Sunteți pe pagina 1din 74

I.

TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI

Lucrri de laborator

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.1.

DETERMINAREA SPECTROFOTOMETRIC A AMONIACULUI UTILIZND METODA ALBASTRULUI DE INDOFENOL


Aceast metod este aplicat pentru determinarea coninutului de amoniac din ape (de exemplu ap de precipitaii) pentru domeniul de concentraii 0,04 2,0 mg NH4/L.

Principiul metodei ntr-o soluie alcalin (pH 10,4-11,5) ionii de amoniu reacioneaz cu hipocloritul formnd monocloramin. n prezena fenolului i a unui exces de hipoclorit, monocloramina va forma un compus albastru, indofenol, reacia fiind catalizat de nitroprusiatul de sodiu. Concentraia de amoniac este determinat spectrofotometric la 630 nm. Reactivi i aparatur Toate substanele chimice trebuie s fie de puritate analitic. Apa utilizat pentru diluare i splare trebuie s fie dublu-distilat sau deionizat i apoi distilat. Fenol (C6H5OH); Nitroprusiat de sodiu (Na2Fe(NO) (CN)5x2H2O); Hidroxid de sodiu (NaOH); Soluie de hipoclorit de sodiu (NaOCl) 1M - se prepar o soluie ce conine aproximativ 3,5% clor activ (35 g/L) n NaOH 0,1M; Clorur de amoniu (NH4Cl); Tiosulfat de sodiu (Na2S2O3); Reactiv A: se dizolv 3,5 g fenol i 0,040 g nitroprusiat de sodiu n 100 mL ap. Soluia se pstreaz n frigider, la ntuneric. n cazul n care culoarea soluiei devine verde, trebuie preparat o alt soluie; Reactiv B: se dizolv 1,8 g hidroxid de sodiu ntr-un volum mic de ap ntr-un balon cotat de 100 mL. Se adaug 4,0 mL soluie de hipoclorit de sodiu 1 M i se aduce la semn cu ap. Soluia se pstreaz n frigider, la ntuneric. Dac soluia este pstrat un timp mai ndelungat (cteva sptmni) concentraia acesteia trebuie verificat prin titrare cu o soluie de tiosulfat de sodiu; Soluie standard de amoniu I, 100 mg NH 4/L: clorura de amoniu trebuie uscat timp de o ora la 100 C. Se dizolv apoi 0,2965 g sare n ap ntr-un balon cotat de 1000 mL. Se dilueaz pn la semn cu ap. Aceast soluie este stabil pentru ase luni atunci cnd este pstrat n frigider;

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Soluie standard de amoniu II, 4 mg NH 4/L: cu ajutorul unei pipete, se transfer 20,0 mL de soluie standard de amoniu I ntr-un balon cotat de 500 mL. Se aduce la semn cu ap. Aceast soluie standard de amoniu ct i soluiile etalon de amoniu folosite pentru obinerea curbei de calibrare trebuie s fie proaspt preparate; Spectrofotometru dotat cu o celul de drum optic de 10 mm; Baie de ap termostatat, 50 C; Eprubete: 30 mL; Baloane cotate: 10, 500 i 1000 mL; Pipete: 1,0; 2,0; 4,0; 5,0; 10,0; 20,0; 25,0; 50,0 mL; Micropipet: 250 L. Calibrarea Prepararea soluiilor etalon pentru curba de calibrare: Se transfer n baloane cotate de 100 mL: 0,0; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 25,0 i 50,0 mL soluie standard de amoniu II. Se aduce la semn cu ap. Concentraiile acestor soluii sunt: 0,00; 0,04; 0,08; 0,2; 0,4; 1,0 i 2,0 mg NH 4/L. Se transfer 5,0 mL din fiecare dintre aceste soluii standard i 5,0 mL ap n eprubete de 30 mL. Se adaug n fiecare eprubet cte 250 L reactiv A cu ajutorul unei micropipete i se amestec bine. Se adaug 250 L reactiv B cu ajutorul unei micropipete i se amestec din nou bine. Se acoper eprubeta cu un material inert. Eprubetele sunt inute timp de 2 ore ntr-o baie de ap la 50C. Se rcesc soluiile la temperatura camerei i se transfer n celula de 10 mm. Se msoar absorbana la 630 nm. Se realizeaz o curb de calibrare prin reprezentarea absorbanelor soluiilor standard n funcie de concentraia de amoniu. Se traseaz noi curbe de calibrare pentru fiecare serie de probe. Pentru verificarea coninutului de amoniu n reactivi, se realizeaz o citire fotometric a probei martor (0,00 mg NH 4/L) fa de ap. Absorbana nu trebuie s depeasc 0,020 uniti.

1.

2.

3. 4. 5.

Mod de lucru Se transfer 5,0 mL de prob i 5,0 mL de ap ntr-o eprubet de 30 mL. Se procedeaz conform instruciunilor prezentate la punctele 2 i 3 de mai sus. Se transform citirile spectrofotometrice ale probei n mg NH 4/L folosind curba de calibrare. Concentraia poate fi exprimat n mg N/L prin multiplicarea rezultatului obinut cu 0,778. Probele ce conin mai mult de 2,0 mg NH 4/L trebuiesc diluate. Cu ajutorul unui echipament corespunztor, metoda indofenolului poate fi automatizat. Interfereni Fierul (III) poate interfera dac concentraia sa este mai mare de 2 mg/L. Dac pH-ul probei este mai mic de 3, proba trebuie neutralizat. Dac proba
3

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

de analizat este tulbure, att ea ct i proba martor trebuiesc filtrate pe hrtie cu band alb.

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.2.

DETERMINAREA CLORURILOR DIN AP


Metoda poate fi folosit pentru determinarea direct a coninutului de ioni clorur din probe de ap pentru un domeniu de concentraii cuprins ntre 0,05 i 5 mg/L. Principiul metodei Ionii clorur din proba de analizat vor substitui ionii de suflocianur din suflocianura de mercur nedisociat. Ionii de sulfocianur eliberai reacioneaz cu ionii de Fe(III) formnd un complex Fe-sulfocianur de culoare rou nchis. Reaciile care au loc sunt scrise mai jos: 2 Cl- + Hg(SCN)2 = HgCl2 + 2SCNSCN- + Fe3+ = Fe(SCN)2+ Absorbana este msurat la 460 nm.

Reactivi i aparatur n vederea efecturii analizelor, se vor utiliza numai substane chimice de puritate analitic i ap dublu distilat sau deionizat i apoi distilat. Acid percloric (HClO4) 72% Suflocianur de mercur (II) (Hg(SCN) 2) Azotat de fier (III) nano-hidratat (Fe(NO 3)3x9H2O) Clorur de sodiu (NaCl) Etanol (C2H5OH) 1. Acid percloric, 1:1. Se amestec 1 volum acid percloric 72% cu 1 volum ap; 2. Soluie saturat de sulfocianur de mercur (II). Se amestec 1 g Hg(SCN) 2 cu 1000 mL etanol. Se filtreaz dup 24 de ore. Soluia poate fi pstrat ntr-un recipient de sticl la temperatura camerei. 3. Soluie de azotat de fier (III), 6%. Se dizolv 6 g Fe(NO 3)3x9H2O n 100 mL 1:1 acid percloric. Se filtreaz soluia dup 24 de ore. 4. Soluie standard de clorur I, 1000 mg/L. Se dizolv 412,5 mg NaCl, uscat n prealabil la 140-200C, n 250 mL ap. 5. Soluie standard de clorur II, 10 mg/L. Se dizolv 10,0 mL soluie standard de clorur I n 100 mL ap.

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

1. 2.

Trasarea curbei de calibrare n baloane cotate de 50 mL se adaug 2,5; 5,0; 7,5; 10; 15; 20 i 25 mL soluie standard de clorur II i se aduce la semn cu ap. Aceste soluii conin 0;5; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0; 4,0 i 5,0 mg Cl-/L. n pahare Erlenmeyer de 100 mL se transfer 25 mL din soluiile de calibrare. Se adaug n fiecare pahar, cu ajutorul unei pipete, 5 mL soluie de sulfocianur de mercur (II) i 2 mL soluie de azotat de fier (III). Se amestec bine att n timpul adugrii acestora ct i dup adugare. Dup 20 de minute se msoar absorbana n celule de 50 mm la 460 nm. Ca referin se folosete o soluie format din 25 mL ap, 5 mL reactiv (2) i 2 mL reactiv (3) foarte bine amestecat. Se construiete un grafic, semnal analitic funcie de concentraie i se traseaz curba de calibrare.

Mod de lucru Se transfer 25 mL de prob de analizat (ap de precipitaii) ntr-un pahar Erlenmeyer i apoi se procedeaz n acelai mod ca mai sus. Se determin coninutul de clorur din prob din curba de calibrare. Interfereni Bromurile i iodurile vor da acelai semnal de absorban ca i cantitatea echivalent de clorur. 1. BIBLIOGRAFIE Iwasaki, I., Utsumi, S., and Ozawa, T. (1952) New colorimetric determination of chloride using mercuric thiocyanate and ferric ion. Bull. Chem. Soc. Japan, 25, 226. Zall, M., Fisher, D., and Gamer, Q. (1956) Photometric determination of chlorides in water. Anal. Chem., 28, 1665-1668.

2.

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.3. DETERMINAREA CONCENTRAIEI DE SO2 DIN AER


Jos MARTINEZ CALATAYUD, Monica CATALA ICARDO Introducere O problem ecologic serioas este poluarea atmosferic cu dioxid de sulf care se datoreaz combustiei compuilor sulfurai din motoare sau cazanele cu aburi. O lupt lent mpotriva acestei poluri a nceput recent, legislaia fiind foarte restrictiv privind concentraia sulfului din combustibili. Metoda de fa pentru determinarea dioxidului de sulf din aer se bazeaz pe absorbia i oxidarea dioxidului de sulf din probe cu obinere de acid sulfuric. Captarea analitului din proba de aer se realizeaz cu ajutorul unui barbotor ntr-o soluie de ap oxigent la un pH fix pentru un anumit timp (24 h). Pentru a determina concentraia acidului sulfuric format, soluia obinut se trateaz cu o cantitate cunoscut de sare de bariu i de torin. n urma acestei reacii se produce un precipitat de sulfat de bariu, iar ionii reziduali de bariu vor forma prin reacia cu torinul un complex colorat a crui absorban se msoar la 520 nm. Diferena dintre cantitatea iniial i cea final de ioni de bariu, care corespunde cu concentraia de sulfat din soluie, d cantitatea de dioxid de sulf oxidat din prob. Reacia din vasul de barbotare: SO2 + H2O2 Formarea culorii Ba2+ + TORIN (Ba - torin) culoare roie (Ba-TORIN) + H2SO4 BaSO4 + 2H+ + TORIN + (Ba rezidual-TORIN) rou Scopul lucrrii: Determinarea zilnic a concentraiei medii de SO 2 din probe de aer atmosferic. Operarea corect a unei staii manuale de control pentru calitatea aerului. Folosirea corect a materialelor i proceselor cu posibile riscuri chimice. Staie manual de control O staie manual de control conine urmtoarele elemente: Intrarea aerului: plnie conic pentru probe de 3-5 cm, confecionat din clorur de polivinil i plasat vertical cu gura nclinat. Ar trebui plasat ct mai departe de perei i de alte elemente care deranjeaz. Dispozitiv de msurare a volumului de prob i de control a debitului.
7

H2SO4

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Pomp de aspirare: debitul ar trebui ajustat la 2 m 3 zi-1. Sistem de filtrare: o trap cu aria de 5 cm 2 pentru particulele formate de ctre dispozitivul de filtrare ce reine particulele cu dimensiuni cuprinse ntre 1-5 m cu o eficien de aproape 100%. Acest filtru va fi potrivit pentru un debit de 2 m 3zi-1. Dispozitiv de barbotare cu o capacitate pentru volume de 100 mL. Conectori: tuburi de clorur de polivinil cu diametru intern de 8 mm. Se evit arcuirile i dac nu este posibil, este necesar o raz mai mare de 5 cm. Reactivi Ap de calitate Milli-Q H2O2 HClO4 72% H2SO4 98% Ba(ClO4)2 anhidru Torin Dioxan

Partea experimental Aparatur Dispozitiv de prelevare a probelor (staie manual de control) Spectrofotometru Celule de sticl de drumul optic de10 mm O micropipet, 250 L 10 baloane cotate de100 mL 2 pipete de 5 mL 2 pipete de 10 mL

Prepararea soluiilor Toate soluiile au fost preparate cu ap de calitate Milli-Q. Precauii: Urmtorii reactivi trebuie manevrai cu atenie: acidul percloric, perclorat de bariu, dioxanul i torinul. 1) H2O2 de concentraie 27-30 % (w/w) ; 2) Acid percloric de concentraie 0,1 mol L -1; se iau 4,3 mL de acid percloric de concentraie 72% i se aduce la semn pn la 500 mL cu ap pur. 3) Acid percloric de concentraie 0,01 mol L -1: 25 mL de acid percloric de concentraie 0,1 mol L-1 se aduc la semn la 250 mL. 4) Soluia de captare. Se dilueaz 10 mL de soluie 1, de H 2O2 27-30 % pn la 1000 mL cu ap pur mili-Q. Se regleaz pH-ul (cu un pH-metru) n domeniul 4,0 - 4,5 prin adugarea unei soluii de acid percloric de concentraie 0,1 mol L -1. Soluia poate fi conservat timp de o lun la frigider. 5) Soluia de Ba(ClO4)2. Se dizolv 0,525 g perclorat de bariu anhidru ntr-un volum mic de soluie 3 (acid percloric 0,01 mol L -1). Aceast soluie se transfer ntr-un balon cotat de 250 mL i se aduce la semn cu acelai acid. 6) Soluia de Ba(ClO4)2 /dioxan. Se dilueaz 1 mL soluie 5 (Ba(ClO 4)2) cu 40 mL de ap milli-Q i se transfer ntr-un balon cotat de 1000 mL; apoi se completeaz cu dioxan. 7) Soluia standard de sulfat de concentraie 0,500 mol L -1. Se dilueaz 28 mL de H2SO4 de concentraie 98% pn la 1000 mL i se titreaz cu o soluie de NaOH
8

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

(hidroxidul a fost titrat vs ftalat acid de potasiu). 1 mL din aceast soluie de sulfat corespunde la 32 mg de SO2. 8) Soluia standard de sulfat de concentraie 0,125 mol L-1. 25 mL din soluia 7 (0,5 mol L-1) se dilueaz cu apa milli-Q ntr-un balon cotat de 1000 mL. 1 mL din aceast soluie corespunde la 800 g de SO2. 9) Soluia standard de sulfat de concentraie 0,00125 mol L-1. Se dilueaz 10 mL din soluia standard (0,125 mol L-1) ntr-un balon cotat de 100 mL, cu ap (1mL din aceast soluie corespunde la 80 g of SO2). 10) Soluia de torin de concentraie 2,5 g L -1. Se dizolv 0,125 g de torin n 20 mL de soluie 9 (standard sulfat 0,00125 mol L-1), se transvazeaz ntr-un balon cotat de 50 mL i se completeaz pn la semn cu ap milli-Q Not: Aceast soluie ar trebui preparat zilnic. 1) Mod de lucru Prelevarea i pre-tratarea probelor. Se pun 100 mL de soluie de captare (soluia 4) ntr-un balon de barbotare i se pornete echipamentul de prelevare, un volum de aer msurat exact este forat s intre n dispozitivul de barbotare, astfel nct concentraia de dioxid de sulf s se nscrie n domeniul liniar al curbei de calibrare. Dac se impune se efectuez diluia necesar. Se descriu mai jos condiiile de prelevare a probelor. Graficul de calibrare 2.1) Soluiile standard de sulfat. O serie de soluii standard de sulfat sunt preparate prin diluarea unor volume de 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0 i 10,0 mL din soluia standard (soluia 9) de concentraie 0,00125 mol L -1 ntr-un balon cotat de 100 mL i se aduce la semn cu ap. Concentraiile rezultate sunt: 0,8; 1,6; 2,4; 3,2; 4,0; 4,8; 5,6; 6,4; 7,2 respectiv 8,0 g mL-1. 2.2) Soluia martor. Se prepar o soluie prin amestecarea a 4,0 mL soluie de captare (soluia 4) cu 10 mL soluie de perclorat de bariu/dioxan (soluia 6) i cu 0,25 mL soluie de torin (soluia 10). Aceasta soluie martor prezint absorban maxim. Soluia de torin trebuie adugat imediat nainte de nregistrarea absorbanei. Aceast soluie rmne neschimbat timp de 30 de minute dac este protejat mpotriva luminii camerei. Obinerea soluiilor standard colorate cu ajutorul soluiilor standard de sulfat. Se folosesc 4,0 mL din fiecare soluie standard de sulfat (punctul 2.2) i se aplic procedura descris pentru analiza martorului (punctul 2.2). Absorbana rezultat trebuie nregistrat nainte de 10 minute. Realizarea reaciei de culoare cu soluia de captare a aerului de analizat. Se introduce un volum de aer ntr-un balon de barbotare de 100 mL. Se ia o prob alicota de 4,0 mL pentru a fi amestecat cu 10 mL soluie de perclorat de bariu/dioxan (soluia 6) i cu 0,25 mL soluie de torin (soluia 10) aa cum s-a descris la punctul 2.2.
9

2)

3)

4)

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

5)

Msurarea absorbanei. Se regleaz lungimea de und la 520 nm i se testeaz aparatul cu o soluie martor, reglnd absorbana la 0,800; se nlocuiete apoi soluia martor cu soluiile standard i se nregistreaz valorile absorbanelor corespunztoare. n final, se citesc soluiile de prob nainte de 10 minute. 6) Calcularea concentraiei de SO2. Se traseaz drepta de calibrare, reprezentnd grafic absorbana vs diferite concentraii de SO2. Datorit reaciei obinute, martorul prezint absorbana maxim, iar panta este negativ. Pentru a calcula concentraia de SO 2 din soluia din dispozitivul de barbotare ct mai exact posibil, domeniul de concentraii folosit (de pe graficul de calibrare) trebuie s fie ntre 0 i 6 g mL-1. Dac concentraia depete domeniul respectiv, trebuie fcut diluia corespunztoare. Rezultate 1) Expunei condiiile procesului de prelevare a probelor: Msurarea debitului de gaz nainte de a ncepe prelevarea probelor (m 3): Data i ora prelevrii (la nceput): Msurarea debitului de gaz la sfritul prelevrii (m 3): Data i ora prelevrii (la sfrsit): 2) Notai valorile absorbanelor i prezentai grafic valorile obinute n funcie de concentraia de dioxid de sulf, trasai curba de regresie. Calculai concentraia poluantului din aer a n g m-3. Intrebri Justificai valoarea negativ a pantei dreptei de calibrare reprezentat n acest exerciiu de laborator. Care tehnic ar putea fi potrivit pentru a obine informaia n timp real; i anume concentraia de SO2 din aer? Mecanismele de oxidare pe care le sufer SO 2 din atmosfer. Descriei efectele SO2 pe diferii receptori. Explicai problemele provenite de la poluarea datorat ploilor acide sursele acestora, efectele i soluiile posibile pentru rezolvarea acestora. Comentai concentraia particulelor n suspensie i concentraia SO2, n comparaie cu regulile legislaiei europene.

