
suprapun i vor construi un spectru caracteristic de interferene. Legarea unui receptor
biologic, cum ar fi anticorpii la suprafaa schimb grosimea stratului de comutare, care produce o
schimbare n spectrul de reflexie (fig. 2).

Fig. 2

2.1.3. Senzori sensibili de masa

Msurtori ale micilor schimbri n mas este o form de transducie care a fost utilizata
pentru dezvoltarea biosenzorului. Dispozitivele piezoelectrice i dispozitive acustice de
unda de suprafata pot fi grupate n aceast categorie.
Vibraiile cristalelor piezoelectrice produc un cmp electric oscilant n care
frecvena de rezonan a cristalului depinde de natura sa chimica, de dimensiunea, forma i masa sa.
Aceste cristale pot fi fcute s vibreze la o anumit frecven de oscilaie, care este dependent de
frecvena electrica. Frecvena de oscilaie este, prin urmare, dependenta de frecvena electrica
aplicata cristalului, precum i de masa cristalului. n cazul n care masa crete, din cauza
legarii analitilor, frecvena de oscilaie a modificrilor cristalului si schimbarea pot fi
msurate. Ecuaia general a cristalului poate fi rezumata dup cum urmeaz n cazul n care
schimbarea de mas (m) este foarte mica n comparaie cu masa total de cristal.
Cristale piezoelectrice, uneori menionate ca si microcristale de cuart (QCM), sunt de obicei
fcute din cuar i opereaz la frecvene ntre 1 i 10MHz. Aceste dispozitive pot
funciona n lichide, cu o limit de determinare de frecven de 0.1Hz .
Dispozitive cu unde acustice, realizate din materiale piezoelectrice, sunt cei mai
comuni senzori, care se ndoaie atunci cnd este aplicat o tensiune de cristal. Senzorii cu
unde acustice sunt operati prin aplicarea unei tensiuni oscilante la frecvena de rezonan
a cristalului.
Limitrile pentru aceast metod implica formatul i cerinele de calibrare, care
sunt consumatoare de timp.

2.1.4. Senzori termometrici

Senzorii termometrici se bazeaz pe msurarea efectelor cldurii unei reacii
chimice specifice sau a absorbiei care implic un analit. n acest grup, efectele termice pot fi msurate
n diverse moduri, de exemplu, n senzorul catalitic cldura unei reactii de combustie sau o reacie
enzimatic este msurat prin utilizarea unui termistor. Biosenzorii calorimetrici
detecteaza variaii de cldur n timpul unei reacii biologice.

2.2. BIOSENZORI PENTRU MONITORIZAREA MEDIULUI

Urmtoarele seciuni discuta biosenzorii dezvoltati i aplicate n monitorizarea
mediului,clasificati n funcie de elementul de recunoatere biologic.

2.2.1. Biosenzori de tip enzime

Eectrozii enzimelor au fost folositi pe scar larg pentru monitorizarea unei game
largi de substraturi importante din punct de vedere clinic sau mediu, folosind n special oxidoreductaze(ca tirozinaza, peroxidaz i lactaza), i hidrolaze(colinesteraza).Biosenzorii de
tip enzime, pot fi mpriti n: cei care msoar inhibitori ai unei enzime specifice datorit
prezenei unor grupuri de analiti int, i cei care msoar transformarea catalitic a analitilor
tinta de ctre o enzim specific. Majoritatea elementelor transductoare asociate
biosenzorilor pe baz de enzime sunt electrochemici, ampermetrici sau poteniometrici.
Enzimele utilizate de obicei n biosenzorii amperometrici sunt oxidazele.
Principalula vantaj al acestei clase de traductori este costul scazut; sunt, de asemenea, foarte
reproductibile i o mare varietate de electrozi de unic folosin sunt adesea disponibili.
Instrumentarul este, de asemenea, foarte uor de obinut i poate fi ieftin i compact, acest lucru
permitand posibilitatea executarii de msurtori la faa locului. Limitri pentru
msurtorile amperometrice includ interfeele poteniale n cazul n care compuii
electroactivi sunt prezenti n eantion, deoarece acestea pot genera valori false actuale .Cele mai multe
dintre recentele progrese n biosenzori electrochimici s-au bazat pe nanotehnologie. Interesul major
n nanomateriale este determinat de proprietile lor. n special, capacitatea de a adapta
dimensiunea i structura i, prin urmare proprietile nanomaterialelor ofer perspective
excelente pentru proiectarea de noi sisteme de detecie i creterea performanei a testului
bioanalitic.
O provocare extrem de importanta n electrozii ampermetrici de tip enzime este stabilirea unei
comunicari electrice satisfctoare ntre site-ul activ al enzimei i suprafaa electrodului.
Centrul redox a celor mai multe oxidoreductaze este izolat electric printr-o membrana de
proteine. Din cauza acestui invelis, enzima nu poate fi oxidata sau redus la niciun potenial. n general,
este nevoie de co-substraturi sau mediatori pentru a realiza transducia eficient a biorecunosterii
evenimentului. Nanotuburi de carbon aliniate (CNT), pregtite pentru asamblare, pot

aciona ca fire moleculare pentru a permite comunicarea electrica ntre electrod de baza si
proteinele redox.

