Sunteți pe pagina 1din 143

I.

PROPRIETILE GENERALE ALE


LICHIDELOR
1.

DETERMINAREA

COEFICIENTULUI

DE

TENSIUNE

SUPERFICIAL A LICHIDELOR
Noiuni teoretice
Stratul de la suprafaa unui lichid care are grosimea razei sferei de aciune
molecular, 5.10-9m, se numete strat superficial. Toate moleculele cuprinse n acest
strat vor fi atrase spre interiorul lichidului datorit faptului c forele de atracie
(coeziune) exercitate de moleculele din interior (din lichid) sunt mai mari dect cele
exercitate de moleculele de gaz n contact cu suprafaa lichidului. Din cauz c
moleculele acestui strat sunt atrase spre interior, stratul superficial va exercita asupra
lichidului o presiune. Moleculele din stratul superficial au o energie potenial mai
mare dect cele din interior. Pe de alt parte, se tie c n general, sistemele se gsesc
n echilibru cnd energia lor potenial devine minim. De aici rezult c starea de
echilibru se realizeaz cnd exist cele mai puine molecule la suprafa, de unde
rezult tendina de micorare a suprafeei libere a lichidului.
Forele tangeniale care iau natere n stratul superficial i care micoreaz
suprafaa liber a lichidului poart numele de tensiune superficial. Din cauza
existenei tensiunii superficiale suprafaa liber a unui lichid ntr-un vas este plan,
iar picturile de lichid n cdere adopt forma sferic. Fora de tensiune superficial
este dat de relaia:
F = l , unde

este o constant ce depinde de natura lichidului i se numete

coeficientul de tensiune superficial, iar l este lungimea conturului pe suprafaa


lichidului. Se exprim cu ajutorul relaiei = F/1 i are unitatea de masur N/m n
sistemul internaional de uniti.
Coeficientul de tensiune superficial este deci egal cu fora ce se exercit n
planul suprafeei (sau tangent la aceasta pentru suprafeele curbe), perpendicular pe
1

unitatea de lungime. El scade cu creterea temperaturii datorit creterii energiei


cinetice a moleculelor lichidului.
Pentru coeficientul de tensiune superficial se poate utiliza i definiia ce rezult
din amplificarea cu distana (d), pe care se deplaseaz fora, conform formulei:

energie
F d

ld
sup rafata

[N/m; J/m2 ]

Se observ c valoarea coeficientului de tensiune superficial reprezint, de fapt,


energia liber a unitii de suprafa a stratului superficial.
ntr-un sistem izolat care evolueaz izoterm se produc numai acele procese ce duc
la scderea energiei libere a sistemului. n consecin, energia liber a stratului
superficial poate scdea att prin reducerea suprafeei libere ct i prin diminuarea
coeficientului

de tensiune superficial. Pentru o soluie, la echilibru, stratul ei

superficial va avea suprafaa minim posibil, iar pe aceast suprafa se vor fixa
acele molecule din soluie care reduc coeficientul de tensiune superficial, el lund
valoarea minim posibil.
Substanele organice coninnd n molecule att grupuri polare, hidrofile, ct i
lanuri hidrocarbonate, hidrofobe, au tendina de a se acumula la suprafaa soluiei,
prin aceast energie liber a sistemului reducndu-se. Explicaia rezid n aceea c
lanurile hidrofobe vor fi excluse din faza apoas pe cnd gruprile hidrofile vor
rmne incluse n stratul superficial al fazei apoase. Are loc, deci, un fenomen de
absorbie, moleculele rmnnd fixate la suprafaa soluiei. Astfel, coninutul de
molecule de acest tip este mai mare n stratul superficial dect n straturile profunde
ale soluiei. Scderea energiei libere a sistemului prin acest fenomen se traduce prin
reducerea energiei libere pe unitatea de suprafa a stratului superficial, adic a
coeficientului de tensiune superficial. Astfel de substane, care se absorb n stratul
superficial al soluiilor i duc la scderea coeficientului de tensiune superficial, se
numesc tensioactive. Cantitatea de substan tensioactiv absorbit pe stratul
superficial este o funcie cresctoare de concentraia soluiei. Mrind progresiv
concetraia soluiei,cantitatea de substan absorbit va crete la rndul ei,
determinnd scderea progresiv a coeficientului de tensiune superficial. Aceast
scdere continu pn nc se mai pot absorbi noi molecule i nceteaz n momentul
2

n care suprafaa este saturat, adic este n ntregime ocupat. Creterea n


continuare a concentraiei soluiei nu mai duce la scderea tensiunii superficiale,
aceasta avnd valoarea minim posibil pentru soluia dat, ntruct i cantitatea de
substan absorbit pe unitatea de suprafa este maxim posibil.
Substanele hidrofile, (electroliii sau substanele puternic polare) au molecule
care interacioneaz cu apa mai puternic dect moleculele de ap ntre ele. Datorit
acestui fapt, la dizolvarea unei astfel de substane n ap starea de energie minim a
sistemului se realizeaz dac moleculele solvite sunt nconjurate din toate prile de
molecule de ap. Ca urmare, ele au tendina de a se acumula n interiorul soluiei
apoase i nu se vor fixa pe stratul superficial. Coeficientul de tensiune superficial a
unei astfel de soluii va fi egal sau cu puin crescut n raport cu cel al apei pure.
Substanele care la dizolvarea lor nu modific sau cresc foarte puin coeficientul
de tensiune superficial se numesc tensioinactive.
Creterea uoar a coeficientului de tensiune superficial ce se observ uneori la
astfel de soluii se explic prin atracia mai mare la care sunt supuse moleculele
stratului superficial de ap prin prezena n interiorul soluiei a moleculelor puternic
hidrofile. i n acest caz energia liber a sistemului este minim, creterea discret a
energiei libere a stratului superficial fiind nsoit de o scdere foarte exprimat a
energiei libere a soluiei prin interaciunea dintre moleculele hidrofile i ap.
Pentru serul sanguin normal coeficientul de tensiune superficial este de 67
68.10-3 N/m, iar pentru urin 70.10-3 N/m. Aceste valori sunt numai cu puin mai mici
dect coeficientul de tensiune superficial al apei la 20 C, care este 72.10-3 N/m. Ele
se reduc considerabil ori de cte ori se acumuleaz n snge i se elimin prin urin
substane tensioactive (de exemplu: sruri biliare n caz de icter mecanic).
Principiul msurtorii
Un lichid lsat s curg liber printr-un orificiu foarte strmt aflat la captul
inferior al unui tub capilar aezat n poziie vertical curge sub form de picturi.
Fiecare pictur se desprinde de captul tubului n momentul cnd greutatea i G
devine egal cu forele de tensiune superficial F exercitate pe circumferina care
formeaz linia de contact dintre marginea tubului i baza picturii. Vom avea deci: G
= F.
3

Deoarece G = mg i F = 2 r atunci:
m g = 2 r , unde m = masa picturii, g = acceleraia gravitaional.

n momentul desprinderii, greutatea picturii este proporional cu constanta de


tensiune superficial a lichidului (legea lui Tate). n locul masei unei picturi putem
lua produsul dintre volumul ei (v) i densitatea lichidului (d), deoarece m = v d.
vdg = 2 r

(1)

Volumul unei picturi e greu de msurat direct, ns l putem determina indirect,


msurnd exact un volum V de lichid (volumul stalagmometrului), determinnd
numrul de picturi (n) pe care l d acest volum la curgerea spontan prin orificiul
capilar i fcnd raportul:

v
n

Introducnd aceasta valoare a lui v n (1) avem:


v
dg
n

2r

(2)

Lund un al doilea lichid, de exemplu apa, vom avea o relaie asemntoare :


v
d g = 2 r a
na a

(3)

mprind relaia (2) cu (3) obinem:


d na

ds n a

(4)

de unde coeficientul de tensiune superficial a lichidului respectiv:

na d

n da

(5)

Relaia (5) ne permite s calculm coeficientul de tensiune superficial a unui lichid


determinnd numrul de picturi dat de un volum anumit de lichid i numrul de
picturi dat de acelai volum de ap.
Aparatur :

Stalagmometrul Traube se compune dintr-un tub de sticl care prezint un rezervor


prevzut cu dou repere circulare a i b. Tubul n poriunea lui inferioar se continu
cu un capilar c, care se termin cu o suprafa lrgit i lefuit orizontal d. Deasupra
i dedesubtul reperelor a i b sunt gravate pe tub mai multe diviziuni care servesc la
determinarea fraciunilor de pictur.
Mod de lucru
Stalagmometrul, dup ce a fost splat
i uscat la trompa de vid, se prinde
vertical cu ajutorul unei cleme pe un
stativ i sub el se aeaz un vas n care
s cad picturile (vezi figura
alturat). Se aspir apa distilat pn
deasupra reperului a, cu ajutorul unui
tub de cauciuc ataat la partea
superioar a stalagmometrului, cu
precauia s nu se formeze bule de aer.
Se numr picturile care se desprind n
timpul cnd se scurge volumul
lichidului de la reperul a pn la reperul
b. Fie na numrul lor i da densitatea
apei la temperatura de lucru.
Fig1.1.Stalagmometrul Traube

Se spal stalagmometrul cu alcool i se usuc la trompa de vid. Se aspir n


stalagmometru lichidul i se numr picturile desprinse ntre aceleai repere. Fie n
numrul lor i d densitatea lichidului la temperatura de lucru. Se repet operaia de
mai multe ori i se face media determinrilor.
Rezultatele se trec ntr-un tabel de felul celui ilustrat mai jos.
n funcie de substana tensioactiv utilizat se vor face determinri la mai multe
concentraii urmrindu-se scderea tensiunii superficiale cu concentraia. Rezultatele
se vor reprezenta grafic.
Nr.
soluie

= f(c)

Concentraie

d
[g/c
m3 ]
(x103
Kg/
m3)

Nr
de
pic
tu
ri
n

Nr.mediu
de
picturi

[dyn/cm]

(x10-3 N/m3)

2. DETERMINAREA COEFICIENTULUI DE VSCOZITATE


Noiuni teoretice
Mediile interne ale organismului, sngele, lichidul interstiial, citoplasma etc., sunt
sisteme disperse care posed proprietile fizice generale ale fluidelor. Vscozitatea
este o proprietate a fluidelor determinat de frecarea intern ce ia natere n masa
fluidului ca urmare a micrii straturilor care se deplaseaz unele fa de altele cu
viteze diferite. S considerm c exemplu de fluid un lichid aderent, apa, care curge
cu viteza mic printr-un tub. Se constat c viteza de curgere este mai mic n
apropierea pereilor tubului i mai mare de-a lungul axului. Explicaia fenomenului
este urmtoarea: un strat de ap ader de pereii tubului i rmne n repaus, de acesta
se freac stratul urmtor, care se va mica cu o vitez relativ mic. Straturile
urmtoare se vor mica cu o vitez din ce n ce mai mare pn ce se atinge o vitez
constant, dependent de presiunea de curgere i de vscozitate. O astfel de curgere la
care deplasarea lichidului se face prin straturi paralele cu direcia de curgere se
numete curgere laminar. Rezult c n masa lichidului care curge prin tub exist
un gradient de vitez perpendicular pe direcia de curgere. Un fluid la care deplasarea
reciproc a straturilor s-ar face fr frecare se numete fluid perfect.
Forele de frecare intern care apar la curgerea unui fluid determin vscozitatea
fluidelor. Ea depinde de natura lichidului ca i de concentraia, mrimea i forma
moleculelor dizolvate. Pentru definirea coeficientului lui de vscozitatea s
considrm n interiorul unui fluid un strat de molecule aezate ntr-un plan orizontal,
de suprafaa S, care se deplaseaz prin masa lichidului n planul propriu cu viteza v.
Din cauza frecrii interne straturile vecine vor fi antrenate cu o for F, a crei
valoare depinde de mrimea suprafaei de contact S , de variaia vitezei v , de
distana l dintre straturi i de o constant care depinde de natura lichidului. Relaia
care leag toate aceste mrimi este urmtoarea:

v
S
l

Fig.2.1. a) Curgerea laminar;

b) Apariia forelor de vscozitate

Din relaia de mai sus, valoarea constantei va fi:

F l

S v

Aceasta constant se numete coeficient de vscozitate i este o mrime caracteristic


pentru fiecare lichid.
Msurarea coeficientului de vscozitate are importan att pentru cercetarea
medical, unde poate fi utilizat pentru determinarea formei i mrimii moleculelor
dizolvate, ct i pentru aprecierea modului de desfurare a fenomenelor
hidrodinamice din organism. Astfel creterea coeficientului de vscozitate a sngelui
duce conform legii lui Poiseuille, la scderea debitului sanguin dac fora de
contracie a inimii rmne constant. n acest caz meninerea constant a debitului
sanguin nu se poate realiza dect prin creterea forei de contracie a muchiului
cardiac, deci i a tensiunii arteriale.
Principiul determinrii
Pentru calcularea coeficientului de vscozitate se utilizeaz trei categorii de metode:
1) metode bazate pe curgerea lichidelor prin tuburi capilare conform legii lui
Poiseuille; 2) metode bazate pe rezistena opus de ctre fluide la cderea unei sfere,
conform legii lui Stokes; 3) metode de antrenare, bazate pe antrenarea n micarea
de rotaie a unui cilindru suspendat n masa lichidului. n cadrul lucrrilor de
laborator noi vom utiliza numai metode bazate pe legea lui Poiseuille. Relaia
stabilit de Poiseuille pentru cantitatea de lichid ce trece printr-un tub cilindric, dac
curgerea se face laminar, este urmtoarea:
7

r4 P t
8l

unde Q este volumul de lichid care se scurge n timpul t, r este raza tubului capilar, l
este lungimea capilarului i P presiunea de curgere. Dac tubul capilar se gsete n
poziie vertical presiunea de curgere P este egal cu presiunea hidrostatic a
coloanei de lichid n tub. Notnd nlimea coloanei de lichid cu h, densitatea
lichidului, , i acceleraia gravitaional g, vom avea urmtoarea relaie:
P=gh
ntroducnd n relaia de mai sus, avem
Q

r 4h g t
8 l

Din aceast relaie se poate calcula coeficientul de vscozitate al lichidului dac


msurm mrimile cuprinse n relaie. Raza unui tub capilar este greu de msurat cu
precizie, n practic utilizm un procedeu care elimin din calcul aceast mrime.
Astfel se fac determinri comparative lsnd s curg prin acelai tub capilar lichidul
al crui coeficient de vscozitate vrem s-l aflm i apoi un volum egal de ap
distilat al crui coeficient de vscozitate este cunoscut. Vom avea pentru lichid i ap
distilat urmatoarele relaii:

r 4 hgt
8l Q

r 4 a gta
8l Q

mprind aceste relaii obinem:

a a ta

i a

t
a ta

Ultima relaie se va folosi la calculul coeficientului de vscozitate, innd cont de


valorile constantelor a = 1 Cp = 10-3Ns/m2 si a = 0,997 g/cm3.
Aparatur
Pentru determinarea coeficientului de vscozitate vom utiliza vscozimetrul Ostwald
(figura de mai jos).

Fig.2.2 . Vscozimetrul Ostwald.

El se compune dintr-un tub capilar (c), a


crui extremitate se continu cu un tub
n form de U i cu un rezervor (R),
prelungit cu un tub vertical (V).
Extremitatea superioar a capilarului se
continu cu o bul (B) care la poriunea
superioar are un tub prevzut cu o
gtuitur.Pe gtuitura superioar este
trasat un reper a, la fel i pe cea
inferioar a bulei, b. Pentru a menine
constant temperatur, n determinrile
de precizie vscozimetrul se introduce
ntr-un termostat.

Mod de lucru
Aparatul se spal bine i se usuc la trompa de vid. Se introduce cu o pipet o
cantitate determinat de lichid n rezervorul vscozimetrului, aceeai cantitate pentru
toate soluiile. Se aspir ncet lichidul n rezervorul situat la partea superioar a
tubului capilar. Se las lichidul s se scurg determinndu-se cu ajutorul unui
cronometru timpul necesar scurgerii lichidului ntre cele dou repere. Pentru aceeai
soluie se efectueaz mai multe determinri, i se va face media rezultatelor care se
trec n tabelul urmtor:
Vscozimetrul Oswald
Nr.

[g/cm3

Solu

ie

Timp
de
scurg
ere

Timp
medi
u de
scurg
ere

cP(x10-3 Ns/m2)

1.
2.
Detreminarea vscozitii sngelui are o deosebit importan medical deoarece
vscozitatea sngelui variaz dup cum urmeaz :
- snge total, de la 3,5 pna la 5,4 10 -3 N s/m
- valori medii :- femei 4,510 Ns/ m
-brbai : 5,010 N s/ m
9

- plasm sanguin, de la 1,9 2,3 10 N s /m


- serul sanguin, de la 1,6-2,2 10 N s /m
Vscozitatea sngelui total este mai crescut la brbat fa de femeie, la adult
fa de copil, mai mare la sngele venos dect cel arterial, depinznd de concentraia
de CO2 din snge. Din punct de vedere patologic vscozitatea sngelui crete n
cazul poliglobuliei i leucemiei, scade n cazul anemiei depinznd de volumul i
forma hematiilor, precum i n hipoproteinemie.

10

3. DENSIMETRIE
Noiuni teoretice
Densitatea este o caracteristic fizic proprie fiecrei substane. Se definete
densitatea absolut ca fiind masa unitii de volum, adic raportul d = m/v exprimat
n kg/m3. Dac n locul masei din formula de mai sus se introduce greutatea
substanei, care variaz n raport cu acceleraia gravitaional (G = mg ), atunci se
poate defini noiunea de greutate specific ( = mg/V).
Se mai definete densitate relativ ca fiind raportul dintre densitatea absolut a
unei substane i densitatea absolut a apei distilate la + 4 oC (cnd este maxim ) sau
la o alt temperatur dat:
dr =

d
V
m
m
=
.
=
, care este o mrime adimensional. Menionm c masa
da
m
m
V
a
a

unui metru cub de ap distilat la:


0oC este 999,8 kg
+ 4oC este 999,9 kg 1000 kg
+ 25oC este 997,0 kg
ceea ce demonstreaz c densitatea variaz odat cu modificarea temperaturii, astfel
c pentru msurarea riguroas a densitii absolute se face ntotdeauna corecia de
temperatur necesar ( dcorectat = dr da

toC

unde densitatea apei distilate la toC se

cunoate din tabele ).


Dac se afl direct prin cntrire valorile m i m a, se poate calcula densitatea
oricrei substane dorite. Densitile diferitelor materiale exprimate n 103 kg/m3:
platin
aur
mercur
fier
aluminiu
sulf
CO2solid

21,40
19,30
13,59
7,86
2,71
2,00
1,53

O2 lichid
ghea
potasiu
petrol
alcool
lemn stejar
H2 lichid

1,14
0,92
0,86
0,80
0,79
0,70
0,07

Conform principiului lui Arhimede, un corp scufundat ntr-un lichid este mpins
de sus n jos cu o for egal cu greutatea volumului de lichid dezlocuit. Cum fiecare
lichid are o anumit densitate nseamn c prin scufundarea aceluiai corp n diferite
11

lichide, dei se dislocuiesc volume egale, acestea vor avea greuti diferite, ceea ce
genereaz fore de mpingere diferite. Pe acest raionament se bazeaz determinarea
densitii lichidelor cu ajutorul densimetrelor (areometrelor), balanei MohrWestphal, metoda Van Slyke pentru densitatea sngelui etc.
3.1

DETERMINAREA DENSITII LICHIDELOR I SOLIDELOR CU

AJUTORUL PICNOMETRULUI I A BALANEI DIGITALE


a) La lichide: Deoarece se lucreaz cu unul i acelai picnometru, volumul apei i
a lichidului studiat sunt aceleai, urmnd doar s msurm masele cu ajutorul unei
balane electronice. Vom introduce notaiile:
m0 = masa picnometrului;
ma = masa picnometrului umplut cu ap distilat;
ml = masa picnometrului umplut cu lichidul studiat;
m = masa lichidului studiat;
v = volumul picnometrului, egal cu al apei sau al lichidului studiat;
da = densitatea apei la temperatura de lucru ( se ia din tabele );
d = densitatea lichidului studiat.
deci

m = m1 m0

v = (ma m0 )/ da
d = m/v =( ml m0 )/ (ma m0 ) da
b) La solide:
Volumul unui corp solid se poate afla indirect prin msurarea masei de ap
dislocuite de ctre acel corp. Astfel vom introduce i notaiile:
ms = masa corpului studiat;
mas = masa picnometrului care conine corpul studiat i n rest este umplut cu ap
distilat;
vs = volumul corpului studiat ( egal cu volumul apei dislocuite de ctre corpul
studiat, la introducerea n picnometru );
ds = densitatea corpului studiat.
deci

vs = (ma + ms mas )/ da

ds = ms/vs = ms / (ma + ms mas ) da


12

Dispozitive: Picnometrele sunt vase de sticl de diferite capaciti prevzute cu


dopuri strbtute de o capilar fin. Cele mai pretenioase sunt prevzute cu
termometre iar capilarele sunt marcate cu un reper (R). Unele picnometre pentru
corpuri solide nu au dop iar pe gtul lor este trasat reperul R
(fig. 3.1.). Alte instrumente necesare sunt balana digital i termometrul digital.
Fig. 3.1. Tipuri de picnometre.

Fig.3.2. Balana digital

Mod de lucru
Dup ce se spal bine picnometrul i se usuc, se cntrete cu precizie masa sa
mpreun cu dopul (m0). Se umple apoi cu ap distilat astfel nct la punerea dopului
apa s refuleze prin capilara acestuia iar n interior s nu rmn bule de aer. Se
terge exteriorul picnometrului i dopul astfel nct capilara acestuia s rmn plin
cu lichid. Cntrind acum picnometrul cu ap obinem valoarea ma. Se procedeaz
identic i pentru aflarea celorlalte valori necesar calculului (masa picnometrului cu
13

lichidul de studiat-de exemplu soluie hidro-alcoolic- i masa picnometrului care


conine corpul solid -de exemplu cteva bile de plumb).
Pentru obinerea unor rezultate precise se va avea n vedere totdeauna grij ca:
- lichidul din interior s nu conin bule de aer;
- corpul solid s-l cntrim numai cnd este perfect uscat;
- s lum n lucru o cantitate ct mai mare de substan solid;
Densitatea apei (da) necesar calculelor se afl din tabele, corespunztor
temperaturii de lucru ( temperatura se va msura cu termometrul digital).
Calculele i prezentarea rezultatelor
Dup aflarea tuturor maselor prin cntrire, facem nlocuirile n formulele respective
i calculm densitile substanelor studiate (plumb, aliaje).
Rezultatele le vom trece ntr-un tabel:
Nr.

Substan

1.

lichid

2.

solid

m0

ma

ml

ms

mas

dl

ds

103 kg/m3

103 kg/m3
-

14

3.2 DETERMINAREA DENSITII LICHIDELOR CU AREOMETRELE


Dup cum am artat n introducere, un corp scufundat ntr-un lichid va rmne n
echilibru numai cnd greutatea va fi egal cu cea a volumului de lichid dislocuit. Pe
acest principiu sunt construite areometrele, formate n principal dintr-o tij de sticl
cu gradaii Tg, o contragreutate G i un termometru T.

Fig.3.3 Utilizarea densimetrelor.


Se observ uor dac d2 > d1, atunci v2 < v1, masa M areometrului rmnnd aceeai
adic: d1 = M/V1 si d2 = M/V2, deci d1/d2 = V1/V2 adic volumul poriunii din
aerometru cufundat ntr-un lichid este invers proporional cu densitatea lichidului.
Areometrele utilizate n laborator au diferite destinaii fiind etalonate corespunztor
(etalonarea se face cu ajutorul unor soluii de densitate cunoscut ).
Cele mai utilizate tipuri de areometre sunt:
- Densimetrul, un areometru care prin scufundare ne d direct densitatea
lichidului prin citirea gradaiei de pe tij Tg n dreptul nivelului lichidului. Precizia
densimetrelor poate fi 10-3 10-4 ( adic 0,001 0,0001 ). Deoarece aceasta comport
o lungime a tijei mare ( respectiv, distane mari ntre gradaii ) se utilizeaz cu succes
o trus de densimetrie, fiecare dintre ele acoperind cu suficient precizie un domeniu
ngust de densiti. De obicei, fiecare densimetru este marcat cu un simbol care ne
permite s transformm densitatea msurat la o anumit temperatur, pentru o alt
temperatur, de exemplu simbolul d415 ne arat c temperatura de lucru este de

15

+15oC, iar densitatea indicat este densitatea relativ n raport cu densitatea apei la
+4oC. Formula cu ajutorul creia putem converti densitatea relativ este:
t1
t1
t1
dt = dT + dT
unde:
t1
dt - densitatea cutat n baza t i la temperatura de lucru t1.
t1
temperatura

dT densitatea msurat n baza T ( nscris pe densimetru ) i la


de lucru t1, factor de corecie.

Exemplu de corecie: cu un densimetru ce are simbol d 15

15

gsim d1515 = 1,6740 i

dorim s o convertim n baza d420 , deci d420 = 1,6740 0,000988 1,6740 = 1,6724.
n practica laboratorului medical se utilizeaz n mod frecvent truse de densimetrie
care permit determinri de densitate n intervale destul de largi.
-Alcoolmetrul, este un densimetru etalonat n baza d1515 i ale crui gradaii indic
concentraia n procente de volum ( % V ) a soluiei alcoolice respective, care se mai
numete i trie real. Cum ns nu se lucreaz ntotdeauna la temperatura 15 oC
nseamn ca vom citi n realitate o trie aparent corespunztoare temperaturii la
care lucrm. Deci va trebui s trecem de la tria aparent la tria real, lucru
realizabil cu ajutorul tabelelor. Cunoscnd tria real care nu este altceva dect
concentraia corectat n procente de volum ( % V ), cu ajutorul tabelelor o putem
converti n procente de greutate ( % G ) sau n g/l sau putem pur i simplu aflm
densitatea d1515 a soluiei alcoolice .
- Urodensimetrul este un areometru special cu scala mult redus, tija fiind
gradat doar ntre 1,000 1,050. Este utilizat frecvent n clinic pentru determinarea
densitii urinei n cadrul explorrilor funciunii aparatului renal. Desigur, dac este
nevoie se fac coreciile de temperatur necesare ( se adaug o unitate densimetric
pentru o variaie a temperaturii cu 3,3oC dac temperatura depete +15oC ).

16

Mod de lucru
Indiferent cu care tip de areometru vom lucra,
vom proceda n acelai fel. ntr-un cilindru de sticl C, se
introduce soluia de cercetat ,S , n suficient cantitate pentru
ca areometrul s poat pluti liber ( acesta se introduce n
soluie cu mult atenie pentru a nu-i sparge partea inferioar
prin lovire de fundul vasului, unde pentru orice
eventualitate se pune si vat ). n momentul cnd areometrul
se afl n echilibru perfect, fr ating fundul sau pereii
cilindrului C, se citete gradaia g pn la care s-a cufundat
n lichid precum i temperatura nregistrat pe termometrul T.
Dup ntrebuinare areometrele se terg i se nchid n cutiile
lor protectoare. Citirea gr gradaiei se face n dreptul prii inferioare a meniscului.

