1

Tesutul conjunctiv
Termenul de esut conjunctiv este atribuit unui esut de baz de origine mezodermal cu rol de suport i metabolic pentru alte esuturi i organe din organism.esutul conjunctiv de regul conine vase de snge i mediaz schimburile de nutrieni, metabolii i produi de metabolism dintre esuturi i sistemul circulator. esutul de suport apare sub diferite forme cu diverse proprieti fizice. n marea majoritate a organelor, esutul conjunctiv lax acioneaz ca un esut de legtur ntre celule i alte esuturi cu funcii mai speciale.esutul conjunctiv dens este un esut de suport pentru dermul pielii, formeaz capsula conjunctiv a unor organe cum sunt ficatul i splina i asigur rezistena la ntindere n ligamente i tendoane. Cartilajul i osul sunt forme specializate de tesut conjunctiv de susinere.esuturile de suport au un important rol metabolic cum ar fi stocajul de lipide pentru esutul adipos alb i reglarea temperaturii corpului la nou nscut pentru esutul adipos brun. Celule ale sistemului imun intr n structura esutului conjunctiv unde lupt mpotriva agenilor patogeni Procesul de reparaie tisular este deasemenea o funcie important a esutului conjunctiv. Toate esuturile de susinere au dou componente majore :celule i matrice extracelular.Matricea extracelular este la rndul ei format din substan fundamental i fibre MATRICEA EXTRACELULAR esuturile nu conin n structura lor doar celulele.O parte substanial a volumului lor este ocupat de spaiul extracelular care conine o reea complex de macromolecule, constituind matricea extracelular.Aceast matrice cuprinde o mare varietate de polizaharide i proteine care sunt secretate i asamblate local ntr-o reea organizat. Pn nu demult s-a crezut c matricea extracelular din esuturile vertebratelor alctuiete o mas inert cu rolul de a stabiliza structura fizic a esutului.Astzi ns,este clar c matricea are rol mult mai activ i mai complex: controleaz mediul n care se afl celulele influennd dezvoltarea lor,migrarea,proliferarea, forma i funciile metabolice.Componentele matrixului pot lega factori de cretere i hormoni,asigurnd astfel permanent o abunden de semnale pentru celulele care se afl aici.Celulele au nevoie de componente specifice ale

matricei pentru a se diferenia.Morfogeneza,ultimul stadiu pentru dobndirea formei celulare , este stns dependent de moleculele matricei.n dezvoltare, moleculele matricei sunt n mod constant nlocuite,degradate i resintetizate,n cazul leziunilor chiar i ntr-un esut adult. Structura sau proprietile mecanice ale componentelor matriciale sunt eseniale pentru buna funcionalitate a unor varieti de esut conjunctiv: exemplu:esutul cartilaginos, esutul conjunctiv fibros din dermul pielii, tendon, esut osos, discurile intervetebrale, dinii, lamina bazal. Cele mai multe dac nu toate componentele matricei extracelulare apar s interacioneze cu celulele conjunctive, fie indirect prin proteinele fibroase(fibronectina),fie prin receptorii de suprafa. COMPOZIIA I DIVERSITATEA STRUCTURAL Macromoleculele ce alctuiesc matricea extracelular sunt secretate local de ctre celulele existente,mai puin de celulele sanguine mature. Compoziia molecular a matricei secretate depinde de: tipul de celul implicat n secreie,stadiul ei de difereniere,precum i statusul ei metabolic. Componentele de baz ale matricei extracelulare sunt: -Glicozaaminoglicanii(GAG), care sunt molecule polizaharidice i care,legate de proteine,formeaz proteoglicanii i -Proteinele fibroase, de dou tipuri funcionale, un tip cu rol structural, colagenul i elastina, iar cellalt cu rol de adezivitate (Ex:fibronectina i laminina). Glicozaminoglicanii i proteoglicanii formeaz o mas gelatinoas puternic hidratat,n care se afl incluse proteinele fibroase.Faza apoas a acestui gel permite difuzia moleculelor nutritive, a metaboliilor i a hormonilor,dintre snge i celulele tisulare:fibrele de colagen mresc rezistena i contribuie la organizarea matrixului,iar fibrele de elastin i asigur flexibilitatea.Proteinele de adezivitate ajut celulele s se ataeze la componentele matricei, de exemplu fibronectina asigur ataarea fibroblastelor la matricea conjunctiva, iar laminina faciliteaz ataarea celulelor epiteliale de lamina bazal.

PROTEINELE FIBROASE MULTIFUNCIONALE MATRICEI EXTRACELULARE: COLAGENUL

ALE

Colagenul formeaz o clas major de proteine fibroase din matricea extracelular.Este proteina cel mai bine reprezentat in organismul animal.(25% din proteinele structurale, i 6% din greutatea corporeal).Se cunosc 25 tipuri de colagen, din care pn in prezent s -au descris 15 tipuri de colagen, din care cinci sunt cele mai comune (I,II,III,IV,V). Tipurile I,II,III, V si XI se asambleaz n polimeri ordonai numii fibrile(10-300 nm diametru) sau fibre de ctiva microni diametru. Tipurile IX si X formeaza fibrile heterogene cu colagenul de tip II. Tipurile IV,VI,VII i VIII, nu se organizeaz n fibrile, datorit domeniilor globulare prezente att la captul carboxil ct i la captul amino. Tipul IV apare stabilizat de legturi covalente ncruciate ntre reziduurilede lizin precum i de puni disulfidice intermoleculare,ceea ce l face greu de extras din membranele bazale,unde formeaz structuri reticulare bidimensionale,fiind componentul principal al laminei bazale. La baza structurii colagenului se afl un triplu helix de lanuri alfa O molecul de colegan are o greutate molecular de 28.500 daltoni, o lungime de 3oo nm i un diametru de 1,5 nm i este alcatuit din trei lanturi polipeptidice alfa mpletite n helix Fiecare lan alfa este format din 1050 de amninoacizi.Un lan alfa conine cte 3 aminoacizi per fiecare tur de helix,din care tot al treilea este glicina.Fiecare lan alfa este spiralizat n jurul unui ax propriu, dup care cele 3 lanuri alfa se spiralizeaza unul n raport cu celalalt.Triplul helix este stabilizat prin legaturi de hidrogen i puni disulfidice. Molecula de colagen n ansamblu are dou domenii: un domeniu central , helicoidal-triplu helix , i dou domenii terminale spiralizate doar in jurul axului propriu. Un lan alfa are urmtoarea structur: -(Y-gly-X)n - unde: -Y= hidroxiprolina -X=Prolina i hidroxilizina Glycina reprezinta 33% din greutatea moleculei de colagen, Prolina=12%, Hidroxiprolina=12%, Hidroxilizina=10% Lanurile alfa sunt codificate pe gene de pe cromozomii 17, pentru lanurile alfa1 si 7 pentru lanurile alfa2.

Colagenul se poate clasifica n funcie de comportamentul fa de matricea extracelular n: 1.Colagen fibrilar-cel care se agreg n fibrile i apoi n fibre 2.Colagen afibrilar-care nu se agreg n fibrile, ci se asociaz periodic altor fibrile de colagen,sau poate forma reele plan bidimensionale n lamina densa bazalis. O molecul de colagen este alctuit din trei lanuri polipeptidice, numite lanuri alfa, aranjate n triplu helix.Lanurile alfa nu sunt toate la fel i n concordan cu diferena ntre lanurile alfa, s -au descris 25 tipuri diferite de colagen, din care primele cinci tipuri sunt prezentate n tabelul de mai jos: TABEL

Asociate moleculelor de colagen exist grupri glucidice ce nsoesc reziduurile de hidroxilizin.Colagenul este considerat o glicoprotein.Gruprile glucidice, nu sunt suficient de numeroase , pentru a da o reacie PAS pozitiv.Colagenul din fibrele de reticulina are mai multe grupri glucidice,de aceea aceste fibre au reacie PAS +. Sinteza de colagen implic mai multe etape: unele dintre ele se desfoar n interiorul celulei-FAZA INTRACELULAR-, iar altele se desfoar n exteriorul celulei-FAZA EXTRACELULAR-

SINTEZA DE COLAGEN (FIBRILOGENEZA) A. Etapa intracelular presupune: -transcripia i traducerea -hidroxilarea reziduurilor specifice de prolin i lizin -glicozilarea reziduurilor de hidroxilizin -eliberarea lanurilor polipeptidice -formarea legturilor bisufidice,ansamblarea lanurilor polipeptidice cu formarea de triplu helix -exocitarea(secreia)n mediul extracelular B. Etapa extracelular -convertirea procolagenului n tropocolagen(colagen) -polimerizarea moleculelor i realizarea fibrelor de colagen A. EtapaIntracelular -Sinteza se face n special n fibroblaste, la nivelul ribozomilor ataai RER 1.Transcripia i traducerea Lanurile polipeptidice sunt produse de ctre poliribozomii ataai reticulului endoplasmatic rugos,pe baza informaiei adus de ARN-ul mesager i sunt trecute simultan n cisternele RER. Genele pentru lanul alfa I sunt localizate pe cromozomul 17, iar pentru lanul alfa II pe cromozomul 7. Informatia este copiat n ARNm pentru fiecare lan pro-alfa. Aceste lanuri pro-alfa sunt mai mari dect lanurile de colagen alfa, deoarece prezint la capetele amino i carboxil peptidele de extensie(peptide semnal la captul amino-150 aminoacizi i secvene de aminoacizi extra250 aminoacizi la captul carboxil. Rolul peptidelor de extensie ,cunoscute sub denumirea de propeptide, este de a iniia asocierea prolanurilor alfa i de a dirija asocierea lor n triplu helix. Asamblarea este iniiat la nivelul captului C-terminal al

propeptidelor, ntre care se stabilesc legturi disulfidice. Astfel,lanurile pro-alfa conin o regiune central colagen (x-gly-y), i regiuni propeptidice necolagene terminale la ambele capete.Greutatea molecular a fiecrui lan pro-alfa este de aproximativ 154.000 daltoni. 2.Modificri posttranslaionale n cisternele RER i ale complexului Golgi au loc modificri posttranslaionale n lanurile polipeptidice; A.Imediat ce captul terminal amino-al lanului alfa ajunge n lumenul reticulului endoplasmatic rugos, este atacat de proteaze care ndeprteaz secvena semnal, permind n continuare. B.Desfurarea procesului de hidroxilare a prolinei i lizinei, n timp ce lanurile polipeptidice nu au conformaie helicoidal. Hidroxilarea prolinei i lizinei ncepe dup ce lanul peptidic a atins o anumit lungime i este legat de ribozomi. Procesul se continu i se desvrete n lumenul RER,fiind catalizat de dou enzime:peptidilprolinhidroxilaza care transform prolina n 4-hidroxiprolin sau 3-hidroxiprolin i peptidillizin-hidroxilaza care transform lizina n hidroxilizin.n molecula de colagen se gsete n special 4-hidroxilizin,necesar formrii de legturi transversale ce stabilizeaz molecula de colagen n fibrile.Reacia de hidroxilare decurge n prezena vitaminei C, a ionilor de fier, alfa-cetoglutaratului i oxigenului. Vitamina C este absolut necesar etapei posttranslaionale. n lipsa ei ,hidroxilarea este insuficient,ceea ce duce la formarea unui trplu helix instabil,neformare de fibrile i fibre de colagen, colagenul se va degrada intracelular, ceea ce va determina creterea fragilitii vasculare, a tendoanelor i a pielii- scorbutul, i deficiene n vindecarea plgilor. C.Glicozilarea hidroxilizinei, se desfoar n cisternele RER,la nivelul lanurilor pro-alfa numai n forma lor nehelicoidal.Ea este catalizat de dou enzime : galactoziltransferaza i glucoziltransferaza.Prin glicozilare se transfer hidroxilizinei, galactoz i glicozilgalactoz. D.Formarea punilor disulfidice , n interiorul lanurilor alfa,sau ntre lanurile alfa, este esenial pentru formarea triplului helix.La capete, lanurile alfa rmn rsucite doar n jurul axului propriu.Aceste puni disulfidice,vor influena formarea moleculei i vor stabiliza interaciunea ntre

