Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
DETERMINAREA
COEFICIENTULUI
DE
TENSIUNE
SUPERFICIAL A LICHIDELOR
Noiuni teoretice
Stratul de la suprafaa unui lichid care are grosimea razei sferei de aciune
molecular, 5.10-9m, se numete strat superficial. Toate moleculele cuprinse n acest
strat vor fi atrase spre interiorul lichidului datorit faptului c forele de atracie
(coeziune) exercitate de moleculele din interior (din lichid) sunt mai mari dect cele
exercitate de moleculele de gaz n contact cu suprafaa lichidului. Din cauz c
moleculele acestui strat sunt atrase spre interior, stratul superficial va exercita asupra
lichidului o presiune. Moleculele din stratul superficial au o energie potenial mai
mare dect cele din interior. Pe de alt parte, se tie c n general, sistemele se gsesc
n echilibru cnd energia lor potenial devine minim. De aici rezult c starea de
echilibru se realizeaz cnd exist cele mai puine molecule la suprafa, de unde
rezult tendina de micorare a suprafeei libere a lichidului.
Forele tangeniale care iau natere n stratul superficial i care micoreaz
suprafaa liber a lichidului poart numele de tensiune superficial. Din cauza
existenei tensiunii superficiale suprafaa liber a unui lichid ntr-un vas este plan,
iar picturile de lichid n cdere adopt forma sferic. Fora de tensiune superficial
este dat de relaia:
F = l , unde
energie
F d
ld
sup rafata
[N/m; J/m2 ]
superficial va avea suprafaa minim posibil, iar pe aceast suprafa se vor fixa
acele molecule din soluie care reduc coeficientul de tensiune superficial, el lund
valoarea minim posibil.
Substanele organice coninnd n molecule att grupuri polare, hidrofile, ct i
lanuri hidrocarbonate, hidrofobe, au tendina de a se acumula la suprafaa soluiei,
prin aceast energie liber a sistemului reducndu-se. Explicaia rezid n aceea c
lanurile hidrofobe vor fi excluse din faza apoas pe cnd gruprile hidrofile vor
rmne incluse n stratul superficial al fazei apoase. Are loc, deci, un fenomen de
absorbie, moleculele rmnnd fixate la suprafaa soluiei. Astfel, coninutul de
molecule de acest tip este mai mare n stratul superficial dect n straturile profunde
ale soluiei. Scderea energiei libere a sistemului prin acest fenomen se traduce prin
reducerea energiei libere pe unitatea de suprafa a stratului superficial, adic a
coeficientului de tensiune superficial. Astfel de substane, care se absorb n stratul
superficial al soluiilor i duc la scderea coeficientului de tensiune superficial, se
numesc tensioactive. Cantitatea de substan tensioactiv absorbit pe stratul
superficial este o funcie cresctoare de concentraia soluiei. Mrind progresiv
concetraia soluiei,cantitatea de substan absorbit va crete la rndul ei,
determinnd scderea progresiv a coeficientului de tensiune superficial. Aceast
scdere continu pn nc se mai pot absorbi noi molecule i nceteaz n momentul
2
Deoarece G = mg i F = 2 r atunci:
m g = 2 r , unde m = masa picturii, g = acceleraia gravitaional.
(1)
v
n
2r
(2)
(3)
(4)
na d
n da
(5)
= f(c)
Concentraie
d
[g/c
m3 ]
(x103
Kg/
m3)
Nr
de
pic
tu
ri
n
Nr.mediu
de
picturi
[dyn/cm]
(x10-3 N/m3)
v
S
l
F l
S v
r4 P t
8l
unde Q este volumul de lichid care se scurge n timpul t, r este raza tubului capilar, l
este lungimea capilarului i P presiunea de curgere. Dac tubul capilar se gsete n
poziie vertical presiunea de curgere P este egal cu presiunea hidrostatic a
coloanei de lichid n tub. Notnd nlimea coloanei de lichid cu h, densitatea
lichidului, , i acceleraia gravitaional g, vom avea urmtoarea relaie:
P=gh
ntroducnd n relaia de mai sus, avem
Q
r 4h g t
8 l
r 4 hgt
8l Q
r 4 a gta
8l Q
a a ta
i a
t
a ta
Mod de lucru
Aparatul se spal bine i se usuc la trompa de vid. Se introduce cu o pipet o
cantitate determinat de lichid n rezervorul vscozimetrului, aceeai cantitate pentru
toate soluiile. Se aspir ncet lichidul n rezervorul situat la partea superioar a
tubului capilar. Se las lichidul s se scurg determinndu-se cu ajutorul unui
cronometru timpul necesar scurgerii lichidului ntre cele dou repere. Pentru aceeai
soluie se efectueaz mai multe determinri, i se va face media rezultatelor care se
trec n tabelul urmtor:
Vscozimetrul Oswald
Nr.
[g/cm3
Solu
ie
Timp
de
scurg
ere
Timp
medi
u de
scurg
ere
cP(x10-3 Ns/m2)
1.
2.
Detreminarea vscozitii sngelui are o deosebit importan medical deoarece
vscozitatea sngelui variaz dup cum urmeaz :
- snge total, de la 3,5 pna la 5,4 10 -3 N s/m
- valori medii :- femei 4,510 Ns/ m
-brbai : 5,010 N s/ m
9
10
3. DENSIMETRIE
Noiuni teoretice
Densitatea este o caracteristic fizic proprie fiecrei substane. Se definete
densitatea absolut ca fiind masa unitii de volum, adic raportul d = m/v exprimat
n kg/m3. Dac n locul masei din formula de mai sus se introduce greutatea
substanei, care variaz n raport cu acceleraia gravitaional (G = mg ), atunci se
poate defini noiunea de greutate specific ( = mg/V).
Se mai definete densitate relativ ca fiind raportul dintre densitatea absolut a
unei substane i densitatea absolut a apei distilate la + 4 oC (cnd este maxim ) sau
la o alt temperatur dat:
dr =
d
V
m
m
=
.
=
, care este o mrime adimensional. Menionm c masa
da
m
m
V
a
a
toC
21,40
19,30
13,59
7,86
2,71
2,00
1,53
O2 lichid
ghea
potasiu
petrol
alcool
lemn stejar
H2 lichid
1,14
0,92
0,86
0,80
0,79
0,70
0,07
Conform principiului lui Arhimede, un corp scufundat ntr-un lichid este mpins
de sus n jos cu o for egal cu greutatea volumului de lichid dezlocuit. Cum fiecare
lichid are o anumit densitate nseamn c prin scufundarea aceluiai corp n diferite
11
lichide, dei se dislocuiesc volume egale, acestea vor avea greuti diferite, ceea ce
genereaz fore de mpingere diferite. Pe acest raionament se bazeaz determinarea
densitii lichidelor cu ajutorul densimetrelor (areometrelor), balanei MohrWestphal, metoda Van Slyke pentru densitatea sngelui etc.
3.1
m = m1 m0
v = (ma m0 )/ da
d = m/v =( ml m0 )/ (ma m0 ) da
b) La solide:
Volumul unui corp solid se poate afla indirect prin msurarea masei de ap
dislocuite de ctre acel corp. Astfel vom introduce i notaiile:
ms = masa corpului studiat;
mas = masa picnometrului care conine corpul studiat i n rest este umplut cu ap
distilat;
vs = volumul corpului studiat ( egal cu volumul apei dislocuite de ctre corpul
studiat, la introducerea n picnometru );
ds = densitatea corpului studiat.
deci
vs = (ma + ms mas )/ da
Mod de lucru
Dup ce se spal bine picnometrul i se usuc, se cntrete cu precizie masa sa
mpreun cu dopul (m0). Se umple apoi cu ap distilat astfel nct la punerea dopului
apa s refuleze prin capilara acestuia iar n interior s nu rmn bule de aer. Se
terge exteriorul picnometrului i dopul astfel nct capilara acestuia s rmn plin
cu lichid. Cntrind acum picnometrul cu ap obinem valoarea ma. Se procedeaz
identic i pentru aflarea celorlalte valori necesar calculului (masa picnometrului cu
13
Substan
1.
lichid
2.
solid
m0
ma
ml
ms
mas
dl
ds
103 kg/m3
103 kg/m3
-
14
15
+15oC, iar densitatea indicat este densitatea relativ n raport cu densitatea apei la
+4oC. Formula cu ajutorul creia putem converti densitatea relativ este:
t1
t1
t1
dt = dT + dT
unde:
t1
dt - densitatea cutat n baza t i la temperatura de lucru t1.
t1
temperatura
15
dorim s o convertim n baza d420 , deci d420 = 1,6740 0,000988 1,6740 = 1,6724.
n practica laboratorului medical se utilizeaz n mod frecvent truse de densimetrie
care permit determinri de densitate n intervale destul de largi.
-Alcoolmetrul, este un densimetru etalonat n baza d1515 i ale crui gradaii indic
concentraia n procente de volum ( % V ) a soluiei alcoolice respective, care se mai
numete i trie real. Cum ns nu se lucreaz ntotdeauna la temperatura 15 oC
nseamn ca vom citi n realitate o trie aparent corespunztoare temperaturii la
care lucrm. Deci va trebui s trecem de la tria aparent la tria real, lucru
realizabil cu ajutorul tabelelor. Cunoscnd tria real care nu este altceva dect
concentraia corectat n procente de volum ( % V ), cu ajutorul tabelelor o putem
converti n procente de greutate ( % G ) sau n g/l sau putem pur i simplu aflm
densitatea d1515 a soluiei alcoolice .
- Urodensimetrul este un areometru special cu scala mult redus, tija fiind
gradat doar ntre 1,000 1,050. Este utilizat frecvent n clinic pentru determinarea
densitii urinei n cadrul explorrilor funciunii aparatului renal. Desigur, dac este
nevoie se fac coreciile de temperatur necesare ( se adaug o unitate densimetric
pentru o variaie a temperaturii cu 3,3oC dac temperatura depete +15oC ).
16
Mod de lucru
Indiferent cu care tip de areometru vom lucra,
vom proceda n acelai fel. ntr-un cilindru de sticl C, se
introduce soluia de cercetat ,S , n suficient cantitate pentru
ca areometrul s poat pluti liber ( acesta se introduce n
soluie cu mult atenie pentru a nu-i sparge partea inferioar
prin lovire de fundul vasului, unde pentru orice
eventualitate se pune si vat ). n momentul cnd areometrul
se afl n echilibru perfect, fr ating fundul sau pereii
cilindrului C, se citete gradaia g pn la care s-a cufundat
n lichid precum i temperatura nregistrat pe termometrul T.
Dup ntrebuinare areometrele se terg i se nchid n cutiile
lor protectoare. Citirea gr gradaiei se face n dreptul prii inferioare a meniscului.
t1
dT
t1
o
t 1C
10
-6
dt
Tria
Tria
apar.
real.
