Spectrometria sau spectrofotometria este o metod care se ocup cu msurarea

absorbiei de energie a substanelor n funcie de lungimea de und a radiaiei.

Spectrofotometria de absorbie este la ora actual una din metodele cele mai
utilizate pentru identificarea, determinarea cantitativ a unui numr extrem de mare
de substante medicamentoase din cele mai diverse clase. Metoda se caracterizeaz
prin sensibilitate, simplicitate si rapiditate, impunndu-se mai ales specificul ei.
Spectrofotometria n ultraviolet i vizibil este o metod curent de investigaie n
controlul medicamentelor cu aplicaii pentru : cunoaterea constituiei moleculare a
unor substane, bazat pe evidenierea unor grupri cromofore sau a unor gupri
care modific benzile de absorbie atribuite unor cromofori; identificarea si
controlul puritii substanelor medicamentoase; dozarea substanelor
medicamentoase ca atare i din amestecuri; studiul echilibrelor n soluii, formarea
combinaiilor complexe, determinarea constantelor de ionizare, constantelor de
stabilitate i instabilitate, ordinul unei reacii, gradul de polimerizare etc.
n vederea identificrii substanelor medicamentoase pure se recomand
compararea spectrului n UV al substanei de determinat cu cel obinut n aceleai
condiii experimentale pentru aceeai substana n stare pur sau se indic cu
precizie lungimile de und la care se nregistreaz maximile i minimile de
absorbie ale spectrului obinut ntr-un anumit solvent si ntr-o anumit
concentraie, precizndu-se uneori i valoarea extinciilor (E), a coeficienilor i
valoarea coeficienilor de la extincie molar () sau a coeficienilor de extincie
specific E11% cm, la 1 max.
n FS, ed. XI, snt prevzute diferite variante spectrofotometrice de determinare
cantitativ a substanelor medicamentoase: determinarea cantitativ dup
coeficientul de extincie ( E11% cm), spectrofotometria diferenial .a.
Noi posibiliti n identificarea si determinarea cantitativ a substanelor
medicamentoase deschide utilizarea metodei de spectrofotometrie derivat n UV.
Metoda fotocolorimetric se utilizeaza pe larg n analiza farmaceutic. Spre
deosebire de spectrofotometria n UV, metoda fotocolorimetric prevede msurarea
densitii optice a soluiei colorate cu ajutorul fotocolorimetrului.
FS, ed. XI, prevede determinarea cantitativ fotocolorimetric a nitroglicerinei,
furadoninei, furazolidonei, riboflavinei, acidului folic, unor glicozide cardiotonice
etc.
Spectrofotometria n infrarou se caracterizeaz printr-o informaie mai
multilateral despre structura chimica a substanei medicamentoase. nterpretarea

unui spectru n IR reprezint un mijloc deosebit de important de determinare a

structurii unei substane, a degradrii ei chimice, a identitii, puritii i evalurii
ei cantitative.
Spectru n IR reprezint o proprietate fizic specific a moleculei, care nu se
repet la o alt molecul orict de mult s-ar asemna strucurile lor, dar care este
identic pentru substane cu structuri identice. Daca doi cumpui identici prezint
n spectrele lor diferene ale poziiei i in intensitii relative a benzilor,
farmacopeile recomanda recristalizarea ambilor compui din acelai solvent i
repetarea determinrii pe probe n stare solid, sau dizolvarea probelor n aceleai
condiii. n acest fel este posibil evidenierea formelor cristaline (polimorfe)
diferite ale acelorai substane.
Spectru IR asigur o identificare mai precis de ct prin alte metode. Numarul
benzilor fundamentale, armonice i de combinaie complic spectrul, dar ofer
garanii suplimentare de identificare. n practic se ntlnesc dou cazuri diferite:
identificarea substanelor cu strcturi necunoscute i celor cu structuri cunoscute.
Spectrofotometria n IR ne permite identificarea omologilor aceleai clase care
prin alte metode nu se pot diferenia ( barbituricile, xantine, fenotiazine, sulfamide,
peniciline etc.), a enantiomerilor i sterioizomerilor. Principiile care stau la baza
determinrii in IR snt aceleai ca i n UV. n IR avem posibilitatea de a lege
dintremultiple benzi care alctuiesc spectrul pe cea mai intes, respectiv pe cea
care se refer la o anumit parte din molecul, de obicei la gruparea responsabil
de activitatea biologic. Aplicarea Legii lui Lambert-Berr, corelat cu cunoaterea
exact a coeficientului de extincie al unei benzi caracteristice, permite determinri
exacte de concentraie sau a gradului de puritate a unui compus.
Calculul concentraiilor se realizeaz fie prin interpolarea extinciilor pe curbele
de etalonare, fie prin directa comparare a absorbiei cu cea a standartului utilizat, al
substanelor integrate corespunztor curbelor de absorbie sau a nalimii vrfurilor.