10

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.4.

DETERMINAREA SULFATULUI DIN APE

Aceast metod se aplic pentru determinarea sulfatului din ape n intervalul 0,05 mg S/L 4 mg S/L. Probele de concentraii mai mari trebuiesc diluate nainte de a fi analizate. Principiu metodei Ba(ClO4)2 este adugat n exces pentru a precipita sulfatul ca sulfat de bariu, precipitarea avnd loc n prezena unui solvent organic. Solventul organic va micora produsul de solubilitate al sulfatului de bariu. Ionii de bariu(II) n exces din soluie reacioneaz cu torinul (sare de sodiu a acidului 4-(o-arsenofenil-azo)-3-hidroxi-2,7-naftalendisulphonic) i apoi concentraia acestora se determin spectrofotometric la 520 mm. Pot fi folosii mai muli solveni organici. Cea mai bun curb de calibrare se obine n dioxan. Reactivi i aparatur Toi reactivii cu excepia torinului trebuie s fie de puritate analitic. Soluiile se prepar n apa distilat i pentru cltire se va folosi ap dublu distilat sau deionizat. Acid sulfuric (H2SO4), soluie de concentraie 0,05 M; Acid percloric(HClO4)., soluie de concentraie 72 %; Perclorat de bariu anhidru (Ba(ClO4)2); Dioxan sau izopropanol; Torin (sare disodic) ; Rin schimbtoare de cationi, n form puternic acid (de ex.: DOWEX 50 W x 8, 50 100 mesh); Acid percloric, soluie de concentraie 0,1 M; Acid percloric, soluie de concentraie 0,01M; Perclorat de bariu (Ba(ClO4)2), soluie stoc, 210 mg perclorat de bariu anhidru se dizolv n acid percloric 0,1 M pn la 100 mL ntr-un balon cotat. Perclorat de bariu (Ba(ClO4)2), reactiv standard, 10 mL din soluia stoc se diluleaz pn la 1000 mL cu dioxan sau izopropanol. Soluie de torin (reactiv), 125 mg de sare disodic se dizolv n 5 mL acid percloric 0,01 M i apoi se dilueaz pn la 50 mL ntr-un balon cotat. Soluia trebuie s fie preparat n fiecare zi. Soluie stoc de sulfat, 31,25 mL soluie 0,05 M de H2SO4 se dilueaz pn la 1000 mL n balon cotat. Concentraia este egl cu 50 mg S/L.
11

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Spectrofotometru pentru msurarea absorbanei la 520 nm; Cuve din sticl pentru spectrofometru, de 20 mm lungimea drumului optic; Micropipet de 250 L; Pipete cu bul de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 i 10 mL; Biuret de 50 mL; Coloan cu schimbtori de ioni: 15 cm nlime, 1 cm diametru; Eprubete de 30 mL; Baloane cotate de 50, 100 i 1000 mL. Vasele vor fi din borosilicat i vor fi cltite cu ap distilat nainte de utilizare.

Trasarea curbei de calibrare Se prepar o serie de soluii standard cu concentraii de 0; 0,5; 1,0; 1,5;4 mg S/L prin diluarea a 0; l; 2; 3; 8 mL soluie stoc de sulfat cu ap n baloane cotate de 100 mL. Se transfer cte 4 mL din fiecare soluie preparat n eprubete. Se adaug 10 mL perclorat de bariu, reactiv standard i 250 L solulie de torin. Se utilizeaz micropipeta pentru soluia de torin. Se omogenizeaz (nu se utilizeaz dopuri de cauciuc). Se transfer soluiile astfel obinute n cuvele spectrofotometrului. Se seteaz lungimea de und a acestuia la 520 nm i se regleaz transmitana la 0 %. Se msoar absorbana soluiilor pn n 10 min de la adugarea soluiei de torin. Acest lucru este important n special pentru concentraii sczute de sulfat i pentru martor deoarece compusul bariu torin poate precipita n timp. Curba de calibrare se traseaz prin reprezentarea absorbanei citite funcie de concentraia soluiilor standard. Ea nu este linear sub 0,5 mg S/L. Acest inconvenient este eliminat prin adugarea unei cantiti de sulfat corespunztoare cu 0,5 mg S/L la toate probele i la proba martor. Astfel se atinge o limit de detecie de 0,05 mg S/L. Metoda analitic Cationii sunt ndeprtai prin trecerea probei pe o coloan ce conine o rin schimbtoare de cationi n form puternic acid. Se transfer 4 mL din proba pretratat ntr-o eprubet i se procedeaz ca mai sus. Determinarea concentraiei de sulf se face prin interpolarea absorbanei citite pe curba de calibrare. Cu un echipament adecvat, metoda de determinare a percloratului de bariu Torin poate fi efectuat i automat. Interferene Fosfatul va interfera n aceast metod. Bibliografie

12

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

1. Persson, G.A. (1966) Automatic colorimetric determination of low concentrations


of sulphate for measuring sulphur dioxide in ambient air. Air Water Pollut., 10, 845-852.

13

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.5. DETERMINAREA PLUMBULUI(II) DIN AER


Jos MARTINEZ CALATAYUD, Monica CATALA ICARDO Introducere Plumbul este un agent poluant atmosferic important. Principala surs antropogen de poluare cu Pb a fost, pn n anul 2001, emisia gazelor de la benzina ntrebuinat de motoarele mainilor care folosesc tetraetil plumb ca aditiv de antidetonare. n plus, este necesar s se considere foarte importante sursele de poluare cu plumb i din unele locuri, ca de exemplu: fabricarea bateriilor, vopselurilor, insecticidelor, topirea i recuperarea metalelor. Plumbul atmosferic se depune pe suprafaa frunzelor plantelor sau pe particulele de praf de pe marginea oselelor sau din apropierea acestora. Persistena sa pe particule de praf poate fi de civa ani. Concentraiile plumbului atmosferic sunt mici, n mod normal asociate cu particulele, ceea ce nseamn c dac se trece printr-un filtru un volum mare de aer, particulele depuse conin suficient plumb pentru a fi detectat. n aceste condiii procedeul de extracie lichid-lichid este potrivit pentru a izola i concentra analitul recuperat. O aplicaie empiric a acestei procedeu, este dizolvarea n acid azotic a plumbului depus pe frunzele plantelor sau ale copacilor sau pe hrtia filtrului. Pentru a elimina o serie de interferene datorate altor metale, se adaug ioni cianur drept agent de complexare. Ditizona (sau difeniltiocarbazona) reacioneaz cu muli ioni metalici i formeaz chelai cu o coloraie intens, care pot fi extrai n solveni organici. Cnd o soluie a ditizonei n diclormetan este pus n contact cu o soluie apoas a unui metal la un pH adecvat, se formeaz complexul metal-ditizon care se extrage apoi n stratul organic. Excesul de reactiv (ditizona) este trecut n faza apoas prin alcalinizare. Maximul de absorbie al complexului metal-ditizon n faz organic este la 520 nm. Scopul lucrrii Determinarea concentraia plumbului depus pe particule. Descrierea polurii cu plumb asupra vegetaiei datorit benzinei folosit la motoarele mainilor. Folosirea unei metodologii uor disponibile bazat pe extracia lichid-lichid combinat cu fotometria n vizibil.

14

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Partea experimental Sticlria de laborator trebuie splat mai nti cu acid azotic 0,01 mol L -1 pentru a elimina orice reziduu posibil de plumb. Sticlrie i aparatur Baloane din polietilen de 100 mL (2) i mnui din latex Cilindru gradat de 50 mL (1) Pahar Berzelius gradat de 100 mL (1) Set de prelevare a probelor Filtru din fibr de sticl Plci Petri Balan analitic Foarfece Suporturi metalice (8) Cercuri metalice (8) Plnii de sticl de 250 mL (8) Pipet de 5 mL (1) Pipete de 5 mL (2) Hrtie de filtru Baloane conice (8) Eprubete (8) Tuburi cu dop de plut de 10 mL (8) Spectrofotometru (vizibil) 1. 2. 3. 4. Modul de preparare a soluiilor Soluie standard de concentraie 5 mg L -1 Pb(II). Soluia standard se prepar prin adugarea a 2,5 mL din soluia stoc de 1000 mg L -1 i apoi se completeaz pn la 1 L cu 0,1 mol L-1 HNO3. Soluie stoc de concentraie 1000 mg L-1 Pb(II), se prepar prin dizolvarea a 1,5980 g Pb(NO3)2 n HNO3 0,1 mol L-1 i apoi se completeaz pn la 1 L cu acelai solvent. Soluia alcalin de complexare. Pentru prepararea acesteia se amestec 750 mL de NH3 (aq) 25 % cu 1,0 g KCN i 1,5 g Na 2SO3 i se completeaz pn la 1 L cu ap pur. Soluia de ditizon (difeniltiocarbazon) de concentraie 25 mg/L. Se dizolv 0,025 g ditizon n 1 L de diclorometan.
15

Reactivi Soluie standard de concentraie 1000 mg/L Pb(II) Ditizon HNO3 Diclorometan NH3, soluie apoas de concentraie 25 % Na2SO3 KCN Na2SO4

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

1.

2.

3.

4.

Mod de lucru a) Prelevarea i pre-tratamentul probelor de plumb de pe frunzele plantelor (proba A). Se aleg cu atenie 8 frunze medii de lng marginea oselei sau dintr-o zon cu trafic intens, care nu prezint particule de pmnt vizibile sau ali ageni poluatori vizibili. Se pun frunzele ntr-o sticl de polietilen splat mai nti cu acid azotic (a nu se spla sau a nu se terge frunzele) i se conserv ntr-un loc uscat pn la momentul analizei. Se adaug n recipientul de prob 20 mL de HNO3 0,1 mol L-1 i se agit puternic timp de dou minute. Se transfer apoi coninutul ntr-un pahar Berzelius de sticl de 100 mL i se spala sticla pentru prob (de trei ori) cu 4 mL de HNO 3 0,1 mol L-1, adugnd de fiecare dat acidul azotic de splare n paharul gradat ce conine plumbul dizolvat. Not: nu se aruc frunzele. b) Prelevarea i tratamentul probelor pentru analiza plumbului atmosferic prins pe suprafaa unui filtru de particule (proba B). Cu ajutorul dispozitivului de prelevare a probelor, un volum suficient de aer se trece prin filtru pentru a obine pe filtru o cantitate de plumb care s se nscrie n domeniul de calibrare. O dat terminat colectarea probelor, filtrul este aezat uor pe o plac Petri (cu ajutorul a dou cleme). Apoi, placa este adus n laborator iar filtrul este introdus ntr-o sticl n care se adaug i 20 mL de HNO 3 0,1 mol L-1. Se procedeaz la fel ca n seciunea anterioar. Msurarea suprafeei frunzelor. Pentru a determina suprafaa total a frunzelor pe care este depus plumbul, se spal frunzele cu ap distilat i se usuc prin presare ntre hrtii de filtru. Se deseneaz conturul pe o hrtie de msurare, se taie hrtia i se cntrete. O bucat ptrat de hrtie, de 10 cm, este de asemenea cntrit pentru a calcula aria n cm2 a suprafeei totale a probelor de frunze. Extracia i determinarea plumbului. Fiecare soluie de prob A i B se trateaz dup cum urmeaz: se amestec ntr-o plnie de extracie coninutul paharului gradat, 5 mL soluie alcalin de complexare i 5 mL soluie de ditizon. Amestecul se agit puternic timp de 5 minute. Se oprete agitarea 5 minute pentru a permite separarea fazelor (apoas i organic). Se deschide plnia i faza organic se trece ntr-o eprubet. Se adaug un vrf de spatul de Na 2SO4 anhidru n eprubet, se agit i apoi faza organic se filtreaz pe o hartie de filtru, recoltndu-se filtratul ntr-o alt eprubet uscat care este imediat nchis pentru a evita evaporarea solventului. Precauii: tuburile de testare i celula fotometric trebuie uscate complet: se poate folosi un curent de aer fierbinte. Se ajusteaz lungimea de und la 520 nm i se face absorbana zero cu diclormetan. Graficul de calibrare. n urmtorul tabel sunt trecui reactivii (n ordinea adugrii lor) ce urmeaz a fi amestecai pentru prepararea setului de soluii standard. Precauii: A se evita n orice moment contactul cu soluia de cianur i soluiile

16

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

acide; formarea acidului cinahidric este extrem de periculoas. A nu se arunca soluiile reziduale la canal; acestea trebuie depozitate n recipieni corespunztori. Plnia: Soluie standard de 5 mg L-1, mL Soluie de HNO3 0,1 mol L-1, mL Soluie alcalin de complexare, mL Soluie de ditizon 25 mg L-1 , mL [Pb] (mg L-1) n stratul organic 1 0 20 5 5 0 2 0,5 20 5 5 0,5 3 1,0 20 5 5 1,0 4 1,5 20 5 5 1,5 5 2,0 20 5 5 2,0 6 2,5 20 5 5 2,5

ntrebri Propunei alte tehnici de analiz pentru determinarea plumbului din atmosfer. Indicai avantajele i dezavantajele acesteia. Dai exemple de alte metale grele care pot fi determinate prin tehnicile propuse. Listai datele experimentale ale metodei de analiz, indicnd posibile surse de erori.

17

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.6.

SEPARAREA PRIN EXTRACIE I DETERMINAREA SPECTROFOTOMETRIC A MERCURULUI DIN APE REZIDUALE

Principiul metodei Metoda de separare i determinare a mercurului propus se bazeaz pe precipitarea selectiv a mercurului cu reactivul Cadion A (4-nitrofenildiazo aminoazobenzen) i extracia complexului format n toluen. Prin msurarea absorbanei extractului n toluen i folosind o curb de etalonare se poate determina cantitatea de mercur din proba de analizat. Formarea compexului mercurului are loc la un pH al fazei apoase de 5,5 11. Mercurul (II) formeaz cu Cadionul un complex cu urmtoarea structur:

N NO2 N N N Hg N N N NO2 N N N

n condiiile modului de lucru dat, reacia este foarte selectiv. Nu interfer ionii de Cu(II), Au(III), Be(II), Sn(II), Cd(II), Tl (I, II), UO 2(II), Pb(II), Mn(II), Fe(II,III), Bi(III), Cr(III), Co(II), Ni(II), Rh(III), Pd(II), Pt(IV), PO 43-, MoO42- i alii. Ionul Ag(I) interfer formnd un complex de culoare roie cu reactivul. Ionul Cl - nu interfer pn la un raport Cl -/Hg(II) de 50. Ionii de Br-, I-, SCN-, S2- i EDTA interfer formnd combinaii stabile cu mercurul (II). Se constat o dependen liniar a absorbanei n funcie de concentraia de mercur n domeniul 0,14 g Hg(II)/mL. Valoarea absorbtivitii molare este de 40000 L mol -1 cm-1. Deoarece formarea complexului de mercur cu cadion are loc n mediu neutru, la mediul de reacie se adaug o soluie de tartrat de sodiu i potasiu, care prin complecii formai s evite precipitarea unor ioni. Reactivul are maximul de absorbie la 402 nm, iar complexul de mercur la 427 nm. Msurtorile de absorban, n vederea determinrii mercurului s-au realizat la 490 nm, lungime de und la care absorbana reactivului este mic.

18

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Reactivi, materiale si aparate necesare Soluie etalon de clorur mercuric cu titrul de 50 g Hg(II)/mL n ap distilat; Soluie de Cadion A (4-nitrofenildiazo aminoazobenzen) 0,015 % n metanol; Soluie de acetat de sodiu 0,2 M; Soluie de tartrat de sodiu i potasiu 20 % n ap distilat; Cilindri sau eprubete cu volumul de 10 50 mL prevzute cu dop, micropipet de 1000 L; pipete de 1, 2 i 5 mL, balon cotat de 100 mL; Determinrile de absorban se fac cu un spectrometru de absorbie molecular n UV-VIS.

Modul de lucru pentru obinerea curbei de calibrare Din soluia de Hg(II) cu titrul 50 L Hg(II)/mL se iau cu o micropipet 0,1; 0,2; 0,4; i 0,6 mL care se introduc n cilindri cu dop. Cu o pipet se introduc apoi 5 mL ap distilat, splnd bine pereii cilindrului cu scopul de a antrena ntreaga cantitate de mercur n soluia apoas. Se introduc apoi: 1 mL soluie de acetat de sodiu 0,2 M; 1 mL soluie de reactiv 0,015 %; se amestec bine i apoi se las 10 min pentru formarea complexului. Se introduc 5 mL toluen i se agit puternic timp de 1 min. Este important dup primele secunde de la agitare s se ntrerup aceasta i s se deschid puin dopul cilindrului pentru a ndeprta vaporii de toluen, dup care se continu agitarea. Dup separarea fazelor (aproximativ 10 15 min) se ia cu o pipet uscat i curat o parte din extractul toluenic care se introduce direct n celula spectrofotometrului. Determinrile de absorban se fac fa de o prob de comparaie preparat n acelai mod ca i etaloanele (se introduce ap distilat, soluie de acetat de sodiu, reactiv i se face extracia n toluen). n proba de comparaie nu se introduce mercur. Se lucreaz cu celule de drum optic de 1 cm i la o lungime de und de 490 nm. Valorile de absorban msurate se reprezint grafic n funcie de cantitile de mercur luate n analiz. Se obine astfel o curb de calibrare, care dac s-a lucrat corect, trebuie s fie o dreapt care trece prin origine. Modul de lucru pentru efectuarea analizei de mercur Proba analizat poate conine pe lng ionii de mercur (II) cantiti mari de ioni de Cu(II); Co(II); Ni(II); Fe(II, III); Zn(II); Ca(II); Mg(II) etc. Din aceast prob se primete pentru analiz o numit cantitate ntr-un balon cotat de 100 mL. Balonul cotat se aduce la semn cu ap distilat i se omogenizeaz. Din aceast prob se iau apoi probe (dou sau trei) care se introduc n cilindri n care se face extracia. Probele luate n analiz trebuie sa fie cuprinse ntr 0,1 1 mL. Se introduc apoi n fiecre cilidru cte 1 mL soluie de tartrat de sodiu i potasiu, care are rolul de a complexa unii ioni, ce ar putea precipita din mediul de reacie. n continuare se lucreaz ca la modul de lucru dat pentru obinerea curbei de calibrare.