Fig 3.4. Urodensimetrul

Calcule i prezentarea rezultatelor


Dup determinarea densitilor i a concentraiilor vom face coreciile de temperatur
corespunztoare, rezultatele trecndu-le n tablelul urmtor:
Determinri

t1

dT

t1
o

t 1C

10

-6

dt

Tria
Tria
apar.
real.
G%
mas.
sau % V g/l

densimetrie
alcoolmetrice
urodensimetrice

17

4. METODE CALORIMETRICE
4.1. DETERMINAREA CLDURII SPECIFICE A UNUI CORP SOLID
Principiu: Calorimetria este partea termodinamicii care se ocup cu msurarea
cantitilor de cldur. Cldura este o form de energie care se datorete agitaiei
termice i se msoar n jouli (J) sau calorii. O calorie este cantitatea de cldur
necesar unui gram de ap distilat pentru a-i ridica temperatura cu un grad, de la
19,5 0 la 20,50 C. Unei calorii i corespunde 4.18 jouli n sistemul SI. Cantitatea de
cldur primit de un corp, depinde de masa m a lui, de natura corpului, caracterizat
printr-o constant caracteristic, notat cu c, i de diferena de temperatur t
adic:
Q = m .c. t
De aici : c =

Q
;
mt

(1)

dac m = 1 i t = 10 obinem, c = Q.

Deci cldur specific este cantitatea de cldur necesar unitii de mas dintr-un
corp pentru a-i ridica temperatura cu un grad. n sistemul CGS ea se msoar n

c =

cal
g .grd

iar n sistemul internaional c =

J
.
Kg .K

Cldura specific a apei este de 1 cal/g.grd = 4,18 J/KgK. Ea este mult mai mare
dect a celor mai multe corpuri. Produsul dintre cldura specific i masa corpului se
numete capacitate caloric i se notez cu C = m.c. Produsul dintre cldura specific
i masa molar M se numete cldur specific molar, CM=c.M sau cldur molar.
Cldura specific a unui corp poate fi determinat prin mai multe metode, cea mai
simpl are la baza metoda amestecurilor. Ea se bazeaz pe schimbul de cldur care
se realizeaz prin punerea n contact a dou sau mai multe corpuri cu temperaturi
diferite. De exemplu dac introducem ntr-un calorimetru cu ap un corp a crui
temperatur este mai ridicat dect cea a apei el va ceda o anumit cantitate de
cldur. n momentul echilibrului termic, conform principiilor calorimetrului, este
valabil egalitatea:

18

Q1 = Q2 Q3 , unde Q1 reprezint cantitatea de cldur cedat de corpul mai cald, Q2


cantitatea de cldur absorbit de apa din calorimetru i Q3 cantitatea de cldur
absorbit de calorimetru, agitator i termometru.
Q1 = m ( t t2 ),

Q2 = m1c1 ( t2 t1 ),

Q3 = m2c2 ( t2 t1 )

unde: m este masa corpului de analizat, m1 este masa apei din calorimetru, m 2 este
masa calorimetrului, agitatorului i a termometrului, c este cldura specific a
corpului, c1 este cldura specific a apei, c2 este cldura specific a calorimetrului,
termometrului i agitatorului, t2 este temperatura final a amestecului( de ehilibru) , t
este temperatura iniial a corpului, t1 este temperatura iniial a apei din calorimetru,
agitator, termometru. Deci t > t2 > t1.
nlocuind valorile pentru Q1, Q2 i Q3 obinem:
mc ( t t1 ) = ( m1 c1 + m2 c2 ) ( t2 t1 )
Capacitatea caloric a calorimetrului ( m2 c2 ) se determin n prealabil i poart
denumirea de echivalent n ap al calorimetrului (notat cu A).
Astfel se poate calcula cldura specific a unui corp innd cont de valoarea
echivalentului n ap al calorimetrului i de faptul c pentru ap cldura specific este
egal cu 1 cal/g grad ( sau 4185 J/kg grad ), avem:
c =

( m1 .c1 A)(t 2 t1 )
m (t t 2 )

Dispozitive: Vasul calorimetric este compus dintr-un vas cilindric B, introdus


ntr-un vas mai mare C i izolat termic.
Vasul B conine o cantitate precis msurat de ap, un termometru D i un agitator E (
Fig. 4.1 ).

Fig.4.1 Prile componente ale unui calorimetru.

Mod de lucru;
- Se introduce n calorimetru o cantitate de ap precis msurat, m1.
19

- Se msoar temperatura apei din calorimetru t1 ( fie cu un termometru cu mercur, fie


cu un termometru electric )
- Se cntrete corpul; apoi se introduce ntr-un vas cu ap care fierbe, unde se las
cteva minute.
- Se msoar temperatura apei care fierbe i care reprezint temperatura iniial a
corpului t.
- Se introduce repede corpul nclzit n calorimetru, agitnd lent apa din calorimetru.
- Se urmrete indicaia termometrului. n momentul n care ea este staionar se
citete valoarea. Aceasta este temperatura final a amestecului, t2.
Pentru a determina cldura specific a corpului se introduc datele n relaia de mai
sus. Msurtorile i calculele se vor efectua pentru diferite materiale: fier, plumb,
aluminiu, aliaje.
Rezultatele se trec n tabelul urmtor:
Nr.
1.

Materialul
A
studiat
J/kg
( cal/g)
Pb

2.

Al

det.

m
g

m1
g

t2
0

t1
0

t
0

c
J/kg grad
(cal/g.grad)

4.2. DETERMINAREA CALDURII SPECIFICE A UNUI LICHID


Pentru a determina cldura specific a unui lichid se folosete unpurttor de cldur
numit termofor. Termoforul este un balon de sticl prevzut cu un tub subire, el
poate transporta aceeai cantitate de cldur att lichidului de referin ( apa ) ct i
lichidului de cercetat, deci este valabil ecuaia calorimetric

Qtermofor = Qapa i

Qtermofor= Qlichid.
Mod de lucru:
Se msoar masa m

vas

a vasului interior al calorimetrului, ma-masa apei ce se

introduce n el i temperatura ta a sistemului ap-calorimetru.

20

Termofor
b

Se umple balonul pn la reperul a cu un lichid colorat i se nclzete ntr-un vas cu


ap cald pn lichidul din tub atinge nivelul b. n acest proces de nclzire
termoforul primete cantitatea de cldur Q. Se scoate termoforul din baia cald i se
introduce n apa din calorimetru., urmrind coborrea nivelului de la b la a.

acest proces de rcire termoforul va ceda apei exact aceiai cantitate de cldur pe
care a primit-o. Dup stabilirea echilibrului termic se msoar temperatura final tf.
Se repet aceleai operaii cu lichidul de cercetat. Dup golirea apei din calorimetru
se introduce o mas de lichid ml i se msoar temperatura lui t l . Masa lichidului se
poate afla din produsul volumului de lichid i densitatea lui. Se nclzete din nou
termoforul n baia cald pn ce lichidul din tub atinge nivelul b dup care se
introduce

n calorimetrul cu lichid i se ateapt atingerea nivelului a, iar

temperatura de echilibru va fi te . Cantitatea de cldur cedat lichidului n aceste


condiii este egal cu cea cedat apei. Cantitatea de cldur primit de ap i de vasul
interior al calorimetrului va fi :
Q = m aca ( t f - t a ) + m vas.cvas ( t f t a )
Cantitatea de cldur

primit de lichidul de cercetat

i de vasul interior

al

calorimetrului va fi:
Q = m l cl ( t e t l ) + m vasc vas( t e t l )
21

Dar m vascvas = C (capacitatea caloric a vasului ) care este deja cunoscut.


m a .c a ( t f - t a ) + C ( t f t a ) = m l .c l ( t e - t l ) + C ( t e t l )
cl =

rezult

m a .c a (t f t a ) C (t f t a t l t e )
m l (t e t l )

Se va determina cldura specific a dou lichide diferite (alcool etilic i soluie de


acid acetic). Se tie c apa are c a = 1 cal/gr.grd, iar n general cldurile specifice ale
lichidelor obinuite sunt mai mici dect a apei.

4.3. DETERMINAREA VARIAIEI DE ENTALPIE LA DIZOLVARE


n sistemele biologice vii au loc o serie de transformri energetice nsoite de
producere de cldur. Desigur, rolul principal n producerea cldurii l au procesele
de oxidare ale substanelor nutritive, iar o parte mai mic o au i procesele de
hidroliz, de dizolvare etc., procese care au loc la presiune constant (1atmosfer ).
Pentru a studia aceste procese s-a introdus o funcie de stare numit entalpie (H), care
poate fi exprimat cu ajutorul relaiei:
H = U + pV

(1)

Unde U

este energia intern a sistemului, p este presiunea la care se gsete sistemul iar V
este volumul lui. Variaia entalpiei H = H2 - H1 reprezint cantitatea de cldur pe
care sistemul o schimb cu mediul exterior ntr-un proces izobar,

H = Qp,

Q p = U + p V (2)

Procesul de dizolvare a substanelor este nsoit de cldura de dizolvare, care depinde


de interaciunea ionilor sau moleculelor substanei cu moleculele dizolvantului. La
dizolvarea unei substane cristaline n ap au loc urmtoarele fenomene: a)
distrugerea reelei cristaline de ctre moleculele de ap dipolare, care se interpun
ntre ionii srii, energia ce trebuie cheltuit n acest proces se numete energie de
reea Hr i b) solvatarea (hidratarea) lor cnd are loc o degajare de cldur
datorit interaciunilor ion-dipol, numit energie de solvatare H s.
22

Conform legii lui Hess, suma cantitilor de cldur ce nsoete un proces este
constant.

Hdiz = H r + H s

(3)

Energia de reea Hr are valoarea de cca 102 cal /mol i este pozitiv deoarece este
absorbit de sistem, iar energia de solvatare H s are cam aceeai valoare dar este
negativ, deoarece ea este degajat de ctre sistem. Entalpia de dizolvare (cldura de
dizolvare) poate fi pozitiv (dizolvarea endoterm ) sau negativ
(dizolvare exoterm ) dup cum energia de reea este mai mare sau mai mic dect
energia de solvatare. Cldura degajat sau absorbit se msoar n calorii /mol sau n
jouli/mol. Cantitatea de cldur Q primit sau cedat de un corp de mas m i cldura
specific c depinde de variaia temperaturii t adic:
Q=mct

(4)

Produsul dintre cldura specific i masa lui se numete capacitate caloric :


C = m. c , Deci:
Q=C t

(5)

Pentru determinarea cldurii de dizolvare se aplic ecuaia calorimetric conform


creia cantitatea de cldura absorbit de un sistem este egal cu cea degajat de alt
sistem, cu care este n contact. n cazul dizolvrii unor sruri, cldura primit pentru
dizolvare (Qp ) este egal cu cea cedat de sistemul calorimetric (Q cal ) i de cldura
cedat de solvent (Q

sol

). Cldura cedat de calorimetru este Qcal = C t , iar cea

cedat de solvent este Qsol. = m s.c s. t, deci cldura total este:

H = Q p = Q sol + Q cal = m sc s t + C t = ( m scs + C ) t

(6)

unde ms este masa soluiei ( masa apei + masa srii ), c cldura specific a soluiei
care se poate egal cu cea a apei (1 cal/gr.grd.). Constanta calorimetrului C se poate
determina din calcul. Entalpia de dizolvare se raporteaz la un mol de substan.
Modul de lucru:
Se cntresc urmtoarele: vasul interior al calorimetrului i agitatorul, masa de ap
ce se va introduce n acest vas i sarea pe care vrem s-o dizolvm, ntr-o eprubet. De
exemplu: utilizai 200 moli ap (1Map = 18 g ) pentru 1mol sare. Se introduce
eprubeta cu sare n apa din calorimetru i se msoar temperatura din minut n minut,
23

pn ce ea rmne constant. Se va folosi termometrul digital. Se vars coninutul


eprubetei n ap, se agit pn la dizolvarea srii. Se msoar din nou temperatura,
timp de 5 minute, din minut n minut. Pentru a gsi valoarea lui t se reprezint
grafic temperatura n funcie de timp. Se calculeaz apoi variaia entalpiei cu relaia
(6).

Fig.4.2.Variaia
procesul

temperaturii
de

dizolvare.

II. MSURAREA PROPRIETILOR ELECTRICE ALE LICHIDELOR


BIOLOGICE
24

5. CONDUCTOMETRIE
Determinarea concentraiei electroliilor din plasma sanguin este foarte util n
practica clinic deoarece ofer indicaii asupra metabolismului hidromineral, asupra
repartiiei apei n organism ntre cele trei compartimente: intracelular, interstiial i
vascular. n diferite tulburri ale echilibrului hidromineral aceast repartiie poate
suferi modificri importante. Determinarea concentraiei electrolitice a plasmei se
poate face prin mai multe metode: conductivitate electric, crioscopie sau prin
dozarea separate a ionilor. Prin msurarea conductibilitii sau a rezistivitii se poate
face o dozare destul de precis i rapid a electroliilor din plasm, substanele
neionizabile cum sunt urea sau glucoza nefiind implicate n aceste determinri.
Noiuni teoretice de baz:
Se numete

conductivitate electric

rezistenei, a mediului respectiv: G =

G ( conductan ), valoarea invers a


1
, unde
R

R este rezistena electric i

se msoar n ohmi ( ). Pentru conductorii de ordinul II conductibilitatea este o


proprietate caracteristic i depinde de concentraia ionilor n soluie (deci de gradul
de disociere electrolitic), de numrul de purttori de sarcin i de viteza cu care
acetia transport curentul n soluie.
Rezistena electric este dat de relaia:

l
R=
, n care l este lungimea
s

conductorului, s seciunea, rezistena specific sau rezistivitatea ( msurat n


.cm ). Ea depinde de mediului respectiv. Rezistena specific,

, este rezistena

unui cub din acel mediu care are lungimea i seciunea egal cu unitatea.
Conductana mediului G se msoar n -1, numit i Siemens ( S ) . Valoarea
invers a rezistenei specifice se numete conductivitate electric specific :

= 1 = l ( -1cm-1 ) sau ( S/cm )

R.s
Conductivitatea electric specific depinde de natura substanei, de temperatur i de
concentraia soluiei. Pentru a determina conductivitatea electric specific a unui
electrolit este nevoie de o celul de conductibilitate. Aceasta e alctuit din doi
25

electrozi de platin cu suprafaa de cca 1 cm2 i distanai la 1 cm, astfel nct volumul
de lichid s rmn acelai pentru toate soluiile de msurat. Celula

de

conductibilitate se caracterizeaz prin constanta celulei, care este dat de raportul


dintre distana dintre electrozi i suprafaa lor,
k=

l
( cm-1 )
S

Deoarece raportul l/S apare i n legea lui Ohm, constanta celulei se poate determina
prin msurtori de rezisten sau de conductan a unor soluii etalon de electrolit cu
conductivitate cunoscut,
= G. k ( S.cm-1 )
De obicei valoarea lui este dat n prospectul aparatului . Spre exemplu,
conductivitatea soluiilor de KCl la 250 C este dat n tabelul de mai jos.
Concentraia molar
Conductivitatea / -1cm-1/
n practic se utilizeaz

0,1

0,02

0,01

0,01289

0,002768

0,001412

conductivitatea

echivalent sau cea molar adic

conductivitatea raportat la numrul de echivaleni-gram sau de molecule-gram de


electrolit ntr-un cm3 de soluie. Acestea sunt simbolizate prin e i m i pot fi
calculate cu relaia :

e , m = c
= .V
e,m
unde

c e,m = concentraia echivalent sau cea molar, iar V este volumul n cm 3.

Spre exemplu, fie o soluie molar a unei substane care disociaz n n ioni. Fiecare
mol din aceasta soluie conine 6,02. 1023 molecule i posed o sarcin electric egal
cu n. 6,02. 1023 .1,6. 10-19 coulombi sau n Faraday. Prin definiie o concentraie de 1
Echivalent reprezint concentraia ionilor pozitivi sau negativi care au o sarcin
electric de 1 Faraday. n exemplul de mai sus concentraia echivalent a soluiei este
de n Echivalent / litru. Experimental s-a putut demonstra c conductivitatea
echivalent scade dac concentraia crete i se pot observa dou tipuri de
comportamente care caracterizeaz electroliii tari, respectiv cei slabi. La diluii mari
26

( 1/ c

10 4) ea rmne aproximativ constant i se numete conductivitate

echivalent la diluie infinit . Extrapolnd la origine, la diluie infinit - unde


comportamentul tinde s fie ideal - se obine conductivitatea echivalent limita 0.

[-1cm-1 ]

Electroliti tari
0
Electroliti slabi

Ce [eq/l]
Fig.5.1. Dependena conductivitii electrice de concentraie pentru electrolii tari respectiv slabi.

Msurarea conductivitii (rezistivitii) are mare importan n determinarea


concentraiei ionilor din plasma sanguin. Valoarea normal a rezistivitii plasmei
sanguine la temperatura corpului este de 69-79 ohm.cm. O cretere a rezistivitii a
plasmei sanguine, indic o scdere a concentraiei
Concentraia total

electroliilor

din

plasm.

a electroliilor din plasma sanguin se poate determina cu

ajutorul relaiei:
c =

1.6.10 6
[ mEq / litru]
(100 0,25.P)

unde este rezistivitatea electric, iar P proteinemia n g/l, care este dat n funcie
de densitatea plasmei n tabelul de mai jos.
27

Tabelul 5
Densitatea

Proteinemia

Densitatea

g/cm3
1,016
1,017
1,018
1,019
1,020
1.021
1,022
1,023
1,024
1,025

g/l
30,9
34,3
37,7
41,2
44,6
48,0
51,4
54.9
58,9
61,7

cm3
1.026
1,027
1,028
1,029
1,030
1,031
1,032
1,033
1,034
1,035

g/

Proteinemia
g/l
65,2
68,8
72,0
75,5
78,9
82,3
85,7
89,2
92,6
96,3

Valoarea normal a concentraiei totale a electroliilor n plasma este de 310 mEq/l.


Msurtorile conductometrice efectuate n legtur cu proprietile electrice ale
celulelor sanguine indic o valoare a capacitii electrice de 1 F/ cm 2 i o
conductan de 48 mS/cm, iar conductivitatea citoplasmei este de 4 mS/cm .

5.1. Utilizarea multimetrului electrochimic - pH, mV, temperatura i


conductivitate ntr-un singur instrument - CONSORT C 830.
La acest instrument pot fi conectate simultan un electrod de pH, un electrod redox, o
celul de conductivitate i un senzor de temperatur. Parametrii tehnici:
Domeniu de masur: 014 pH, 1000 mV, 0100C, 0100 mS/cm.
Rezoluie : 0.01 pH, 1 mV, 1C, 0.1 S/cm
Precizie - pH/mV 0.5% din valoarea masurat.
- conductivitate- 2% pe toat scala.
Compensarea temperaturii- automat sau manual n intervalul 0-100 C.
Calibrare automat pH 2 puncte i conductivitate 1 punct
Recunoatere tampon pH, 9 valori preprogramate.
Accesorii- celul de conductivitate SK10B
-

electrod de pH SP10B

senzor de temperatur ST10N


28

stativ flexibil cu bra.

Soluii tampon i pentru calibrare.

Pe cutia aparatului exist 5 taste. Cu tasta Mode se poate selecta modul de lucru
(msurarea conductivitii, pH, temperatura) procedura de etalonare i revenire la
modul iniial. Butonul CAL ncepe sau continu etalonarea sau alegerea unei funcii ,
sgeile se folosesc pentru alegerea manual a unei valori sau a unei funcii, iar
tasta ON/OFF pentru conectarea sau deconectarea aparatului . Pe ecran pot aprea
cteva mesaje sau coduri de eroare: / or / = depirea

scalei , / cc / = constanta

celulei n afara domeniului de msur, / CAL/ = greeal de etalonare, / MEM/ =


eroare de memorare. Nu se va introduce celula de conductivitate i electrodul de pH
n acelai timp n soluie.

Fig.5.2. Conductometrul CONSORT 830.

5.1.a. Modul de lucru pentru msurarea conductivitii :


Se selecioneaz gama de conductibilitate apsnd pe butonul Mode.
Dup ce s-a splat electrodul cu ap distilat, pe urm cu soluia etalon de 0,01 M
KCl ( 1413 S/ cm ), se cufund apoi electrodul n aceast soluie.Temperatura
soluiei nu are importan, dar totui ea trebuie s fie cuprins ntre 0 i 30 grade
29

Celsius. Dac temperatura este diferit, se compenseaz manual la valoarea indicat .


Apsai apoi tasta Cal.
Aparatul va arta temperatura de referin / r.20/ sau / r.25 /.Alegei valoarea
dorit i apsai tasta Cal.
Aparatul va indica constanta celulei de ex. / 1.045 / i se etaloneaz automat cnd
afiajul este stabil ( adic tasta Cal nceteaz clipirea ).
Dup ce se cltete electrodul cu ap distilat, apoi cu soluia de msurat, se
introduce n soluia de msurat i se citete valoarea pe ecran.
Dup utilizare, splai electrodul i introducei-l n ap distilat ( adugai puin
detergent pentru a conserva mai bine suprafaa electrozilor de platin).
5.1.b. Modul de lucru pentru msurarea pH.
Se va selecta gama de pH cu ajutorul tastei Mode. Afiajul va indica imediat
valoarea msurat la etalonarea precedent. Pentru o nou etalonare, se apas tasta
CAL.
Se cltete electrodul cu ap distilat i se introduce ntr-unul din tampoane.
Afiajul va indica unul dintre cele 9 tampoane din memorie, spre exemplu 4.01, n
timp ce indicatorul pH de pe ecran clipete. Se alege cu ajutorul sgeilor tamponul
corespunztor i se apas tasta Cal. Aparatul va arta tamponul msurat i se va
calibra automat atunci cnd afiajul este stabil(indicaia Cal de pe ecran nu mai
clipete).
Se va clti electrodul cu ap distilat i se introduce n cel de-al doilea tampon.
Afiajul va indica un nou tampon din memorie (de exemplu 9.18) n timp ce
indicatorul pH de pe ecran clipete. Se alege tamponul corespunztor i se apas tasta
Cal, etalonarea se face automat.
Se cltete electrodul cu ap distilat i se introduce n soluia de msurat, apoi se
citete direct valoarea de pe ecran.
Dup folosire cltii totdeauna electrozii cu ap distilat i pstrai n soluie de KCl
cu concentraie 3...4 M.
5.1.c. Modul de lucru pentru msurarea mV.
Selecionai gama mV cu tasta Mode.
30

Dup cltirea cu ap distilat se introduce electrodul n soluia de msurat i se


citete valoarea pe ecran.
Dup folosire se cltete cu ap distilat i se pstreaz n soluie KCl 3...4 M.
Pentru toate modurile de lucru se poate folosi concomitent senzorul de temperatur.
Aplicaie: 1) Se pregtete o soluie de KCl 1 n i o soluie de CH 3COOH 1 n, n ap
distilat. Apoi se vor prepara diluiile 0,1; 0,01; 0,001 i 0,0001 normal i se va
determina conductivitatea si pH-ul lor. Datele se vor trece n urmtorul tabel. Se va
reprezenta grafic conductivitatea n funcie de concentraie pentru fiecare soluie.
Soluie

Concentraia
[n]

G
[

-1

Siemens]

[ mS/

pH

cm]

2) Se va calcula concentraia total de electrolii din plasm cunoscnd valoarea


normal a rezistivitii electrice a plasmei, conform formulei de mai sus. Proteinemia
se determin din tabelul 5 n funcie de densitatea plasmei.

6. STUDIUL UNEI PILE DE CONCENTRAIE


Noiuni teoretice :
Un electrod metalic introdus n soluie apoas ce conine ionii si va participa la o
reacie redox de tipul :
red
z e- + ox ,
31

unde red - atomul neutru, z valena ionului, e sarcina electronului, ox ionul cu


sarcina +z.
ntruct electronii rmn n metal iar ionii trec n soluie, datorit atraciei
electrostatice dintre ei, se formeaz la interfaa metal-soluie un strat dublu electric.
Diferena de potenial datorit stratului dublu electric se opune trecerii unei noi
cantiti de ioni n soluie. Sistemul ajunge la echilibru cnd tendina de trecere a
ionilor n soluie datorit diferenei de potenial chimic ntre formele red i ox este
anulat de tendina trecerii n sens opus datorit diferenei de potenial electric.

Fig.6.1. Formarea stratului dublu


electric la suprafaa electrodului
metalic

32

Se poate demonstra (avnd n vedere c potenialul chimic n faza metalic este egal
cu potenialul standard) c potenialul electric al electrodului metalic n raport cu
soluia se poate calcula cu formula:
E E0

RT
ln C ox , unde Cox este concentraia molar a ionilor n soluie, R
zF

constanta universala a gazelor, T- temperatura absolut, z- valena ionului, F


numrul lui Faraday (96500 C/mol) , E0 potenialul electric normal al electrodului
(potenialul electric standard dac temperatura este 25C).
Doi electrozi identici introdui n soluii de concentraii diferite, C1ox i C2ox, se vor
ncrca la poteniale diferite, E1 i E2.
E1 = E0 +

RT
ln C1ox
zF

E2 = E0 +

RT
ln C 2ox
zF

La punerea n contact electric a celor dou soluii printr-o punte electrolitic


(coninnd o sare ce disociaz n ioni cu mobiliti egale i deci nu produce potenial
de difuziune) ntre cei doi electrozi apare o diferen de potenial electric, E:
E = E2 E1 =

C
RT
ln 2ox
zF
C1ox

Un astfel de dispozitiv se numete pila de concentraie datorit faptului c diferena


de potenial electric este o consecin a diferenei de concentraie a ionilor n cele
dou soluii.
Cazul discutat mai sus se refer la trecerea n soluie a unor ioni pozitivi. Dac
electrodul utilizat se comport reversibil n raport cu ionii negativi din soluie
diferena de potenial se va calcula cu aceeai formul doar semnul va fi schimbat
datorit schimbrii polaritii stratului dublu electric. n general se va putea scrie:

E=

RT C 2
ln
zF C1

Semnul + utilizndu-se pentru ionii pozitivi, iar

- pentru ionii negativi.

Trecndu-se la logaritmi zecimali se obine forma practic a formulei de mai sus:


33

E=

RT C2
2,302 lg (volti, V) , sau
zF C1

E=

2 302

RT C 2
lg (milivolti, mV)
zF C1

n cele ce urmeaz se va studia potenialul electric generat de o pil de concentraie a


ionului C1- din soluiile de KCl, dispozitiv ce se apropie de comportamentul ideal.
Electrozii utilizai sunt fire de argint pe care s-a depus electrolitic un strat de AgCl
(notai pe scurt electrozi Ag/AgCl) i care sunt reversibili n raport cu Cl-.
Electrodul introdus n soluie mai diluat de KCl va trimite n faza apoas mai muli
ioni Cl-, el ncrcndu-se la un potenial pozitiv n raport cu cel aflat n soluia mai
concentrat. Diferena de potenial, masurat n mV, va fi:
E = - 2302
E = 2302

RT C 2
lg
sau, dup rsturnarea fraciei:
zF C1

RT C1
lg
(mV).
zF C 2

Msurarea diferenelor de potenial generate de pilele de concentraie nu poate fi


fcut cu instrumente obinuite datorit faptului c acestea modific stratul dublu
electric de la suprafaa electrozilor prin cantitatea mare de curent ce trebuie s le
strbat. Din acest motiv se folosesc galvanometre sau milivoltmetre electronice care
au rezistena de intrare suficient de mare.
Materiale necesare
Milivoltmetrul cu afisaj digital, 2 electrozi Ag/AgCl montai pe supori ce se pot
deplasa vertical pe stative, 2 pahare Berzelius de 50 ml, fii de hrtie de filtru (ca
puni electrolitice), soluie de KCl cu concentraia 12 moli/litru, cilindru gradat de
50 ml, ap distilat.
Descrierea aparaturii
Dispozitivul experimental este realizat pe dou stative verticale n lungul crora pot fi
deplasate suporturile pe care sunt fixai cei doi electrozi i de care pot fi prinse cu
34

cleme paharele Berzelius coninnd soluiile de lucru. Primul pahar Berzelius va


conine soluia de KCl nediluat, de referin, cu concentraia pe care o vom nota C 1
i care rmne nemodificat pe tot cursul experienei. Al doilea pahar Berzelius va
conine soluii de concentraie variabil, C2, obinute prin diluarea progresiv a
soluiei de referin. Prin coborrea suporilor, electrozii El 1 i El2 pot fi introdui n
soluiile respective. Puntea electrolitic, P, dintre cele dou soluii este realizat cu o
band de hrtie de filtru. Cablurile electrozilor El 1 si El2 vor fi cuplate la bornele
referin i respectiv, msurare ale milivoltmetrului sau pH-metrului. n cazul
utilizrii unui pH-metru butonul de comutare mV-pH se va pune n poziia mV.

