Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
GENETICĂ BACTERIANĂ
•Genetica–studiul caracterelor ereditare și al variației acestora
•Genă–segment ADN care codifică prin secvența nucleotidelor un produs specific (ARN,
proteină)
•Genom–totalitatea genelor unui organism
•Genotip–ansamblul genelor care codifică anumite caractere ale unui organism
•Fenotip–ansamblul caracterelor structurale sau funcționale ale unui organism, rezultate din
expresia unor gene
Structura ADN
•Gena-secvența ADN care codifică un caracter, precum și regiunile reglatorii care
controlează expresia genei
ADN-ul
•moleculă mare, compusă din unităti repetitive similare: deoxiribonucleotide
deoxiribonucleotid= 2’ deoxiriboză+ fosfat+ baza azotată
•purinică(Adenina, Guanina)
•pirimidinică(Citozina, Timina)
Structura ADN
•ADN –obișnuit dublu catenar
•Cele două lanțuri ADN -menținute prin legăturile de H dintre o anumită bază purinică și
baza pirimidinică complementară (A =T, G C)
•lungimea unei molecule ADN se măsoară în perechi de baze (pb)
•1 kpb = 1000 pb
Cele două lanțuri ADN sunt:
Localizarea ADN
•eucariote –ADN d.c.
–nuclear -cromozomi liniari multipli de diferite mărimi
–mitocondrial –cromozom circular
•virusuri
–moleculele de ADN relativ mici, m.c.sau d.c, lineare sau circulare
–există și virusuri ARN (lipsite de ADN)
ARN
•în general monocatenar, de aceea este capabil de pliere, cu formarea unor structuri
secundare și terțiare complexe
•numeroase funcții:
transfer al informației genetice de la ADN la ribozomi (ARNm)
transfer al unor aminoacizi (ARNt)
enzimatică (ribozime, ex. peptidil transferaza din ribozomi)
reglatoare –interacționează prin complementaritate și interferă cu translația unor
ARNm
Tipuri de ARN
1. ARN ribozomal
–intră în compoziția celor 2 subunități ribosomale, impreună cu proteine
–codificat de gene cromozomale (impropriu numite ADNr)
–ARN 16S are și activitate catalitică
2. ARN mesager
•transmite ribozomilor informația stocată în secvența ADN
•ARN m.c. cu lungimede aproximativ2 kb
•Fiecare secventa ARNm exista in celula in mai multe copii
•Marimea si diversitatea populatiei ARNm (formata din totalitatea secventelor de ARNm din
celula) depind de tipul celulei și de starea sa fiziologică, deoarece reflectă genele exprimate
la un anumit moment
•La procariote ARNm este policistronic (codifică mai multe polipeptide)
3. ARN transfer
–interacționează specific cu un anumit aminoacid
–complexul aminoacil –ARNt este recunoscut de ribozomi
–ARNt interacționează prin anticodon cu codonul complementar al ARNm
Genomul bacterian
Componente:
A.Cromozom
B.Plasmide
C.Elementegeneticemobile
Replicon = ADN circular care conține informația necesară pentru propria replicare (posedă
genelecare codificăstructurilenecesarepentrureplicare)
•cromozomul bacterian și plasmidele sunt repliconi
A. Cromozomul bacterian
•moleculă unică de ADN d.c. circular
•conține genele care codifică toate caracterele esențiale menținerii viabilității
•haploid
•2000 –4000 gene, 500 –5000 kb
•atașat unui situs membranar de replicare
•intens plicaturat
•1-2 mm lungime(ex. cromozomulE coli -1300 μm lungime, dimensiunilebacteriei1μm x
3μm);
•ocupă 10% din volumulcelulei
B. Plasmide
•elemente genetice extracromosomale
•atașate unui situs membranar de replicare
•au autonomie replicativă (replicon)
•mult mai mici decât cromozomul (<5%)
•prezente doar la unele bacterii (caracter de tulpină)
•intr-o celulă bacteriană pot exista unul sau mai multe plasmide (identice sau distincte)
•într-o populație bacteriană plasmidele pot realiza transferul unor gene care codifică variate
caractere (ex. rezistența la antibiotice)
Plasmidele conțin:
C. Elemente transpozabile
Bacteriofagi (fagi)
•virusuri care se replică in celule bacteriene
•specifice unei specii bacteriene