19

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Interpretarea datelor experimentale Valorile de absorban msurate pentru probele luate n analiz permit, cu ajutorul curbei de calibrare, s se determine cantitatea de mercur din acestea. Cunoscnd cantitatea de mercur din fiecare prob i deasemenea ct reprezint ea din volumul total al probei luate n analiz, adic 100 mL, se poate determina cantitatea de mercur primit n analiz. Rezultatul se d n mg de mercur. Observaii: Toluenul este mai puin dens dect apa, iar dup agitare se separ n parte superioar. Msurtorile de absorban se fac ntotdeauna fa de o prob de comparaie care nu conine mercur.

20

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.7.

DETERMINAREA PLUMBULUI PRIN SPECTROMETRIE DE ABSORBIE ATOMIC CU ATOMIZARE ELECTROTERMIC (Et-AAS)


Maria Cristina BRATU

Introducere Plumbul metalic i compuii si sunt toxici; ei pot ptrunde n organism prin ingerare, inhalare, sau resorbie prin piele (otrvirea acut cu plumb este rar datorat slabei resorbii). Asimilarea continu de cantiti mici de plumb este de departe mai periculoas. Iniial, plumbul este slab legat de eritrocite i doar o mic parte este eliminat prin urin, majoritatea fiind acumulat n oase. Dintre toi compuii organici ai plumbului, formele trialchilate prezint cel mai puternic efect neurotoxic pentru mamifere. Dup asimilare, formele tetraalchilate sunt rapid metabolizate la forme trialchilate. n mediu, principala surs de compui organici ai plumbului o reprezint folosirea lor ca ageni antioxidani pentru benzin. Ca rezultat al legislaiei, n multe ri aceast surs de poluare este n scdere. Odat ptruni n atmosfer, compuii tetraalchilici ai plumbului se descompun fotocatalitic, proces ce poate fi foarte rapid n condiiile date. Produii de descompunere sunt compui ai plumbului tri-, di-, monoalchilai. Plumbul este un element poluant omniprezent n toate zonele biosferei. Rareori, apele naturale conin o concentraie mai mare de 5 g/L Pb, dar au fost totui raportate i concentraii mai mari de plumb. O alt surs de plumb n apa de la robinet o poate reprezenta i conductele de plumb prin care aceasta circul. Pentru determinarea plumbului se poate aplica o metod colorimetric i anume metoda cu ditizon, spectrometria de absorbie atomic cu flacr respectiv cu atomizare electrotermic (cuptor de grafit), precum i spectrometria de emisie atomic cu plasm cuplat inductiv. Spectrometria de absorbie atomic cu flacr prezint o limit de detecie relativ ridicat, necesitnd aplicarea unui procedeu de extracie n cazul analizei apei potabile n care se gsesc concentraii sczute de plumb. Spectrometria de absorbie atomic cu atomizare electrotermic este mult mai sensibil pentru concentraii sczute de plumb i nu necesit extracie. Spectrometria de emisie atomic cu plasm cuplat inductiv prezint o sensibilitate similar cu cea a spectrometriei de absorbie atomic cu flacr. n aceast lucrare se prezint un procedeu de determinare a plumbului din aerul unui loc de munc expus la aceast nox chimic prin metoda spectrometriei de absorbie atomice cu atomizare electrotermic. Reactivi i aparatur Acid azotic 65 % suprapur (Aldrich), amonium dihidrogen fosfat (Merck), ap distilat (conductivitate 4 Siemens/cm).
21

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Acid azotic 0,2 % se dilueaz 3,076 mL HNO 3 suprapur cu 1000 mL ap distilat. Modificator de matrice pentru cuptorul de grafit se dizolv 0,4 g de amoniu dihidrogen fosfat n 10 mL de ap distilat. Standard comercial de plumb de concentraie 1000 mg/L (Aldrich). Standard de plumb de concentraie 10 mg/L: n balon cotat din teflon de 25 mL se dilueaz 250 L de standard de plumb de concentraie 1000 mg/L cu 25 mL de HNO3 0,2 % suprapur. Standard de plumb de concentraie 100 g/L: n balon cotat din teflon de 25 mL se dilueaz 250 L de standard de plumb de concentraie 10 mg/L cu 25 mL de HNO3 0,2 % suprapur. Standard de plumb de concentraie 10 g/L: n balon cotat din teflon de 25 mL se dilueaz 250 L de standard de plumb de concentraie 100 g/L cu 25 mL de HNO3 0,2 % suprapur. Standardele de plumb de concentraie 2, 4 g/L sunt obinute prin diluarea automat efectuat de ctre autosamplerul spectrofotometrului de absorbie atomic Perkin Elmer, model Analyst 700 a standardului de plumb de concentraie 10 g/L cu acid azotic 0,2 %. Toate determinrile de plumb au fost efectuate folosind spectrofotometrul de absorbie atomic Perkin Elmer, model Analyst 700, echipat cu: sursa de radiaii const ntr-o surs luminoas ce emite spectrul de linii caracteristice elementului analizat (Pb): o lamp cu catod cavitar (aezat pe un sistem automat de transport cu opt poziii pentru lmpi). sursa de corecie a fondului: lamp de deuteriu. monocromator- folosit pentru izolarea unei linii de absorbie din spectrul de linii caracteristice elementului analizat. detector solid asociat cu sistem de amplificare electronic i echipament de msurare. surs de atomizare reprezentat de cuptorul de grafit cu nclzire electric longitudinal. Tensiunea este aplicat de-a lungul tubului de grafit, paralel cu fasciculul de radiaie. Sursa de alimentare, sistemele electronice, precum i controlul pneumatic al gazului inert pentru cuptorul de grafit sunt ncorporate n spectrometru. Tubul de grafit este meninut pe poziie n cuptor prin intermediul a dou contacte din grafit, care asigur contactele electrice pentru nclzirea tubului. Tubul de grafit este confecionat din electrografit acoperit cu grafit pirolitic i prezint o platform LVov integrat care determin ca prob i atmosfera din interiorul tubului s fie n echilibru termic n timpul etapei de atomizare. Pentru a preveni oxidarea tubului de grafit la temperaturi nalte i pentru purjarea din tub a vaporilor i fumului este utilizat un gaz inert (argonul) att n interiorul tubului ct i n jurul exteriorului acestuia. Rcirea tubului de grafit este realizat prin cuplarea la o surs de ap rece, o temperatur i un debit optim al apei poate rci cuptorul n 20 secunde.
22

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

autosamplerul conine toate componentele mecanice i electrice necesare prelurii unui volum corect de soluie dintr-un container selectat, injectrii sale n tubul de grafit precum i splrii acului de injecie. Folosirea autosamplerului pentru injectarea soluiilor n tubul de grafit duce la o mbuntire considerabil a rezultatelor analitice comparativ cu pipetarea manual. Volumul pipetat este cuprins ntre 1 99 L. n componena autosamplerului intr i tvia cu 88 de poziii, n care sunt aezate containere din polipropilen folosite pentru soluiile etalon, soluiile modificatorilor de matrice, soluiile probelor precum i ale diluenilor. Poziia fiecrui container apare numerotat pe tvi. calculator cu soft specific AA WinLab, care controleaz spectrofotometrul.

Mod de lucru Se pornete compresorul de aer folosit pentru acionarea pneumatic a spectrometrului. Se deschide butelia de argon i apoi se deschide circuitul apei de rcire a cuptorului de grafit. Se cupleaz la reea spectrofotometrul cu absorbie atomic i calculatorul. Se ncarc softul specific acestui instrument AA Win Lab. Dup efectuarea unui test automat de verificare a aparatului, din biblioteca cu metode, se alege metoda de determinare a plumbului bazat pe utilizarea cuptorului folosind modificator de matrice (NH 4H2PO4). Se aprind lampa cu catod cavitar de plumb i lampa de deuteriu (pentru corecia fondului) - se las s se nclzeasc o jumtate de or. n editorul metodei, se stabilesc: cantitatea de prob/standard injectat (25 L), cantitatea de modificator de matrice adugat (5 L) precum i poziia acestuia pe tvia autosamplerului, poziia diluantului (HNO 3 0,2 %), numrul de replicate, tipul dreptei de calibrare (linear/nonlinear), concentraiile standardelor folosite pentru calibrare i poziia standardului cel mai concentrat din care prin diluare automat se prepar celelalte standarde i programul cuptorului de grafit. Programul de temperatur al cuptorului de grafit 25 L de blank/standard/prob sunt introduse n unitatea de atomizare i temperatura este crescut treptat pentru a putea fi ndeprtat solventul i interferenii ct mai complet posibil naintea atomizrii. n tabelul de mai jos este prezentat programul de temperatur al cuptorului de grafit optimizat pentru determinarea plumbului. Cele cinci etape n programul de temperatur al cuptorului de grafit au urmtorul rol: 1.2. - uscarea are loc dup introducerea probei n cuptor. Proba trebuie uscat la o temperatur suficient de mic pentru a evita descompunerea ei. Pentru soluiile apoase, pentru uscarea probelor, se aplic temperaturi de 100 140 C. Utilizarea unei rampe de temperatur asigur creterea temperaturii ntr-un interval de timp bine determinat. n cazul tuburilor de grafit cu platform integrat (cazul prezentei lucrri), timpul corespunztor rampei de temperatur este mai scurt, un
23

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

timp mai lung se aplic n cazul atomizrii probei de pe pereii tubului. Dup rampa de temperatur, cuptorul este meninut la temperatura de uscare selectat, pn cnd uscarea este complet. Deoarece sunt utilizai doar civa microlitrii de prob, timpul de meninere la temperatur constant este de sub 1 minut. n timpul procesului de uscare, debitul de gaz intern este meninut la valoarea sa maxim (250-300 mL/min) pentru purjarea din tub a solventului vaporizat 3. piroliza are ca scop volatilizarea componenilor organici i anorganici ai matricei n mod selectiv fa de prob, lsnd elementul de analizat ntr-o matrice mai puin complex pentru a fi analizat. n tipul acestei etape, temperatura este crescut ct de mult posibil pentru a putea volatiliza componentele matricei, dar pn la temperatura la care ar apare pierderea analitului. Debitul de gaz intern este meninut la 250-300 mL/min pentru a indeprta componentele volatilizate ale matricei. 4. atomizarea are ca scop producerea populaiei de atomi corespunztoare elementului de analizat, care s permit msurarea absorbiei atomice. n aceast etap, temperatura este crescut pn la punctul la care s aib loc disocierea speciilor moleculare volatilizate. Temperatura de atomizare este o caracteristic a elementului analizat.Pentru atomizare este de dorit ca temperatura s fie crescut ct de repede posibil. De aceea, timpul corespunztor rampei de temperatur va fi setat la valori minime care s asigure cea mai mare vitez de cretere a temperaturI. La nceputul acestei etape, este activat operaia de citire a spectrometrului, ncepndu-se msurarea absorbiei radiaiei luminoase. 5. curirea dup atomizare, cuptorul de grafit poate fi nclzit la temperaturi mai mari, pentru a fi ars orice reziduu al probei care poate rmne n cuptor
Etapa # 1 2 3 4 5 6 Temperatura ( C) 100 140 700 1800 2600 Rampa (timp-s) 5 15 10 0 1 Meninere temp. constant (s) 20 15 20 5 3 Debit gaz intern (mL/min) 250 250 250 0 250 250 Tipul gazului (norm/spl.) N N N N N N Citire

Nu Nu Nu Da Nu Nu

Trasarea dreptei de calibrare Se citete punctul de zero al instrumentului, msurnd absorbana corespunztoare blank-ului de calibrare (HNO 3 0,2 %). Valoarea absorbanei corespunztoare blank-ului se va scdea automat att din absorbanele corespunztoare standardelor ct i probelor.
24

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Att pentru citirea blank-ului de calibrare ct i al standardelor i probelor este necesar adugarea la prepararea automat a probelor a cte 5 L soluie de NH4H2PO4 (situat n poziia 86 a autosamplerului) drept modificator de matrice. Pentru trasarea dreptei de calibrare se folosesc standarde de plumb de concentraii 2, 4, 10 g/L. Standardele de plumb de concentraie 2 respectiv 4 g/L sunt obinute prin diluarea automat efectuat de ctre autosamplerul spectrofotometrului a 5 L respectiv 10 L de standard de plumb de concentraie 10 g/L (dispus n poziia 87 a autosamplerului) cu 20 L respectiv 15 L de acid azotic 0,2 % (poziia diluentului n autosampler 88). Se citesc absorbanele corespunztoare celor trei standarde de plumb, cu cte dou replicate fiecare la 283,3 nm. Este trasat automat dreapta de calibrare de ctre softul instrumentului, n regim nonlinear. Valorile corespunztoare coeficientului de corelaie i pantei corespunztoare dreptei de calibrare sunt calculate automat i afiate pe monitorul calculatorului cuplat cu instrumentul analitic. Determinarea concentraiei de plumb din mediul unui loc de munc Se determin concentraia de plumb dintr-un mediu expus la aceast nox: atelierul linotip dintr-o tipografie. Pentru a putea determina concentraia de plumb la nivel respirator, se recolteaz plumbul din trei probe de aer, n trei momente diferite, folosind n acest scop o pomp de recoltare pentru probe gazoase Ametek. Cele trei probe de aer sunt recoltate cu un debit de aproximativ 1 L/min, timp de zece minute. Debitul de recoltare este msurat cu un calibrator de debit cu bul de spun Gilibrator 2, pentru fiecare prob n parte notndu-se valoarea exact a debitului msurat, pentru a putea determina volumul de aer recoltat: Volumaer (Vaer) = Debit (D)* timp(t) (1)

Pentru recoltarea plumbului din probe de aer se folosesc impingere, n care se introduc cte 10 mL de acid azotic 0,2 %, acid n care este barbotat un volum V de aer, reinndu-se n soluia absorbant plumbul. Fiecare din cele trei soluii absorbante (acid azotic 0,2 %) n care a fost reinut plumbul este transvazat cantitativ n cte un balon cotat de cte 50 mL, care este adus la semn cu acid azotic 0,2 %. Aceste soluii sunt introduse n cte trei cuve n autosamplerul spectrometrului i sunt analizate cu cte dou replicate fiecare. Sunt analizai cte 25 L de soluie folosind spectrofotometrul cu absorbie atomic Analyst 700, iar absorbanele corespunztoare fiecrei replicate n parte se interpoleaz pe dreapta de calibrare, determinndu-se astfel concentraiile corespunztoare. Pentru a calcula concentraia de plumb exprimat n mg/m 3 aer se aplic formula:
25

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

c Pb (mg / m 3 ) =

Vdil * c Vaer ( L) * 1000

(2)

unde Vdil. = 50 mL.; nlocuind ecuaia (1) n relaia (2), se obine:

c Pb (mg / m 3 ) =

Vdil * c D * t * 1000

(3)

unde D = debit (L/min); t = timp (min). Deci, pentru determinarea concentraiei de plumb din probele de aer recoltate se ia n calcul concentraia de plumb obinut de pe dreapta de calibrare (c- exprimat n g/L), volumul la care a fost diluat soluia absorbant a probei (V dil. = 50mL), debitul de aspirare al aerului (D exprimat n L/min ) precum i timpul de aspirare a aerului n soluia absorbant (t exprimat n min).

26

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.8.

DETERMINAREA MERCURULUI PRIN SPECTROMETRIE DE ABSORBIE ATOMIC CU VAPORI RECI


Maria - Cristina BRATU

Introducere Metalele toxice nu sunt biodegradabile, avnd tendina de a se acumula n organele vitale ale omului unde acioneaz o perioad lung de timp. Poluarea mediului cu metale toxice apare datorit efluenilor industriali, precum i a deversrilor de ape reziduale provenind de la diferite surse. Mercurul este un element n urme, care n cantiti mici poate produce efecte toxice severe. n cazul oamenilor care nu sunt expui la mercur prin intermediul meseriilor lor, cea mai probabil surs de acest element o reprezint dieta. Cantitatea raportat de mercur coninut de alimente este relativ sczut, aproximativ 0,02 g/g, dar exist o variabilitate mare a acesteia funcie de tipul de produs, de originea sa geografic, precum i de tehnicile industriale i agricole din zona respectiv. Mercurul se acumuleaz prin intermediul lanului trofic, n special n mediul acvatic. Compuii organici i anorganici ai mercurului pot fi prezeni n apa natural i se pot concentra n diferite organisme, cum sunt petii. De aceea, petii pot avea un coninut mai mare de mercur comparativ cu alte alimente, dar este dificil de raportat o concentraie medie a acestui element, deoarece aceasta depinde de specie, vrst, mrime i calitatea apei n care triesc. Dintre toate metodele pentru determinarea mercurului, absorbia atomic cu vapori reci (CVAAS) a devenit probabil cea mai utilizat tehnic de analiz fiind caracterizat prin sensibilitate i selectivitate deosebite. n aceast lucrare este descris o metod de analiz bazat pe spectrometria de absorbie atomic cu vapori reci (CVAAS) utilizat pentru determinarea mercurului din mediul unui loc de munc expus la aceast nox chimic, precum i dintr-o prob de pete. Reactivi i aparatur Clorur stanoas (Fluka), acid clorhidric (Baker), permanganat de potasiu (Spolek/Cehia), acid sulfuric (Fluka), clorhidrat de hidroxilamin (Reactivul); ap distilat (conductivitatea 4 S/cm). Acid azotic 65% fr Hg (Fluka), Acid sulfuric 98% fr Hg (Fluka). Amestec acid: acid azotic fr Hg 1,5 % i acid sulfuric fr Hg 1,5 %. Soluie absorbant pentru vaporii de mercur: 2,4 x 10 -2 % KMnO4 n H2SO4 4 %. [15] SnCl2 5 % n HCl 10 % . Soluie de permanganat de potasiu 6%.
27

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Soluie de clorhidrat de hidroxilamin 20 %. Standard stoc de mercur de concentraie 1000 mg/L (Aldrich). Standard de mercur de concentraie 10 mg/L- preparat prin diluarea a 500 L de standard stoc de mercur de concentraie 1000 mg/L cu 50 mL de soluie absorbant pentru vaporii de mercur efectuat n balon cotat de 50 mL. Standard de mercur de concentraie 100 g/L - preparat prin diluarea a 500 L de standard stoc de mercur de concentraie 10 mg/L cu 50 mL de soluie absorbant pentru vaporii de mercur efectuat n balon cotat de 50 mL. Standarde de mercur de concentraie 2 g/L, 5 g/L, 10 g/L folosite pentru etalonarea sistemului AAS-MHS 10 preparate prin adugarea n 10 mL de soluie absorbant pentru vaporii de mercur a 200 L, 500 L respectiv 1000 L de standard de mercur de concentraie 100 g/L. Toate determinrile de mercur prin absorbie atomic sunt efectuate folosind spectrofotometrul de absorbie atomic Perkin Elmer model Analyst 700 cuplat cu un sistem manual de generare de hidruri model MHS-10.