Fig.6.2. Reprezentarea schematic a dispozitivului experimental pentru o pil de concentraie.

35

Fig.6.3. Multimetre digitale


utilizate pentru nregistrarea
diferenei de potenial
electric produs de o pil de
concentraie.

Modul de lucru
Se cupleaz milivoltmetrul la reea i se pornete urmrindu-se aprinderea
ecranului de afiaj. Nu se va da importan valorilor indicate de aparat atta timp ct
electrozii nu sunt introdui n soluie iar puntea electrolitic nu este instalat ntre
cele dou vase cu soluie.
n ambele pahare, dup ce n prealabil au fost splate cu ap distilat, se introduce
soluie de concentraie C1. Paharul nr1 se va prinde cu o clema pe stativul din stnga,
n el va fi introdus electrodul El1 i va fi meninut astfel pn la sfritul
determinrilor. n paharul nr.2, prins de stativul din dreapta, va fi introdus electrodul
El2 i cu o banda de hrtie de filtru se va face legtura cu vasul nr.1. Indicaiile
aparatului se vor stabiliza ntr-un interval de timp 1-2 minute. Dac ntregul sistem
funcioneaz corect diferena de potenial afiat de aparatul de msur este nul, sau
difer cu cel mult 5 mV. Vom nota aceast valoare E1.
n continuare, se poate scoate electrodul El2 din vasul nr2 i din soluia ce o
conine se prepar, prin diluare , 50 ml soluie de concentraie C 2 = C1/2 (25 ml
soluie inial + 25 ml ap distilat). Aceasta se reintroduce n vasul nr.2 dup cltirea
lui cu ap. Se repet msurarea diferenei de potenial obinndu-se valoarea E2.
Se procedeaz ca i mai sus, n mai multe rnduri, dilund succesiv soluia din
vasul nr.2, astfel nct s se obin valorile pentru potenialele E4, E8, E16, E32 ...
corespunztoare unor soluii din vasul nr.2 de concentraii C 1/4, C1/8, C1/16, C1/32,...
Este foarte important ca la fiecare msurtoare s se schimbe puntea de hrtie de
36

filtru dintre vase. Altfel exist riscul falsificrii rezultatelor prin modificarea
concentraiilor din acest vas.
Prezentarea rezultatelor i calcule:
C2
C1/C2
lg

C1
C2

C1/1

C1/2

C1/4

C1/8

C1/16

C1/32

C1/64

C1/128

16

32

64

128

0,301

0,602

0,903

1,204

1,505

1,806

2,107

0,00

En(mV)

Se va reprezenta grafic dependena potenialului pilei de concentraie, E, n funcie de


lg (C1/C2) trasndu-se dreapta care aproximeaz cel mai bine punctele obinute
experimental.
Cu ajutorul graficului se stabilesc valorile pentru panta experimental a dreptei ke:
ke=

E
lg(C1 /C 2 )

Ecuaia drepetei experimentale cu valorile astfel gsite se va scrie sub formula:


E = E0 + ke lg (C1/C2)
Aceast ecuaie va fi comparat cu cea teoretic:
E = kt

lg (C1/C2) unde kt =

2 302 RT
F

este panta teoretic pentru

msurtori fcute n mV.


Astfel se poate aprecia ct de aproape de comportamentul ideal este pila studiat.
Aceast apropiere este cu att mai mare cu ct E 0 (potenialul datorit asimetriei n
funcionarea electrozilor) este mai redus i cu ct panta experimental ke se apropie
mai mult de valoarea calculat pentru panta teoretic kt.

37

III. PROPRIETI OPTICE ALE LICHIDELOR BIOLOGICE


7. DETERMINAREA INDICELUI DE REFRACIE AL UNEI SOLUII
CU AJUTORUL REFRACTOMETRULUI ABBE

Notiuni teoretice. Refracia luminii

reprezint fenomenul de trecere a undei

luminoase dintr-un mediu optic cu indicele de refracie n1 ntr-un alt mediu optic cu
indicele de refracie n2, cu schimbarea direciei de propagare. Reprezentnd raza de
inciden (1), raza refractat (2) i notnd:
- i: unghiul de inciden, format de raza incident cu normala n punctul de inciden
la suprafaa de separare dintre cele dou medii
- r: unghiul de refracie, format de raza refractat cu normala, putem afirma c raza
incident, raza refractat i normal la suprafa sunt coplanare i are loc relaia :
n1 sin i = n2 sin r
38

Fig. 7.1. Fenomenul de reflexie, refracie i reflexie total a luminii.

Discuii:
1. dac n2>n1 atunci r < i; raza refractat se apropie de normal
2. dac n2<n1 atunci r>i; raza refractat se deprteaz de normal
3. la suprafaa de separare dintre dou medii transparente au loc simultan fenomene
de reflexie i de refracie a luminii.
4. atunci cnd n2<n1 notm cu l unghiul limita = unghiul format de raza incident
pentru care unghiul de refracie este r = 90 => n1sin l = n2
Dac lumina trece din mediul 1 n mediul 2 i n1>n2 atunci exist relaia
sin 1 = n2 / n1 , relaie ce poate servi la aflarea unuia din cei doi indici de refracie
dac se cunoate cellalt i se msoar unghiul limit, 1. Pe acest principiu este
construit refractometrul Abbe cu ajutorul cruia se poate citi direct indicele de
refracie al unui lichid (dup ce s-a adus n dreptul unui reper fix zona de delimitare
lumin ntuneric ce apare atunci cnd radiaiile se propag n condiiile refraciei la
unghiul limit).
Determinrile refractometrice ne dau informaii preioase i n legtur cu
structura unor substane, cum ar fi de exemplu cele organice. Refracia specific i
refracia molecular a unei substane sunt mrimi fizice importante care pot
caracteriza din punct de vedere optic un lichid biologic. Ea se poate calcula cu
ajutorul relaiei lui Lorenz:
Rs=

n2 1 1
i

n2 2 d

rm = rs M
39

n care n este indicele de refracie iar d este densitatea.


Produsul dintre refracia specific i greutatea molecular M a unei substane se
numete refracie molecular. Aceast mrime este i ea o caracteristic molecular a
fiecrei substane, valoare ei depinznd de starea de agregare a substanei respective.
Refracia molecular n cazul substanelor organice este egal cu suma refraciilor
atomice i a refraciilor legturilor, precum i a grupelor coninute de molecul.
Refractometria ca metod de lucru are urmtoarele avantaje: se lucreaz cu o
cantitate infim de substan (1-2 picturi), este o metoda rapid i foarte precis (se
poate citi indicele de refracie cu o precizie de 4 zecimale). Cunoscndu-se indicele
de refracie, se poate determina concentraia soluiilor studiate( n cazul laboratorului
clinic -concentraia proteinelor n lichidele biologice).
Aparatura: Refractometrul de tip ABBE-Convex are urmtoarele pri componente:
1. Ocular, mrire optic 30X.
2. Dispozitiv de deschidere/nchidere a prismei.
3. Oglinda reflectatoare.
4. Intrare pentru msurarea temperaturii apei de rcire (dac este cazul).
5. Intrare pentru luminarea prismei.
6. Intrare pentru sistem de termostatare.
7. Prisma superioar.
8. Dispozitiv pentru controlul dispersiei.
9. Dispozitiv de ajustare msurare.
10. Buton pentru compensarea culorii.
11. Intrare pentru msurarea temperaturii probei cu termometrul digital.
12. Buton de calibrare.
13. Reglajul luminozitii scalei de msurare.

40

Fig. 7.2. Refractometrul ABBE, tip CONVEX.

41

Partea principal a refractometrului Abbe se compune din dou prisme, una pentru
msurare i cealalt pentru iluminare, care se pot bloca cu ajutorul unui urub. Prin
intermediul unui tambur se poate deplasa blocul prismelor astfel ca n cmpul vizual
al lunetei s ne apar o imagine pe jumtate iluminat i a crei limit de separaie
ntre zona iluminat i cea ntunecat s fie plasat exact la ncruciarea celor dou
fire reticulare.
Fig. 7.3. Aspectele privind punerea la punct (a) i
citirea indicilor de refracie (b) pentru
refractometrul Abbe.

Deoarece se lucreaz cu lumina alb (lumina


policromatic) pentru a se nltura fenomenele
de dispersie ce pot aprea (i care ar determina
erori de msurare datorit imposibilitii
obinerii unei limite de separaie nete) se
utilizeaz o prism suplimentar care se poate
roti cu ajutorul unui dispozitiv situat lateral,
acest dispozitiv numindu-se compensator. Cu
ajutorul lunetei se poate citi direct indicele de
refracie al substanei studiate, dar i
concentraia procentual.
Modul de lucru
nainte de msurtoarea propriu zis trebuie fcute cteva teste de calibrare. Se
deschide intrarea prismei superioare (5) i se nchide oglida reflectatoare (3). Se
acioneaz tamburul de compensare a culorii (10) pn cnd culorile rou i albastru
dispar complet.
Metoda de calibrare utiliznd ap distilat: Se deschide prisma superioar, se
pipeteaz 2-3 picturi de ap i apoi se nchide. Dac temperatura nregistrat este de
20C, indicele de refracie ar trebui s fie 1,3330. n caz contrar, se acioneaz
tamburul (9) pn cnd scala indic valoarea menionat. De asemenea se acioneaz
butonul de calibrare pn cnd limita de separare lumin-umbr corespunde cu
intersecia firelor reticulare.

42

Calibrarea odat fcut, se poate proceda la msurtorile propriu zise, determinnd


pentru diferite lichide biologice att indicele de refracie (cu precizie de patru
zecimale) ct i concentraia procentual. Dac msurtoarea se face la temperaturi
mai mari sau mai mici de 20C trebuie fcut o corecie a rezultatului. n tabelele
urmtoare sunt trecute coreciile care trebuie fcute n funcie de temperatur i
cteva valori ale indicelui de refracie pentru unele substane de referin.

n figura alturat sunt prezentate dou tipuri de


refractometre portabile care permit msurtori
rapide i uoare, ideale pentru determinarea
concentraiei procentuale n scala Brix. Scala de
msurare Brix arat concentraia procentual a
unor substane solide dizolvate n ap, fiind
calibrat la cantitatea de zahr (trestie de zahr)
n grame, coninut n 100g de ap. Deci cnd
se msoar o soluie care conine zahr, scala Brix indic exact concentraia real.

43

Calcule i prezentarea rezultatelor


Odat citite valorile indicelui de refracie i ale concentraiei, cu ajutorul formulelor
anterioare se calculeaz refracia molecular i refracia specific pentru fiecare
prob. n cazul soluiilor proteice, concentraia se va determina din tabelele puse la
dispoziie. Rezultatele se trec n tabelul urmtor:
Nr.
sol.

Concentraia
proteine serice

d (kg/m3)

Refracia
specific rs

Refracia
molecular rm

44

8.

DETERMINAREA

CONCENTRAIILOR

SOLUIILOR

OPTIC

ACTIVE CU POLARIMETRUL
Noiuni teoretice
Conform legilor electro-magnetismului o perturbaie electromagnetic aprut
ntr-o regiune a spaiului devine izvorul altor perturbaii de aceeai natur n
poriunile nvecinate n spaiu - apare astfel o und electromagnetic care se va
propaga cu viteza luminii.
Legile generale ale micrii ondulatorii se refer n aceeai msur att la undele
longitudinale ct i la cele transversale. Vibraiile longitudinale sunt simetrice fa de
direcia de propagare, adic aciunea lor asupra unui aparat receptor oarecare nu se
schimb dac acest aparat este rotit n jurul direciei de propagare. n cadrul undelor
transversale condiiile de aciune ale undei asupra aparatului pot fi diferite, dup cum
vibraiile transversale

sunt surprinse ntr-un plan sau ntr-altul, care trece prin

direcia de propagare.
Din teoria electromagnetic a luminii rezult ca undele luminoase sunt
transversale. ntr-adevr, toate legile electromagnetismului duc la concluzia c

variaia n timp a intensitii cmpului electric E este nsoit de apariia unui cmp

magnetic-alternativ H , orientate perpendicular unul n raport cu cellalt.


Un asemenea cmp electromagnetic alternativ nu rmne fix n spaiu, ci se

propag cu viteza luminii de-a lungul unei linii perpendiculare pe vectorii E i H ,

genernd unde electromagnetice, unde de lumin. n felul acesta cei trei vectori H ,

E i viteza de propagare v , sunt perpendiculari ntre ei, cu alte cuvinte direciile

vectorilor E i H sunt perpediculare pe direcia de propagare, adic unda


electromagnetic este transversal. n fiecare caz dat exist o anumit orientare i prin
urmare raza luminoas nu reprezint axa de simetrie a undelor electromagnetice. O
asemenea simetrie este caracteristic undelor transversale. Vom nelege prin lumina

natural acea lumin n care vom ntlni toate orientrile posibile ale vectorului E

( i prin urmare i ale lui H ).


45

Lumina n care E , la fel i H i pstreaz o singur direcie, o vom numi lumina


polarizat. Planul care trece prin direcia de propagare i care cuprinde vectorul
electric, se numete plan de vibraie al luminii polarizate, iar planul n care se gsete
vectorul magnetic i direcia de propagare se numete plan de polarizaie.

Fig. 8.1. Planurile de vibraie i de polarizaie in cazul luminii polarizate.

Fenomenul de polarizare al luminii, adic selecionarea undelor de lumin cu o


anumit orientare a vectorului electric E, are loc prin reflexia sau refracia luminii la
suprafaa de separare a doi dielectrici izotropi sau prin dubla refracie cnd lumina
trece printr-un cristal anizotrop. Un sistem este izotrop dac toate proprietile sale
sunt identice dup oricare din direciile spaiului, iar un sistem va fi anizotrop dac
proprietile lui depind de direcia dup care are loc fenomenul.
Noi vom studia dubla refracie (sau birefringena) ce are loc la trecerea luminii
printr-un cristal de spat de Islanda (CaCO 3) care cristalizeaz n sistemul romboedric.
Dac pe un asemenea cristal cade un fascicul de lumin, dup refracie el va da
natere la dou fascicule, avnd direcii diferite.
Chiar dac unghiul de inciden este nul, fascicolul refractat este dublu. Raza care
se propag n continuarea fascicolului incident se numete raza ordinar iar cea de a
doua, raza extraordinar. Dac studiem cele doua raze emergente constatm c
ambele sunt polarizate, i anume n planuri perpendiculare ntre ele.

46

v
E

v
Fig.8.2. Oscilaiile vectorului electric n cazul
luminii plan-polarizate (sus) i circular
polarizate (jos)

Fig.8.3 Polarizarea luminii prin spat de Islanda: cele


dou prisme sunt lipite cu balsam de Canada, ansamblul
constituind un NICOL; RO-Raza ordinar; RE-Raza
extraordinar polarizat n planul figurii.

8.1. Metode optice care utilizeaz lumina polarizat


Radiaia plan i circular polarizat
Radiaia electromagnetic reprezint o und ai crei vectori electric (E) i
magnetic (H) oscileaz perpendicular pe direcia de propagare i sunt orientai
reciproc perpendicular. Frecvena oscilaiei, , reprezint numrul de oscilaii pe
47

secund. Lumina nepolarizat sau natural conine cuante ai cror vectori au


orientrile distribuite aleator, neexistnd un mod privilegiat de oscilaie.

Lumina

plan-polarizat este cea n care vectorul electric, respectiv magnetic, oscileaz


fiecare doar ntr-un singur plan.
Lumina circular polarizat are caracteristic faptul c vectorul electric, respectiv
magnetic, rmn constani n modul dar descriu fiecare o traiectorie elicoidal
(Fig.5), cu rotaii pe secund. Dup sensul n care vrful vectorului parcurge elicea
(atunci cnd privim spre surs), lumina poate fi circular polarizat spre stnga (sens
trigonometric sau antiorar) ori spre dreapta (sens antitrigonometric sau orar).
Lumina plan-polarizat poate fi considerat ca fiind rezultatul compunerii
vectoriale a dou unde coerente, cu aceeai amplitudine, circular-polarizate una spre
stnga i una spre dreapta.

Importana studiilor n lumin polarizat


Singura interaciune fizic care depinde explicit de asimetria structurii moleculelor
este interaciunea cu radiaia polarizat. Asimetria structurii trebuie neleas n sens
general, aici intrnd: asimetria distribuiei de sarcin (dipolii electrici permaneni);
asimetria n dislocrile sarcinilor sub influena cmpului electric exterior
(polarizabilitate asimetric); asimetria n micarea electronilor pe orbitalii de valen
(atomi asimetrici); etc.
n plus, fa de studiile n lumin nepolarizat, interaciunea luminii polarizate cu
moleculele ofer informaii de natur geometric (orientare, distribuie, ordonare,
suscesiune) asupra unor legturi sau zone din molecule.
8.2. Absorbia luminii polarizate
Ca n orice metod de spectroscopie de absorbie, lungimile de und alese se afl
n domeniile benzilor de absorbie ale legturilor.
n cazul luminii polarizate, interaciunea vectorului electric va depinde de
orientarea dipolilor absorbani i de geometria orbitalilor pe care sunt distribuii
electronii n jurul atomilor. Absorbia luminii polarizate are particulariti exploatate
48

de tehnicile de dicroism linear - n cazul utilizrii luminii plan polarizate i dicroism


circular - n cazul celui circular polarizate.
8.2.1. Dicroismul linear (DL) reprezint fenomenul prin care o prob strbtut
de o radiaie policromatic linear polarizat i schimb culoarea odat cu rotirea
planului de polarizare. El se datorete absorbiei unor radiaii cu lungimi de und
diferite, dac planul luminii polarizate i schimb orientarea fa moleculele aezate
ordonat.
Pentru punerea n eviden a DL este nevoie ca moleculele din prob s fie
aranjate n acelai fel. Aranjamentul ordonat este aproape perfect n cristale, dar
obinerea acestora, n cazul macromoleculelor, nu este o sarcin uoar. n dielectrici,
o orientare bun poate fi obinut cu ajutorul cmpului electric, dac moleculele au
momente dipolare. Rezult o aranjare mulumitoare a macromoleculelor fibrilare sau
alungite n lichide n curgere sau prin perierea ntr-o singur direcie a unei soluii
vscoase, pn se usuc.
Existena dicroismului linear, i mrimea lui, dac moleculele sunt orientate
preponderent cu dimensiunea mare n lungul unei axe, notate cu z, se exprim prin
valoarea raportului dicroic, d.

E II E
E II E

unde E|| este extincia probei cnd planul luminii polarizate este paralel cu axa z, iar
E este extincia gsit cnd planul luminii poalarizate este perpendicular pe axa z.
Valorile diferite de zero ale raportului dicroic semnaleaz existena unor asimetrii
moleculare, iar graficului d() poate furniza date asupra naturii acestor asimetrii
(gruprile, legturile sau conformaiile ce o produc).
DL este utilizat curent n scopul stabilirii orientrilor diferitelor legturi din
structura moleculelor. n acest fel s-au putut descifra orientrile legturilor de
hidrogen n structurile - helix (paralel cu axul lanului polipeptidic) i - foaie
plisat (perpendicular pe lan).

49

DL poate fi observat i n UV, pentru lumina polarizat avnd din benzile de

15
10

polimer
nalt

dimer

5
0
AMP (monomer)

5
10
15
240

260

280

(nm)

Fig. 8.4. Dicroismul circular la AMP.

absorbie ale dublelor legturi conjugate ale aminoacizilor aromatici sau ale bazelor
azotate. Astfel, poate fi determinat orientarea planurilor bazelor azotate fa de axele
elicilor duble ale acizilor nucleici.
8.2.2. Dicroismul circular (DC) este fenomenul prin care radiaiile
monocromatice, circular polarizate n sensuri opuse, sunt absorbite diferit de ctre
moleculele substanei.
DC, la o lungime de und dat, se evalueaz, cel mai simplu, prin diferena dintre
extinciile unei probe msurate pentru lumina circular polarizat spre stnga (EL) i
spre dreapta (ER):
E() = EL ER
Exprimarea se poate face i pe baze molare, n funcie de coeficienii molari de
extincie:
()= L R

(M1cm1)

Fenomenul de absorbie n UV - VIS se datorete excitrii electronilor. n cazul


structurilor asimetrice, ei oscileaz pe traiectorii elicoidale. Absorbia n vecintatea
lungimii de und de rezonan ( o) va fi alta dac sensul elicii traiectoriei este acelai
50

cu cel al elicii radiaiei considerat n sensul de propagare1, sau n sens contrar. De


aceea DC se manifest intens n domeniile benzilor tranziiilor electronice. n funcie
de lungimile de und la care | | are valori maxime se poate studia energetica
legturilor, iar graficul lui () d informaii asupra asimetriei distribuiei
structurilor ce le conin.
Fiecare band de DC este sensibil att la strucura macromoleculelor, ct i la toi
factorii care interacioneaz cu tranziiile electronilor din legturi. (Fig. 6)
8.3. Rotirea planului luminii polarizate este rezultatul activitii optice a unor
substane care au molecule asimetrice.
Activitatea optic se studiaz, de obicei, n domenii spectrale ndeprtate de
benzile de absorie ale substanelor. Deci ea nu se datorete absorbiei luminii ci se
explic prin vitezele de propagare diferit a radiaiilor circular polarizate n sensuri
opuse.
Asimetria molecular cea mai rspndit este cea datorit atomilor de carbon
asimetrici. n cazul macromoleculelor, asimetria se poate datora i structurilor
secundare (elici rotite spre dreapta sau stnga) sau teriare, cnd radicali simetrici se
plaseaz n medii asimetrice - cu cmpuri locale intense.
Rotirea planului luminii polarizate apare ca urmare a faptului c, n zonele
asimetrice, electronii execut micri pe traiectorii elicodale ce pot fi rsucite - fie
spre stnga, fie spre dreapta. Considernd c lumina plan-polarizat este compus
din dou componente circular polarizate n sensuri opuse, propagarea uneia va fi
favorizat fa de cealalt. Vitezele celor dou componente ntr-un astfel de mediu
vor fi inegale i, la ieire, cei doi vectori electrici vor avea ntrzieri diferite. n final,
rezultanta compunerii lor va fi rotit fa de poziia ce o avea la intrarea n mediu.
Activitatea optic a polimerilor difer de cea a monomerilor din care provin i
este posibil ca un polimer, datorit structurii sale, s aib activitate optic fr a
conine momomeri optic activi.
8.3.1. Dispersia optic rotatorie (DOR) este fenomenul de dependen a
unghiului de rotaie specific [](), de lungimea de und, , a radiaiei plan1

Trebuie notat c sensul rotirii elicii luminii circular polarizate, luat n sensul de propagare, este invers celui
considerat uzual, adic atunci cnd privim spre surs.

51

polarizate. Cu alte cuvinte, dac un fascicol de lumin policromatic, polarizat,


strbate o prob, componentele monocromatice ale fascicolului le vom gsi rotite
fiecare cu un alt unghi (dispersate rotator).
Efectele rotatorii se manifest pn departe de lungimile de und ale benzilor
de absorbie. Deci acolo unde absorbia luminii i DC sunt absente.
Graficele DOR, ca i cele DC, depind de asimetria local a zonelor n care se
afl electronii ce pot executa tranziii. Scopul trasrii lor este de a identifica i
explora astfel de zone, interaciunile dintre ele, sau susceptibilitatea lor la factorii de
mediu.

Principiul lucrrii:

52

Cu ajutorul luminii polarizate se pot determina rapid i destul de exact, n laboratorul


clinic, concentraiile unor soluii ale cror substane au proprietatea de a roti planul de
polarizare al luminii. Substanele care au aceast proprietate se numesc optic-active i
se mpart, n fucie de sensul n care rotesc planul luminii polarizate, n: levogire,
cele care rotesc planul luminii polarizate nspre stnga, se noteaz cu semnul
minus;dextrogire, cele care-l rotesc
nspe dreapta, se noteaz cu semnul

plus.

helix
foaie plisata

ghem haotic
200

220

240

(nm)

Fig.8.4.1. Dispersia optica rotatorie la poli-Llizina.

Proprietatea aceasta de a roti planul luminii polarizate se datorete structurii


asimetrice a substanelor organice de obicei, coninnd unul sau mai muli atomi de
carbon aezai asimetric (un atom de carbon cu cele patru valente satisfcute de patru
radicali diferii).
n cazul soluiilor preparate cu ajutorul unei substane optic active, unghiul

cu

care va fi rotit planul luminii polarizate va depinde de urmtorii factori: de


concentraia soluiei,C deci de densitatea d a soluiei, de grosimea stratului de lichid
strbtut de lumina polarizat x(dm), de lungimea de und a luminii utilizate, precum
i de temperatura soluiei. Lumina polarizat se obine cu ajutorul unui cristal
anizotrop care prezint fenomenul de birefrigen.
53

Totodat, unghiul cu care este rotit planul de polarizare mai depinde i de natura
substanei componente a soluiei, caracterizat cu ajutorul mrimii [ ] care se mai
numete unghi de rotaie specific.
Deoarece rotaia specific variaz cu temperatura i cu lungimea de und a
luminii, s-a convenit ca s se standardizeze pentru lumina galben a sodiului i pentru
Na

temperatura +20C, aceast valoare standard notndu-se cu [ ] 20 . Deci o soluie


va roti planul de polarizare al luminii cu unghiul

[ ]

i care are valoarea:

Na
d xc
20
100

formula care permite aflarea concentraiei soluiei studiate.


Aparatur
Aparatul cu ajutorul cruia se determin unghiul cu care este rotit planul luminii
polarizate se numete polarimetru i este compus, n principiu, din urmtoarele pri:
o surs de lumin S, un nicol polarizator NP, un tub T n care se pune soluia de
analizat, un nicol analizator NA mobil, care se poate roti la dreapta sau la stnga
(corespunztor substanelor dextrogire sau levogire) i care este cuplat la un
dispozitiv mecanic de citire a unghiului

prevzut cu un vernier circular sau ocular

D, n care observatorului i apare cmpul ocular CO ce are o zon vertical central


ZC. Nicolii sunt astfel construii nct raza ordinar RO care apare n urma
fenomenului de birefrigen s se reflecte total pe suprafaa ce separ prismele
nicolului.

Fig.8.6 Schema polarimetrului.

54

Fig. 8.7. Polarimetrul Polaris pri componente:


1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Ocular
Lupa pentru citirea valorii unghiului de rotaie
urub de control
urub pentru focalizare.
Scala i vernierul pentru citirea unghiului de rotaie
Compartiment n care se introduce tubul cu proba
Filtru de sticl
Lampa de sodium
Comutator de pornire oprire.

