Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Biocel Cursuri Sem 1 An 1 PDF
Biocel Cursuri Sem 1 An 1 PDF
CAPITOLUL 1
INTRODUCERE N BIOLOGIA CELULAR I MOLECULAR
Importana disciplinei
Celula- definiie, etape importante n evoluia celular
Comparaii ntre celulele procariote i eucariote
Repere istorice
Page 1
Trecerea ctre formele complexe actuale s-a fcut n cursul evoluiei de la simplu la
complex, n condiiile diversificrii modului de hrnire ct i prin extinderea mediilor de
via.
Primele organisme vii au aprut acum 3,8-3,5 miliarde de ani, cu aproximativ un
miliard de ani dup ce a fost format Pamntul. Primele etape au constat n formarea
moleculelor organice, n condiiile speciale cnd n atmosfer nu exista oxigen. Se pare c
amestecul de CO2, N2, H2, SH2 i CO, n prezena unei surse electrice ar fi permis formarea
de molecule organice (aminoacizi) care ulterior au polimerizat formndu-se macromolecule
de acizi nucleici i proteine.
Existena vieii este condiionat de posibilitatea unor macromolecule organice de tipul
acizilor nucleici, de a nregistra informaia genetic. Ca urmare caracteristica esenial a
organismelor vii, de tip acelular sau celular, este existena unui program genetic
alctuit dintr-un numr variabil de uniti ereditare de baz numite gene
Teoria lui Muller, 1923 numit teoria genotipului, conform
creia viata a aprut odat cu formarea abiotic a uneia sau mai
multor gene. Dup Muller proprietile minimale ale unui sistem
biologic i n primul rnd activitatea metabolic i capacitatea de
replicare sunt potenial nscrise n structura genelor, care plasate
intr-un mediu molecular propice, cum ar celula pot codifica procesul
de cretere i multiplicare.
n aceste gene este codificat
biochimic informaia necesar realizrii
caracteristicilor anatomo-morfologice, fiziologice i biochimice ale tuturor formelor de
via de pa Pmnt.
Formele cele mai simple sunt de tip acelular, cum sunt virusurile i viroizii, acestea au
un program genetic alctuit din numai cteva gene sau zeci de gene (virusul MS 2 are 4 gene
ce formeaz o molecul de acid nucleic, bacteriile au n jur de 3000 de gene dispuse ntr-un
cromozom circular, plantele au n jur de 15.000 de gene, iar mamiferele zeci de mii, la om
sunt se pare, 25.000).
Viroizii sunt o categorie de structuri subvirale cu aciune patogen descoperii recent, a
cror informaie genetic e stocat ntr-o molecul de ARN ( ex. viroidul cu 359 nucleotide
produce boala stelrii la cartof similari sunt i viroizii care produc maladiile Kuru i
Kreutzfeld Jacob a cror efect este degenerescena sistemului nervos).
O alt categorie de structuri simple (forme acelulare) de via este reprezentat de
plasmide, care sunt macromolecule de ADN bicatenar circular sau linear, acestea au fost
descoperite de J. Lederberg (1952) la bacterii. Plasmidele au program genetic n care se
gsete informaia necesar autoreplicrii lor n interiorul celulei gazd, precum i diverse
gene care determin, de pild capacitatea bacteriilor de rezisten la antibiotice, la compui ai
metalelor grele sau la diverse toxine.
Aceste forme au capacitatea de a se replica independent de materialul genetic al celulei
gazd i au capacitate de autoreglare i autodezvoltare, pstrndu-se legtura cu genomul
celulei gazd, printr-un flux informativ, care permite adaptarea la mediu i respectiv
evoluie. Cel mai clar exemplu este adaptarea la antibiotice a bacteriilor, aspect mult discutat
n ultimul timp ca urmare a implicaiilor medicale.
[note curs]
Page 2
Fotosinteza
6CO2 +6H2O
C6H12O6 +6O2
Metabolismul oxidativ
C6H12O6 +6O2
[note curs]
Page 3
[note curs]
Page 4
dei foarte simple, fiind unicelulare, au un ADN cu 3000 de milioane de perechi de baze, ca
i ADN uman, ceea ce indic o complexitate funcional.
Tabel 1.1 Elemente comparative ntre celula procariot i cea eucariot
(Zamfirescu, 1999)
Diferente la
nivel structural
i funcional
Celula procariot
Nucleu
Organite
celulare
Ribozomi
Perete celular
Diviziunea
celular
Alte diferene
Nu au capacitatea de difereniere
celular dect foarte rar i limitat.
Nu au capacitate de a forma
organisme pluricelulare.
Celula eucariot
Au nucleu tipic cu nucleol i
membran nuclear.
Cromozomii sunt mai muli,
numrul lor fiind constant pentru
o specie dat.
n timpul diviziunii se formeaz
aparatul mitotic.
Sunt prezente mitocondriile,
lizozomii, reticulul
endoplasmatic, aparatul Golgi,
etc.
80s (subuniti 60s i 40s)
Este prezent la levuri i plante
(avnd structur distinct de a
procariotelor) i absent la
celulele animale.
Diviziune indirect (mitoz,
cariokinez) cu faze
caracteristice.
nmultirea sexuat este
frecvent, zigotul formndu-se
prin meioz.
Pot prezenta endocitoz, i pot
avea vacuole digestive
intracelulare.
Au capacitate de difereniere
celular.Formeaz frecvent
organisme pluricelulare.
Dimensiuni mari.
[note curs]
Page 5
Scurt istoric
SCHLEIDEN I SCHWANN n 1838, descoper celula i impune
doctrina celular, nceputul biologiei celulare.
ALBERT VON KLLIKER, 1857, descrie prima dat mitocondria n
muchi, dar abia n 1890, RICHARD ALTMANN evideniaz
mitocondria n limfocite si identific autonomia genetic i funcional.
Denumirea este introdus de CARL BENDA pe baza morfologiei (mitos
gr=fir, kondrion gr.= granul).
Aparatul Golgi (sau dictiozomul) este un organit celular gsit la
majoritatea eucariotelor, situat n centrul celulei. A fost identificat, n
1898, de ctre doctorul italian Camillo Golgi.
GEORGE EMIL PALADE (n. 19 noiembrie 1912, Iai d. 8 octombrie
2008) a fost un medic i om de tiin american de origine romn,
specialist n domeniul biologiei celulare, Laureat al Premiului Nobel
pentru Fiziologie i Medicin n anul 1974.
De asemenea, Dr. George E.Palade a fost premiat n 1986, n Statele
Unite, cu Medalia Naional pentru tiin -- n biologie (National Medal
of Science) pentru: "descoperiri fundamentale ('pioneering') a unei serii
eseniale de structuri supercomplexe, cu nalt organizare, prezente n
toate celulele vii", (inclusiv cele umane), descoper ribozomii numii
astfel i corpusculii lui Palade (corpusculi generai de nucleoli i
constituii din ARN), evideniaz exocitoza i endocitoza, descifreaz
sinteza proteinelor.
[note curs]
Page 6
[note curs]
Page 7
CAPITOLUL 2
COMPOZIIA CHIMIC A CELULEI
Substanele organice
Bazele moleculare ale organizrii biochimice a celulelor
Apa i ionii anorganici
Celulele sunt alctuite dintr-un numr limitat de elemente chimice dintre acestea
C,N,H,O,P,S reprezint un procent de 99%. De asemenea, elementul cel mai important din
celul este apa care se gsete n proporie de 70% sau chiar mai mult. Tinnd cont c
reaciile chimice se desfoar la acest nivel sunt foarte importante interaciunile dintre ap i
ali compui chimici.
Apa dei are un echilibru dintre protoni i electroni este o molecul polar deoarece
nucleul atomului de oxigen atrage parial electronii atomilor de hidrogen lsnd nucleul
acestora cu ncarcare slab pozitiv, iar densitatea excesiv a electronilor atomilor de oxigen
creaz o regiune opus slab negativ. Doarece sunt dou legturi O-H, molecula de ap este
un dipol electrostatic (Figure 2.1) ce formeaz interaciuni noncovalente cu alte molecule.
Din cauza naturii polare a moleculelor de ap, se pot forma legturi de hidrogen att
ntre moleculele de ap ct i cu alte tipuri de molecule polare, ele interacionnd cu ioni
ncrcai pozitiv sau negativ.