Modul de lucru pentru determinarea concentraiei de mercur din mediul unui loc de munc Se determin concentraia de mercur dintr-un mediu expus la aceast nox: incinta unui laborator de metrologie. Printre activitile desfurate n acest laborator se numr i repararea termometrelor. Pentru a putea determina concentraia de mercur la nivel respirator, se recolteaz trei probe de aer, n trei momente diferite, folosind n acest scop o pomp de recoltare pentru probe gazoase Ametek. Cele trei probe de aer sunt recoltate cu un debit de aproximativ 1 mL/min, timp de zece minute. Debitul de recoltare este msurat cu un calibrator de debit cu bul de spun Gilibrator 2, pentru fiecare prob n parte notndu-se valoarea exact a debitului msurat, pentru a putea determina volumul de aer recoltat: Volumaer (Vaer) = Debit (D)* timp(t) (1)

Pentru recoltarea probelor de aer se folosesc impingere cu frit cu volumul de 100 mL, n care se introduc cte 50 mL de soluie absorbant pentru vaporii de mercur, soluie n care este barbotat un volum V de aer, reinndu-se n soluia absorbant mercurul. nainte de efectuarea unui set de msurtori, este necesar etalonarea sistemului AAS-MHS 10. Pentru etalonare, se msoar absorbanele standardelor de mercur de concentraie 2, 5, 10 g/L la lungimea de und de 253,7 nm . Standardele de mercur de concentraie 2, 5, 10 g/L se prepar fiecare chiar naintea msurtorilor, prin introducerea n vasul de reacie al generatorului de hidruri
28

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

MHS 10, n 10 mL de soluie absorbant pentru vaporii de mercur a cte 200 L, 500 L respectiv 1000 L de standard de mercur de concentraie 100 g/L. Operarea cu sistemul MHS-10 nseriat cu spectrofotometrul de absorbie atomic n figura de mai jos se prezint schema sistemului MHS-10.
Reductor de presiune Piston Valv multicanal Celul de cuar

Supap de siguran Tub de imersare Rezervor cu reductor Vas de reacie

Schema sistemului MHS -10

Cnd sistemul MHS-10 este n repaus, un flux de argon circul continuu de la punctul de intrare al valvei (P) ctre punctul de ieire al acesteia, (A) i de acolo prin restrictorul de debit F3 (care determin o valoare nominal de debitului de 650 mL/min) n momentul conectrii la sistem a vasului cu standardul de mercur (de concentraie 2, 5, respectiv 10 g/L), un flux de gaz inert circul prin tubul (e) ctre celula de cuar, eliminndu-se aerul din sistem. Un flux continuu de gaz inert trece prin restictorul F1 (cu o valoare nominal a debitului de 25 mL/min) i linia (b) spre tubul de imersie. Gazul din tubul de imersie i forma conic a vasului de reacie asigur o foarte bun omogenizare a soluiei. Cel de al treilea flux de gaz inert circul prin restrictorul F2 (cu o valoare nominal a debitului de 400 mL/min) i linia (a) ctre vasul de reacie. Eliminarea aerului din sistem cu ajutorul fluxului de argon se efectueaz timp de 50 de secunde. Pentru a efectua n continuare determinarea, se ine apsat pistonul dispozitivului (fig. 1), iar fluxul de gaz inert care circul prin F 3 este astfel ntrerupt. Este aplicat o presiune ntre ieirea (B) a valvei, pe linia (c) ctre rezervorul cu reductor. Astfel reductorul este mpins prin tubul (d) spre tubul de imersie, prin care
29

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

este adugat la soluia de standard /prob. Drept reductor se folosete o soluie de SnCl2 5 % preparat n HCl 10 % care este adugat la soluia de analizat timp de 26 secunde. Ionii de Hg2+ din soluia de analizat sunt redui de ctre SnCl 2 la mercur n stare elementar, vaporii de mercur rezultai sunt transportai de ctre argon la celula de cuar fr ferestre (aezat pe un suport metalic montat deasupra arztorului spectrofotometrului cu absorbie atomic Analyst 700) unde absorb radiaia de la lampa cu catod cavitar de mercur a spectrofotometrului. Spectrofotometrul Analyst 700 este controlat prin intermediul calculatorului, iar dup adugarea reductorului la soluia de analizat, se ncepe msurarea absorbanei, timp de 60 de secunde. Pe ecranul calculatorului absorbana corespunztoare vaporilor de mercur se nregistreaz sub forma unor picuri a cror nlime este proporional cu concentraia elementului din proba de analizat. Se citesc absorbanele corespunztoare maximelor picurilor obinute pentru standarde de mercur de concentraie 2, 5, respectiv 10 g/L, cu cte dou replicate pentru fiecare standard, apoi se traseaz dreapta de calibrare . Se determin concentraia de mercur din fiecare prob de soluie absorbant n care a fost reinut mercurul. n acest scop, din cei 50 mL de soluie absorbant, se analizeaz cu cte dou replicate, cte 10 mL de soluie folosind sistemul manual de generare de hidruri MHS- 10 cuplat cu spectrofotometrul cu absorbie atomic Analyst 700, iar absorbanele corespunztoare fiecrei replicate n parte se interpoleaz pe dreapta de calibrare, determinndu-se astfel concentraiile corespunztoare. Pentru a calcula concentraia de mercur exprimat n mg/m 3 aer se aplic formula:

c Hg ( mg / m 3 ) =

Vsol.abs * c Vaer (L) * 1000

(2)

unde Vsol abs. = 50 mL nlocuind ecuaia (1) n relaia (2), se obine:

c Hg (mg / m 3 ) =

Vsol.abs * c D * t * 1000

(3)

unde D = debit (L/min); t = timp (min) Deci, pentru determinarea concentraiei de mercur din probele de aer recoltate se ia n calcul concentraia de mercur obinut de pe dreapta de calibrare (c- exprimat n g/L), volumul soluiei absorbante (V sol abs. = 50 mL), debitul de aspirare al aerului (D - exprimat n L/min ) precum i timpul de aspirare a aerului n soluia absorbant (t- exprimat n min).
30

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Modul de lucru pentru determinarea concentraiei de mercur dintr-o prob de pete Se analizeaz o prob de file de cod achiziionat dintr-un supermarket. n acest scop, se mrunete o cantitate reprezentativ de prob, cu ajutorul unui cuit de plastic. Din aceast prob bine omogenizat i mrunit, se cntresc aproximativ 0,7 g pete (se noteaz cantitatea exact cntrit). Se lucreaz cu dou probe n paralel, iar la o a treia prob se adaug o cantitate cunoscut de standard de mercur. Dreapta de etalonare se traseaz folosind probe de comparaie i standarde de mercur prelucrate prin acelai procedeu de mineralizare ca i probele de pete. Procedeul de mineralizare a probelor de pete, a probelor de comparaie i standardului de mercur (100g/L Hg) Se introduc n dou pahare Erlenmeyer cu dop cu lif, aproximativ cte 0,7 g pete, 5 mL H2SO4 concentrat. Se nchid bine recipienii i se introduc n baia de ap setat la 70 C, timp de o or. Se rcesc apoi paharele pe baie de ghea, adugndu-se n aceast poziie cte 50 mL de KMnO 4 6 %. Se introduc apoi paharele n baia de ap setat la 55 C, timp de dou ore. Se las apoi s se rceasc la temperatura camerei i se adaug cte 15 mL de clorhidrat de hidroxilamin 20 %. Din soluiile rezultate, se determin concentraia de mercur cu ajutorul sistemului AAS-MHS 10, analiznd dou replicate a cte 10 mL din fiecare soluie. n cazul probei de comparaie folosit pentru trasarea dreptei de calibrare i pentru prepararea standardelor de calibrare de concentraie 2, 5, respectiv 10 g/L se introduc n pahare Erlenmeyer cu dop 5 mL H 2SO4 concentrat, restul procedeului fiind identic cu cel folosit la mineralizarea probelor de pete. Se traseaz dreapta de calibrare folosind prob de comparaie i standarde care parcurg naintea analizei, aceleai etape ca i probele. Se prepar standardul de Hg de concentraie 10 mg/L prin diluarea a 500 L de standard de mercur comercial de concentrae 1000 mg/L cu 50 mL de amestec de acid azotic fr Hg 1,5 % i acid sulfuric fr Hg 1,5 % n balon cotat de 50 mL (se adaug n balon cinci picturi de KMnO4 6% pentru stabilizarea mercurului). Standardul de mercur de concentraie 100 g/L se obine prin introducerea n pahar Erlenmeyer cu dop, a 700 L de standard de mercur de concentraie 10 mg/L i 5 mL H 2SO4 concentrat, urmndu-se acelai procedeu de mineralizare ca n cazul probelor de pete. Cu toi reactivii adugai n procedeul de mineralizare, cei 700 L de standard de mercur de concentraie 10 mg/L se vor dilua cu 70 mL amestec de reactivi, obinndu-se standardul de mercur de concentraie 100 g/L. Pentru trasarea dreptei de calibrare, se introduc n vasul de reacie al sistemului MHS-10, n 10 mL prob de comparaie mineralizat cte 200 L, 500 L, respectiv 1000 L de standard de mercur de concentraie 100 g/L mineralizat pentru a obine standardele de calibrare de concentraie 2, 5, 10 g/L Hg. Dup conectarea vasului de reacie cu fiecare standard n parte, la sistemul MHS 10, se barboteaz argon n vasul de reacie timp de 50 secunde pentru eliminarea aerului din sistem. Se
31

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

adug apoi reductorul n vasul de reacie (soluie de SnCl 2 5 % preparat n HCl 10 %), timp de 26 secunde. Sub aciunea reductorului, ionii Hg 2+ sunt redui la Hg elementar, vaporii de mercur rezultai fiind transportai de ctre argon la celula de cuar fr ferestre unde absorb radiaia de la lampa cu catod cavitar de mercur a spectrofotometrului Analyst 700. Se citete absorbana corespunztoare fiecrui standard cu cte dou replicate. Pentru a citi punctul de zero mercur al instrumentului n vederea eliminrii influenei Hg coninut de reactivi, nainte de a ncepe citirea absorbanelor corespunztoare standardelor de mercur de concentraie 2, 5, 10 g/L Hg, n vasul de reacie al instrumentului se introduc 10 mL prob de comparaie mineralizat, msurndu-se dup adugarea reductorului, absorbana corespunztoare acesteia. Ulterior aceast absorban se scade automat din absorbanele corespunztoare standardelor de mercur i probelor. Absorbanele corespunztoare mercurului din probele de pete se interpoleaz pe dreapta de calibrare i se determin concentraia de mercur din cei 10 mL de soluie analizat. Calculul concentraiei de mercur din probele de pete Pentru a calcula concentraia de mercur din probele de pete exprimat n mg/kg prob se aplic formula:

c Hg ( mg / kg ) =

Vsol.finala (mL) * c m proba (g) * 1000

(4)

unde Vsol final. = 70 mL; Deci, pentru determinarea concentraiei de mercur din probele de pete se ia n calcul concentraia de mercur obinut de pe dreapta de calibrare (c- exprimat n g/L), volumul soluiei finale (dup adugarea tuturor reactivilor nainte de citirea probelor) precum i cantitatea de prob de pete (exprimat n grame) analizat. Aplicarea metodei adiiilor standard pentru verificarea interferenelor ntr-un pahar Erlenmeyer cu dop, se introduc aproximativ 0,7 g pete, 35 L de standard de mercur de concentraie 10 mg/L i 5 mL H 2SO4 concentrat. Se urmeaz exact acelai procedeu de mineralizare descris mai sus. Se analizeaz apoi cu dou replicate, cte 10 mL din soluia rezultat dup mineralizarea probei. Se calculeaz randamentul de regsire (%) cu formula: Regsire(%) = unde:
32

Conc. determ. * 100 Conc. calc.

(5)

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Conc. determ. = concentraia determinat se obine dup aplicarea ecuaiei (4); Conc. calc. = concentraia corespunztoare probei de pete +5 g/L (standardul de mercur adugat).

I.9.

DETERMINAREA pH-ului N APE DE PLOAIE. METODA POTENIOMETRIC


Principiul metodei Metoda se bazeaz pe diferena de potenial ntre o pereche de electrozi ce const dintr-un electrod de sticl sensibil la diferenele activitii ionilor de hidrogen dintre soluia de prob i soluia intern i un electrod de referin, ce se presupune c are un potenial constant, independent de n care este imersat. Diferena de potenial msurat este comparat cu potenialul obinut n condiiile n care ambii electrozi sunt imersai ntr-o soluie sau ntr-o soluie tampon cu pH-ul sau cu concentraia ionilor de hidrogen cunoscute. pH-ul este definit de urmtoarea formul: pH(proba) = pH(referinta) + [E(proba) E(referinta)] F/RT1n10

unde E reprezint potenialele electrozilor, R este constanta universal a gazelor, T este temperatura absolut i F este constanta Faraday. Aceasta este definiia operaional a pH-ului. Soluiile tampon de pH cunoscut sunt atestate de ctre Institutul Naional de Tehnologie Standardizat (NIST). Standardul primar i cel mai des folosit pentru calibrarea pH-metrelor este soluia de ftalat acid de potasiu de concentraie 0,05 M, ce are un pH = 4,00 la 20C i o activitate a ionilor de hidrogen de 10 -4M. Activitatea ionilor de hidrogen se determin prin calcule teoretice (convenia Bates-Guggenheim). n probe de ap de precipitaii, tria ionic are de obicei o valoare situat n intervalul 10-3-10-5. Coeficintul de activitate pentru cationii monovaleni precum ionii de hidrogen va fi n domeniul 0,95 0,99. Aceasta corespunde unei diferene ntre pH i log(H+) mai mic de 0,02 uniti de pH. Mult mai critic este presupunerea unui potenial constant al electrodului de referin la trecerea dintr-o soluie de ftalat acid de potasiu relativ concentrat la soluii de prob extrem de diluate. Aceast situaie apare datorit posibilitii apariiei inerente a unui potenial de jonciune lichid ntre soluia intern a electrodului de referin i soluia de prob. Acest potenial de jonciune lichid este cu att mai mare cu ct diferena ntre triile ionice ale celor dou soluii este mare i poate fi redus prin micorarea zonei de contact dintre soluia intern i soluia de
33

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

prob. Au fost propuse o serie de celule ce ndeplinesc acest criteriu. Teste efectuate pe electrozi comerciali cu soluii acide diluate sau cu soluii tampon de trie ionic sczut, cu pH-ul sau concentraia de ioni de hidrogen cunoscute, au demonstrat ns c aceast problem a fost n bun msur rezolvat prin utilizarea unor pH-metre i a unor sisteme de electrozi moderne. Cu toate acestea, se recomand verificarea sistemului de electrozi la intervale regulate de timp, prin msurarea pH-ului aparent al unei soluii de trie ionic sczut cu pH-ul sau concentraia de ioni de hidrogen cunoscute. pH-ul determinat trebuie s difere de pH-ul teoretic cu maxim 0,02 0,05 uniti de pH. Dac acest lucru nu se ntmpl, sau dac citirea nu este stabil n timpul agitrii soluiei, electrodul de referin trebuie nlocuit. Un electrod de sticl nou trebuie testat fa de cel puin dou soluii tampon pentru a vedea dac rspunsul su este Nernstian. Este de preferat ca electrodul de referin s fie pstrat ntr-o soluie diluat de clorur de potasiu (0,1M). Reactivi i aparatur Soluii propuse de Institutul Naional de Tehnologie Standardizat (NIST) de pH cunoscut. 1. soluie de ftalat acid de potasiu (C6H4(COOH)(COOK)) de concentraie 0,05 M; pH = 4,00 la 20C i pH = 4,01 la 25C. Se dizolv 10,12 g de ftalat acid de potasiu, C6H4(COOH)(COOK), uscat la 120C, n 1000 mL ap distilat. 2. soluie de fosfat acid de potasiu (KH 2PO4) de concentraie 0,025M i soluie de fosfat acid disodic (Na2HPO4) de concentraie 0,025M; pH = 6,88 la 20C i pH = 6,86 la 25C. Se dizolv 3,39 g fosfat acid de potasiu, KH 2PO4, i 3,53 g fosfat acid disodic, Na2HPO4, uscat la 120C, n 1000 mL ap distilat. n locul fosfatului acid disodic anhidru poate fi folosit o cantitate de 4,43 g de fosfat acid disodic hidratat, Na2HPO4x2 H2O, neuscat. Pot fi de asemenea folosite i soluii tampon disponibile comercial, dar trebuiesc verificate fa de soluia tampon primar menionat anterior. Soluiile tampon trebuiesc inute la ntuneric n recipiente de borosilicat sau polietilen bine sigilate. pH-metru cu o precizie de 0,02 sau chiar 0,01 uniti de pH; electrod de sticl i electrod de referin pentru pH-metru. Electrodul de referin trebuie ales astfel nct s permit determinri n soluii cu trie ionic sczut i este de preferat s fie un electrod de calomel umplut cu soluie saturat de clorur de potasiu. Pot fi folosii i ali electrozi de referin sau combinaii de electrozi, dar trebuiesc testai n vederea obinerii unor performane acceptabile. agitator magnetic, cu bar de agiare nvelit n teflon pahare Berzelius folosite pentru soluia test, din sticl de borosilicat sau polietilen Trasarea curbei de calibrare
34

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Calibrarea pH-metrului se efectueaz n concordana cu instruciunile din manualul de utilizare al instrumentului, folosind una sau dou (preferabil) soluii tampon. Temperatura soluiilor tampon trebuie s fie cunoscut. Calibrarea trebuie verificat dup fiecare set de probe. Mod de lucru Msurarea pH-ului probei se efectueaz n concordan cu instruciunile din manualul de utilizare al instrumentului. Soluia se agitat, dar nu foarte puternic. Temperatura soluiei de prob trebuie s fie aceeai cu cea a soluiei de tampon folosit la calibrare. Se spal electrodul cu ap distilat dup fiecare msuratoare, dup care este uscat cu hrtie de filtru. Electrozii sunt pstrai ntr-o soluie de KCl 0,1 M sau n concordana cu recomandrile productorului. Electrodul de referin nu trebuie pstrat n ap distilat! Testul de performan al perechii de electrozi Comportarea electrodului de referin genereaz principala surs de erori n cazul msurrii pH-ului, n special n soluii cu o trie ionic sczut. Pentru a determina performanele unui electrod de referin, trebuiesc efectuate msurtori de control n soluii diluate de acizi sau pentru soluii diluate de tampon, cu scopul de a verifica corectitudinea valorilor de pH obinute pentru soluii cu trie ionic sczut. n acest caz, poate fi folosit pentru studii o soluie ce are un pH de ~ 4,00. O soluie de HCl de concentraie 10-4 M trebuie s prezinte un pH de 3,990,05. Perechile de electrozi trebuie de asemenea s prezinte diferene mici ntre valorile obinute pentru soluiile cu trie ionic mic agitate i neagitate. n general, jonciunea lichid dintre soluia de analizat i soluia saturat de KCl din interiorul electrodului de referin este format dintr-o frit ceramic poroas. O agitare uoar ndeprteaz soluia concentrat de KCl care iese prin intermediul capilarelor. Dac agitarea este prea puternic, aceasta poate determina o diluare a mediului ionic chiar n frit. Acest lucru mrete potenialul de jonciune lichid i deci trebuie evitat. Potenialul de jonciune lichid poate fi de asemenea s creasc dac frita se colmateaz cu impuriti. Bibliografie 1. Bates, R.G. (1965), Determination of pH, Theory and Practice. New York, Wiley. 2. Linnet, N. (1970), pH Measurements in Theory and Practice , Copenhagen, Radiometer. 3. Westcott, C.C. (1978), pH Measurement, New York, Acad. Press. 4. Davison, W. and Woof, C. (1985) Performance tests for the measurement of pH with glass electrodes in low ionic strength solutions including natural waters. Anal. Chem., 57, 2567-2570.
35

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

36

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.10.