55

Mod de lucru:
n lucrarea de fa vom studia concentraia n glucoz a unor soluii dup formula
urmtoare:
100
C= [ ] Na d x c n %
20

Pentru msurarea unghiului se procedez astfel:


Se umple tubul T cu ap distilat astfel nct s nu conin bule de aer i se terg
ferestrele de sticl de la capetele tubului pentru ca imaginea s se vad n bune
condiii.
Se introduce apoi tubul n polarimetru i se rotete nicolul analizor cu ajutorul
urubului micrometric pn ce zona central ZC apare egal ntunecat cu cele dou
cmpuri laterale. Deci se lucreaz n condiiile extinciei maxime ce se obine atunci
cnd cei doi nicoli ai polarimetrului sunt aezai n cruce.
Se citete unghiul iniial, notat cu , cu o precizie de 0,05 utiliznd vernierul cu
care este prevzut aparatul.
Se nlocuiete apa din tub cu soluia de analizat, se realizeaz prin rotirea urubului
micrometric o iluminare uniform a cmpului CO. Se citete noul unghi indicat de
aparat, notat cu .
Observaie. Operaiile de egalizare a cmpului i de citire a unghiului se realizeaz
att pentru soluie ct i pentru ap de cel puin 5ori, n calcule lundu-se media
valorilor unghiurilor, notate

56

a.

b.

Nicoli paraleli

Nicoli n cruce

Fig.8.8.a) Mersul razelor de lumina prin polarimetru cnd nicolii sunt aezai n cruce.
b) Aspectul cmpului luminos observat prin polarimetru n fucie de poziia nicolului analizator n
raport cu cel polarizator.

Fig. 8.9. Citirea unghiului cu ajutorul


vernierului circular.

1 x

x = 0,30
= 1,30

57

Calcule i prezentarea rezultatelor


Cunoscnd valorile pentru unghiurile medii

i , se calculeaz unghiul cu care

rotete soluia planul luminii polarizate astfel:


Apoi, se calculeaz concentraia procentual a soluiei, care n cazul de fa este


Na

glucoza pentu care [ ] 20 = 52.8.


La efectuarea calculelor se va ine cont c n formula de mai sus, densitatea d este
msurat n g/cm3 iar lungimea stratului de soluie (a tubului ce o conine) , x, este
exprimat n decimetri (dm).
Rezultatele obinute se trec n tabelul urmtor:
Soluia
Glucoza

Na

[ ] 20
52.8

x
(dm)
1

d
(g/cm3)

C
(g%)

9. MICROSCOPIA OPTIC
58

9.1. Studiul microscopului optic.


Microscopul optic este utilizat att n domeniul cercetrilor medicale ct i n
analize uzuale de laborator. Acest instrument optic poate da imagini clare ale unor
formaiuni celulare cu dimensiuni pn la aproximativ 0,15 m. Determinarea acestor
dimensiuni are o importan deosebit n explorrile clinice i de laborator. Cu
ajutorul microscopului optic se pot face analize ale lichidului cefalorahidian (LCR), a
urinii, a sngelui etc.
Exemplu: Departajnd eritrocitele n funcie de diametrul lor mediu, se obine curba
Prince-Jones pentru snge nomal, iar comparativ cu acesta se pot depista diferite
afeciuni.
Instrumentele optice dau imagini clare, n care se pot distinge amnunte ce nu
pot fi observate cu ochiul liber.
Din punct de vedere tehnic un instrument optic este un asamblu de lentile,
oglinzi i diafragme, axele optice ale prismelor trebuind s coincid cu axul
geometric al instrumentului. n funcie de natura imaginii, instrumentele optice se
mpart n:
-instrumente optice cu imagini reale cum sunt ochiul, aparatul fotografic,
aparatul de protecie;
-instrumente optice care dau imagini virtuale i sunt folosite pentru
examinarea direct a obiectivelor; astfel de instrumente sunt: luneta, microscopul
optic, lupa.
Microscopul optic este destinat observrii unor probe (frotiuri) a cror
dimensiuni pot atinge 0,15m. Acest instrument are trei pri principale: mecanic,
optic i dispozitiv de iluminare.
9.2. Componentele unui microscop cu lumin transmis
Principiul care st la baza construciei oricrui microscop l constituie
proprietatea lentilelor optice de a produce refracia razelor luminoase care le
traverseaz, formnd astfel o imagine real sau virtual. La microscopul optic,
obiectivul formeaz o imagine mrit, real i inversat specimenului. Ocularul preia
59

aceast imagine i o transform ntr-o imagine mrit, virtual i dreapt n raport cu


prima. Astfel, imaginea final dat de microscop este virtual, rsturnat i mrit.
9.3.Componentele mecanice ale microscopului
Microscoapele optice moderne sunt alctuite dintr-o parte mecanic ce
cuprinde: piciorul microscopului, msua sau platina cu sistemele ei de deplasare a
preparatului i tubul microscopului, care poate fi deplasat n plan vertical cu ajutorul
unor angrenaje.
Piciorul sau talpa microscopului, este o component care confer stabilitate
aparatului. La microscoapele moderne talpa microscopului se afl ncorporat n
sursa de lumin.
Coloana sau mnerul- microscopul se articuleaz fix sau mobil cu piciorul.
Msua sau platina, perpendicular pe coloan, servete ca suport pentru
preparat. Acesta din urm se imobilizeaz pe platin prin dou lame metalice numite
valei sau cavaleri. Platina este prevzut cu un dispozitiv special numit car mobil
care, acionat de dou uruburi coaxiale, permite deplasarea fin a preparatului.
Tubul microscopului are la partea superioar ocularele, iar la partea
inferioar, revolverul cu obiectivele. La microscoapele moderne, n tubul optic se afl
interpus lupa binocular, care conine un sistem de prisme pentru distribuirea imaginii
la cele dou oculare.
Revolverul, format din dou discuri metalice suprapuse, cel inferior mobil,
aduce prin rotirea obiectivului dorit n axul optic.
Dispozitivul de punere la punct a imaginii este alctuit din viza macrometric
care se folosete pentru prinderea grosier a imaginii; iar viza micrometric prin
micri fine, permite clasificarea imaginii.

60

Vizorul
Obiective
Buton reglare fina imagine
Buton pornit/ oprit
Suportul
Diafragma
Baza de susinere
Corpul vizorului
Obiective finale
Suport prindere cu lamele
Dispozitiv fixare imagine
Buton reglare imagine
Orificiu ( deschidere )
Bra
Sursa de lumina
Fig.9.3. Microscopul optic

9.4.Componentele optice
ale microscopului
Aceste

componente

cuprind piese de calitatea


crora depind performanele ce pot fi obinute n examinarea unui preparat. Aceast
component este alctuit din oculare, obiective i sistemul de iluminare.
Obiectivele sunt constituite dintr-un sistem de lentile care sunt destinate s
funcioneze n imediata vecintate a preparatului. Singura lentil care formeaz
imaginea se afl la partea inferioar a obiectivului i se numete lentila frontal.
Distana dintre ea i suprafaa preparatului reprezint distana frontal i este cu att
mai mic cu ct obiectivul folosit are o putere mai mare de mrire. Celelalte lentile
din obiectiv au rolul de a corecta aberaiile optice produse de lentila frontal. n
general, obiectivele care se folosesc cel mai frecvent la microscoape au puterea de
mrire de: 6x, 10x, 20x, 40x, 60x, 90x, 100x, aceasta fiind gravat pe suprafaa
cilindrului. Obiectivele au putere de mrire mai mic (pn la 40x) se numesc
obiective uscate pentru ca mediul interpus ntre lentila frontal i preparat este
aerul. Obiectivele cu putere mare de mrire (60x, 90x, 100x), cu care se lucreaz
foarte aproape de preparat, se numesc obiective cu imersie deoarece spaiul dintre
61

lentila frontal i preparat este ocupat de un lichid (ulei de cedru, glicerin, uleiul de
parafin) n care este imersat vrful apropiat cu al sticlei port preparat i, prin
folosirea lor, se elimin n mare masur refracia n afara suprafeei lentilei frontale a
razelor de lumin care ilumineaz preparatul. Ca urmare imaginea observat va
ctiga n luminozitate i claritate.

Fig.9.4.
Obiective

oculare.

Ocularele se afl dispuse la partea superioar a lupei binocular, fiind formate


fiecare, din dou lentile plan convexe ce formeaz o imagine mrit, dreapta i
virtual. Pentru observare se folosesc de obicei oculare cu putere mic de mrire
(7x,10x), deoarece rolul lor este de a distinge detaliile fine date de obiectiv i mai
puin de a mri aceast imagine.
Gradul de mrire a imaginii finale date de microscop poate fi modificat prin
schimbarea obiectivelor i ocularelor i se calculeaz fcnd produsul dintre puterea
de mrire a ocularului i a obiectivului.
Formula pentru grosisment i putere de separare
Exemplu: ocular 10x; obiectiv 20x; marire: 20 X 10=200.
62

Aceast valoare d puterea de mrire total sau grosismentul microscopului.


Sistemul de iluminare, la microscoapele moderne, se afl ncorporat n talp i
este reprezentat de un bec de 6V sau 12V. Tot aici se afl i un sistem special pentru
controlul fluxului n axul fluxului de lumin. Lumina este orientat n axul optic al
microscopului de ctre o oglind plan dispus oblic n dreptul unui orificiu care se
afl sub platin. nclinaia oglinzii poate fi reglat cu dou uruburi. Sub platin,
prins de coloana microscopului se afl condensorul, care are rolul de a concentra
razele de lumin ntr-un focar ce coincide cu planul preparatului. Unghiul luminii
care intr n condensor se regleaz cu ajutorul diafragmei iris, dispus n montura
condensorului, sub lentile. Condensorul poate fi ridicat sau cobort, cu ajutorul unei
vize dispus sub platin.
9.5.Cum se prinde imaginea la un microscop optic obinuit ?
Prinderea imaginii i observarea sa la un microscop optic obinuit se face
relativ simplu i nu necesit cunotine speciale de mecanic fin sau de alt natur.
Pentru evitarea unor eecuri, inerente la un nceptor, precum i a obine o imagine
corect i apropiat calitativ de performanele maxime ale aparatului, toate manevrele
trebuie s fie executate ntr-o anumit ordine:
1. Se aeaz lama cu preparatul de cercetat pe platin i se prinde cu valeii.
Este foarte important ca lama s fie aezat n aa fel nct preparatul s fie orientat n
sus. n caz contrar nu se va putea prinde imaginea cu obiective mai mari de 40x.
2. Privind lateral se aduce preparatul n axul optic prin manevra carului mobil.
Axul optic coincide cu punctul de lumin dat de condensatorul ridicat n prealabil n
poziia maxim. Dup efectuarea acestei operaii, condensatorul se coboar la o
poziie intermediar.
3.Se aduce obiectivul 10x n axul optic al microscopului prin rotirea
revolverului. Cnd obiectivul ajunge n ax, rotirea revolverului ntmpin o uoar
rezisten. Este bine ca ntotdeauna observarea unui preparat s nceap prin folosirea
obiectivului 10x, deoarece acesta d o imagine de ansamblu a preparatului, permind
totodat selectarea unei zone din preparat care urmeaz a fi observat apoi de mriri
mai mari.
63

4. Dei imaginea nu a fost nc prins, se poate stabili n aceast etap, distana


pupilar prin manevrarea lupei binocular.
5. Privind lateral, se coboar obiectivul pn n poziia inferioar. Aceasta se afl
la civa mm de suprafaa preparatului. Privind apoi n microscop, se ridic obiectivul
cu viza macrometric pn se prinde imaginea. Apoi, claritatea imaginii se regleaz
prin manevra vizei micrometrice, iar gradul de luminozitate al cmpului se regleaz
prin ridicarea sau coborrea condensorului.
6. Pentru observarea unor detalii ale preparatului, se introduce n axul optic un
obiectiv cu puterea de mrire mai mare. Pentru fiecare obiectiv imaginea se prinde
prin ridicarea acestuia fa de preparat pentru a evita lovirea accidental a lentilei
frontale de lama port preparat.
n cazul folosirii unui obiectiv cu imersie, se pune pe lamela care acoper
preparatul o pictur de ulei de imersie i se coboar apoi obiectivul pn ce vrful
su atinge pictura. Aceast operaie se face privind lateral. Imaginea se prinde apoi,
privind cu atenie n microscop, prin coborrea foarte fin a obiectivului cu viza
macrometric. Odat obinut imaginea, claritatea se menine prin manevra continu
a vizei micrometrice. Pentru a avea o iluminare corespunztoare, condensorul va fi
ridicat la maximum.
7. Dup ncheierea observrii, microscopul se las n repaus cu obiectivul 10x
n axul optic i se acoper pentru a fi ferit de praf. Se verific dac s-a efectuat
deconectarea de la reeaua de curent electric.
n cazul ntrebuinrii obiectivului cu imersie, acesta se terge cu uleiul de
imersie prin trecerea degetului deasupra lentilei frontale. Periodic acest obiectiv se
cur cu o batist de finet umezit ntr-o soluie de alcool etilic-aceton (1:1). Se va
evita folosirea n acest scop a hidrocarburilor (xilen, benzen, toluen) pentru ca aceasta
va dizolva rina special n care este montat lentila frontal a obiectivului.

Modul de lucru:
9.5. a) Etalonarea riglei gradate a ocularului. Microscopul este dotat cu o reea
ajuttoare micrometric gradat astfel nct pe poriunea vizibil cu ochiul liber
gradaiile reprezint 0,1 respectiv 0,5 mm. Pe poriunea central rigla este divizat n
64

zecimi de mm. Etalonarea riglei ocularului se face n felul urmtor: se vizualizeaz


concomitent att reeaua micrometric de pe lam ct i rigla micrometric a
ocularului astfel nct s se poat numra cte diviziuni de pe reea corespund unei
singure diviziuni de pe rigl. Apoi cu o regul de trei simpl se poate calcula care este
fraciunea dintr-un mm care corespunde unei diviziuni de pe rigla ocularului.
9.5. b) Determinarea dimensiunii unor preparate. Odat ce a fost fcut
etalonarea riglei, reeaua micrometric ajuttoare poate fi nlturat. n locul ei se
fixeaz pe msua microscopului diverse preparate. Prima dat se ncearc
vizualizarea unui fir de pr, fixat cu o lamel pe o lam curat. Odat pus la punct
imaginea, rigla ocularului se suprapune peste grosimea firului de pr numrndu-se
cte diviziuni corespund acestei dimensiuni. Apoi, acest numr de diviziuni se
nmulete cu valoarea aflat anterior prin regula de trei simpl, obinndu-se
dimensiunea n mm a grosimii firului de pr. Apoi se vizualizeaz alte preparate puse
la dispoziie, fixate pe lame: ou de parazit, preparate histologice.
Elementul

Diviziuni

Valoarea

Diviziuni

Dimensiunea

Dimensiunea

Studiat

coresp.element.

diviziuni

coresp.dimensi.

preparatului.

prepartului medie

microm.

preparatului.

reelei

unei

mm.

Ou de parazit

6,5

0,0307

mm

mm

3,5

0,1075

0,1128

0,0921

4,5

0,1381

Grosismentul- reprezint raportul dintre tangenta unghiului sub care se vede


imaginea prin instrument i tangenta unghiului sub care se vede obiectul atunci cnd
este privit cu ochiul liber sau altfel spus, raportul dintre diametrul aparent al imaginii
i cel al obiectului aezat la distana optim de vedere clar -care pentru un ochi
normal are valoarea 25 cm.

tg 2
P
P.
tg1
4

sau G= Gob Goc

Puterea separatoare sau de rezoluie : este capacitatea microscopului de a


forma imagini distincte a dou puncte vecine ale obiectului. Aceast mrime, depinde
65

de aberaiile sferice i de fenomenul de difracie a luminii care traverseaz


instrumentul. Putem mri valoarea l/ prin mrirea lui n, folosind observarea prin
imersie, n care ntre Ob (de 90X) i prob se pune o pictur de ulei de cedru.

1,22
2n sin u

unde:
l/ =putere separatoare
= lungime de und a radiaiei folosite
n = indicele de refracie al mediului dintre Ob i Oc.
u = unghiul de apertur, format de razele extreme.
n. sin u = apertur numeric, este nscris pe obiectiv alturi de mrirea sa.
Modul de lucru:
Determinarea grosismentului i a coeficientului micrometric.
Micrometrul obiectiv este o lam de sticl pe care sunt gravate 100 de diviziuni pe
o distan de 1 mm, intervalul ntre dou diviziuni succesive este de 0,01mm.
Micrometrul ocular - are forma unui disc cu diametrul egal cu cel al tubului n care
se introduce. Este confecionat din sticl pe care sunt gravate 100 diviziuni pe o
lungime de 1 cm, intervalul dintre dou diviziuni succesive este egal cu 0,1 mm.
Pentru determinarea grosismetrului microscopic se procedeaz astfel:
se fixeaz lama micrometrului obiectiv pe msua de lucru ;
se introduce tekerul micoscopului n bornele transformatorului, iar tekerul
transformatorului n priza de 220V;

se regleaz iluminarea cu ajutorul diafragmei;

se introduce din mijlocul micrometrului ocular n dreptul obiectivului cu ajutorul


uruburilor cu care este prevzut msua microscopului;

alegem i fixm obiectivul cel mai mic (10X);

se apropie obiectivul de micrometru pn la distan minim fr a privi n


ocular;

ridicnd lent obiectivul se caut imaginea diviziunilor micrometrului;


66

microscopul se pune la punct astfel nct n cmp s avem imaginea ambelor


micrometre;

se rotete ocularul pn cnd cele dou scri sunt paralele i parial suprapuse;

se mrete contrastul prin ridicarea sau coborre condensatorului (crescnd


contrastul va scdea puterea separatoare l/);
se aduce scala gradat a micrometrului obiectiv astfel nct captul su s
coincid cu cel al micrometrului ocular;
se compar imaginea micrometrului obiectiv (mrit de Gob ori) cu micrometrul
ocular astfel nct n diviziuni ale micrometrului obiectiv s corespund la m diviziuni
ale micrometrului ocular.
nlocuind valorile lui m i n n relaia:
Gob

100 m
.
10 n

Se calculeaz G microscop cu relaia :


G = Gob .Goc
Se efectueaz trei determinri pentru fiecare obiectiv (10X, 20X , 40X) rezultatele
trecndu-se n tabel:
Tabelul 1
Ob.

Nr.deter.

Gob

Goc

Goc

10X
20X
40X

Pentru determinarea coeficientului micrometric se efectueaz urmtoarele :


-se suprapune scala micrometrului ocular cea a obiectivului i se citesc;
nob numrul de diviziuni ale micrometrului obiectiv care se suprapun exact

peste un numr ntreg de diviziuni ale micrometrului ocular.


noc numrul de diviziuni ale micrometrului obiectiv.

-se calculeaz coeficientul micrometric cu formula:


67

nob
.10( m)
noc
-se mai fac multe combinaii de oculare i obiective, iar rezultatele se trec n tabelul
2:
CM

Tabelul 2
Obiectiv

Ocular 5X

Ocular 7X

Ocular 10X

10X
20X
40X
9.6. Ochiul - un sistem optic complex.
Ochiul este pentru organismul uman un analizator cu ajutorul cruia analizm
mediul nconjurtor. Analizatorul vizual este alctuit din trei segmente :
segmentul periferic, reprezentat de ochiul propriu-zis i anexele sale, segmentul
intermediar, reprezentat de fibrele nervoase care conduc excitaiile vizuale la creier i
segmentul cortical, situat n regiunea occipital a scoarei creierului.
Globul ocular (ochiul) are forma unei sfere, care n partea din fa are aplicat o alt
poriune sferic cu raz mai mic, reprezentat de corneea transparent. n faa
cristalinului se afl irisul care are forma unei diafragme prevzut cu o deschidere
numit pupil cu dimensiunea variabil ntre 3 i 7mm. n calota posterioar este
situat retina, o membran nervoas, alctuit din celule nervoase, celule de susinere
i celule pigmentare.

68

Celulele nervoase sunt de 6 tipuri :


1. Fotoreceptoare cu conuri
2. Fotoreceptoare cu bastonae
3. Bipolare
4. Multipolare
5. Orizontale neuroni de asociaie cu dendrite i axon
6. Amacrine neuroni de asociaie fr dendrite cu un axon lung i foarte ramificat .
Ca urmare a suprapunerii acestor tipuri de celule i a sinapselor dintre ele, se pot
diferenia 10 straturi ale retinei. Primul strat este cel al celulelor pigmentare alctuite
din celule care conin pigment melanic. Cel de-al doilea este stratul celulelor
fotoreceptoare alctuit din celule nervoase specializate, care nu se divid, numite dup
forma lor, bastonae i conuri. Conurile i bastonaele conin pigmeni vizuali diferii.
Conurile, n numr de 5-7 milioane, reprezint receptorii vederii diurne, colorate
(percep detalii i culori). Se gsesc n special la nivelul petei galbene (macula lutea)
la distana de 25 m. Exist 3 tipuri de conuri, unul pentru perceperea luminii roii,
altul pentru perceperea luminii verzi i al treilea pentru lumina albastr. Ele conin
rodopsin care se descompune n prezena luminii i se resintetizeaz n prezena
vitaminei A.

69

Membrana limitant extern, cel de-al treilea strat, este o reea de prelungiri ale
celulelor gliale, ce nconjoar baza celulelor fotoreceptoare. Stratul granular extern
cuprinde corpii neuronali i prelungirile celulelor fotoreceptoare. Stratul plexiform
extern reprezint zona sinaptic dintre celulele fotoreceptoare i neuronii bipolari.
Stratul granular intern este alctuit din corpii neuronilor bipolari. Stratul plexiform
intern este zona sinaptic dintre neuronii bipolari i neuronii multipolari. Stratul
neuronilor multipolari cuprinde corpul neuronilor multipolari. Stratul fibrelor optice
este format din axonii neuronilor multipolari. Ultimul strat al retinei, membrana
limitant intern delimiteaz retina spre faa sa extern. Fiecare celul cu con face
sinaps cu un singur neuron bipolar i acesta cu un singur neuron multipolar. Mai
multe celule cu bastona fac sinaps cu un singur neuron bipolar, iar mai muli
neuroni bipolari fac sinaps cu un singur neuron multipolar.

70

Fig.9.6.1.Arhitectura straturilor de celule fotoreceptoare.

Segmentul intermediar sau segmentul de conducere (calea optic) este format din 3
neuroni. Primii 2 neuroni, senzitivi, sunt reprezentai de protoneuron (bipolar),
71

respectiv deutoneuronul (multipolar) din retin. Axonii deutoneuronului formeaz


nervul optic i tractul optic.
Globul ocular este alctuit dintr-o serie de medii transparente :
a) umoarea apoas (n=1,33), un lichid clar secretat de procesele ciliare fiind drenat
permanent de venele scleroticii (tunica extern- partea posterioar)
b) cristalinul este o lentil biconvex care este acionat de muchiul ciliar care i
modific raza de curbur i odat cu aceasta convergena (n [1,33 ; 1,41])
c) umoarea sticloas (corpul vitros) este o substan gelatinoas situat n spatele
retinei (n=1,33).
Capacitatea cristalinului de a-i modifica raza de curbur pentru ca s poat fi vzute
clar obiectele aflate la distane diferite poart numele de acomodare la distan.
Pentru acomodare este necesar i corectarea axelor oculare prin contracia
musculaturii extrinseci a globului ocular. Un ochi standard (emetrop) are distanele
obiect i imagine diferite cu valorile f1=15,7mm i

f2=24,4mm. Exist deci o

concordan perfect ntre puterea de convergen a mediilor refringente i lungimea


axului antero-posterior, ceea ce permite vederea clar, fr acomodare, a obiectelor
situate la o distan mai mare de 6m.

Fig.9.6.2. Formarea imaginii in ochiul emetrop.


72

Distana minim de vedere clar pentru un ochi standard este de 25cm, iar rezoluia
ochiului (capacitatea de a distinge separat 2 puncte vecine) la aceast distan este de
75m.Pentru ca un ochi normal s poat vedea imaginea obiectului fr efort de
acomodare aceasta trebuie s se formeze la o distan mai mare de distana minim
de vedere clar de 0,25m- Punct Proximum. Ideal ar fi ca imaginea s se formeze la
distana maxim de 6m- Punct Remotum. n cazul n care puterea de convergen a
sistemului dioptric nu concord cu lungimea axului antero-posterior, ochiul este
ametrop prezentnd diverse defecte optice :
-miopie
-hipermetropie
-prezbiie
-astigmatism
1. Miopia este un viciu de refracie care const n faptul c razele luminoase care vin
paralele de la infinit se ntlnesc ntr-un focar situat naintea retinei. Acest viciu de
refracie se corecteaz cu lentile divergente, care ndeprteaz focarul pn ajunge pe
retin.

2. Hipermetropia este un viciu de refracie caracterizat prin aceea c razele paralele


venite de la infinit se reunesc ntr-un focar situat n spatele retinei. Acest viciu de
73

refracie se corecteaz cu lentile convergente, care apropie focarul pn ajunge pe


retin.

3. Prezbiia este un viciu datorat pierderii elasticitii cristalinului, deci a posibilitii


de acomodare a acestuia, care se instaleaz odat cu naintarea n vrst. Acest viciu
se corecteaz cu lentile a cror convergen variaz continuu pe nlimea lentilei
pentru acomodarea ochiului la diferite distane.
4. Astigmatismul este un defect optic ce se caracterizeaz prin faptul c raza de
curbur a cristalinului i mai ales a corneei nu este aceeai n toate meridianele (nu
este omogen).Razele care vin de la infinit nu se ntlnesc ntr-un focar unic, existnd
focare pentru razele care cad pe meridianele orizontale i focare pentru cele care cad
pe meridianele verticale. Defectul se corecteaz prin lentile cilindrice aezate n aa
fel nct s uniformizeze refracia n toate meridianele corneei sau cristalinului.

74

Pierderea vederii se numete cecitate i are cauze multiple. Ea se poate datora unei
rupturi a corneei sau unei afeciuni a cristalinului, care devine opac i incapabil s
lase s treac lumina. n alte cazuri cecitatea se datoreaz dezlipirii retinei, ca urmare
a unei lovituri sau faptului c celulele sale nervoase nu mai funcioneaz corect.
Unele cazuri de cecitate se datoreaz unor factori externi. De exemplu, dac nervii
optici sunt lezai, dei se formeaz o imagine corect pe retin, aceasta nu este
transmis la creier. Un traumatism cranian suferit de o persoan poate distruge aria
vizual a creierului, determinnd orbirea persoanei respective, n ciuda faptului c
ochii acestuia funcioneaz perfect.
Vederea cromatic
Retina conine 2 tipuri de fotoreceptori (receptori vizuali) : conurile i bastonaele.
Bastonaele sunt mult mai numeroase (130 milioane) i sunt mai sensibile dect
conurile la intensitatea luminoas ; ns nu sunt sensibile la culoare.
Cele 7 milioane de conuri confer ochiului sensibilitatea la culoare. Acestea sunt
concentrate n partea central a petei galbene, numit fovea centralis (diametru
0,3mm). Se apreciaz c acestea sunt distribuite ca sensibilitate pe culori n felul
urmtor : 64 % sunt conuri roii; 32 % sunt conuri verzi; 2 % sunt conuri
albastre. Conurile verzi i roii sunt concentrate n fovea centralis, iar cele
albastre n exteriorul acestei regiuni. De aici rezult o deosebire n modul cum se
disting culorile. Astfel, percepia obiectelor albastre cu intensitate mare este mai slab
dect a celor roii sau verzi. Faptul c vedem culorile cu un efort comparabil este
atribuit unui amplificator n albastru aflat n cicuitul de prelucrare din creier.