Ca rezultat al acestor interaciuni, ionii i moleculele polare sunt uor solubile n ap
(hidrofile). n schimb, moleculele nepolare care nu pot interaciona cu apa nu sunt solubile
sau slab solubile n mediul apos (hidrofobe). Moleculele nepolare au tendina s reduc ct
mai mult contactul cu apa asamblndu-se ntre ele.
Legturile de hidrogen confer apei o cretere a capacitii calorice care realizeaz
fenomenul ecranrii termice, si apr structurile celulare de efectul reaciilor exotermice.
Moleculele de ap formeaz nveliurile de hidratare a ionilor.
[note curs]
Page 8
[note curs]
Page 9
reaciilor chimice din sistemele biologice este asigurat de proteinele enzime. De asemenea,
particip la transportul i depozitarea unor molecule mici (hormoni) i intervin n aprarea
organismului (anticorpii).
Rolurile structurilor proteice sunt diverse:
-particip la organizarea i desfurarea proceselor vitale;
-particip la agregarea aminoacizilor, a lanurilor polipeptidice i a altor
prostetice dnd natere la microfilamente, microtubuli, membrane, ribozomi;
grupri
[note curs]
Page 10
Aminoacid
Polipeptid
Nucleotid
Polinucleotid
Monozaharid
Polizaharid
Page 11
[note curs]
Page 12
glucoza
Dou polizaharide glicogenul i amidonul sunt forme de depozit ale glucidelor simple
la animale i plante, ambele fiind compuse
integral din glucoz.
[note curs]
Page 13
Figura 2.3. ADN caten dubl prin stabilirea legturilor de hidrogen ntre bazele
azotate
Ceea ce este interesat n modul de realizare a legturilor e faptul c se creaz o anumit
direcie a polimerizrii: o extremitate a lanului se termin cu o grupare 3 hidroxil, iar
cealalt cu o grupare 5 fosfat, ntotdeauna creterea se face n direcia 5-3.
Purine
Adenina (A)
Guanina (G)
pirimidine
Citozina (C)
Timina (T)
Uracil (U)
In ARN
adenozina
In ADN
deoxitimidina
In ARN
adenilat
guanilat
citidilat
uridilat
In ADN
deoxiadenilat
deoxiguanilat
deoxicitidilat
deoxitimidilat
Nucleozid monofosfat
AMP
GMP
CMP
UMP
Nucleozid difosfat
ADP
GDP
CDP
UDP
Nucleozid trifosfat
ATP
GTP
CTP
UTP
Nucleozide
Nucleotide
guanozina
citidina
uracil
Page 14
ADN este o molecul dublu helicoidal fiind alctuit din dou lanuri polinucleotidice
care sunt antiparalele (Figura 2.3). Bazele azotate sunt dispuse n interiorul macromoleculei i
cele dou lanuri sunt unite prin legturile de hidrogen dintre perechile de baze
complementare: A-T, G-C.
Nucleotidele au i alte roluri intracelulare. ATP este principala form de stocare a
energiei chimice n celul. Alte nucleotide funcioneaz ca transportori fie ai energiei, fie ai
unor grupri chimice reactive implicate n diferite reacii metabolice, alte grupe au rol n
semnalizarea celular (AMP= adenozinmonofosfat). n funcie de bazele azotate i de
gruprile fosfat sunt mprite n categorii cu terminologie adecvat componentelor
constitutive (Tabel 2.2).
(ac palmitic)
Acizii grasi nesaturai conin una sau mai multe legaturi duble ntre atomii de carbon, n
acizii grai saturai toi atomii de carbon sunt legai la un numr maxim de atomi de hidrogen.
(ac oleic)
Lanurile lungi hidrocarbonate de acizi grai conin numai legturi nepolare C-H care
sunt incapabile s interacioneze cu apa. Natura hidrofob a acestor lanuri explic
comportamentul lipidelor complexe n formarea membranelor celulare.
Acizii grai servesc ca pri structurale ale membranei celulare i protejeaz astfel
celula de invazia toxinelor, bacteriilor, viruilor, substanelor cancerigene i alergenilor.
Este uor de neles de ce cercetrile au legat dezechilibrul acizilor grai de o varietate
de boli cronice printre care bolile de inima, cancerul, diabetul, artrita, alergiile, problemele
legate de sistemul nervos, inclusiv tulburrile de comportament, probleme dermatologice i
diferite tulburari imunologice.
[note curs]
Page 15
Acizii grai sunt depozitai sub form de trigliceride sau grsimi care sunt alctuite din
trei acizi grai legai la o molecul de glicerol. Trigliceridele sunt insolubile n ap i de
aceea se acumuleaz ca picturi de grsime n citoplasm.
Acizii grai pot forma combinaii astfel:
Fosfolipidele sunt componentele principale ale membranelor celulare i sunt alctuite
din 2 acizi grai unii la extremitatea polar.
Fosfogliceridele sunt fosfolipide la care cei doi acizi grai sunt legai la atomii de
carbon din glicerol, iar al treilea atom de C din glicerol este legat la o grupare fosfat, care la
rndul ei este ataat la o alt molecul polar mic care poate fi colina, serina, inozitolul sau
etanolamina.
Sfingomielina este singurul fosfolipid fr glicerol din membranele celulare. Ea
conine 2 lanuri hidrocarbonate, legate la captul polar format din serin fosforilil colina.
Toate fosfolipidele au cozi hidrofobe formate din dou lanuri hidrocarbonate i o
extremitate polar hidrofil (constituit din gruparea fosfat ataat la diferite grupri polare).
Ca urmare fosfolipidele sunt molecule amfipatice parial solubile i parial insolubile n
ap. Aceast proprietate este fundamental pentru formarea membranelor biologice.
Structura fosfolipid
Structura glicolipidelor
Structura colesterolului
CAPITOLUL 3
[note curs]
Page 16
MEMBRANA CELULAR
Generaliti
Rolul plasmalemei
Structura molecular i macromolecular a plasmalemei
Membrana eritrocitar-model de structura
Glicocalix
Funciile
membranei
celulare
proteine
realizeaz
n afara membranei celulare externe (plasmalema) exist i structuri interne care sunt
denumite endoplasme i care delimiteaz n principal organitele celulare.
Membrana celulara mpreun cu glicocalixul (un nveli de natur glicoproteic) i
citoscheletul membranar formeaz nveliul celular.
n poriunea de contact cu citoplasma formeaz o zon numit corticala celular
groas de 1-2 m, care are rolul s stabileasc relaii ntre plasmalem i citoscheletul celular.
La suprafaa nveliului celular sunt o serie de diferenieri numite jonciuni celulare
care au rol important n realizarea adeziunii celulare. Pe suprafa exist de asemenea cili,
microvili, flageli i pseudopode cu rol n motilitatea celular.
Concepia actual privind structura membranar susine c toate membranele biologice
au aceeai organizare structural. Formarea membranelor biologice este bazat pe
proprietile lipidelor ct i de asocierea dintre lipide i proteine
Plasmalema are o compoziie lipidic bistratificat n care sunt inserate moleculele de
protein (glicoproteine) i colesterol.
[note curs]
Page 17
Lipidele membranare
Lipidele membranare reprezint o categorie larg de substane organice relativ
insolubile n ap, solubile n cei mai muli solveni organici, cu caracter amfifil i (molecul
care este att hidrofil ct i lipofil) solubil, multe dintre ele fiind esteri ai unor alcooli
polihidroxilici cu acizi grai (acizi carboxilici cu lan alifatic liniar, adic o caten liniar
coninnd mai muli atomi de carbon). Aa cum stipuleaz modelul n mozaic fluid al
organizrii membranelor, lipidele sunt structurate n membrane, sub form de bistrat, cu
capetele hidrofile la exterior i cozile hidrofobe n interior, bistrat care prezint proprieti
fluide, manifestate bidimensional.
Lipidele reprezint 40-50% din materialul organic al membranelor, aceasta proportie
variaza n funcie de tipul membranei. Sub aspect molecular ele reprezint componenta
structural de baza a membranelor celulare (raportul molecular lipide/proteine fiind de
~50/1).