lanurile polipeptidice.n urma acestei etape se va forma PROCOLAGENUL. B.Faza extracelular. Procolagenul nou format este exocitat n exterior prin formare de granule de secreie . Microtubulii sunt implicai n transportul granulelor de secreie din regiunea complexului Golgi ctre suprafaa celular. Dac microtubulii sunt dezagregai cu colchicin sau vinblastin,granulele de secreie se acumuleaz n regiunea nucleului. Dup ce protocolagenul este secretat n spaiul extracelular, se realizeaz clivajul enzimatic (procolagen-peptidazele) a cea mai mare parte a poriunii terminale neincolcite care conine reziduuri de aminoacizi ducnd la formarea tropocolagenului.Moleculele de colagen rezultate din clivajul procolagenului, se asambleaz n fibrile nu nainte de a avea loc dezaminarea oxidativ a gruparilor amino-, a lizinei i hidroxilizinei prin aciunea lizil-oxidazei, rezultind aldehide reactive. ntre aceste grupri aldehidice se pot forma crosslikeri transversale intramololeculare,care stabilizeaz molecula. n colagenul de tip I, II, III fibrilele se agreg spontan:la acest proces contribuie i proteoglicanii.Se formeaz astfel subuniti microfibrilare ,care prin asociere cu altele,realizeaz fibrilele.ntre ele se stabilesc puni de hidrogen i legturi hidrofobe care menin stabilitatea fibrilelor.Ulterior stabilitatea crete i prin formarea de puni covalente. n esuturile tinere fibrilele de colagen pot avea diametrul de 15-20 nm,n timp ce n unele varieti de esut conjunctiv matur pot atinge 2oo nm. Observate la microscopul electronic fig.1 fibrilele de colagen prezint striaii transversale care se repet la 68nm, de-alungul fibrilei.Bandarea este o reflectare a aranjamentului moleculelor de colagen n structura fibrilei.Aceste molecule cu lungime de 300nm i diametrul 1,5nm.Ele sunt aezate n rnduri paralele i echidistante.ntr-un rind moleculele sunt dispuse la o distan de 35 nm.(gap). Mrimea gap-ului este astfel aranjat inct se repet la 5 rinduri. Fibrilele de colagen se asociaz n numr diferit i realizeaz fibrele de colagen ,cu grosimi diferite,ntre 1-20 microni. Fibrele de colagen sunt unite ntre ele prin carbohidrai reprezentai n principal de hexoze, care dau reacia PAS pozitiv fibrelor de colagen. Ele sunt mai numeroase n fibrele de colagen subiri(reticulin).Fibrele de reticulin sunt formate din colagenul III i sunt fibre subiri de 1 m diametru, se ramific i se anastomozeaz, i din cauza cantitii mari de glucide ataate

colagenului nu se coloreaz n coloraia uzual Hemalaun-eozin. Fibrele de reticulin se evideniaz prin impregnri argentice. Fibrele de colagen sunt lungi,sinuoase, cilindrice, cu capete care pierd n matricea extracelular.Ele sunt acidofile,se coloreaz n roz n coloraia hemalaun-eozin , brun rocat n coloraia Van Gieson, albastru n coloraia AZAN, i Mallory, i verde n coloraia Masson.Fibrele de colagen nu se anastomozeaz , ntre ele,dar pot alctui benzi ,sau panglici, n care fibrele de colagen se dispun paralel ntre ele.Ele poart denumirea de fibre albe, sunt foarte rezistente i apar birefringente , la microscopul de polarizaie. Fibrele de colagen pot fi degradate de colagenaze ,enzime eliberate de fibroblaste, leucocitele polimorfonucleare, macrofage , unele celule epiteliale ale pielii,celulele epiteliale sinoviale. Degradrea fibrelor de colagen , este urmat de resorbia moleculelor care rezult, proces mai activ n perioada de cretere a organismului,dup distrugeri ale esutului conjunctiv sau dup procese inflamatorii.n acelai timp este stimulat i refacerea fibrelor de colagen de ctre fibroblaste, n aa fel nct n condiii fiziologice exist o balan pozitiv ntre resorbie i refacere. Celulele productoare de colagen sunt: -fibroblastele -celulele mezenchimale -celulele perineurale -cementoblastele -odontoblastele -celulele cartilaginoase -unele celule musculare netede -celulele epiteliale -adipocitele -celulele Schwann, i celulele gliale n general

a.

b.

b.

c.

Fig 1. Fibre de colagen , microscopie electronic de transmisie ,c,i scanning .a. b. Pe imaginea de microscopie electronic de transmisie se remarc periodicitatea creeat de dispunerea caracteristic a moleculelor de colagen n cadrul unei fibrile de colagen.

Fig 2. Tesut conjunctiv dens semiorientat din dermul pielii. Col tricrom, HEA, 2oo x. Fibrele de colagen apar n albastru.

10

ELASTINA i FIBRELE ELASTICE Elastina este ntlnit n special n esutul conjunctiv n strns conexiune cu colagenul. Nivele crescute de elastin sunt prezente n ligamente, pereii vaselor (n special artere), n esutul pulmonar, piele tendoane, etc.Ea este de regul secretat de aceleai celule ca i colagenul . Molecula de elastina este o glicoprotein, are o g reutate molecular= 72000 daltoni,iar compoziia ei n aminoacizi este: -33% glycin - 10-13%prolin - 60% reziduuri de aminoacizi nepolari,ceea ce face ca molecula de elastin s fie hodrofob(desmozina i izodesmozina) -nu contine hidroxiprolin i hidroxilizin. Sinteza ei ncepe la nivelul fibroblastului.Etapa intracelulara se suprapune ca timpi peste etapa intracelular a sintezei de colagen.n urma etapei intracelulare se obine tropoelastina, care se prezint sub form de molecul incolcit.Exocitat n spaiul extracelular, ntre molecule se formeaz cross-linkeri intermoleculare catalizate de liziloxidaza.De regul cam 28-34 de reziduuri de lizina pot fi implicate in cross-linkeri ceea ce determin polimerizarea elastinei in spaiul extracelular.Elastina este foarte rezistent la fierbere,la extracia cu acizi i baze diluate,la aciunea tripsinei.Este hidrolizat de elastaza secretat de pancreas. Moleculele de elastin ,sinoase i de forme diferite,sunt legate ntre ele prin punti necovalente slabe, ca i prin puni covalente distanate,care permit reelei elastice s se ntind i s se string, ntocmai ca o gum.Aspectul elastinei la microscopul electronic este amorf, dei n cele mai multe cazuri se asociaz la colagenul fibrilar.(n special la colagenul VI) Formarea fibrilelor de colagen VI asociate la elastin se face foarte aproape de suprafaa celular,ceea ce permite celulei s controleze orientarea acestor fibre.Este menionat c asocierea proteinelor fibrilare pare s joace un rol important in organizarea moleculelor de elastin. Atracia hodrofob ntre moleculele de elastin ,pare s joace un rol important n procesul de rsucire i ncolcire.Asocirea fibrilelor de colagen pare s limiteze ntinderea. Sistemul de fibre elastice este compus din trei tipuri de fibre: fibrele de oxitalan, fibrele de elaunin i fibrele elastice.Sistemul se dezvolta n trei etape succesive care pot fi observate att n esuturile embrionare ct i n esuturile adulte. n stadiul iniial, fibrele sunt alctuite din benzi de miofibrile subiri, alctuite din glicoproteine.Fibrele oxitalanice pot fi gsite n

11

zonula lui Zinn i la nivelul dermului.n stadiul urmtor de dezvoltare, apare o dispozitie neregulat a moleculelor de elastin printre fibrele oxitalanice, formind fibrele de elaunin(grec.elaunem=a conduce).Aceste fibre sunt intlnite n jurul glandelor sudoripare i la nivelul dermului. n timpul celui de-al treilea stadiu de dezvoltare, elastina se acumuleaz pn ocup partea central a unei benzi de fibre, fiind nconjurat de un strat subire de microfibrile glicoproteice.Acestea sunt fibrele elastice, componentul majoritar al sistemului elastic.Fig.3 n timp ce fibrele oxitalanice sunt rezistente la tensiune, fibrele elastice se ntind ca rspuns la tensiune . Fibrele elastice sunt denumite i fibrele galbene, au un diametru de 1 micron.Ele se ramific i se anastomozeaz realiznd reele neregulate.Se coloreaz inconstant cu eozina, n roz pal.Se pot colora electiv, cu orcein n rou brun ntunecat, cu rezorcin-fuxina(Weigert n rou aprins, cu aldehidfuxina(Gomori) n negru.Fig. 4

Fig 3. Fibroblast- fibr elastic , imagine de microscopie electronic 3200x Alturi de un fragment de fibroblast se remarc n centrul imaginii aspectul ultrastructural al unei fibre elastice mature. Ea prezint n partea central un miez cu contur policiclic dens la fluxul de electroni nconjurat de numeroase fibrile de fibrilin surprinse att n seciune transversal ct i longitudinal.

12

Fig 4. Seciune transversal prin aorta col cu orcein 400x. Fibrele elastice apar colorate n brun rocat cu orcein.

GLICOZAMINOGLICANII Reprezint o component important a matricei extracelulare.ncrcarea negativ de pe aceste polizaharide ,dat de prezena gruprilor sulfat i carboxil asigur legarea unei cantiti mari de ap i cationi .Oricum cu excepia hialuronanului, glicozaminoglicanii nu sunt gsii ca lanuri libere de polizaharide , ci sunt sintetizai direct pe un miez proteic.GAG sunt lanuri polizaharidice neramificate, foarte lungi, formate din uniti dizaharidice repetitive.Se numesc glicozaminoglicani, deoarece unul dintre glucidele care formeaz dizaharidul repetitiv este ntotdeauna un glucid aminat, N acetil- glucozamina sau Nacetilgalactozamina.n majoritatea cazurilor acest glucid aminat este sulfatat.Al doilea glucid al dizaharidului repetitiv este acidul uronic.Din cauza gruprilor sulfat i carboxil,GAG sunt puternic ncrcai negativ.n funcie de componentele glucidice ,de tipurile de legaturi chimice dintre acestea i de numrul i de localizarea gruprilor sulfat,GAG au fost mprtii n patru grupe:

13

14

Lanurile polizaharidice sunt att de inflexibile nct nu se pot mpacheta n structuri globulare compacte, cum o pot face lanurile polipeptidice.De aceea aceste molecule sunt foarte hidrofile.Astfel ,GAG au tendina de a adopta o conformaie foarte extins,care ocup un volum foarte mare n raport cu masa lor,formind mase gelatinoase chiar i cind se afl in concentraii foarte mici. Marea densitate a sarcinilor lor negative, determin atracia i legarea cationilor, de exemplu a Na+,cationi care sunt osmotic activi,ceea ce determin suciunea n matrice a unei mari cantiti de ap.Aceasta creeaz o presiune de turgescen(turgor),ceea ce asigur o rezisten la forele de compresiune(n contrast cu fibrele de colagen care asigur rezisten la forele de traciune). Cantitatea de GAG din esuturile conjunctive este de obicei mai mic de 10% din greutatea total a proteinelor fibroase.Din cauz c formeaz un gel poros,puternic hidratat,GAG ocup totui cea mai mare parte a spaiului extracelular,asigurnd un suport mecanic pentru esuturi i permind difuzia rapid a moleculelor hidrosolubile precum i migrarea celulelor.