75

Specializarea celor dou tipuri de fotoreceptori din ochi conduce la o mulime de


fenomene aparent ciudate. De exemplu, un cpitan de vas sau un pilot vd mai bine
noaptea, n ntuneric, dac aparatele de pe bord sunt luminate n rou. Efortul lor de
acomodare este mai mic, ochiul utiliznd tipuri diferite de fotoreceptori pentru
culoarea roie (conurile) i pentru lumina slab (bastonaele). Din studiile efectuate
asupra percepiei imaginilor colorate n comparaie cu cele alb-negru s-a evidenat
faptul c n imaginile colorate ochiul detecteaz mai uor marginile obiectelor i
caracteristicile acestora. n imaginile alb-negru se pierde informaia coninut n
lungimea de und a fiecrei culori. Din numeroase experimente efectuate cu diferii
subieci, crora li se prezentau imagini colorate diferit i li se cerea s le recunoasc,
s-a ajuns la concluzia c ochiul omenesc poate distinge mii poate chiar milioane de
culori. O caracterisic important a vederii cromatice este faptul c prin diminuarea
intensitii luminii care se reflect pe un obiect colorat nu se modific i distribuia
spectral, adic distribuia lungimilor de und ale undelor reflectate de obiect i apoi
percepute de ochi. Creierul primete pentru prelucrare aceleai informaii, care sunt
legate de lungimea de und a culorilor din imagine.
Dac obiectul este cenuiu, atunci el reflect la fel toate lungimile de und, conurile
de pe pata galben sunt toate impresionate la fel i creierul nu reuete s disting
diferitele puncte de pe suprafaa obiectului. Dac obiectul este colorat de exemplu, in
rou i albastru, el reflect din lumina incident cu predilecie componenta roie i pe
76

cea albastr, ceea ce face s fie impresionate doar conurile specializate pentru aceste
culori i creierul reuete s prelucreze uor informaia primit.Toate proprietile
vederii cromatice sunt azi utilizate n domeniul publicitii, n televiziune,
cinematografie, mod etc.
Fotometria
Fotometria se ocup cu msurarea energiei transportat de undele electromagnetice
din domeniul optic. Radiaiile electromagnetice din domeniul vizibil dau senzaia de
lumin i n acelai timp transport energie. ntr-un sens mai ngust, fotometria se
ocup cu msurarea efectului radiaiilor din domeniul vizibil asupra ochiului
omenesc. Astfel, se definesc dou

categorii de mrimi i uniti de msur :

fotometrice i energetice. Pentru caracterizarea transportului de energie de ctre


lumin se definesc mrimile energetice :
- flux de energie radiant
- intensitate energetic
- iluminare energetic
Pentru definirea mrimilor energetice trebuie s definim sursa de lumin punctiform,
care este o surs ce emite ntr-un mediu omogen i izotrop, cu suprafaa de und
sferic.
Fluxul de energie radiant e se definete ca energia care strbate o suprafa
oarecare, normal pe direcia de propagare a razei de lumin, n unitatea de timp,
adic : e = W / t care are unitatea de msur wattul.
Intensitatea energetic a unei surse punctiforme este fluxul de energie radiant
emis n unitatea de unghi solid, adic :
Ie = de / d , unde d= unghiul solid elementar

(1)

Intensitatea energetic se msoar n W/steradian. Unghiul solid este o poriune din


spaiu coninut ntr-o cavitate a unei

suprafee conice. El se msoar ca raportul

dintre aria tiat de con pe suprafaa unei sfere cu centrul n vrful conului i ptratul
razei sferei. Unghiul solid elementar taie o arie elementar dA pe suprafaa sferei,
astfel: d = dA / r2.

77

Unitatea de msur este steradianul (sr) definit ca fiind unghiul sub care se vede din
centrul unei sfere o arie de pe suprafaa sferei egal cu raza la ptrat.
Iluminarea energetic a unei suprafee este egal cu fluxul de energie radiant care
strbate unitatea de arie a suprafeei transversale, adic :
Ee = de / dAn

(2)

care are unitatea de msur W / m2 .


Dac eliminm fluxul de energie radiant ntre relaiile 1) i 2) vom obine o relaie
ntre iluminarea energetic a unei suprafee i intensitatea energetic a unei surse
punctiforme sub forma :
Ee = Ie / r2

(3)

Dac fasciculul cade sub inciden oblic, astfel nct axa conului care delimiteaz
unghiul solid este nclinat fa de normala la suprafa cu unghiul , n relaia (3)
apare proiecia pe direcia normal la suprafa definit de versorul n, adic expresia
se nmulete cu cos :
Ee = ( Ie / r2 )cos

78

Efectul luminii din domeniul vizibil asupra ochiului depinde n afar de


caracteristicile fizice ale luminii (densitatea de energie, frecvena) i de sensibilitatea
diferit a ochiului la frecvene diferite ale luminii. Din msurtori fotometrice
efectuate s-a constat c ochiul omenesc are sensibilitatea maxim la frecvenele din
mijlocul spectrului vizibil, adic n verde. S-a convenit s se considere c
sensibilitatea ochiului este maxim pentru = 550nm. Aceasta nseamn c pentru a
obine un anumit efect luminos asupra ochiului, la aceast lungime de und este
necesar cel mai mic flux de energie radiant. Pentru a caracteriza sensibilitatea
ochiului la diferite culori se definete sensibilitatea spectral a ochiului (eficien
luminoas) V , care este egal cu raportul dintre fluxul de energie radiant e0 care
produce o anumit senzaie luminoas la = 550nm i fluxul de energie radiant e
care produce aceai senzaie luminoas la alt lungime de und , adic :
V = e0 / e
Dependena de lungimea de und a funciei V

este diferit ziua i noaptea.

Dependena nocturn are un maxim deplasat spre albastru. Cu ajutorul mrimii V se


poate trece de la definirea mrimilor fotometrice. Efectul radiaiilor asupra ochiului
se caracterizeaz prin urmtoarele mrimi fotometrice :
-

fluxul luminos

intensitatea luminoas

iluminarea
79

Fluxul luminos este mrimea fotometric corespunztoare mrimii energetice fluxul


de energie radiant e i se definete ca produsul :
= kV e,

k = constant numit echivalent fotometric

al radiaiei.
Unitatea de msur pentru fluxul luminos este lumenul ( lm ). Astfel, echivalentul
fotometric al radiaiei are valoarea k = 683 lm/w.
Intensitatea luminoas a unei surse punctiforme este fluxul de energie luminos
emis n unitatea de unghi solid, adic :
I = d / d
Intensitatea luminoas este mrime fundamental pentru mrimile fotometrice n
sistemul internaional de uniti (SI). Unitatea de msur este candela (cd), fiind egal
cu intensitatea luminoas ntr-o direcie dat a unei surse care emite radiaie
electromagnetic monocromatic cu frecvena de 5401012 Hz i cu intensitatea
energetic n acea direcie egal cu 1/683 (W/sr). Suprafaa unei sfere se vede din
centrul acesteia sub un unghi solid egal cu 4. Astfel, fluxul luminos emis de o
surs n toate direciile cu aceai intensitate luminoas este egal cu :
= 4I
Iluminarea unei suprafee este egal cu fluxul luminos care strbate unitatea de arie a
unei suprafee transversale, adic :
E = d / dAn = ( I / r2 )cos
Unitatea de msur pentru iluminare este luxul (lx). 1 lx = 1 lm/m2. Se mai utilizeaz
i unitatea tolerat phot (ph), care este egal cu 1 lm/cm2, astfel c 1 lx = 104 ph.

80

10. SPECTROFOTOMETRIE
ABSORBIA I EMISIA RADIAIILOR DE CTRE MOLECULE
10.1. Energia moleculelor i posibilitile de modificare a ei
prin absorbia radiaiilor electromagnetice
Spre deosebire de atomi, la care mecanismul curent de absorbie i de emisie a
radiaiilor este cel de tranziie a electronilor ntre diferitele nivele energetice,
moleculele i pot schimba energia i datorit: micrii de vibraie a atomilor la
capetele legturilor prin care sunt fixai, sau prin variaia energiei cinetice de rotaie
a moleculei.
Tranziiile electronice, n cazul moleculeleor i macromoleculelor, se fac
ntre nivele energetice ale orbitalilor moleculari de legtur i antilegtur.
Diferenele energetice (Ete) dintre aceti orbitali corespund unor lungimi de und
plasate n domeniile ultraviolet (UV) i vizibil (VIS). Fiecare tip de legtur are
tranziii electronice n domenii spectrale care permit identificarea ei.
Vibraia se poate face n dou feluri: n lungul legturilor (cnd are loc
ntinderea i comprimarea lor) sau perpendicular pe legturi (cnd se produc
modificri ale unghiurilor dintre acestea). Ca i energia electronilor, energia cinetic a
fiecrui mod de vibraie este cuantificat, cu ajutorul unui numr cuantic, v =
0,1,2,3.... Diferena energetic (Ev) dintre dou nivele de vibraie este constant, iar
cuantele absorbite n acest caz se afl n domeniile de infrarou (IR) - apropiat sau
mijlociu.
ntruct nu exist atom legat care s nu vibreze, energia moleculei pe nivelul de
vibraie cel mai sczut, cu v = 0, este totdeauna superioar unui nivel energetic
electronic -Fig.10.1.

81

Rotaia moleculelor poate produce acumulare de energie cinetic, de


C

1
0

5
1
05
1
50
1
0
5
1
50
1
0

4
3
2
1

0
5

5
1
05

1
50
1
0
5
1
50

3
2
1

A
Nivele
electronice

1
0

0
Nivele
de vibraie
v = 0,1,2...

Nivele
de rotaie
r = 0,1,2...

Fig.10.1 Dispunerea nivelelor energetice moleculare.


Sgetile reprezint cteva dintre tranzitiile permise ntre
nivelele electronice A si B. Selectia tranzitiilor prmise
se face cu regulile: vsup vinf = 1 si rsup rinf = 1.

asemenea

cunatificat.

Numrul cuantic de rotaie, r


=

0,1,2,3...

cuantific

momentul cinetic de rotaie i


energia

corespunztoare.

ntruct exist molecule care


nu se rotesc, primul nivel de
rotaie (r = 0) se suprapune
peste primul nivel de vibraie
- Fig.1. Diferenele energetice
datorit rotaiei (Er) sunt i
mai

reduse,

cuantele

corespunztoare fiind n IR
ndeprtat.

Influena agitaiei termice.


ntruct energia cinetic de agitaie termic, pe mol, este de ordinul RT (constanta
gazelor x temperatura absolut) adic 2,5 Kcal/mol, o proporie mare dintre molecule
se vor afla pe unul din nivelele energetice de rotaie, iar o fraciune redus pe unul din
nivele de vibraie. Rezult c, n echilibru termodinamic, populaia de molecule se va
afla distribuit pe o multitudine de nivele energetice foarte apropiate ntre ele.
10.2. Absorbia energiei de ctre molecule, spectre moleculare
Moleculele i macromoleculele pot absorbi radiaii electromagnetice, cuante de
energie h. Energia primit modific prin unul sau mai multe din mecanismele de
mai sus energia moleculei absorbante. Pentru o cuant din domeniul UV-VIS va fi
adevrata egalitate:
82

hEte + Ev + Er
ntruct nivelele ntre care se face tranziia, pot avea stri de vibraie i/sau de rotaie
diferite, rezult c, pentru o tranziie ntre aceleai nivele electronice, cuantele
absorbite pot avea energii diferite. (Fig.10.1). Spectroscopic fenomenul se traduce
prin apariia unui numr corespunztor de linii, apropiate ntre ele, grupate n bande
sau benzi spectrale.
Liniile care compun benzile de absorbie molecular pot fi distinse numai n cazul
moleculelor izolate, aflate n stare gazoas. Pentru moleculele dizolvate, cum sunt
macromoleculele biologice, interaciunea cu solventul face ca liniile din bezi s nu
mai pot fi distinse.
10.3. Emisia radiaiilor de ctre macromolecule, luminescena
Posibilitatea de aducere a macromoleculelor n stare excitat
Pentru a emite radiaii, un atom sau molecul trebuie s se gseasc pe un nivel
energetic superior (ntr-o stare excitat), radiaia fiind emis la trecerea pe un nivel
energetic inferior.
Energia necesar excitrii poate fi termic (substane aduse la incandescen),
electric (descrcri n gaze), chimic sau radiant (excitarea radiativ). Excitarea
radiativ, prin absorbie de cuante, este modul curent de a aduce moleculele n soluie
ntr-o stare n care sunt capabile s emit radiaii.
Dezexcitarea moleculelor
n afar de dezexcitarea prin emisie de radiaii (tranziie radiativ) o molecul
poate trece pe un nivel energetic inferior prin tranziii neradiative. Tranziiile
neradiative se explic prin convertirea energiei n alte forme, cum sunt energia
chimic, electric sau mecanic de agitaie termic. n acelai lan de procese ce
nsoete revenirea unei molecule la starea de energie joas se ntlnesc ambele tipuri
de desexcitri. (Fig.10.2.)

83

Luminescena este
fenomenul de emisie a unor

s
absorbtie

radiaii de lungime de und mai

emisie

mare (frecven i energie mai


reduse), n comparaie cu cele

fluorescent
s - stare singlet; t - stare triplet;
- desexcitare neradiativ

fosforescent

ale radiaiilor pe care substana


le-a absorbit. Ea reprezint

Fig. 10.2. Tranzitiile electronice la producerea


luminescenei

modalitatea curent de emisie a


radiaiilor de ctre moleculele
aflate n soluie, la temperaturi
obinuite.

Faptul poate fi uor explicat dac inem cont c ntre excitarea radiativ (n care
molecula absoarbe cuanta cu energia h abs) i dezexcitarea radiativ (n care emite
cuanta h emis) au loc una sau mai multe dezexcitri neradiative, n care molecula
comunic sistemului (de obicei solventului) o cantitate de energie termic, En.
Legea conservrii energiei se va scrie:
h abs = h emis + En
Este evident c energiile cuantelor emise sunt mai reduse dect cele ale celor
absorbite.
Dup natura strii intermediare de pe care se face dezexcitarea radiativ,
luminescena poate s se produc n dou moduri: fluorescen i fosforescen.
(Fig.10.2.)
Fluorescena apare atunci cnd, dup dezexcitarea neradiativ, electronul i
pstreaz spinul de sens opus perechii sale, rmas pe nivelul energetic inferior (stare
singlet). Timpul de via, , al electronului n aceast stare este extrem de scurt, =
109 ... 103 s. Dup acest interval de timp, toi electronii au revenit pe nivelele
inferioare. Practic, fenomenul dureaz numai ct timp dureaz excitarea radiativ.
Excitarea este realizat cu radiaii care corespund unei benzi de absorbie intens
a substanei.

Indiferent de

lungimea de und aleas pentru excitare, datorit


84

multitudinii nivelelor de vibro-rotaie ale populaiei de molecule, lumina emis se


distribuie ntr-o band.
Fluorescena este produs de majoritatea macromoleculelor aflate n soluie. n
cazul proteinelor, responsabili de producerea fluorescenei sunt radicalii aromatici ai
unor aminoacizi (Phe, Tyr, Trp), iar n cazul acizilor nucleici toate bazele azotate.
Fosforescena se produce dac pe nivelul intermediar, de pe care revine,
electronul excitat se afl cu spinul n acelai sens cu cel al electronului rmas pe
nivelul inferior (stare triplet). Timpul de via al electronului n aceast stare poate fi
mult mai lung, = 103 s ... ore. nseamn c substanele fosforescente, coninnd o
multitudine de electroni excitai, continu s emit lumin nc mult timp dup ce a
ncetat iluminarea care a produs excitarea.
ntruct fosforescena poate avea loc numai n stare solid, ea nu i-a gsit
aplicaii n studiul biomacromoleculelor.
10.4. Studiul macromoleculelor prin spectroscopie de absorbie

Msurarea absorbiei radiaiilor de ctre o substan


Absorbia se exprim cantitativ cu ajutorul extinciei (E) numit i absorban
(A). Ea exprim gradul de atenuare a unui fascicol de luminos dup strbaterea unui
strat de substan ce conine molecule absorbante.
La trecerea unui fascicol luminos de o anumit lungime de und , printr-un strat de
substan cu grosimea dx, el va fi absorbit conform legii :
-dI= K I dx, dI= I I0,
Unde I este intensitatea fascicolului dup ce a strbtut stratul absorbant, dI este
variaia elementar a intensitii, K este constanta de absorbie a mediului pentru
lumina cu lungimea de und .

85

I0

I
dx

Fig.10.3. Scderea
intensitii fascicolului
luminos la trecerea
printr-un strat de
substan cu grosimea x

I =I0 e k x

x
Extincia, datorat unui component din soluie, crete linear cu concentraia lui
molar, C, i cu grosimea stratului de soluie strbtut, x :
E=Cx

(legea Lambert i Beer)

se numete coeficient molar de extincie i, pentru scopuri biologice, unitatea


curent este de M1.cm1, exprimat uneori ca litri/mol.cm . Valoarea lui nu depinde
dect de natura absorbantului i de lungimea de und la care a fost msurat. Se
poate demonstra c :
E = lg I0 / I = lg T, unde T este gradul de transmisie al luminii, adic
T = I / I0 sau T(%) = I /I0 . 100.
Spre exemplu, valoarea extinciei unui fascicol luminos a crui intensitate scade de
10 ori fa de cel incident pe suprafa, va fi E=1.
Se numete curb caracteristic de absorbie, sau spectrul de absorbie al
substanei, graficul dependenei coeficientului molar de extincie de lungimea de
und: = ().
Informaiile oferite de curba caracteristic de absorbie privesc: a) tipurile
legturilor i energetica lor (prin lungimile de und la care se plaseaz maximele de
absorbie) i b) abundena gruprilor sau legturilor absorbante (prin valorile
coeficienilor de extincie). Ea este determinat de natura moleculei (compoziie,
structur) i depinde de interaciunile (intra- sau intermoleculare) pe care le are
molecula sau pri ale ei.
Selectarea lungimilor de und potrivite pentru determinarea concentraiilor prin
msurtori de extincie se face utiliznd monocromatoare. Lungimea de und la care
se fac determinrile se alege astfel nct substana de determinat s prezinte
86

absorbanta maxim iar ceilalti componeni ai amestecului s absoarb ct mai puin


(sau deloc). Trebuie menionat c toate corpurile apar colorate n culoarea
complementar radiaiilor absorbite, deci pentru a obine extincia maxim pentru o
soluie de o anumit culoare, trebuie ales un filtru de culoare complementar acesteia
(vezi diagrama de mai jos).

Fig.10.4. Diagrama culorilor complementare

Gruprile cromofore reprezint grupri de atomi, legate prin interaciuni chimice


sau fizice, i care au benzi de absorbie caracteristice.
Absorbia n ultraviolet i vizibil se datorete gruprilor cromofore reprezentate de
legturile covalente. Cromo-for nseamn purttor de culoare. Culoarea observat
la o soluie strbtut de lumin alb, se datorete radiaiilor pe care moleculele ce o
compun le las s treac (nu le absoarbe).
Legtura simpl, CC, absoarbe sub 160 nm, dar studiile la < 180 nm sunt
imposibile n soluie apoas, ntruct i legturile covalente ale apei absorb puternic
n acest domeniu.
Legturile duble absorb ntre 180 i 300 nm prin tranziiile electronice ntre orbitalii
i *.

87

Dublele legturi conjugate ale ciclurilor aromatice (aminoacizi ca Phe, Tyr, Trp),
sau ale heterociclurilor bazelor
1

cm )

azotate

8000

pirimidinice), au cte o band


ghem haotic

4000

(purinice

de absorbie intens ntre 230


i

300

nm.

lungimilor
maximelor,
coeficienilor

180
200
220
(nm)
Fig. 10.5 Spectrele de absorbie n UV ale
poli-L-lizinei n conformaiile ,
ghem haotic.

de
i

Deplasrile
und

ale

variaiile
molari

de

extincie ai radicalilor, servesc


la

studiul

structurii

interaciunilor cu agenii de
mediu: fora ionic, pH-ul,
temperatura.
Legturile pepetidice (avnd craracter de dubl legtur) absorb ntr-o band cu
dou maxime: unul mai exprimat, la 200 nm, i altul mai redus, la 225 nm. Spectrele
lanurilor polipeptidice, dac acestea adopt o structur secundar definit, au
particulariti caracteristice ale spectrului de absorbie (Fig.10.5).

200000

100000

50000

10000

5000
3000
300
400
500
(nm)
Fig. 10.6 Spectrele de absorbtie ale oxihemoglobinei (),
deoxihemoglobinei () si methemoglobinei (- -)

600

88

Metaloproteinele, ca i compuii ce conin radicali aromatici policiclici i sisteme


de duble legturi conjugate absorb n domeniul vizibil.

Prima categorie include compuii metalelor tranziionale, iar pentru a doua se pot cita
flavo-proteinele. Proteinele heminice (hemoglobina - Fig.10.6.

i citocromii) au

spectre caracteristice datorate, pe de o parte, nucleului conjugat tetrapirolic i, pe de


alt parte, prezenei ionilor de fier. Cuprul, determin spectrele ceruloplasminei
plasmatice, citocrom-oxidazelor mitocondriale sau al hemocianinei (transportorul de
oxigen din sngele unor nevertebrate).
Absorbia n infrarou, n condiii apropiate de cele biologice, are loc datorit
vibraiilor moleculare, fiindc, aa cum s-a vzut, n soluie strile rotaionale pure nu
pot exista. Domeniul spectral n care se lucreaz este IR apropiat i mediu.
n cazul vibraiilor longitudinale ale legturilor marginale, de exemplu, se cunosc
lungimile de und ale maximelor de absorbie. Dac atomii acestora particip la puni
de hidrogen se produc deplasri caracteristice, n sensul creterii lungimilor de und.
(Tabelul. 1)
Tabelul 1 : Poziiile maximelor de absorbie pentru vibraiile longitudinale ale unor legturi
LEGATURA

Lungimea de und

Lungimea de und

n lipsa legturii de H

n prezena legturii de H

OH

2,75 m

3,00 m

NH

2,95 m

3,10 m

SH

3,90 m

4,00 m

C=O

5,90 m

6,05 m

Soluiile apoase nu sunt propice studiilor n infrarou datorit celor dou benzi de
absorbie intens ale apei (n jurul a 3,1 m i 6,1 m). Legturile de hidrogen, care
89

de pot studia uor n solveni neapoi, nu pot fi studiate n ap.

10.5. DESCRIEREA SPECTROFOTOMETRULUI UV-VIS


SP-8001 METERTECH

90

Parametrii tehnici

Domeniul de msurare:
200-1100 nm
Lime de band:
2 nm
Precizia lungimii de und:
1 nm
Monocromator:
split beam (raz divizat)
Reproductibilitate: 0.2 nm
Domeniul fotometric: - 0.300-3.000 Abs
Precizia fotometric: 0.005 % la 1.000 Abs
Stabilitate (drift):
< 0.0003 Abs / or la 500 nm
(dup 1 or de nclzire)
Stabilitate baseline: 0.002 Abs (ntre 210-1000 nm)
Lumina mprtiat: < 0.05% la 340 nm i 220 nm
Surs de lumin:
lamp deuteriu (UV) i lamp halogen (VIS)
Schimbare surs de lumin: automat
Detector: dou fotodiode
Vitez de nregistrare spectru: 100-5000 nm/min
Drum optic: schimbabil ntre 10-100 mm
Afiaj: LCD cu iluminare din spate, contrast reglabil
Ieiri semnal: port serial i paralel
Alimentare / sigurane:
100/120/220/240 V ~ 50/60 Hz
sigurane: T 2A 220/240 V, T 4A 100/120 V
Ambient / umiditate: temperatura camerei: 15-30C, umiditate < 80%
Dimensiuni: 506 mm x 430 mm x 220 mm. Masa: ~18 kg
91

Moduri de msurare: la lungime de und fix, nregistrare de spectru, msurare n


timp la o lungime de und, msurare cantitativ, cinetic simpl.

ELEMENTE DE COMAND

Comanda spectrofotometrului, introducerea parametrilor de msurare precum i


vizualizarea rezultatelor se face cu ajutorul butoanelor tastaturii protejate cu folie. Se
pot observa urmtoarele grupuri:
Taste funcii:
Taste
numerice:
:
CLEAR:
ESC:
ENTER:
READ:
AUTO ZERO:
Sgei:
CELL
CELL
QUICK RUN:

F1-F5, selectarea unei funcii de pe afiaj


cifre, punct zecimal, semnul minus
introducerea lungimii de und dorite
tergerea valorilor nedorite
ntoarcere dintr-o fereastr n cea precedent, sau ntoarcere de la o
operaie la un nivel superior de meniu
validarea datelor sau operaiilor introduse
pornirea msurtorii conform parametrilor setai
corecie blanc, seteaz valoarea fotometric la 0 ABS (100%T)
deplasarea cursorului prin lista parametrilor
deplasare schimbtorului de cuve nainte cu o poziie
deplasare schimbtorului de cuve napoi cu o poziie
la apsarea tastei apare lista tuturor fiierelor salvate cu parametrii
de msurare, indiferent de modulde lucru; alegnd de aici, se
ajunge imediat n modul de lucru corespunztor

PORNIRE I FUNCIONARE: Ne asigurm c n incinta de lucru nu este nici o


cuv. Se nchide capacul incintei, se pornete aparatul. Pe afiaj vor aprea urmtoarele
mesaje:

92

12:00:00

Metertech
Metertech Inc. SPUV/VIS
All rights reserved
Version 1.0

Detect
Initial System.....

Aparatul va executa un autotest, va aprinde lmpile i va recunoate accesoriile


opionale, dac ele exist, toate acestea n mod automat. Dup iniializare va fi afiat
fereastra meniului principal. De aici se poate alege din apte (ase) opiuni.

12:00:00
System Main Menu
1.Photometric
2.Spectrum
3.Timescan
4.Kinetic
5.Quantitative
6.System Setup

Select Number:1

Quick
Run

Sample
Control

93

Alegerea se face prin tastarea numrului corespunztor sau prin deplasarea benzii
luminoase (hightlight) urmate de apsarea tastei ENTER. Pe partea de jos a afiajului
mai sunt dou opiuni, dintre care "Sample Control" are sens doar n cazul utilizrii
unui suport multicell (multicuv), iar cu tasta F1 de sub "Quick Run" se poate intra n
meniul de fiiere, ca i cu ajutorul tastei QUICK RUN. Parametrii de baz ai
spectrofotometrului se pot seta din submeniul 6, "System Setup". Opiunile din acest
submeniu se aleg prin tastarea numrului corespunztor urmat de apsarea tastei
ENTER.
Setup clock: pentru setarea datei i orei.
1.
Setup lamp: aici putem vedea nivelul de energie a lmpilor, putem opri
2.
lmpile individual, totodat aici putem reseta la zero orele de funcionare a
lmpilor, dup nlocuirea cu una nou.
Setup printer: pentru alegerea tipului potrivit de imprimant.
3.
Setup RS-232: pentru setarea portului serial.
4.
Setup hardware: se pot seta trei parametri de baz:
5.
lungimea de und la care se comut sursa de lumin la trecerea din VIS n
UV. n cazul n care lungimea de und de msurare coincide cu cea de
comutare a sursei de lumin setat de productor (363 nm), se recomand
modificarea acestei valori n intervalul 330 i 365 nm.
Switch to..... comutare ntre accesorii i single cell.
Scan base line..... dac este setat pe ON, dup pornire, aparatul msoar
automat un baseline.
Measure bandwidth: Pentru msurarea limii de band se apas tasta
6.
READ. Va fi nregistrat spectrul lmpii UV. Dac aparatul este bine calibrat,
atunci va rezulta un vrf n jurul valorii de 656.1 nm, iar limea de band va
fi sub 2 nm. Rezultatul poate fi tiprit apsnd tasta de sub "Print Data".
Measure baseline: apsnd ENTER, se va msura un baseline.
7.
Search zero point: msurare n poziia de zero, pentru test hardware.
8.
EFECTUAREA MSURTORILOR N DIFERITE MODURI
a) MSURARE LA LUNGIME DE UND FIX
Este un mod de msurare simplu, la lungime de und fix. Se pornete din meniul
principal, alegnd punctul 1. Apare fereastra Photometric Parameter setup.
Deplasndu-ne cu ajutorul sgeilor, putem selecta parametrii dorii pentru setare sau
editare. Avem posibilitatea de a ncrca i seturi de parametri de la msurtori
anterioare, prin apsarea tastei funcie F1, de sub afiaj. Cu tasta F2 se salveaz, cu
F3 se tipresc parametrii. Pot fi setai urmtorii parametri de msurare:
Input the Number of

stabilirea numrului de lungimi de und de msurare


94

:
Measure Mode:

(1-5); dup apsarea tastei ENTER se dau valorile lor.


alegerea modului de msurare: ABS-absorban,
transmitan, Conc.-concentraie.
specificarea numrului ciclurilor de msurare (1-999)
pe aceai prob. Un ciclu nseamn cte o msurare la
fiecare lungime de und din list.
timp de ateptare (1-999 sec) ntre cicluri
Dac se seteaz pe Yes, rezultatele se tipresc dup
fiecare ciclu.