DETECIA PESTICIDELOR UTILIZND BIOSENZORI SERIGRAFIAI PE BAZ DE PRUSSIAN BLUE


Fabiana ARDUINI, Giuseppe PALLESCHI

Introducere Aceast lucrare de laborator prezint o nou metod de determinare a pesticidelor organo-fosforice i carbamice din ap utiliznd electrozi serigrafiai modificai cu Prussian Blue. Pesticidele se numr printre cei mai importani poluani ai mediului datorit toxicitii mari i prezenei lor extinse n mediul nconjurtor. De la cel de al Doilea Rzboi Mondial, a crescut mult utilizarea pesticidelor n agricultur odat cu creterea produciei mondiale de alimente. n acest context, emisiile de pesticide din timpul producerii lor, i mai important prezena reziduurilor acestor substane i a metaboliilor lor n alimente, ap i sol a devenit o problem social de larg interes [1]. Printre numeroasele metode utilizate pentru determinarea pesticidelor, metodele cromatografice cum ar fi Cromatografia de Lichide de nalta Performan (HPLC) sau Cromatografia de gaze (GC) sunt utilizate ca metode de referin [2,3]. Metodele enzmatice au fost adoptate ca alternative la metodele clasice pentru determinarea mai simpl i mai rapid a unor poluani ai mediului [4,5]. Utilizarea enzimelor colinesterazice pentru determinarea bazat pe inhibiie a poluanilor au demonstrat un mare potenial pentru analiza de screening a mediului [68]. Colinesteraza exist n sistemul nervos i n celulele roii ale sngelui i joac un rol fiziologic important, fiind responsabil de hidroliza acetiltiocolinei, un neurotransmitor ce opereaz la nivelul sinapselor nervoase. Reacia de hidroliz enzimatic a acetiltiocolinei n prezena acetilcolinesterazei (AChE) este urmtoarea:
AChE

CH3COO(CH2)2N+(CH3)3Cl- + H2O

CH3COOH + HO(CH2)2N+(CH3)3Cl- (1)

AChE este inhibat ireversibil de pesticidele organo-fosforice i carbamice, iar compararea activitii enzimatice a acesteia nainte i dup expunerea la proba analizat poate furniza infomaii privind nivelul polurii. Msurarea activitii enzimatice poate fi realizat utiliznd metode electrochimice [6-9], chemiluminometrice [10] sau spectrofotometrice [11, 12]. n ultimii ani, o mare atenie a fost acordat proiectrii de biosensori electrochimici integrai pentru determinarea compuilor inhibitori ai activitii colinesterazelor. Determinarea amperometric a pesticidelor este mai precis i mai sensibil comparativ cu determinarea poteniometric care se bazeaz pe msurarea acidului acetic rezultat n urma hidrolizei enzimatice. A fost dezvoltat un sistem amperometric bi-enzimatic ce
37

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

utilizeaz AChE impreun cu colinesteraza (ChOD). n acest sistem colina rezultat n urma hidrolizei enzimatice este apoi oxidat de ChOD, produsul electrochimic activ (H2O2) fiind determinat amperometric.
ChOD

HO(CH2)2N+(CH3)3Cl- + O2

HOOC(CH2)2N+(CH3)3Cl- + H2O2 (2)

Biosenzorul utilizat n aceast lucrare se bazeaz pe utilizarea unui traductor modificat cu Prussian Blue (PB) ce este cuplat cu AChE ca enzim, i cu acetiltiocolina ca substrat enzmatic. Tiocolina produs n urma reaciei enzimatice este msurat utiliznd electrozi serigrafiai (screen-printed electrodes, SPE) modificai cu PB. Msurtorile se realizeaz n pictur, la un potenial de + 200 mV fa de electrodul de referin de Ag/AgCl. Efectul electrocatalitic al PB fa de tioli a fost discutat pentru prima dat ntro lucrare anterioar [13]. Parte experimental Pricipiul metodei Calitatea PB de catalizator a fost combinat cu tehnologia serigrafierii pentru construcia de senzori cu caractestici superioare pentru determinarea amperometric a tiocolinei. Biosensorul pentru determinarea pesticidelor este bazat pe urmtoarea reacie:
AChE

CH3COS(CH2)2N+(CH3)3Cl- + H2O

CH3COOH + HS(CH2)2N+(CH3)3Cl-

n urma reaciei enzimatice se produce ticolina, care este oxidat la electrodul modificat cu PB. Se utilizeaz electrozi serigrafiai modificai cu PB acoperii cu o membran enzimatic. Reactivi glutarladehid 25 % (soluie apoas); Nafion; Aceticolinesteraza (AchE) (EC 3.1.1.7) 244 U/mg; Hexacianoferat de potasiu; Clorur feric; Paraoxon (dietil-p-nitrofenilfosfat). Ca tampon de lucru s-a utilizat tamponul fosfat de poatasiu salin (0,05 M ce conine KCl 0,1 M, pH 7,4). Toi reactivii folosii trebuie s fie de puritate analitic. Aparatur Determinrile se realizeaz utiliznd un poteniostat portabil PalmSens Electrochemical Sensor Interface (Palm Instruments BV, Olanda).
38

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Prepararea electrozilor Electrozii serigrafiai utilizai sunt preparai cu o main de serigrafiat 245 DEK (Weymouth, Anglia), utiliznd pentru imprimarea electrodului de lucru o cerneal pe baz de grafit (Electrodag 421) produs de Acheson Italiana (Milano, Italia). Serigrafierea se realizeaz pe un suport flexibil format dintr-un film de poliester (Autostat HT5) obinut de la Autotype Italia (Milano, Italia). Electrozii sunt produi n folii de cte 20. Diametrul electrodului de lucru este de 0,3 cm, ceea ce determin o arie geometric aparent de 0,07 cm 2, contra-electrodul este pe baz de cerneal grafitic, iar electrodul de referin este de clorura de argint. Modificarea electrozilor cu Prussian Blue Electrozii serigrafiai sunt modificai prin plasarea unei picturi (10 L) de soluie precursor pe suprafaa electrodului de lucru. Aceast soluie este obinut prin amestecarea a 5 L de FeCl3 0,1 M preparat n HCl 10 mM cu 5 L de K3[Fe (CN) 6] 0,1 M preparat n HCl 10 mM. Pictura trebuie plasat cu atenie numai pe suprafaa electrodului de lucru astfel nct s se evite formarea PB pe electrodul de referin sau pe contra-electrod, fapt care ar duce la creterea apreciabil a rezistenei interne a sistemului. Dup 10 minute, electrozii sunt cltii cu 3 mL HCl 10 mM. Electrozii sunt apoi lsai 90 min n etuv la 100 C pentru a obine un strat activ i stabil de PB. Electrozii modificai cu PB se pstreaz uscai, la temperatura camerei i la ntuneric. Imobilizarea acetilcolinesterazei Acetilcolinesteraza a fost imobilizat pe suprafaa electrozilor modificai cu PB utiliznd metoda legrii ncruciate. Astfel, 4 L de amestec glutaraldehid 1 % n ap, Nafion 5 % n alcool, BSA 3 % n ap i AChE 0,01 U au fost lsai s se usuce aproximativ 30 min pe suprafaa electrodului de lucru. Dup preparare biosenzorii au fost pstrai n tampon la 4 C. Procedura de determinare a pesticidelor Determinarea pesticidelor se bazeaz pe msurarea activitii enzimatice nainte i dup punerea n contact a biosenzorului cu proba. Msurarea activitii enzimatice nainte de punerea n contact cu proba se realizeaz dup cum urmeaz: 1) 50 L de tampon sunt plasai pe electrod, dup care se aplic un potenial de + 200 mV vs. Ag/AgCl i se nregistraz curentul (aprox. 5 nA). Dup efectuarea msurtorii soluia tampon este ndeprtat de pe suprafaa biosenzorului. 2) 50 L de tampon de lucru ce conine tiocolin 3 mM sunt adugai pe electrod i se nregistreaz curentul (aproximativ 80 nA). Curentul obinut ce se datoreaz oxidrii ticolinei se obine fcnd diferena dintre curentul nregistrat n etapa 2 minus cel nregistrat n etapa 1. Valoarea obinut corespunde enzimei neinhibate (I0). 3) Biosenzorul este splat cu soluie tampon i se incubeaz timp de 30 min n 5 mL prob, sub agitare. n timpul incubrii AChE este inhibat dac n prob exist pesticide. 4) Dup aceasta, biosensorul este splat cu tampon i se repet a doua etap, nregistndu-se activitatea enzimatic rezidual.
39

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Curentul datorat oxidrii ticolinei, produs dup inhibarea enzimei, este dat de diferena dintre curentul nregistrat n etapa 4 minus cel nregistrat n etapa 1 (I1). Inhibiia procentual se calculeaz pe baza urmtoarei formule: I%= [(I0-I1)/I0]100 Reactivarea biosensorului Acest tip de senzori sunt de unic folosin, dar este posibil msurarea pesticidelor de mai multe ori utiliznd acelai electrod. Practic, este posibil utilizarea aceluiai biosensor reactivnd enzima cu piridin-2-aldoxim methocolur (2-PAM). Dup fiecare prob analizat, biosensorul se spal cu ap distilat i se relizeaz regenerarea lui prin plasarea pe acesta a unei picturi de soluie 2-PAM 5 mM timp de 30 sec. Apoi, biosensorul este splat i o alt pictura de soluie tampon ce conine substratul enzimatic este adguat pe suprafaa senzorului pentru msurarea activitii enzimei regenerate. Acest procedeu permite utilizarea unui biosenzor de mai multe ori. Pentru msurarea unei concentraii necunoscute de pesticid prezent n ap este necesar parcurgerea tuturor celor patru etape i respectiv, calcularea inhibitiei procentuale. Concentraia pesticidului se calculeaz folosind curba de calibrare ce ar trebui obinut nainte de analizarea propriu-zis a probelor.

Linia de baz

Timp (min)

40

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

1.

2.

Modul de lucru Curba de calibrare este necesar pentru msurarea i calcularea inhibiiei pentru urmtoarele concentraii de paraoxon: 0, 10, 20, 30, 40 i 50 ppb. Soluiile de paraoxon se prepar n ap distilat i se urmeaz etapele 1-4 ale procedurii prezentate anterior. Gradul de inhibiie ale biosenzorului n funcie de concentraia paraoxonului se reprezint grafic i se calculeaz parametrii dependenei lineare rezultate. Analiza probei i calcularea concentraiei pesticidului. Dou probe de ap potabil n care a fost adugat paraoxon vor fi analizate pentru determinarea concentraiei pesticidului. Inhibiia enzimatic calculat pentru fiecare prob va fi introdus n ecuaia calculat anterior i se calculeaz concentraia paraoxonului din fiecare prob.

Bibliografie 1. FAO, Agriculture towards 2010, in: C 93/94 Document of 27 th Session of the FAO Conference, Rome, 1993. 2. Standard methods for examination of water and wastewater 20th ed.; American Public Health Association; Washington,1998; pp 6/85-6/90. 3. Liska I.; Slobodnik J. J.Cromatogr.A, 1996, 733, 235-258. 4. Preininger C.; Wolfbeis O.S. Biosens. Bioelectron, 1996, 11, 981-990. 5. Bagirova, N.A.; Shekhovtsova, T. N.; van Huystee, R. B., Talanta, 2001. 6. Bernabei M.; Chiavarini S.; Cremisini C.; Palleschi G., Biosens. Bioelectron, 1993, 8, 265-271. 7. Cremisini, C.; Di Sario, S.; Mela, J.; Pilloton, R.; Palleschi, G., Anal. Chim. Acta, 1995, 311, 273-280. 8. Hart A.L.; Collier W.A.; Janssen D., Biosens. Bioelectron, 1997, 12, 645-654. 9. Sol S.; Merkoci A.; Alegret S., Crit. Rev. in Anal. Chem., 7, 2003, 33(2), 9-126. 10. Dne A.F.; Badea M.; Aboul-Enein H.Y., Biopolymers (Biospectr.) 2000, 57, 3742. 11. Poganik L.; Franko M., Biosens. Bioelectron, 1999, 14, 569-578. 12. Ellman, G.L.; Courtney K.D.; Andres V; Featherstone R.M., Biochem. Pharmacol, 1961, 7, 88-95. 13. Ricci, F.; Arduini, F.; Amine, A.; Moscone, D.; Palleschi, G., J. Electroanal. Chem. 2004, 563, 229-237. 14. Ricci, F.; Amine, A.; Tuta C.; Ciucu A., Lucarelli F.; Palleschi, G., Anal. Chim. Acta 2003, 485, 111-120.

41

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.11.

DETERMINAREA ACIZILOR TARI I SLABI N APE DE PRECIPITAII. METODA TITRRII COULOMETRICE

Introducere Aceast metod este folosit pentru determinarea acizilor tari n apele de precipitaii pentru un domeniu de concentraii cuprins ntre de 10 -5i10-3 M. Limita de concentraie inferioar este apropiat de concentraiile din apele de adncime ce nu conin minerale alcaline. Principiul metodei n cazul metodei de titrare coulometric (Liberti i colab., 1972), acidul este titrat la curent constant cu ioni hidroxil eliberai de un electrod de platin, iar electrodul auxiliar este un electrod de argint/bromur de argint. Reacia total este: Br- + Ag + H2O AgBr + OH- + H2 Tensiunea electromotoare (EMF) a perechii de electrod de sticl electrod de calomel este citit la anumite intervale de timp i rezultatele sunt folosite pentru construirea unei diagrame Gran (Gran, 1952; Rosotti and Rosotti, 1965), din care se determin punctul final al titrarii prin extrapolarea prii lineare a curbei. Singura modificare ce se impune este adugarea la prob a unui volum cunoscut i constant de acid nainte de titrare, pentru a facilita titrarea probelor slab acide sau bazice fr interferene din partea dioxidului de carbon. Reactivi i aparatur n vederea realizrii analizelor sunt folosii numai reactivi de puritate analitic. Apa utilizat pentru diluare i spare trebuie s fie dublu-distilat sau deionizat i apoi distilat. Azot gazos (N2) de concentraie 99,9%; Bromura de potasiu (KBr); Acid sulfuric (H2SO4) de concentraie 0,05 M; Soluie tampon de pH = 4,00; Soluie I: soluie de KBr de concentraie 1 M i soluie de H 2SO4 de concentraie 2,5x10-3 M. Se transfer 120 g KBr i exact 50 mL de soluie de H 2SO4 0,05M ntr-un balon cotat de 1000 mL. Se aduce la semn cu ap. pH-metru cu scala extins (Radiometer PHM 26 sau un instrument cu specificaii similare); o surs de curent constant (2-10 mA, ajustabil);
42

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

o baterie de 4,5 V cu rezistene n serie ajustabile i un miliamperometru sunt suficiente pentru realizarea msurtorilor, dar sunt, de asemenea, i coulometre disponibile comercial (de exemplu Metrohm); pahar pentru titrare, 100 mL. Aceasta trebuie s prezinte un capac special cu guri ce servesc ca suport pentru electrozi i pentru racordul de azot i trebuie s fie dotat cu o manta termostatat; un termostat (25 C 1 C); electrozi sensibili. Un electrod de sticl obinuit (scar de pH 0-10) i un electrod de calomel ca referin, sau un electrod combinat; electrozi de lucru. Electrodul de platin (2 x 2 cm) este realizat din platin lucioas (foi sau reea). Electrodul de Ag este alctuit din argint de 99,9% puritate i este un fir cu diametrul de 1,0 mm i o lungime de 30 cm, spiralat n dimensiuni convenabile. pipete de 50 mL; micropipete de 0,5 i 1,0 mL; balon cotat de 1000 mL.