La mamifere membranele plasmatice sunt complexe i conin patru fosfolipide
fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina i sfingomielina, care mpreuna
formeaza cele 50 de procente, i care difer de la o membrane la alta (Tabel 3.1).
n bistrat lipidele au o dispunere asimetric (stratul extern conine n special
fosfatidilcolin i sfingomielina, iar cel intern fosfatidiletanolamin i fosfatidilserin,
precum i fosfatidilinozitolul, care are rol in semnalizare celular) i sunt de o mare
eterogenitate (Figura 3.1).
fosfatidiletanolamin
fosfatidilserin
fosfatidilcolin
sfingomielina
Figura 3.1 Patru fosfolipide principale din structura membranelor de la mamifere. Toate
sunt derivate din glicerol, cu excepia sfingomielinei care este derivat din serin.
Asadar, membranele celulare sunt structurate pe un bistrat lipidic bidimensional,
asimetric si eterogen.
[note curs]
Page 18
fosfolipide
colesterol
glicolipide
[note curs]
Page 19
Bistratul este cea mai simpl structurare a lipidelor care poate nchide un volum mare
de mediu hidrofil, spre a-l separa de un altul tot hidrofil (capetele hidrofile la exterior, putnd
acomoda structura celor dou medii hidrofile; cozile hidrofobe n interior, n adncimea
structurii, conferind rolul de barier) (Figura 3.2).
Aadar este o structur care poate corespunde dezideratelor celulelor de a fi separate de
mediul nconjurtor i de a-i menine ntr-o manier eficient homeostazia intern.
Asamblarea n bistrat se poate face spontan, fiind deci favorizat energetic, iar bistratul
nu poate prezenta, din considerente termodinamice, capete libere. Acest lucru confer
membranelor tenacitate n pstrarea integritii structurale i refacerea rapid a acesteia chiar
n cazul unor distrugeri datorate agresiunilor mecanice.
Structurarea sub form de bistrat i dispunerea asimetric a componentelor acestuia
confer proprieti fizico-chimice diferite celor dou fee ale membranei. Mai mult,
asigur comportament independent celor dou fee ale membranei, dar i solidar, atunci cand
nevoile celulei o cer (Tabel 3.1).
Manifestarea bidimensional a fluiditii bistratului lipidic d membranei celulare
caracterul de structur cu proprieti mezomorfe, proprieti specifice cristalelor lichide.
Tabel 3.1 Compoziia n lipide a membranelor celulare (exprimat n procente)
Date dupa P.L. Yeagle, 1993 citat de Geoffrey M. Cooper 2009
Lipide
Plasmalema
eritrocitar
Fosfatidilcolina
Fosfatidilserina
Fosfatidiletanolamina
Sfingomielina
Glicolipide
Colesterol
17
6
16
17
2
45
Membrana
reticulului
endoplasmatic
55
3
16
3
0
6
Membrana
externa
mitocondrian
50
2
23
5
0
5
[note curs]
Page 20
Aplicatii in farmacologie
Veziculele fosfolipidice numite liposomi
(descrise n 1965) sunt intens folosite n
domeniul
farmacologiei.
Deoarece
delimiteaz un compartiment apos, liposomii
pot fi vezicule considerate ca veritabile
capsule farmacologice.
n momentul preparrii, n veziculele
liposomale se pot ncapsula diferite substante
cu efect terapeutic. Deoarece lipozomii sunt
mrginii de o membran reprezentat de
bistratul fosfolipidic, cu aceeasi structur ca
si membranele biologice naturale, ei nu sunt
toxici daca sunt administrati n organism.
Liposomii interactioneaz specific cu
celulele, fiind captati de ctre acestea prin
endocitoza sau fuziune.
Toate aceste argument experimentale
stau la baza speranelor c liposomii vor fi
folositi
ca vectori farmacologici n
administrarea dirijat a preparatelor
terapeutice catre anumite celule tinta
(Mixich & Ardelean, 2002).
O importanta proprietate a
bistratului lipidic este aceea c se
comporta ca un fluid bidimensional, dar
moleculele component sunt libere s execute miscri de rotatie sau difuzie lateral. Aceast
fluiditate este o caracteristica ce depinde n egal msura att de factorii intrinseci
(compozitia n lipide a bistratului) ct i de o serie de factori extrinseci (temperatura,
presiune, substane chimice)
Lipidele membranare pot executa urmtoarele tipuri de micri:
1. Micri intramoleculare
de rotaie, cnd sunt generate de capacitatea lanurilor acizilor grai de a se roti n
jurul legturilor C-C (Figura 3.3), capacitate care se rsfrnge asupra comportamentului
ntregii molecule prin cuplurile de fore pe care le induc. Se realizeaz cu o frecven de 109
rotaii/s.
de flexie a cozilor hidrofobe (vibraie ), aceste micri trebuie nelese tot ca rezultat
al micrilor din interiorul moleculelor de lipide, la nivelul cozilor hidrofobe ale acizilor grai
nesaturai, care, nu pot executa dect micri asemntoare tergtorului de parbriz; efectul la
nivelul ntregii molecule este acela al micrii de flexie a cozii, cu o frecven de 108 flexii/s.
2. Micri intermoleculare (Figura 3.3) - difuzie lateral implic schimbarea poziiei
moleculelor de lipide unele n raport cu altele.
[note curs]
Page 21
Importana medical
Multe analgezice, ca i unele anestezice, fiind compui
liposolubili, acioneaz i prin modificarea fluiditii membranelor
neuronale.
n membranele biologice exist o mixtur de tipuri de acizi
grai care au rolul de a menine fluiditatea la 370C.
Meninerea fluiditii bistratului membranar este esenial
pentru creterea i reproducerea celular normal.
[note curs]
Page 22
Importana evolutiv
n cazul organismelor poikiloterme, a cror temperatur
variaz cu cea a mediului, membranele celulare i schimb
compoziia n acizi grai, n aa fel nct, fluiditatea se menine n
limite constante, indiferent de temperatura mediului ambient.
Dac temperatura scade, se sintetizeaz n membrane
fosfolipide, n care predomin acizii grai nesaturai (cu duble
legturi), astfel c, descreterea fluiditii, odat cu scderea
temperaturii este evitat.
1-Factorii chimici intrinseci, pe care celula i folosete n modularea fluiditii
membranei n funcie de necesiti, sunt cantitatea de acizi grai nesaturai din structura
fosfolipidelor, sau a glicolipidelor, i/sau cantitatea de colesterol din structura bistratului.
Fluiditatea membranei este direct proporional cu procentul de acizi grai nesaturai
din structura lipidelor bistratului (crete cantitatea de acizi grai nesaturai, crete i
fluiditatea), n timp ce creterea procentului de colesterol duce la rigidizarea membranei
(micorarea fluiditii) datorit structurii sale inelar rigide. Aadar fluiditatea membranei este
invers proporional cu cantitatea de colesterol din bistrat.
2- Factorii chimici extrinseci se clasific la randul lor n:
fiziologici (hormoni sau mediatori chimici liposolubili),
patologici (metabolii liposolubili ai unor ageni patogeni, substane chimice
toxice liposolubile),
terapeutici (medicamente liposolubile).
Proteinele membranare
Proteinele sunt de asemenea, o alt component major a membranelor celulare.
Majoritatea membranelor plasmatice conin 50% lipide i 50% proteine. Deoarece
proteinele sunt mai mari dect lipidele 1 molecul de proteine corespunde la 50-100
de molecule lipidice. Dac lipidele reprezint elementele structurale de baz din
organizarea membranelor celulare, proteinele constituie componenta care se ocup de
funciile specifice ale membranelor celulare.
Exista o coresponden ntre raportul lipide/proteine dintr-o membran i importana
funcional a acesteia:
[note curs]
Page 23
[note curs]
Page 24
[note curs]
Page 25
Proteinele nu acioneaz i nu se
manifest singure, ci funcionarea acestora
este guvernat de interaciile cu alte
proteine, vorbindu-se astfel, de o reea de
proteine ce intervine n reglarea unei
funcii celulare.
Page 26
2- rolul metabolic al
proteinelor membranare
se manifest sub form de
schimburi de informaii i
Proteinele
membranelor
sunt
substane dintre celule, sau
purificate prin electroforez n gel de
dintre acestea i mediu.
poliacrilamid, n prezen de dodecilsulfat
Astfel,
proteinele
de sodiu (SDS-PAGE).