Cycle Number:
Cycle Interval (sec):
Print Every Cycle:

12:00:00

PHOTOMETRIC

500.0nm

Parameter
Setup
1.Input the Number of
1 :500.0

:1

2.Measure mode
Have unit(Yes/No)?
Unit
Factor(default=1)
3.Cycle number
4.Cycle interval(sec)
5.Print every cycle

:ABS
:Yes
:
:1.000
:1
:0
:No

Number from 1 to 5...


Load
Save
Print Sample Next
Param Param Data
Contro Screen
Dup setarea tuturor parametrilor, se recomand salvarea lor ntr-un fiier. Dup
apsarea tastei F2, apare un careu cu litere. Selectarea unei litere are loc prin
deplasarea cu ajutorul sgeilor pe linia care o conine, urmat de apsarea numrului
corespunztoare coloanei n care se gsete ea.
Dup completarea numelui se apas tasta ENTER, apoi cu ajutorul sgeilor ne
deplasm pe o linie goal i se apas din nou ENTER; fiierul este salvat. Se pot
salva cte 15 fiiere pentru fiecare mod de msurare.
Atenie! Aparatul va suprascrie fr ntrebare fiierele cu acelai nume!!
Dup introducerea parametrilor se apas tasta F5, apare un tabel gol, i fotometrul se
poziioneaz pe prima lungime de und din list.
A se urmri ntotdeauna mesajele din partea de jos a afiajului, operaiile acelea
trebuie efectuate.
95

%T-

Pentru a ine cont de valoarea blancului, se aeaz cuva goal sau umplut cu solvent
n suportul de cuve i se apas tasta AUTO ZERO.

12:00:00

PHOTOMETRIC

550.0nm

400.0 450.0 500.0 550.0


N
ABS1
ABS2 ABS3 ABS4
o
1 0.855 1.223 1.501 1.802
2 0.855 1.224 1.502 1.803
3 0.854 1.223 1.502 1.801
4 0.855 1.224 1.503 1.803
5 0.854 1.223 1.501 1.802
Press READ when ready...
Print
Prev
Data
Screen
Msurarea pornete dup apsarea tastei READ. La sfrit se poate reporni msurarea
sau pot fi printate datele. Exist i un mod foarte simplu de msurare pentru cazul n
care se lucreaz la o singur lungime de und. Din meniul principal se apas tasta .
Cu tasta "Mode" se alege modul fotometric de msurare (absorban, transmitan,
concentraie).

96

12:00:00
0.000A

LAMBDA

500.0nm

: 500.0 nm

Data: 0.000 A
Press & keyin
wavelength...

View
Data

Save
Data

Mode
Sample Toggle
A/C/%T Contro Digits
l

Se introduce lungimea de und i se valideaz cu ENTER, dup care msurarea


pornete imediat i se afieaz rezultatul. Se poate i salva prin apsarea tastei F2. O
msurtoare nou se poate porni apsnd din nou tastele i ENTER. Cu tasta F1
(View Data) se pot afia rezultatele msurtorilor i se pot i tipri. Rezultatele nu
sunt salvate definitiv; dac se iese din acest mod de msurare, ele se pierd.
b) NREGISTRARE DE SPECTRU
n modul de nregistrare de spectru avem posibilitatea de a msura fie pe un domeniu
restrns, fie pe tot domeniul spectrofotometrului, cu specificarea vitezei de scanare.
Spectrul rezultat poate fi prelucrat n diverse moduri, poate fi printat, salvat i deschis
mai trziu. Spectrele pot fi i suprapuse n aceai fereastr (overlay). Pentru pornirea
acestui mod, din meniul principal se alege punctul 2. Navignd cu tastele sgei,
putem seta sau edita parametrii.

97

12:00:00

SPECTRUM

500.0nm

Param
1.Start
2.Stop
3.Measure mode
4.Low value(ABS)
5.High value(ABS)
6.Scan
7.Overlay screen

:400.0
:800.0
:ABS
:-0.30
:3.00
:1000
:Yes

Number from 200


to 1098...
LSave
Print Sample Next
PParam Data
Control Screen
a
r
Comenzile afiate n partea inferioar a ferestrei se pot executa cu ajutorul tastelor de
sub ele. Putem seta urmtorii parametri de lucru:
Start Wavelength:
Lungimea de und de start (200-1098 nm)
Stop Wavelength:
Lungimea de und final (202-1100 nm)
Measure Mode:
Modul de msurare fotometric (absorban,
transmitan)
Low Value:
Limita de jos a scalei grafice pe timpul msurrii
(-0.3-2.99 A / 0-119.9 %T)
High Value:
Limita de sus a scalei grafice pe timpul msurrii
(-0.29-3.00 A / 0.1-120.0 %T)
Scan
Speed
Viteza de scanare a spectrului (100-5000 nm/min)
(nm/min):
Overlay Screen:
Yes nseamn c msurtorile succesive vor fi afiate
suprapuse n fereastr. Numai ultima msurtoare se
poate analiza.
Dup setarea tuturor parametrilor, este indicat salvarea lor ntr-un fiier, similar
celor descrise la modul fix de msurare. Acestea pot fi rechemate oricnd pentru
pornirea unei msurtori. Putem salva n total 15 fiiere de parametri. Dup umplerea
memoriei, rndurile vor fi suprascrise. Deasemenea, la o salvare aparatul nu va cere
confirmarea suprascrierii rndului actual. Din acest motiv, se recomand deplasarea
98

cu ajutorul sgeilor pe un rnd gol. Dup validarea parametrilor de msurare se


apas tasta F5 (Next Screen) i se va intra n fereastra grafic de msurare.
12:00:00

SPECTRUM

800.0nm

1
.
5
0
A
B
S

0
.
7
5

0
.
0
0
4
0
0

Nm

605

800

Press READ when ready...


Access Mani- Clear
Prev
Data
pulate Graph
Screen
Pe partea de jos a ecranului apare mesajul "Press READ when ready". A se urmri
ntotdeauna mesajele din partea de jos a afiajului, operaiile acelea trebuie
efectuate.
Deoarece spectrofotometrul are un singur drum optic, un spectru msurat s-ar
compune din absorbanele ansamblului cuv + solvent + prob necunoscut. Din
aceast cauz, pentru luarea n consideraie a valorii de blanc, nainte de msurarea
propriu zis, vom introduce n suport cuva sau cuva cu solventul pur i vom apsa
tasta AUTO ZERO. Dup care aparatul va msura un baseline (blanc) pe domeniul de
lungimi de und definit prin parametri de lucru; acesta va fi sczut din msurtorile
de probe pornite cu tasta READ.
Se aeaz cuva cu prob n locaul din incinta de lucru, se nchide capacul incintei. Se
apas tasta READ, msurtoarea pornete i spectrul va fi trasat pe ecranul grafic. Pe
partea de sus a ecranului sunt afiate lungimea de und i valoarea fotometric,
actuale. Msurtoarea poate fi oricnd oprit prin apsarea tastei ESC. La sfrit,
dac este nevoie, cu tasta READ putem nregistra din nou spectrul. Pe partea de jos a
ecranului se vd ferestrele operaiilor posibile.
Ele pot fi executate cu ajutorul tastelor funcii (F1-F5), aflate dedesubt.
Cu tasta "Prev Screen" (F5) ne ntoarcem n fereastra de parametri. Cu tasta "Clear
Graph" (F3) putem terge spectrul. Dac am activat overlay, vor fi terse toate
spectrele.
99

Cu tasta "Acces Data" (F1) acceptm msurtoarea. n ferestrele de jos vor aprea noi
mesaje:
F 3 "Print Data" printarea rezultatului;
F 2 "Save Data" salvarea spectrului sub numele dat de noi (5 fiiere);
F 1 "Load Data" rencrcarea spectrelor salvate pentru analiz. Cu banda luminoas
ne poziionm pe rndul dorit i cu ENTER l ncrcm n fereastra grafic de mai
nainte. Cu tasta ESC putem urca cu un nivel mai sus, unde putem face analiza
spectrului.
c) ANALIZ DE SPECTRU
Putem intra n acest punct de meniu dup nregistrarea unui spectru sau dup
reapelarea unui spectru salvat n prealabil. Pentru acesta trebuie s apsm tasta F2 de
sub fereastra "Manipulate".
Vom avea urmtoarele posibiliti:
- F1
Smooth Data: netezirea automat a curbei
- F2
Zoom Data: mrirea/micorarea curbei; la axa Y plpie cursorul, acolo
trebuie introdus noua valoare apoi se valideaz cu ENTER. Cursorul va sri la
poziia urmtoare; prin repetarea operaiei precedente i terminnd pe partea dreapt a
axei X, curba va fi redesenat conform coordonatelor. Apsnd din nou tasta F2 se va
repeta procesul, sau se poate reveni la aspectul iniial cu tasta F5.
- F3
Show Track: apare o linie vertical, n rndul de sus va fi afiat poziia
ei actual i valoarea fotometric corespunztoare. Poate fi deplasat cu tastele sgei,
astfel putem cuta orice vrf sau vale. Dac ntr-un loc apsm tasta "Save Data",
datele vor fi salvate. Cu "View Data" se pot vizualiza, cu "Print Data" se pot printa
datele vrfurilor. Ieirea se face cu tasta ESC.
- F4
Peak Walley: dup apsare, apare jos un meniu nou.

100

12:00:00

SPECTRUM

1
.
5
0
A
B
S

0
.
7
5

0
.
0
0
4
0
0

View
Data

Nm

605

800

Press
hot
key
to
Search Search Less
More
Peak
Valley Point Point

Alegnd "Search Peak" se va face o cutare de maxime. Dac se alege "Search


Valley" se vor cuta minime ale spectrului. Folosind tastele "Less Point", "More
Point" se va executa o cutare pentru mai puine, respectiv pentru mai multe puncte.
Dup cutare, datele pot fi afiate sub form tabelar dac se apas tasta "View
Data", de aici pot fi i printate.
12:00:00
0.132A

SPECTRUM

800.0nm

Data File List


------------------------------Data01
413.2nm
0.344A
Data02
498.8nm
1.415A
Data03
587.1nm
0.352A
Data04
714.3nm
1.065A
Data05
787.5nm
0.534A

Prev
Page

Next
Page

Print
Data

Prev
Screen
101

Cu tasta F5 (Prev Screen) ne ntoarcem n fereastra precedent, de analiz. Cu tasta


ESC ne putem deplasa napoi prin structura meniului.
d) MSURARE N TIMP (TIME SCAN)
n acest mod de msurare putem nregistra variaia n timp a valorii fotometrice alese,
la o lungime de und. Se utilizeaz pentru urmrirea reaciilor, pentru msurtori de
cinetic. Este posibil ntrzierea msurtorii propriu-zise (Delay Time), astfel citirea
pornete numai dup expirarea timpului setat. Din meniul principal putem ajunge n
modul Time Scan alegnd punctul trei. Apare fereastra Parameter Setup.

12:00:00
0.000A

TIMESCAN

500.0nm

Parameter
1.Wavelength(nm)
2.Scan time(sec)
3.Delay time(sec)
4.Measure mode
5.Low value(ABS)
6.High value(ABS)
7.Overlay screen

Load
Param

:500.0
:30
:0
:ABS
::3.00
:Yes

Number from 200 to


Save
Print Sample Next
Param Data
Contro Screen

Dup ce am setat parametrii, putem porni msurtoarea sau i putem salva ntr-un
fiier. Tot de aici, parametrii pot fi i printai. Putem seta urmtorii parametri:
Wavelength:

Lungimea de und aleas (200-1100 nm)

Scan

Time:

Durata msurtorii (5-9999 sec)

Delay

Time:

Timpul de ntrziere; dup apsarea tastei READ, msurtoarea


propriu zis va porni dup acest timp (0-50 sec)
Modul de msurare fotometric (ABS sau %T)
Limita de jos al ecranului grafic pe timpul msurtorii
(-0.3-2.99 Abs / 0-119.9 %T)

Measure Mode:
Low Value:

102

High
Overlay
Screen:

Value:

Limita de sus al ecranului grafic pe timpul msurtorii


(-0.29-3.00 Abs / 0.1-120.0 %T)
Yes nseamn c msurtorile succesive vor fi afiate suprapuse
n fereastr. Numai ultima msurtoare se poate analiza.

Dup setarea parametrilor, dac este necesar, msurm valorea de blanc, apoi aezm
cuva cu prob n incinta de lucru i nchidem capacul.
Apsm tasta READ, dup trecerea timpului setat la delay time va porni
msurtoarea i curba va fi trasat pe ecranul grafic. n partea de sus al ecranului se
poate vedea timpul scurs i valoarea fotometric actual. Putem opri msurtoarea cu
tasta ESC.

12:00:00 TIMESCAN
0.000A

500.0nm

1
0
1
.
0
%
T

1
0
0
.
0

9
9
.
0
0

Sec

150

300

Press READ when ready...


Access Mani- Clear
Prev
Data
pulate Graph
Screen
La sfrit putem repeta msurtoarea cu tasta READ.
Pe partea de jos a ecranului sunt afiate ferestrele comenzilor ce pot fi executate.
Acestea pot fi lansate cu tasta aflat dedesubtul lor (F1-F5). Analiza rezultatelor se
face similar celor descrise la analiza spectrelor.
e) MODUL DE MSURARE CANTITATIV
n acest mod de msurare avem posibilitatea determinrii concentraiei unei probe
necunoscute, pe baza unei curbe de calibrare nregistrate n prealabil de ctre
utilizator cu ajutorul unor soluii standard, a cror concentraie se cunoate. Se pot
nregistra patru tipuri de curb de calibrare. Din meniul principal putem ajunge n
modul Quantitative alegnd punctul cinci. Apare fereastra Parameter Setup
103

.
12:00:00

QUANTITATIVE

500.0nm

Parameter
1.Wavelength(nm)
2.Standard
S
1:0.0
S 3:0.0

:500.0
:3

3.Have Unit(Yes/No)

:No

4.Method
:
5.Keyin ABS
6.Print every cycle

:No
:No

Number from 200 to


Load
Save
Print Sample Next
Param Param Data
Contro Screen
Navignd cu tastele sgei, putem seta sau edita parametrii. Validarea lor se face prin
apsarea tastei ENTER. Putem ncrca i seturi de parametri salvai anterior.
Lista parametrilor de setat este urmtoarea:
Wavelength:
Lungimea de und aleas (200-1100 nm).
Standard Number:
Numrul standardelor cu concentraia cunoscut (1-10) .
Have
Se vrea asocierea valorilor cu o unitate de msur? Dac
Unit(Yes/No):
se alege Yes, apare un tabel din care putem alege una
dintre cele 12 u. m.
Method:
Tipul curbei de calibrare (avem patru opiuni):
1'ord.(Origin):
dreapt, care trece prin origine;
1'ord. (No Org): dreapt, care nu trece prin origine;
2'ord. (Origin):curb de gradul doi, care trece prin origine;
2'ord. (No Org):curb de gradul doi, care nu trece prin origine.
Keyin ABS:
"No" nseamn c soluiile standard trebuie msurate;
"Yes" - absorbana soluiilor standard se introduce manual.
Print Every Cycle:
S se printeze dup fiecare msurare sau nu.
Dup validarea tuturor parametrilor, cu tasta F5 trecem n fereastra Quantitative
Standard Table. Apsm tasta READ, pe rndul de sus apare concentraia introdus
mai nainte, precum i un mesaj n partea de jos: "Press READ for read stds". Dup
apsarea tastei apare un mesaj nou: "Insert stds and press READ". Acum putem
introduce primul standard din seria de diluie. Se apas READ, dup care valoarea
absorbanei msurate va fi nscris n rndul corespunztor. Celelalte soluii din seria
de standarde se msoar la fel. Cu tasta F2 trecem n fereastra "manipulate" unde
"View Curve" ne va afia curba de calibrare, iar "View Equati" ecuaia pe baza creia
aparatul va calcula concentraia probelor necunoscute, dup ce le-a msurat
absorbana. (Apsnd "Keyin Factor" putem edita parametrii K1 i K0 ai ecuaiei,
104

corectnd astfel valoarea calculat). Dac nu dorim folosirea factorului, ne ntoarcem


cu "Prev Screen".
Cu tasta "Sample Measure" (F2) ajungem n fereastra de msurare propriu zis.
Measure Sample
--------------------------------Sample
ABS
Conc.( G/L)
1
0.521
5.2100
2
1.137
11.370
3
2.325
23.250

Press READ when ready...


Print Sample Prev
Data
Contro Screen
Acum putem aeza cuva cu proba de concentraie necunoscut n incint. Dup
nchiderea capacului se apas tasta READ; msurtoarea va fi executat. Pe rndul de
sus vor fi nregistrate numrul de ordine al probei, absorbana msurat precum i
concentraia calculat pe baza curbei de dinainte. Urmtoarele probe necunoscute vor
fi msurate pe rnd, la fel. La sfrit putem printa rezultatele.
Dup validarea tuturor parametrilor, cu tasta F5 trecem n fereastra Quantitative
Standard Table.
12:00:00

QUANTITATIVE
500.0nm
Standard
Table
--------------------------------Sample
Conc.
ABS
1
1.0000
0.1
2
2.0000
0.2
3
3.0000

Number from 0.3 to 3.0...


Access ManiPrev
Data
Pulate
Screen
Apsm tasta READ, pe rndul de sus, lng concentraia introdus n prealabil, va
plpi cursorul. Aici trebuie introdus cu tastele numerice valoarea absorbanei, apoi
se valideaz cu ENTER. La sfrit cu tasta Esc validm curba de calibrare. Apsm
105

F2 i intrm n fereastra "Manipulate", unde "View Curve" ne afieaz curba de


calibrare, iar "View Equati" ne arat ecuaia pe baza creia aparatul va calcula
concentraia probelor necunoscute, dup ce le-a msurat absorbana. Apsnd "Keyin
Factor" putem edita parametrii K1 i K0 ai ecuaiei. Dac nu dorim folosirea
factorului, ne ntoarcem cu "Prev Screen". Cu tasta "Sample Measure" (F2) ajungem
n fereastra de msurare propriu zis. Acum putem aeza cuva cu proba de
concentraie necunoscut n incint. Dup nchiderea capacului se apas tasta READ,
msurtoarea va fi executat. Pe rndul de sus vor fi nregistrate numrul de ordine al
probei, absorbana msurat precum i concentraia calculat pe baza curbei de
dinainte. Urmtoarele probe necunoscute vor fi msurate pe rnd, la fel. La sfrit
putem printa rezultatele.
f) CINETIC
n acest mod de msurare nregistrm variaia absorbanei n timp la o lungime de
und fix; pe baza curbei nregistrate se poate calcula activitatea. O aplicaie tipic
este analiza activitii enzimatice. Alegnd punctul patru din meniul principal
System, ajungem n acest mod de msurare. Apare fereastra Parameter Setup.
12:00:00

KINETIC

500.0nm

Parameter
1.Wavelength(nm)
2.Sampling Number
3.Lag Time(sec)
4.Rate Time(sec)
5.Delay Time(sec)
6.Have unit(Yes/No)?

:500.0
:5
:2
:12
:0
:No

7.Factor(default=1)
8.Low Value(ABS)
9.High Value(ABS)
10.Measure Temperature
11.Overlay Screen
12.Print every cycle

:1.0
:-0.30
:3.00
:None
:Yes
:No

Number from 2 to 99
Load
Save
Print Sample Next
Param Param Data
Contro Screen
De aici putem introduce sau edita parametrii de msurare. Putem ncrca i parametri
salvai anterior. Avem acces la urmtorii parametri:
Wavelength:

Lungimea de und aleas (200-1100 nm);

Sampling
number:
Lag Time:

Numrul probelor; valorile care vor fi folosite la


calculul activitii (2-20);
Un interval de timp n secunde, dup pornirea
msurtorii, pe durata cruia nu dorim s folosim
datele pentru calcul (2-9999);
Intervalul de timp dup Lag Time, pe durata cruia
dorim s folosim datele pentru calcul (3-9999 sec);

Rate Time:

106

Delay

Time:

Timpul de ntrziere a msurtorii dup apsarea tastei


READ (0-50 sec);
Have
Setnd Yes, vom putea alege dintre 12 uniti de
Unit(Yes/No):
msur;
Factor
Putem seta un factor de care s se in cont la
(default=1):
convertirea variaiei de absorban n activitate (09999.9);
Aktivitate = Factor * ABS/min (panta de variaie a absorbanei)
Low
Value:
Limita de jos al ecranului grafic la msurtoare (-0.32.99 A);
High
Value:
Limita de sus al ecranului grafic la msurtoare (- 0.293.00A). Aceasta trebuie s fie mai mare dect cea de
jos cu min. 0.1.
Measure
Posibilitatea termostatrii: none, 25, 30, 37C. Are sens
Temperature:
doar n cazul echiprii cu accesoriu de termostatare;
Overlay
Yes nseamn c msurtorile succesive vor fi afiate
Screen:
suprapuse n fereastr. Numai ultima msurtoare se
poate analiza (Manipulate);
Print
Every
S se printeze dup fiecare msurare sau nu.
Cycle:
Dup setarea lor, parametrii pot fi salvai pentru utilizri ulterioare. Dup validarea
parametrilor, intrm n fereastra de msurare cu F5. Aezm proba n incinta de lucru,
apoi apsm tasta READ. Msurtoarea va porni, vor trece intervalele delay time i
lag time, dup care curba va fi trasat pe ecran. Putem opri oricnd msurtoarea cu
tasta ESC.
Dup terminarea msurtorii se va executa calcularea activitii; rezultatul va fi afiat
n partea de jos a ecranului. Ptrelele de pe curb arat punctele de calculaie. T
arat parametrul rate time, ABS/T rata de variaie a absorbanei, iar C/T rata de
variaie a concentraiei n cazul utilizrii unui factor.

107

12:00:00

KINETIC

405.0nm

1
.
De aici putem
0
0
datele sau le
A
afia sub form
B
S
tabel (cu tasta
List). Cu tasta
0
(Manipulate)
.
3
obinem dou
5
opiuni
de
0
analiz.
n
.
submeniul
3
0
Track
putem
6
90
120
sec
deplasa
o
0
dreapt
T=60.0
Factor=3253.000
vertical
cu
ABS/T=0.11308( ABS/min)
ajutorul tastelor
C /T=367.86414( U/L/min)
evalund curba
ABS
=0.00188T + 0.27194
Linear
Fit
Press READ when ready
aeaz
peste
Data
Mani- Clear Print Prev
o dreapt de List
pulate Graph Data
Screen
regresie.
Opiunea Original va reafia curba iniial.

printa
putem
de
Data
F2
noi
Show

sgei,
astfel.
curb

APLICATII : 1. Trasarea unei curbe de etalonare


Dependenta coeficientului de extincie de concentraia substanei dizolvate este
un indiciu asupra existenei unor interaciuni ntre moleculele dizolvate, deci este o
preioas surs de informaii. n cadrul acestei lucrri se va trasa, pentru o anumit
substan etalon, a crei concentraie este cunoscut, graficul dependentei extinciei
de concentraie, adic E = E (c). Acest grafic va putea fi utilizat pentru : a)
determinarea concentraiilor unor soluii necunoscute (preparate pornind de la
etalon) , b) stabilirea domeniului de concentraii pentru care este valabil legea
Lambet-Beer, c) evidenierea unor eventuale interaciuni ntre moleculele de solvit
(de exemplu, moleculele de albastru de metilen avnd o structura aromatic planar,
tind s se agrege n soluie apoas, datorit forelor hidrofobe).

108

Plecnd de la soluia etalon care are o concentraie cunoscut, se prepar n


eprubete diferite diluii, cu ap distilat: 5%, 10%, 30%, 40%, 50%, 70%.
Pentru cazul n care se lucreaz la o singur lungime de und, din meniul principal al
spectrofotometrului se apas tasta . Cu tasta "Mode" se alege modul fotometric de
msurare (absorban). Valoarea lungimii de und se alege corespunztor culorii
soluiei, urmrind diagrama culorilor complementare (dac etalonul este albastru de
metilen se va selecta = 480 nm ). Prima msurtoare se va efectua cu ap distilat:
pentru a ine cont de valoarea blancului, se aeaz cuva umplut cu solvent (ap) n
suportul de cuve i se apas tasta AUTO ZERO. Dup ce se salveaz rezultatul, se
nlocuiete cuva care conine blancul (ap distilat) cu o cuv care conine pe rnd,
soluiile preparate din etalon, salvnd de fiecare dat rezultatul. n final, toate valorile
extinciilor vor aprea n tabel, care poate fi printat ulterior.
Se va trasa graficul E =E(c), innd cont c pentru c = 0

E = 0 (graficul ncepe

din origine), observnd creterea extinciei odat cu concentraia soluiei. Apoi se va


determina spectrofotometric extincia soluiei (soluiilor) necunoscute, iar pe baza
graficului se va stabili concentraia acesteia. De asemenea se va observa c poriunea
liniar a graficului reprezint domeniul de concentraii pentru care legea Lambert
Beer este strict valabil.
2. Determinarea concentraiilor diferitelor forme ale hemoglobinei n soluii
i n snge
Hemoglobina se poate afla n soluii sub trei forme diferite: oxihemoglobina,
deoxihemoglobina i methemoglobina ( fig.10.6) . Formele oxi i deoxi trec reversibil
una n cealalt n funcie de presiunea parial a oxigenului n soluie, au fierul
heminic sub forma Fe

2+

i sunt active din punct de vedere fiziologic n procesul de

transport al oxigenului. Forma met apare sub aciunea unor oxidanti puternici , are
fierul heminic sub forma Fe3+ i

este inactiv din punct de vedere fiziologic.