Mod de lucru Se pornesc toate aparatele i se las o jumatate de or astfel nct acestea s intre n regim optim de lucru. Se regleaz pH-metrul la pH 4,00, utiliznd soluia tampon. Se transfer 50 mL de proba n instalaia de titrare termostatat i se adaug 1 mL de soluie I. Se pornete barbotarea cu azot i se ajusteaz fluxul astfel nct soluia s fie agitat n mod continuu. Nu trebuie s existe bule care s perturbe soluia dintre electrodul sensibil i electrodul de lucru. Se msoar pH-ul soluiei. Dac pH-ul probei este mai mare de 5.6, este necesar adugarea unui volum mai mare de 1 mL de soluie I. Se ateapt pn cnd pH-ul rmne constant. Se comut pH-metrul pentru a citi n milivoli (scala 0240 mV cu electrodul de sticl pozitiv) i se pornete curentul de electroliz. Se citete potenialul electrodului de sticl fa de electrodul de calomel la fiecare 20 de secunde i se continu pn cnd potenialul i modific semnul (n jurul valorii de pH 8). Se oprete electroliza. Se traseaz diagrama Gran, Y, la 25C (vezi tabelul de mai jos) fa de timpul de electroliz (n secunde). Diagrama intersecteaz abscisa n punctul de echivalen, te (F-constanta Faraday, R-constanta universal a gazelor, T-temperatura absolut).

43

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Funcia Gran. EmV 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 44 y 1,04 1,08 1,14 1,17 1,22 1,26 1,31 1,36 1,42 1,48 1,54 1,60 1,66 1,73 1,80 1,90 1,94 2,02 2,10 2,18 2,26 2,36 2,45 2,54 2,65 EmV 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 y 4,93 5,13 5,33 5,55 5,77 5,98 6,22 6,47 6,75 7,00 7,28 7,57 7,87 8,19 8,51 8,85 9,20 9,57 9,94 10,3 10,7 11,1 11,6 12,1 12.5 EmV 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 y 23,4 24,4 25,3 26,3 27,4 28,4 29,6 30,7 32,0 33,3 34,6 36,0 37,4 38,8 40,4 42,0 43,6 45,3 47,2 49,1 51,0 53,1 55,2 57,4 59,7 EmV 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 y 111 115 120 125 130 135 140 146 152 158 164 171 177 185 192 199 207 216 224 233 242 252 262 272 283

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

EmV 26 27 28 29 30 31 32 34 34 35 36 37 38 39 40

y 2,75 2,86 2,97 3,09 3,21 3,34 3,48 3,61 3,75 3,90 4,06 4,23 4,39 4,56 4,74

EmV 66 67 68 69 70 71 72 74 74 75 76 77 78 79 80

y 13,0 13,5 14,1 14,6 15,2 15,8 16,5 17,1 17,8 18,5 19,3 20,0 20,8 21,7 22,5

EmV 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120

y 61,9 64,4 67,0 69,7 72,4 75,3 78,3 81,5 84,7 88,1 91,6 95,1 98,9 103 106

EmV 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160

y 294 306 318 331 344 351 371 386 402 418 434 452 470 489 507

Exprimarea rezultatelor Concentraia acizilor tari din prob este calculat prin formula:

sau

unde: i = curentul de electroliz n amperi; te = timpul de electroliz la punctul de echivalen (secunde); F = constanta Faraday (coulombi/mol); Vo = volumul iniial de prob (litri); NH2SO4 = normalitatea acidului sulfuric adugat; VH2SO4 = volumul de acid sulfuric adugat (litri)
45

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Nota: Sticl borosilicat poate fi folosit pentru pstrarea probei. Sticlria trebuie tratat cu acid diulat fierbinte i cltit foarte bine apoi cu ap distilat nainte de folosire. Se consider adecvat o inere a sticlriei timp de 12 ore ntr-un vas cu acid clorhidric 10%, la 90C, urmat de cltirea ntr-un vas cu ap distilat timp de 24 de ore. n caz contrar este posibil difuzia metalelor alcaline din sticl n prob.

Bibliografie 1. Gran, G. (1952) Determination of the equivalence point in potentiometric titrations. Part I. Analyst, 77, 661-671. 2. Liberti, A., Possanzini, M. and Vicedomini, M. (1972) The determination of the non-volatile acidity of rain water by a coulometric procedure. Analyst, 97, 352-356. 3. Rosotti, F.J.C. and Rosotti, H.J. (1965) Potentiometric titrations using Grans plots. Chem. Educ., 42, 375-378.

46

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

47

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.12.

DETERMINAREA BENZENULUI, TOLUENULUI I XILENULUI DIN AER PRIN CROMATOGRAFIE DE GAZE


Jos MARTINEZ CALATAYUD, Monica CATALA ICARDO

Introducere Hidrocarburile aromatice sunt de o importan industrial deosebit; ele reprezint materia prim pentru mai mult de 60% din cantitatea de mase plastice, elastomeri i fibre sintetice, i de asemenea pentru vopseluri, insecticide, medicamente etc. n plus, acestea se gsesc n combustibilii obinui din petrol. Datorit acestora, i putem gsi ca ageni de poluare atmosferic n concentraii foarte diferite. Cele mai importante hidrocarburi aromatice sunt benzenul, toluenul i diferii xileni (izomeri micti), urmai de naftalin i antracen. Principalele surse de benzen sunt fraciile uoare de gudron de crbune i fraciile aromatice extrase din benzin. Toluenul se obine din aceleai surse ca i benzenul i poate fi separat de acesta i de xilen prin distilri succesive. Mai mult de 50% din toluenul produs se transform n benzen prin hidro-dealchilare. O parte din fraciile cu coninut mare de toluen se adaug benzinei pentru a crete cifra octanic. Aceste motive fac ca benzenul, toluenul i xilenul s se gseasc n atmosfer drept ageni de poluare. n general, acetia sunt analizai prin cromatografia de gaze i cantitatea total este exprimat ca BTX (g de benzen, toluen sau xilen/m3). Cromatografia de gaze (GC) este o tehnic de separare foarte folosit pentru a rezolva problemele din diverse domenii, printre care i analizele de mediu. La un moment dat, ea a fost folosit ca o tehnic de control, prezentnd rezoluie foarte bun pentru compuii organici volatili. Principiile teoretice de separare n cromatografia de gaze nu difer foarte mult de cele ale cromatografiei n general. n GC, faza mobil este un gaz, n timp ce faza staionar poate fi un adsorbant solid sau un lichid reinut pe un suport solid (coloane mpachetate) sau impregnat pe pereii unei coloane capilare (coloana deschis). Pentru a obine o separare bun i cromatograme cu rezoluie nalt, este necesar un control strict al temperaturii n cuptor, al debitului fazei mobile i o alegere potrivit a fazei mobile i a celei staionare, precum i un sistem de detecie adecvat. Scopul lucrrii Pentru a nva folosirea corect a standardelor i a tehnicilor instrumentale de nalt performan. Pentru familiarizarea cu cromatografia de gaze i performanele acesteia. Pentru a identifica i a determina benzenul, toluenul i xilenul din probe de aer.
48

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Partea experimental A) Reactivi i aparatur Sticlrie i aparatur Set de prelevare a probelor Cartue adsorbante Cromatograf de gaze Coloan capilar nepolar Detector FID Software pentru procesarea datelor Balan analitic Tuburi de 19 mL prevzute cu dop Baloane cotate de 25 mL Pipete de 1, 2, i 4 mL Microsering, 10 L

Reactivi Pentan Standarde pentru GC: Benzen (standard) Toluen (standard) Xilen (standard)

B) Prepararea soluiilor Soluia stoc A. ntr-un balon cotat de 25 mL se introduc 20 mL pentan, se acoper etan i se cntrete. Apoi se adaug 500 L benzen, se acoper imediat i se cntrete din nou. Se adaug rapid 500 L toluen. Se ndeprteaz balonul de pe balan i se aduce la semn cu pentan. Soluia standard B. ntr-un tub se introduc 9 mL pentan i apoi 1 mL soluie stoc A. Not: se acoper imediat balonul i se lucreaz la ni. 1) C) Modul de lucru Prelevarea i pre-tratamentul probelor. Cu ajutorul echipamentului de prelevare, se introduce n cartuul adsorbant un volum de aer msurat exact (10 L), astfel nct concentraia de benzen, toluen i xilen s se ncadreze n domeniul liniar de calibrare. Dac este necesar se fac ajustrile de rigoare. Extracia. n laboratorul analitic coninutul din tubul de prelevare se trateaz cu 100 mL pentan pentru a extrage compuii organici. Filtrarea. Extractul este filtrat pe un filtru de Naylon de 0,45 m pentru a elimina particulele i pentru a se evita introducerea acestora n coloana cromatografic. Calibrarea. Soluii standard de benzen, toluen i xilen. Folosind tuburi acoperite, o serie de soluii standard de benzen, toluen i xilen se prepar prin diluarea unor volume de 1,0; 2,0; 3,0 i 4,0 mL soluie B n pentan pn la 10 mL. Not: se acoper imediat balonul i se lucreaz la ni. Analiza. Analiza cromatografic se realizeaz innd cont de urmtoarele condiii: Volumul de injectare: 1L; Coloana: HP5 de tip fenilmetilsilicon (30m x 0,32 mm x 0,25 m); Gazul purttor: heliu, debitul 1,5 mL min-1;
49

2) 3) 4)

5)

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Temperatura injectorului 230 C; Temperatura detectorului 250 C; Temperatura programat a coloanei: Izoterm la 35 C timp de 5 min; de la 35 C la 140 C, la 15 C min -1; izoterm la 140 C; 2 min; temperatura final: 35 C 5.1.) Identificarea benzenului, toluenului i xilenului. O soluie de benzen i apoi de toluen sunt injectate pentru a determina timpii de retenie care permit identificarea acestor compui att pentru graficul de calibrare ct i n probe. 5.2.) Injectarea standardelor. Diferite soluii standard de benzen, toluen i xilen sunt injectate n aceleai condiii, obinndu-se cromatograme corespunztoare i arii corect integrate pentru picurile acestor compui. 5.3.) Injectarea probelor. 1 L extract se injecteaz n aceleai condiii obinnduse cromatograme corespunztoare i ariile integrate pentru picurile benzenului, toluenului i xilenului ce vor fi identificate prin timpii lor de retenie. Rezultate 1) Identificarea timpilor de retenie (t R) pentru cei trei compui. 2) Calcularea concentraiei n g L -1 de benzen, toluen i xilen, folosind toate punctele de pe graficul de calibrare.
A (soluia stoc) Volumul de benzen (L) mg de benzen cntrit g L-1 benzen Volumul de toluen mg de toluen cntrit g L-1 toluen Volumul de xilen mg de xilen g L-1 xilen Standard n Volumul de soluie (n mL) g L-1 benzen g L-1 toluen g L-1 xilen Scriei: 500

500

500

3) Scriei n tabel aria picurilor din graficul de calibrare


Benzen g/L ria

50

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Toluen g/L ria Xilen g/L ria

4) Trasarea dreptelor de calibrare. Reprezentai grafic aria obinut din cromatograme fa de valorile concentraiilor de benzen, toluen i xilen i aplicai analiza regresiei liniare corespunztoare. 5) Obtinei din dreptele de calibrare concentraiile corespunztoare benzenului, toluenului i xilenului din soluiile de prob. Identificai prezena celor trei compui cu ajutorul timpilor de retenie. Obinei ariile picului de pe cromatograme i apoi calculai concentraiile n g m -3. 1) 2) 3) 4) ntrebri Explicai problemele referitoare contaminrii datorate compuilor organici, originile lor, efectele i soluiile posibile de combatere a acestora. Dai exemple de diferite scheme de prelevare a probelor pentru compuii organici. Desenai schema unui cromatograf de gaze. Ce efect are temperatura din cuptor asupra separrii acestor compui?

51

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.13.

DETERMINAREA DE COMPUI ORGANICI VOLATILI DIN ATMOSFER CU UN GAZ CROMATOGRAF PORTABIL


Maria-Cristina Bratu

Introducere . Monitorizarea compusilor organici volatili (VOC) n probe de mediu este realizat fie prin prelevarea unor probe de aer i analiza ulterioar a acestora n laborator, fie prin determinarea acestora chiar la punctul de recoltare folosind un gaz cromatograf portabil (procedeu descris n aceast lucrare). Analiza compuilor organici volatili din atmosfer se realizeaz uzual, fie prin adsorbia acestora pe cartue cu umpluturi specifice, urmat de desorbie termic i analiza lor cu ajutorul unui gaz cromatograf prevzut cu detector MS, FID, sau ECD, fie prin prelevarea unor probe de aer n recipieni metalici urmat de presurizarea acestora cu un gaz inert i analiza gaz cromatografic ulterioara a amestecului. Ambele variante de analiz presupun o intervenie a operatorului uman, crescnd astfel posibilitatea apariiei unor erori sistematice ce se reflect n exactitatea analizei. Folosirea unui gaz cromatograf portabil prevzut fie cu detector FID, PID sau ECD nu necesit intervenia operatorului ntre etapele de prelevare i analiz, simplificnd foarte mult procedeul de lucru i eliminnd erorile inerente interveniei operatorului n faza de pregtire a probei. Reactivi i aparatur Gaz purttor (azot de puritate cromatografic, min 99,999%). Butelie pentru calibrarea GC portabil: butelie SCOTTY de 48 L i 300 psi (BTEX Gas Mix), constnd din ase analii cu concentraia n azot de 10 ppm fiecare, dup cum urmeaz: benzen, etilbenzen, toluen, m-xilen, o-xilen, p-xilen. Determinrile de compui organici volatili au fost efectuate folosind gaz cromatograful portabil Photovac, model Voyager, ce are n configuraie: dou sisteme termostatate de injecie (o valv automat de injecie gaze, un port de injecie gaze folosind o sering de gaze), un cuptor de coloane ce asigur termostatarea a patru coloane capilare montate din fabric n interiorul acestuia (o coloan oarb pentru analiza cantitii totale de compui organici volatili, o coloan pentru compui organici volatili uori, o coloan pentru compui organici volatili medii i o coloan pentru compui organici volatili grei), doi detectori gaz cromatografici legai n paralel i cu achiziie simultan de date (PID- detector de fotoionizare i ECD- detector cu captur de electroni) i sistemul ncorporat de procesare/stocare date. Gaz cromatograful portabil este prevzut cu control electronic de debit

52

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

pentru gazul purttor i interfa de conectare la PC extern pentru controlul gaz cromatografului, transferul datelor achiziionate i reprocesarea acestora prin intermediul soft-ului cromatografic SiteChart. n figura de mai jos este reprezentat schema gaz cromatografului portabil Photovac model Voyager n care sunt indicate toate prile sale componente.

Schema gaz cromatografului portabilPhotovac model Voyager

Modul de lucru nainte de a ncepe operarea cu gaz cromatograful portabil, este necesar ca acumulatorul su s fie ncrcat. Se ncarc cilindrul intern al cromatografului cu gaz purttor (azot de puritate 99,999%) prin conectarea portului de umplere al instrumentului prin intermediul unui regulator de presiune, la o butelie de azot de 200 atm. Umplerea cu gaz purttor a cilindrului intern al cromatografului asigur o autonomie a acestuia de 7 ore, timp n care se pot efectua pe teren msurtori gaz cromatografice. Dup alimentarea cu gaz purttor, se pornete cromatograful prin apsarea tastei On/Off, fiind necesar un interval de timp de aproximativ o jumtate de or pentru stabilizarea acestuia i intrarea n parametrii optimi de lucru, moment indicat de
53

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

culoarea verde a led-ului de indicare a strii gaz cromatografului (Ready status indicator). nainte de a ncepe determinarea propriu-zis, se tasteaz o denumire de recunoatere a locului de prelevare a probei, folosind tastatura cromatografului. Pentru acest lucru , se urmeaz schema: - se tasteaz ENTER MENU folosind una din cele patru taste poziionate n partea stng a display-ului (este vorba n ordinea de dispunere de sus n jos, de tasta On/Off, Start/Stop, Enter Menu, Exit) i folosind tastele de sub display, se apas tasta de sub SETUP, apoi tasta de sub TAG. n acest moment se tasteaz denumirea locului de prelevare prob n vederea recunoaterii ulterioare a cromatogramei nregistrate la locul respectiv. De asemenea, se aleg coloana i detectorul, cu ajutorul crora se va efectua respectiva analiz. Pentru compuii uori (de exemplu: acetona, meti-etil-cetona, cloroform) se alege coloana C, iar pentru cei medii (benzen, toluen, xileni, metilizobutil-ceton, tricloretilen) este selectat coloana B. Timpul de analiz pe coloana C este de 15 minute, iar pe coloana B este de jumtate de or. n ceea ce priveste detectorii, achiziia de date poate s aib loc simultan pe ambii detectori, sau poate fi selectat detectorul de fotoionizare (n cazul compuilor al cror potenial de ionizare este mai mic 10,6 eV) sau detectorul cu captur de electroni (n cazul compuilor care conin atomi de clor sau brom). Pentru selectarea coloanei, se tasteaz ENTER MENU - SETUP - CONFIG - COLUMN i cu ajutorul tastei Enter Menu se selecteaz sau se dezactiveaz o coloan cromatografic. Dup stabilirea acestor parametrii, se trece la prelevarea probei de aer ce urmeaz s fie analizat, prin selectarea tastei START/STOP. Timp de 20 de secunde se va aspira o prob de aer prin intermediul unei pompe (pe parcursul aspirrii, led-ul indicator al strii de prelevare, denumit Sampling status indicator- va avea culoarea roie). Dup trecerea intervalului de 20 de secunde de aspirare a probei, proba este condus de gazul purttor de la punctul de intrare n cromatograf, prin coloana de separare selectat anterior spre detector. Fiecare component al probei va fi reinut un timp diferit n interiorul coloanei i se va elua din coloan la un timp de retenie caracteristic. Dac rspunsul detectorului este raportat la timpul mort, acest rspuns se va prezenta sub forma unei serii de picuri cromatografice separate n timp, cte un pic pentru fiecare component al probei. Timpul de retenie servete la identificarea componenilor probei de aer analizate, iar ariile picurilor cromatografice sunt folosite pentru analiza cantitativ. Analiza calitativ i cea cantitativ efectuat de aparatul Voyager, dup analizarea unei probe de aer are la baza timpii de retenie i ariile picurilor corespunztoare standardelor anterior analizate. Cromatograful prezint n baza sa de date o librrie de compui, cte un standard al fiecrui compus de interes fiind stocat n memoria sa prin: timp de retenie, aria picului i concentraie. Raportul arie pic/concentraie reprezint sensibilitatea pentru un anumit compus (exprimat n mVS/ppm), iar aceast informaie este salvat ntr-o parte a memoriei aparatului
54