Avantajele
membranare pot fi receptori,
acestui tip de electroforez constau n faptul
transportori
prin
membran
c detergentul (dodecilsulfatul de sodium
(canale ionice, pompe ionice), sau
numit i laurilsulfat de sodiu) pe de o parte
transportori
cu
membran
elibereaz toate proteinele (att pe cele
(clatrin, caveolin: proteine ce
periferice, ct i pe cele integrale) din
structureaz nveliuri ale unor
arhitectura membranei, solubilizndu-le, iar
microdomenii din membran pentru a
pe de alt parte se adsoarbe unitar pe
permite invaginarea acestora i
lanurile polipeptidice, conferindu-le o
detaarea sub form de vezicule, sau
densitate de sarcin negativ unitar.
fuzionarea
unor
vezicule
cu
n
aceste
condiii
migrarea
membrane celular pentru a realiza
proteinelor se face numai n funcie de
procese
denumite
endocitoz,
greutatea lor molecular.
respectiv exocitoz;
Proteinele membranare mai
pot
funciona
ca
enzime
(metaloproteinaze
pentru
componente de matrice extracelular,
fosfolipaze, kinaze, fosfataze), sau ca proteine implicate n semnalizare (proteine platform,
sau schel, proteine G).
n toate aceste funcii asimetria structurrii membranei este deosebit de important.
Astfel, receptorii, dar i proteinele de adeziune (aderinele i integrinele) prin asimetria lor
structural permit interaciunea prin ectodomenii cu liganzii specifici, iar prin endodomenii
asigur transmiterea informaiei ctre interiorul celulei i declanarea unor procese celulare
care se constituie n rspuns celular la semnalizrile receptate.
Organizarea proteinelor din structura membranelor eritrocitare
Primele i cele mai detaliate informaii asupra proteinelor membranare au fost
obinute din studiul membranelor eritrocitare.
Motivaia este simpl: materialul biologic este uor de obinut, n cantitate suficient;
populaia celular omogen este uor de asigurat, membranele se obin fr dificultate printrun simplu oc hipoton urmat de centrifugare, iar membranele obinute (numite i fantome
eritrocitare) nu sunt impurificate cu endomembrane (membrane ale organitelor celulare),
inexistente n acest caz.
Rezultatele unei asemenea abordri pentru descrierea proteinelor membranei
eritrocitare se nfiaz sub forma unui spectru de benzi proteice distribuite ntre 20 i 250
kD, benzi care iniial au primit denumiri sub form de cifre (banda 1, banda 2, etc.),
nuanndu-se cu, spre exemplu, banda 4.1, banda 4.2, acolo unde benzile apreau ca dublete.
Ulterior, unele dintre proteine au primit denumiri specifice.
Organizarea i funcionarea membranei eritrocitare poate fi discutat pe baza
informaiilor pe care le avem referitor la proteinele ei. Comentariile asupra proteinelor
membranei eritrocitare ne vor ajuta s nelegem mai aprofundat organizarea acestor
[note curs]
Page 27
[note curs]
Page 28
Figura 3.6. Structura citoscheletului asociat membranei (la eritrocite) (dup Alberts,
2005)
[note curs]
Page 29
[note curs]
Page 30
parte, la celulele epiteliilor monostratificate, polul apical are un glicocalix mai abundent, fa
de polul latero-bazal.
Legarea monozaharidelor ntre ele se poate face n mai multe moduri, ntruct exist
mai multe grupri hidroxil disponibile, dar aceste legturi sunt limitate de tipurile de
glicoziltransferaze (enzimele ce acioneaz n biosinteza structurilor glucidice prezente n
reticulul endoplasmic i n complexul Golgi). Aceste enzime sunt stereospecifice, astfel c,
legarea glucidelor nu este ntmpltoare.
Rolul glicocalixului
1- Modul n care el este structurat, confer membranei rezisten mecanic, controlnd
accesul ctre straturile profunde ale sale, deci ctre bistratul lipidic i ctre
componentele proteice ale acesteia.
2- Prin componentele acide din structura lor (acizii sialici, acizii uronici, gruprile
sulfat), lanurile oligo-(poli-) zaharidice ale glicocalixului particip la sarcina negativ
a suprafeei celulare. ncrctura negativ a suprafeei celulare, o caracteristic
general valabil tuturor celulelor, face ca interaciunile dinte acestea s nu se poat
realiza dect sub control celular, n zone (microdomenii) ale membranelor nalt
specializate n realizarea acestei funcii. n aceste zone se formeaz ceea ce numim
jonciuni celulare, structuri specializate ale membranelor cu organizri i funcii
diverse.
procesele inflamatorii
[note curs]
Page 31
Capacitarea
const
n
modificri ale compoziiei lipidice i
glicoproteice ale suprafeei capului
spermatozoidului, ca i n creterea
metabolismului i motilitii acestuia.
Mecanismele
acestor
transformri
structurale
i
funcionale sunt declanate de
ptrunderea anionului bicarbonat
printr-un
canal
specific
din
membrana
spermatozoidului
i
activarea unei adenilat ciclaze.
Page 32
activitate galactozil-transferazic.
Zona pelucida acioneaz ca o barier ce confera specificitate de specie fertilizrii,
astfel nct aceasta nu se poate realiza ntre elemente ale unor specii diferite. Eliminarea
zonei pelucida a ovocitului permite fertilizarea elementelor aparinnd unor specii diferite,
ns zigoii hibrizi astfel obinui nu sunt viabili, nu se dezvolt. Interaciunea descris mai
sus ntre spermatozoid i ZP3, declanaz ceea ce se numete reacie acrozomal.
[note curs]
Page 33
Page 34
[note curs]
Page 35
Canale ionice
Formeaz pori deschisi prin care moleculele cu dimensiuni i sarcin adecvate pot trece
liber prin bistratul lipidic (Figura 6.3).
[note curs]
Page 36
Page 37
[note curs]
Page 38
Figura 6.6 Transport activ glucoza, dup principiul simport, mpreun cu Na+
Apoi, glucoza este transportat prin difuziune facilitat, prin suprafaa bazolateral a
epiteliului intestinal n capilarele sanguine ale esutului conjunctiv subiacent.
Deci, enterocitele sunt polarizate funcional (n domeniul apical are loc transportul
activ, iar n cel bazolateral are rol difuziunea facilitat) Figura 6.6.
[note curs]
Page 39
schimbri sunt analoage cu cele de la difuziunea facilitat, dar sunt induse de un ciclu de
fosforilare-defosforilare.
Ionii de Na+ se leag cu mare afinitate la situsuri situate n interiorul celulei. Aceast
legare stimuleaz hidroliza ATP i fosforilarea pompei. Apoi are loc o schimbare
conformaional a pompei ce i expune situsurile pentru Na+ la exteriorul celulei dup care,
afinitatea situsurilor pentru Na+ scade, i ca urmare acesta este eliberat n spaiul extracelular.
n mod similar este introdus K+ n celul. Pompa are trei situsuri pentru Na+ i dou pentru
K+, astfel nct la fiecare ciclu se transport prin membrana plasmatic trei ioni de Na+ i doi
de K+, i se consum o molecul de ATP.
Tabel 6.1 Categoriile de enzime ATP-aze implicate n funcionarea echilibrului
osmotic prin activarea pompelor ionice
Enzime care cupleaz hidroliza sau
sinteza ATP cu transportul ionilor
Tipul transportului
mpotriva/n sensul gradientului
electrochimic
Na+, K+-ATPaz
ATP-azele din clasa P
= polipeptide transmembranare care se Ca2+ -ATPaz
ATP-aze transportoare de protoni
fosforileaz n timpul transportului
ATP-azele din clasa V
=monomeri polipeptidici care dei
hidrolizeaz ATP ul nu se fosforileaz
n timpul transportului
ATP-azele din clasa F= ATP-sintetaze
Se afl n membrana mitocondriilor
Pompa Na+/ K+-ATP az este cea mai studiat i are 3 roluri de baz:
-
[note curs]
Page 40
[note curs]
Page 41
Ca2+ -ATP-az
Pompa de calciu menine concentraia
intracelular a calciului la un nivel foarte
sczut. n majoritatea celulelor animale i n
eritrocite Ca2+ -ATP-az se afl n membrana
plasmatic i are rolul de a transporta Ca2+ n
afara celulei. Aceast pomp are rolul de a
menine o concentraie foarte mic a calciului
n citoplasm (0,1M), fa de mediul
extracelular (1M). De aceea creterile foarte
mici de calciu au rol n semnalizarea celular.
n celula muscular - Ca2+ -ATP-az
e localizat n membrana RE i transport ionii
de calciu din citosol n interiorul RE (organit
care are rolul de a depozita si concentra Ca2+;
calsequestrina este o molecul proteic ce
fixeaz 43 mol. Ca2+).
