Ministerul Educatiei si Cercetarii al Republicii Moldova

Universitatea de Stat din Republica Moldova

Referat
Tema: Caracterizarea unui microorganism

A elaborate:Cuzub Cristian
Grupa: EcologieFR-2303
A verificat: Moldovan Anna

Chisinau,2024
 Escherichia coli
Escherichia coli (nume abreviat: E. coli) este o bacterie Gram-negativă care trăiește în intestinele
organismelor cu sânge cald.

E. coli este o bacterie lactozo-pozitivă (descompune lactoza), gram-negativă, oxidazo-negativă,

ce apare la microscop sub formă de bastonașe (este un bacil). El face parte din grupa
enterobacteriilor care trăiește ca epifit în tractusul digestiv. În unele cazuri de dezechilibrare a
microflorei intestinale, aceste bacterii pot produce îmbolnăviri, printr-o înmulțire masivă sau
apariția unor tulpini toxicogene. Bacteria a fost denumită în 1919 după numele bacteriologului
germano-austriac Theodor Escherich(en), cel care a descoperit-o.

Bacteriile E. coli nu sunt întotdeauna limitate la intestin, și abilitatea lor de a supraviețui pentru
perioade scurte de timp în afara corpului ce le face un organism-indicator ideal pentru a testa
probe de mediu de contaminare fecală. Bacteria poate fi, de asemenea, cultivata cu ușurință și
genetica sa este relativ simplă și ușor de manipulat printr-un proces mutagenic, făcându-l unul
dintre cele mai bine studiate organisme procariote model, și o specie importanta în domeniul
biotehnologiei și microbiologie.

Figura 1. Escherichia coli

Tabelul 1.Clasificare științifică
Supradomeniu Biota
Domeniu Bacteria
Regn Pseudomonadati
Încrengătură Pseudomonadota
Clasă Gammaproteobacteria
Ordin Enterobacterales
Familie Enterobacteriaceae
Gen Escherichia

Cultivarea Escherichia coli

Pre-culturație: O tulpină de E. coli modificată genetic este cultivată inițial într-un mediu de
creștere bogat în substanțe nutritive, cum ar fi agar-agar sau lichid nutritiv. Scopul acestei etape
este de a pregăti o cultură de celule bacteriene în creștere activă.
Inocularea: Cultura de pre-cultura este transferată într-un mediu de creștere principal. Acest
mediu poate fi un mediu lichid, cum ar fi mediul de cultură Luria-Bertani (LB), care furnizează
substanțele nutritive necesare pentru creșterea bacteriilor.
Creșterea: E. coli este cultivată la temperaturi și condiții adecvate pentru reproducere rapidă. De
obicei, temperatura este menținută la aproximativ 37°C, temperatura optimă pentru creșterea
bacteriilor.
Inducția: După ce cultura a atins o densitate celulară specifică, se induce producția de insulină.
Acest lucru se realizează adăugând un inductor, cum ar fi izopropil-β-D-thiogalactopiranozid
(IPTG), care activează expresia genei de insulină.
Colectarea și purificarea: După ce bacteriile au produs insulina, aceasta poate fi colectată din
mediu. Insulina este apoi purificată pentru a elimina impuritățile și pentru a obține un produs
final de calitate farmaceutică.
Formularea și îmbutelierea: Insulina purificată este formulată și îmbuteliată în condiții sterile
pentru a fi distribuită și utilizată în tratamentul diabetului.
Cultivarea E. coli pentru producția de insulină este un proces complex care necesită o atenție
deosebită pentru a asigura calitatea și puritatea produsului final.
Pentru cultivarea Escherichia coli în scopuri de producție industrială, temperatura optimă este de
aproximativ 37°C. Această temperatură permite bacteriei să se reproducă rapid și eficient,
maximizând producția de insulină sau alte proteine dorite.

Este important ca temperatura să fie menținută constantă în timpul procesului de cultivare pentru
a asigura condiții optime de creștere pentru bacterie. Variațiile semnificative de temperatură pot
afecta negativ producția și calitatea produsului final.
 Utilizarea Escherichia coli pentru producerea insulinei
Ce este insulina?
Insulina este un hormon, secretat de insulele lui Langerhans, ce participă la metabolismul
glucidelor. Insulina este cel mai important hormon în metabolismul glucidelor. Insulina
contribuie în primul rând la micșorarea concentrației glucozei în sânge. Aceasta mărește
permeabilitatea membranei celulare pentru glucoză.

Metoda producerii insulinei

Escherichia coli poate fi utilizată pentru producerea de insulină prin tehnici de inginerie genetică.
Procesul implică introducerea genelor care codează pentru insulina umană în genomul bacteriei
E. coli. După ce genele sunt integrate în genomul bacteriei, aceasta începe să producă insulina în
mod natural.
Pentru a realiza acest lucru, cercetătorii izolează genele care codează pentru insulina umană și le
introduc într-un vector de expresie, care este apoi introdus în E. coli. Vectorul conține, de obicei,
elemente de reglare care determină E. coli să producă insulina în cantități mari.
După ce E. coli a produs insulina, aceasta poate fi extrasă și purificată pentru utilizare medicală.
Producția de insulină recombinantă folosind E. coli este un proces important în industria
farmaceutică, deoarece permite obținerea de cantități mari de insulină la costuri relativ reduse.
Prima insulină de tip uman produsă prin inginerie genetică a fost realizată din bacterii E. coli
care au fost modificate timp de câteva luni prin tehnici de inserție a genelor. Performanța a fost
rezultatul unui efort comun al echipelor de cercetare de la o firmă californiană de biochimie
(Genetech Inc.) și de la e City of Hope National Medical Center, Los Angeles.
Producția naturală de insulină în corpul uman are loc în interiorul pancreasului, care este
programat să facă acest lucru de anumite gene. Oamenii de știință au sintetizat copii ale acestor
gene și le-au introdus în bacteriile intestinale Escherichia coli.
Din 1979 începe comercializarea bacteriei modificate de Escherichia coli și producerea
industrială a insulinei în bioreactoare. Tot prin modificarea genetică a acestei bacterii oamenii de
știință au reușit să obțină hormoni de creștere.
Ingineria genetică a devenit posibilă după descoperirea naturii eredităţii, a genomului şi a rolului
jucat de acizii nucleici. Primele manipulări genetice au fost efectuate pe bacterii, în anul 1973,
fiind obţinută, în SUA, prima bacterie modificată genetic (MG) – o tulpină de Escherichia coli cu
gene şi însuşiri de Salmonella.
Concluzie:
Producerea de insulină folosind Escherichia coli este un proces important în industria
farmaceutică, deoarece permite obținerea de cantități mari de insulină la costuri relativ reduse.
Prin ingineria genetică, genele care codează pentru insulină umană sunt introduse în genomul
bacteriei, iar aceasta devine capabilă să producă insulina în mod eficient.
Cultivarea bacteriei E. coli pentru producția de insulină necesită o serie de etape, incluzând pre-
cultivarea, inocularea într-un mediu de creștere principal, creșterea bacteriilor, inducția
producției de insulină, colectarea și purificarea insulinei, și, în final, formularea și îmbutelierea
produsului final.
Această metodă de producție a insulină recombinante a revoluționat tratamentul diabetului
zaharat, făcând insulină mai accesibilă și mai ușor de obținut pentru milioane de persoane din
întreaga lume.