ACIDUL HIALURONIC(HIALURONANUL) Impropriu denumit proteoglican,deoarece lanurile polizaharidice nu sunt legate covalent de un miez proteic, cu toate c formeaz legturi non covalente cu aceste miezuri proteice.Este o component major a matrixului extracelular care nconjoar celulele proliferative i migratoare ,n particular din esuturile embrionare.Acesta este deasemen ea ,componentul structural major al proteoglicanilor care se gsesc n matrixul extracelular al cartilajelor. O molecul de acid hialuronic este format din aproximativ 50.000 de uniti repetitive ale unui dizaharid format din acid glucuronic i N acetilglucozamin.Din cauza legturilor de tip beta dintre monozaharide, precum i din cauza existenei legturilor de hidrogen din interiorul moleculei, acidul hialuronic are aspectul unui bastonas lung i rigid.Repulsia mutual dintre gruprile carboxil ncrcate negativ,care se afl dispuse la intervale regulate,contribuie de asemenea ,la stabilizarea structurii rigide.O singur molecul poate astfel atinge lungimea de 2o microni. Acidul hialuronic este unic printre glicozaminoglicani pentru cteva motive: -Are greutatea molecular cea mai mare dintre toi glicozaminoglicanii -Nu este sulfatat i nu se epimerizeaz n timpul sintezei

15

-Nu este legat covalent de miezul proteic -Nu este sintetizat n complexul Golgi,ca i ceilali glicozaminoglicani Acidul hialuronic este sintetizat direct prin membrana plasmatic,iar elongarea lanurilor sale se face prin addiie de grupri glucidice la capetele reduse. Prin comparaie cu acidul hialuronic,toi ceilali GAG : -Prezint zaharuri sulfatate -Conin uniti dizaharidice diferite, aranjate n secvene mult mai complexe -Sunt formai din lanuri mult mai scurte,cu mai puin de 3oo uniti glucidice -Sunt legai covalent la proteine Hialuronanul este prezent n esut pe suprafaa celular.Datorit ncrcturii sale negative i legturilor de hidrogen dintre reziduurile glucidice adiacente, exist o rigiditate inerent n cadrul moleculei rezultind o structur colcit expandat cu greutatea molecular mare. Oricum la concentraii mai mari, lanurile de acid hialuronic se pot ncolaci i pot da natere unor structuri dublu sau triplu helicoidale, fomnd o reea continu,ce fixeaz n ochiuri, molecule de ap. Abilitatea ,chiar i la concentraii mici de a forma o reea continu este dependent de greutatea molecular mare a polizaharidului.Din cauza structurii sale hidratate,naturiiporoase,nveliul celular acoperit cu acid hialuronic, ine la distan celulele,una fa de cealalt,asigurnd libertatea lor de micare i de proliferare. Suprimarea micrii celulare i iniierea atarii intercelulare,este frecvent corelat cu scderea concentraiei de acid hialuronic.Cnd migrarea celular este oprit,moleculele de acid hialuronic, sunt degradate de catre enzima hialuronidaz. Proteoglicanii sunt formai din lanuri de GAG legate colavalent de un miez proteic Proteoglicanii sunt macromolecule existente n toate esuturile conjunctive.Aceste molecule sunt formate dintr-un miez proteic,la care se ataeaz covalent una sau mai multe molecule de glicozaminoglicani,de acelai tip sau de tip diferit..Ca i n cazul celorlalte glicoproteine,lanul polipeptidic,sau miezul proteic al proteoglicanilor este sintetizat pe ribozomii de pe membranele RER i introdus n lumenul acestuia.Lanurile polizaharidice sunt asmblate pe acest miez proteic, mai ales n aparatul Golgi: n primul rind la radicalii serinici ai polipeptidului se ataeaz un trizaharid de legtur care servete ca primer pentru creterea polizaharidului; ulterior ,prin intervenia unei glicozil-transferaze,se adaug susccesiv radicalii glucidici.

16

n decursul alungirii lanului polizaharidic n aparatul Golgi,o parte a glucidelor polimerizate sunt modificate covalent prin reacii de sulfatare i de epimerizare care modific configuraia monomerilor.Sulfatarea crete foarte mult incrctura negativ a proteoglicanilor.Proteoglicanii prezint o remarcabil diversitate.Se cunosc urmtoarele tipuri de proteoglicani: A.-Proteoglicanii din matricea cartilaginoas-Agrecanul-sunt cele mai mari agregate moleculare cunoscute.O singur molecula poate fi mai lung de 4 microni.Asemenea proteoglicani confer cartilajului propritile sale caracteristice:consisten asemntoare unui gel i rezisten la deformare.Componenta central a agregatelor de proteoglicani ,o formeaz o molecul foarte lung de acid hialuronic.La el se leag strns ,dar nu covalent,la intervale de 4o nm,proteinele miez ale proteoglicanilor de condroitin-sulfat i cheratan sulfat. Legarea proteoglicanilor la acidul hialuronic este asigurat de o protein linker. B-Proteoglicani simpli care se afl n laminele bazale.Acetia sunt formi dintr-un miez proteic cu greutate molecular de 2000040000,la care se ataeaz lanuri de heparan sulfat. C-Proteoglicani neagregati care sunt coninui n toate esuturile conjunctive inclusiv n tesutul cartilaginos, conin un miez proteic cu unul sau trei lanuri covalent likate de condroitin-sulfat,dermatan-sulfat, keratan-sulfat. Au greutate mica, 4oooo, iar funcia lor nu este clar,dar moleculele lor apar asociate cu fibrilele ordonate de colagen. D.-Proteoglicanii de pe suprafaa celular un miez proteic inserat n bistratul lipidic membranar, care fixeaz moleculele polizaharidice de GAG doar pe suprafaa extracelular.Sunt ntlnii pe suprafaa celulelor endoteliale, vasculare.La miezul proteic se asociaz pe suprafaa extracelulara 3-8 molecule de heparan sulfat.Aceti proteoglicani sunt capabili s lege colagenul tip I, III, IV, V ,dar nu i tipul II. Deasemenea au abilitatea de a lega fibronectina i a moleculelor de adezivitate, mediind adezivitatea celul-celul. Controleaz coagularea,metabolismul lipoproteinelor, creterea muchiului neted, formarea neuriilor,permeabilitatea membranelor bazale.

GLICOPROTEINELE STRUCTURALE DE ADEZIVITATE Au fost studiate prin doua metode: 1.Prima este bazat pe producia de anticorpi, ce sunt capabili s inhibe sau s rup jonciunile celulare.Moleculele, cu care aceti anticorpi interacioneaz sunt apoi identificae prin diferite tehnici : imunoprecipitarea i tehnicile cromatografice. .

17

2.Se utilizeaz un component matricial purificat, imobilizat pe un mediu cromatografic cum ar fi:agaroza sau poliacril amida.Afinitatea cromatografic a unor celule sau extracte tisulare sunt apoi utilizate s identifice proteinele ce interacioneaz cu componentul imobilizat.Aceast tehnica poate identifica i receptorii de suprafa posibili pentru componentele matricei extracelulare. Aceste tehnici au identificat dou clase diferite de molecule implicate n jonciunile de adezivitate de tip celul-matrice: -1.Receptorii de membran -2.Glicoproteinele structurale sau de adezivitate Glicoproteinele structurale sunt molecule multifuncionale, care uzual interacioneaz cu cteva componente ale matricei extracelulare, i cu suprafaa celular prin domenii specifice de legare, i prin aceasta au rol in interaciunile celula-matrice=ca proteine de ancorare.Au abilitatea de a se asocia ntre ele, de a se lega de alte componente ma triciale i deasemenea mediaz organizarea matricei celulare. FIBRONECTIN LAMININ ENTACTIN TENASCEIN TROMBOSPONDININ CONDRONECTIN Cele mai bine cunoscute din punct de vedere structural i funcional sunt fibronectina i laminina. Sunt reprezentate de:FIBRONECTINA Fibronectinele sunt o clasa mare de glicoproteine cu GM= 450 000, sunt prezente n toate esuturile conjunctive.Sunt descoperite n 1970, ca o protein celular de suprafa prezent numai la fibroblastele normale , nu i tumorale, care promoveaz ataarea celular. Molecula este alcatuit din dou subuniti cu GM=220000, i respectiv 250000 linkate n dimeri prin puni disufidice. Lanurile polipeptidice sunt alctuite din 3 tipuri de unitti repetitive: I, II, III. Tipul I conine 45-50 reziduuri de aminoacizi meninui prin puni disulfidice. Tipul II are 60 reziduuri de aminoacizi. Tipul III are 90 reziduri de amninoacizi. 2 subunitati tip II interacioneaz cu 9 subunitti tip I, la capetele aminoterminale ale moleculei de fibronectin pentru a forma domeniile de fixare ale colagenului.Restul moleculei, n partea central este format

18

din 15-27 subuniti tip III. n acest portiune pot exista 2 grupri sulhidril libere ,care sunt implicate n formarea de multimeri cu greuti moleculare mari. Fibronectina poate exist n dou forme: 1.Forma dimeric solubil secretat de hepatocite,celule endoteliale, gasit n plasm 2.Forma multimeric, secretat de marea majoritate a celulelor conjunctive, este depozitat uzual n matricea extracelular sub form de fibrile lungi insolubile. FUNCII Fibronectina are urmtoarele domenii de legare: a.-domenii ce interacioneaz cu suprafeele celulare i cu cteva componente ale matricei(fibrinogen, heparina, stafilococ, gelatina ) b.-2 situsuri pentru corss-likeri la alte proteine, catalizate de transglutaminaz c.-situsuri pentru asociere proprie Tipurile II , leag gelatina i colagenul , iar Tipurile III are situsuri de legare la suprafaa celulara, pentru glicozaminoglicanii sulfatai (heparansulfatul, dermatansulfatul, condroitinsulfatul). Fibronectina poate interaciona cu receptorii celulari de suprafa, prin intermediul domeniilor de ataare i deasemenea prin intermediul proteoglicanilor. Aceast abilitate de a se cupla cu proteoglicanii sau cu suprafeele celulare poate juca un rol semnificant n ordonarea matricei extracelulare. LAMININA Este o glicoprotein cu GM=900000 , izolat iniial din matricea extracelular a tumorilor.n esuturile normale este glicoproteina major non-colagenic din membranele bazale i este localizat n lamina rara.Are o lungime de 70nm, este att de lung , ct de groas este lamina bazal. Laminina este alctuit din 2 subunitti likate prin puni disulfidice a.-subunitatea A cu GM=440000 b.-2 subuniti B cu GM=205000-230000 Molecula de laminin are aspectul unei cruci cu 1 bra lung i trei brae scurte.Pe fiecare bra scurt apar dou domenii globulare la capete, iar la captul braului lung apare un singur domeniu globular. Subunitatea A intr n structura unui bra scurt, a capetelor globulare ale moleculei indiferent de localizare i partea terminal a braului lung Subunitatea B formeaza restul bratului lung, i doua brae scurte.

19

FUNCII Intr n structura laminelor bazale care conin un set comun de proteine i glicozaminoglicani:colagen de tip IV, heparan-sulfat, entactina , precum i laminin. Lamina bazal mai este denumit i matrix de tip IV,datorit tipului de colagen care l conine.Celulele , n general, nu se pot lega direct de colagenul de tip IV sau de proteoglicani.Laminina ns, asigur ancorarea suprafeei celulare la membranele bazale. Diferitele celule care sunt mrginite de lamine bazale, cum ar fi celulele adipoase, celulele musculare nerede i striate, pot utiliza pentru aceasta diferii receptori de suprafa.Laminina posed cel puin dou regiuni de care se pot lega asemenea receptori.