Conform fig. 4. spectrele de absorbie ale acestor forme difer ntre ele , iar
coeficienii de extincie molari au valori diferite n funcie de lungimea de und.
Punctele de intersecie a curbelor coeficienilor de extincie se numesc puncte
isosbestice, adic au aceeai absorbtivitate pentru lungimea de und corespunztoare
109

lor. n cazul hemoglobinei, un interes deosebit l reprezint concentraia total de


hemoglobin n snge (hemoglobinemia ) dar i proporia de methemoglobina din
hemoglobina total. Concentraia hemoglobinei n snge (hemoglobinemia) se poate
determina convertind toate formele de hemoglobin la methemoglobina, cu ajutorul
unei soluii ajuttoare de ferocianur de potasiu, dup care se efectueaz msurarea
fotometric a concentraiei la lungimea de und 540 nm, unde absorbtivitatea molar
(coeficientul molar de extincie) are valoarea maxim = 11. 103 M-1cm-1.
Fie proba de snge care conine soluia de methemoglobin diluat de d ori ft
din sngele proaspt recoltat. Extincia probei n cuve de 1 cm grosime va fi:
EHb540 = met540 . c , de unde rezult concentraia cHb = EHb540 / met540, dar concentraia
real n snge va fi de d ori mai mare, adic
cHb = ( d / met540) . EHb540.
Proporia de methemoglobin se calculeaz dup determinarea extinciilor soluiei
de hemoglobin rezultat din hemoliza la dou lungimi de und diferite: prima este
525 nm unde formele oxi i met au un punct isosbestic, iar a doua la 540 nm unde
diferena de absorbtivitate ale celor dou forme este maxim (vezi fig.10.6.) .
Deoarece se lucreaz cu soluii saturate cu aer, n care se poate considera c toat
hemoglobina activ este sub forma oxi, cantitatea aflat sub forma deoxi se
neglijeaz. La 525 nm cele dou forme au aceeai absorbtivitate, deci extincia se
poate scrie sub forma:
E525 = 525 .cHb, iar la 540 nm , unde absorbtivitile difer ,
E540 = oxi 540. coxi + met 540. cmet.
Apoi se ine cont de faptul c concentraia n forma oxi reprezint de fapt diferena
coxi = cHb cmet .
Dac se calculeaz rapoartele coeficienilor de extincie pentru cele dou forme de
hemoglobin la 540 i respectiv 525 nm se obine:
met 540/ 525 = 1.091, respectiv oxi 540/ 525 = 1.753.
innd cont de aceste valori, dup un ir de calcule simple, relaia pentru
procentul de methemoglobina din prob se poate scrie sub forma urmtoare:
MetHb % = (2.649-1,151. E540/ E525) :100

(1)
110

Prepararea soluiilor, citirea extinciilor i prezentarea rezultatelor.


Se pregtesc dou eprubete curate i uscate. n prima se pipeteaz 5 ml de soluie
methemoglobinizant (coninnd

fericianur de potasiu) iar n cealalt 5 ml de

soluie hemolizant ( coninnd amoniac 0,1%) . n fiecare se adaug cte 0,02 ml de


snge proaspt recoltat, utiliznd pipeta automat. Cele dou eprubete se agit i se
las n repaus circa 5 minute.Dup acest interval n prima eprubet va aprea o
coloraie brun, caracteristic methemoglobinei, iar n a doua coloraia va fi roierubinie, caracteristic oxihemoglobinei. Aceste probe se vor plasa n cuve standard de
1 cm. Pentru determinarea hemoglobinemiei se va citi extincia soluiei din prima
eprubet (care conine ntreaga cantitate de hemoglobin convertit la hemoglobina)
la = 540 nm, fa de soluia methemoglobinizant ca blanc. Valoarea obinut se
noteaz EHb540. Procentul de methemoglobin se determin folosind ca blanc soluia
hemolizant i apoi citind extincile soluiei din eprubeta a doua la 525 i respectiv
540 nm. Valorile se noteaz E525 respectiv E540.
Hemoglobinemia se va calcula conform formulei prezentat anterior
inndu-se cont de factorul de diluie d = 5/ 0,02 = 251 i de valoarea met 540 = 11.10-3
M-1cm-1. Astfel,
CHb = 22,8 EHb540 mM.

(2)

Masa molecular a hemoglobinei este 16 000 Da, o soluie milimolar conine


deci 1,6 g Hb/100ml, deci concentraia de hemoglobin se mai poate exprima i
astfel:
CHb = 36,8 EHb540 g/100ml snge.

(3)

Procentul de methemoglobin se va calcula cu ajutorul formulei (1) .


Interpretarea rezultatelor se face innd cont c hemoglobinemia normal are
urmtoarele valori, raportat la vrsta subiecilor umani:
g/ 100 ml

Mm

Aduli
Femei
Barbai

12 - 16
14 18

7,5 - 10
8,7 - 11,2

111

Copii

Nou- nscui
Sugari
Precolari
colari

16 - 25
10 - 15
11 14
12 -16

10 15,5
6,2 9,3
6,8 - 8,7
7,5 - 10

n mod normal mai puin 0,3 % din hemoglobina total se afl sub forma de
methemoglobin, aceast valoare crete semnificativ n cazul unor intoxicaii cu
substane oxidante cum ar fi nitrii, nitrai, chinone, nitribenzen, anilina, etc. Precizia
metodei se ncadreaz n limitele de 1%, chiar dac precizia aparatului este mult
mai bun. Valorile necunoscute se pot determina i folosind modul de msurare
cantitativ a spectrofotometrului, dup ce n prealabil a fost salvat n memorie curba
de etalonare. Este interesant de verificat dac rezultatele coincid.

IV. INTERACIUNEA RADIAIILOR CU MATERIA


11.1 CLASIFICAREA RADIAIILOR, SURSE DE RADIAII
112

Definiie: Numim radiaie fenomenul fizic de transmitere la distan a energiei


fr a fi nevoie de un mediu purttor. Studiul complet al unui fenomen radiativ
presupune investigarea mecanismelor i a legilor care guverneaz: a) producerea
lor; b) propagarea (care, conform definiiei, poate avea loc n vid) i c) absorbia
energiei pe care o transport.
Clasificarea radiaiilor
Dup natura lor, radiaiile pot fi corpusculare i electromagnetice.
Radiaiile corpusculare sunt compuse din particule de substan avnd o
anumit energie cinetic. Ele pot fi subdivizate n funcie de sarcina i masa
particulelor transportoare ale energiei, conform schemei de mai jos:
4
Particule ( 2 )

Ele sunt nuclee de heliu, rezult din


dezintegrarea radiaoctiv de tip alfa, poart
dou sarcini elementare pozitive iar masa lor
este egal cu patru uniti atomice de mas.

0
Particule ( 1 )

Incrcate
electric

Acestea sunt electroni, rezult din


dezintegrarea radiaoctiv de tip beta minus,
poart o sarcin elementar negative, numr
de mas zero, masa lor fiind egal cu 1/1840
uniti atomice de mas.

Particule

0
( 1 )

Sunt
compuse
din
pozitroni
(antiparticula
electronilor)
rezult
din
dezintegrarea radiaoctiv de tip beta plus sau
prin generarea de perechi.

Radiaii
corpusculare

1
Protoni, 1 p , care sunt nuclee de hidrogen.
Neutre

1
Neutroni, 0 n .
Particule

elementare
neutre, cu numr de mas 1.

nucleare,

Radiaiile electromagnetice sunt emise i absorbite n natur sub form de


cuante (fotoni). Fotonii sunt particule fr mas de repaus, ce transport, fiecare, o
cantitate de energie ce poate fi calculat cu expresia E = h , unde h = constanta lui
113

Planck (6,625.1034 Js), iar = frecvena radiaiilor. Masa lor de micare, m, se leag
de energie prin formula lui Einstein: E = mc2, c fiind viteza luminii n vid. Curent,
energia lor se exprim n electron-Voli: 1eV = 1,6.1019 J .
Spectrul radiaiilor electromagnetice este extrem de extins. n funcie de lungimile
lor de und n vid ( = c/ ), acesta se poate reprezenta ca n figura de mai jos:
(m)
10

102

lungi
medii
RADIO

scurte
10
1

ultrascurte

TV
TEL. MOBILA
SATELIT
CUPTOARE

101
102

microunde

103
IR ndeprtat
104
IR mediu

INFRAROSU (IR)

105
IR apropiat
6

10

0,7.106 VIZIBIL (VIS)


0,4.106

10

ULTRAVIOLET (UV)
8

10

10

1010

RNTGEN (X)

1011
1012

GAMMA ()

n funcie de energia transportat, radiaiile se clasific n radiaii neionizante


i radiaii ionizante. Distincia dintre aceste este convenional, i este legat de
efectele asupra materiei. Dac se iau

n considerare energiile de ionizare ale

principalilor atomi ce compun materia vie (H, C, N i O), pot fi considerate ionizante
radiaiile ce transport energie mai mare de 13,6 eV pe particul, ceea ce corespunde,
114

n cazul radiaiilor electromagnetice, la o lungime de und < 100 nm. Pe de alt


parte, anumite macromolecule biologice pot fi ionizate la energii ce depesc 5 eV,
lungimea de und corespunztoare fiind < 200 nm.
Pentru simplificare, cnd este vorba de radiaiile electromagnetice, se consider
ionizante radiaiile din domeniile X i , neionizante cele din domeniile radio,
microunde, IR, VIS i UV.
Radiaiile corpusculare au importan biologic numai prin efectele lor ionizante.
Surse de radiaii. Acestea pot fi naturale i artificiale.
Sursele naturale au fost singurele la care a fost expus biosfera (i populaia
uman) pn n epoca modern. Acestea sunt la rndul lor cosmice i telurice.
Principala surs cosmic de radiaii este soarele. Acesta emite tot spectrul de radiaii
electromagnetice i toate radiaiile corpusculare.
Dintre cele electromagnetice, numai o mic parte ajung la suprafaa solului, fiind
absorbite de cromosfera solar i atmosfera terestr. Astfel, vaporii de ap i bioxidul
de carbon atmosferice absorb n IR, iar stratul de ozon absoabe UV. Proporia, n
procente, a fotonilor neionizani care ajung la nivelul mrii este de 2% UV, 45% VIS
i 53% IR. Fotonii ionizani sunt absorbii n proporie covritoare de moleculele
straturilor atmosferei nalte, pe care le ionizeaz dnd natere ionosferei.
Radiaiile corpusculare emise de soare, care formeaz vntul solar, sunt, de
asemenea mpiedicate s atig straturile inferioare ale atmosferei. Cele ncrcate
electric, datorit nclinrii axei Pmtului, intr oblic n cmpul magnetic al acestuia
i, fiind supuse forei Lorentz, se mic pe traiectorii elicoidale ce le direcioneaz
spre poli. Aici efectele lor ionizante asupra atmosferei nalte se manifest prin apariia
aurorelor polare. Neutronii nu ajung pn la Pmnt, timpul lor mediu de via n
stare liber, de aproximativ 1000 s, fiind mult mai scurt dect durata cltoriei lor de
la Soare i planeta noastr. Ei se vor transforma, fiecare, ntr-un proton i un electron,
care vor crete numrul particulelor ionizante, ncrcate electric.
Alte surse cosmice de radiaii ionizante sunt furnizate de activitatea stelar. Cele
mai importante sunt razele cosmice, formate din nuclee atomice (mai ales protoni) de
mare energie care, prin coliziune cu nucleele gazului atmosferic produc jerbe de
particule secundare ionizante. Acestea din urm sunt atenuate odat cu strbaterea
115

atmosferei subjacente. Din acest motiv, efectele cresc cu altitudinea, dublndu-se cu


fiecare cretere cu 1500 m a acesteia.
Sursele telurice, sunt reprezentate de izotopii radioactivi din atmosfer i scoar.
Intensitatea radiaiilor emise de acestea depind de localizarea geografic. Zonele
aflate n vecintatea unor zcminte de uraniu, de exemplu, vor fi afectate de nivele
de radiaie mai mari.
Sursele artificiale sunt construite prin activitate uman. Expunerea la radiaiile
emise de acestea poate fi general (nedescriminatorie), profesional, medical
(exploratorie i terapeutic), sau accidental.
Expunerea general include toate persoanele aflate n vecintatea unei surse de
radiaii neionizante (lmpi, emitore radio, cuptoare, etc.) sau ionizante (generatoare
de raze X, sau centrale nucleare).
Expunerea profesional afecteaz personalul care, prin natura meseriei,
manipuleaz dispozitive sau materiale emitoare de radiaii (operatorii staiilor de
radio, medicii radiologi, sau profesionitii industriei de extracie, prelucrare i
utilizare a materialelor radioactive).
Expunerea exploratorie (diagnostic) i terapeutic este consecina activitii
medicale i are importan n cazul utilizarrii radiaiilor X i . Radiografiile i
radioscopiile de orice tip reprezint expuneri semnificative la radiaii ionizante.
Expuneri importante se produc n Rentgenterapia sau cobaltoterapia afeciunilor
tumorale.
Expunerea accidental are loc n cazul exploatrii defectuoase a surselor
artificiale de radiaii. Ea afecteaz, n primul rnd, personalul din vecintate i apoi
restul populaiei.
11.2. Efecte ale radiaiilor neionizante:

Efectele chimice ale radiaiilor

neionizante
Energia absorbit de ctre gruprile cromofore ale moleculelor poate antrena
modificri (reacii) fotochimice ale acestora. Faptul este comun i mpiedicarea lui
poate fi regsit n pstrarea n flacoane brune sau opace a unor medicamente sau
116

buturi (bere, vin). n lumea vie, plantele i algele transform curent energia
luminoas n energie chimic stocat n compui organici de sintez.
Exist dou legi ale fotochimiei: 1) Un foton interacioneaz cu o singur
molecul i 2) n urma interaciunii, energia fotonului este absorbit integral.
De procese fotochimice sunt responsabile mai ales radiaiile UV, absorbite de
dublele legturi. Trecerea electronilor pe orbitalii de antilegtur () este echivalent
cu ruperea acesteia urmat de posibilitatea refacerii n alte modaliti. Ca urmare, pot
avea loc unul din fenomenele:
- Refacerea ei n alt poziie (migrarea);
- Izomerizarea cis-trans;
- Adiia unui substituent, n general OH sau H;
- Dimerizarea;
- Ciclizarea intern.
Asupra macromoleculelor proteice, transformrile fotochimice susmenionate se
manifest mai ales asupra aminoacizilor aromatici i a secvenei legturilor peptidice.
Ele au ca efect schimbarea structurii primare (covalente) i, consecutiv a celor
secundare, teriare i cuaternare. Rezultatul este apariia unor compui denaturai,
lipsii de funcie biologic sau cu funcia alterat.
Macromoleculele de acizi nucleici sufer efecte fotochimice importante datorit
absorbiei radiaiilor UV de ctre dublele legturi ale bazelor azotate. Dimerizrile i
trimerizrile de baze, ciclizrile sau adiiile la acestea mpiedic adoptarea unei
geometrii corecte a helixurilor de acizi nucleici. Consecinele biochimice rezid n
imposibiliatea de recunoatere a acestora de ctre enzimele implicate n citirea,
utilizarea i transmiterea informaiei genetice.
Efectele biologice ale radiaiilor neionizante
La nivel de organism, procesele fotochimice pot fi implicate n dou procese
fiziologice:
a) Fotoconversia, prin care are loc tranformarea energiei luminoase n energie
chimic. Cel mai important este fotosinteza, realizat de majoritatea plantelor vezi i
de microorganismele plactonului oceanic.
117

b) Fotodetecia, n timpul creia energia luminoas este tratat ca semnal


informatic i mijlocete orientarea i ncadrarea organismelor n mediu. Ea este
ntlnit de la protozoare la plante i animale. Dintre acestea, numai animalele au
ochi - organe specializate n obinerea unor imagini fotografice ale mediului
nconjurtor.
Efectele locale, tisulare, ale radiaiilor neionizante depind de domeniul spectral
n care sunt plasate. Toate, cnd sunt absorbite, produc nclzirea esuturilor,
profunzimea de ptrundere scznd odat cu scderea lungimii de und.
Undele utilizate n telecomunicaii au efecte incerte. Cele cu lungimi de und
mari nu au fost incriminate n producerea unor afeciuni specifice. Undelor din
domeniul celor ultrascurte, utilizate n telefonia mobil, le-a fost atribuit, fr a fi
indubitabil, creterea riscului de tumori cerebrale n vecintatea urechii la care este
folosit telefonul.
Microundele au efect caloric exprimat i de profunzime, prin punerea n oscilaie
a dipolilor de ap, cea ce antreneaz creterea energiei de agitaie termic din mediu.
Faptul i-a gsit aplicaii practice att n balneofizioterapie (n tratarea afeciunilor
degenerative, cnd nclzirea local i vasodilataia consecutiv au efecte benefice)
ct i gospodreti - cuptoarele cu microunde.
Radiaia din domeniul IR produce nclzirea local, profunzimea lor de
ptrundere n esuturi fiind de civa milimetri. i acestea sunt absorbite mai ales de
apa tisular, dar i de macromolecule, prin excitatrea micrilor de vibraie ale
atomilor.
Indiferent de mecanismul nclzirii, creterea exagerat a temperaturii produce
denaturarea ireversibil a proteinelor i a structurilor celulare cu manifestrile clinice
curente ale arsurilor.
Radiaia vizibil nu are efecte patologice, ea fiind implicat n fotodetecie i
fotoconversie. Totui, dac este focalizat pe zone reduse, antreneaz arsuri tisulare,
cum este cazul privirii cu ochiul liber a soarelui mprejurare n care se produc arsuri
de retin.
Radiaia UV are cele mai multe efecte fotochimice, care se constat pn la
profunzimi de 2- 3 mm. Protecia mpotriva lor se face fiziologic prin pigmentarea
118

(bronzarea) pielii. Aceasta poate fi determinat genetic la populaiile din zonele


tropicale, sau poate fi indus de expunerea la UV a subiecilor cu tegumente de
nuane deschise.
n doze mici, radiaiile UV produc bronzarea prin transformarea tirozinei n
melanin, pigment absorbant al acestora. Dozele mari, absorbite n timp scurt, produc
fenomene similare arsurilor termice, cauza fiind denaturarea proteinelor. Efectul
bacteriostatic al dozelor mari de UV se explic mai ales prin mpiedicarea
multiplicrii microorganismelor, ca o consecin a interaciunii cu acizii nucleici.
Dozele moderate i repetate de ultraviolete au asupra tegumentelor, n timp mai
ndelungat, efecte carcinogene. (Tumorile maligne ale esuturilor epiteliale se numesc
carcinoame i o bun parte a celor cutanate, la vrstnici, se datoresc radiaiilor UV).
i acestea sunt consecine genetice rezultate din modificarea acizilor nucleici.
11.3. INTERACIUNEA RADIAIILOR IONIZANTE CU MATERIA VIE
Studiul efectelor radiaiilor ionizante asupra materiei vii este mai complicat i
presupune parcurgerea mai multor etape:
- nelegerea mecanismelor de transfer a energiei lor ctre mediu i a producerii
ionizrilor care reprezint interaciunea lor primar cu substana.
- Descifrarea efectelor radiochimice produse de ionizri. Aceste efecte pot avea
loc fie datorit interaciunii directe cu macromoleculele sistemului viu, fie ca o
consecin a modificrilor induse de radiaii n solventului apos, cnd vorbim de
interaciuni indirecte.
- Transformrile radiochimice sunt urmate, n final de efecte biologice.
Interaciunea primar cu substan a radiaiilor corpusculare ncrcate
Principalul mecanism de transfer a energiei lor ctre mediul strbtut este acela de
ionizare a atomilor i moleculelor substanei. Responsabile de ionizri sunt
interaciunile electrostatice dintre particul i electronii atomilor.
Pentru o particul, scderea energiei ei i creterea energiei mediului este
caracterizat prin transferul linear de energie, TLE. Acesta reperezint energia
pierdut de particul pe fiecare unitate de lungime a traiectoriei sale.
119

Dac o particul face Iionizri pe unitatea de lungime, i energia medie pierdut


de la iniierea unei ionizri pna la producerea urmtoarei , avem:

TLE = I.

ntruct ntre dou ionizri particula produce i un numr de excitri ale atomilor,
este mai mare dect energia de ionizare. Astfel, pentru aer i ap valorile sunt de 32
eV i 34 eV, respectiv.
TLE crete cu ptratul sarcinei particulei i concentraia electronilor din mediu
dar nu are o valoare constant de-a lungul traiectoriei. Ea scade cu creterea
ptratului vitezei particulei deoarece, la viteze mari ale acesteia, timpul ct are loc
interaciunea cu electronii este mai redus. Unitatea curent utilizat, la strbaterea
mediilor apoase, este KeV/m.
Dac particula strbate o substan compus dintr-un element pur, n vecintata
fiecrui punct al traiectoriei este valabil expresia:
TLE

dE
z
k
v
dx

Zn

unde dE este pierderea de energie pe distana dx; k - o constant ce depinde de


natura particulei, a mediului i unitile de msur alese; z - numrul de sarcini
elementare ale particulei; v - viteza particulei n punctul dat; Z - numrul de ordine ai
atomilor mediului; n - numrul de atomi pe unitatea de volum a mediului
(concentraia atomilor mediului).
ntruct Z n = ne , concentraia electronilor n mediu, formula se poate rescrie
z

TLE k

ne

Ultima expresie este util pentru calcularea valorii TLE n medii ce conin
amestecuri moleculare i pentru care ne este uor accesibil calculului.
Dac vom considera dou particule de aceeai energie cinetic, una grea i alta
uoar, prima va avea o vitez mai mic dect a doua. Din acest motiv particulele
grele au un TLE mai mare dect cele uoare de aceeai energie.
Privind din punctul de vedere a lungimii parcursului, particulele grele, pierznd
mai mult energie pe unitatea de lungime, au parcursuri mai scurte, pe cnd cele
uoare strbat n mediu distane mai mari. Dac o particul are energie E i, pentru
120

ntreg parcursul de lungime d, are un TLE mediu, notat TLE , aceste mrimi se
leag cu relaia simpl:
d

E
TLE

n plus, particulele cu mas mare (alfa i protoni), nu ricoeaz la ciocnirile cu


electronii, avnd traiectorii rectilinii; pe cnd cele uoare (electronii) dup fiecare
ciocnire cu un electron din mediu i schimb direcia, prezentnd traiectorii sub
forma unor linii frnte.
Consecine medicale
Particulele alfa (cu sarcin mare, z = +2, i mas mare m = 4 u.a.m.) prezint un
pericol redus n cazul iradierii externe, adncimea lor de ptrundere nedepind
stratul cornos al epidermei. O astfel de particul cu energia de 5,3 MeV (Mega
electron-Voli) are un TLE tisular mediu de 130 KeV/m i ptrunde la o profunzime
de maximum 40 m. Iradierea intern ce poate avea loc datorit absorbiei digestive
sau respiratorii a unor radionuclizi alfa-emitori duce la iradieri importante ale
celulelor vecine locului unde se fixeaz i se acumuleaz atomii radioactivi.
Protonii (z = +1 i m = 1 u.a.m.) se comport aproximativ similar ntruct,
conform formulelor precedente, au TLE de 16 ori mai mic iar lungimea traiectoriei de
16 ori mai mare.
Particulele beta (electroni cu z = 1 i m = 1/1850 u.a.m.), datorit masei foarte
mici au viteze extrem de mari, ceea ce conduce la valori de TLE foarte reduse, cu
parcursuri n esuturi mult mai lungi. Ele pot produce consecine att datorit iradierii
externe ct i celei interne. La energii de zeci de MeV, particulele beta au parcursuri
n esuturi de 1 ... 2 cm.

Interaciunea primar a neutronilor cu substana


121

Neavnd sarcin electric, neutronii nu interacioneaz electrostatic cu


componentele atomilor, fiind, prin sine, fr proprieti ionizante. Ei produc ionizri

S u b sta n ta

T r a s e e le io n iz a r il o r p o d u s e d e
p r o to n ii c io c n ii d e n e u tr o n i

C a p tu r n e u tr o n ic

indirect, datorit interaciunilor cu nucleele atomice. Aceste interaciuni sunt


difuziunea i captura neutronic.
Difuziunea neutronilor este consecina fenomenului de ciocnire mecanic dintre
acetia i nucleele atomilor, n urma cruia nucleele ciocnite (intele) preiau parte din
energia cinetic a neutronilor (proiectilele). n urma unei succesiuni de ciocniri,
neutronul i pierde progresiv energia cinetic. Cum n mediile biologice mai mult de
jumtate de nuclee sunt de hidrogen, iar legile ciocnirilor elastice arat c energia
preluat de int crete cu scderea masei acesteia, protonii de energie mare rezultai
din cicniri vor fi principalii responsabili de producerea ionizrilor. ntruct
probabilitatea ciocnirii nucleelor este destul de mic, parcursurile neutromilor ntre
dou ciocniri sunt lungi, ceea ce explic marea lor putere de penetrare. Pe de alt
parte, masele proiectilului (neutron) i intei (proton) sunt aporoape egale iar
neutronul ricoeaz dup fiecare ciocnire, efectele ionizante fiind difuze. De
exemplu, n ap, un neutron cu energia de 2 MeV i-o reduce la 1 eV dup 18
ciocniri, n medie.
122

Captura neutronic este o reacie nuclear produs de neutronii leni, cu energii


inferioare a 1KeV. n urma capturii rezut un nucleu izotopic de mas superioar cu 1
u.a.m., care este n stare excitat. Dezexcitarea lui se produce prin emisia unei radiaii
. Schema general a transformrilor este:

A
1
A 1
(radioactiv)
Z X 0 n ZY *
foton

A 1
ZY

(stabil)

Fotonii , sunt n continuare responsabili de ionizri prin mecanisme ce vor fi


sumarizate n continuare.
Interaciunea fascicolelor de fotoni X i cu substana.
Dac un fascicol de radiaie X sau , monocromatic (fotoni monoenergetici)
strbate normal un strat de substan, la ieire el se va gsi atenuat. Notnd Io
intensitatea radiaiei incidente, I intensitatea celei emergente pe aceeai direcie, i cu
x grosimea stratului se demonstreaz teoretic i se constat experimental c atenuarea
fascicolului respect legea:
I I o e x ;

e fiind baza logaritmilor, iar coeficientul de atenuare

linear. Se mai constat c depinde att de energia fotonilor ct i de natura


materialului strbtut.
Proprietile atenuante ale unui material fa de o radiaie cu fotoni de energie
dat se caracterizeaz prin grosimea de njumtire (x1/2) care este grosimea stratului
care reduce intensitatea radiaiei emergente la Io/2. nlocuind n formul i
logaritmnd ambii membri ai egalitii se obine:
ln

1
x1 / 2 ;
2

de unde rezult relaia dintre grosimea de njumtire i coeficientul de atenuare


linear:
x1/ 2

ln 2

123

Dac se vor face msurtori pe alte direcii dect cea a fascicolului incident se vor
gsi intensiti de radiaii diferite de zero pentru fotoni de energii mai mici sau pentru
electroni accelerai. Aceasta arat c interaciunile a radiaiilor X i cu substana
sunt complexe, n urma acestora rezultnd radiaii difuzate: unele mprtiate iar
altele secundare. nseamn c reducerea intensitii fascicolului (atenuarea lui) are
loc att prin absorbia energiei lui de ctre substan ct i prin difuzia energiei pe
alte direcii i sub alte forme dect cele ale fotonilor fascicolului incident. Energia
transportat de fascicolul incident (Winc) se va regsi integral, distribuit ntre cea a
fascicolului emergent (Wemg), energia absorbit de substana strbtut (Wabs,
transferat mediului) i energia radiaiei difuzate (Wdif). Ultimele dou reduc
intensitatea (energia) fascicolului emergent i, cu ct reprezint o fraciune mai mare
din aceasta, coeficientul de atenuare linear () arevaloarea mai mare.
Dei sunt mai multe tipuri de interaciuni care reduc intensitatea fascicolelor de
fotoni X i , de importan practic sunt numai trei: efectul fotoelectric, efectul
Compton i generarea de perechi (efectul de materializare).
Efectul fotoelectric se manifest prin absorbia integral a energiei unui foton de
ctre un electron al unui atom. Energia lui se distribuie integral ntre energia necesar
extraciei din atom i energia cinetic a electronului expulzat (fotoelectronului). n
acest caz, efectele ionizante se datoresc fotoelectronilor, care se comport similar
Winc