2.2.2. Imunosenzori
Elementele de recunoatere sunt interaciunile imunochimice ntre anticorpi i
antigene. Acest tip de dispozitiv combina principiile de imunodozare in faza solida, cu elemente de
transducie fizico-chimice. Deoarece cei mai mici poluani organici cu greutate molecular mic n
mediu au cteva caracteristici distinctive optice sau electrochimice, detectarea legarii
stoechiometrice al acestor compui de anticorpi este de obicei realizata prin utilizarea
unor formate competitive obligatorii. Limitarea principal a acestor tehnici este
detectarea electrochimica aimmuno reactiilor, deoarece este necesar s se foloseasca enzime care vor
genera compusi activi electrochimic. Imunosenzorii electrochimici au fost utilizati pe scar
larg pentru analiza de mediu n configuraii amperometrice, potentiometrice i
conductimetrice. Imunosenzorii amperometrici msoara curentul generat de oxidarea sau
reducerea substanelor redox la suprafata electrodului, care are loc la un potential electric
adecvat.

2.2.3. Biosenzori de tp ADN

Structura ADN-ului este foarte sensibila la influena poluanilor din mediu, cum ar
fi metalele grele, bifenili policlorurai (PCB) sau compuii aromatici policiclici (PAH).
Aceste substane sunt caracterizate de o afinitate mare pentru ADN-ului, cauznd
mutageneza si carcinogeneza. Deci, este foarte atractiv de a folosi sisteme care contin ADN, de
exemplu, biosenzori bazati pe ADN pentru a efectua teste genotoxice, sau de testare rapid
a poluanilor pentru activitii mutagene i cancerigene. Biosenzorii electrochimici pe baza de
ADN imobilizat, au o specificitate mare de biomolecule. Aceasta reduce consumul ADN-ului i
duce la dezvoltarea unor metode moderne de analiz a efectorilor de ADN. .Dezvoltarea
biosenzorilor electrici hibrizi pe baza de ADN a atras eforturi considerabile de cercetare. Astfel de
aplicatii ale senzorului pe baza de ADN necesit sensibilitate ridicat prin transducia
amplificata a interaciunii oligonucleotidelor. .Mai multe procese de amplificare pot fi
utilizate pentru a mbunti considreabil sensibilitatea testelor de particule.

10

2.2.4. Biosenzori celulari

Un biosenzor microbian este un dispozitiv analitic care cupleaza microorganismele cu un
traductor pentru a permite detectarea rapid, precis i sensibil a analitilor int n
domenii diverse cum ar fi medicina, monitorizarea mediului, aprare, prelucrarea alimentelor i
siguran. Anterior biosenzorii microbieni utilizau funciile respiratorii i metabolice ale
microorganismelor pentru a detecta o substan care a fost fie un substrat fie inhibitor al acestor
procese. Biosenzorii celulari n analizele de mediu au fost aplicati pentru evaluarea
efectelor biologice, cum ar fi consumul biochimic de oxigen, toxicitate, genotoxicitate
sau estrogenecitate, i, de asemenea, pentru msurarea poluanilor int sau grupurilor de poluani. Cu
toate acestea, cele mai multe aplicaii s-au concentrat in ansamblu pe efectele biologice .Cele mai
multe elemente transductoare n biosenzorii bacterieni sunt electrochimice i optice. Una
dintre aplicaiile cele mai relevante a fost determinarea consumului biochimicde oxigen.Cei mai multi
senzori CBO se bazeaz pe msurarea ratei respiraiei bacteriene, n imediata apropiere a unei
traductor, de obicei de tip Clark (un senzor amperometric dezvoltatde Clark n 1956 pentru
msurarea oxigenului dizolvat). Nite senzori BOD au fost dezvoltati i comercializati de diveri
productori n ambele configuraii de tip biofilm si bioreactor. Sistemul de biosenzor CBO
prezinta nc o serie de limitri care reduce numrul cererilor lor: lipsa de standardizare i a
legislaiei n majoritatea rilor, cerinele complicate de ntreinere, i rezisten
insuficient pentru diveri compui toxici. Este posibila eliminarea efectelor toxice ale
ionilor de metale grele prin utilizarea unui agent de chelare care complexeaza ionii, de
exemplu EDTA sau DDTC.

2.3. Retele wireless autonome de biosenzori

O reea de senzori fr fir este o reea fr fir constnd din dispozitive distribuite folosind
senzori i / sau biosenzori pentru monitorizarea condiiilor fizice sau de mediu, cum ar fi
temperatura, presiunea, salinitatea, micarea sau poluanii, n locaiidiferite (Fig. 3).