TENASCEINA Este un hexamer alctuit din 6 subunitti dispuse radiar n jurul unui miez proteic.Fiecare subunitate are aspectul unui b de toboar cu o poriune liniar i una globular.Din punct de vedere al rolului ndeplinit, tenasceina se fixeaz pe membrana celular prin intermediul unui proteoglican, neavnd receptor de membran, deci va interveni alturi de alte proteine structurale ale matricei celulare n organizarea matricei i n proliferarea celular. ENTACTINA Glicoproteina cu greutate molecular mic, are aspectul unui b de toboar.Se leag de laminin la poriunea neramificat. TROMBOSPONDININA Glicoprotein cu GM=420000 identificat iniial n plachetele umane.Ulterior s-a artat a fi secretat de fibroblaste,celulele endoteliale, si nglobat n matricea extracelular.O serie de cercetri recente au artat c trombospondinina are locusuri specifice de legare a:fibrinogenului,fibrinectinei,lamininei,heparinei,colagenului de tip V. CONDRONECTINA Glicoproteina izolat iniial din ser, i mediaz practic ataarea condrocitelor n matricea cartilaginoas.Se leag specific de : colagenul tip II, fibronectin, laminin, agrecan.

20

CELULELE CONJUNCTIVE Tesutul conjunctiv face legtura ntre alte tipuri de esuturi.Este un esut heterogen, fiind alctuit din celule, fibre i substan fundamental.Substana fundamental i fibrele conjunctive alctuiesc matricea conjunctiv extracelular, se afl in spaiile intercelulare.esutul conjunctiv este bogat inervat i conine terminaii nervoase libere i incapsulate. Celulele conjunctive nu prezint polaritate ,ele intervin n producerea matricei extracelulare, prin secreia de macromolecule pe toata suprafaa celular n comparaie cu celulele epiteliale care secret numai la polul apical.Intervin deci n organizarea matricei extracelulare, care este foarte importanta, pentru migrarea celulara, diviziunea proliferarea, diferenierea, determinismul formei i funciei celulare( este absolut indispensabil n fazele finale ale morfogenezei ) . Concomitent cu producerea matricei extracelulare, celulele conjunctive intervin i n distrucia ei, prin secreia de protein -enzime care degradeaz macromoleculele matriciale.n condiii fiziologice exist un echilibru dinamic ntre producerea i distrugerea matricei. Celulele conjunctive rmn ataate de moleculele matriciale prin intermediul unor receptori de tip integrine, receptori integrin-like i receptori non-integrine. Integrinele sunt receptori alctuii din dou subuniti:alfa i beta.Subunitile alfa exist n ase variante alfa 1-alfa 6, care asigura adezivitatea celulelor conjunctive la macromeolecule matriciale, prin contacte focale , n cadrul jonciunilor focale. Integrinele beta2 sunt exprimate pe suprafaa celulelor migrate n esutul conjunctiv(limfocite mari cu coninut granular, leucocite polimorfonucleare).Acestea confer adezivitate de tip celula- matrice i de tip celul celul.Integrinele B3 sunt prezente pe megacariocite i pe membrana plachetelor sanguine.Asigur adezivitatea de fibrinogenul plasmatic, i de factorul Wilebrand subendotelial. Celulele conjunctive se pot gsi in dou forme: activ i inactiv(relaxat). Cele care se gsesc n form activ confer stabilitate esutului conjunctiv prin contactele focale pe care le stabilesc.Cele inactive relaxate sunt detaate de matrice, au mare capacitate de proliferare i migare celular Celulele conjunctive por fi clasificate dup mai multe criterii:

21

CLASIFICAREA CELULELOR CONJUNCTIVE 1.Din punct de vedere al originii: CELULE FIXE -Fibroblastul-fibrocitul -Condroblastul-condrocitul -Osteoblastul-osteocitul -Adipocitul CELULE MOBILE -Leucocitele granulare -Limfocitele B -Limfocitele T circulante -Monocitele-macrofage -Mastocitul -Celula pigmentar(melanocitul) Celule fixe se mai numesc i celule propriu-zise ale esutului conjunctiv. Ele particip la secreia macromoleculelor componente ale matricei extracelulare. Ele confer stabilitate esutului conjunctiv prin jonciunile focale pe care le stabilesc cu matricea. Aceste celule prezint proprietatea de interconvertibilitate pe orizontal i pe vertical.De exemplu fibroblastul devine fibrocit, dar in acelasi timp el se poate transforma n condroblast, osteoblast sau adipocit. Celulele mobile, leucocitele granulare, limfocitele B, limfocitele T i monocitele trec prin diapedeza la nivelul peretelui capilar sau al venulei postcapilare, iar la nivelul esutului conjunctiv intervin n procesele imune de aparare local. Se pot gsi n esutul conjunctiv polimorfonucleare neutrofile, acidofile i bazofile. Limfocitele T , macrofagele i limfocitele B coopereaza n procesul imun mediat umoral. Monocitele dup ce ajung prin diapedez n esutul conjunctiv devin macrofage, i devin celule imune efectorii intervenind n procesul de fagocitoz sau pinocitoz. Alteori coopereaz cu limfocitele T , n scopul activrii limfocitelor B pentru secreia de imunoglobuline. Totalitatea macrofagelor din organism formeaz sistemul fagocitar mononuclearpopulaie heterogen de celule cu larg localizare avnd ca funcie comun -fagocitoza-. Celula pigmentar sau melanocitul, deriv din crestele neurale, de unde migreaz n esutul conjunctiv din stroma conjunctiv a irisului, n dermul pielii i la nivelul epidermului printre keratinocite.

22

Legat de originea mastocitelor sunt dou teorii. Una dintre ele susine originea n bazofilele sanguine, care dup ce ajung prin diapedez n interstiiu, devin mastocite. Aceast teorie se bazeaz pe aspecte marfologice i funcionale asemnatoare ntre cele dou celule. Cea de-a doua teorie mult mai acceptat susine originea mastocitului n celula stem pluripotent din mduva roie hematogen, celul care va da natere mastoblastului-promastocitului- mastocitului. 2. Criteriul funcional a.-CELULE CONJUNCTIVE IMPLICATE IN PRODUCIA I DISTRUGEREA MOLECULELOR MATRICIALE:exemplu: fibroblastul condroblastul, osteoblastul, celula muscular neted din pereii vasculari b.CELULE CONJUNCTIVE CU FUNCIE PREDOMINANT METABOLIC: -adipocitul brun are funcie predominat termogenetic -adipocitul alb are rol n metabolismul intermediar al lipidelor -adipocitul hepatic( celula lui ITO) are rol n sinteza i depozitarea vitaminei A c.CELULE CU FUNCIE PREDOMINANT N REACIILE IMUNE LOCALE: 1.Celule efectorii:-celule implicate in fagocitoz: de tip macrofag de tip microfag -celule implicate in rspunsul imun mediat umoral-limfocitul B care devine plasmocit -limfocitele T citotoxice -limfocitele NK de tip limfocitar -limfocitele K 2.Celule imune accesorii: -macrofagul -celulele prezentatoare de antigen ORIGINEA CELULELOR CONJUNCTIVE

SCHEMA

23

24

CELULA MEZENCHIMAL Poate proveni din mezoderm ( n majoritatea varietilor de esut) sau din mezoectoderm(celulele conjunctive de la nivelul extremitii cefalice). Celulele mezenchimale alctuiesc esutul conjunctiv embrionar. Este o celul de form neregulat cu numeroase prelungiri, dimensiuni de 3o microni. Se caracterizeaz printr-un raport nucleoplasmatic supraunitar. Are un nucleu mare veziculos, identat sau rotund, palid colorat, bogat n eucromatin cu nucleol evident.Citoplasma redus este bazofil, srac n organite. Microscopul electronic evideniaz grupri poliribozomale libere.Celulele mezenchimale vin n contact prin jonctiuni Gap. Sunt implicate n producerea matricei extracelulare, lipsit de component fibrilar.Sunt celule pluripotente.Din ea deriv marea majoritate a celulelor conjunctive.Celula mezenchimal se ntlnete i n esuturile conjunctive adulte, n numr limitat n jurul capilarelor , venulelor postcapilare.Ea induce deferenierea epiteliului cu care vin n contact.Fig.6

Fig 28 Tesut mezenchimal H.E. Ob x Se observa aspectul particular al celulelor mezenchimale la care raportul nucleoplasmatic este supraunitar. Celulele prezinta numeroase prelungiri care vin in contact cu prelungirile celulelor vecine , Nucleii celulelor sunt eucromatici cu nucleoli evidenti. Matricea

.Fig.6 Celule mezenchimale. Col. H.E. 6oox

25

Fig 6 Tesut mezenchimal H.E. Ob x Se observ aspectul particular al celulelor mezenchimale la care raportul nucleoplasmatic este supraunitar. Celulele prezint numeroase prelungiri care vin n contact cu prelungirile celulelor vecine , Nucleii celulelor sunt eucromatici cu nucleoli evideni. Matricea extracelulara are un aspect omogen fiind sarac n fibre conjunctive.

FIBROBLASTUL Reprezint forma activ din punct de vedere funcional. El poate deveni inactiv i se numete fibroblast. Este cel mai rspndit tip celular din esutul conjunctiv, i cea mai activ celul. Structural are o lungime de 15-2o microni. Este o celul alungit, ce emite numeroase prelungiri la capete. Celulele pot stabili ntre ele contacte de tip jonciuni Gap.Are un nucleu mare ovalar situat central, palid colorat cu nucleoli evideni. Citoplasma este abundent bazofil.Fig.7

Fig7. Seciune transversal prin trahee Col HE .400x n corionul mucoasei respiratorii se observ un esut conjunctiv lax n care se remarc nucleii alungii ai fibroblastelor, alturi de fibrele de colagen, vase de snge i alte tipuri de celule conjunctive.

26

La microscopul electronic, nucleul apare ncrcat cu eucromatin, prezint sau nu identaii. In citoplasm se gsete un reticul endoplasmatic rugos foarte dezvoltat, grupri poliribozomale libere, un aparat Golgi bine reprezentat, granule de secreie cu coninut granular sau filamentos, mitocondrii numeroase, centrozom, un citoschelet foarte bine reprezentat( microtubuli, microfilamente, filamente intermediare de desmin i vimentin).Fig.8 i 9.

Fig 8 Fibroblast , imagine de microscopie electronic 1200x Se remarc aspectul neregulat al celulei care emite numeroase prelungiri. Nucleul este dispus central, prezint foarte multe indentaii , are hetereocromatin dispus la periferie n apropierea membranei interne nucleare iar eucromatina dispus central.n citoplasm se remarc numeroase organite celulare. nafara celulei, se remarc mnunchiuri de fibrile de colagen surprinse atit n seciune longitudinal ct i n seciune transversal.