Substan

Wemg
Wabs

Wdif
Winc = Wemg + Wabs + Wdif

radiaiei . Energia lor va fi absorbit de mediul strbtut. Pe de alt parte, atomii


excitai prin expulzarea unui electron din pturile inferioare revin n stare
124

fundamental prin tranziii ale celor din pturile superioare. Astfel de tranziii sunt
responsabile de emisia unor radiaii secundare de fluorescen (X n cazul atomilor
grei sau UV n cazul celor uori). Energia radiaiilor astfel difuzate este, n general,
neglijabil.
Atenuarea prin efect fotoelectric a fascicolului se descrie cantitativ prin
coeficientul de atenuare linear f , care crete cu probabilitate producerii efectului.
Aceasta depinde pronunat de energia fotonilor incideni i de natura atomilor int.
Efectul fotoelectric este deosebit de important n cazul fotonilor de energii reduse
care strbat materiale ce conin elemente grele.
Aplicaiile practice ale efectului fotoelectic se regsesc n alegerea i construcia
filtrelor pentru realizarea imaginilor radiografice. ntruct nu sunt potrivite explorrii
radiologice de profunzime, radiaiile cu fotonii de energii mici (sub 50 KeV) sunt
atenuate n fasciculele policromatice emise de tuburile Rentgen cu filtre din cupru.
Pe de alt parte, contrastul optim al imaginilor radiografice se obine n domeniul
60 ... 120 KeV, unde efectul fotoelectric nc este manifest.
Efectul Compton apare la ciocnirea dintre un foton i un electron (considerat
liber sau slab legat). Rezult un electron de recul, care primete o parte din energia
fotonului incident i un foton difuzat, cu energie (i frecven) mai mici dect a celui
incident. Acest efect este semnificativ ca importan cnd energiile de legare a
electronilor n atom pot fi considerate neglijabile fa de energiile fotonilor incideni.
n urma ciocnirii, energia fotonului incident se regsete n energia transferat
electronului de recul i energia fotonului difuzat. Electronii de recul au energii
suficiente pentru a produce ionizri similare razelor beta, iar fotonii difuzai, n
funcie de energia pe care o mai au, pot produce fie alte efecte Compton fie efecte
fotoelectrice.
Dac n cazul efectului fotoelectric aproape ntreaga energie pierdut de fascicolul
incident este transferat substanei absorbante, n cazul efectului Compton o parte
este emis de substana traversat sub form de radiaie mprtiat sub unghiuri mari
fa de cea incigent. n mediul biologic, energia radiaiei difuzate (Wdif) este de 4 ...
5 ori mai mare dect energia transferat electronilior i absorbit (Wabs) n zona
125

strbtut de fascicol. Ca urmare, efectele iradierii prin radiaia mprtiat se vor


manifesta pn departe de zona intit de fascicolul incident.
Atenuarea fascicolului incident se caracterizeaz cantitativ printr-un coeficient de
atenuare linear pe care-l vom nota C. Acesta scade lent odat cu creterea energiei
fotonilor dar crete exprimat odat cu numrul de electroni din unitatea de volum
(densitatea materialul). Astfel se explic proprietile absorbante deosebite ale
metalelor grele, cum este plumbul.
Geanerarea de perechi

are loc atunci cnd un foton de energie nalt

traverseaz cmpul electrostatic al unui nucleu. Dac acest cmp este destul de
intens, energia fotonului se materializeaz, prin apariia unui electron (e ) i a
unui pozitron (e+, antiparticula electronului). Materializarea nu poate avea loc dect
dac energia fotonului depete de dou ori energia de repaus a unui electron (0,511
MeV). Pragul teoretic al energiei fotonului este h > 2. 0,511 = 1,022 MeV. n
practic, atenuarea prin generare de perechi depete n amploare celelalte fenomene
la energii cu mult mai mari, nentlnite n practica medical, (5 MeV pentru plumb i
25 MeV pentru ap i carbon).
Diferena dintre energia fotonului i cea necesar materializrii, este regsit ca
energie cinetic a electronului i pozitronului. Aceast energie este absorbit de
mediu (Wabs), prin ionizri similare celor produse de radiaia
Spre deosebire de electron, viaa pozitronului este scurt. Dup ncetinirea
responsabil de ionizri, la ntlnirea unui electron, perechea pozitron - electron
sufer reacia de anihilare, energia particulelor transformndu-se n dou cuante ,
fiecare cu h = 0,511 MeV. Aceste cuante sunt emise pe o direcie oarecare, n
sensuri opuse, i intr n componena energiei difuzate (Wdif). Fotonii de anihilare
pot produce, n alte zone dect cea supus iradierii primare, efecte fotoelectrice sau,
mai ales, Compton.
Dac ne referim numai la pierderea de energie a fascicolului incident prin
generarea de perechi, aceasta se caracterizeaz prin coeficientul de atenuare linear
p. Pierdere se datorete

n special absorbiei de ctre mediu, energia fotonilor

difuzai fiind o fraciune redus din cea a fotonilor ce a generat perechea.


126

Coeficientul global de atenuare linear va fi suma celor trei, corespunztoare


fiercruia dintre efecte:
= f + C + p

Contribuia independent la scderea energiei radiaiei incidente depinde de energia


fotonilor i de mediul strbtut. n ap, fasciculele de fotonii cu diferite energii sunt
atenuai dup cum urmeaz:
h 50 KeV -------> predomin efectul fotoelectric
50 KeV h 20 MeV -------> predomin efectul Compton
h 20 MeV -------> predomin generarea de perechi
Indiferent de efectul considerat, radiaiile X i , prin natura lor au proprieti
ionizante directe slabe. Ionizrile importante sunt indirecte i se datoresc electronilor
accelerai care rezult n urma fiecruia din cele trei efecte discutate mai sus.
11.4. EFECTELE RADIOCHIMICE ALE RADIAIILOR IONIZANTE
Procesele chimice care au loc dup ionizarea unor molecule de ctre radiaii se
numesc efecte radiochimice. Aa cum se va vedea, ionizarea conduce la ruperea
legturilor covalente simple cu formarea de radicali liberi. Acetia sunt fragmente de
molecul avnd electroni nemperecheai (celibatari), ceea ce i face extrem de
reactivi. Reaciile date de radicalii liberi sunt responsabile de toate consecinele
chimice pe care le au radiaiile ionizante asupra sistemelor vii.
n ecuaiile chimice prezena electronului nmperecheat se semnaleaz cu un
.
.
punct plasat n dreapta sus a radicalului, de exemplu OH (radical liber oxidril) sau H
(radical hidrogen).
La iradierea unui sistem viu, vor suferi ionizri att moleculele solventului apos
ct i moleculele lui biologice. Apa va suferi procesul de radioliz, radicalii liberi
rezultai vor da reacii care se vor repercuta, n moduri variate asupra
macromoleculelor sistemului. Realizndu-se prin intermediul solventului, acestea se
numesc efecte radiochimice indirecte. Consecinele ionizrii macromoleculeor se
numesc efecte radiochimice directe.

127

Efectele radiochimice indirecte ale radiaiilor ionizante


Radioliza apei
Ionizarea unei molecule de ap are loc dup reacia
H2O ------> H2O+ + e
La impactul cu particula ionizant electronul, de mas mai mic, va avea o vitez
mai mare i va fi proiectat departe de ionul de ap. Din acest motiv ionii vor rmne
n vecintatea traiectoriei particulei iar electronii mprtiai mai la distan.
Fiecare din produii de ionizare este instabil transformndu-se conform reaciilor:
H2O+------> H+ + OH .
e + H2O ------> H . + OH

(lng traiectorie)
(la distan)

Principalele reacii ale compuilor de radioliz


Radicalii liberi formai se pot recombina oricum, dar distribuia lor spaial este
puin propice re-formrii apei:
H . + OH . ------> H2O
n schimb, radiacalii liberi de acelai tip se pot combina ntre ei:
H . + H . ------> H2
OH . + OH . ------> H2O2

(la distan)
(lng traiectorie)

Dac hidrogenul molecular este netoxic, apa oxigenat (H2O2) este un agent
oxidant foarte puternic, ce produce denaturarea ireversibil a proteinelor.
S-ar prea c efectele denaturante rmn cantonate lng punctele de ionizare, dar
nu este aa din cauza prezenei oxigenului molecular n mediile biologice. Radicalii

H dau lanuri de reacii n urma crora oxigenul este fixat ca ap oxigenat:


H . + O2 ------> HO2. (radical peroxid de hidrogen, oxidant extrem de
puternic)
2 HO2. ------> H2O2 + O2

H . + O2 ------> HO2.
128

s.a.m.d...
Radicalii hidroxil i peroxid pot fi responsabili i de oxidarea unor grupri din
structura moleculelor organice, mai ales a celei SH, cu formarea unor puni SS ,
dup reaciile generale:
R1SH + HSR2 + 2 OH . ------> R1SSR2 + 2 H2O
R1SH + HSR2 + 2 HO2. ------> R1SSR2 + 2 H2O2
Rezultatul acestor reacii este apariia n timp a unor macromolecule cu structuri
primare alterate i modificate ca funcie.

Efectele radiochimice directe ale radiaiilor ionizante


Moleculele organice, la fel ca i moleculele de ap pot fi ionizate la nivelul unei
legturi, urmarea fiind ruperea ei i apariia unor radicali liberi organici susceptibili
de a se combina ntre ei i/sau cu cei rezultai din radioliza apei. Dac lum cazul a
numai dou molecule organice afectate rezult 4 radicali liberi:
RaRb ------> Ra.+ Rb.
RcRd ------> Rc.+ Rd.
Aceti radicali se pot lega ntre ei n orice combinaie i, n plus, fiecare poate
adiiona radicali H

sau OH

din mediul apos. Rezult c ansa de refacere a

moleculelor originale este foarte mic n raport cu cea de apariie a unora modificate.
Adesea, n cazul unor molecule complexe, excesul de energie nu rmne localizat i
s rup legtura, ci se distribuie la mai multe legturi sau se transfer de la o
molecul la alta. Aceste reacii de transfer a energiei nu sunt imediate. Uneori strile
active persist mai multe ore sau zile i reaciile radiochimice se prelungesc mult
dup iradiere. Astfel de post-efecte sunt foarte evidente la proteine i acizi nucleici.
Oxigenul din mediu produce peroxidarea n lan a macromoleculelor, similar
mediului apos, conform reaciilor:

129

RaH + OH . ------> Ra. + H2O


Ra. + O2 ------> RaO2.

(radical peroxid organic)

RbH + RaO2. ------> RaOOH + Rb.

Rb. + O2 ------> RbO2.

RcH + RbO2. ------> RbOOH + Rc.

Rc. + O2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
s. a. m. d. . . . .
S-a putut, pornind de la o singur ionizare, s se pun n eviden formarea unui
lan de 70 de peroxizi organici.
Aciunea asupra proteinelor
Proteinele sunt denaturate prin fragmentri, polimerizri, peroxidri i formri de
puni disulfidice. Efectele cele mai nocive asupra funciilor celulare sunt produse prin
inactivarea enzimelor.
Aciunea asupra acizilor nucleici
Modificrile radiochimice ale acizilor nucleici sunt foarte complexe. Alterarea
structurii chimice a bazelor azotate produce disocierea dublelor helixuri datorit
imposibilitii de asociere a bazelor n perechi. Pe de alt parte, fiecare dintre
lanurile dublului helix poate suferi ruperi. Frecvena ruperilor unui singur lan este
de 10 ori mai mare dect cea a ruperii n acelai loc a ambelor lanuri. Faptul are
importan fiindc n primul caz moleculele pot fi reparate, pe cnd n al doilea nu.
Aa se explic sensibilitatea crescut la radiaii a organismelor haploide (cu stocare a
informaiei genetice ntr-un singur lan AND) fa de cele diploide (cnd stocarea se
face ntr-un dublu helix).
Ruperile, chiar pe un singur lan, dac nu sunt reparate rapid, pot conduce la
ramificri cu adoptarea de structuri tridimensionale, nerecognoscibile biochimic.
130

Degradarea radiochimic a acizilor nucleici este responsabil de efectele asupra


sintezelor celulare (alturi de inactivarea enzimelor) i, ntr-o faz ulterioar, de cele
genetice.
11.5. EFECTELE BIOLOGICE ALE RADIAIILOR IONIZANTE
Apariia efectelor biologice la organismele expuse radierii este rezultatul
desfurrii n timp a trei faze:
Faza reaciilor elementare, foarte scurt, de ordinul a 10 15 secunde, care
corespunde la a) interaciunea primar care are ca rezultat excitarea i ionizarea
moleculelor i b) la reaciile radio-chimice prin care apar radicali liberi i rupturi
moleculare. Ea nu este influenat de temperatur.
Faza reaciilor chimice, care dureaz de la cteva secunde la mai multe ore. n
timpul ei, radicalii liberi i moleculele excitate reacioneaz ntre ele i cu alte
molecule.Viteza acestor reacii crete cu temperatura, din care cauz se mai numete
faza termosensibil.
Faza modificrilor funciilor i structurilor celulare corespunde efectelor
manifeste ale bolii de iradiere. Acest stadiu biologic poate dura de la cteva ore la
mai muli ani. (Subiecii puternic iradiai n noaptea accidentului de la Cernobl au
sucombat pn a doua zi la amiaz, pe cnd unele dintre victimele bombardamentului
de la Hiroima au supravieuit cu simptome manifeste 10 ... 20 de ani.)
Studiile experimentale asupra culturilor de celule iradiate cu doze creasctoare de
radiaii au condus la urmtoarele concluzii privind unele funcii celulare:
Funcia celular
Creterea
Mitoza
Moatea celular

Doze mici
accelerat
ncetinit
tardiv

Doze mari
diminuat
oprit
precoce

Este necesar o precizare a sensului terminologiei utilizate pentru moarte celular.


Moartea celular precoce nseamn c n urma iradierii mor chiar celulele iradiate.
Moartea celular tardiv caracterizeaz populaia care este condamnat s dispar la
tentativa de reproducere a descendenilor de generaia a II-a, a III-a, a IV-a . . .etc.. Ea
semnific faptul c celulele iradiate i pierd capacitatea de reproducere indefinit.
131

Primele constatri asupra radiosensibilitii au fost fcute de BergonieTribondeau n 1906. El a enunat o lege care sumarizeaz caracteristicile celulelor
susceptibile la efecte letale:
O populaie de celule este cu att mai sensibil le radiaii cu ct 1) are viteza
proceselor metabolice mai mare; 2) este iradiat ntr-o faz mai precoce a mitozei i
3) este mai nedifereniat. Sunt nedifereniate celulele care au un viitor cariocinetic
lung, deci morfologia i funciile nu sunt definitiv fixate.
Aceast lege ofer un ghid simplu pentru msurile de radioprotecie medical i
pentru nelegerea cazurilor n care se practic radioterapia. Radioprotecia impune
s nu fie expuse radiaiilor esuturile sntoase sensibile: cele embrionare, cele
hematopoetice, gonadele, epiderma i mucoasa intestinal. Pe de alt parte,
beneficiaz de radioterapie tumorile cu celule de radiosensibilitate mare. Acestea
sunt, n general, sarcoamele (n special blastoamele) care sunt tumori cu celule
derivate din esuturile mezenchimale (nedifereniate). Acestea satisfac n foarte bun
parte cerinele specificate de Bergonie-Tribondeau.
11.6.

UTILIZAREA

DETECTORULUI

DETECTORULUI

CU

SCINTILAIE

GEIGER-MLLER
PENTRU

SAU

DETERMINAREA

VARIAIEI CU DISTANA A FLUXULUI DE RADIAII


Emiterea spontan de radiaii alfa, beta i gamma de ctre unele nuclee se
numete radioactivitate natural. Prin emiterea unei particule alfa are loc o
transformare a elementului dat ntr-un alt element pentru ca numrul de ordine al
elementului scade cu 2 uniti, iar cel de mas cu 4 uniti.
226
88

4
Ra 222
86 Rn 2

. n general: ZAX

He

Z-2

A-4

Exemplu:

n cazul emiterii de radiaii beta numrul de mas A rmne constant, iar numrul de
ordine Z crete cu o unitate. Exemplu:
n general:

A
Z

0
1

214
82

Pb 10 e 214
83 Bi

A
Z 1

Y .

132

Particulele beta emise, nu se gsesc n nucleu, ele apar n timpul tranziiei de la


proton n neutron i invers cnd se emit i particule de mas i sarcin zero numite
neutrino i antineutrino. Exemplu:

1
1

1
0

n +

+1

+ o.

La emisia radiaiilor gamma, numrul atomic i cel de mas rmn constante,


deoarece nucleul trece dintr-o stare excitat la una normal.
Dac la un moment dat t = 0, exist N 0 nuclee radioactive, dintr-un element oarecare,
atunci numrul de nuclee rmase nedezintegrate N, dup timpul t (n sec ) va fi:
N = N0.e- t, unde este constanta de dezintegrare. Valoarea ei depinde numai
de structura intern, specific fiecrui radionuclid, nu i de condiiile exterioare.
Legea de mai sus ne indic faptul c numrul de nuclee rmase nedezintegrate scad
exponenial cu timpul.

Pentru a caracteriza

stabilitatea nucleului se utilizeaz n loc de , timpul de

njumtire T1/2. El reprezint intervalul de timp n care se dezintegreaz jumtate


din numrul de nuclee iniiale, N 0/2 , deci relaia va fi:
N0
= N0.e-
2

T1/2 =

ln 2

Timpul de njumtire este foarte diferit de la un nucleu la altul, fiind cuprins ntre
109 ani i cteva s (microsecunde).emple de timpi de injumatatire

133

N
Fig. 11.1. Scderea n timp a numrului de nuclee instabile
N0.

N0

N0/2
N0/4
T1/2

T1/4

Alt mrime folosit n practic este activitatea unei surse radioactive, notat cu

i definit ca numrul de dezintegrri care au loc ntr-o secund, ntr- o cantitate


de substan radioactiv. Activitatea este deci dat de scderea n timp a numrului
de nuclee instabile N:

=-

dN
= N
dt

Activitatea se msoar n dezintegrri pe secund . O dezintegrare pe secund se


numete becqerel ( Bq). n practic e folosete Curie, 1 Ci = 3,7 . 10 10 dez/sec sau
Bq.
Pentru a pune n eviden i pentru a msura radiaiile nucleare se folosesc
detectoare de radiaii Detectoarele de radiaii se bazeaz pe faptul c radiaiile alfa,
beta i gama produc direct sau indirect o cantitate de ioni prin mediile prin care trec.
Nucleele care apar n urma dezintegrrii alfa i beta sunt n general excitate i revin
instantaneu la starea fundamental prin emisia de fotoni gamma. Exist ns i
nuclee care rmn n stare excitat un timp mai ndelungat, stare metastabil. Aceste
nuclee dau natere la o radioactivitate gamma veritabil, caracterizat prin propria
perioad. Un fascicul de radiaii emis de o surs radioactiv, dup ce a strbtut un

134

mediu oarecare poate fi caracterizat prin viteza de numrare produs ntr-un detector
adecvat:
V=

nr.impulsuri
timp

Pentru cazul cnd ne intereseaz mai mult efectele biologice produse de ctre
radiaiile, alfa, beta sau gama se folosesc alte mrimi ca: doza de ioni (msurat n
Rentgen), doza de energie absorbit ( msurat n Gray), sau doza biologic
( msurat n Sievert) etc.
La trecerea radiaiilor printr-un mediu oarecare ele sunt aborbite i intensitatea lor
scade exponenial cu distana parcurs n mediu conform relaiei:
I = Io.e -

unde I0 este intensitatea fluxului incident, I intensitatea

fluxului emergent,

coeficientul de atenuare, iar x distana parcurs prin mediul studiat.

Put 11.Puterea

penetranta a radiaiilor:

Puterea p

Hrtie

Lemn

Beton

Coeficientul se poate determina msurnd vitezele de numrare ale contorului,


V2 i V1, corespunztoare grosimilor stratului parcurs x2 i x1, folosind expresia:

=k

ln V2 ln V1
x 2 x1

135

Pentru a elimina valoarea constantei k, se fac msurtori relative pentru dou


materiale, cunoscnd coeficientul de atenuare al unuia dintre ele. Pentru fier =
0,455 cm-1, iar pentru plumb = 0,3 cm-1.
Detectorii se clasific dup

principiul lor de funcionare. Un dectector este

format din dou pri: a) un mediu n care radiaia produce un efect specific
(scintilaii, ionizri, efect fotoelectric sau efect Compton) i b) un sistem de
nregistrare a efectului produs de radiaii.
Detectorii cu scintilaii se bazeaz pe apariia de scintilaii n cristalele anorganice
sau organice, atunci cnd acestea sunt lovite de particulele respective. Fotonii
scintilailor sunt nregistrai cu ajutorul unui fotomultiplicator producndu-se un
impuls de tensiune. Amplitudinea impulsului este proporional cu numrul

de

scintilaii deci cu energia lor. Din acest motiv detectorul cu scintilaii se folosete att
la numrarea particulelor emise ct i la msurarea energiei lor. Detectorul GeigerMuller este un detector cu ionizri n gaz. El este constituit dintr-un tub metalic
catodul- i un fir central-anodul- ambele fiind introduse ntr-un cilindru de sticl,
etan. Amestecul de gaze conine n general heliu sau argon plus vapori de alcool
etilic. Datorit simetriei cilindrice, intensitatea cmpului n jurul anodului va scdea
rapid odat cu distana fa de aceasta. ntre cei doi electrozi se aplic o diferen de
potenial relativ mare, pn la 2500 V. Radiaiile alfa i beta ionizeaz direct gazul
din tub, pe cnd radiaiile gama ionizeaz gazul indirect prin electronii secundari.
Schema detectorului (contorului) Geiger-Muller:

ubul Geiger-Muller

Sursa

Anod
Aparat
de
msur

Gaz la
presiune
joas

Catod

Utilizarea detectorului cu semiconductori RADIATION ALERT.


136

Acest tip de detector portabil are tubul GM ncasat n instrument. La intrarea unui
flux de particule ionizante n tub, acesta va declana un impuls electronic care este
semnalizat prin apariia unei lumini roii i printr-un semnal sonor. Fondul cosmic
existent permanet poate fi nregistrat n fiecare minut i are valori ntre 5 25
impulsuri pe minut, depinznd de locaie i de altitudine. Se selecteaz nivelul de
alert la poziia X1, iar dac numrtorul depete scala aparatului se trece la
nivelurile superioare X10, X100. Semnalul sonor poate fi auzit acionnd butonul
ON/OFF/AUDIO. Se observ c att indicatorul vizual de pe ecran ct i cel audio
diminueaz progresiv pe msur ce se trece la nivele superioare de alert. Pentru a
determina ce tip de radiaie (alfa, beta sau gamma) provine de la o anumit surs,
procedm astfel:
-

detectorul se poziioneaz vertical cu partea din spate n apropierea sursei, iar

dac se nregistreaz un semnal, el poate proveni de la radiaia gamma sau beta de


energie mare (deoarece razele gamma de energie joas i razele X cu energie de 1040 keV nu pot penetra peretele tubului GM, dar pot ptrunde prin fereastr).
-

Se plaseaz o folie de aluminiu ntre instrument i sursa, iar dac indicaia

ecranului se modific, este vorba de radiaie beta. Majoritatea izotopilor conin att
radiaie gamma ct i beta.
-

Dac n poziia de mai sus nu se inregistreaz semnal, se poziioneaz

instrumentul cu fereastra spre surs. Semnalul nregistrat poate proveni n acest caz
de la radiaie alfa, beta sau gamma de energie joas. Dac se plaseaz o foaie de
hrtie ntre fereastr i surs, iar semnalul nceteaz, este vorba despre radiaie alfa.
Intervalul de operare al instrumentului: 0-50 mR/h = miliRentgens per or, sau 0500 Sv/h = microSieverts per or (gamma i X) i 0-50000 CPM = counts per
minute (alfa si beta). Sensibilitatea instrumentului avnd ca referin izotopul
este de 25 impulsuri/sec/1mR/h. Dac se utilizeaz pentru detecia

125

60

Co

I, se recomand

0.5 mCi sau mai mult. Nivelul minim detecie este n acest caz aproximativ 0.02 Ci .

137

Fig.11.3. a) Panoul frontal al detectorului de radiaii. b) Poziionarea sursei de radiaii fa de


detector.
138

Modul de lucru:
a) Indiferent ce tip de radiaie urmeaz a fi detectat, se va face o determinare iniial
a fondului cosmic, adic numrul de impulsuri/100 secunde nregistrate de instrument
n lipsa sursei studiate. La fiecare 100 secunde se noteaz valoarea (timp de cinci
minute) i apoi se va face media, care reprezint de fapt fondul cosmic. Determinarea
numrului de particule radioactive care ajung la detector se face plasnd sursa
succesiv la diferite distane: 20 cm, 15 cm, 10 cm, 5 cm, 1 cm. Se nregistreaz de
fiecare dat numrul de impulsuri / 100 secunde, repetndu-se msurtorile de cteva
ori i apoi se face media pentru fiecare distan aleas. Numrul de particule care
provin exclusiv de la surs se afl prin scderea fondului cosmic din valoarea medie a
impusurilor pentru fiecare distan. Se va reprezenta grafic numrul de impulsuri
provenite de la surs, n funcie de distan, iar din grafic se va determina distana de
njumtire. Se completeaz tabelul urmtor:
Distana sursa contor
cm

Nr. impulsuri/100 sec


Msurat
Media

Nr.imp./100sec provenite
de la sursa (media)

Infinita(fond cosmic)

1cm
5 cm
10 cm........
b) Se fixeaz distana dintre sursa radioactiv i detector la una din valorile de mai
sus. Se introduc pe rnd, ntre surs i detector, plci de plumb de diferite grosimi i
se nregistreaz de fiecare dat numrul de impulsuri. Se va reprezenta grafic numrul
de impulsuri provenite de la surs n funcie de grosimea stratului de material
absorbant, iar din grafic se va determina distana de njumtire. Apoi se va calcula
ln 2

coeficientul de atenuare conform relaiei X1/2 =

0,693

139

CUPRINS
I.
1.
2.
3.
4.

PROPRIETILE GENERALE ALE LICHIDELOR

Determinarea coeficientului de tensiune superficial a lichidelor ...1


Determinarea coeficientului de vscozitate..6
Densimetrie.11
Metode calorimetrice..18

II. MSURAREA PROPRIETILOR ELECTRICE ALE


LICHIDELOR BIOLOGICE
5. Conductometrie..25
6. Studiul unei pile de concentraie32
III. PROPRIETI OPTICE ALE LICHIDELOR BIOLOGICE
7. Determinarea indicelui de refracie al unei soluii cu ajutorul refractometrului
ABBE...................................38
8. Determinarea
concentraiilor
soluiilor
optic
active
cu
ajutorul
polarimetrului...45
9. Microscopie optic. Ochiul-un sistem optic complex........58
10. Spectrofotometrie. Absorbia i emisia radiaiilor de ctre
molecule 80
Utilizarea spectrofotometului UV-VIS pentru trasarea unei curbe
140

de etalonare i determinarea diferitelor forme ale hemoglobinei n


soluii i n snge89
IV. INTERACIUNEA RADIAIILOR CU MATERIA VIE
11. Clasificarea radiaiilor. Surse de radiaii. .111
Efectele radiaiilor neionizante. ....114
Interaciunea
radiaiilor
ionizante
cu
materia
vie,
efecte
radiochimice..125
Utilizarea detectorului Geiger-Muller sau a detectorului cu
scintilaie pentu determinarea variaiei cu distana a fluxului de
radiaii .130
BIBLIOGRAFIE SELECTIV

SIMONA

CAVALU

Colaboratori :
Pop Leontin
Loredana B

141

EDITURA UNIVERSITII DIN ORADEA 2006

142

143