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Voyager cunoscut sub denumirea de bibliotec care va fi automat upgradat n timpul calibrrii instrumentului. n cazul fiecrei probe analizate, timpii de retenie corespunztori picurilor cromatografice nregistrate sunt comparai n mod automat cu timpii de retenie ai compuilor din biblioteca cromatografului. Dac se constat o suprapunere n limitele stabilite de fereastra de recunoatere a picului, atunci picul respectiv este identificat ca fiind un compus din bibliotec. Pentru calcularea concentraiei corespunztoare picului identificat, aria sa se mparte la sensibilitatea standardului corespunztor din bibliotec (sensibilitatea raportul arie/concentraie). Timpii de retenie i rapoartele arie/concentraie corespunztoare standardelor compuilor din bibliotec sunt upgradate ori de cte ori cromatograful Voyager este calibrat. Pentru calibrarea gaz cromatografului portabil s-a ales varianta conectrii acestuia prin intermediul unui regulator de debit, la un recipient presurizat ce conine cu amestec de gaze de calibrare (n cazul prezentului articol s-a utilizat pentru calibrare o butelie BTEX coninnd benzen, etilbenzen, toluen, m-xilen, o-xilen, pxilen de concentraie 10 ppm fiecare). Este necesar selectarea unui interval mai lung de aspirare a gazului de calibrare, pentru a permite purjarea ntregului traseu dintre gaz cromatograf i butelia de calibrare nainte de nceperea calibrrii propriu-zise. Pentru a efectua calibrarea, se deschide butelia de calibrare i se deschide ncet valva regulatorului de debit. Este necesar ca n timpul aspirrii gazului de calibrare prin intermediul pompei, indicatorul regulatorului de debit s se menin la o valoare de echilibru situat ntre zona de maxim (zon de culoare roie) i cea de minim a debitului, lucru care permite asigurarea unui debit corespunztor pentru gazul de calibrare. Dup ce gazul de calibrare a fost introdus n cromatograf, se nchide butelia de calibrare i apoi se nchide i regulatorul de debit. La efectuarea calibrrii, se selecteaz coloana dorit, setat astfel: ENTER MENU-SETUP-CONFIG-COLUMN. Apsnd n acest moment tasta ENTER MENU se activeaz o coloan A sau B sau C pe care se va efectua analiza, putnd selecta un detector sau ambii detectori n acelai timp (detectorul PID sau /i ECD). n acest moment sunt selectate biblioteca PID sau /i ECD n funcie de detectorii alei. Urmnd schema ENTER MENU LIBRARY - LIST i folosind sgeile stngadreapta se selecteaz biblioteca corespunztoare coloanei alese. Pentru activarea sau dezactivarea unui compus, se marcheaz numele compusului respectiv, se apas tastele de sub EDIT CALCMPD. Dac un compus nu este selectat, este automat scos din bibliotec. Pentru introducerea concentraiei unui compus, se apas tastele de sub EDIT CALCONC. Prin utilizarea tastelor sgei sunt introduse concentraiile compuilor din gazul de calibrare. Gazul de calibrare trebuie s conin toi compuii care au fost activai n biblioteca selectat. Prin apsarea tastei START/STOP se ncepe analiza, apoi se apas tastele de sub DISPLAY GC CMPD pentru a
55

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

vizualiza lista compuilor, iar la finalizarea analizei este necesar a se verifica dac toi compuii de calibrare sunt prezeni n aceast list. Apsnd ENTER MENU LIBRARY- CALL se accept ultima analiz efectuat ca fiind corespunztoare calibrrii gaz cromatografului portabil .

I.14.

SEPARAREA SI DETERMINAREA TRIHALOMETANILOR DIN APE PRIN CROMATOGRAFIE DE GAZE

Introducere Trihalometanii (CHCl3, CHCl2Br, CHClBr2, CHBr3) se formeaz n ap pe parcursul procesului de clorinare. Sunt posibile mai multe mecanisme de formare, dintre care menionm pe cel care se pornete de la produii polifenolici de degradare ai acidului fulvic din compoziia substanelor humice naturale. Concentraia trihalometanilor n ape este monitorizat datorit rolului ce li se atribuie n procesele de carcinogenez, concentraia maxim admis fiind de 100 g/L (respectiv 30 g/L CHCl3). Mod de lucru Prepararea umpluturii coloanei cromatografice Faza staionar utilizat este squalanul (5,6,10,15,19,23-hexametilen tetracosan), avnd punctul de fierbere la 375 C i densitatea 0,805 g/cm 3.
CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH (CH2)3 CH (CH2)4 CH (CH2)3 CH (CH2)3 CH CH3

CH (CH2)3

Suportul inert este Chromosorb W, AW-DMCS de granulaie 80/10 mesh. Chromosorbul W este un pmnt diatomitic, ce conine acid silicic n faz amorf hidratat, cu structur poroas, tratat termic la 900 C cu o mic cantitate de Na 2CO3 (3 %) i are o suprafa specific de 1 3,5 m 2/g. Indicele AW semnific splarea prealabil acid a produsului comercial livrat. Indicele DMCS semnific modificarea suprafeei cu dimeticlorsilan dup schema de mai jos:
O Si O Si H2O, H+ OH Si OH O Si + 2 Cl CH3 Si CH3 Cl

56

Cl Cl CH3 Si CH3 CH3 Si CH3 Si O Si

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

a)

Concentraia fazei staionare pe suport mixt este de 10 %. Pentru prepararea a 10 g de umplutur se procedeaz astfel: se dizolv 1 g squalan n 150 mL n-hexan de puritate cromatografic ; se cntresc 9,000 g de Chromosorb W, AW-DMCS cu precizie de 1 mg; se toarn soluia de squalan peste Chromosorb i se omogenizeaz cu ajutorul unui agitator magnetic timp de 15 minute; se evapor lent n-hexanul, de preferin ntr-o instalaie de distilare cu blaz rotitor (nclzirea se face pn la maximum 85-95 C); umplutura astfel preparat se las timp de 24 de ore ntr-un vas Petri. Se folosete o coloan cromatografic de sticl cu diametrul interior de 3,5 mm i o lungime de 1,4 mm. Umplerea coloanei se face n urmtorul mod: se astup unul dintre capetele coloanei cu un dop din vat de sticl; se conecteaz captul respectiv al coloanei prin intermediul unui furtun de cauciuc la o pomp de vid; prin intermediul unei plnii de dimensiuni adecvate se introduce umplutura n coloan n poriuni mici. Dup fiecare adugare, se lovesc pereii coloanei cu o baghet din lemn pentru a realiza o tasare uniform a umpluturii. Parametrii separrii Faza mobil: N2; Faza staionar: 10 % squalan pe Chemosorb W, AW-DMCS; Coloana: diametrul interior 3,5 mm, lungime 1,4 m; Presiunea N2 prin detector: 0,3 atm; Presiunea de intrare a fazei mobile n coloan: 0,8 atm; Detector: de ionizare n flacr; Temperatura coloanei: 70 C; Temperatura detectorului: 250 C; Temperatura injectorului: 120 C; Volumul probei injectate: 3 L; Standarde folosite: CHCl3, CHBr3, CHClBr2 de puritate cromatografic. Modul de pregtire a probelor i a standardelor Modul de preparare a standardelor: ntr-un balon cotat de 50 mL, cu dop etan, se cntresc la balana analitic cantiti de substan standard ntre 20 i 90 mg. Se aduce la semn cu alcool metilic. Soluia stoc astfel obinut pstrat la + 4 C poate fi utilizat timp de dou sptmni.

57

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

b) -

soluia stoc de lucru se obine prin diluare 1/25 a soluiei stoc cu alcool metilic. Se obin n acest mod concentraii ale trihalometanilor de ordinul ctorva zeci de g/L. ntr-un recipient cu capacitatea de 10 mL, confecionat din polipropilen i al crui capac este prevzut cu un septum din cauciuc siliconic, se introduc 4 mL ap distilat, 5 L soluie etalon de lucru (cu ajutorul unei microseringi) i 1 mL pentan de puritate cromatografic. vasul se agit timp de 4 minute. se ateapt separarea fazelor. cu ajutorul unei microseringi, se preia din stratul organic i se injecteaz n coloan. Modul de separare al trihalometanilor din ape: 4 mL din prob se introduc n vasul de extracie prezentat anterior. Se adaug 1 mL pentan de puritate cromatografic i se face extracia; se preiau 3 L din stratul organic i se injecteaz n coloan dac proba de ap conine clor liber se adaug cteva granule de tiosulfat de sodiu, apoi se procedeaz la extracia trihalometanilor n pentan. Prelucrarea rezultatelor Aspectul unei cromatograme este prezentat n figura urmtoare:

Cromatograma obinut la separarea trihalometanilor din ape. 1-solvent de extracie (pentan); 2- CHCl3; 3-CHCl2Br; 4-CHClBr2; CHBr3 58

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Se apreciaz aria picurilor din cromatograma probei etalon. Se obin valorile:


e e e Ae CHCl 3 ; A CHCl 2 Br ; A CHClBr2 ; A CHBr3

Se apreciaz aria picurilor din cromatograma probei necunoscute. Se obin valorile:


E x x x A CHCl ; A CHCl ; A CHClBr ; A CHBr 3 2 Br 2 3

Aria unui pic se obine prin nmulirea nlimii picului cu limea acestuia la 0,607 din nlime. Concentraiile necunoscute se afl din relaiile:
e Ae THM .......... .........c THM x A THM .................... x

x= unde:

x A THM c e THM Ae THM

THM trihalometan ce THM concentraia etalonului n trihalometanul respectiv.

59

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

60

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.15.

DETERMINAREA COMPUILOR FENOLICI DIN AP PRIN CROMATOGRAFIE DE LICHIDE DE NALT PERFORMAN


Maria-Cristina BRATU

Introducere Fenolul i fenolii substituii reprezint produse secundare comune multor procese industriale. La concentraii de ordinul ppb-urilor, n condiiile din mediu n funcie de temperatur i pH, aceti compui pot persista mai multe zile sau sptmni. S-a demonstrat c fenolii sunt toxici pentru majoritatea organismelor acvatice i chiar i la concentraii sczute au un efect advers asupra gustului i mirosului apei. De aceea, n cazul n care diferite tipuri de ape urmeaz s fie folosite ca surse de ap pentru consum uman, se impune verificarea contaminrii lor cu aceti poluani organici. n Comunitatea European, concentraia maxim permis pentru diferiti fenoli n apa potabil este deosebit de mic. n aceast situaie, se impune utilizarea unei metode analitice care s asigure selectivitate i sensibilitate ridicate. n aceast lucrare, este prezentat o metod de determinare a fenolilor din ape folosind un procedeu de preconcentrare prin extracie selectiv a acestor compui din ap pe cartue adsorbante i determinare apoi a fenolilor extrai de pe cartu prin cromatografie de lichide de nalt performan cu detecie n UV. Reactivi i aparatur Acetonitril de puritate HPLC (Riedel de Haen); ap de puritate HPLC (Fluka), metanol de puritate HPLC (Fluka), acid acetic (Aldrich). Cartu SPE de preconcentrare: Supelclean ENVI-Chrom P (Supelco)- copolimer stiren-divinil benzen ( dimensiunea particulelor: 80-160 m; dimensiunea porilor: 110-175 ). Standard de fenoli: EPA 604-M Phenols Mix (Supelco)- format dintr-un amestec preparat n metanol de 11 analii, aflai la diferite concentraii: fenol (500 g/mL); 4-nitrofenol (2500 g/mL); 2,4-dinitrofenol (1500 g/mL); 2-clorofenol (500 g/mL); 2-nitrofenol (500 g/mL); 2,4-dimetilfenol (500 g/mL); 4,6-dinitro-ocrezol(2500 g/mL); 2,4-diclorofenol (500 g/mL); 4-cloro-m-crezol (2500 g/mL); 2,4,6-triclorofenol (1500 g/mL); pentaclorofenol (2500 g/mL). Standard de fenoli: EPA 604-S Phenols Mix (Supelco)- format din 11 soluii de fenoli individuali, cu concentraia de 500 mg/L preparate n metanol, cu volum de 1 mL- fenol; 4-nitrofenol; 2,4-dinitrofenol; 2-clorofenol; 2-nitrofenol; 2,4dimetilfenol; 4,6-dinitro-o-crezol; 2,4-diclorofenol; 4-cloro-m-crezol; 2,4,661

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

triclorofenol; pentaclorofenol) i o fiol cu amestec din toi fenolii menionai anterior. Sistem de extracie n faz solid tip Vacuum Manifold Supelco cu 12 poziii. Trap de lichide tip Supelco SPE Vacuum Pump Trap Kit. Pomp de vid Heidolph. Determinrile propriu-zise au fost efectuate folosind un cromatograf de lichide de nalt performan Perkin Elmer seria 200, echipat cu: pomp cuaternar; degazor pentru solveni; autosampler (pentru injecia automat n coloana cromatografic a unei cantiti de prob preselectat anterior si pentru splarea automat a seringii); incinta termostatat pentru coloane cromatografice; detector UVVis tip Diode Array cu posibilitatea achiziiei simultane de spectre; calculator (soft). Mod de lucru Prepararea probei Proba de ap se aciduleaz pn la pH=2 n scopul prevenirii ionizrii compuilor fenollici. Preconcentrarea probei pe cartu SPE: se activeaz cartuul prin trecerea a 6 mL metanol cu un debit de 1 mL/min. se condiioneaz cartuul prin trecerea a 6 mL ap acidulat (pH=2) cu un debit de 1 mL/min. se trec prin cartu cu un debit de 2,5 mL/min, 100 mL de prob introdus ntr-un vas adiional. eluarea de pe cartu se realizeaz cu 2 mL amestec de solveni metanol/acid acetic 1%, cu un debit de 1mL/min. Urmeaz analiza cromatografic a eluatului n vederea separrii componenilor i determinarii acestora. Analiza cromatografic: n vasele schimbtorului automat de probe (autosampler) se introduc standardele i probele de analizat (aproximativ 2 mL). Se folosete sistemul HPLC Perkin Elmer seria 200. Se foloseste o coloan cu faz invers Brownlee de tip Pecosphere C 18, cu diametrul porilor de 3 m, lungimea coloanei fiind de 83 mm i diametrul de 4,6 mm. Se lucreaz cu eluie n gradient linear de faz mobil: de la 35 % acetonitril/ap (pH=2,2) pn la 100 % acetonitril, n interval de 4 minute. Faza mobil circul prin coloana cromatografic cu un debit de 2,5 mL/min. Analiza cromatografic efectuat n aceste condiii dureaz cinci minute. Ordinea de eluie din coloana cromatografic este urmtoarea: fenol; 4-nitrofenol; 2-clorofenol; 2,4-dinitrofenol; 2-nitrofenol; 2,4-dimetilfenol; 4-cloro-m-crezol; 2,4-diclorofenol; 4,6-dinitro-o-crezol; 2,4,6-triclorofenol; pentaclorofenol.
62

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

n cazul unor probe de ap cu compoziie mai complex, pentru o mai bun separare a compuilor fenolici, poate fi folosit o alt coloan cromatografic: tip Supelcosil LC-8, cu dimensiunile 15 cm lungime x 4,6 mm d.i. cu diametrul particulelor de 5 m. Se lucreaz tot cu eluie cu gradieni a fazei mobile (A: metanol/1% acid acetic; B:H2O/1 % acid acetic) si anume: 5-100 % A + 95 0% B n 30 minute. Faza mobil circul prin coloana cromatografic cu un debit de 1 mL/min. Timpul de analiz necesar pentru a separa cei 11 compui fenolici este de 11 minute, ordinea de eluie din coloana cromatografic fiind urmtoarea: fenol; 4-nitrofenol; 2,4dinitrofenol; 2-clorofenol; 2-nitrofenol; 2,4-dimetilfenol; 4,6-dinitro-o-crezol; 2,4diclorofenol; 4-cloro-m-crezol; 2,4,6-triclorofenol;pentaclorofenol. n ambele situaii, temperatura coloanei este setat la 30 C, msurtoarea fiind efectuat cu un detector UV-Vis tip Dyode Array cu achiziie spectral simultan, compuii fenolici fiind monitorizai simultan la dou lungimi de und: 254 nm i 280 nm. Pentru stabilirea timpului de retenie corespunztor fiecrui compus fenolic din amestec se folosete standardul de fenoli: EPA 604-S Phenols Mix (Supelcoformat din 11 soluii de fenoli individuali, cu concentraia de 500 mg/L. Se dilueaz fiecare compus fenolic 1:50 cu metanol. Prin injectarea n sistemul cromatografic a cte 60 L din fiecare soluie diluat de compus fenolic corespunznd la 0,6 g, se determin timpul de retenie corespunztor fiecruia. Prin urmare, identificarea compuilor fenolici separai din proba de analizat se va realiza automat prin intermediul soft-ului cromatografului, prin compararea timpilor de retenie ai acestora cu timpii de retenie ai standardelor introduse n prealabil n sistemul HPLC. Dozarea cantitativ a compuilor fenolici se realizeaz prin interpolarea ariei picului cromatografic corespunztor fiecrui compus separat, pe curba de etalonare trasat folosind amestecuri de diferite concentraii de soluii standard de compui fenolici preparate n metanol (v/v). Pentru a asigura o bun reproductibilitate a timpilor de retenie corespunztori compuilor fenolici, precum i pentru o bun precizie a determinrilor, nainte de nceperea analizelor cromatografice, este necesar un interval de stabilizare a sistemului cromatografic de cel puin o or. Trasarea dreptei de calibrare Se traseaz o dreapt de calibrare n patru puncte. n acest scop, standardul de amestec de fenoli EPA 604-M Supelco este diluat cu metanol n proporie de 1:25 (v/v), 1:50(v/v), 1:100 (v/v), respectiv 1:125 (v/v). Concentraiile corespunztoare amestecului de compui fenolici din cele patru soluii astfel obtinute, exprimate in mg/L sunt prezentate n tabelul A. Cantitaile de fenoli exprimate n g din soluiile standard preparate pentru trasarea dreptei de calibrare sunt prezentate n tabelul B. n patru vase ale schimbtorului automat de probe al cromatografului se introduc aproximativ cte 2 mL din fiecare din cele patru solutii, din care se vor injecta automat cte 60 L.
63