27

Fig9. Fibroblast , imagine de microscopie electronic 2400x Nucleu celular n poziie central cu nucleol evident, n citoplasm se remarc numeroase organite celulare : mitocondrii, RER vezicule de secretie. nafara celulei se remarc numeroase bandelete de fibrile de colagen secionate att longitudinal ct i transversal. Rol:- sintetizeaz i secret toate moleculele precursoare ce intr n alctuirea fibrelor i substanei fundamentale, exemplu: proelastina, procolagenul, glicoproteinele-fibrilina-, glicozaminoglicanii nesulfatai sau sulfatai, proteinele cu rol n adezivitate(fibronectina, tenasceina, laminina, entactina, etc.) -secret exoenzime de origine lizozomal cu aciune extracelular , ex:colagenaze, proteaze(catepsina) -secret factorul de cretere fibroblastic cu rol n proliferarea capilarelor sanguine -poate secreta interferon gamma cu aciune antiviral, mai puternic dect interferonul secretat de macrofage. Fibroblastele au dou proprieti fundamentale: 1. modulaia 2. nonechivalena 1.Modulaia, reprezint proprietatea fibroblastelor de interconvertibilitate cu alte celule de origine mezenchimal. Se poate tranforma in fibrocit,

28

sau n miofibroblast, dar poate deveni condroblast, osteoblast sau adipocit. Fibrocitul este o celul cu dimensiuni mai mici dect fibroblastul, are form alungit bifurcat sau trifurcat la capete, citoplasm puin, acidofil, nuclul alungit, tahicromatic. La microscopul electronic, aparatul de sintez proteic este foarte slab dezvoltat, n schimb aparatul lizozomal este bine reprezentat. La nivelul membranei celulare s-au evideniat receptori pentru lipoproteinele cu densitate joas, deci pot ngloba aceste molecule prin proces de pinocitoz, avnd deci rol n metabolismul colesterolului. Miofibroblastul. Se aseamn structural la microscopul electronic cu fibroblastul dar are n citoplasm un aparat contractil reprezentat de miofilamente groase de miozin i subiri de actin. Funcia lui este n primul rnd contractil. Apare n esutul conjunctiv de reparaie din jurul plgilor, n axul conjunctiv al vilozitilor intestinale, n capsula i trabeculele splenice, n albugineea testicolului, n teaca extern a foliculilor ovarieni. Un tip particular de miofibroblast este pericitul lui Rouget prezent n dedublarea laminei bazale de la nivelul capilarelor sanguine. 2. Non-echivalena.Este exprimat n perioada de organogenez. Fibroblastele din diferite varieti de esutul conjunctiv, i chiar din aceeai varietate de esut conjunctiv dar din diferite localizri au particulariti structurale i funcionale diferite. Fibroblaste, ca i celulele mezenchimale din care provin , controleaz diferenierea epiteliului din apropiere. De exemplu, fibroblastele din dermul palmei determin dezvolatarea stratului lucidum, i creterea n grosime a corpului cornos al epidermului. Fibroblastele din endometru, sufer modificri sub influena hormonilor ovarieni, devin celule deciduale(predeciduale), cptnd i proprieti endocrine.

MASTOCITUL Este de origine mieloid, provine din diferenierea unor celule stem unipotente din mduva roie hematogen, ce se difereniaz n promastocit , ce migreaz din snge n esut unde se transform n mastocit. Mastocitele sunt celule mobile ntlnite la nivelul mucoaselor respiratorii, cilor respiratorii, digestive, genitale feminine, n esutul conjunctiv lax subcutanat.Pot fi izolate sau n cuiburi, n apropierea

29

vaselor de snge.Mastocitele au o via lung cu o mare capacitate de proliferare n esuturi. Mastocitul este o celul rotund sau ovalar,cu diametrul de 2o3om. Nucleul celular este mic heterocromatic, dispus central, adeseori mascat de granulele mastocitare, iar citoplasma este slab acidofil i prezint granulaii mici inegale cu diametrul de 0,3-2 m, care la microscopul optic se evideniaz cu albastru de toluidin, cu tionin, fiind metacromatice, i colorndu-se n rou violaceu.Fig.10

Fig 10. Mastocite in dermul pielii col cu Albastru de toluidina ob 40x

Fig 10. Mastocite n dermul pielii col. albastru de toluidin 600x

30

La microscopul electronic, se poate evidenia c citoplasma masctocitului este srac n organite celulare, are ms un citoschelet mai dezvoltat subplasmalemal. Granule mastocitare inegale, dense la fluxul de electroni apar delimitate de endomembrane . Fig 11 i 12

Fig 11. Imagine de microscopie electronic 2400x n centrul imaginii se remarc un mastocit, n citoplasma cruia se observ numeroase granule cu coninut dens .La dreapta i la stnga mastocitului se remarc seciuni transversale prin doua vase , de tip venos i arterial. n apropierea

31

mastocitului , de remarcat un fibroblast. Cele dou celule sunt nconjurate de numeroase manunchiuri de fibre de colagen.

Fig 12 Mastocit imagine de microscopie electronic. 5000x n centrul imaginii se observ nucleul celular cu nucleol evident. n citoplasm de remarcat numeroase granule dense la fluxul de electroni. Membrana mastocitului emite frecvente pseudopode.

i din punct de vedere molecular conin: GAG sulfatai(heparina i condroitin-sulfatul), histamina, proteaze neutre, factorul chemotactic al eozinofilelor .n funcie de tipul de GAG sulfatat coninut n granule, mastocitele pot fi : a. mastocite prezente n mucoase-heparinocite-conin heparina n granulaii b.mastocitele din esutul subcutanat , ce conin n granule condroitinsulfatul. Cele dou populaii reacioneaz diferit la agenii farmacologici. Citoplasma mai coine cteva mitocondrii mici i un reticul endoplasmatic rugos slab reprezentat.

32

Membrana celular conine receptori specifici pentru IGE(reagine). n timpul reaciilor de sensibilizare imediat mastocitele pot sintetiza n membrana celular leucotriene din fosfolipidele membanare i sunt eliberate n spaiul extracelular odat cu coninutul granulelor mastocitare Mastocitele intervin n reactiile de hipersensibilizare imediat de tipul alergiilor, urticariilor , sau ocului anafilactic( cel mai de temut dintre toate). Aceste celule au proprietate de degranulare, cnd prin exocitoz coninutul granulelor mastocitare este eliberat n matricea adiacent. Degranularea poate fi spontan, indus de factori mecanici, termici, factori chimici(cofeina, morfina), care duce la moartea celulei , poate fi o degranulare imunospecific , mediat de anticorpi realiznduse o degranulare parcelar a celulei i poate fi o degranulare lent, n care coninutul granulelor este eliberat prin exocitoz fr a fi afectat celula . Degranularea se face prin legarea antigenelor de anticorpii( IGE), fixati , pe receptorii specifici la suprafata mastocitului. Anticorpii -IGEreagine , produi n organism de ctre plasmocite, ca urmare a ptrunderii unui antigen-alergen. Ori de cte ori, organismul vine n contact cu alergenul rspectiv, acesta se leag de anticorpii de pe suprafaa mastocitelor , formndu-se complexe antigen -anticorp declannd mecanismul de mesager secund, prin activarea adenilatciclazei cu creterea AMPc, cu stimularea unor proteinkinaze, urmat de fosforilarea proteinelor specifice, i creterea influxului de calciu.Aceasta duce la tendina de fuzionare a granulelor cu membrana plasmatic urmat de ruperea membranei i eliberarea coninutului granular n spaiul extracelular. Complexele antigen- anticorp activeaz sistemul de fosfolipaze membranare, cu producerea de acid arahidonic i apoi leucotriene ca urmare a activitii lipooxigenazei. Histamina eliberat din granulele mastocitare crete permeabilitatea capilarelor, se realizeaz o dilataie a venulelor postcapilare , urmat de filtrare masiv de plasm i diapedez de leucocite accentuat, n special eozinofile atrase prin factorul chemotactic al eozinofilelor. Deasemena histamina realizeaz contracia muchilor netezi bronhiolari( bronhospasm). Eozinofilele atrase n esut ncorporeaz o parte din histamina eliberat , pe care o distruge prin prezena histaminoxidazei. Celelalte PMN-uri atrase n esut pot induce o mastocitoliz violent. Leucotrienele eliberate din membrana celular ncetinesc contracia muchiului neted. Mastocitele , sunt n strns corelaie cu fibroblastele , pentru c diferenierea mastocitelor este controlat de factorul de cretere sintetizat

33

de fibroblaste. Mastocitele care elibereaz substane active care acioneaz local sunt incluse n categoria celulelor paracrine. nafar de rolul menionat , mastocitele intervin n metabolismul intermediar al lipidelor prin secreia unei protein-enzime cu rol de cofactor al lipoproteinlipazei. PLASMOCITUL Celul mobil a esutului conjunctiv, este prezent n mucoasele respiratorii, mucoasa tubului digestiv, cile genitale feminine, n esutul conjunctiv lax subcutanat. Din punct de vedere al originii, este o celul conjunctiv maturat pe seama unui limfocit B , care trece prin diapedez din snge n esutul conjunctiv lax, sau reticulat, la nivelul venulelor postcapilare. Forma celulei, de regul este ovalar, cu diametrul 2o-3o m, avnd un nucleu mare voluminos , excentric, cu aspect, granular "n spie de roat". Citoplasma abundent , bazofil , prezint un halou perinuclear , care nu se coloreaz. Bazofilia citoplasmei este corelat cu prezena unui reticul endoplasmatic rugos bogat reprezentat( ergastoplasma). n haloul perinuclear nu se mai evideniaz ergastoplasm ci doar complex Golgi bogat reprezentat i centrozom. Din cnd n cnd , m zonele de citoplasm acidofil se pot evidenia mici formaiuni acidofile , denumite corpusculii lui Russel care au substrat , lanurile polipeptidice, aflate n tranzit prin reticulul endoplasmatic rugos. Fig.13

Fig 13. Plasmocite n ganglionul limfatic. Se mai observ i alte celule conjunctive, ex macrofage, celule reticulare, limfocite col H.E. 400x La microscopul electronic, se remarca, poziia nucleului, excentric, cu heterocromatina alternnd cu eucromatina, dnd aspectul caracteristic,

34

de "cadran de ceas" sau " spie de roat".Citoplasma n mare parte este ncrcat cu unreticul endoplasmatic bogat reprezentat, n ale crui canalicule se vad polipeptidele aflate n tranzit de la ribozomi la complexul Golgi. n haloul perinuclear, se observa lipsa reticulului, si prezena unui complex Golgi, mitocondrii, centru celular, elemente de citoschelet.Fig 14.

Fig14. Plasmocit imagine de microscopie electronic de transmisie 800 x. Se poate remarca nucleul celular cu eucromatina dispus n spie de roat .Aproape ntreaga citoplasm este ncrcat cu un reticul endoplasmatic rugos cu excepia zonei perinucleare n care RER lipsete, n schimb este foarte bine dezvoltat complexul Golgi Rolul plasmocitelor este n rspunsul imun mediat umoral.Ele produc anticorpi. Anticorpii sunt globuline specifice produse ca rspuns la penetrarea organismului de ctre antigene. Fiecare anticorp este specific unui antigen, dar poate avea reacii ncruciate cu antigene nespecifice, care au ns conformaie molecular similar.

35

-Imunoglobuline G, se ntlnesc att n umori, snge, limf, lichid interstiial legate de diverse particule, avnd rol de opsonine. -Imunoglobulinele M sunt secretate ntotdeauna n primele faze ale unui proces inflamator.Aceste imunoglobuline mpreun cu imunoglobulinele G pot fi receptori specifici pentru antigene pe suprafaa limfocitelor B. -Imunoglobulinele A sunt secretate sub form de monomeri , sau dimeri, i apoi sunt transferate la suprafaa epiteliului de nveli unde asigur imunitatea de membran a tuturor epiteliilor de nveli. -Imunoglobulinele D sunt receptori antigenici specifici pe suprafaa limfocitelor B. -Imunoglobulinele E, sunt secretate la contactul organismului cu antigenul, i au receptori n membrana mastocitului i a bazofilelor. n rspunsul imun mediat umoral, primar, deci la primul contact al limfocitelor cu antigenul, acestea se blastizeaz, adic se transform n limfoblaste sau imunoblaste pentru a sintetiza imunoglobuline. n cadrul acestei transformri, limfocitul crete n volum, atinge diametrul de 10m.Nucleul crete n volum devine palid se ncarc cu eucromatin i are 2-4 nucleoli evideni. Citoplasma devine abundent, bazofil, la nivelul ei dezvoltndu-se organitele celulare n special cele de sintez. Dup activare limfocitele B se divid prin mitoze repetate i dau natere la clone celulare B. Din acestea , unele imunoblaste se difereniaz m plasmocite, celule secretoare de imunoglobuline. Alte imunoblaste se ntorc la forma de limfocit circulant, devenind celul cu memorie. Aceasta reine n memoria ei( n acizii nucleici) primul contact cu antigenele.Stimularea limfocitelor B determinat de prezena antigenelor este ajutat de o categorie de limfocite T numite ajuttoare ( helper), ca i de macrofage. Acestea din urm capteaz antigenul pe suprafaa lor i n fac mai imunogen. Macrofagele pot chiar fagocita unele antigene, pe care dup ce le prelucreaz n citoplasm n scopul sporirii puterii lor antigenice( de activare a limfocitelor) le exociteaz i le prezint limfocitelor B. n rspunsul imun secundar. Deci la un al doilea contact cu antigenul , nu mai este nevoie de cooperarea Limfocite T helper, macrofage, limfocite B pentru blastizarea limfocitelor B , deoarece exist o populaie de limfocite cu memorie care recunosc antigenul i se blastizeaz imediat , i se tranform n imunoblaste mult mai rapid.. Clonele care iau natere formeaz n mod difereniat , pe de o parte plasmocite secretoate de imunoglobuline , i pe de alt parte, celule cu memorie care s asigure linia limfocitar memorizant , gata de intervenie pentru un nou rspuns imun. Dup stimulare imunoblastele trec n cile limfatice , apoi n snge , pe care-l prsesc spre a se localiza n apropierea focarului antigenic. De exemplu, imunoblastele ganglionilor mezenterici migreaz preferenial n

36

corionul mucoasei intestinale, n timp ce imunoblastele splinei rmn n pulpa roie sau migreaz n mduva osoas dup imunizarea secundar.