Eliberarea ionilor de calciu din RE ctre citosol
determin contracia, iar reintroducerea lor
determin relaxarea muscular.
Ca2+ -ATP-az transport cte 2 ioni
de Ca2+ pentru fiecare molecul de ATP
hidrolizat i necesit prezenta Mg2+.
Medicamentele ouabaina i
digoxina au o foarte mare semnificaie
clinic, ele cresc fora contraciei
miocardului n afeciuni cardiace
congestive.
Efectul acestor medicamente
const n blocarea funcionrii Na+, K+ATP az ducnd, n consecin, la
creterea concentraiei intracelulare a
ionilor de Na, scznd gradientul de
sodiu, sistemul antiport Na+- Ca2+
funcioneaz mai puin eficient, sunt
exportai mai puini ioni de calciu, iar
concentraia intracelular a Ca2+
crete, iar celulele cardiace se contract
mai frecvent i mai puternic.
Implicaii farmacologice
[note curs]
Page 42
[note curs]
Page 43
Implicaii patologice
Dezechilibrele transporturilor ionici se pot produce n diferite
situaii patologice. De exemplu, n etapa de debut al unei ischemii
sau n criza epileptic intens crete progresiv K+ extracelular.
Dac ionul de K+ depete un anumit prag, urmeaz un transport
intracelular de Cl- n funcie de nivelul K+ extracelular.
Unul din mecanismele apariiei edemului cerebral citotoxic
este legat de excesul de Na+ ceea ce induce un exces intracelular de
ap.
Mutaiile genelor responsabile de sinteza i funcionarea
proteinelor membranare ce formeaz pompele ionice sau canale
transmembranare genereaz boli genetice grave.
Exemplu:
n cazul mutaiilor genei CLCNI ( care codific canalul de clor
de la nivelul muchilor scheletici) apare miotonia congenital cu
forma recesiv (Tip Becker) sau forma dominant ( Tip Thomsen).
mutaiile subunitilor beta sau gamma ale canalului renal
epitelial de sodiu implicate n producerea sindromului Liddle
(hipertensiune, alcaloz hipopotasemic, pierderi renale de K).
Dintre bolile genetice cu transmitere autozomal recesiv, una
dintre cele mai frecvente, este fibroza chistic sau mucoviscidoza
[note curs]
Page 44
Implicaii farmacologice
Modul de aciune al diureticelor i clasificarea lor are la baz
cunoaterea mecanismelor molecular de la nivelul unor canale
ionice.
Astfel, se poate vorbi despre:
- diuretice care inhib mecanismul simport Na+- K+-2Cl- diuretice care inhib mecanismului simport Na+-Cl- diuretice care inhib canalele de Na+ de la nivelul epiteliului
renal
[note curs]
Page 45
3- Transcitoza= implic ambele procese, att endo cat i exo si se caracterizeaz prin
transportul macromoleculelor prin citoplasm celular, de la un pol la cellalt.
Endocitoza
Este orice proces prin care membrana plasmatic nvelete o particul extracelular sau
o poriune din mediul extracelular, formnd astfel vezicule intracelulare.
Procesul de internalizare a macromoleculelor i particulelor implic mai multe
posibiliti:
1-Pinocitoza = captarea nespecific de ctre celul a unor picturi mici din lichidul
extracelular, prin vezicule. Orice material dizolvat n lichidul extracelular poate fi
internalizat ntr-o cantitate proporional cu concentraia sa.
Experimental au fost urmrite pe traseu vezicule de pinocitoz care conin peroxidaz,
veziculele foarte mici au fuzionat rezultnd vezicule mari care au fuzionat cu lizozomii.
2- Endocitoza mediat de receptori = proces in care receptorii specifici de pe
suprafaa membranei recunosc o molecul extracelular numit ligand de care se leag,
poriunea din plasmalem care conine complexe ligand- receptor este apoi endocitat.
3- Fagocitoza = const din captarea, ingerarea de particule de mrimi mari cum ar fi
fragmente celulare, bacterii. n corpul uman este comun macrofagelor, leucocitelor, care
distrug astfel bacteriile.
Veziculele formate prin fagocitoz au un diametru mai mare de de 1m. De asemenea,
o alt diferen fat de endocitoz const n faptul c, expansiunea membranei plasmatice n
jurul particulei fagocitate necesit participarea filamentelor de actin din imediata apropiere a
plasmalemei.
Materialele introduse n celul prin endocitoz fau fagocitoz pot fi depozitate n
vezicule intracelulare. De obicei, materialul ingerat intr n compartimentul lizozomal, unde
este degradat.
Fuziunea membranelor n procesul de endocitoz
Procesul de fuziune al membranelor este implicat, n afar de exocitoz, endocitoz i
fagocitoz, i n alte procese celulare importante. Separarea celulelor la sfritul mitozei,
fuziunea mioblatilor la formarea celulelor musculare scheletice multinucleate.
Procesul de fuziune a membranelor este un proces foarte complex pentru c
membranele nu pot fuziona spontan. Unul din obstacole l reprezint ncrctura intens
negativ a suprafeei celulare, dat de acidul sialic prezent n glicolipidele suprafeei celulare,
care determin ca membranele s se resping.
O alt problem o reprezint absena capetelor libere de membran, pentru ca fuziunea
s aib loc, bistraturile sau sferele membranare trebuie s se deschid.
Fuziunea membranar poate s fie indus artificial. Prin aceste metode s-a scos n
eviden c etapa importanta este apropierea ct mai strans dintre membrane sau aglutinarea
dup care are rol fuziunea propriu-zis.
Problemele fuziunilor sunt nc contradictorii. Exist ipoteza care sugereaz c
regiunile membranare ce vin n contact sunt lipsite de proteine membranare i astfel se
presupune c fuziunea are loc la nivelul lipidelor.
Fagocitoza este caracteristic mai ales formelor unicelulare de eucarioate. Acest proces
asigur protozoarelor glucidele, aminoacizii, lipidele precum i alte substane nutritive.
[note curs]
Page 46
[note curs]
Page 47
[note curs]
Page 48
[note curs]
Page 49
inserat o singur molecul de protein (proteina apo B), iar n interior particulei se afl o
cantitate semnificativ de molecule de colesterol (1500).
[note curs]
Page 50
[note curs]
Page 51
CAPITOLUL 7
ORGANITELE CELULARE CU ROL N TRANSPORTUL I
SELECTAREA INTRACELULAR A MOLECULELOR
Reticulul endoplasmatic
Aparatul Golgi
Lizozomii
Mecanismul transportului vezicular
Reticulul endoplasmic (RE) este un organit delimitat de endomembran, structurat sub
forma unor cisterne i/sau tubuli, cu numeroase anastomoze, a cror fa citoplasmatic
prezint, sau nu, rugoziti i a crui funcie de baz este aceea de a produce molecule i
macromolecule eseniale organizrii i funcionrii celulelor.
RE face parte din grupul organitelor implicate n biogeneza i traficul intracelular al
membranelor, alturi de aparatul Golgi, lizozomi i sistemul endosomal, fiind primul din
serie, adic cel care iniiaz procesele celulare care se desfoar n aceste organite.
Reticulul endoplasmic reprezint cea mai abundent structur delimitat de
endomembrane din celul, coninnd mai mult de jumtate din membranele acesteia.
Spaiul mrginit de aceste membrane formeaz lumenul reticulului endoplasmatic.
Exist dou tipuri de RE: RE rugos (RER) care este acoperit de ribozomi pe suprafaa
exterioar i are rolul de prelucrare a proteinelor.