Spectrofotometria este o ramur a spectroscopiei care se ocup cu msurarea

cantitativ a proprietilor de reflexie sau de transmisie ale unui material
(substan) n funcie de lungimea de und. Termenul de spectrofotometrie este
specific msurtorilor n care este utilizat radiaia electromagnetic din spectrul
infrarou (IR), ultraviolet (UV), ea fcnd astfel parte din spectroscopia
electromagnetic. n practic, metoda se bazeaz pe proprietatea de absorbie sau
de transmisie a compuilor chimici la diverse lungimi de und. Astfel,
spectrofotometria este folosit att ca metod calitativ pentru identificarea
prezenei unei substane ntr-o soluie, ct i cantitativ pentru identificarea

concentraiei unei substane dintr-o soluie. De asemenea, metoda poate fi utilizat

pentru determinarea constantei de echilibru a unei soluii. ntr-o reacie chimic,
echilibrul chimic este starea n care ambii reactani i produi sunt prezeni n
concentraii care nu mai manifest tendina de modificare n timp. De obicei,
aceast stare se atinge cnd reacia direct are loc cu aceeai rat ca i reacia
invers. Ratele de conversie a reaciei directe i a celei inverse sunt diferite de zero
dar, fiind egale, nu exist modificri nete ale concentraiilor reactantului i
produsului. Acest proces se numete echilibru dinamic. Din punct de vedere
spectrofotometric, determinarea concentraiilor reactanilor i produilor ntr-o
astfel de situaie, presupune msurarea luminii transmise de ctre soluie. Orice
compus chimic absoarbe, transmite sau reflect lumin (radiaie electromagnetic)
n cadrul unui interval de lungimi de und. Aparatele destinate acestor msurtori
se numesc spectrofotometre.
Spectrofotometrul este un instrument capabil s msoare cu precizie cantitatea de
fotoni (intensitatea luminii) absorbit de trecerea lor printr-o prob (soluie).
Astfel, se poate determina indirect i cantitatea de substan (concentraia). n
funcie de spectrul lungimilor de und pe care le emite sursa de lumin,
spectrofotometria are dou variante: UV utilizeaz lungimi de und cuprinse
ntre 185 400 nm (UV). IR utilizeaz lungimi de und cuprinse ntre 750 nm
1000 m.
Spectrofotometria UV este utilizat cel mai frecvent n chimia analitic
pentru determinarea cantitativ:
1) A soluiilor ce conin cationi ai metalelor tranziionale, majoritatea fiind colorate
(absorb radiaii electromagnetice din spectrul vizibil) datorit electronilor de pe
orbitalii de tip d care pot fi uor excitai fiind astfel determinai s execut tranziii
cuantice. Culoarea soluiilor ce conin astfel de cationi poate fi ns afectat de
prezena unor anioni sau liganzi. De ex. soluia de CuSO4 de culoare albastr
deschis poate fi intensificat cu ajutorul amoniacului care poate s schimbe
maximul de absorbie.
2) A compuilor organici, n special aceia care manifest un nalt grad de conjugare
(sisteme cu orbitali p n care alterneaz legturi simple cu cele multiple i care, n
general, scad energia total a moleculei, crescndu-i astfel stabilitatea). De ex.
ADN, ARN i proteinele absorb radiaia electromagnetic mai ales din spectrul UV
i foarte rar din cel vizibil. Pentru aceste determinri, ca solvent, se folosete de
cele mai multe ori etanolul pentru c absoarbe mult mai puin dect apa
Principiul spectrofotometriei UV se bazeaz pe legea Lambert-Beer. Aceast lege
prevede c cantitatea de lumin absorbit de o soluie este expresia unei funcii
exponeniale a concentraiei i a lungimii de und n raport cu acea soluie.
Calibrarea metodei pentru o anumit substan implic dou etape distincte:

1.

Se determin maximul de absorbie al substanei respective fcnd un

scanning a lungimilor de und n concordan cu culoarea acesteia. Dac
substana este incolor, se identific o reacie de culoare specific acesteia i se
analizeaz produsul colorat.

2.

Se determin relaia dintre concentraia substanei luat n analiz (sau a

produsului rezultat dac e vorba de o reacie de culoare) i absorbie. Aceast
determinare se face la lungimea de und ce corespunde maximului de absorbie
determinat la etapa 1.

OBSERVAII
Identificarea lungimii de und ce manifest absorbie maxim trebuie realizat pe o
prob a crei concentraie nu determin la aceast lungime de und o absorbie mai
mare de 1. Valorile convenabile pentru absorbie sunt situate ntre 0,1 i 1. Peste
aceast valoare efectul de umbrire al particulelor poate modifica corectitudinea
rezultatelor. Aceast situaie implic concentraii prea mari n care particulele
componente ale soluiei, fiind prea apropiate, se pot afla una n spatele celeilalte i
nu contribuie la absorbie. De aceea, pentru o substan oarecare, identificarea
acestei concentraii se face prin ncercri.