Efectul administrării orale a MgSO4

asupra homeostaziei glucozei în sânge

prin inhibarea gluconeogenezei și
expresiei genei FOXO1 în ficatul și
mușchiul șoarecilor cu diabet indus
Studiu realizat de: Ayeshe Barootia, Mitra Kamrana, Fatemeh Kharazmia, Ebrahim Eftakharb, Kianoosh Malekzadehb,
Ardeshir Talebic, Nepton Soltanid
a Department of Physiology, Hormozgan University of Medical Science, Bandar Abbas, Iran
b Molecular Medicine Research Center and Hormozgan Health Institute, Hormozgan University of Medical Science, Bandar
Abbas, Iran
c Clinical Pathology Department, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Science, Isfahan, Iran
d Endocrinology and Metabolism Research Center, Hormozgan University of Medical Sciences, Bandar Abbas, Iran
e Department of Physiology, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Science, Isfahan, Iran
Introducere
• Factorul de transcripție Forkhead (FOXO1) joacă un rol important în
medierea acțiunii insulinei și în reglarea expresiei genelor țintă.
• FOXO1 este un regulator negativ al sensibilității la insulină la nivelul
ficatului, adipocitelor și celulelor β pancreatice.
• Activitatea FOXO1 promovează hiperglicemia diabetică, dislipidemia
și răspunsul în fază acută.
• Studii recente au demonstrat că insulina poate suprima activitatea
FOXO1 , iar deficiența de Mg crește activitatea enzimelor PEPCK și
G6P-ase.
Materiale și metode
1. Animale
• Animalele au fost împărțite în cinci grupuri (n = 10 șobolani la fiecare
grup): control non-diabetic (NDC); controlul non-diabetic tratat cu Mg2 +
(Mg2 + -NDC); diabet cronic (CD); diabet cronic tratat cu Mg2 + (Mg2 +
-CD); și diabet cronic tratat cu insulină (Ins-CD).
• Streptozotocina (STZ) a fost utilizată pentru inducerea diabetului. Grupele
Mg2 + -CD și Mg2 + -NDC au primit 10 g / l sulfat de magneziu
(MgSO4) adăugate la apă potabilă, iar grupul Ins-CD a primit 2,5 U / kg
insulină.
• Animalele au fost monitorizate pentru concentrațiile de glucoză din sânge
și greutatea corporală în fiecare săptămână la 9 dimineața, pe parcursul
experimentului.
2. Test de toleranță intraperitoneală la glucoză (IPGTT)
• Pentru IPGTT, animalele din toate grupurile au fost supuse la 15 ore
de fixare peste noapte și li s-a administrat 1,5 g de glucoză/kg g.c.
Sângele a fost extras din vena din coadă la intervale de 0, 10, 20, 30,
60, 90 și 120 min după administrarea de glucoză.
3. Test biochimic
• Animalele au fost anesteziate cu ketamina HCl, apoi decapitate.
Ficatul și mușchiul au fost izolate pentru gena FOXO1 și expresia
proteinei prin PCR în timp real și metode de imunohistochimie.
4. Extracția ARN
• ARN a fost tratat cu 1 μl DNază-I în 37 ° C timp de 30 min și apoi s-a
adăugat 1 µl 50mM EDTA. Apoi a fost incubat la 65 ° C timp de 10
min pentru inactivarea DNazei. ARN extras a fost cuantificat utilizând
electroforeză cu gel de agaroză 1,5%.
5. Sinteza de ADNc și PCR cantitativă în timp real
• Pentru FOXO1: starea ciclului termic a fost o denaturare inițială la 95°C timp de 3
minute, urmată de 40 cicluri de denaturare la 95°C timp de 10 secunde, recoacere
la 62°C pentru fiecare primer timp de 30 sec. De asemenea, pentru PEPCK, starea
ciclului termic a fost o denaturare inițială la 95°C timp de 3 minute, urmată de 40
de cicluri de denaturare la 95°C timp de 10 secunde și recoacere la 65°C pentru
fiecare primer timp de 30 sec. Toate standardele și măsurătorile probelor au fost
repetate de două ori.

Tabel 1. Primeri proiectați pentru amplificarea, β-actinei, FOXO1 și PEPCK.