MACROFAGELE Apar ca o populaie de celule heterogene, cu aspect structural i funcional particular fiecrei regiuni n parte. Ceea ce este comun este capacitatea de fagocitoz i originea lor din monocitele circulante. Ansamblul de macrofage din organism formeaz sistemul fagocitar mononuclear sau sitemul reticulohistiocitar. Sitemului fagocitar mononuclear i se descriu 3 compartimente: 1. Compartimentul medular 2. Compartimentul sanguin 3. Compartimentul tisular. ntre aceste trei compartimente exist un echilibru dinamic.. Compartimentul medular include toate celulele implicate n diferen ierea monocitelor sanguine. Ele alctuiesc seria monocitar-linia monocitopoetic. La nivelul mduvei exist: celula stem pluripotent care se diferniaz pe linie monocitar. Prima celul pe care o putem sesiza este monoblastul, apoi promonocitul, iar apoi monocitul care va trece n compartimentul tisular. Monoblastul are raportul nucleoplasmatic supraunitar, nucleul veziculos , bogat n eucromatin, cu nucleoli evideni(3-4). Citoplasma redus, cantitativ, slab bazofil, organite celulare reduse. Sufer dou, trei diviziuni mitotice consecutive i d natere promonocitului. Promonocitul , este o celul la care se gsesc n citoplasma slab bazofil, granule primare, azurofile, mieloperoxidazo specifice. Nucleul va prezenta o identaie, heterocromatina se ordoneaz, nucleolii dispar. Promonocitul se divide mitotic consecutiv de 2 ori i trece n monocit. Monocitul este ovalar, are un diametru de 20m, citoplasma abundent bazofil, cu granulaii azurofile dispuse n identaia nuclear.La nivelul nucleului heterocromatina se dispune alternativ cu eucromatina dnd aspect de " tabl de sah " , Nucleolii nu mai sunt vizibili. Monocitele circulante prec prin diapedez prin venulele postcapilare , ajung n esutul conjunctiv lax i reticulat unde se transform n macrofag.La nivelul esutului conjunctiv macrofagele sunt surprinse sub dou aspecte reversibile: -Macrofagul fix-histiocitul-celul de talie mic 10-15m, cu nucleu mic heterocromatic, mic, central, cu citoplasm puin acidofil. -Macrofagul mobil-histiomacrofagul-au talie mai mare 3om, au citoplasm mai abundent, acidofil, fin granulat la microscopul optic, nucleul este excentric, palid colorat cu nucleol vizibil. Fig.15

37

Fig 15. Macrofage i plasmocite n centrul germinativ al unui ganglion limfatic. Se evidentiaz citoplasma macrofagelor cu aspect granular neomogen. Nucleul eucromatic cu nucleol evident. Alturi de macrofage se observ i plasmocite cu aspectul caracteristic, citoplasma bazofil , nucleu excentric, precum i limfocite n repaus sau pe cale de blastizare. Col. tricroma 600x

38

Fig 16. Macrofag imagine de microscopie electronic 5000x Se observ nucleul eucromatic cu nucleol evident, citoplasma este ncarcat cu lizozomi secundari i cu numeroase vezicule de fagocitoz ; la partea de sus a imaginii ctre stnga se observ n citoplasm i corpi reziduali.

La microscopul elctronic, se remarc , nucleul excentric, bogat n eucromatin cu nucleol evident, citoplasma prezint organite comune, reticul endoplasmatic, mitocondrii, complex Golgi elemente de citoschelet mai bine reprezentate n pseudopodele emise de membrana celular. Compartimentul lizozomal este foarte bine reprezentat, se observ att lizozomi secundari, corpi reziduali, fagozomi sau pinozomi.Acetia din urm fiind responsabili de aspectul granular sau vacuolat al citoplasmei la microscopul optic.Fig.16

39

Se caracterizeaz prin mai multe proprieti: 1.Este o celul mobil care emite prelungiri numite pseudopode, sunt atrase prin chemotactism pozitiv, i se deplaseaz amoeboidal. 2.Sunt dotate cu o intens activitate de fagocitoz. Fagocitoza , proprietate fundamental a macrofagelor, este declanat de impactul suprafeei celulare cu un antigen de natur diferit. Fagocitoza poate fi specific i nespecific. Pentru realizarea fagocitozei specifice este important faptul c macrofagele recunosc particulele, pe care urmeaz s le nglobeze, proces denumit recunoatere fagocitar.. Prin recunoatere fagocitar , macrofagul difereniaz microorganismele sau resturile tisulare, de materialele endogene normale. Recunoatera fagocitar se realizeaz la dou niveluri: la nivel tisular, cu ajutorul opsoninelor, i la nivel celular , prin receptori de pe suprafaa macrofagelor. Opsoninele pot neimunospecifice ca fibronectina i imunospecifice ca anticorpii de tipul IgG, IgM , precum i cea de a treia fraciune a complementului.Ele nvelesc(opsonizeaz) antigenul , care apoi urmeaz s fie recunoscut de receptori din membrana macrofagului. Fagocitoza specific neimunologic sau neimunospecific este mediat de receptori pentru fibronectin.Opsonizarea se realizeaz cu fibronectin, care apoi va fi recunoscut de receptori de pe suprafaa macrofagelor.n esutul conjunctiv fibronectina mediaz fagocitarea de colagen denaturat, fibrin, fibrinogen, trombocite. Fagocitoza specific imunologic sau imunospecific, este mediat de receptori pentru IgG, IgM i fraciunea C3 a complementului. Opsonizarea se face cu aceste molecule care apoi vor fi recunoscute de receptorii de la suprafaa macrofagelor. Receptorii interacioneaz cu o anumit poriune din IgG, i anume cu fragmentul Fc , de aici deriv denumirea de receptor Fc pentru categoria de receptori care ataeaz complexele antigen- anticorp. Fagocitoza mediat de receptori apare numai la macrofagele tisulare denumire " de profesie". Ea trebuie deosebit de fagocitoza nespecific sau nemediat de receptori, n care unele materiale inerte sau chiar bacterii pot fi nglobate n absena factorilor de recunoatere. n aceste cazuri apar interaciuni nespecifice electrostatice sau hidrofobe , ntre aceste particule i suprafaa extern a macrofagelor. Un astfel de exemplu n reprezint macrofagele alveolare(celule prfoase) care nglobeaz din aerul inspirat unele particule inerte: crbunele ,siliciul,azbestul, etc. Fagocitoza se realizeaz n mai multe etape: A. ataarea particulei antigenice de membrana macrofagului. B. internalizarea particulei cu ajutorul pseudopodelor emise de membrana macrofagului i formarea

40

unui fagozom sau pinozom n funcie de consistena antigenului, care se deplaseaz n citoplasm cu ajutorul microfilamentelor. Fagozomul fuzioneaz apoi cu lizozomii primari formnd lizozomi secundari de tipul fagolizozomilor.La nivelul acestora particulele sunt degradate cu ajutorul hidrolazelor acide lizozomale. Ceea ce nu poate fi digerat, rmne depozitat n lizozomii secundari , care capt denumirea de corpi deni i care sunt exocitai.Limfokinele secretate de ctre limfocitul T , activitatea macrofagelor este crescut. Macrofagele sub aciunea limfokinelor , activate sunt capabile s nglobeze i s distrug orice tip de antigen fr recunoatere imunologic Este dotat cu o puternic activitate secretorie. Secret: -proteaze implicate n degradarea macromoleculelor matriciale: urokinaze activatoare de plasminogen,catepsine, glucuronidaze, elastaze colagenaze, . -molecule solubile cu rol de a modula activitatea altor celulecitochine, ex interleuchina 1, care va induce stimularea limfocitelorTH i mai departe a celulelor Tcitotox, a limfocitelor B, a limfocitelor NK . -interferonii , ,.Interferonul are aciune antitumoral i antiviral -factori de cretere a fibroblastelor, stimulnd formarea fibroblastelor i inducnd fibroza SISTEMUL FAGOCITAR MONONUCLEAR -Macrofagele libere diseminate n esutul conjunctiv lax (histiocitele i histiomacrofagele) -Macrofagele seroaselor peritoneale i pleurale -Macrofagele alveolare-celulele prfoase din alveolele pulmonare -Macrofagele din organele limfo i hematoformatoare -Macrofagele din SNC-microglia -Macrofagele fixe din ficat- celulele Kupffer -Macrofagele din piele -celulele Langherhans. -Macrofagele din esutul osos -osteoclastele

41

VARIETI DE ESUT CONJUNCTIV Clasificarea morfofuncional a esuturilor 1.esuturi conjunctive propriu-zise 1.esuturi conjunctive laxe-propriu-zise -speciale 2.esuturi conjunctive dense(fibroase)- semiorientate -orientate 2.esuturi conjunctive cu funcii speciale 1.esutul conjunctiv reticulat-esut mieloid -eusut limfoid 2.Tesutul conjunctiv elastic 3.esut conjunctiv adipos 4.esut mucoid 5.Sngele 6.eusuturi conjunctive scheletale a.esutul cartilaginos -cartilaj hialin -cartilaj elastic -fibrocartilajul b.esutul osos-lamelar haversian -lamelar trabecular c. Articulaiile esutul conjunctiv lax Este cea mai rspndit variatate de esut conjunctiv. Intr n alctuirea mucoasei organelor cavitare, nsoind epiteliul de nveli al mucoasei respective. Formeaz axul conjunctivo-vascular al seroaselor, fiind tapetat de jur mprejur de celule mezoteliale. Formeaz deasemenea stroma conjunctiv a organelor parenchimatoase, care face legtura ntre diferitele componente parenchimatoase ale organelor. Intr n alctuirea pereilor vasculari( adventicea vascular), precum i n partea superficial a dermului pielii denumit derm papilar. esutul conjunctiv lax este alctuit n proporii relativ egale din celule conjunctive, fibre i substan fundamental. Celulele conjuntive sunt reprezentate att de celule fixe ct i de celule libere.Celulele fixe sunt reprezentate de fibrocite, fibroblaste, chiar i miofibroblaste. Celule libere sunt reprezentate de mastocite, macrofage, plasmocite, precum i alte tipuri de celule reactive imune, i anume limfocite T,celule de tip citotoxic, limfocite NK. Celulele fixe sunt implicate n producerea i distrugerea matricei conjunctive, iar celule