G%
mas.
sau % V g/l
densimetrie
alcoolmetrice
urodensimetrice
17
4. METODE CALORIMETRICE
4.1. DETERMINAREA CLDURII SPECIFICE A UNUI CORP SOLID
Principiu: Calorimetria este partea termodinamicii care se ocup cu msurarea
cantitilor de cldur. Cldura este o form de energie care se datorete agitaiei
termice i se msoar n jouli (J) sau calorii. O calorie este cantitatea de cldur
necesar unui gram de ap distilat pentru a-i ridica temperatura cu un grad, de la
19,5 0 la 20,50 C. Unei calorii i corespunde 4.18 jouli n sistemul SI. Cantitatea de
cldur primit de un corp, depinde de masa m a lui, de natura corpului, caracterizat
printr-o constant caracteristic, notat cu c, i de diferena de temperatur t
adic:
Q = m .c. t
De aici : c =
Q
;
mt
(1)
dac m = 1 i t = 10 obinem, c = Q.
Deci cldur specific este cantitatea de cldur necesar unitii de mas dintr-un
corp pentru a-i ridica temperatura cu un grad. n sistemul CGS ea se msoar n
c =
cal
g .grd
J
.
Kg .K
Cldura specific a apei este de 1 cal/g.grd = 4,18 J/KgK. Ea este mult mai mare
dect a celor mai multe corpuri. Produsul dintre cldura specific i masa corpului se
numete capacitate caloric i se notez cu C = m.c. Produsul dintre cldura specific
i masa molar M se numete cldur specific molar, CM=c.M sau cldur molar.
Cldura specific a unui corp poate fi determinat prin mai multe metode, cea mai
simpl are la baza metoda amestecurilor. Ea se bazeaz pe schimbul de cldur care
se realizeaz prin punerea n contact a dou sau mai multe corpuri cu temperaturi
diferite. De exemplu dac introducem ntr-un calorimetru cu ap un corp a crui
temperatur este mai ridicat dect cea a apei el va ceda o anumit cantitate de
cldur. n momentul echilibrului termic, conform principiilor calorimetrului, este
valabil egalitatea:
18
Q2 = m1c1 ( t2 t1 ),
Q3 = m2c2 ( t2 t1 )
unde: m este masa corpului de analizat, m1 este masa apei din calorimetru, m 2 este
masa calorimetrului, agitatorului i a termometrului, c este cldura specific a
corpului, c1 este cldura specific a apei, c2 este cldura specific a calorimetrului,
termometrului i agitatorului, t2 este temperatura final a amestecului( de ehilibru) , t
este temperatura iniial a corpului, t1 este temperatura iniial a apei din calorimetru,
agitator, termometru. Deci t > t2 > t1.
nlocuind valorile pentru Q1, Q2 i Q3 obinem:
mc ( t t1 ) = ( m1 c1 + m2 c2 ) ( t2 t1 )
Capacitatea caloric a calorimetrului ( m2 c2 ) se determin n prealabil i poart
denumirea de echivalent n ap al calorimetrului (notat cu A).
Astfel se poate calcula cldura specific a unui corp innd cont de valoarea
echivalentului n ap al calorimetrului i de faptul c pentru ap cldura specific este
egal cu 1 cal/g grad ( sau 4185 J/kg grad ), avem:
c =
( m1 .c1 A)(t 2 t1 )
m (t t 2 )
Mod de lucru;
- Se introduce n calorimetru o cantitate de ap precis msurat, m1.
19
Materialul
A
studiat
J/kg
( cal/g)
Pb
2.
Al
det.
m
g
m1
g
t2
0
t1
0
t
0
c
J/kg grad
(cal/g.grad)
Qtermofor = Qapa i
Qtermofor= Qlichid.
Mod de lucru:
Se msoar masa m
vas
20
Termofor
b
acest proces de rcire termoforul va ceda apei exact aceiai cantitate de cldur pe
care a primit-o. Dup stabilirea echilibrului termic se msoar temperatura final tf.
Se repet aceleai operaii cu lichidul de cercetat. Dup golirea apei din calorimetru
se introduce o mas de lichid ml i se msoar temperatura lui t l . Masa lichidului se
poate afla din produsul volumului de lichid i densitatea lui. Se nclzete din nou
termoforul n baia cald pn ce lichidul din tub atinge nivelul b dup care se
introduce
i de vasul interior
al
calorimetrului va fi:
Q = m l cl ( t e t l ) + m vasc vas( t e t l )
21
rezult
m a .c a (t f t a ) C (t f t a t l t e )
m l (t e t l )
(1)
Unde U
este energia intern a sistemului, p este presiunea la care se gsete sistemul iar V
este volumul lui. Variaia entalpiei H = H2 - H1 reprezint cantitatea de cldur pe
care sistemul o schimb cu mediul exterior ntr-un proces izobar,
H = Qp,
Q p = U + p V (2)
Conform legii lui Hess, suma cantitilor de cldur ce nsoete un proces este
constant.
Hdiz = H r + H s
(3)
Energia de reea Hr are valoarea de cca 102 cal /mol i este pozitiv deoarece este
absorbit de sistem, iar energia de solvatare H s are cam aceeai valoare dar este
negativ, deoarece ea este degajat de ctre sistem. Entalpia de dizolvare (cldura de
dizolvare) poate fi pozitiv (dizolvarea endoterm ) sau negativ
(dizolvare exoterm ) dup cum energia de reea este mai mare sau mai mic dect
energia de solvatare. Cldura degajat sau absorbit se msoar n calorii /mol sau n
jouli/mol. Cantitatea de cldur Q primit sau cedat de un corp de mas m i cldura
specific c depinde de variaia temperaturii t adic:
Q=mct
(4)
(5)
sol
(6)
unde ms este masa soluiei ( masa apei + masa srii ), c cldura specific a soluiei
care se poate egal cu cea a apei (1 cal/gr.grd.). Constanta calorimetrului C se poate
determina din calcul. Entalpia de dizolvare se raporteaz la un mol de substan.
Modul de lucru:
Se cntresc urmtoarele: vasul interior al calorimetrului i agitatorul, masa de ap
ce se va introduce n acest vas i sarea pe care vrem s-o dizolvm, ntr-o eprubet. De
exemplu: utilizai 200 moli ap (1Map = 18 g ) pentru 1mol sare. Se introduce
eprubeta cu sare n apa din calorimetru i se msoar temperatura din minut n minut,
23
Fig.4.2.Variaia
procesul
temperaturii
de
dizolvare.
5. CONDUCTOMETRIE
Determinarea concentraiei electroliilor din plasma sanguin este foarte util n
practica clinic deoarece ofer indicaii asupra metabolismului hidromineral, asupra
repartiiei apei n organism ntre cele trei compartimente: intracelular, interstiial i
vascular. n diferite tulburri ale echilibrului hidromineral aceast repartiie poate
suferi modificri importante. Determinarea concentraiei electrolitice a plasmei se
poate face prin mai multe metode: conductivitate electric, crioscopie sau prin
dozarea separate a ionilor. Prin msurarea conductibilitii sau a rezistivitii se poate
face o dozare destul de precis i rapid a electroliilor din plasm, substanele
neionizabile cum sunt urea sau glucoza nefiind implicate n aceste determinri.
Noiuni teoretice de baz:
Se numete
conductivitate electric
l
R=
, n care l este lungimea
s
, este rezistena
unui cub din acel mediu care are lungimea i seciunea egal cu unitatea.
Conductana mediului G se msoar n -1, numit i Siemens ( S ) . Valoarea
invers a rezistenei specifice se numete conductivitate electric specific :
R.s
Conductivitatea electric specific depinde de natura substanei, de temperatur i de
concentraia soluiei. Pentru a determina conductivitatea electric specific a unui
electrolit este nevoie de o celul de conductibilitate. Aceasta e alctuit din doi
25
electrozi de platin cu suprafaa de cca 1 cm2 i distanai la 1 cm, astfel nct volumul
de lichid s rmn acelai pentru toate soluiile de msurat. Celula
de
l
( cm-1 )
S
Deoarece raportul l/S apare i n legea lui Ohm, constanta celulei se poate determina
prin msurtori de rezisten sau de conductan a unor soluii etalon de electrolit cu
conductivitate cunoscut,
= G. k ( S.cm-1 )
De obicei valoarea lui este dat n prospectul aparatului . Spre exemplu,
conductivitatea soluiilor de KCl la 250 C este dat n tabelul de mai jos.
Concentraia molar
Conductivitatea / -1cm-1/
n practic se utilizeaz
0,1
0,02
0,01
0,01289
0,002768
0,001412
conductivitatea
e , m = c
= .V
e,m
unde
Spre exemplu, fie o soluie molar a unei substane care disociaz n n ioni. Fiecare
mol din aceasta soluie conine 6,02. 1023 molecule i posed o sarcin electric egal
cu n. 6,02. 1023 .1,6. 10-19 coulombi sau n Faraday. Prin definiie o concentraie de 1
Echivalent reprezint concentraia ionilor pozitivi sau negativi care au o sarcin
electric de 1 Faraday. n exemplul de mai sus concentraia echivalent a soluiei este
de n Echivalent / litru. Experimental s-a putut demonstra c conductivitatea
echivalent scade dac concentraia crete i se pot observa dou tipuri de
comportamente care caracterizeaz electroliii tari, respectiv cei slabi. La diluii mari
26
( 1/ c
[-1cm-1 ]
Electroliti tari
0
Electroliti slabi
Ce [eq/l]
Fig.5.1. Dependena conductivitii electrice de concentraie pentru electrolii tari respectiv slabi.
electroliilor
din
plasm.
ajutorul relaiei:
c =
1.6.10 6
[ mEq / litru]
(100 0,25.P)
unde este rezistivitatea electric, iar P proteinemia n g/l, care este dat n funcie
de densitatea plasmei n tabelul de mai jos.
