Producerea biotehnologica a compusilor

bioactivi anti-HIV

Calophyllum brasiliense

Cabat Elena-Alexandra
 Cuprins

• Introducere
• Descriere speciei
• Culturi de calus
• Micropropagare
• Concluzii
• Bibliografie
 Introducere

Calophyllum brasiliense este un arbore

medicinal cunoscut în principal pentru producerea de
calanolide ce sunt metaboliți secundari care inhibă
revers transcriptaza virusului imunodeficienței umane de
tip 1 (HIV-1). (Maldonado-Magaña, 2015)

În plus, studiile curente au demonstrat că C.

brasiliense conține o varietate de substanțe fitochimice,
inclusiv xantone, cumarine, flavonoide și triterpene, care
au acțiune antibacterienă, acționează împotriva
cancerului și posedă activitate antivirală.

Pe lângă importanța chimica și farmacologica,

este o specie recomandată pentru restaurarea pădurilor
riverane supuse inundațiilor periodice pe termen mediu
și lung.
 Descrierea speciei

•C. brasiliense face parte din familia Calophyllaceae, genul Calophyllum

•Este un arbore de dimensiuni medii, verde, cu o înălțime de 12-20 m și
diametru cuprins intre 40-60 cm.
•Florile sunt numeroase, mici, parfumate și albe.
•Fructele sunt drupe de 2,5 până la 3 cm lungime, cu froma ovoidă sau
sferică, verzui, gălbuie atunci când sunt coapte.
•C. brasiliense este distribuit în principal în pădurile tropicale din America
Latină, de la Brazilia la Mexic.
 În plante, calanolidele pot fi detectate în principal în frunze, chiar dacă
acestea provin din răsaduri de C. brasiliense care au fost germinate din semințe și
cultivate într-o seră. Calanolidele pot fi de asemenea detectate în calusul
plantelor, culturile de suspensie celulară și frunzele provenite de la plante
regenerate in vitro din tulpini nodale tinere ale plantelor Calophyllum brasiliense
timp de 12 luni. (Gomez-Robledo, 2016)
Au fost identificate 3 tipuri diferite de calanolide (A, B și C) în C.
brasiliense, ele prezentând o activitate inhibitorie semnificativă asupra replicării
virusului HIV-1.

Structura chimica a: a calanolide A, b Calanolide B, c calanolide C

(Bernabe, 2014)
 Culturi de calus

În 2009 s-a demonstrat că culturile de calus reprezintă o tehnică utilă pentru

producerea de calanolide.

Semințele mature au fost colectate. Endocarpul și tegumentul au fost

îndepărtate din semințe și apoi au fost puse la germinat. Când răsadurile au ajuns la 10-
15 cm în înălțime (după aproximativ 3 luni), au fost transferate în pungi de polietilenă.

O lună mai târziu, frunzele imature de 5-6 cm în lungime au fost îndepărtate

din plantă și utilizate ca sursă de explant. În cele din urmă explantele au fost plasate în
borcane care conțin mediu de cultură. Frunzele proaspete din răsadurile și biomasa de
calus produse de semințe și explante de frunze au fost uscate la 60 ° C într-un cuptor și
transformate în pulberi fine. Conținutul de calanolid B, respectiv calanolid C, a fost
determinat prin HPLC.
S-a observat că inducția calusului și a rădăcinii pe explante de frunze sau semințe a
fost dependentă de regulatorii de creștere.
Diferite morfologii au fost dezvoltate din tratamentele PGR testate în explante.

Pentru explantele de frunze, tratamentul cu KIN

și 2,4-D a indus un calus verzui (a) care, după 2
săptămâni, a căpătat un aspect gălbui (b).

Tratamentul cu KIN și NAA a provocat apariția

unui calus alb, compact (c) sau rădăcină (d)
care s-a transformat complet într-un calus maro
și friabil (e) 3 săptămâni mai târziu.
 Efectul auxinelor și citokininelor asupra inducerii calusului din
explantele frunzelor sau semințelor a fost semnificativ diferit, cu
auxinele producând un procent mai mare de inducție.
Cu auxinele, cea mai mare producție de calusuri în explante de
frunze a apărut cu NAA, în timp ce în explante de semințe a fost cu PIC.
KIN a produs inducție de calus semnificativ mai mare în cazul explantelor
de frunze decât BA.
 HPLC a evidențiat o producție mai mare de calanolid B și calanolid C în
calusuri din explante de semințe decât cele dezvoltate din frunze.

Rezultatele au arătat că culturile de calus C. brasiliense pot reprezenta o

biosursă fezabilă pentru producerea de calanolide.
Producția de calanolid B și de calanolid C prin FCS a fost de
aproximativ 3 ori mai mare decât cea obținută din frunzele frunzelor de plante
sănătoase.
 Micropropagare

Propagarea naturală a acestei specii are loc prin intermediul semințelor,

însă natura lor recalcitrantă și fructificarea neregulată, care are loc la intervale de
41 de luni, limitează propagarea acesteia.

În 2015, într-un studiu, Maldonado-Magaña și colab. au germinat

semințele in vitro și au stabilit un sistem de micropropagare pentru C. brasiliense
prin segmente nodale din plantule germinate.
Semințelelor mature C. brasiliense colectate le-a fost îndepărtat
endocarpul și tegumentul.
Semințele dezinfectate au fost plasate în tuburi de testare din sticlă
conținând 15 ml de mediu de cultură fără regulatori de creștere (PGR) pentru a
germina in vitro.
 După 12 zile, 48,6% din semințe au germinat. (a)
Răsadurile cultivate in vitro au prezentat o dezvoltare bună după 6 luni. (b)
Toate mediile de cultură care conțin muguri induși de PGR (c) și înnegrirea
explantului au fost prevenite cu o soluție antioxidantă.
•Proliferarea lastarilor (d) din segmentele nodale, utilizând cel mai convenabil
tratament.
•Atunci când lăstarii au fost excizati din nodul proliferat și crescuți în mediu fără
PGR, au arătat o dezvoltare bună (e)
•2 auxine (IBA și IAA) induc rizogeneza la lăstari (f)
•Răsadurile care au prezentat cea mai mare înălțime au fost aclimatizate în ghivece
și 77,5% dintre plante au supraviețuit transplantului după 3 luni (g).
 Concluzii

5
C. brasiliense este o specie care conține cantități mari de substanțe
fitochimice cu o mare varietate de actiuni cum ar fi antimicrobiana,
antiparazitara, antivirala etc.
Această specie prezintă o mare relevanță datorită potențialului său ridicat
de a produce calanolide, care sunt compuși fitochimici cu potențial puternic
împotriva virusului HIV-1.
 Bibliografie

5
1. Maldonado-Magana A., Salcedo Perez E., Bernabe-Antonio A., In vitro
regeneration of Calophyllum brasiliense Cambess: A valuable medicinal
tree, 2015.African Journal of Biotehnology
2. Gomez-Robledo H-B., Cruz-Sosa F. Bernabe-Antonio A., Identification of
candidate genes related to calanolide biosynthesis by transcriptome
sequencing of Calophyllum brasiliense (Calophyllaceae), 2016
3. Bernabe-Antonio A., Estrada-Zuniga E., Buendia L., Production of anti-
HIV-1 calanolides in a callus culture of Calophyllum brasiliense
(Cambes),2010