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Dup obinerea cromatogramelor corespunztoare fiecrui amestec de fenoli injectat, aparatul identific compusul pe baza timpului de retenie i integreaz automat ariile corespunztoare fiecrui maxim. Cele patru cromatograme obinute se consider drept standarde de calibrare, iar din nou n regim automat softul aparatului genereaz dreptele de calibrare corespunztoare fiecrui component la cele patru concentraii. Se pot obine diverse tipuri de drepte de calibrare. Cea mai folosit (aleas i n cazul nostru) este dreapta de gradul I cu intersectarea originii. Dac se dorete extinderea dreptei de calibrare la valori mari de concentraie este recomandabil folosirea unei ecuaii de gradul II cu condiia ca abaterea maxim de la liniaritate s nu depeasc 25 %. Se poate constata c prin adsorbia pe cartu a 100 mL de prob contaminat cu compui fenolici, urmat de eluarea cu 2 mL de amestec metanol/acid acetic 1%, majoritatea compuilor fenolici pot fi fr dificultate determinai la concentraii sub valoarea de 0,1 ppb folosind detecia n UV.
Tabel A. Concentraiile (exprimate n mg/L) ale compuilor fenolici folosii la trasarea dreptei de calibrare
Comp. fenolici n standard EPA 604-M Conc. comp. fenolici n standard EPA 604M (Supelco) 500 mg/L 2500 mg/L 1500 mg/L 500 mg/L 500 mg/L 500 mg/L 2500 mg/L 500 mg/L 2500 mg/L 1500 mg/L 2500 mg/L Conc. comp. fenolici n standard EPA 604-M (Supelco) diluat 1:25 cu metanol 20 mg/L 100 mg/L 60 mg/L 20 mg/L 20 mg/L 20 mg/L 100 mg/L 20 mg/L 100 mg/L 60 mg/L 100 mg/L Conc. comp. fenolici n standard EPA 604-M (Supelco) diluat 1:50 cu metanol 10 mg/L 50 mg/L 30 mg/L 10 mg/L 10 mg/L 10 mg/L 50 mg/L 10 mg/L 50 mg/L 30 mg/L 50 mg/L Conc. comp. fenolici n standard EPA 604-M (Supelco) diluat 1:100 cu metanol 5 mg/L 25 mg/L 15 mg/L 5 mg/L 5 mg/L 5 mg/L 25 mg/L 5 mg/L 25 mg/L 15 mg/L 25 mg/L Conc. comp. fenolici n standard EPA 604-M (Supelco) diluat 1:125 cu metanol 4 mg/L 20 mg/L 12 mg/L 4 mg/L 4 mg/L 4 mg/L 20 mg/L 4 mg/L 20 mg/L 12 mg/L 20 mg/L

Fenol 4-Nitrofenol 2,4-Dinitrofenol 2-Clorofenol 2-Nitrofenol 2,4-Dimetilfenol 4,6-Dinitro-ocrezol 2,4-Diclorofenol 4-Cloro-mcrezol 2,4,6Triclorofenol Pentaclorofenol

64

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Tabel B. Cantitaile de fenoli exprimate n g din soluiile standard preparate pentru trasarea dreptei de calibrare, pentru un volum de injecie de 60 L
Comp. fenolici n standard EPA 604-M Conc. comp. fenolici n standard EPA 604M (Supelco) 500 mg/L 2500 mg/L 1500 mg/L 500 mg/L 500 mg/L 500 mg/L 2500 mg/L 500 mg/L 2500 mg/L 1500 mg/L 2500 mg/L Conc. comp. fenolici n standard EPA 604-M (Supelco) diluat 1:25 cu metanol 1,2 g 6,0 g 3,6 g 1,2 g 1,2 g 1,2 g 6,0 g 1,2 g 6,0 g 3,6 g 6,0 g Conc. comp. fenolici n standard EPA 604-M (Supelco) diluat 1:50 cu metanol 0,6 g 3,0 g 1,8 g 0,6 g 0,6 g 0,6 g 3,0 g 0,6 g 3,0 g 1,8 g 3,0 g Conc. comp. fenolici n standard EPA 604-M (Supelco) diluat 1:100 cu metanol 0,3 g 1,5 g 0,9 g 0,3 g 0,3 g 0,3 g 1,5 g 0,3 g 1,5 g 0,9 g 1,5 g Conc. comp. fenolici n standard EPA 604-M (Supelco) diluat 1:125 cu metanol 0,24 g 1,2 g 0,72 g 0,24 g 0,24 g 0,24 g 1,2 g 0,24 g 1,2 g 0,72 g 1,2 g

Fenol 4-Nitrofenol 2,4-Dinitrofenol 2-Clorofenol 2-Nitrofenol 2,4-Dimetilfenol 4,6-Dinitro-ocrezol 2,4-Diclorofenol 4-Cloro-mcrezol 2,4,6Triclorofenol Pentaclorofenol

65

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.16. DETERMINAREA ALDEHIDELOR I CETONELOR DIN AER


Aldehidele i cetonele reinute sub form de 2,4-dinitrofenil hidrazon n tuburi impregnate pot fi analizate din extracte cu ajutorul cromatografiei lichide de nalt performan (HPLC). Reactivi i aparatur Acetonitril, calitate HPLC, Rathburn Chemicals Ltd., No. RH 1016; Metanol, Merck; Tetrahidrofuran, Merck; Ap distilat i deionizat cu ajutorul unui sistem de purificare a apei Millipore MilliQ; Iodur de potasiu de puritate analitic, Fluka; Acid sulfuric, Merck; Etanol; Compui carbonilici; 2,4-dinitrofenil hidrazin, Fluka; Pot fi utilizate urmtoarele instrumente i ehipamente: Un sistem modular Hewlett-Packard 1050, ce const dintr-un sistem de alimentare cu 4 solveni tip 79852A, un detector de tip diode array i un schimbtor automat de probe; Nova-Pak C18, particule de 4 m (No. 86344, Waters Associates), 150 mm * 3,9 mm d.i.); Filtru precoloan in-line pentru ap; Sticlrie de laborator i seringi.

Mod de lucru Se umple o sering de 5 mL cu acetonitril. Se colecteaz extractul de prob ntr-un balon de 3 mL. Se elueaz derivaii prin trecerea lent (1,5 mL/min) a acetonitrilului prin cartu. Se oprete eluarea dup colectarea a 3 mL. Se transfer aproximativ 0,5 mL de soluie de prob ntr-o fiol de 2 mL a schimbtorului automat de probe i se sigileaz fiola. Proba este astfel pregtit pentru analiza prin HPLC. Un volum de 10 L de soluie de prob sau de soluie standard este separat prin utilizarea unui amestec cuaternar de metanol/ap/acetonitril/tetrahidrofuran. n tabelul de mai jos este prezentat profilul gradientului utilizat.
66

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

Detecia i determinarea se realizeaz la 369 nm (limea benzii 22 nm) utiliznd ca referin o lungime de und de 474 nm (limea benzii 50 nm). Detecia i determinarea dicarbonililor au loc la 440 nm (limea benzii 22 nm), cu referina la 337 nm (limea benzii 50 nm).
Gradientul cuaternar ce separ carbonilhidrazonele de interes la un debit de 0,8 mL/min.
Timp 0,0 0,5 20,0 24,0 40,0 41,0 45,0 48,0 % Tetrahidrofuran 18,0 18,0 8,4 0,0 0,0 0,0 0,0 18,0 % Acetonitril 22,0 22,0 37,4 0,0 0,0 0,0 100,0 22,0 % Apa 60,0 60,0 54,2 34,0 15,0 15,0 0,0 60,0 % Metanol 0,0 0,0 0,0 66,0 85,0 85,0 0,0 0,0

Este necesar cuantificarea urmtorilor compui carbonilici: metanal, etanal, propenal, propanal, propanon, 2-metil-propenal, butanal, 2-butanon, 3-buten-2-on, pentanal, hexanal, benzencarbaldehid, etandial, oxopropanal. Proba martor Este necesar prepararea zilnic a probelor martor. O dat pe saptamn trebuiesc analizate probe martor. Concentraiile metanalului, etanalului i propanalului din proba martor pot varia la schimbarea lotului de cartue sau a celui de acetonitril. Concentraia n proba martor nu trebuie s depeasc 0,05 g/m 3 de compus carbonilic ntr-un volum de 750 de litri de prob. 1. Prepararea hidrazonelor Se dizolv 400 mg 2,4-dinitrofenilhidrazin n 2 mL acid sulfuric concentrat, 96%. Aceast soluie este apoi adugat, sub agitare, la 13 mL etanol de concentraie 75%. Orice solid nedizolvat este nlturat cu ajutorul unei pipete Pasteur. Un volum corespunztor a 500 mg de compus carbonilic este transferat n 20 mL etanol. Soluia carbonilic (de la punctul 2) este apoi transferat ntr-o soluie de DNPH (de la punctul 1) sub agitare. Dup 15 minute reacia are loc complet.
67

2. 3.

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

4. 5.

Se filtreaz soluia de la punctul 3 i se recristalizeaz hidrazona din etanolul apos (hidrazonele din compui carbonilici nesaturai/aromatici trebuiesc recristalizate din acetonitril apos). Se usuc hidrazona i se efectueaz un test de puritate (HPLC-UV).

Calibrarea Se prepar cte o soluie stoc din fiecare carbonilhidrazon prin dizolvarea a aproximativ 5 mg (+/- 1%) n 100 mL acetonitril. Soluiile de calibrare sunt preparate prin diluarea soluiilor stoc (1-2 g/mL). Determinarea Concentraia compuilor carbonilici n probe de aer, exprimat n g/m 3, este dat de relaia:

C concentraia compusului carbonilic n probe de aer [ g/m3]; c concentraia compusului carbonilic n proba standard [ g/mL]; H(s) nlimea picului/aria compusului carbonilic n proba standard [counts]; H(p) nlimea picului/aria compusului carbonilic n proba de aer [counts]; K factor de conversie (de exemplu din hidrazona n carbonil) metanal-0.1429, etanal-0.1964, propenal- -0.2373, etc.; V volumul de prob [m3]; v volumul probei preparate [mL]. Interfereni Ne-eliminarea ozonului cu ajutorul epuratorului de gaze are ca rezultat subestimarea concentraiilor unor carbonilhidrazone. Bibliografie 1. Vairavamurthy, A., Roberts, J.M. and Newman, L. (1992) Methods for determination of low molecular weight carbonyl compounds in the atmosphere: a review. Atmos. Environ., 26A, 1965-1993. 2. Slemr, J. (1991) Determination of volatile carbonyl compounds in clean air. Fresenius J. Anal. Chem., 340, 672-677. 3. Dye, C. and Oehme, M. (1992). Comments concerning the HPLC separation of acrolein from other C3 carbonyl compounds as 2,4-dinitrophenylhydrazones: a proposal for improvement. J. High Res. Chrom., 15, 5-8.

68

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

69

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

I.17.

DETERMINAREA ALACHLORULUI UTILIZND TEHNICA DIRECT ELISA


Jenny EMNEUS

Introducere Aceast metod permite evaluarea cantitativ a alachlorului din ap utiliznd tehnica ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). Alachlorul face parte din Grupa I a compuilor ce determin efecte acute pentru sntate i la concentraii mici. Determinarea este simpl i poate fi adaptat la utilizarea ca metod de screening n punctele de prelevare a probelor. Tehnica ELISA direct implic de obicei imobilizarea anticorpilor prin simpl absorbie pe suprafaa godeurilor plcilor de analiz, urmat de adugarea analitului (alachlor) i a antigenului (analitului) marcat (alachlorului derivatizat marcat cu peroxidaz (HRP)) care va ncepe s competiioneze pentru zonelor active ale anticorpului (anticorp specific pentru alachlor din oaie, purificat). Utiliznd un substrat mixt specific pentru antigenul marcat (n cazul nostru exp: 3,3', 5,5' tetrametil benzidina i H 2O2 n soluie tampon acetat 50 mM, pH-ul 5,2), concentraia analitului reacionat poate fi evaluat indirect prin determinarea concentraiei fraciei legate de marker. Detecia spectrometric la 450 mm permite determinarea cantitativ a alachlorului prin tehnica direct ELISA. Metoda este aplicat pentru determinarea alachlorului n probele de ap (de exemplu: apa potabil, apa de suprafa, amestecuri de ape reziduale menajere i industriale, ape subterane, apele reactive. Acidul 2-[(2,6-dietil-fenil)(metoximetil)amino]-2-oxo-etan-sulfonic (ESA) interfer (cross reacts) cu alachlorul n tehnica ELISA. ESA nu este detectat ca standard HPLC sau GC [2]. Acetanilide nrudite cu alachlorul, pot interfera de asemenea n determinarea alachlorului. Pentru a preveni eventualele erori n analize, reactivitatea ncruciat ( the cross reactivity) a anticorpului utilizat va fi evaluat pentru posibile interferene. Aparatur Micro plci cu 96 godeuri (NUNC, Brand Products). Cititor universal pentru micro plci (EL800, Bio-tek Instruments INC) Pipet automat cu mai multe capete (8 poziii).

Recoltarea, conservarea i depozitarea probelor Probele se recolteaz n sticle de 40 mL n care s-au adugat 3 mg tiosulfat de sodiu cristale nainte de a fi transportate de la locul de prelevare. La prelevarea apei de la robinet se va deschide robinetul pentru a permite curgerea pn la stabilizarea
70

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

temperaturii apei (1 2 minute). Se ajusteaz debitul la aproximativ 500 mL/min i se recolteaz proba din curentul de curgere. Proba se pstreaz sigilat (etan) de la colectare pn la analiz. La prelevarea dintr-o mas de ap, se umple vasul de recoltare dintr-o zon reprezentativ. Echipamentul de prelevare a probelor inclusiv cele automate trebuie s nu aib tuburi de plastic, garnituri de plastic sau alte pri din plastic, din care pot se pot extrage prin dizolvare compui ce pot interfera cu analitul din prob. Sondele de recoltare automatizate n care sunt pstrate probele o perioada mai lung de timp vor utiliza vase de sticl racite. Clorul rezidual din prob trebuie redus prin adugarea a 50 mg/L sulfit de sodiu (poate fi adugat solid cu agitare i amestecare pn la dizolvare, sau preparat ca soluie). Se ajusteaz pH-ul la 2 cu soluie 6 N de HCl. Sunt necesari peste 4 mL pentru a se realiza ajustarea. Este foarte important ca proba s fie declorurat nainte de a se aduga acidul pentru scderea pH-ului. Nu este permis adugarea sulfitului i a acidului n sticle nainte de prelevarea probei. Acidul clorhidric trebuie adugat probei la locul de prelevare pentru a ntrzia orice degradare microbiologic a analitului. Proba trebuie ngheat sau rcit la 4oC de la recoltare pn la extracie. Studiile de conservare au demonstrat c analitul este stabil timp de 14 zile n probe dac acestea au fost conservate. Probele refrigerate pot fi pstrate pn la 30 de zile. Pregtirea probei Alachlorul este extras i concentrat din prob prin SPE (solid phase extraction) utiliznd ca faz solid de extracie un disc de 25 mm, SDB -xc (3M Empore TM, sau echivalent). Dup realizarea concentrrii, discul SDB se amplaseaz n poziie orizontal ntr-un vas cu gur larg. Se adaug 2 mL de metanol (puritate analitic) peste discul SDB, se acoper i se agit pe o platform orbital de agitate timp de 15 min. Se transfer soluia de metanol ntr-o fiol de 4 mL cu dop de teflon. Se utilizeaz o pipet sau o sering pentru a lua o cot parte din prob i se dilueaz cu ap deionizat la minim 1 : 100. Vasul cu restul de prob se sigileaz cu parafilm i se depoziteaz n frigider. Not: Dac concentraia probei este mai mare de 0,5 g, sunt necesare diluii ulterioare pentru a se ncadra n domeniul de analiz a metodei. Dac intervalul de concentraie este necunoscut se pot realiza mai multe diluii. Metoda analitic Experiment 1. Optimizarea concentraiilor de antigen marcat i anticorp

71

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

1. Se introduc n godeurile plcii cte 100 l soluie de anticorp (n intervalul 0 1000 mg/L n 50 mM soluie tampon carbonat, pH 9,6 , n coloanele 1 12 prin diluii succesive) i se las pentru absorbie la 4 oC, peste noapte.
Optimizarea concentraiei de anticorp Optimizarea concentraiei de antigen marcat

1
A B C D E F G H

10

11

12

2. Dup ce este ndeprtat soluia rezidual, placa este splat cu tampon fosfat salin (PBS) (aprox. 200 L/ godeu). 3. 100 L din diferite concentraii ale antigenului marcat (n intervalul 1/100 0 antigen marcat diluat n PBS) este adugat pe a doua dimensiune (rndul de la A la H) prin diluii succesive i se las la incubat timp de 5 ore. 4. Soluia rezidual este ndeprtat, placa este splat i uscat dup cum a fost descris la pct. 2. 1. 200 L din soluia substrat este adugat n fiecare godeu. Dup un timp de reacie de 10 min aceasta se stopeaz prin adugarea a 50 l de soluie 4 M de H2SO4 i se incubeaz din nou pentru 25 30 min. 5. Absorbana este citit la 450 nm. Concentraiile optime ale antigenului marcat i ale anticorpului sunt alese ca fiind cele care determin o legare la anticorp de 40 70 % . Experiment 2. Calibrarea analitului i analiza probelor reale 1. Placa este acoperit cum a fost descris la pasul 1, experiment 1, exceptnd numai concentraia optim a anticorpului utilizat. Incubarea se realizeaz peste noapte la 4oC.
72

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

2. Soluia rezidual se ndeprteaz i placa este splat dup cum a fost descris la pct. 2, experiment 1. 3. Calibrarea analitului (de la 0 ppm la 1 ppm alachlor) se face de-a lungul plcii cu diferite matrici de probe, dup cum urmeaz:

4. Antigenul marcat este adugat astfel nct s fie atins concentraia optim, iar volumul final n fiecare godeu s fie 100 l. Se incubeaz timp de 5 ore. 5. Soluia rezidual se ndeprteaz i placa este splat dup cum a fost descris la pct. 2, experiment 1. 6. 200 l din soluia substrat este adugat n fiecare godeu. Dup un timp de reacie de 10 min, aceasta se stopeaz prin adugarea a 50 l de soluie 4 M de H 2SO4 i se incubeaz din nou pentru 25 30 min. 7. Absorbana este citit la 450 nm. Raport 1. Descriei principiul de lucru al metodei. 2. Explicai cum se alege cel mai bun anticorp i cum se efectueaz diluiile antigenului marcat. 3. Estimai IC50 intervalul dinamic i limita de detecie la determinarea alachlorului utiliznd curba de diluie n soluie tampon i n prob. 4. Aproximai influena matricei n fiecare caz (prin calcularea raportului ntre IC50, semnalul calibrrii n soluie tampon i semnalul corespunztor n cazul diluiei cu urin.) 5. Estimai concentraia alachlorului ntr-o prob necunoscut.
73

I. TEHNICI ANALITICE PENTRU MONITORIZAREA I CONTROLUL POLURII MEDIULUI Lucrri de laborator

74