Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
FIZICO-CHIMICE ALE
PROTEINELOR
Silvia Stratulat
Confereniar universitar
Obiectivele:
Masa molecular a proteinelor. Noiuni generale referitor la
metodele de determinare a masei moleculare a proteinelor.
Proprietile amfotere ale proteinelor. Sarcina electric a
proteinelor. Factorii ce determin sarcina proteinei. Punctul i
starea izoelectric.
Solubilitatea proteinelor. Proprietile hidrofile ale proteinelor n
funcie de componena aminoacizilor i de particularitile
structurale. Factorii de stabilizare n soluie a substanelor
coloidale. Starea soluiilor coloidale: sol, gel, xerogel. Exemple.
Denaturarea proteinelor, agenii ce provoac denaturarea.
Modificrile structurale ale proteinei la denaturare.
Metodele de studiere a componenei calitative i cantitative a
proteinelor:
a)hidroliza; b) cromatografia; c) electroforeza; d) salifierea; e)
dializa.
6. Importana biomedical a metodelor de evaluare calitativ i
cantitativ a proteinelor.
Proprieti fizico-chimice
Masa molecular
Solubilitatea proteinelor
Proprietile amfotere i sarcina
electric a proteinei
Denaturarea
Masa molecular
a proteinelor
intre 10.000 i 40.000.000 Daltoni.
METODELE DE
DETERMINARE A MASEI
MOLECULARE A PR
se determin prin urmtoarele metode:
1. Ultracentrifugarea (pr. sedimenteaz n raport
cu m i mrimea lor)
2. Cromotografi
3. Electroforeza
4. Spectrometria de mas
Cromatografie de
permeabilitate in geluri
Spectrometria de mas
masoara masa unei molecule dupa
ce aceasta a fost transformata in ioni.
reamintim ca nu se masoara direct
masa moleculei ci mai exact raportul
masa/ sarcina pentru un ion.
In cazul in care sarcina este egala cu
unu (z=1) acest raport corespunde cu
masa moleculare (ionului) dar exista si
cazuri in care z1.
Proprietile
electrochimice ale
proteinelor
Sarcina electric a
proteinelor
Proteinele prezint
polielectrolii amfoteri
Sarcina electric a
proteinelor
Sarcinaelectric a proteinelor
este determinat de 2 factori:
I. de componena AA
II. de pH mediului
Sarcina electric este
determinat:
1. de componena AA:
Salifierea
Asupra vitezei de precipitare
a proteinelor prin salifiere
acioneaz un ir de factori
ca: hidrofilitatea proteinei,
masa molecular, sarcina
electric; de aceea salifiere
diferitelor proteine are loc n
concentraii diferite de sruri.
De exemplu, albuminele se
precipit n soluie saturat
de sulfat de amoniu, pe cnd
globulinele - n soluie
semisaturat
Proprietile coloidale
i osmotice ale
proteinelor
Proteinele sunt substane
macromoleculare,solubile, la dizolvarea
crora se formeaz soluii coloidale
proteice.
Spre deosebire de soluiile coloidale
obinuite, soluiile proteice nu necesit
prezena stabilizatorului. Soluiile
proteice sunt stabile i cu timpul nu se
precipit.
Soluiile proteice posed
proprieti caracteristice
soluiilor coloidale:
fiind macromolecule nu
proteine
difundeaz prin membrane
semipermiabile, pe cnd
micromoleculele trec prin
asemenea membrane. Acest
proces e numit dializ.
Proprieti osmotice
Incapacitatea de a difuza prin membranele
semipermiabile are ca urmare apariia
fenomenului de osmoz (deplasarea mol.
de H2O prin membran n soluia proteic).
Deplasarea apei este limitat de presiunea
hidrostatic (presiunea coloanei de ap).
Presiunea care trebuie aplicat pentru a
opri curentul osmotic se numete presiune
osmotic.
Presiunea osmotic determinat de
proteine presiune oncotic.
Proprietatea de a forma
geluri
Proteinele prezint coloizi liofili, i deci pot forma
geluri.
Moleculele proteinei interacioneaz ntre ele
formnd reele structurale n interiorul crora se
imobilizeaz apa.
Gelatinizarea are loc mai uor n sol. pr. fibrilare
Formarea de gel se observ la coagularea
sngelui (formarea reelei de fibrin).
La nvechirea gelurilor are loc sinerezisa
expulzarea apei, datoprit contraciei mol din
reea i eliminarea apei.
Formarea gelului
depinde de :
concentraia soluiei (odat cu
creterea concentraiei);
temperatur (la scderea
temperaturii);
concentraia ionilor de hidrogen (n
punctul izoelectric se observ o vitez
maxim de formare a gelului);
prezena electroliilor (Ionul SO4 2-
- contribuie n mod preferat la
transformarea solului n gel).
Xerogel
este gelul secat (uscat) - lipsit de ap.
se capt prin secare liofil a soluiilor
coloidale
Secarea liofil const n ndeprtarea apei
n vid din soluia coloidal ngheat.
se pstreaz un timp mai ndelungat ceea
ce prezint importan practic n industria
de preparare a medicamentelor de origine
proteic.
Ex: deferite proteine (albumina, gama-
globulinele i altele).
Denaturarea
proteinelor
Sub aciunea agenilor denaturani are
loc distrugerea nivelurilor superioare
de organizare ale moleculei proteice
(secundar, teriar, cuaternar) n afar
de structura primar cu pierderea
proprietile fizico-chimice i biologice
ale proteinei.
Agenii denaturani
se mpart n fizici i chimici.
1. factorii fizici: temperatura, presiunea,
radiaiile ultraviolete, radiaii X.
2. factorii chimici : acizi, bazele,
solvenii organici (eter, cloroform),
ureea, detergenii, metale grele (Pb,
Hg), amidele.
Trsturile proteinei
denaturate:
FOLDING aranjarea
spaial corect de
novo a catenei:
Metodele de studiere a
componenei calitative i
cantitative a proteinelor
a) hidroliza (ruperea unei legturi ordinare
cu adiia unei molecule de ap)
b) cromatografie
c) electroforeza
d) salifiere
e) dializa
f) gel-filtrare
Cromatografie
- este identificarea i separarea
aminoacizilor.
Principiul: Metoda este bazat pe diferena
coeficientului de repartiie a aminoacizilor n
ap i solvent organic (butanol), care nu se
amestec cu apa.
Apa se absoarbe pe hrtia cromatografic,
constituind faza staionar, iar solventul
organic, migreaz pe ea. Concomitent cu
ultimul se mic i aminoacizii.
Viteza migrrii aminoacizilor pe banda
cromatografic este direct proporional cu
gradul de solubilitate n butanol.
CROMOTOGRAFIE DE
SCHIMB IONIC
are la baz interaciunile electrostatice i difuzia,
iar separarea componentelor se face n funcie de
sarcinile lor electrice, constantele de disociere i
diametrul efectiv al ionilor.
CROMOTOGRAFIE DE
SCHIMB IONIC
CROMOTOGRAFIA DE
AFINITATE
n care separarea are loc datorit unor
interaciuni biochimice specifice cu
aa-numitele grupari de afinitate.
CROMOTOGRAFIA DE
AFINITATE
Electroforeza
-
Direcia migrrii Pr
depinde de pH-ul
mediului;
Pr fiind electrolii
amfoteri n mediul
acid ele posed sarcin
+ i se mic spre C, n
mediul bazic posed
sarcin -migreaz spre
A.
.
Electroforeza
-