27
Tabelul 5
Densitatea
Proteinemia
Densitatea
g/cm3
1,016
1,017
1,018
1,019
1,020
1.021
1,022
1,023
1,024
1,025
g/l
30,9
34,3
37,7
41,2
44,6
48,0
51,4
54.9
58,9
61,7
cm3
1.026
1,027
1,028
1,029
1,030
1,031
1,032
1,033
1,034
1,035
g/
Proteinemia
g/l
65,2
68,8
72,0
75,5
78,9
82,3
85,7
89,2
92,6
96,3
electrod de pH SP10B
Pe cutia aparatului exist 5 taste. Cu tasta Mode se poate selecta modul de lucru
(msurarea conductivitii, pH, temperatura) procedura de etalonare i revenire la
modul iniial. Butonul CAL ncepe sau continu etalonarea sau alegerea unei funcii ,
sgeile se folosesc pentru alegerea manual a unei valori sau a unei funcii, iar
tasta ON/OFF pentru conectarea sau deconectarea aparatului . Pe ecran pot aprea
cteva mesaje sau coduri de eroare: / or / = depirea
scalei , / cc / = constanta
Concentraia
[n]
G
[
-1
Siemens]
[ mS/
pH
cm]
32
Se poate demonstra (avnd n vedere c potenialul chimic n faza metalic este egal
cu potenialul standard) c potenialul electric al electrodului metalic n raport cu
soluia se poate calcula cu formula:
E E0
RT
ln C ox , unde Cox este concentraia molar a ionilor n soluie, R
zF
RT
ln C1ox
zF
E2 = E0 +
RT
ln C 2ox
zF
C
RT
ln 2ox
zF
C1ox
E=
RT C 2
ln
zF C1
E=
RT C2
2,302 lg (volti, V) , sau
zF C1
E=
2 302
RT C 2
lg (milivolti, mV)
zF C1
RT C 2
lg
sau, dup rsturnarea fraciei:
zF C1
RT C1
lg
(mV).
zF C 2
35
Modul de lucru
Se cupleaz milivoltmetrul la reea i se pornete urmrindu-se aprinderea
ecranului de afiaj. Nu se va da importan valorilor indicate de aparat atta timp ct
electrozii nu sunt introdui n soluie iar puntea electrolitic nu este instalat ntre
cele dou vase cu soluie.
n ambele pahare, dup ce n prealabil au fost splate cu ap distilat, se introduce
soluie de concentraie C1. Paharul nr1 se va prinde cu o clema pe stativul din stnga,
n el va fi introdus electrodul El1 i va fi meninut astfel pn la sfritul
determinrilor. n paharul nr.2, prins de stativul din dreapta, va fi introdus electrodul
El2 i cu o banda de hrtie de filtru se va face legtura cu vasul nr.1. Indicaiile
aparatului se vor stabiliza ntr-un interval de timp 1-2 minute. Dac ntregul sistem
funcioneaz corect diferena de potenial afiat de aparatul de msur este nul, sau
difer cu cel mult 5 mV. Vom nota aceast valoare E1.
n continuare, se poate scoate electrodul El2 din vasul nr2 i din soluia ce o
conine se prepar, prin diluare , 50 ml soluie de concentraie C 2 = C1/2 (25 ml
soluie inial + 25 ml ap distilat). Aceasta se reintroduce n vasul nr.2 dup cltirea
lui cu ap. Se repet msurarea diferenei de potenial obinndu-se valoarea E2.
Se procedeaz ca i mai sus, n mai multe rnduri, dilund succesiv soluia din
vasul nr.2, astfel nct s se obin valorile pentru potenialele E4, E8, E16, E32 ...
corespunztoare unor soluii din vasul nr.2 de concentraii C 1/4, C1/8, C1/16, C1/32,...
Este foarte important ca la fiecare msurtoare s se schimbe puntea de hrtie de
36
filtru dintre vase. Altfel exist riscul falsificrii rezultatelor prin modificarea
concentraiilor din acest vas.
Prezentarea rezultatelor i calcule:
C2
C1/C2
lg
C1
C2
C1/1
C1/2
C1/4
C1/8
C1/16
C1/32
C1/64
C1/128
16
32
64
128
0,301
0,602
0,903
1,204
1,505
1,806
2,107
0,00
En(mV)
E
lg(C1 /C 2 )
lg (C1/C2) unde kt =
2 302 RT
F
37
luminoase dintr-un mediu optic cu indicele de refracie n1 ntr-un alt mediu optic cu
indicele de refracie n2, cu schimbarea direciei de propagare. Reprezentnd raza de
inciden (1), raza refractat (2) i notnd:
- i: unghiul de inciden, format de raza incident cu normala n punctul de inciden
la suprafaa de separare dintre cele dou medii
- r: unghiul de refracie, format de raza refractat cu normala, putem afirma c raza
incident, raza refractat i normal la suprafa sunt coplanare i are loc relaia :
n1 sin i = n2 sin r
38
Discuii:
1. dac n2>n1 atunci r < i; raza refractat se apropie de normal
2. dac n2<n1 atunci r>i; raza refractat se deprteaz de normal
3. la suprafaa de separare dintre dou medii transparente au loc simultan fenomene
de reflexie i de refracie a luminii.
4. atunci cnd n2<n1 notm cu l unghiul limita = unghiul format de raza incident
pentru care unghiul de refracie este r = 90 => n1sin l = n2
Dac lumina trece din mediul 1 n mediul 2 i n1>n2 atunci exist relaia
sin 1 = n2 / n1 , relaie ce poate servi la aflarea unuia din cei doi indici de refracie
dac se cunoate cellalt i se msoar unghiul limit, 1. Pe acest principiu este
construit refractometrul Abbe cu ajutorul cruia se poate citi direct indicele de
refracie al unui lichid (dup ce s-a adus n dreptul unui reper fix zona de delimitare
lumin ntuneric ce apare atunci cnd radiaiile se propag n condiiile refraciei la
unghiul limit).
Determinrile refractometrice ne dau informaii preioase i n legtur cu
structura unor substane, cum ar fi de exemplu cele organice. Refracia specific i
refracia molecular a unei substane sunt mrimi fizice importante care pot
caracteriza din punct de vedere optic un lichid biologic. Ea se poate calcula cu
ajutorul relaiei lui Lorenz:
Rs=
n2 1 1
i
n2 2 d
rm = rs M
39
40
41
Partea principal a refractometrului Abbe se compune din dou prisme, una pentru
msurare i cealalt pentru iluminare, care se pot bloca cu ajutorul unui urub. Prin
intermediul unui tambur se poate deplasa blocul prismelor astfel ca n cmpul vizual
al lunetei s ne apar o imagine pe jumtate iluminat i a crei limit de separaie
ntre zona iluminat i cea ntunecat s fie plasat exact la ncruciarea celor dou
fire reticulare.
Fig. 7.3. Aspectele privind punerea la punct (a) i
citirea indicilor de refracie (b) pentru
refractometrul Abbe.
42
43
Concentraia
proteine serice
d (kg/m3)
Refracia
specific rs
Refracia
molecular rm
44
8.
DETERMINAREA
CONCENTRAIILOR
SOLUIILOR
OPTIC
ACTIVE CU POLARIMETRUL
Noiuni teoretice
Conform legilor electro-magnetismului o perturbaie electromagnetic aprut
ntr-o regiune a spaiului devine izvorul altor perturbaii de aceeai natur n
poriunile nvecinate n spaiu - apare astfel o und electromagnetic care se va
propaga cu viteza luminii.
Legile generale ale micrii ondulatorii se refer n aceeai msur att la undele
longitudinale ct i la cele transversale. Vibraiile longitudinale sunt simetrice fa de
direcia de propagare, adic aciunea lor asupra unui aparat receptor oarecare nu se
schimb dac acest aparat este rotit n jurul direciei de propagare. n cadrul undelor
transversale condiiile de aciune ale undei asupra aparatului pot fi diferite, dup cum
vibraiile transversale
direcia de propagare.
Din teoria electromagnetic a luminii rezult ca undele luminoase sunt
transversale. ntr-adevr, toate legile electromagnetismului duc la concluzia c
variaia n timp a intensitii cmpului electric E este nsoit de apariia unui cmp
genernd unde electromagnetice, unde de lumin. n felul acesta cei trei vectori H ,
natural acea lumin n care vom ntlni toate orientrile posibile ale vectorului E
46
v
E
v
Fig.8.2. Oscilaiile vectorului electric n cazul
luminii plan-polarizate (sus) i circular
polarizate (jos)
Lumina
E II E
E II E
unde E|| este extincia probei cnd planul luminii polarizate este paralel cu axa z, iar
E este extincia gsit cnd planul luminii poalarizate este perpendicular pe axa z.
Valorile diferite de zero ale raportului dicroic semnaleaz existena unor asimetrii
moleculare, iar graficului d() poate furniza date asupra naturii acestor asimetrii
(gruprile, legturile sau conformaiile ce o produc).
DL este utilizat curent n scopul stabilirii orientrilor diferitelor legturi din
structura moleculelor. n acest fel s-au putut descifra orientrile legturilor de
hidrogen n structurile - helix (paralel cu axul lanului polipeptidic) i - foaie
plisat (perpendicular pe lan).
49
15
10
polimer
nalt
dimer
5
0
AMP (monomer)
5
10
15
240
260
280
(nm)
absorbie ale dublelor legturi conjugate ale aminoacizilor aromatici sau ale bazelor
azotate. Astfel, poate fi determinat orientarea planurilor bazelor azotate fa de axele
elicilor duble ale acizilor nucleici.
8.2.2. Dicroismul circular (DC) este fenomenul prin care radiaiile
monocromatice, circular polarizate n sensuri opuse, sunt absorbite diferit de ctre
moleculele substanei.
DC, la o lungime de und dat, se evalueaz, cel mai simplu, prin diferena dintre
extinciile unei probe msurate pentru lumina circular polarizat spre stnga (EL) i
spre dreapta (ER):
E() = EL ER
Exprimarea se poate face i pe baze molare, n funcie de coeficienii molari de
extincie:
()= L R
(M1cm1)
Trebuie notat c sensul rotirii elicii luminii circular polarizate, luat n sensul de propagare, este invers celui
considerat uzual, adic atunci cnd privim spre surs.
51
Principiul lucrrii:
52
plus.
helix
foaie plisata
ghem haotic
200
220
240
(nm)
cu
Totodat, unghiul cu care este rotit planul de polarizare mai depinde i de natura
substanei componente a soluiei, caracterizat cu ajutorul mrimii [ ] care se mai
numete unghi de rotaie specific.
Deoarece rotaia specific variaz cu temperatura i cu lungimea de und a
luminii, s-a convenit ca s se standardizeze pentru lumina galben a sodiului i pentru
Na
[ ]
Na
d xc
20
100
54
Ocular
Lupa pentru citirea valorii unghiului de rotaie
urub de control
urub pentru focalizare.
Scala i vernierul pentru citirea unghiului de rotaie
Compartiment n care se introduce tubul cu proba
Filtru de sticl
Lampa de sodium
Comutator de pornire oprire.
55
Mod de lucru:
n lucrarea de fa vom studia concentraia n glucoz a unor soluii dup formula
urmtoare:
100
C= [ ] Na d x c n %
20
56
a.
b.
Nicoli paraleli
Nicoli n cruce
Fig.8.8.a) Mersul razelor de lumina prin polarimetru cnd nicolii sunt aezai n cruce.
b) Aspectul cmpului luminos observat prin polarimetru n fucie de poziia nicolului analizator n
raport cu cel polarizator.
