Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Abstract
Profilul electrochimic (EC) care utilizeaz electrodul tiprit placat cu nanoparticule de cupru
(Cun-SPE) a prezentat selectivitate i sensibilitate specific fa de peptidele care ar putea
diferenia n mod eficient carnea de strut. Din carne de porc, carne de vit i de pui i s evalueze
calitile i prospeimea crnii de strut. Cele patru crnuri au fost difereniate n 5 minute prin
profile cromatografice caracteristice, care constau doar din patru vrfuri majore. Identificarea
vrfurilor prin LC / MS / MS a sugerat c n timp ce lizina i glutamina au fost prezentate ca
componente comune, anserina a fost specific crnii de pasre i carnosina a fost peptida lips
caracteristic celei de stru n profilul CE. Analiza statistic (curba ROC) a demonstrat c
rapoartele de vrf ar putea fi utilizate pentru a evalua carnea de stru cu sensibilitate ridicat
(pn la 95%) i specificitate (pn la 100%). Efectele temperaturii de depozitare i timpul au
fost studiate pentru utilizarea potenial a Cun-SPE pentru a evalua prospeimea crnii. Aceast
metod HPLC-EC prea a fi superioar deteciei UV n ceea ce privete simplitatea profilului i
lipsit de procesul de derivatizare sau proceduri complexe de extracie a probelor, ceea ce o face o
metod adecvat pentru diferenierea rapid de rutin de carne de stru din specia comun de
carne cu capacitatea de a diferenia simultan graficul crnii de stru.
1.Introducere
2.Metode i materiale
2.1. Prepararea extractelor de carne
Patru specii de carne au fost incluse n acest studiu. Pentru asigurarea prospeimii
esuturilor, carne crud de bovine, porcine si pui au fost achiziionate de la supermarketuri locale
din oraul Taichung, Taiwan. Crnurile de stru au fost obinute proaspete de la un abator
contractant asociat cu Asociaia Taiwanez de Strui Domestici. Buci de carne proaspt au fost
procesate imediat, iar celelalte pri rmase nefolosite au fost depozitate la -20 n congelator.
Cincizeci de grame de carne slab au fost tiate in buci mici i apoi tocat nainte 5 g au fost
omogenizate cu 10mL faz mobil (40 mM tampon fosfat, pH 7,8) cu un bio-agitator. Un extract
crud a fost obinut filtrnd ulterior prin tifon si apoi centrifugat la 10.000 rpm timp de 15 minute
la t 25. Supernatantul rezultat a fost filtrat secvenial prin filtre cu siringa de 0.45 si 0.22 m i
un alicot de 20 L din filtratul final a fost injectat n analiza HPLC-EC.
2.2.Analiza HPLC-EC
n scopul studiului, condiiile HPLC-EC au fost modificate dintr-un raport anterior care
difereniaz speciile de carne (Chou i colab., 2007). Pe scurt, un sistem HPLC (pompa
inteligent Hitachi L-6200, Hitachi Ltd., Tokyo, Japonia) a fost conectat la un analizator
electrichimic CHI 721B (CH Instruments, Austin, TX, SUA) i detectat printr-un dispozitiv de
analiz a fluxului de injecie utiliznd sistemul cu trei electrozi constnd dintr-un electrod de
lucru de unic folosin (Cun-SPE, electrod placat cu nanoparticle de cupru tiprit, Zensor R &
D, Taichung, Taiwan), un electrod de referin Ag / AgCl i electrod auxiliar din platin. S-au
efectuat separri cromatografice utiliznd o coloan pe baz de silice (Zorbax Eclipse AAA, 5
lm, 4,6 mm, tehnologia Agilent Inc., Santa Clara, CA, SUA) i 10 mM fosfat de sodiu, pH 7,8 ca
faz mobil. Condiiile de analiz au fost: potenialul de detecie 0,05 V, timpul de funcionare
500 s, injectare 20l. Toate experimentele au fost efectuate n trei exemplare pentru bucile de
carne obinute de la diferii furnizori. Timpii de retenie i zona din toate vrfurile majore au fost
nregistrate ca profilul cromatografic pentru compararea speciilor. Un vrf major a fost n mod
obinuit definit ca orice vrf cu o suprafa care depete 10% din suprafaa total a vrfurilor
din ntreaga cromatogram.