42

mobile sunt implicate n reaciile imune locale.esutul conjunctiv lax este implicat i n procesele de regenerare tisular local. Fibrele conjunctive sunt de colagen, de reticulin i elastice.Fibrele de colagen dispuse n panglici se asociaz cu fibrele elastice, i n ansamblu se dispun sub form de reele care se ntretaie sub diferite unghiuri deschise. Fibrele de reticulin concur i ele la formarea reelei, dar n general ele nu se vd pe preparatele colorate n hemalaun eozin, datorit coninutului mare n resturi oligozaharidice ataate colagenului tip III din care sunt formate.Substana fundamental conine glicoproteine de adezivitate de tipul fibronectinei, lamininei, entactinei, i tenasceinei, deasemenea i glicozaminoglicani(GAG) i proteoglicani. esutul conjunctiv lax este foarte bine vascularizat, sunt n gene ral prezente att vase de calibru mare ct i vase de calibru mic: arteriole, capilare i venule postcapilare. Este i foarte bine inervat, conine fibre nervoase vasomotorii i fibre nervoase senzitive ce se termin sub form de terminaii libere sau incapsulate, alctuind extero-proprio- i visceroceptorii.Fig.17

Fig.17 Tesut conjunctiv dens semiorientat n dermul reticular i esut conjunctiv lax n dermul papilar Col H.E. impregnare argentic 400x

43

Unii histologi vorbesc de varieti de esut conjunctiv lax. i anume ar fi vorba de : -esut conjunctiv lax lamelar care intr n alctuirea fasciilor superficiale i profunde ale muschilor. Este format n principal din fibre de colagen i elastic care se dispun sub form de lamele suprapuse. -esut conjuctiv areolar( fenestrat), formeaz epiploonul; fibrele de colagen organizeaz areole sau caviti cu diametru i contur variabil. -esut conjunctiv spinocelular, prezent n corticala ovarului n jurul foliculilor ovarieni, i n structura endometrului n jurul glandelor uterine. Este alctuit predominant din fibroblaste cu caractere embrionare, cu un evident potenial de difereniere n alte celule. Au o capacitate deosebit , ca sub aciunea hormonilor ovarieni s se transforme n celule secretoare de hormoni androgeni, sau se pot transforma n celule predeciduale(deciduale), intrnd mai departe n structura plcii bazale din placent.Exist deasemenea o cantitate redus de substan fundamental, i un numr mic de fibre conjunctive reprezentate de fibrele de reticulin.

TESUTURI CONJUNCTIVE DENSE(FIBROASE) La nivelul lor predomin componenta fibrilar n detrimentul celulelor i a substanei fundamentale. Foarte bine reprezentate sunt fibrele de colagen. a.Tesuturi semiorientate(semimodelate) Intr n alctuirea capsulei organelor parenchimatoase, durei mater, scleroticii i corneii. Formeaz deasemenea partea profund a dermului pielii- dermul reticular,submucoasa organelor cavitare. Este alctuit predominant din fibre de colagen ce se organizeaz n mnunchiuri, fascicule. n cadrul fasciculelor, fibrele sunt aezate paralel i au un traseu ondulat. Fasciculele de colagen i fibrele elastice se dispun sub forma unei "psle". ntre fibrele de colagen se gsec celulele conjunctive, reprezentate de celule fixe(fibroblaste i fibrocite)i celule mobile( mastocite, macrofage, plasmocite, celule NK, limfocite T ,PMN) Substana fundamental , puin cantitativ, conine toate tipurile de molecule caracteristice unui esut conjunctiv.Fig 17 esutul conjunctiv dens semiorientat este bine vascularizat i inervat, fibrele nervoase fiind reprezentate de terminaii nervoase vasomotorii, ca i de fibre senzitive libere sau incapsulate cu rol de extero-proprio-i visceroceptori. Acest esut confer protecie mecanic, de suport, are grad mare de flexibilitate i extensibilitate(capsulele)

44

b. esuturi conjunctive dense orientate. Sunt reprezentate de aponevroz i tendonul Aponevroza. Este o formaiune inextensibil care asigur inseria muchilor lai pe os.Este format din una sau mai multe lamele conjunctive n funcie de tipul de aponevroz. Aponevroza poate fi: simpl(1-2 lamele conjunctive) i compus( 3-5 lamele conjunctive) O lamel conjunctiv este format din fibre de colagen groase dispuse paralel ntre ele, dar care se dispun perpendicular pe fibrele de colagen din lamela supra i subiacent. ntre fibrele de colagen apare o cantitate redus de substan fundamental i fibroblaste care nbrac forme foarte diferite n raport cu spaiul ocupat. Planurile conjunctive se ntretaie sub diferite unghiuri, cel mai adesea n unghi drept. Aponevroza este avascular, se hrnete prin difuziune, n schimb are numeroase terminaii senzitive.

Tendonul Este o formaiune inextensibil, care asigur fixarea muchilor lungi pe schelet. Tendonul este format din: -tendoane primare i -tendoane secundare Un tendon primar este alctuit dintr-un ansamblu de fibre de colagen care creeaz ntre ele spaii nguste,n care se gsesc celulele conjunctive, substan fundamental. Fibrele de colagen sunt paralele ntre ele , sunt groase i formeaz fascicule de grosimi diferite. ntre fascicule celule conjunctive reprezentate de fibroblaste , care au fost denumite i tenocite se aeaz ntr-un mod caracteristic, de monom bigeminat( celulele formeaz siraguri care la rndul lor se dispun paralel cu fibrele de colagen. Sunt dou cte dou, deoarece n urma diviziunii, datorit spaiilor mici nu se pot despri).n seciune longitudinala ele apar extrem de aplatizate, fcnd corp comun cu fibrele de colagen. Fig. 18 .n seciune transversal celule apar de form triunghiular, deoarece din corpul lor pornesc nite prelungiri, ca nite aripioare, formnd un unghi ce cuprinde fibra de colagen adiacent,de aceea aceste celule au fost denumite i "celule aliforme". Fig 19.Tendoanele primare au forme i mrimi diferite, de regul tendoanele mai mici se aeaz spre partea central a tendonului compus, iar cele mai mari spre peri ferie. Un tendon primar este nvelit la periferie de o atmosfer de esut conjunctiv lax foarte slab reprezentat denumit endotenon(endotendineum).

45

Fig 18. Tendon sectiune longitudinal H.E 400x .De remarcat bandeletele de fibre de colagen paralele ntre ele, i bigeminismul tenocitelor .

Tendonul secundar este un ansamblu de tendoane primare. Are diametru mai mare i este acoperit de un esut conjunctiv lax bine reprezentat, bogat vascularizat i inervat(corpusculi Pacini) , denumit peritenon(peritendineum). Un tendon compus(teriar) este format dintr-un numr variabil de tendoane secundare. Acesta este acoperit la suprafa de un esut conjunctiv dens semiordonat cu rol de capsul, ce este aderent de peritenon i care se numete epitenon (epitendineum), care separ tendonul de restul structurilor adiacente i este dublat de o teac -un strat de celule mezoteliale. ntre celulele mezoteliale i epitenon exist un spaiu redus , ocupat de esut conjunctiv lax. Celulel e mezoteliale mpreun cu esutul conjunctiv lax formeaz teaca sinovial.Bursa sinovial provine din dedublarea tecii mezoteliale. Aici se delimiteaz un spaiu ocupat de o cantitate redus de lichid sinovial bogat n ap proteine, ioni i GAG. Tendonul este un esut avascular, care se hrnete prin difuziune pe seama vaselor din peritenon. Regenerarea tendonului se face deasemenea pe seama peritenonului

46

Fig 19. Tendon sectiune transversal HEA.600x Se observ tendoanele primare separate de endotenonium, tendoanele secundare separate de peritenonium Aspectul tenocitelor pe seciune transversal este mai particular" celule cu aripi"

Jonciunea osteotendinoas.Tendonul se inser la nivelul diafizei oaselor lungi prin intermediul fibrelor de colagen care strbat periostul diafizei i ptrund n corticala diafizei. Aceste fibre se numesc fibrele Sharpey, modul de inserie al tendonului la nivelul diafizei.Inseria pe epifize(apofize) se face prin esut conjunctiv de alunecare denumit esut conjunctiv fibros hialin care este un esut conjunctiv intermediar ntre esutul conjunctiv dens ordonat i esutul cartilaginos hialin. Acest esut este alctuit din fibre de colagen grupate n fascicule. ntre fascicule exist substan fundamental calcificat i celule cartilaginoase, mari,globuloase cu nucleu excentric.Aspectul diferit de inserie al tendonului pe diafiz, sau epifiz e legat de modul diferit de formare a diafizei i epifizei.Jonciunea osteotendionoas este o zon activ de cretere a tendonului i osului. Jonciunea miotendinoas

47

La acest nivel epitenonul se continu cu epimisiumul,peritenonul se continu cu perimisiumul i endotenonul cu endomisiumul. Fibra muscular striat la acest nivel se termin sub forma unor prelungiri digitiforme.Pe versantul intern al membranei plasmatice se inser miofilamentele subiri ale ultimului sarcomer. Versantul extern este dublat de lamin bazal ,care mpreun cu membrana plasmatic formeaz sarcolema.Fibrele de colagen ce provin de la tendon se inser i ptrund n identaiile sarcolemei i se leag aderent la lamina bazal prin intermediul fibronectinei i lamininei prezente n cantitate mare la nivelul jonciunii. La acest nivel apar i fibre de reticulin care nce rcuiesc prelungirile digitiforme ale fibrei musculare, dispunndu-se ca nite inele n jurul jonciunii. Este o zon de maxim funcionalitate.Fig 2o

Fig 20. Jonctiune Miotendinoasa Col Giemsa 600X

48

ESUTURI CONJUNCTIVE MOI CU FUNCII SPECIALE Tesutul conjunctiv mucoid.Este prezent n cordonul ombilical i se numete gelatina lui Wharton.Este alctuit, predominant din substan fundamental bogat n acid hialuronic, avnd o consistent de gel poros puternic hidratat. Are puine celule cu caractere embrionare, fibroblaste i celule mezenchimale i puine fibre de colagen Fig 21. esutul elastic Se gsete n structura ligamentelor elastice, ligamente reduse la om, prezente la animale n regiunea cervical.( ligamentele galbene), n ligamentele fibroase ce solidarizeaz articulaiile i n ligamentul suspensor al penisului. n structura acestui esut se gsesc predominant fibre elastice, puin substan fundamental, i celule de tip fibroblaste. esutul reticulat Se gsete n structura mduvei roii hematogene formnd esutul mieloid ca i n structura organelor limfoide formnd esutul limfoid.Fig 22 esutul are n structura lui un dublu reticul, format din celule conjunctive (citoreticul)dublat de o reea format din fibre de reticulin(fibroreticul). Celulele conjunctive ce particip la formarea reelei sunt de mai multe tipuri: -celule reticulare fibroblastoide -celule reticulare histioide -celule reticulare interdigitate -celule reticulare dendritice foliculare Celulele reticulare fibroblastoide sunt fibroblastele din esutul conjunctiv propriu-zis. Se deosebesc prin faptul , c au prelungiri desprinse uniform de pe suprafaa celular, prelungiri care se dispun n toate direciile i stabilesc contacte joncionale de tip Gap ntre celule. Citoplasma celular este redus cantitativ, slab bazofil, nucleul este veziculos, adesea nucleolat, eucromatic. Aceste celule au aceeai origine ca i fibroblastele, se difereniaz local din celula embrionar mezenchimal. Au rol n producerea matricei care are n principal fibre de reticulin.