1 x
x = 0,30
= 1,30
57
Na
[ ] 20
52.8
x
(dm)
1
d
(g/cm3)
C
(g%)
9. MICROSCOPIA OPTIC
58
60
Vizorul
Obiective
Buton reglare fina imagine
Buton pornit/ oprit
Suportul
Diafragma
Baza de susinere
Corpul vizorului
Obiective finale
Suport prindere cu lamele
Dispozitiv fixare imagine
Buton reglare imagine
Orificiu ( deschidere )
Bra
Sursa de lumina
Fig.9.3. Microscopul optic
9.4.Componentele optice
ale microscopului
Aceste
componente
lentila frontal i preparat este ocupat de un lichid (ulei de cedru, glicerin, uleiul de
parafin) n care este imersat vrful apropiat cu al sticlei port preparat i, prin
folosirea lor, se elimin n mare masur refracia n afara suprafeei lentilei frontale a
razelor de lumin care ilumineaz preparatul. Ca urmare imaginea observat va
ctiga n luminozitate i claritate.
Fig.9.4.
Obiective
oculare.
Modul de lucru:
9.5. a) Etalonarea riglei gradate a ocularului. Microscopul este dotat cu o reea
ajuttoare micrometric gradat astfel nct pe poriunea vizibil cu ochiul liber
gradaiile reprezint 0,1 respectiv 0,5 mm. Pe poriunea central rigla este divizat n
64
Diviziuni
Valoarea
Diviziuni
Dimensiunea
Dimensiunea
Studiat
coresp.element.
diviziuni
coresp.dimensi.
preparatului.
prepartului medie
microm.
preparatului.
reelei
unei
mm.
Ou de parazit
6,5
0,0307
mm
mm
3,5
0,1075
0,1128
0,0921
4,5
0,1381
tg 2
P
P.
tg1
4
1,22
2n sin u
unde:
l/ =putere separatoare
= lungime de und a radiaiei folosite
n = indicele de refracie al mediului dintre Ob i Oc.
u = unghiul de apertur, format de razele extreme.
n. sin u = apertur numeric, este nscris pe obiectiv alturi de mrirea sa.
Modul de lucru:
Determinarea grosismentului i a coeficientului micrometric.
Micrometrul obiectiv este o lam de sticl pe care sunt gravate 100 de diviziuni pe
o distan de 1 mm, intervalul ntre dou diviziuni succesive este de 0,01mm.
Micrometrul ocular - are forma unui disc cu diametrul egal cu cel al tubului n care
se introduce. Este confecionat din sticl pe care sunt gravate 100 diviziuni pe o
lungime de 1 cm, intervalul dintre dou diviziuni succesive este egal cu 0,1 mm.
Pentru determinarea grosismetrului microscopic se procedeaz astfel:
se fixeaz lama micrometrului obiectiv pe msua de lucru ;
se introduce tekerul micoscopului n bornele transformatorului, iar tekerul
transformatorului n priza de 220V;
se rotete ocularul pn cnd cele dou scri sunt paralele i parial suprapuse;
100 m
.
10 n
Nr.deter.
Gob
Goc
Goc
10X
20X
40X
nob
.10( m)
noc
-se mai fac multe combinaii de oculare i obiective, iar rezultatele se trec n tabelul
2:
CM
Tabelul 2
Obiectiv
Ocular 5X
Ocular 7X
Ocular 10X
10X
20X
40X
9.6. Ochiul - un sistem optic complex.
Ochiul este pentru organismul uman un analizator cu ajutorul cruia analizm
mediul nconjurtor. Analizatorul vizual este alctuit din trei segmente :
segmentul periferic, reprezentat de ochiul propriu-zis i anexele sale, segmentul
intermediar, reprezentat de fibrele nervoase care conduc excitaiile vizuale la creier i
segmentul cortical, situat n regiunea occipital a scoarei creierului.
Globul ocular (ochiul) are forma unei sfere, care n partea din fa are aplicat o alt
poriune sferic cu raz mai mic, reprezentat de corneea transparent. n faa
cristalinului se afl irisul care are forma unei diafragme prevzut cu o deschidere
numit pupil cu dimensiunea variabil ntre 3 i 7mm. n calota posterioar este
situat retina, o membran nervoas, alctuit din celule nervoase, celule de susinere
i celule pigmentare.
68
69
Membrana limitant extern, cel de-al treilea strat, este o reea de prelungiri ale
celulelor gliale, ce nconjoar baza celulelor fotoreceptoare. Stratul granular extern
cuprinde corpii neuronali i prelungirile celulelor fotoreceptoare. Stratul plexiform
extern reprezint zona sinaptic dintre celulele fotoreceptoare i neuronii bipolari.
Stratul granular intern este alctuit din corpii neuronilor bipolari. Stratul plexiform
intern este zona sinaptic dintre neuronii bipolari i neuronii multipolari. Stratul
neuronilor multipolari cuprinde corpul neuronilor multipolari. Stratul fibrelor optice
este format din axonii neuronilor multipolari. Ultimul strat al retinei, membrana
limitant intern delimiteaz retina spre faa sa extern. Fiecare celul cu con face
sinaps cu un singur neuron bipolar i acesta cu un singur neuron multipolar. Mai
multe celule cu bastona fac sinaps cu un singur neuron bipolar, iar mai muli
neuroni bipolari fac sinaps cu un singur neuron multipolar.
70
Segmentul intermediar sau segmentul de conducere (calea optic) este format din 3
neuroni. Primii 2 neuroni, senzitivi, sunt reprezentai de protoneuron (bipolar),
71
Distana minim de vedere clar pentru un ochi standard este de 25cm, iar rezoluia
ochiului (capacitatea de a distinge separat 2 puncte vecine) la aceast distan este de
75m.Pentru ca un ochi normal s poat vedea imaginea obiectului fr efort de
acomodare aceasta trebuie s se formeze la o distan mai mare de distana minim
de vedere clar de 0,25m- Punct Proximum. Ideal ar fi ca imaginea s se formeze la
distana maxim de 6m- Punct Remotum. n cazul n care puterea de convergen a
sistemului dioptric nu concord cu lungimea axului antero-posterior, ochiul este
ametrop prezentnd diverse defecte optice :
-miopie
-hipermetropie
-prezbiie
-astigmatism
1. Miopia este un viciu de refracie care const n faptul c razele luminoase care vin
paralele de la infinit se ntlnesc ntr-un focar situat naintea retinei. Acest viciu de
refracie se corecteaz cu lentile divergente, care ndeprteaz focarul pn ajunge pe
retin.
74
Pierderea vederii se numete cecitate i are cauze multiple. Ea se poate datora unei
rupturi a corneei sau unei afeciuni a cristalinului, care devine opac i incapabil s
lase s treac lumina. n alte cazuri cecitatea se datoreaz dezlipirii retinei, ca urmare
a unei lovituri sau faptului c celulele sale nervoase nu mai funcioneaz corect.
Unele cazuri de cecitate se datoreaz unor factori externi. De exemplu, dac nervii
optici sunt lezai, dei se formeaz o imagine corect pe retin, aceasta nu este
transmis la creier. Un traumatism cranian suferit de o persoan poate distruge aria
vizual a creierului, determinnd orbirea persoanei respective, n ciuda faptului c
ochii acestuia funcioneaz perfect.
Vederea cromatic
Retina conine 2 tipuri de fotoreceptori (receptori vizuali) : conurile i bastonaele.
Bastonaele sunt mult mai numeroase (130 milioane) i sunt mai sensibile dect
conurile la intensitatea luminoas ; ns nu sunt sensibile la culoare.
Cele 7 milioane de conuri confer ochiului sensibilitatea la culoare. Acestea sunt
concentrate n partea central a petei galbene, numit fovea centralis (diametru
0,3mm). Se apreciaz c acestea sunt distribuite ca sensibilitate pe culori n felul
urmtor : 64 % sunt conuri roii; 32 % sunt conuri verzi; 2 % sunt conuri
albastre. Conurile verzi i roii sunt concentrate n fovea centralis, iar cele
albastre n exteriorul acestei regiuni. De aici rezult o deosebire n modul cum se
disting culorile. Astfel, percepia obiectelor albastre cu intensitate mare este mai slab
dect a celor roii sau verzi. Faptul c vedem culorile cu un efort comparabil este
atribuit unui amplificator n albastru aflat n cicuitul de prelucrare din creier.
75
cea albastr, ceea ce face s fie impresionate doar conurile specializate pentru aceste
culori i creierul reuete s prelucreze uor informaia primit.Toate proprietile
vederii cromatice sunt azi utilizate n domeniul publicitii, n televiziune,
cinematografie, mod etc.
Fotometria
Fotometria se ocup cu msurarea energiei transportat de undele electromagnetice
din domeniul optic. Radiaiile electromagnetice din domeniul vizibil dau senzaia de
lumin i n acelai timp transport energie. ntr-un sens mai ngust, fotometria se
ocup cu msurarea efectului radiaiilor din domeniul vizibil asupra ochiului
omenesc. Astfel, se definesc dou
(1)
dintre aria tiat de con pe suprafaa unei sfere cu centrul n vrful conului i ptratul
razei sferei. Unghiul solid elementar taie o arie elementar dA pe suprafaa sferei,
astfel: d = dA / r2.
77
Unitatea de msur este steradianul (sr) definit ca fiind unghiul sub care se vede din
centrul unei sfere o arie de pe suprafaa sferei egal cu raza la ptrat.
Iluminarea energetic a unei suprafee este egal cu fluxul de energie radiant care
strbate unitatea de arie a suprafeei transversale, adic :
Ee = de / dAn
(2)
(3)
Dac fasciculul cade sub inciden oblic, astfel nct axa conului care delimiteaz
unghiul solid este nclinat fa de normala la suprafa cu unghiul , n relaia (3)
apare proiecia pe direcia normal la suprafa definit de versorul n, adic expresia
se nmulete cu cos :
Ee = ( Ie / r2 )cos
78
fluxul luminos
intensitatea luminoas
iluminarea
79
al radiaiei.
Unitatea de msur pentru fluxul luminos este lumenul ( lm ). Astfel, echivalentul
fotometric al radiaiei are valoarea k = 683 lm/w.
Intensitatea luminoas a unei surse punctiforme este fluxul de energie luminos
emis n unitatea de unghi solid, adic :
I = d / d
Intensitatea luminoas este mrime fundamental pentru mrimile fotometrice n
sistemul internaional de uniti (SI). Unitatea de msur este candela (cd), fiind egal
cu intensitatea luminoas ntr-o direcie dat a unei surse care emite radiaie
electromagnetic monocromatic cu frecvena de 5401012 Hz i cu intensitatea
energetic n acea direcie egal cu 1/683 (W/sr). Suprafaa unei sfere se vede din
centrul acesteia sub un unghi solid egal cu 4. Astfel, fluxul luminos emis de o
surs n toate direciile cu aceai intensitate luminoas este egal cu :
= 4I
Iluminarea unei suprafee este egal cu fluxul luminos care strbate unitatea de arie a
unei suprafee transversale, adic :
E = d / dAn = ( I / r2 )cos
Unitatea de msur pentru iluminare este luxul (lx). 1 lx = 1 lm/m2. Se mai utilizeaz
i unitatea tolerat phot (ph), care este egal cu 1 lm/cm2, astfel c 1 lx = 104 ph.
