 Genetica moleculara este domeniul biologiei care

studiaza structura si functia genelor la nivel molecular.

Ea studiaza si cum genele sunt trasmise din generatie
in generatie, conservarea dar si variabilitatea lor.
Genetica moleculara foloseste metode de Genetica si
Biologie Moleculara.
 Tot in spectrul ei sunt cuprinse si tehnicile ce ne
permit izolarea, analiza (pana la variatia unei perechi
de baze, SNP) dar si diverse tipuri de interventie in
scop terapeutic (sau cercetare) la nivelul molecular al
ADN.
 ADN Recombinant este o forma de ADN artificial
produsa prin inginerie genetica, prin combinarea
sau insertia uneia sau mai multe catene ADN;
astfel combina secvente ADN care nu apar
adiacente in mod normal. In termeni de
modificare genetica, ADN recombinant este
produs prin insertia unei secvente relevante de
ADN intr-un genom al unui organism existent,
cum ar fi plasmidele sau bacteriile, pentru a
codifica si exprima caractere pentru un scop
specific.
 Instrumente pentru ADN
Recombinant
 Enzimele de restrictie: O serie de endonucleaze (enzime
care “taie” ADN cand intalnesc secvente specifice in
interiorul moleculei), au un rol cheie in cercetarea cu ADN
recombinant. Ele sunt izolate de la multe specii de bacterii
sau drojdii (yeast) si catalogate in functie de secventa de
recunoastere.

 Vectorii: Un vector este o structura ce contine o molecula

de ADN in care poate fi inserat ADN exogen, care apoi se
poate introduce si replica intr-o celula de interes.

 Moleculele chimerice: O molecula (ADN, ARN, proteina)

continand secvente derivate de la doua specii diferite.
Enzimele de restrictie - actiune
• Vectorii

Un "Vector" este un agent care poate transporta un fragment ADN intr-o celula
tinta. Daca este folosit pentru a reproduce fragmentul ADN, este denumit un
"vector de clonare“

Tipuri de vectori:
Plasmid: macromoleculă de ADN prezentă în unele bacterii și mai rar în celule eucariote și care se poate
replica autonom de cromozomul "gazdei", dar folosind aparatul replicativ al celulei în care se găsește. În
general plasmidele sunt formate din ADN dublu catenar și au formă circulară. Într-o singură celulă se pot
afla de la una până la câteva sute sau chiar mii de copii ale aceleiași plasmide. Are o capacitate de 15 kb.

Fagul (lambda): (bacterio)fagul lambda este un tip de virus care infecteaza bacterii. Mai exact, bacteriofagii
lambda vizează numai Escherichia coli. Se comporta bacteriofag ca paraziți, hraniti de gazdele lor. După ce
bacteriofagul lambda infecteaza E. coli, mai multi fagi (sau virusuri) sunt replicati în cadrul unei bacterii E.coli.
Capacitate de 25 kb.

Cosmid: Plasmide modificate, ce contin secventa cos de la fagul lambda, necesara impachetarii ADN in
particulele fagice. De asemenea, cosmidele prezinta originea replicarii de la plasmida ColE1 si un marker
de selectie, de obicei gena de rezistenta la ampicilina. In acest fel, cosmidele se pot replica si mentine ca
plasmide (permitind selectia coloniilor purtatoare pe mediu ce contine antibioticul corespunzator.
Capacitate de 35-45 kb.

Cromozomi artificiali bacterieni (BAC): Capacitate de 50-300 kb.

Cromozomi artificiali din drojdie (YAC): Capacitate de 300- >1500 kb.
Cromozomi artificiali umani (HAC): Capacitate de >2000 kb.
• Plasmide
• Fagul λ
• Cosmide
• YAC
• Bibliotecile Genomice

O biblioteca genomica este o populatie de bacterii

gazda, fiecare din ele continand un fragment din
molecula de ADN genomic, ce a fost inserat intr-un
vector de clonare, cum ar fi o colectie de molecule de
ADN reprezentand intregul genom al organismului
sursa.

