Departamentul de Inginerie Chimic i Biochimic,

Universitatea Politehnica din Bucureti

Biotehnologii

conf. dr. ing. Iuliana Jipa

iulia.jipa@yahoo.com

2016 - 2017
Structura cursului:
Capitolul 1 Elemente introductive
Capitolul 2 Microorganisme de importan industrial
Capitolul 3 Materii prime n biotehnologii
Capitolul 4 Consideraii asupra realizrii industriale a proceselor biochimice
Capitolul 5 Procedee de sterilizare n biotehnologie
Capitolul 6 Fermentaia de regim
Capitolul 7 Reactoare biochimice
Capitolul 8 Separarea i purificarea produselor de biosintez
Capitolul 9 Aplicaii ale biotehnologiei n domeniul proteciei mediului
Elaborarea unui proces tehnologic:

Fazele procesului tehnologic:

prepararea mediului de cultur

prepararea culturii de inocul
sterilizarea mediului de cultur, a fermentatorului i a echipamentelor
conexe
fermentaia de regim
separarea masei celulare
separarea i purificarea produsului de biosintez
tratarea i eliminarea efluenilor i a produselor secundare
Prepararea mediului de cultur (a substratului):
mediile de cultur: - simple sau complexe;
- cu compoziie chimic bine definit sau semidefinit;
- trebuie s conduc la producii rapide i reproductibile.
componenii mediului de cultur:
- satisfac necesitile microorganismului productor n etapele de cretere i dezvoltare;
- asigur realizarea unei productiviti maxime.

Se tinde spre determinarea pentru fiecare microorganism a necesarului minim de substane hrnitoare i alctuirea
unui mediu complex minimal, care s conin doar componentele necesare creterii i producerii de metabolii.
La stabilirea compoziiei mediului de cultur trebuie s se in seama de compoziia elementar a
microorganismelor i de necesitile acestora pentru o cretere rapid i eficient.
Pe lng componentele principale, mediile de cultur pot conine:
- antispumani cum ar fi uleiurile naturale (ulei de soia, bumbac, care constituie i surse suplimentare de
carbon) sau produse clasice (uleiuri siliconice, propilenglicol etc.);
- precursori.
Adaosurile pot juca un rol esenial n obinerea anumitor enzime sau produse (ex. antibiotice, vitamine), prin blocarea
unor ci enzimatice anterioare, sau dirijarea biosintezei spre produsul dorit (n cazul precursorilor).
La stabilirea concentraiei componentelor mediului de cultur trebuie s se in seama de posibilitatea apariiei
fenomenelor de inhibiie de substrat sau de produs.
n selectarea materiilor prime trebuie avute n vedere, pe lng necesitile fiziologice ale microorganismului i de o
serie de criterii de natur economic cum ar fi:
- preul de cost al materiei prime;
- disponibiltatea, accesibilitatea i constana calitii materiei prime;
- stabilitatea la transport i depozitare.
Prepararea mediilor de cultur se realizeaz n vase prevzute cu sisteme de amestecare i de dozare.
Prepararea culturii de inocul:

Cultura de inocul se obine din tulpini pure selecionate.

Tulpinile de microorganisme izolate din diferite medii (sol, aer, plante
etc.) sunt selecionate n vederea obinerii unor tulpini nalt productive.
n multe cazuri creterea productivitii tulpinilor slbatice se realizeaz
prin modificri genetice, obinute n urma unor tratamente cu factori
mutageni fizici (iradiere cu raze X, UV, , raze ionizate) sau chimici.
Att obinerea tulpinilor modificate genetic, ct i conservarea
calitilor mutantelor este extrem de dificil i constituie secretul
fiecrui productor.
Prepararea culturii de inocul presupune o munc extrem de laborioas,
realizndu-se n etape succesive, distincte, n volume cresctoare.
Culturile se realizeaz pe substraturi cu compoziie similar cu cea din
fermentaia de regim, pentru a realiza aclimatizarea microorganismului
productor cu substratul hrnitor i de a reduce perioada de lag.
Sterilizarea mediului de cultur, a fermentatorului i a echipamentelor conexe:

SCOP: distrugerea oricror forme de microorganisme i ageni patogeni

Metode:
- termice - au cele mai largi aplicaii practice, datorit eficienei i simplitii:
uscate sau umede:
cu aer cald la 140-200 0C necesit: - temperaturi mai ridicate;
- timp de acionare mai ndelungat;
cu vapori de ap sub presiune la 120-140 0C eficien mare, datorit aciunii
hidratante, coagulante i de hidroliz a aburului asupra proteinelor microbiene;
prin nclziri repetate la 70-100 0C.
discontinue sau continue

- fizice - filtrarea prin umpluturi fibroase (materiale poroase, membrane)

- iradiere cu radiaii UV, IR, raze X,

- chimice - utilizarea agenilor chimici cum ar fi:

- oxid de etilen, formol, fenol, azotiperit, ozon etc.
Sterilizarea mediului de cultur, a fermentatorului i a echipamentelor conexe:

Alegerea metodei de sterilizare:

- funcie de proprietile fizico-chimice ale materialelor ce urmeaz a fi sterilizate:

materiale termolabile
- filtrare (pe materiale poroase, fibroase, prin membrane)
- cu ageni chimici (etilenoxid, formaldehid, fenol, amestec formaldehid-aer)
aer (debit necesar mare
numr mare i variat de microorganisme prezente
rezistena microorganismelor la temperatur n absena umiditii)
- fitrare pe materiale filtrante: fibr de sticl, nitrat de celuloz, teflon, poliamid
- radiaii
spaii sterile
- sterilizarea cu radiaii
bioreactoarele i echipamentele conexe
- abur sub presiune
- funcie de operaiile realizate:
transvazarea aseptic
- aer steril sub presiune
nsmnarea aseptic
- sub protecia unei flcri
- sub presiune de aer steril
n cazul n care nici o alt metod de sterilizare nu poate fi aplicat se va realiza prepararea
aseptic a mediului de cultur.
Fermentaia de regim:
Condiiile optime sunt determinate de:
- compoziia mediului de cultur
- natura microorganismului productor
- temperatur
- pH
- concentraia de oxigen
- intensitatea amestecrii
Controlul strict al temperaturii (cu variaii de 50C) n fermentatoarele de mare capacitate nu este
posibil nici nu este necesar (n general).
Regimul de pH
- specific fiecrui microorganism;
- are n majoritatea cazurilor o tendin de scdere, datorit punerii n libertate a unor acizi
organici;
- meninerea n limitele prescrise:
- pe parcursul procesului prin dozare de substane cu caracter basic;
- prin regulatorii de pH coninui n mediu.
Asigurarea necesarului de oxigen:
- datorit solubilitii foarte sczute a oxigenului n ap se impune necesitatea
vehiculrii unui volum foarte mare de aer prin fermentator;
- pentru un contact interfazic gaz-lichid-solid ct mai eficient se utilizeaz diferite
sisteme constructive de barbotare, la care se adaug amestecarea mediului;
- gradul de amestecare depinde:
- de tipul constructive;
- direct proporional cu turaia agitatorului.
Durata proceselor variaz n limite mari de la 40 - 42 de ore la 8-10-. zile.
Separarea masei celulare:

Precedat de inactivarea microorganismelor prin modificri semnificative ale:

- temperaturii;
- pH-ului;
- prin adaos de substane chimice;
Se poate face prin:
- filtrare;
- Centrifugare;
- utiliznd uniti de separare prin membrane.
Influeneaz semnificativ economicitatea procesului.

Concentraia mic n substrat i n multe cazuri labilitatea structural a produsului

biosintetizat impun acordarea unei atenii deosebite etapelor de separare i purificare.

Alegerea operaiilor se face funcie de:

- natura substratului;
- concentraiile elementelor din substrat;
- proprietile fizico-chimice;
- locul de obinere (extracelular sau intracelular) al produsului;
- cantitatea i proprietile substratului care trebuie prelucrat.