REN (neted) care nu este asociat cu ribozomii, fiind implicat mai ales n metabolismul
lipidic.
RE i sinteza proteinelor
Biosinteza tuturor proteinelor ntr-o celul se iniiaz n citosol. Excepie fac proteinele
codificate de ADN-ul mitocondrial (puine; nu mai mult de 10% dintre proteinele necesare
funcionrii mitocondriei).
Reticulul endoplasmatic preia selectiv ptoteinele din citosol, nainte ca sinteza lor s se
fi terminat la acest nivel.
Se pune problema: cum tie RE care dintre complexele de biosintez proteic
(polisomi) trebuie s fie preluate la nivelul membranei sale? Informaia prin care se face
selecia se afl n nsui lanul polipeptidic n formare. Ea este o secven compact de 1530 aminoacizi hidrofobi .
[note curs]
Page 52
Exist dou tipuri de transport prin care circul proteinele sintetizate la nivelul
ribozomilor:
1- Transportul post-translaional proteinele destinate s rmn n citosol sau s fie
ncorporate n nucleu, mitocondrii, peroxizomi sunt sintetizate n ribozomii liberi
i eliberate n citosol cnd translaia lor s-a terminat, deci sinteza e finalizat.
2- Transportul co-translaional majoritatea proteinelor destinate secreiei sau
ncorporrii n RE, ap. Golgi, lizozomi sau membrane plasmatice, sunt sintetizate n
ribozomii legai la membran i transportate n RER pe msur ce translaia are loc.
n reticulul endoplasmatic, deoarece proteinele sunt translocate n timpul sintezei lor,
ribozomii responsabili pentru aceast sintez trebuiesc ataai pe membrana reticulului
endoplasmatic. Aceti ribozomi legai la membran, acoper suprafaa reticulului
endoplasmatic, formnd regiuni care delimiteaz reticulul endoplasmatic rugos (RER).
[note curs]
Page 53
[note curs]
Page 54
[note curs]
Page 55
[note curs]
Page 56
[note curs]
Page 57
Aparatul Golgi
Dup ce au fost sintetizate n RE rugos, majoritatea proteinelor se deplaseaz prin
intermediul veziculelor de transport ctre aparatul Golgi (Figura 7.3). Veziculele aparatului
Golgi sunt dispuse ntre reticulul endoplasmatic i membrana plasmatic, sau ntre reticulul
endoplasmatic i alte organite celulare cum ar fi lizozomii.
Aparatul Golgi este alctuit din saci membranari turtii si din vezicule asociate i se
caracterizeaz printr-o polaritate morfofuncional distinct (Figura 7.4).Se consider c
aparatul Golgi are 3 compartimente distincte :
1. Reeaua (faa) Golgi cis este orientat spre elementele tranziionale ale RE fiind
strns asociat cu acestea.
2. Pachetul de cisterne (faa median) care este format din ansamblul de vezicule
aplatizate, suprapuse i dispuse ntre feele cis i trans.
3. Reteaua (faa) Golgi trans este orientat spre periferia celulei i care se continu cu o
serie de formaiuni veziculare.
[note curs]
Page 58
[note curs]
Page 59
Lizozomii
Lizozomii sunt organite care conin o serie de enzime cu rol n degradarea intracelular.
Aceste structuri au n general form sferic i prezint o serie de variaii de mrime i form
ca rezultat al diferenei dintre coninutul n particule care au fost preluate pentru digestie.
Enzimele pe care le conin pot distruge toate tipuri de molecule polimer din celul: proteine,
acizi nucleici, carbohidrai i lipide.
Lizozomii funcioneaz ca un sistem digestiv al celulei, care fie degradeaz elemente
din afara celului endocitate, fie diger compui uzai din propria celul.
Lizozomii conin aproximativ 50 de enzime care pot hidroliza proteine, ADN, ARN,
polizaharide, lipide.
Enzimele hidrolitice acide sunt meninute n stare latent, n interiorul membranei,
activitatea lor nemanifestndu-se atta timp ct membrana lizozomal este integr.
Coninutul n enzime hidrolitice variaz n limite largi cu specia, tipul de esut, tipul de
celul, gradul de activitate sau momentul de activitate. Una din enzimele ubicviste, prezent
n toi lizozomii celulari, indiferent de specie, esut sau tipul celular este fosfataza acid,
enzim socotit marker a lizozomilor.
Membrana lizozomal este permeabil pentru produii de hidroliz (aminoacizi,
nucleotide) pe care iexcret n citoplasm unde sunt reutilizai. n structura acestei
membrane exist pompe de H+, care fac posibil ptrunderea protonilor (ATP dependent) ce
favorizeaz un pH acid (ph=5) n interiorul veziculelor. n restul citoplasmei pH este
meninut la 7,2
Lizozomii care au aspect omogen i sunt de talie mic (0,2-0,4 m) au un bogat
coninut de enzime hidrolitice i se numesc lizozomi primari sau de acumulare enzimatic.
Lizozomii cu matricea de aspect polimorf iau natere din lizozomi primari printr-un
proces de acumulare a unor materiale de provenien diferit i au fost denumii lizozomi
secundari.
Dup modul de formare i respectiv materialele incluse de vezicule lizozomii sunt
clasificai astfel:
A- endozomi sau heterolizozomi, n care sunt incluse materialele endocitate, aceste
vezicule se formeaz prin fuziunea lizozomilor primari (care conin enzime hidrolitice)
cu heterofagozomii (vezicule formate n urma fagocitozei, endocitozei sau pinocitozei).
[note curs]
Page 60
[note curs]
Page 61
Mucopolizaharidozele MPZ
Rezulta din deficitul unei enzime lizozomale necesara pentru
catabolismul glicozaminoglicanilor. Glicozaminoglicanii (GAG),
care sunt constituenii majori ai esutului conjunctiv, reprezint
carbohidrai compleci cu lan lung care sunt de obicei atasati
proteinelor pentru a forma proteoglicanii.
Caracteristicile clinice ale muco-polizaharidozelor rezult din
acumularea lizozomal de GAG parial degradat i nedegradat i
includ tipic facies cu trsturi aspre, grosolane, opacifiere corneana,
organomegalie, ankiloza articulaiilor, anomalii osoase, hernii,
statura unica i, n unele afecuni, retardare mentala.
Produii de degradare ai dermatanului, keratanului i
condroitin sulfatului sunt asociai cu manifestrile viscerale, iar
acumularea produilor de degradare ai heparan sulfatului determina
deficiena
mentala.
Constatrile de laborator includ prezena limfocitelor vacuolare pe
frotiul periferic i prezena de GAG n urin.
Hurlers sindrom este din categoria muco-polizaharidozelor
de tip I (MPZ-I) i se datoreaz absenei sau insuficienei enzimei L-iduronidaz, responsabil de degradarea mucopolizaharidelor n
lizozomi.
Enzima
este
necesar
pentru
matabolizarea
glicozaminoglicanilor (GAG). n prezena deficitului enzimatic,
acetia se vor acumula n lizozomii celulelor macrofage, determinnd
o suferin multisistemic: visceral, osoas i neurologic.
[note curs]
Page 62
CAPITOLUL 8
Page 63
[note curs]
Page 64
[note curs]
Page 65
Forma pieselor componente poate varia n cadrul membranei interne, ca i numrul lor.
n componenta lor poate s apar numai unul sau numai dou segmente n loc de 3.
n fiecare caz, membrana intern prezint o baz alctuit din citomembran n mozaic
sau trilaminat pe a crei fa intern se ataeaz segmentele izolate, de obicei cefalice, ale
subunitilor.
Particulele elementare s-au dovedit a conine fiecare lanul transportor de electroni
(lanul respirator) i enzimele respective (citocromoxidaza, succin coenzima Q reductaza,
NADH citocrom C reductaza, citocrom a, b, c) precum i enzimele procesului de fosforilare
oxidativ.
Proteinele majore din membrana intern sunt:
ATP-sintetaza care produce ATP n spaiul matriceal
Proteine specifice de transport
Enzimele reaciilor oxidative ale lanului respirator.
NADH constituie substratul cap de serie al transportului de electroni, spre oxigenul
molecular, de-a lungul lanului enzimatic respirator.