80
10. SPECTROFOTOMETRIE
ABSORBIA I EMISIA RADIAIILOR DE CTRE MOLECULE
10.1. Energia moleculelor i posibilitile de modificare a ei
prin absorbia radiaiilor electromagnetice
Spre deosebire de atomi, la care mecanismul curent de absorbie i de emisie a
radiaiilor este cel de tranziie a electronilor ntre diferitele nivele energetice,
moleculele i pot schimba energia i datorit: micrii de vibraie a atomilor la
capetele legturilor prin care sunt fixai, sau prin variaia energiei cinetice de rotaie
a moleculei.
Tranziiile electronice, n cazul moleculeleor i macromoleculelor, se fac
ntre nivele energetice ale orbitalilor moleculari de legtur i antilegtur.
Diferenele energetice (Ete) dintre aceti orbitali corespund unor lungimi de und
plasate n domeniile ultraviolet (UV) i vizibil (VIS). Fiecare tip de legtur are
tranziii electronice n domenii spectrale care permit identificarea ei.
Vibraia se poate face n dou feluri: n lungul legturilor (cnd are loc
ntinderea i comprimarea lor) sau perpendicular pe legturi (cnd se produc
modificri ale unghiurilor dintre acestea). Ca i energia electronilor, energia cinetic a
fiecrui mod de vibraie este cuantificat, cu ajutorul unui numr cuantic, v =
0,1,2,3.... Diferena energetic (Ev) dintre dou nivele de vibraie este constant, iar
cuantele absorbite n acest caz se afl n domeniile de infrarou (IR) - apropiat sau
mijlociu.
ntruct nu exist atom legat care s nu vibreze, energia moleculei pe nivelul de
vibraie cel mai sczut, cu v = 0, este totdeauna superioar unui nivel energetic
electronic -Fig.10.1.
81
1
0
5
1
05
1
50
1
0
5
1
50
1
0
4
3
2
1
0
5
5
1
05
1
50
1
0
5
1
50
3
2
1
A
Nivele
electronice
1
0
0
Nivele
de vibraie
v = 0,1,2...
Nivele
de rotaie
r = 0,1,2...
asemenea
cunatificat.
0,1,2,3...
cuantific
corespunztoare.
reduse,
cuantele
corespunztoare fiind n IR
ndeprtat.
hEte + Ev + Er
ntruct nivelele ntre care se face tranziia, pot avea stri de vibraie i/sau de rotaie
diferite, rezult c, pentru o tranziie ntre aceleai nivele electronice, cuantele
absorbite pot avea energii diferite. (Fig.10.1). Spectroscopic fenomenul se traduce
prin apariia unui numr corespunztor de linii, apropiate ntre ele, grupate n bande
sau benzi spectrale.
Liniile care compun benzile de absorbie molecular pot fi distinse numai n cazul
moleculelor izolate, aflate n stare gazoas. Pentru moleculele dizolvate, cum sunt
macromoleculele biologice, interaciunea cu solventul face ca liniile din bezi s nu
mai pot fi distinse.
10.3. Emisia radiaiilor de ctre macromolecule, luminescena
Posibilitatea de aducere a macromoleculelor n stare excitat
Pentru a emite radiaii, un atom sau molecul trebuie s se gseasc pe un nivel
energetic superior (ntr-o stare excitat), radiaia fiind emis la trecerea pe un nivel
energetic inferior.
Energia necesar excitrii poate fi termic (substane aduse la incandescen),
electric (descrcri n gaze), chimic sau radiant (excitarea radiativ). Excitarea
radiativ, prin absorbie de cuante, este modul curent de a aduce moleculele n soluie
ntr-o stare n care sunt capabile s emit radiaii.
Dezexcitarea moleculelor
n afar de dezexcitarea prin emisie de radiaii (tranziie radiativ) o molecul
poate trece pe un nivel energetic inferior prin tranziii neradiative. Tranziiile
neradiative se explic prin convertirea energiei n alte forme, cum sunt energia
chimic, electric sau mecanic de agitaie termic. n acelai lan de procese ce
nsoete revenirea unei molecule la starea de energie joas se ntlnesc ambele tipuri
de desexcitri. (Fig.10.2.)
83
Luminescena este
fenomenul de emisie a unor
s
absorbtie
emisie
fluorescent
s - stare singlet; t - stare triplet;
- desexcitare neradiativ
fosforescent
Faptul poate fi uor explicat dac inem cont c ntre excitarea radiativ (n care
molecula absoarbe cuanta cu energia h abs) i dezexcitarea radiativ (n care emite
cuanta h emis) au loc una sau mai multe dezexcitri neradiative, n care molecula
comunic sistemului (de obicei solventului) o cantitate de energie termic, En.
Legea conservrii energiei se va scrie:
h abs = h emis + En
Este evident c energiile cuantelor emise sunt mai reduse dect cele ale celor
absorbite.
Dup natura strii intermediare de pe care se face dezexcitarea radiativ,
luminescena poate s se produc n dou moduri: fluorescen i fosforescen.
(Fig.10.2.)
Fluorescena apare atunci cnd, dup dezexcitarea neradiativ, electronul i
pstreaz spinul de sens opus perechii sale, rmas pe nivelul energetic inferior (stare
singlet). Timpul de via, , al electronului n aceast stare este extrem de scurt, =
109 ... 103 s. Dup acest interval de timp, toi electronii au revenit pe nivelele
inferioare. Practic, fenomenul dureaz numai ct timp dureaz excitarea radiativ.
Excitarea este realizat cu radiaii care corespund unei benzi de absorbie intens
a substanei.
Indiferent de
85
I0
I
dx
Fig.10.3. Scderea
intensitii fascicolului
luminos la trecerea
printr-un strat de
substan cu grosimea x
I =I0 e k x
x
Extincia, datorat unui component din soluie, crete linear cu concentraia lui
molar, C, i cu grosimea stratului de soluie strbtut, x :
E=Cx
87
Dublele legturi conjugate ale ciclurilor aromatice (aminoacizi ca Phe, Tyr, Trp),
sau ale heterociclurilor bazelor
1
cm )
azotate
8000
4000
(purinice
300
nm.
lungimilor
maximelor,
coeficienilor
180
200
220
(nm)
Fig. 10.5 Spectrele de absorbie n UV ale
poli-L-lizinei n conformaiile ,
ghem haotic.
de
i
Deplasrile
und
ale
variaiile
molari
de
studiul
structurii
interaciunilor cu agenii de
mediu: fora ionic, pH-ul,
temperatura.
Legturile pepetidice (avnd craracter de dubl legtur) absorb ntr-o band cu
dou maxime: unul mai exprimat, la 200 nm, i altul mai redus, la 225 nm. Spectrele
lanurilor polipeptidice, dac acestea adopt o structur secundar definit, au
particulariti caracteristice ale spectrului de absorbie (Fig.10.5).
200000
100000
50000
10000
5000
3000
300
400
500
(nm)
Fig. 10.6 Spectrele de absorbtie ale oxihemoglobinei (),
deoxihemoglobinei () si methemoglobinei (- -)
600
88
Prima categorie include compuii metalelor tranziionale, iar pentru a doua se pot cita
flavo-proteinele. Proteinele heminice (hemoglobina - Fig.10.6.
i citocromii) au
Lungimea de und
Lungimea de und
n lipsa legturii de H
n prezena legturii de H
OH
2,75 m
3,00 m
NH
2,95 m
3,10 m
SH
3,90 m
4,00 m
C=O
5,90 m
6,05 m
Soluiile apoase nu sunt propice studiilor n infrarou datorit celor dou benzi de
absorbie intens ale apei (n jurul a 3,1 m i 6,1 m). Legturile de hidrogen, care
89
90
Parametrii tehnici
Domeniul de msurare:
200-1100 nm
Lime de band:
2 nm
Precizia lungimii de und:
1 nm
Monocromator:
split beam (raz divizat)
Reproductibilitate: 0.2 nm
Domeniul fotometric: - 0.300-3.000 Abs
Precizia fotometric: 0.005 % la 1.000 Abs
Stabilitate (drift):
< 0.0003 Abs / or la 500 nm
(dup 1 or de nclzire)
Stabilitate baseline: 0.002 Abs (ntre 210-1000 nm)
Lumina mprtiat: < 0.05% la 340 nm i 220 nm
Surs de lumin:
lamp deuteriu (UV) i lamp halogen (VIS)
Schimbare surs de lumin: automat
Detector: dou fotodiode
Vitez de nregistrare spectru: 100-5000 nm/min
Drum optic: schimbabil ntre 10-100 mm
Afiaj: LCD cu iluminare din spate, contrast reglabil
Ieiri semnal: port serial i paralel
Alimentare / sigurane:
100/120/220/240 V ~ 50/60 Hz
sigurane: T 2A 220/240 V, T 4A 100/120 V
Ambient / umiditate: temperatura camerei: 15-30C, umiditate < 80%
Dimensiuni: 506 mm x 430 mm x 220 mm. Masa: ~18 kg
91
ELEMENTE DE COMAND
92
12:00:00
Metertech
Metertech Inc. SPUV/VIS
All rights reserved
Version 1.0
Detect
Initial System.....
12:00:00
System Main Menu
1.Photometric
2.Spectrum
3.Timescan
4.Kinetic
5.Quantitative
6.System Setup
Select Number:1
Quick
Run
Sample
Control
93
Alegerea se face prin tastarea numrului corespunztor sau prin deplasarea benzii
luminoase (hightlight) urmate de apsarea tastei ENTER. Pe partea de jos a afiajului
mai sunt dou opiuni, dintre care "Sample Control" are sens doar n cazul utilizrii
unui suport multicell (multicuv), iar cu tasta F1 de sub "Quick Run" se poate intra n
meniul de fiiere, ca i cu ajutorul tastei QUICK RUN. Parametrii de baz ai
spectrofotometrului se pot seta din submeniul 6, "System Setup". Opiunile din acest
submeniu se aleg prin tastarea numrului corespunztor urmat de apsarea tastei
ENTER.
Setup clock: pentru setarea datei i orei.
1.
Setup lamp: aici putem vedea nivelul de energie a lmpilor, putem opri
2.
lmpile individual, totodat aici putem reseta la zero orele de funcionare a
lmpilor, dup nlocuirea cu una nou.
Setup printer: pentru alegerea tipului potrivit de imprimant.
3.
Setup RS-232: pentru setarea portului serial.
4.
Setup hardware: se pot seta trei parametri de baz:
5.
lungimea de und la care se comut sursa de lumin la trecerea din VIS n
UV. n cazul n care lungimea de und de msurare coincide cu cea de
comutare a sursei de lumin setat de productor (363 nm), se recomand
modificarea acestei valori n intervalul 330 i 365 nm.