Acest termen se refera, de asemenea, la colectia tuturor

vectorilor, fiecare purtand un fragment al ADN
cromozomial al organismului, inainte de insertia acestor
molecule in celula gazda.
• Biblioteci de cDNA
O biblioteca cDNA este o combinatie de fragmente de cADN (ADN
complementar) clonat inserate intr-o colectie de celule gazda, care impreuna
constituie o portiune a transcriptomului organismului.

cDNA este revers transcris din ARN. Este foarte convenabil de lucrat cu
ARNm. ARNm contine introni si exoni, iar in timpul modificarilor
posttranscriptionale intronii sunt eliminati. Exista numai exoni prezenti in
acest moment, ceea ce difera substantial de AND genomic integral, in sensul
prezentei numai acelor secvente care codifica (in mare, proteine, aproximativ
20,000 de proteine diferite la om, incluzand si cea mai mare parte a enzimelor
prezente in orice tip de tesut/celula). Avantajul este ca, astfel, putem dispune
de o biblioteca de secvente care codifica direct proteinele dintr-o celula si, in
acest fel, putem sti compozitia exacta a proteinelor; de asemenea, faciliteaza
analiza proteinelor celulare.
• Hibridizarea si Sondele (oligo)nucleotidice
• Southern blotting
• Northern blotting
• PCR
• Secventierea Sanger
• FISH
• CGH
array-CGH of a glioblastoma
 Utilizarile ADN recombinant
 Poate furniza cantitati mari de material care nu poate fi obtinut
prin metodele de purificare conventionale
 Poate furniza material uman (recombinant) folosit in clinica
(insulina, hormon de crestere)
 De asemenea, pot fi obtinute proteine (recombinante) pentru
vaccinuri (ex: hep-B) si pentru testarea diagnostica (ex: testarea
in SIDA).
 Folosit si pentru productia de medicamente recombinante,
precum si in medicina legala.
 Ne ofera un mod rational si concret de adresare in intelegerea
bazelor moleculare a unui mare numar de boli si posibilitati de
aplicare a terapiei genice in tratarea lor (ex: hipercolesterolemia
familiala, anemia falciforma/sicklemia, talasemiile, fibroza
chistica, distrofiile musculare)
Anemia falciforma/Sicklemia
 Terapia genica este in studiu in vederea unui posibil
tratament pentru anemia falciforma/sicklemie.
Cercetatorii urmaresc posibilitatea implantarii unei
gene normale in reticulocite (precursorii hematiilor)
in maduva osoasa a unei persoane cu sicklemie, astfel
ca acestea (reticulocitele modificate) sa produca
hematii normale. De asemenea, cercetatorii studiaza
posibilitatea unui tratament prin suprimarea activitatii
(“turn off”) genei mutante/bolnave sau prin activarea
(“turn on”) unei gene care face hematiile sa se
comporte normal.
 CLONAREA
 Clonarea reprezinta izolarea si cresterea unei unice
linii celulare (in sensul uniformitatii genice) si a
descendentilor sai, care contine si exprima o gena
de interes (izolata de la alt organism).
 Animale transgenice
 Un organism/animal transgenic sau Organism Modificat Genetic
este un organism al carui material genetic a fost modificat
folosind ingineria genetica d.ex. Tehnologia ADN recombinant.
 Oamenii de stiinta au produs un numar mare de animale
transgenice in speranta unor beneficii majore pentru umanitate.
D.ex gene umane au fost introduse in organismul porcinelor
pentru a produce insulina umana (vezi mai sus) sau chiar organe
necesare transplanturilor (cu o rata mai mica de respingere,
avand aceeasi structura, umana, inclusiv antigenica).
 Aplicatiile sunt vaste. Caprele au fost folosite pentru a produce o
proteina importanta in coagularea sangelui. Alte experimente,
tot la capra, tintesc la descoperirea unor tratamente curative
pentru scleroza multipla si unele forme de cancer.
 Organisme transgenice

Pestele zebra (zebrafish)

obisnuit Aceste exemplare de Pestisor Auriu sunt un tip de Peste
zebra obtinuti cu ajutorul AND recombinant. Genele
pentru proteine flourescente au fost inserate in genomul lor
pentru a exprima culorile lor fluorescente.