•Structură
Lizotipare
Fag temperat
•In stadiul de profag genele vegetative sunt represate, fiind exprimate doar genele
responsabile de replicarea genomului; uneori și gene exprimate in fenotipul bacterian
(caractere noi)
Conversie lizogenică – apariția unui caracter nou (ex.producerea unei toxine) la bacterii
care găzduiesc un profag
Bacterie lizogenă – bacterie care găzduiește un profag (după un număr de diviziuni ale
celulei bacteriene profagul va activa genele vegetative, va intra in ciclul litic și va induce liza
bacteriei si eliberarea de fagi infectiosi)
Etape
1. inițierea –la nivelul originii replicării
2. elongarea – sinteza unei noi catene ADN, pe baza complementarității; fiecare catenă
parentală este utilizată ca matriță
3. terminarea replicării
•ADN polimeraza I
-ADN polimerază ADN dependentă
-desface fragmentele ARN utilizate ca primeri (RNAză H) și le inlocuiește cu fragmente ADN
nou sintetizate
-are activitate exonucleazică 5` -3`și 3` -5`
•Topoizomeraze
-se fixează pe ADN d.c. inaintea furcii de replicare
-reduc forța de torsiune rezultată din derularea ADN de către helicaze, prin tăierea și lipirea
imediată a uneia (topoizomeraza I) sau ambelor catene ADN (topoizomeraza II); ADN giraza
este cea mai importantă topoizomerază II descrisă la Escherichia coli
-realizează desprinderea celor doi cromozomi la sfârșitul replicării
Etapele transcrierii:
1. inițierea - ARN polimeraza interacționează cu secvența promotor
2. elongarea - o catenă ADN este utilizată ca matriță de către ARN polimeraza ADN-
dependentă care sintetizează ARN-ul complementar (sinteză unidirecțională,5` 3`);
3. terminarea - ARN polimeraza recunoaște secvența terminator și se desprinde de ADN
•deoarece ADN-ul bacterian nu conține introni iar ARN-ul rezultat din transcriere
funcționează ca ARNm
•ARNm bacterian – policistronic (codifică produsele genelor grupate intr-un operon)
Etape:
1. Inițierea – începe la capătul 5` al ORF -asocierea subunității ribosomale 30S, ARNm, ARNt
formilmetionina (codon start AUG), apoi si subunitatea 50S, factor de inițiere
2.Elongarea – aminoacil-ARNtsintetaza atașează câte un aminoacid la lanțul peptidic format
•Fiecare ARNm poate fi tradus simultan de mai mulți ribosomi
•Polisom–ARNm cu mai mulți ribosomi
•continuu – gene care codifică produși esențiali pentru viabilitatea celulei in orice condiții de
mediu (gene constitutive)
•intermitent - gene care codifică produși necesari doar in anumite condiții; expresia lor este
controlată la nivel
Exemple
•Represia unor gene vegetative in cursul sporulării; inducția acelorași gene declanșează
germinarea (prin modificarea specificitatii ARN polimerazei)
•Inducția sintezei unor β-lactamaze de către antibiotice β-lactamice
•Inducția unor pompe de eflux de către subst. toxice (antibiotice, dezinfectante etc)
Variația bacteriană
Fenotipică
•Indusă de interactiunea genomului cu factori de mediu
•Reversibilă
•Nu se transmite ereditar
•Prin controlul la nivel transcripțional, translațional sau posttranslațional
Genotipică
•Modificare bruscă, (spontană sau indusă)
•Ireversibilă
•transmisibilă ereditar prin mutații, transfer de ADN și recombinare genetică
A. Mutații
Tipuri
•Substituții – modifică un singur nucleotid dintr-un codon, care astfel poate deveni codon
– sinonim – nu se modifică aminoacidul codificat
– nou – modificarea secvenței de aminoacizi (mutație cu sens greșit)
– non-sens – sinteza unui peptid incomplet (mutație non-sens); dacă mutația non-sens
este in prima genă structurală a unui operon – mutatie polară
•Microinserții, microdeletii – inserția sau deleția a unul sau mai multe nucleotide (mutații
cu schimbare de proiect)
B. Transfer genetic
•la eucariote se realizează doar prin transfer la următoarea generație - transfer vertical