Switch to..... comutare ntre accesorii i single cell.
Scan base line..... dac este setat pe ON, dup pornire, aparatul msoar
automat un baseline.
Measure bandwidth: Pentru msurarea limii de band se apas tasta
6.
READ. Va fi nregistrat spectrul lmpii UV. Dac aparatul este bine calibrat,
atunci va rezulta un vrf n jurul valorii de 656.1 nm, iar limea de band va
fi sub 2 nm. Rezultatul poate fi tiprit apsnd tasta de sub "Print Data".
Measure baseline: apsnd ENTER, se va msura un baseline.
7.
Search zero point: msurare n poziia de zero, pentru test hardware.
8.
EFECTUAREA MSURTORILOR N DIFERITE MODURI
a) MSURARE LA LUNGIME DE UND FIX
Este un mod de msurare simplu, la lungime de und fix. Se pornete din meniul
principal, alegnd punctul 1. Apare fereastra Photometric Parameter setup.
Deplasndu-ne cu ajutorul sgeilor, putem selecta parametrii dorii pentru setare sau
editare. Avem posibilitatea de a ncrca i seturi de parametri de la msurtori
anterioare, prin apsarea tastei funcie F1, de sub afiaj. Cu tasta F2 se salveaz, cu
F3 se tipresc parametrii. Pot fi setai urmtorii parametri de msurare:
Input the Number of
:
Measure Mode:
Cycle Number:
Cycle Interval (sec):
Print Every Cycle:
12:00:00
PHOTOMETRIC
500.0nm
Parameter
Setup
1.Input the Number of
1 :500.0
:1
2.Measure mode
Have unit(Yes/No)?
Unit
Factor(default=1)
3.Cycle number
4.Cycle interval(sec)
5.Print every cycle
:ABS
:Yes
:
:1.000
:1
:0
:No
%T-
Pentru a ine cont de valoarea blancului, se aeaz cuva goal sau umplut cu solvent
n suportul de cuve i se apas tasta AUTO ZERO.
12:00:00
PHOTOMETRIC
550.0nm
96
12:00:00
0.000A
LAMBDA
500.0nm
: 500.0 nm
Data: 0.000 A
Press & keyin
wavelength...
View
Data
Save
Data
Mode
Sample Toggle
A/C/%T Contro Digits
l
97
12:00:00
SPECTRUM
500.0nm
Param
1.Start
2.Stop
3.Measure mode
4.Low value(ABS)
5.High value(ABS)
6.Scan
7.Overlay screen
:400.0
:800.0
:ABS
:-0.30
:3.00
:1000
:Yes
SPECTRUM
800.0nm
1
.
5
0
A
B
S
0
.
7
5
0
.
0
0
4
0
0
Nm
605
800
Cu tasta "Acces Data" (F1) acceptm msurtoarea. n ferestrele de jos vor aprea noi
mesaje:
F 3 "Print Data" printarea rezultatului;
F 2 "Save Data" salvarea spectrului sub numele dat de noi (5 fiiere);
F 1 "Load Data" rencrcarea spectrelor salvate pentru analiz. Cu banda luminoas
ne poziionm pe rndul dorit i cu ENTER l ncrcm n fereastra grafic de mai
nainte. Cu tasta ESC putem urca cu un nivel mai sus, unde putem face analiza
spectrului.
c) ANALIZ DE SPECTRU
Putem intra n acest punct de meniu dup nregistrarea unui spectru sau dup
reapelarea unui spectru salvat n prealabil. Pentru acesta trebuie s apsm tasta F2 de
sub fereastra "Manipulate".
Vom avea urmtoarele posibiliti:
- F1
Smooth Data: netezirea automat a curbei
- F2
Zoom Data: mrirea/micorarea curbei; la axa Y plpie cursorul, acolo
trebuie introdus noua valoare apoi se valideaz cu ENTER. Cursorul va sri la
poziia urmtoare; prin repetarea operaiei precedente i terminnd pe partea dreapt a
axei X, curba va fi redesenat conform coordonatelor. Apsnd din nou tasta F2 se va
repeta procesul, sau se poate reveni la aspectul iniial cu tasta F5.
- F3
Show Track: apare o linie vertical, n rndul de sus va fi afiat poziia
ei actual i valoarea fotometric corespunztoare. Poate fi deplasat cu tastele sgei,
astfel putem cuta orice vrf sau vale. Dac ntr-un loc apsm tasta "Save Data",
datele vor fi salvate. Cu "View Data" se pot vizualiza, cu "Print Data" se pot printa
datele vrfurilor. Ieirea se face cu tasta ESC.
- F4
Peak Walley: dup apsare, apare jos un meniu nou.
100
12:00:00
SPECTRUM
1
.
5
0
A
B
S
0
.
7
5
0
.
0
0
4
0
0
View
Data
Nm
605
800
Press
hot
key
to
Search Search Less
More
Peak
Valley Point Point
SPECTRUM
800.0nm
Prev
Page
Next
Page
Print
Data
Prev
Screen
101
12:00:00
0.000A
TIMESCAN
500.0nm
Parameter
1.Wavelength(nm)
2.Scan time(sec)
3.Delay time(sec)
4.Measure mode
5.Low value(ABS)
6.High value(ABS)
7.Overlay screen
Load
Param
:500.0
:30
:0
:ABS
::3.00
:Yes
Dup ce am setat parametrii, putem porni msurtoarea sau i putem salva ntr-un
fiier. Tot de aici, parametrii pot fi i printai. Putem seta urmtorii parametri:
Wavelength:
Scan
Time:
Delay
Time:
Measure Mode:
Low Value:
102
High
Overlay
Screen:
Value:
Dup setarea parametrilor, dac este necesar, msurm valorea de blanc, apoi aezm
cuva cu prob n incinta de lucru i nchidem capacul.
Apsm tasta READ, dup trecerea timpului setat la delay time va porni
msurtoarea i curba va fi trasat pe ecranul grafic. n partea de sus al ecranului se
poate vedea timpul scurs i valoarea fotometric actual. Putem opri msurtoarea cu
tasta ESC.
12:00:00 TIMESCAN
0.000A
500.0nm
1
0
1
.
0
%
T
1
0
0
.
0
9
9
.
0
0
Sec
150
300
.
12:00:00
QUANTITATIVE
500.0nm
Parameter
1.Wavelength(nm)
2.Standard
S
1:0.0
S 3:0.0
:500.0
:3
3.Have Unit(Yes/No)
:No
4.Method
:
5.Keyin ABS
6.Print every cycle
:No
:No
QUANTITATIVE
500.0nm
Standard
Table
--------------------------------Sample
Conc.
ABS
1
1.0000
0.1
2
2.0000
0.2
3
3.0000
KINETIC
500.0nm
Parameter
1.Wavelength(nm)
2.Sampling Number
3.Lag Time(sec)
4.Rate Time(sec)
5.Delay Time(sec)
6.Have unit(Yes/No)?
:500.0
:5
:2
:12
:0
:No
7.Factor(default=1)
8.Low Value(ABS)
9.High Value(ABS)
10.Measure Temperature
11.Overlay Screen
12.Print every cycle
:1.0
:-0.30
:3.00
:None
:Yes
:No
Number from 2 to 99
Load
Save
Print Sample Next
Param Param Data
Contro Screen
De aici putem introduce sau edita parametrii de msurare. Putem ncrca i parametri
salvai anterior. Avem acces la urmtorii parametri:
Wavelength:
Sampling
number:
Lag Time:
Rate Time:
106
Delay
Time:
107
12:00:00
KINETIC
405.0nm
1
.
De aici putem
0
0
datele sau le
A
afia sub form
B
S
tabel (cu tasta
List). Cu tasta
0
(Manipulate)
.
3
obinem dou
5
opiuni
de
0
analiz.
n
.
submeniul
3
0
Track
putem
6
90
120
sec
deplasa
o
0
dreapt
T=60.0
Factor=3253.000
vertical
cu
ABS/T=0.11308( ABS/min)
ajutorul tastelor
C /T=367.86414( U/L/min)
evalund curba
ABS
=0.00188T + 0.27194
Linear
Fit
Press READ when ready
aeaz
peste
Data
Mani- Clear Print Prev
o dreapt de List
pulate Graph Data
Screen
regresie.
Opiunea Original va reafia curba iniial.
printa
putem
de
Data
F2
noi
Show
sgei,
astfel.
curb
108
E = 0 (graficul ncepe
2+
transport al oxigenului. Forma met apare sub aciunea unor oxidanti puternici , are
fierul heminic sub forma Fe3+ i
Conform fig. 4. spectrele de absorbie ale acestor forme difer ntre ele , iar
coeficienii de extincie molari au valori diferite n funcie de lungimea de und.
Punctele de intersecie a curbelor coeficienilor de extincie se numesc puncte
isosbestice, adic au aceeai absorbtivitate pentru lungimea de und corespunztoare
109
(1)
110
(2)
(3)
Mm
Aduli
Femei
Barbai
12 - 16
14 18
7,5 - 10
8,7 - 11,2
111
Copii
Nou- nscui
Sugari
Precolari
colari
16 - 25
10 - 15
11 14
12 -16
10 15,5
6,2 9,3
6,8 - 8,7
7,5 - 10
n mod normal mai puin 0,3 % din hemoglobina total se afl sub forma de
methemoglobin, aceast valoare crete semnificativ n cazul unor intoxicaii cu
substane oxidante cum ar fi nitrii, nitrai, chinone, nitribenzen, anilina, etc. Precizia
metodei se ncadreaz n limitele de 1%, chiar dac precizia aparatului este mult
mai bun. Valorile necunoscute se pot determina i folosind modul de msurare
cantitativ a spectrofotometrului, dup ce n prealabil a fost salvat n memorie curba
de etalonare. Este interesant de verificat dac rezultatele coincid.
0
Particule ( 1 )
Incrcate
electric
Particule
0
( 1 )
Sunt
compuse
din
pozitroni
(antiparticula
electronilor)
rezult
din
dezintegrarea radiaoctiv de tip beta plus sau
prin generarea de perechi.
Radiaii
corpusculare
1
Protoni, 1 p , care sunt nuclee de hidrogen.
Neutre
1
Neutroni, 0 n .
Particule
elementare
neutre, cu numr de mas 1.
nucleare,
Planck (6,625.1034 Js), iar = frecvena radiaiilor. Masa lor de micare, m, se leag
de energie prin formula lui Einstein: E = mc2, c fiind viteza luminii n vid. Curent,
energia lor se exprim n electron-Voli: 1eV = 1,6.1019 J .