11

Fig. 3
Aceast abordare ar putea fi ntr-un viitor apropiat unul din principalele progrese realizat pentru
monitorizarea continua a mediului, precum i pentru punerea n aplicare a noilor directive UE, n special
n medii dificil de monitorizat, cum ar fi zonele de coast i n largul mrii. Astazi, evenimente
moleculare i biologice pot fi monitorizate i traduse n semnale digitale prin intermediul
biosenzorilor i, acest fapt, deschide o fereastr nou n producerea de dispozitive analitice.
Aceast nou abordare ar putea o revoluie n viitorul monitorizarii mediului.Cu toate acestea,
costul de dispozitive de biosensing autonome de ncredere este nc mult prea mare pentru
implementari masive. Unele dintre neajunsurile care ar trebui s fie depite sunt: complexitatea
proceselor de biosensing, nevoia de etalonri periodice, care ar trebui s fie reduse la minimum, iar
nevoia pentru reactivi cat mai stabili biologic, costurile energetice i de producie ar trebui s fie,
de asemenea, reduse la minimum. In ultimii ani au fost facute progrese considerabile n hardware i
software pentru construirea de reele de biosensor wireless. Cu toate acestea, pentru a
asigura colectarea eficient a datelor de ctre reelele de biosenzor pentru monitorizarea mediilor de la
distan ,rmn urmtoarele probleme: Reactivitate: capacitatea reelei de a reaciona la
mediul su i s furnizeze numai date relevante pentru utilizatori; Robustete: capacitatea
nodurilor de reea s funcioneze corect n medii dure; Durata de reea: maximizarea duratei de timp
n care reeaua este capabila s furnizeze date nainte ca bateria de noduri sa se epuizeze.

12

Primul pas n reelele de senzori wireless este dezvoltarea de blocuri autonome de

tip platforme sensibile. Un nod senzor este cea mai mic component a unei reele de senzori,care are
integrate capacitati de detectare i de comunicare.

3. Viitoare tendine i concluziile

Tehnologia Biosensor constituie un domeniu de cercetare care se extinde rapid, care a fost
transformata n ultimele dou decenii, prin noile descoperiri legate de noi materiale pentru tehnologii,
noi mijloace de transducia semnalului, i software-ul de calculator capabil de a controla
dispozitivele. Cu toate acestea, pentru a mbunti i pentru a obtine dispozitive mai fiabile,tendinele
n activitile de cercetare de biosenzori se vor axa pe realizarea unei monitorizari continue,
determinri multi-analit, folosind elemente de transducie voluminoase idispozitive de
transductie miniaturizate. Unele sisteme au fost dezvoltate pentru monitorizarea continu i pot
furniza msurtori uor, rapid i la locul prelevarii. Ele pot fi, de asemenea, utilzate pentru
cartografierea zonelor contaminate atunci cnd este important s se obin rezultate
rapide n domeniu, cum ar fi dup o deversare accidental sau evenimente de poluare .n plus,
platformele autonome cu senzor i tehnologiile wireless sunt foarte promitoare pentru dezvoltarea
unor sisteme de avertizare n timp real, dezvluind schimbri dinamice n variabilele
monitorizate n mediul nconjurtor. n ceea ce privete progresele din domeniul tehnologiilor
de detectare, trebuie subliniate progresele nregistrate n transducerea optica care ofer
robustee, versatilitate i facilitatea de miniaturizare. De exemplu, dispozitivele SPR apar ca unele
dintre cele mai promitoare tehnologii care urmeaz s fie puse n aplicare n programele
de avertisment de mediu. De asemenea, progrese relevante n dispozitive electrochimice au fost
realizate recent datorit introducerii de noi materiale nanotechnologice, cum ar fi
nanoparticulele i nanotuburile de carbon, care au stat la baza unor noi sisteme cu
rspunsuri mbuntite. Pe de alt parte, progresele in domeniul microelectronicii au
permis miniaturizarea sistemelor analitice, care permit reducerea cerinelor energetice,
manipularea unui volum redus de probe i, prin urmare, o reducere a consumului de reactiv i
generarea de deeuri, precum i creterea eantionului tranzitat. Elemente noi de detectie,
care pot mbunti afinitatea, specificitatea i masa de producie a componentelor de
recunoatere molecular pot dicta n cele din urm succesul sau eecul tehnologiilor de detectare.
n cele din urm, ultima limitare care trebuie s fie depita prin biosenzori pentru

13

monitorizarea mediului este cea de validare. Aceasta este o problem important pentru integrarea lor
n programele de control al poluarii.

BIBLIOGRAFIE
1.

B. Eggins, Biosensors. An Introduction, Ed. Willey Teubner,

2.

http://www.scribd.com/doc/56635641/Biosenzori

3.

http://www.scribd.com/doc/27228806/Curs-Biosensori

1996.

14