Cristele mitocondriale difer ca numr i poziie de la o celul la alta, n raport cu
diferitele condiii fiziologice sau patologice. Astfel, la o diet alimentar carenial, crestele
mitocondriale se terg, dispar, relundu-se dieta normal ele se refac dac starea precar nu a
depit limita metabolic fiziologic. Cristele mresc suprafaa membranei, crete capacitatea
mitocondriei de a genera ATP.
Cristele mitocondriale pot fi aezate perpendicular pe axul mare al mitocondriei, sau
paralel cu acesta. n hepatocit aria membranei interne a mitocondriei este de 5x mai mare
dect aria membranei externe, iar suprafaa membranei interne este de 15x mai mare dect
membrana plasmatic. n celulele musculare (scheletice, cardiace) de 3x mai multe criste
dect n celule hepatice.
ntre membrana extern i intern se afl compartimentul extern, iar compartimentul
intern (matricea mitocondrial) este delimitat de membrana intern i cristele mitocondriale.
Compartimentul extern- este cuprins ntre membrana extern i intern i are aspect
omogen. La acest nivel se realizeaz un schimb intens de ap i electrolii ntre mediul
extramitocondrial, pe de o parte i compartimentul intern pe de alt parte.
Aici se pot acumula unii ioni (Ca2+) care apar sub form de zone mai mari sau mai mici
izolate, sau conglomerate dense la fluxul de electroni. Ionii de calciu trebuie s se menin la
nivel sczut n citoplasm.
Compartimentul intern sau matricea mitocondrial poate prezenta la microscopul
electronic, fie aspect omogen fie granular. La nivelul ei se gsesc localizate o bun parte din
enzimele mitocondriale care sunt n numr de 200 de fiecare mitocondrie (ATP-aza, malat
dehidrogenaza).
Tot n matrice se gsesc i acizii nucleici mitocondriali.
Datorit permeabilitii ridicate a membranei externe, spaiul intermembranar este
ocupat de un fluid asemntor citosolului.
n spaiul intermembranar se afl enzimele fosforilate ale celorlalte nucleotide utiliznd
ATP ca donor de resturi pirofosfat. n acest spaiu sunt sintetizate formele trifosfat ale
ribonucleotidelor i dezoxiribonucleotidelor utilizate n sinteza acizilor nucleici i a GTP
implicat ca surs energetic n sinteza proteinelor i n sinteza de cGMP (guanozin 5,3
monofosfat ciclic).
Lumenul mitocondrial, delimitat de membrana intern, n care proemin crestele, este
ocupat de matricea mitocondrial. n matrice exist 5-10 molecule de ADN mitocondrial
circular, ribosomi mitocondriali de tip bacterial (70s), ARNm mitocondrial, ARNt i
[note curs]
Page 66
[note curs]
Page 67
- 2-5% vitamine (A,C), protein-enzime (200), diferii ioni i acizi nucleici: ADN, ARN,
la care compoziia molecular este asemntoare acizilor nucleici nucleari i citoplasmatici,
dar aranjamentul structural al moleculei difer.
Prezenta acizilor nucleici n mitocondrie face ca organitul s cstige o parial
autonomie genetic care presupune:
Formarea de ctre organit de noi molecule de ADN prin acelai proces de duplicare
semiconservativ, ntlnit n nucleu.
Sintetizarea moleculelor de ARN mitocondrial dup mecanismul similar din nucleu.
Sintetizarea unor proteine structurale, n special cele destinate membranelor.
Acizii nucleici mitocondriali sunt localizati de obicei ntr-o singur zon a organitului
care se numeste zon nucleoid. n unele mitocondrii pot exista 2-6 zone nucleoide.
Genomul mitocondrial uman codific 13 proteine implicate n transportul electronilor i
fosforilarea oxidativ.
De asemenea, genele ADN mitocondrial codific i formarea ARN ribozomal (16S i
12S) ct i 22ARNt care sunt necesare pentru translaia proteinelor specifice.
Ca i ADN nuclear, cel mitocondrial poate suferi mutaii. Aceste modificri sunt
transmise pe linie matern. Mutaiile unei gene ce codific formarea ARNt mitocondrial sunt
asociate cu modificri metabolice ce cauzeaz obezitatea i diabetul.
Proteinele prezente n mitocondrii sunt mai puin cunoscute dect ADN mitocondrial.
La mamifere sunt n jur de 1000-1500 de astfel de proteine. Se consider c, mitocondriile
din esuturi diferite au proteine diferite ceea ce poate explica funcionarea specializat a
celulelor. Procesele de modificare a formei mitocondriale sau succesiunea acestor organite n
celule sunt asociate, de asemenea, cu diferenele biochimice ale acestor structuri, de la o
celul la alta.
[note curs]
Page 68
[note curs]
Page 69
[note curs]
Page 70
Page 71
Aceti trei compui intr n cadrul ciclului tricarboxilic, etapa oxidrii terminale a
tuturor alimentelor.
Mitocondria este organitul la nivelul cruia se realizeaz aceste reacii complexe ale
catabolismului.
Izolarea primelor mitocondrii intacte de ctre G.E. Palade, care a stabilit structura lor
electronomicroscopic, a permis studiul activitii multienzimatice ale acestui organit,
denumit cicloforaz, deoarece n mitocondrie are loc oxidarea substraturilor n cadrul
ciclului Krebs i Lynen.
Membrana intern i matricea, reprezint situsul tuturor reaciilor de oxidare a
piruvatului i acizilor grai la CO2 i H2O, precum i sinteza cuplat a ATP din ADP i Pi.
PPi+ H2O
2ADP + 2Pi
2Pi
2 ATP
Aceste procese complexe cuprind mai multe etape i pot fi subdivizate n trei grupuri
de reacii, fiecare desfurndu-se n anumite compartimente ale mitocondriei.
1- Oxidarea piruvatului i a acizilor grai la CO2, cuplat cu reducerea transportorilor de
electroni NAD+ i FAD, la NADH+ H+ i FADH2.
Aceste reacii au loc la nivelul matricei mitocondriale.
2- Transferul electronilor de pe NADH + H+ i FADH2, la O2
Aceste reacii sunt desfurate la nivelul membranei interne i sunt cuplate cu
generarea unui gradient electrochimic de protoni de o parte i de alta a acesteia.
3- Utilizarea energiei nmagazinate n gradientul transmembranar de protoni, pentru
sinteza de ATP, de ctre ATP sintetaz, aflat la nivelul membranei interne.
Ultimele dou grupuri de reacii implic intervenia unor proteine complexe care sunt
orientate asimetric n membrana mitocondrial intern.
Cristele mitocondriale mresc mult suprafaa, ceea ce crete capacitatea mitocondriei
de a genera ATP. De exemplu, ntr-o mitocondrie din celulele hepatice, aria membranei
interne este de cinci ori mai mare dect aria membranei externe, iar suprafaa total a
membranelor interne mitocondriale dintr-o celul, este de 15 ori mai mare dect aria
membranei plasmatice.
n celulele musculare cardiace i scheletice, mitocondriile conin de trei ori mai multe
criste dect mitocondriile hepatice. Cristele mitocondriale din celulele diferitelor esuturi se
pliaz n moduri foarte variate, dar semnificaia acestor diferene morfologice este nc
inexplicabil.
Ansamblul cunotintelor privind respiraia au fost integrate graie lucrrilor lui A.
Szent-Gyrgyi, n teoria dublei activri. Prin dehidrogenarea substratului se pierd, datorit
dehidrogenazelor, unul sau mai muli hidrogeni care imediat sunt activai.
AH2
A+ 2H
2H+ + 2e-
[note curs]
2 O-
Page 72
Page 73
Dup alimentaie, cea mai mare parte a acetil Co-A provine din glucoz ingerat, iar
excesul de glucoz este folosit pentru completarea rezervelor de glicogen care au fost
consumate, sau pentru sinteza de lipide.
Page 74
Cea mai important contribuie a ciclului Krebs este extracia electronilor de nalt
energie prin oxidarea celor 2 atomi de C ai radicalului acetil. Aceti electroni tranzitoriu
preluai de NADH i FADH2 (flavin-adenin-dinucleotid) sunt rapid transferai n lanul
respirator de pe membrana intern mitocondrial.