49

Fig 27 Cordon ombilical H.E. 400 Gelatina Warthon- esut conjunctiv mucoid

Fig 22 Celule reticulare n corticala unui ganglion limfatic HE 400x

50

Celulele reticulare histioide sunt histiocitele din esutul conjunctiv propriu-zis. Sunt celule ovalare cu prelungiri, cu citoplasma acidofil.i nucleu mediu activ. Pot fi fixe i mobile. Se ntlnesc alctuind stratul marginal(celule adventiciale) de-alungul formaiunilor vasculare care traverseaz parenchimul organelor limfoide. Fac parte din sistemul fagocitar mononuclear. Celulele reticulare interdigitate au originea n celulele stem pluripotente i sunt localizate doar n ariile timodependente ale organelor limfoide periferice sau arii ocupate preferenial de limfocitele T. Celulele reticulare dendritice foliculare se gsesc n ariile timoindependente ale organelor limfoide secundare, zonele ocupate predominant de limfocitele B i n numr redus de limfocitele TH. Ultimele dou tipuri de celule reticulare sunt greu de evideniat la microscopul optic, ele se pun n eviden prin teste de imunofluorescent i la microscopul electronic.Celulele interdigitate au un nucleu mare eucromatic, identat cu form neregulat, citoplasma abundent, clar la microscopul optic, iar la cel electronic , prezint organite celulare reduse i numeroase granule de secreie. Celulele dendritice foliculare trimit prelungiri mai mari dect celulele interdigitate, ocup centrul foliculilor limfatici. La microscopul electronic , n citoplasm se evideniaz granule de secretie. Stabilesc jonciuni de tip desmozom cu prelungirile invecinate. Membrana plasmatic are o activitate enzimatic ATP-azic. Din punct de vedere funcional ultimele dou categorii de celule reticulare sunt celule prezentatoare de antigen. Ele recunosc antigenul prin receptori Fc, pe care l nglobeaz sub form de endozom prin endocitoz. Antigenul scap din endozom i la nivelul citoplasmei se leag de nite molecule de clasa a II a . Complexul antigen -clasa II a este exocitat pe suprafaa celulelor i este recepionat de limfocitele TH care stimuleaz limfocitele B sau celulele Tcitotoxice.Sunt considerate celule imune accesorii, fiind implicate n calea aferent a rspunsului imun mediat umoral.

51

ESUTUL ADIPOS esutul adipos sau gras este alctuit predominant din celule grase(adipocite sau lipocite), celule care se organizeaz n lobuli sau paniculi adipoi, separai ntre ei de septuri de esut conjunctiv lax. La nivelul septurilor apar formaiuni vasculare i fibre nervoase. Alturi de celule n esutul adipos exist puin substan fundamental i puine fibre de reticulin. Originea celulei adipoase o reprezint celula embrionar mezenchimal derivat din mezodermul embrionar, cu numeroase prelungiri i care din sptmna a 5a de via intrauterin se transform n adipoblast care are un nucleu central veziculos, prelungiri puine i numeroase picturi lipidice n citoplasm, reticul endoplasmatic rugos, mitocondrii, i foarte bine reprezentat activitatea enzimatic - naftilacetatesteraza. Adipoblastul se transform n preadipocit care va matura apoi la adipocit alb, brun ,adipocit hepatic( celula lui ITO) care se va localiza n spaiile dintre hepatocite i sinusurile intralobulare. Celula lui ITO are rol n sinteza i stocarea vitaminei A. De menionat c adipocitele brune nu vor da natere adipocitelor albe, prin involuie. Numrul celulelor adipoase crete la nou nscut ,pn la 2 ani de viat, cind procesul de cretere i difereniere este controlat de hormonii de cretere:STH, hormonii tiroidieni, insulina, citochine, factori de cretere de tip insulinic. O alt cretere a numrului de adipocite se constat la pubertate, proces controlat de hormonii sexuali, estrogenii i androgenii. Cantitatea de esut adipos ca i distribuia grsimilor este diferit la sexul masculin fa de sexul feminin. Se vorbete chiar de un adipocit ginoid(sexul feminin) i un adipocit android(sexul masculin).La sexul masculin esutul adipos reprezint pn la pubertate cca 15% din greutatea corpului, iar la pubertate 25%. La sexul feminin ,pn la pubertate, esutul adipos reprezint 25%, iar la pubertate 40%. Celulele adipoase prin rolul pe care l au particip la conversia androgenilor n estrogeni la sexul feminin. Femeile cu un esut adipos mai bine reprezentat, au un exces de estrogeni, (hiperfoliculinie), i au o predispozitie ctre neoplasmul mamar, sau endometrial.O cretere exagerat a numrului de adipocite este prezent n obezitatea hiperplastic.Dar exist i o obezitate hipertrofic, n care creterea n greutate se face prin hipertrofierea celulelor adipoase. Obezitatea hiperplastic are cauz genetic, iar cea hipertrofic este indus de aport caloric exagerat. n caz de inaniie ( post prelungit), adipocitele pot suferi o transformare seroas reversibil. Celulele adipoase i pierd incluziunile lipidice, capt prelungiri asemnndu-se cu fibroblastele.

52

esutul adipos alb(unilocular) esut foarte bine reprezentat la adult, la nivelul hipodermului, n jurul organelor, la nivelul mezenterului. Este alctuit din adipocite albe, organizate n paniculi adipoi separai de septuri conjunctive, care aduc cu ele n esut vase de snge, i terminaii colinergice i adrenergice. Vascularizaia este foarte bogat, se apreciaz un capilar pentru fiecare adipocit.Adipocitele albe au dimensiuni ntre 5o-12o microni, form rotund(izolat) sau poligonal (n esut prin compresiune reciproc), nucleul turtit eucromatic dispus periferic, nconjurat de puin citoplasm dispus i ea periferic. Toat celula este ocupat de o pictur lipidic (adipocit unilocular)unic care se dizolv pe parcursul etapei de clarificare a preparatului microscopic permanent n hidrocarburile benzenice, astfel nct celula apare ca lipsit de coninut -imagine de "inel cu pecete".Fig 23.

Fig. 23 esut adipos alb H.E 600x Se remarc aspectul caracteristic de celul cu aspectul de inel cu pecete. Celulele sunt organizate n paniculi adipoi separai de septuri conjunctive de esut conjunctiv lax .De asemenea se observ un numr mare de vase de snge.

53

Pictura lipidic se poate evidenia prin coloraii pentru lipide neutre nespecifice , n rou portocaliucu Sudan III, sau n rou aprins cu Sudan Scharlach. La microscopul electronic, n celul se remarc numeroase organite implicate n sinteza de lipide:mitocondrii cu criste tubulare, REN, ;incluziunea lipidic unica nu este delimitat de endomembran , este mare i poate fi nconjurat de alte mici incluziuni periferice. Celula adipoas prezint deasemenea un citoschelet cortical foarte bine reprezentat. Membrana plasmatic a adipocitului unilocular este dublat de o lamin bazal nconjurat la rndul ei de o reea abundent de fibre de reticulin. Aceast lamin bazal este comun pentru mai multe lipocite. n strns legtur cu membrana bazal se gsesc capilare sanguine pentru fiecare adipocit. Terminaiile nervoase att colinergice ct i adrenergice se opresc la nivelul laminei bazale, mediatorul ajungnd la adipocit prin difuziune, iar efectul se va exercita prin intermediul receptorilor membranari i nucleari. Celula adipoas este implicat n special n metabolismul lipidic. Celula adipoas prin micropinocitoz nglobeaz acizi grai provenii din sngele capilar, acizi care legati de albumine difuzeaz prin endoteliul capilar, membrana bazal a capilarului, membrana bazala a adipocitului i prin endocitoz sunt nglobai n adipocit. La nivelul respectiv, acizii grai se separ de albumine, dup care 3 molecule de acizi grai se condenseaz cu o molecul de glicerolformnd triacilglicerolul(TG) care este inglobat n incluziune. Acizii grai provin din 2 surse majore: exogen (alimentaie)i endogen ( provenii din ficat). Acizii grai din surs exogen se absorb n intestin, sub form de chilomicroni care se formeaz la nivelul enterocitului. Chilomicronii sunt molecule mari de 3 microni diametru cu o zon central format din TG i colesterol esterificat i o zon periferic format din apoproteine, FL, colesterol liber. Ptrund n vilozitate la nivelul chiliferului central, ajungnd n circulaia limfatic ,apoi n circulaia sanguin , iar la nivelul capilarelor chilomicronii sunt scindai de o lipoproteinlipaz secretat de celula endotelial. Acizii grai eliberati , rmn legai de albumine i n acest mod ajung prin difuziune n celula hepatic . Dac sursa de acizi grai este ficatul, atunci acizii grai sunt descrcai de ficat sub form de lipoproteine cu densitate mic ,care sunt scindate de lipoproteinlipaz cu eliberarea acizilor grai legai de albumine. Celula adipoas poate s-i sintetizeze de novo acizi grai utiliznd glucoza, funcia lipogenetic depinznd de insulin, insulin care crete permeabilitatea celulei adipoase pentru glucoz i stimuleaz lipoproteinlipaza.

54

Lipidele sub form de incluziuni sunt depozitate pentru un timp variabil, de la cteva ore pn la 3o zile, dup care sunt mobilizate prin aciunea hormonilor lipolitici.Scindarea TG cu eliberarea de acizi grai reprezint funcia lipolitic dependent de o lipaz hormonosensibil la neurotransmitori. esutul adipos brun(multilocular) Este prezent la ft i nou nscut n primele dou luni de via.Reprezint 2-5% din greutatea corporeal. Este dispus subcutanat n regiunea cervical, inghinal, retrosimfizar i la nivelul mediastinului . esutul adipos brun are macroscopic acest culoare , acesta fiind motivul denumirii lui. Aceast culoare particular este datorat n primul rnd unui pigment lipocrom existent n citoplasma celulelor adipoase, unei vascularizaii mai bogate dect n cazul esutului adipos alb(cca 2-3 capilare per adipocit)i citocromului c prezent pe cristele unor mitocondrii mult mai numeroase dect n cealalt varietate de esut adipos. Tesutul adipos brun este alctuit din adipocite brune, care formeaz paniculi adipoi separai prin septuri conjunctive, care conin vase de snge i terminaii nervoase adrenergice. Dispoziia celulelor are un aspect epitelioid. nafar de celule , esutul mai conine substan fundamental puin i fibre de reticulin. Adipocitul brun este o celul de talie medie , 30 microni, poligonal, cu nucleul dispus central i cu o citoplasm care la microscopul optic apare intens vacuolat, spongioas, motiv pentru care acestor celule li se spune i spongiocite.Acest aspect este datorat, incluziunilor lipidice multiple, care s-au dizolvat pe parcursul etapelor de obtinere al preparatului microscopic permanent inclus la parafin.Fig 24.

55

Fig 24. esut adipos brun H.E. ob 600x La microscopul electronic adipocitul prezint n citoplasm mitocondrii cu criste tubulare i septate, REN i numeroase picturi lipidice nedelimitate de endomembrane. Membrana celular este dublat de o lamin bazal proprie fiecrui adipocit, care la rndul ei este dublat de o reea fibroreticular. Terminatiile nervoase adrenergice vin n contact direct cu membrana adipocitului, strpungnd lamina bazal. Funcia acestui esut este predominant termogenetic. Cnd temperatura organismului scade, din terminaia adrenergic se descarc norepinefrina, care se leag imediat de receptorul ei adrene rgic stimulnd apoi adenilatciclaza. Aceasta va duce la formarea AMP c, care la rndul lui stimuleaz proteinkinazele cu activarea lipazei. Lipaza va determina ca acizii grai desfcui din forma de depozit , s fie ari n ciclul Krebs. n acelai timp la nivelul ribozomilor este blocat sinteza de ATP sintetaz, iar la nivel mitocondrial este decuplat oxidarea de fosforilare. n acest fel nu se mai formeaz ATP, i ntreaga energie este disipat sub form de cldur.