Spectrul radiaiilor electromagnetice este extrem de extins. n funcie de lungimile
lor de und n vid ( = c/ ), acesta se poate reprezenta ca n figura de mai jos:
(m)
10
102
lungi
medii
RADIO
scurte
10
1
ultrascurte
TV
TEL. MOBILA
SATELIT
CUPTOARE
101
102
microunde
103
IR ndeprtat
104
IR mediu
INFRAROSU (IR)
105
IR apropiat
6
10
10
ULTRAVIOLET (UV)
8
10
10
1010
RNTGEN (X)
1011
1012
GAMMA ()
principalilor atomi ce compun materia vie (H, C, N i O), pot fi considerate ionizante
radiaiile ce transport energie mai mare de 13,6 eV pe particul, ceea ce corespunde,
114
neionizante
Energia absorbit de ctre gruprile cromofore ale moleculelor poate antrena
modificri (reacii) fotochimice ale acestora. Faptul este comun i mpiedicarea lui
poate fi regsit n pstrarea n flacoane brune sau opace a unor medicamente sau
116
buturi (bere, vin). n lumea vie, plantele i algele transform curent energia
luminoas n energie chimic stocat n compui organici de sintez.
Exist dou legi ale fotochimiei: 1) Un foton interacioneaz cu o singur
molecul i 2) n urma interaciunii, energia fotonului este absorbit integral.
De procese fotochimice sunt responsabile mai ales radiaiile UV, absorbite de
dublele legturi. Trecerea electronilor pe orbitalii de antilegtur () este echivalent
cu ruperea acesteia urmat de posibilitatea refacerii n alte modaliti. Ca urmare, pot
avea loc unul din fenomenele:
- Refacerea ei n alt poziie (migrarea);
- Izomerizarea cis-trans;
- Adiia unui substituent, n general OH sau H;
- Dimerizarea;
- Ciclizarea intern.
Asupra macromoleculelor proteice, transformrile fotochimice susmenionate se
manifest mai ales asupra aminoacizilor aromatici i a secvenei legturilor peptidice.
Ele au ca efect schimbarea structurii primare (covalente) i, consecutiv a celor
secundare, teriare i cuaternare. Rezultatul este apariia unor compui denaturai,
lipsii de funcie biologic sau cu funcia alterat.
Macromoleculele de acizi nucleici sufer efecte fotochimice importante datorit
absorbiei radiaiilor UV de ctre dublele legturi ale bazelor azotate. Dimerizrile i
trimerizrile de baze, ciclizrile sau adiiile la acestea mpiedic adoptarea unei
geometrii corecte a helixurilor de acizi nucleici. Consecinele biochimice rezid n
imposibiliatea de recunoatere a acestora de ctre enzimele implicate n citirea,
utilizarea i transmiterea informaiei genetice.
Efectele biologice ale radiaiilor neionizante
La nivel de organism, procesele fotochimice pot fi implicate n dou procese
fiziologice:
a) Fotoconversia, prin care are loc tranformarea energiei luminoase n energie
chimic. Cel mai important este fotosinteza, realizat de majoritatea plantelor vezi i
de microorganismele plactonului oceanic.
117
TLE = I.
ntruct ntre dou ionizri particula produce i un numr de excitri ale atomilor,
este mai mare dect energia de ionizare. Astfel, pentru aer i ap valorile sunt de 32
eV i 34 eV, respectiv.
TLE crete cu ptratul sarcinei particulei i concentraia electronilor din mediu
dar nu are o valoare constant de-a lungul traiectoriei. Ea scade cu creterea
ptratului vitezei particulei deoarece, la viteze mari ale acesteia, timpul ct are loc
interaciunea cu electronii este mai redus. Unitatea curent utilizat, la strbaterea
mediilor apoase, este KeV/m.
Dac particula strbate o substan compus dintr-un element pur, n vecintata
fiecrui punct al traiectoriei este valabil expresia:
TLE
dE
z
k
v
dx
Zn
TLE k
ne
Ultima expresie este util pentru calcularea valorii TLE n medii ce conin
amestecuri moleculare i pentru care ne este uor accesibil calculului.
Dac vom considera dou particule de aceeai energie cinetic, una grea i alta
uoar, prima va avea o vitez mai mic dect a doua. Din acest motiv particulele
grele au un TLE mai mare dect cele uoare de aceeai energie.
Privind din punctul de vedere a lungimii parcursului, particulele grele, pierznd
mai mult energie pe unitatea de lungime, au parcursuri mai scurte, pe cnd cele
uoare strbat n mediu distane mai mari. Dac o particul are energie E i, pentru
120
ntreg parcursul de lungime d, are un TLE mediu, notat TLE , aceste mrimi se
leag cu relaia simpl:
d
E
TLE
S u b sta n ta
T r a s e e le io n iz a r il o r p o d u s e d e
p r o to n ii c io c n ii d e n e u tr o n i
C a p tu r n e u tr o n ic
A
1
A 1
(radioactiv)
Z X 0 n ZY *
foton
A 1
ZY
(stabil)
1
x1 / 2 ;
2
ln 2
123
Dac se vor face msurtori pe alte direcii dect cea a fascicolului incident se vor
gsi intensiti de radiaii diferite de zero pentru fotoni de energii mai mici sau pentru
electroni accelerai. Aceasta arat c interaciunile a radiaiilor X i cu substana
sunt complexe, n urma acestora rezultnd radiaii difuzate: unele mprtiate iar
altele secundare. nseamn c reducerea intensitii fascicolului (atenuarea lui) are
loc att prin absorbia energiei lui de ctre substan ct i prin difuzia energiei pe
alte direcii i sub alte forme dect cele ale fotonilor fascicolului incident. Energia
transportat de fascicolul incident (Winc) se va regsi integral, distribuit ntre cea a
fascicolului emergent (Wemg), energia absorbit de substana strbtut (Wabs,
transferat mediului) i energia radiaiei difuzate (Wdif). Ultimele dou reduc
intensitatea (energia) fascicolului emergent i, cu ct reprezint o fraciune mai mare
din aceasta, coeficientul de atenuare linear () arevaloarea mai mare.
Dei sunt mai multe tipuri de interaciuni care reduc intensitatea fascicolelor de
fotoni X i , de importan practic sunt numai trei: efectul fotoelectric, efectul
Compton i generarea de perechi (efectul de materializare).
Efectul fotoelectric se manifest prin absorbia integral a energiei unui foton de
ctre un electron al unui atom. Energia lui se distribuie integral ntre energia necesar
extraciei din atom i energia cinetic a electronului expulzat (fotoelectronului). n
acest caz, efectele ionizante se datoresc fotoelectronilor, care se comport similar
Winc
Substan
Wemg
Wabs
Wdif
Winc = Wemg + Wabs + Wdif
fundamental prin tranziii ale celor din pturile superioare. Astfel de tranziii sunt
responsabile de emisia unor radiaii secundare de fluorescen (X n cazul atomilor
grei sau UV n cazul celor uori). Energia radiaiilor astfel difuzate este, n general,
neglijabil.
Atenuarea prin efect fotoelectric a fascicolului se descrie cantitativ prin
coeficientul de atenuare linear f , care crete cu probabilitate producerii efectului.
Aceasta depinde pronunat de energia fotonilor incideni i de natura atomilor int.
Efectul fotoelectric este deosebit de important n cazul fotonilor de energii reduse
care strbat materiale ce conin elemente grele.
Aplicaiile practice ale efectului fotoelectic se regsesc n alegerea i construcia
filtrelor pentru realizarea imaginilor radiografice. ntruct nu sunt potrivite explorrii
radiologice de profunzime, radiaiile cu fotonii de energii mici (sub 50 KeV) sunt
atenuate n fasciculele policromatice emise de tuburile Rentgen cu filtre din cupru.
Pe de alt parte, contrastul optim al imaginilor radiografice se obine n domeniul
60 ... 120 KeV, unde efectul fotoelectric nc este manifest.
Efectul Compton apare la ciocnirea dintre un foton i un electron (considerat
liber sau slab legat). Rezult un electron de recul, care primete o parte din energia
fotonului incident i un foton difuzat, cu energie (i frecven) mai mici dect a celui
incident. Acest efect este semnificativ ca importan cnd energiile de legare a
electronilor n atom pot fi considerate neglijabile fa de energiile fotonilor incideni.
n urma ciocnirii, energia fotonului incident se regsete n energia transferat
electronului de recul i energia fotonului difuzat. Electronii de recul au energii
suficiente pentru a produce ionizri similare razelor beta, iar fotonii difuzai, n
funcie de energia pe care o mai au, pot produce fie alte efecte Compton fie efecte
fotoelectrice.
Dac n cazul efectului fotoelectric aproape ntreaga energie pierdut de fascicolul
incident este transferat substanei absorbante, n cazul efectului Compton o parte
este emis de substana traversat sub form de radiaie mprtiat sub unghiuri mari
fa de cea incigent. n mediul biologic, energia radiaiei difuzate (Wdif) este de 4 ...
5 ori mai mare dect energia transferat electronilior i absorbit (Wabs) n zona
125
traverseaz cmpul electrostatic al unui nucleu. Dac acest cmp este destul de
intens, energia fotonului se materializeaz, prin apariia unui electron (e ) i a
unui pozitron (e+, antiparticula electronului). Materializarea nu poate avea loc dect
dac energia fotonului depete de dou ori energia de repaus a unui electron (0,511
MeV). Pragul teoretic al energiei fotonului este h > 2. 0,511 = 1,022 MeV. n
practic, atenuarea prin generare de perechi depete n amploare celelalte fenomene
la energii cu mult mai mari, nentlnite n practica medical, (5 MeV pentru plumb i
25 MeV pentru ap i carbon).
Diferena dintre energia fotonului i cea necesar materializrii, este regsit ca
energie cinetic a electronului i pozitronului. Aceast energie este absorbit de
mediu (Wabs), prin ionizri similare celor produse de radiaia
Spre deosebire de electron, viaa pozitronului este scurt. Dup ncetinirea
responsabil de ionizri, la ntlnirea unui electron, perechea pozitron - electron
sufer reacia de anihilare, energia particulelor transformndu-se n dou cuante ,
fiecare cu h = 0,511 MeV. Aceste cuante sunt emise pe o direcie oarecare, n
sensuri opuse, i intr n componena energiei difuzate (Wdif). Fotonii de anihilare
pot produce, n alte zone dect cea supus iradierii primare, efecte fotoelectrice sau,
mai ales, Compton.
Dac ne referim numai la pierderea de energie a fascicolului incident prin
generarea de perechi, aceasta se caracterizeaz prin coeficientul de atenuare linear
p. Pierdere se datorete
127
(lng traiectorie)
(la distan)
(la distan)
(lng traiectorie)
Dac hidrogenul molecular este netoxic, apa oxigenat (H2O2) este un agent
oxidant foarte puternic, ce produce denaturarea ireversibil a proteinelor.
S-ar prea c efectele denaturante rmn cantonate lng punctele de ionizare, dar
nu este aa din cauza prezenei oxigenului molecular n mediile biologice. Radicalii
H . + O2 ------> HO2.
128
s.a.m.d...