•la procariote se poate realiza și între indivizi din aceeași generație (din aceeași specie sau
din specii diferite) –transfer orizontal
•Bacteriile utilizează endonucleaze de restricție pentru a se apărade ADN-ul străin
•Transferul orizontal -limitat la fragmente mici de ADN provenit de la o bacterie donor
Endonucleaze de restricție
•recunosc secvențe specifice de 4-10 pb care constituie un palindrom(se citesc identic in
ambele sensuri)
•desfac legăturile fosfodiesterice ale ambelor catene ADN
•Fiecare specie are propriile enzime de restricție (au fost identificate peste 3000 de enzime
de restricție)
•Pentru a-și proteja ADN-ul propriu situsurile recunoscute de enzimele de restricție proprii
bacteriei sunt mascate prin metilarea nucleotidelor (A sauC) din poziții specifice
•Metilarea – realizată imediat după sinteza catenei ADN
Transfer genetic
•Gene ale bacteriei donor pot persista în bacteria receptor fie
– integrate in cromosomul bacteriei receptor –consecutiv recombinării genetice
– extracromosomal – dacă ADN-ul este circular și are informațiile necesare pentru
propria replicare
Mecanisme
1.Transformarea
2.Conjugarea
3.Transducția(transferulmediatde bacteriofagi)
1. Transformarea
•Transfer de gene realizat prin intermediul ADN-ului liber provenit de la o bacterie donor și
acceptat de bacteria receptor; este urmat de recombinare omologă (legitimă)
•depinde de mărimea ADN-ului și de starea de competență a bacteriei (expresia unor
proteine specifice care captează ADN)
•fenomen descris la pneumococi, Bacillus, Haemophilus, Neisseria
•fenomen evidențiat de Griffith, 1928
•experiment repetat de Avery, MacLeod, McCarty, 1944
2. Conjugarea
•Transfer genetic realizat prin contact fizic intre două bacterii, prin intermediul unor
– pilisexuali (bact Gram neg)
– molecule de adeziune (bact Gram poz)
•are loc intraspecific și interspecific
•Bacterie donor – doar bacteria care conține plasmide conjugative (conjugoni) = plasmide
care codifică structuri și enzime necesare conjugării și transferuluiADN (genele tra)
•factorul F – primul plasmid conjugativ descris
• Fiziologia si efectele conjugării diferă in funcție de localizarea plasmidului (independent in
citoplasmă, respectiv integrat in cromosom, ca epizom)
Transducția – transfer genic mediat de anumiți fagi, fără contact fizic intre bacterii
a. Transducția generalizată
•in cursul ciclului litic ADN-ul cromozomal este fragmentat
•foarte rar capsida virală poate impacheta in locul genomului viral fragmente aleatorii de
ADN bacterian (orice genă bacteriană)
•fagul va injecta fragmentul ADN bacterian intr-o nouă celulă; după recombinare omologă
celula va exprima noi caractere (conversie lizogenică)
b. Transducția specializată
•la trecerea din faza lizogenă in faza litică profagul va fi excizat din cromozomul bacterian;
•uneori excizia interesează și gene adiacente profagului, care vor fi replicate impreună cu
genomul viral si vor fi impachetate impreună cu acesta in capsidă; deoarece unii profagi se
integrează doar în anumite situsuri cromosomale, doar anumite gene cromosomale pot fi
transduse
•fagul infecțios va injecta ADN-ul viral care conține și gena cromozomală intr-o nouă celulă;
urmează integrarea in cromozomul bacterian a profagului și genei de la bacteria donor
Recombinarea genetică
= schimb de gene / fragmente intre două molecule ADN (ex. de la o bacterie donor și de la
bacteria receptor)
•contribuie la creșterea diversității fenotipice a populației
– La eucariote – in cursul meiozei (reproducere sexuată) – transfer genetic vertical
(transfer genetic de la părinți la descendenți)
– La procariote – transfer genetic orizontal (de la bacterii din aceeași generație)
•in functie de gradul de omologie dintre cele două secvențe recombinarea poate fi
– Omologă
– neomologă