Prin convenie, carnea de stru a fost n mod convenabil clasificat n trei categorii
(premium, ridicat, corect) bazate pe gust, textura si raritatea muchilor. Fiecare categorie
coninea 3-8 pri de carne (n total 16 pri) reprezentnd muchi din diferite zone anatomice ale
struului. Demonstraia anatomic a fiecrei pri i categoriile aparintoare au fost artate n
tabelul 1. Profilele cromatografice a fiecrei pri de carne au fost analizate precum mai sus i
profilele cromatografice incluznd timpul de retenie, numrul major de vrfuri i zona au fost
nregistrate pentru comparaie.
Programul de statistic pentru tiine sociale (PSSS) pentru Windows a fost utilizat pentru
analiza statistic. Carnea de stru a fost clasificat n trei categorii numite premium, nalt,
corect. Pentru compararea mijloacelor de raport zonal dintre dou vrfuri ntre aceste trei
categorii a fost aplicat analiza de variaie (ANOVA) urmata de testul Tukey pentru comparaie
pe perechi. Penru a determina care zon raport dintre cele doua vrfuri poate fi utilizat pentru
clasificarea crnii de strut, a fost efectuata analiza receptorului curbelor caracteristicilor
operative. Utiliznd o list cu specificaii i sensitiviti pentru pentru valorile limit ulterioare,
curba ROC a fost construit i aplicat pentru a determina o valoare optim limit de tiere. Zona
de sub curba ROC a fost de asemenea aplicata pentru a compara diferite metode de diagnostic;
cu ct este mai mare AUC, cu att mai bun este testul diagnostic. Sub presupunerea non
parametric, eroarea standard pentru AUC a fost calculat iar valoarea p obinut. O valoare p
mai mic dect 0.05 nseamn c AUC este statistic diferit de 0.5.
2.6.Metodele LS-MS
3. Rezultate si discuii
3.1 Diferena dintre carnea de stru i LC/MSn privind vrfurile specifice ale speciei
Patru specii de carne pot fi difereniate dup profilul carecteristicii cronomatografice avnd
doar patru vrfuri majore timp de 5 minute. Un vrf specific aviarelor, de 3,5 minute a fost
identificat ca diferen fa de mamifere. Carnea de stru poate fi suplimentar difereniat faa de
vit i porc prin absena vrfului 2 (ca.180s). Vita si porcul mpart acelai profil major de vrf
nainte de 5 minute, dar pot fi usor difeniate de rapoartele vrf 1/ vrf 2 i vrf2/ vrf3, dar i de
un vrf suplimentar de aproximativ 10 minute pentru porc. Simplitatea profilului cu 4 vrfuri
este un mare avantaj i o mbuntire fa de cromatogramul cu UV pentru identificarea
speciilor i economisirea timpului de la metodele bazate pe biologie molecular. succesul acestei
metode EC poate fi datorat combinaiei dintre o sensibilitate optim i selectivitatea a
aminoacizilor i/sau mici peptide bazate pe mecanismul CunSPE. Acest nou electrod este
modificat la suprafa cu nanoparticule de Cu care permit detectarea cu sensibilitate a
aminoacizilor la diferite grade de specificaie i n acelai timp intensiv pentru proteinele mari.
Acest caracter special permite acestui electrod sa determine selectiv aminoacizii i peptidele din
matricea bogat d proteine, al crei caracter permite fucionarea ei ca o unealt n scopul acestui
studiu.
Un factor confuziv pentru validitatea metodei a fost starea de prospeime a probei n care este
degradat proteina muscular, ar putea afecta dimensiunea i aria vrfurilor detectate.