Majoritatea enzimelor ciclului Krebs sunt hidrosolubile, fiind localizate n matricea
mitocondrial. Sunt, de asemenea, localizate la nivelul membranei interne: succinat
dehidrogenaza i cetoglutarat dehidrogenaza.
n afar de calea descris, glucoz poate fi degradat pe ci accesorii, cum este calea
fosfogluconatului, o bucl metabolic de la nivelul glucozo-6-fosfatului, n care intervin o
serie de reacii metabolice intermediare.
n condiii normale, 30% din glucoza hepatic i 5% din cea muscular, sunt
metabolizate pe aceast cale, important att pentru sinteza lipidelor, ct i ca metabolism
suplimentar care asigur degradarea glucidelor n anumite anomalii enzimatice congenitale,
care efectueaz metabolizarea pe cale principal.
Pe aceast cale, o molecul de glucoz este consumat prin mai multe cicluri, genernd
dioxid de carbon i hidrogen.
Atomul de hidrogen eliberat nu este preluat de NAD, ca cel rezultat din calea
metabolic major, ci de NADP (coenzima II), fiind ulterior transferat de FAD cu ajutorul
unei transhidrogenaze.
Transferul electronilor de la NADH + H+ i FADH2 la O2
Degradarea complet a glucozei are ca rezultat formarea 6 molecule de CO2,
concomitent cu reducerea a 10 molecule de NAD la 10 NADH + H+ i a 2 FAD la 2 FADH2
Oxigenul molecular O2 este utilizat pentru a reoxida aceste coenzime reduse. La
nceput coenzimele i transfer perechea de electroni la molecule acceptor situate n
membrana intern a mitocondriei.
Pierderea electronilor regenereaz forma oxidat a coenzimelor (NAD i FAD),
reducnd acceptorul.
Energia care se elibereaz prin oxidarea unei singure molecule de de NADH sau
FADH2 de ctre O2 este suficient pentru a susine sinteza mai multor molecule de ATP.
De aceea, oxidarea NADH i sinteza de ATP nu pot avea loc ntr-o singur reacie, ci
transferul electronilor trept cu trept de la NADH la O2, prin intermediul proteinelor care
formeaz lanul transportor de electroni.
Protonii sunt pompai prin membrana mitocondrial intern n spaiul intermembranar,
generndu-se un gradient de concentraie protonic, n interior matricea devine negativ.
Deplasarea protonilor prin membrana intern, n sensul gradientului de concentraie, napoi n
matrice, se face prin punerea n micare a unei enzime ATP-sintetaz.
ATP- sintetaza este o protein membranar complex care realizeaz sinteza ATP din
ADP i Pi (fosfat anorganic).
Lanul transportor de electroni
Au fost identificate mai multe complexe enzimatice, respiratorii, implicate n transferul
electronilor de la NADH +H+ la O2.
1. Complexul I NADH-coenzima Q-reductaz sau NADH-dehidrogenaza este cel
mai mare complex enzimatic respirator, enzima coninnd 22 de lanuri
polipeptidice. Are rolul de a accepta electronii de la NADH i de a-i transfera prin
intermediul unei molecule mici liposolubile (ubiquinona= coenzima Q).
[note curs]
Page 75
Funcia
inhibitor transport e
inhibitor transport e
inhibitor transport e
inhibitor transport e
inhibitor transport e
Localizarea aciunii
Complex I
Complex I
Complex III
Complex IV
Complex IV
Azida
2,4,-dinitrofenol
Pentaclorofenol
Oligomicin
inhibitor transport e
Decuplani
Decuplani
Inhibitor ATP sintetaz
Complex IV
Transportor transmembranar de H+
Transportor transmembranar de H+
ATP sintetaz
[note curs]
Page 76
[note curs]
concentraiilor
de
Page 77
[note curs]
Page 78
[note curs]
Page 79
Peroxizomii
Sunt organite mici, de form sferic sau oval cu diametrul ntre 0,2-1,7 m,
considerate cu implicaii metabolice, inclusiv cele legate de metabolismul energetic.
Peroxizomii conin enzime implicate n diferite reacii metabolice. Aproximativ 85 de gene
sunt cunoscute, n genomul uman, ca fiind implicate n codificarea proteinelor peroxizomilor.
Aceste proteine numite peroxine (Pex 1, Pex2) sunt sintetizate la nivelul ribozomilor liberi i
apoi sunt importate n peroxizomi, ca i lanuti polipeptidice complete.
Peroxizomii sunt dispersai n citosol i uneori asociai la alte organite (mitocondrii) sau
incluziuni citoplasmatice.
Compoziia chimic i funciile peroxizomilor
Membrana peroxizomilor conine 30%
lipide i 70% proteine, compoziie
asemntoare cu a reticulului endoplasmatic (cele dou membrane sunt srace n colesterol,
iar fosfolipidele sunt n proporii similare).
Membrana peroxizomilor este permeabil pentru ap i molecule mici, dar este
impermeabil pentru NAD i NADP.
Peroxizomii conin n interiorul lor cel putin 50 de enzime, care sunt implicate n
diferite ci biochimice, specifice diferitelor tipuri de celule.
Enzimele peroxizomilor sunt oxidazele flavinice (cu grup prostetic FAD sau FMN)
care realizeaz n organit reaciile de oxidare.
Aceste enzime catalizeaz oxidarea unor substraturi, cum ar fi acidul uric, aminoacizii
i acizii grai, pornind de la oxigenul molecular.
Rezultatul acestor reacii de oxidare este producerea peroxidului de oxigen (H2O2).
Deoarece acesta este toxic pentru celule, intervine o alt enzim a peroxizomilor, catalaza,
care descompune peroxidul de hidrogen, fie prin transformarea sa n ap, fie prin utilizarea sa
la oxidarea altui compus organic (etanolul).
n peroxizomi au loc din oxidrile acizilor grai, restul se desfoar n mitocondrii.
Se consider c peroxizomii oxideaz acizii cu lan lung de atomi de carbon, dup ce lanul sa scurtat la 6 atomi de C, urmeaz oxidarea lui n mitocondrii.
Peroxizomii sunt implicai i n biosinteza lipidelor. n celulele animale, colesterolul i
dolicolul sunt sintetizai n peroxizomi, precum i n reticulul endoplasmatic. Tot rol n
sinteza este evideniat i n ficat unde peroxizomii sunt implicaii n sinteza acizilor biliari
care sunt derivai din colesterol.
Peroxizomii conin enzime necesare pentru sinteza plasmalogenilor (fosfolipide), n
care unul din lanurile hidrocarbonate este legat de glicerol printr-o legtur eteric i nu
esteric.
Plasmalogenii sunt componente prezente numai n membrana din celulele esutului
cardiac sau ale creierului.
[note curs]
Page 80
Asamblarea peroxizomilor
Proteinele destinate peroxizomilor sunt sintetizate la nivelul ribozomilor liberi citosolici
i ajung la peroxizomi ca lanuri polipeptidice complete.
Fosfolipidele sunt de asemenea, importante n peroxizomi prin proteinele de
interschimb lipidic care transport de la nivelul situsului lor de sintez (reticulul
endoplasmatic). Importul de proteine i fosfolipide determin creterea peroxizomilor i apoi
noii peroxizomi se formeaz prin diviziunea vechilor peroxizomi, n acelai mod ca
mitocondriile i cloroplastele.
Sunt proteine de tipul Pex3, Pex19, care funcioneaz ca i receptori pentru alte
peroxine, care ptrund prin cel puin dou ci cunoscute.
Majoritatea proteinelor sunt orientate, ctre peroxizomi, printr-o secven simpl de
aminoacizi SER-LYS-LEU la nivelul extremitii carboxil (semnalul 1 de orientare
PTS1).
Alte proteine sunt orientate printr-o secvena de 9 aminoacizi (PTS 2) prezent la
extremitatea amino.
n cazul n care apar mutaii ale genelor care codific proteine
componente ale peroxizomilor, apar boli grave. Un exemplu este
sindromul Zellweger, care este letal, n primii 10 ani de via. Cauza
acestui sindrom este apariia unor mutaii ale genelor care codific
sinteza proteinelor cu rol de receptor pentru semnalele PTS1.
[note curs]
Page 81
[note curs]
Page 82
[note curs]
Page 83