Radicalii hidroxil i peroxid pot fi responsabili i de oxidarea unor grupri din
structura moleculelor organice, mai ales a celei SH, cu formarea unor puni SS ,
dup reaciile generale:
R1SH + HSR2 + 2 OH . ------> R1SSR2 + 2 H2O
R1SH + HSR2 + 2 HO2. ------> R1SSR2 + 2 H2O2
Rezultatul acestor reacii este apariia n timp a unor macromolecule cu structuri
primare alterate i modificate ca funcie.
sau OH
moleculelor originale este foarte mic n raport cu cea de apariie a unora modificate.
Adesea, n cazul unor molecule complexe, excesul de energie nu rmne localizat i
s rup legtura, ci se distribuie la mai multe legturi sau se transfer de la o
molecul la alta. Aceste reacii de transfer a energiei nu sunt imediate. Uneori strile
active persist mai multe ore sau zile i reaciile radiochimice se prelungesc mult
dup iradiere. Astfel de post-efecte sunt foarte evidente la proteine i acizi nucleici.
Oxigenul din mediu produce peroxidarea n lan a macromoleculelor, similar
mediului apos, conform reaciilor:
129
Rc. + O2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
s. a. m. d. . . . .
S-a putut, pornind de la o singur ionizare, s se pun n eviden formarea unui
lan de 70 de peroxizi organici.
Aciunea asupra proteinelor
Proteinele sunt denaturate prin fragmentri, polimerizri, peroxidri i formri de
puni disulfidice. Efectele cele mai nocive asupra funciilor celulare sunt produse prin
inactivarea enzimelor.
Aciunea asupra acizilor nucleici
Modificrile radiochimice ale acizilor nucleici sunt foarte complexe. Alterarea
structurii chimice a bazelor azotate produce disocierea dublelor helixuri datorit
imposibilitii de asociere a bazelor n perechi. Pe de alt parte, fiecare dintre
lanurile dublului helix poate suferi ruperi. Frecvena ruperilor unui singur lan este
de 10 ori mai mare dect cea a ruperii n acelai loc a ambelor lanuri. Faptul are
importan fiindc n primul caz moleculele pot fi reparate, pe cnd n al doilea nu.
Aa se explic sensibilitatea crescut la radiaii a organismelor haploide (cu stocare a
informaiei genetice ntr-un singur lan AND) fa de cele diploide (cnd stocarea se
face ntr-un dublu helix).
Ruperile, chiar pe un singur lan, dac nu sunt reparate rapid, pot conduce la
ramificri cu adoptarea de structuri tridimensionale, nerecognoscibile biochimic.
130
Doze mici
accelerat
ncetinit
tardiv
Doze mari
diminuat
oprit
precoce
Primele constatri asupra radiosensibilitii au fost fcute de BergonieTribondeau n 1906. El a enunat o lege care sumarizeaz caracteristicile celulelor
susceptibile la efecte letale:
O populaie de celule este cu att mai sensibil le radiaii cu ct 1) are viteza
proceselor metabolice mai mare; 2) este iradiat ntr-o faz mai precoce a mitozei i
3) este mai nedifereniat. Sunt nedifereniate celulele care au un viitor cariocinetic
lung, deci morfologia i funciile nu sunt definitiv fixate.
Aceast lege ofer un ghid simplu pentru msurile de radioprotecie medical i
pentru nelegerea cazurilor n care se practic radioterapia. Radioprotecia impune
s nu fie expuse radiaiilor esuturile sntoase sensibile: cele embrionare, cele
hematopoetice, gonadele, epiderma i mucoasa intestinal. Pe de alt parte,
beneficiaz de radioterapie tumorile cu celule de radiosensibilitate mare. Acestea
sunt, n general, sarcoamele (n special blastoamele) care sunt tumori cu celule
derivate din esuturile mezenchimale (nedifereniate). Acestea satisfac n foarte bun
parte cerinele specificate de Bergonie-Tribondeau.
11.6.
UTILIZAREA
DETECTORULUI
DETECTORULUI
CU
SCINTILAIE
GEIGER-MLLER
PENTRU
SAU
DETERMINAREA
4
Ra 222
86 Rn 2
. n general: ZAX
He
Z-2
A-4
Exemplu:
n cazul emiterii de radiaii beta numrul de mas A rmne constant, iar numrul de
ordine Z crete cu o unitate. Exemplu:
n general:
A
Z
0
1
214
82
Pb 10 e 214
83 Bi
A
Z 1
Y .
132
1
1
1
0
n +
+1
+ o.
Pentru a caracteriza
T1/2 =
ln 2
Timpul de njumtire este foarte diferit de la un nucleu la altul, fiind cuprins ntre
109 ani i cteva s (microsecunde).emple de timpi de injumatatire
133
N
Fig. 11.1. Scderea n timp a numrului de nuclee instabile
N0.
N0
N0/2
N0/4
T1/2
T1/4
Alt mrime folosit n practic este activitatea unei surse radioactive, notat cu
=-
dN
= N
dt
134
mediu oarecare poate fi caracterizat prin viteza de numrare produs ntr-un detector
adecvat:
V=
nr.impulsuri
timp
Pentru cazul cnd ne intereseaz mai mult efectele biologice produse de ctre
radiaiile, alfa, beta sau gama se folosesc alte mrimi ca: doza de ioni (msurat n
Rentgen), doza de energie absorbit ( msurat n Gray), sau doza biologic
( msurat n Sievert) etc.
La trecerea radiaiilor printr-un mediu oarecare ele sunt aborbite i intensitatea lor
scade exponenial cu distana parcurs n mediu conform relaiei:
I = Io.e -
fluxului emergent,
Put 11.Puterea
penetranta a radiaiilor:
Puterea p
Hrtie
Lemn
Beton
=k
ln V2 ln V1
x 2 x1
135
format din dou pri: a) un mediu n care radiaia produce un efect specific
(scintilaii, ionizri, efect fotoelectric sau efect Compton) i b) un sistem de
nregistrare a efectului produs de radiaii.
Detectorii cu scintilaii se bazeaz pe apariia de scintilaii n cristalele anorganice
sau organice, atunci cnd acestea sunt lovite de particulele respective. Fotonii
scintilailor sunt nregistrai cu ajutorul unui fotomultiplicator producndu-se un
impuls de tensiune. Amplitudinea impulsului este proporional cu numrul
de
scintilaii deci cu energia lor. Din acest motiv detectorul cu scintilaii se folosete att
la numrarea particulelor emise ct i la msurarea energiei lor. Detectorul GeigerMuller este un detector cu ionizri n gaz. El este constituit dintr-un tub metalic
catodul- i un fir central-anodul- ambele fiind introduse ntr-un cilindru de sticl,
etan. Amestecul de gaze conine n general heliu sau argon plus vapori de alcool
etilic. Datorit simetriei cilindrice, intensitatea cmpului n jurul anodului va scdea
rapid odat cu distana fa de aceasta. ntre cei doi electrozi se aplic o diferen de
potenial relativ mare, pn la 2500 V. Radiaiile alfa i beta ionizeaz direct gazul
din tub, pe cnd radiaiile gama ionizeaz gazul indirect prin electronii secundari.
Schema detectorului (contorului) Geiger-Muller:
ubul Geiger-Muller
Sursa
Anod
Aparat
de
msur
Gaz la
presiune
joas
Catod
Acest tip de detector portabil are tubul GM ncasat n instrument. La intrarea unui
flux de particule ionizante n tub, acesta va declana un impuls electronic care este
semnalizat prin apariia unei lumini roii i printr-un semnal sonor. Fondul cosmic
existent permanet poate fi nregistrat n fiecare minut i are valori ntre 5 25
impulsuri pe minut, depinznd de locaie i de altitudine. Se selecteaz nivelul de
alert la poziia X1, iar dac numrtorul depete scala aparatului se trece la
nivelurile superioare X10, X100. Semnalul sonor poate fi auzit acionnd butonul
ON/OFF/AUDIO. Se observ c att indicatorul vizual de pe ecran ct i cel audio
diminueaz progresiv pe msur ce se trece la nivele superioare de alert. Pentru a
determina ce tip de radiaie (alfa, beta sau gamma) provine de la o anumit surs,
procedm astfel:
-
ecranului se modific, este vorba de radiaie beta. Majoritatea izotopilor conin att
radiaie gamma ct i beta.
-
instrumentul cu fereastra spre surs. Semnalul nregistrat poate proveni n acest caz
de la radiaie alfa, beta sau gamma de energie joas. Dac se plaseaz o foaie de
hrtie ntre fereastr i surs, iar semnalul nceteaz, este vorba despre radiaie alfa.
Intervalul de operare al instrumentului: 0-50 mR/h = miliRentgens per or, sau 0500 Sv/h = microSieverts per or (gamma i X) i 0-50000 CPM = counts per
minute (alfa si beta). Sensibilitatea instrumentului avnd ca referin izotopul
este de 25 impulsuri/sec/1mR/h. Dac se utilizeaz pentru detecia
125
60
Co
I, se recomand
0.5 mCi sau mai mult. Nivelul minim detecie este n acest caz aproximativ 0.02 Ci .
137
Modul de lucru:
a) Indiferent ce tip de radiaie urmeaz a fi detectat, se va face o determinare iniial
a fondului cosmic, adic numrul de impulsuri/100 secunde nregistrate de instrument
n lipsa sursei studiate. La fiecare 100 secunde se noteaz valoarea (timp de cinci
minute) i apoi se va face media, care reprezint de fapt fondul cosmic. Determinarea
numrului de particule radioactive care ajung la detector se face plasnd sursa
succesiv la diferite distane: 20 cm, 15 cm, 10 cm, 5 cm, 1 cm. Se nregistreaz de
fiecare dat numrul de impulsuri / 100 secunde, repetndu-se msurtorile de cteva
ori i apoi se face media pentru fiecare distan aleas. Numrul de particule care
provin exclusiv de la surs se afl prin scderea fondului cosmic din valoarea medie a
impusurilor pentru fiecare distan. Se va reprezenta grafic numrul de impulsuri
provenite de la surs, n funcie de distan, iar din grafic se va determina distana de
njumtire. Se completeaz tabelul urmtor:
Distana sursa contor
cm
Nr.imp./100sec provenite
de la sursa (media)
Infinita(fond cosmic)
1cm
5 cm
10 cm........
b) Se fixeaz distana dintre sursa radioactiv i detector la una din valorile de mai
sus. Se introduc pe rnd, ntre surs i detector, plci de plumb de diferite grosimi i
se nregistreaz de fiecare dat numrul de impulsuri. Se va reprezenta grafic numrul
de impulsuri provenite de la surs n funcie de grosimea stratului de material
absorbant, iar din grafic se va determina distana de njumtire. Apoi se va calcula
ln 2
0,693
139
CUPRINS
I.
1.
2.
3.
4.
SIMONA
CAVALU
Colaboratori :
Pop Leontin
Loredana B
141
142
143