Cromatogramele de carne de stru, pui i carne de porc incubate la 25 C sau 4 C timp de pn
la 9 zile nu au evideniat modificri calitative n profilurile n care au fost reinute aceleai valori
ale vrfurilor majore i timpii de retenie respectivi i nu s-a evideniat nici o diferen fa de
profilul din extractele de carne proaspt. Singura excepie a fost un vrf suplimentar produs la
24 de ore n grupul de carne de vit de 25 C (figura 3). n schimb, s-au observat schimbri
cantitative ale ariei vrfului (n cea mai mare parte declinul) care au fost asociate cu temperatura
i timpul. Prin urmare, a fost posibil urmrirea modificrilor dinamice ale cromatogramei i
utilizarea acestora pentru a accesa gradul de scdere a vrfului ca msur a ratei de degradare n
diferite condiii de mediu. De exemplu, prin utilizarea vrfului 1 ca vrf de marker i a timpului
la care a fost atins suprafaa de vrf similar, rata scderii / degradrii suprafeei a fost de
aproximativ trei ori mai rapid la 25 C dect la 4 C (Fig.3A versus B) la pui (60-72 ore vs. 9
zile) i carne de porc (48-60 ore vs. 6-8 zile) i de nou ori mai rapid la carnea de strut (24 ore
vs. 9 zile) i carne de vit (48 ore vs. ). Proteoliza postmortem dicteaz profilurile cromatografice
care analizeaz componentele proteice (Lamatsch, Roepstorff, & Bendixen, 2002). Mai multe
sisteme proteolitice endogene, incluznd sistemul calpain-calpastatin, mediaz degradarea
proteinelor miofibrilare i citoscheletale (Maltin, Balcerzak, Tilley, & Delday, 2003). Totui,
raportul a sugerat c majoritatea proteolizelor apar ntre 3 i 14 zile post mortem. Acest lucru i
faptul c nu s-au detectat noi peptide mici n profil au indicat c n intervalul de timp conceput n
acest studiu, prospeimea are doar efecte limitate la profilul cromatografic. Cu toate acestea,
metoda a permis nc detectarea modificrilor dinamice ale procesului proteolitic, aa cum se
arat n zona de vrf a vrfului sczut treptat, care merge mpreun cu perioada de monitorizare.
n concluzie, a fost elaborat o metod HPLC-EC cu selectivitate specific i sensibilitate optim
la peptidele musculare pentru a diferenia efectiv carnea de strut de porc, carnea de vit i pui i
pentru a evalua diferitele grade i prospeimea crnii de stru. Cele patru tipuri de carne ar putea
fi difereniate n 5 minute prin profile cromatografice caracteristice, care constau doar din patru
vrfuri majore, prezise ca fiind lizin, carnosin, anserin i glutamin. Rezultatele LC / MS /
MS au sugerat c falsificarea carnii de stru poate fi identificat prin prezena unui coninut
ridicat de carnosin, bogat n carne de pui, carne de vit i de porc, dar foarte sczut n stru.
Analiza statistic (curba ROC) demonstreaz c rapoartele de vrf ale crnii de strut n profilul
EC ar putea fi utilizate pentru evaluarea claselor de carne de stru (niveluri de pre) cu
sensibilitate i specificitate ridicat. n plus, schimbarea dinamic a profilurilor EC asociate cu
temperatura i timpul de depozitare a fost promitoare n aplicarea potenial a acesteia pentru a
evalua prospeimea crnii. Aceast metod HPLC-EC pare s fie superioar deteciei UV n ceea
ce privete simplitatea profilului i lipsit de derivatizare sau proceduri complexe de extracie a
probei, ceea ce l transform ntr-o metod adecvat pentru diferenierea rapid de rutin a crnii
de stru din specia comun de carne cu abilitatea de a diferenia simultan calitatea crnii de stru.