Curs de Biofizică

Vă rugăm:
gânditi!

6
Disciplina de
Biofizică
si Fizică
Prof. dr. Ciprianamedicală
Stefănescu
Sef lucr. dr. Irena Grierosu
 Tehnici de centrifugare

The 20G centrifuge at NASA's Ames Research Center, Moffett Field, California.
 Forțe care acționează asupra unei
particule în procesul de
sedimentare:
Ff

Ff = 6πrηv m = masa particulei,

G
Ff
g = acceleraţia
gravitaţională,
• 2 forţe: r = raza particulei,
greutatea, G, η = coeficientul de
G viscozitate,
v = viteza particulei
şi în mişcare
forţa de
Forța centrifugă -
rotația poate modifica
artificial G:
Eprubeta cu proba în
rotaţie

Ff

G
Ff Fc

Ff

G
Fc
Forţa centrifugă
Eprubeta cu
proba in
procesul de Ff = forta de frecare
sedimentare Fc = forta centrifuga
unde:
ω = 2πν, viteza rotaţională
ν = frecvenţa de rotaţie
m = masa particulei
ρ si ρ’ = densităţile
particulei şi, respectiv, a
solventului
V = volumul particulei
R = distanţa, raza centrifugei
 Factorul de eficiență
a centrifugei:

Forta g = este o
masura a acceleratiei
resimtita ca greutate
Dispozitivul
Tabletop A 19th-century hand cranked

centrifuge laboratory centrifuge

Ultracentrifuga
Beckman
Optima TLX .
Tehnici de centrifugare
Exemplu de separare prin
centrifugare în gradient de densitate
Exemplu de separare prin
centrifugare în gradient de
densitate
Exemplu de separare
prin centrifugare
diferentiala
 Fractionarea celulară
Liver

1.
Prelevare
tesut
≈ 5 grame

Etape:
1. Prelevarea
(recoltarea)
2. Omogenizarea
3. Sedimentarea
4. Centrifugarea
diferențială
5. Ultracentrifugarea
 Centrifugarea
diferențială

1. Viteză mică
Homogenizatio
(1.000g X 10 min): Tissue n
1000 g
celule întregi, nuclee, cells
(1000 times Homogenat
e
citoschelet the
force of
Differential
gravity)
Supernatant centrifugation
2. Viteză medie 10 min
poured
into next tube
(20.000g X 20 min): 20,000
g
mitocondrii lizozomi 20 min

80,000
3. Viteză mare Pellet rich in
nuclei and
g
60 min
(80.000g X 1 h): cellular
150,000
debris
microzomi Pellet rich in
g
3 hr
mitochondri
a
4. Ultracentrifugare (and chloro-
plasts if Pellet rich in
(150.000g X 3 h): cells
are from a
“microsomes
”
ribozomi plant) (pieces of
plasma
macromolecule mem-
Pellet rich
in
branes and
ribosomes
cells’ internal
membranes)
 Coeficient de
sedimentare
Svedberg-ul =
unitate nonSI
pentru rata de
sedimentare =
10 -3 secunde

5
ULTRACENTRIFUGAREA
(Svedberg – 1923)
 Etape: Izolarea unei
proteine prin
1. Prelevare ultracentrifugare
(recoltare)
purificare
2. Omogenizare
3. Sedimentare
Cromatografie,
4. Centrifugare apoi analiza
diferențială proteinei in
2 scopuri
5. Ultracentrifugare

Cunoasterea
Cunoasterea
structurii
structurii
tridimensionale
primare
(conformationale):
difractie cu raze X
si RMN
16 g timp de
1 minut …

Centrifugarea este o metoda de ...

Bibliografie selectivă

• Aurengo A., Grémy F., Petitclerc T. - Biophysique, Médecine-Sciences

Flammarion, Paris, 1998.
• Dimoftache C., Herman S. – Principii de Biofizică umană, Ed. Universitară
“Carol Davila”, București, 2003.
• Duncan G, Physics in the Life Sciences, Blackwell Scientific Publications, The
Alden Press, Oxford, 1990.
• Durand A., Escanyé J-M., Naoun A. La biophysique en 1001 QCM, Ed.
Ellipses, 2004.
• Goldfarb D. Biophysics DeMYSTiFieD. McGraw-Hill Companies, 2011.
• Herman S. Aparatura medicală. Principiile fizice ale aparaturii medicale
moderne,Ed.Teora,București, 2000.
• Nölting, Bengt. Methods in Modern Biophysics. Springer. 2003.
• Pascu M., Rusu V., Vasile C., Spectrometria in IR in medicina si farmacie,
Editura BIT, 2003.
• Popescu A., Bazele Opticii, Ed. Universității „Al. I. Cuza”, Iași, 1988.
• Rusu V., Baran T., Brănișteanu D. D. - Biomembrane și patologie, vol. I, Ed.
Medicală, București, 1988, 63-92, 286-292.
• Rusu V. Note de curs. 2010.
• Rusu V. – Nobel – Retrospectivă 1905 – 1995 – Laureații premiului pentru
fiziologie și medicină, Ed. Omnia, Iași, 1996.
• Rusu V si colab. Lucrări practice și demonstrații de Biofizică și Fizică
Medicală, Ed. „Gr. T. Popa” Iași, 2003.
• Rusu V. – Dicționar medical, Ed. Medicală, București, ed. IV, 2011.
• Skoog D. A., Holler F. J., Nieman T. A., Principes d’analyse instrumentale,
De Boeck Université, Paris, 2003.
• Ștefănescu C, Rusu V. Biophysics and Medical Physics: An Introduction, Ed.
Tehnopress, 2008.