 6. Imunohistochimie
Fig.1. Comparație a glicemiei alimentate (A),
testului de toleranță intraperitoneal la
glucoză (IPGTT) (B) și a zonei de sub curba
glicemică (ASC) (C) în controlul non-
diabetic (NDC), diabet cronic (CD), control
non-diabetic tratat cu Mg2 + (Mg2 + -NDC),
diabet cronic tratat cu insulină (Ins-CD) și
grupuri diabetice cronice tratate cu Mg2 +

* Diferență semnificativă între

animalele CD și alte grupuri.
* Diferență semnificativă între
animalele Ins-CD și grupele Mg2 +
-CD și Mg2 + -NDC.
 Fig. 2. Comparația dintre greutatea
corporală (A), nivelul plasmei de
magneziu (B) în controlul non-
diabetic (NDC), diabet cronic (CD),
Mg2 + controlul non-diabetic tratat
(Mg2 + -NDC), diabet cronic insulin-
tratat (Ins -CD) și Mg2 + diabet
tratat cronic (Mg2 + -CD)

* Semnificativ diferit între CD și alte

grupuri (P <0,0001).
  # Diferență semnificativă între
grupurile Mg2 + -CD și Ins-CD și
grupele Mg2 + -NDC (P <0,001).
Rezultate
• Înainte de intervenție, nu au existat diferențe în ceea ce privește
glicemia, IPGTT, greutatea corporală și nivelul Mg plasmatic între
animalele din fiecare grup.
a) Modificări ale glicemiei
• Inducerea diabetului a determinat creșterea concentrației de glucoză
din sânge și glicemia a continuat să fie crescută la 16 săptămâni după
inducerea diabetului. Administrarea de MgSO4 sau insulină timp de
16 săptămâni (din ziua 10) a provocat scăderea concentrațiilor de
glucoză din sânge în grupele Mg-CD și Ins-CD.
b) Efectul MgSO4 asupra testului de toleranță intraperitoneal la
glucoză (IPGTT)
• Înainte de a începe administrarea MgSO4 și STZ, modelele IPGTT
pentru toate grupurile au fost similare.
• Cu toate acestea, după 16 săptămâni, grupul CD a prezentat o
intoleranță severă la glucoză (Fig. 1B), care s-a îmbunătățit
semnificativ în grupul Mg2 + CD până la un grad care a fost
considerat eficient.
c) Modificări ale greutății corporale și a nivelului plasmatic al
magneziului
• Greutatea corporală a animalelor cu CD a scăzut nesemnificativ în
comparație cu nivelurile la animalele cu NDC; creșterea greutății
corporale a fost observată în mod semnificativ după administrarea de
Mg2 + și insulină în comparație cu nivelurile la animalele cu CD.
• Nivelul plasmatic Mg în CD a scăzut semnificativ în comparație cu
grupul NDC. Administrarea de Mg2 + și insulină timp de 16
săptămâni (începând cu ziua 10) a determinat creșterea concentrațiilor
plasmatice de Mg2 + în grupele Mg2 + -CD și Ins-CD, dar există
diferențe semnificative între grupurile Mg2 + -CD și Ins-CD.
d) Modificări în expresia genei FOXO1 și PEPCK
• Transcrierea FOXO1 în mușchi a scăzut în comparație cu șobolanii
diabetici cronici (CD) datorită tratamentului cu Mg2 +. Dar
administrarea de insulină la șobolani diabetici nu a putut reduce
expresia genei FOXO1 în ficat, în comparație cu grupa CD.
e) Modificări ale nivelului de proteine FOXO1 și PEPCK
• Nivelul de proteine FOXO1 în mușchi a crescut în grupul CD, cu toate
acestea acest rezultat nu a fost observat în grupele Mg2 + sau tratate
cu insulină. Nivelul proteic FOXO1 în ficat la grupul tratat cu Mg2 + a
scăzut în comparație cu animalele CD, dar această constatare nu a fost
observată în grupul Ins-CD în comparație cu animalele CD și Mg2 +
-CD.
Fig. 3. Comparație a expresiei
genice PEPCK în ficat (A),
Nivel proteic de PEPCK în
ficat (B), Expresia genei
Forkhead (FOXO1), expresie a
genei în ficat (C)
Concluzii
• Administrarea de MgSO4 a îmbunătățit IPGTT, a scăzut nivelul glicemiei
și a scăzut genele FOXO1 și PEPCK și expresia proteinelor în mușchi și
ficat, în timp ce insulina doar ar putea scădea gena FOXO1 și expresia
proteinelor din mușchi.
• MgSO4 a îmbunătățit hiperglicemia prin inhibarea genei FOXO1 și a
nivelului de proteine din mușchi și ficat și, de asemenea, a scăzut nivelul
glicemiei prin interzicerea căii gluconeogenezei în ficat.
• În general, rezultatele acestui studiu au arătat că Mg2 + este mai eficient
decât insulina în controlul glicemiei și în prevenirea căii gluconeogenezei
în ficat, în timp ce Mg2 + are atât efecte hepatice cât și musculare.