09.05.

2012

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE CAROL DAVILA, BUCURETI CATEDRA DE MEDICIN CELULAR I MOLECULAR MEDICINA DEZVOLTRII UMANE

ORGANITE SEMIAUTONOME

ef lucrri dr. Sanda Maria Creoiu

MITOCONDRIA
Definiie

Structur, ultrastructur Funciile mitocondriei

09.05.2012

Albert von Kolliker 1857

Richard Altmann - 1852 1900

1890 - bioblasti

09.05.2012

Carl Benda - 1898

Peter Dennis Mitchell

Premiul Nobel 1978 pentru formularea teoriei chemiosmotice

09.05.2012

Nobel 1997 - ATP sintaza

Mitocondria
organit celular
delimitat de un sistem de

dou membrane funcie de baz producerea de ATP.

mitos: fir, a; khondrion: granul.

09.05.2012

Distribuie
Numr i form foarte

variabile n aceeai celul, datorit plasticitii Volum relativ

5

- uzual 20 - hepatocite 30 - miocardocite

Videomicroscopie
O mitocondrie marcat fluorescent (sgeat) se deplaseaz ntr-o celul vie pe o distan de 6,6 m n 33 sec.
(B Trinczek et al., J Cell Sci 112:2355, 1999)

Microscopia optic
coloraii citologice

Verde Janus B colorant vital Hematoxilin feric Regaud granule negre

09.05.2012

Microscopie de fluorescen

Mitocondrii marcate cu
MitoTracker Green

Microscopie confocal

09.05.2012

Localizare intracelular

Ultrastructura mitocondriei
Desen al lui GE

Palade - 1953

09.05.2012

Ultrastructura mitocondriei
Membran mitocondrial Spaiu Criste intermembranar extern i

Matrice

intern

Ultrastructura mitocondriei

09.05.2012

Ultrastructura mitocondriei

Ultrastructura mitocondriei

09.05.2012

Ultrastructura mitocondriei

Mitocondrii cu criste tubulare

10

09.05.2012

Metodologia studierii mitocondriei

Postulatele teoriei chemiosmotoice (P. Mitchell, 1961)

Premiul Nobel n chimie, 1978

11

09.05.2012

Funciile mitocondriei
Postulatele teoriei chemiosmotice (P. Mitchell, 1961)

1 Lanul respirator este transportor de protoni 2 ATP sintaza produce ATP prin disiparea gradientului

protonic

Teoria chemiosmotic

3 Membrana mitocondrial intern conine

transportorii ce asigur traficul metaboliilor 4 Pe ci nespecifice, membrana mitocondrial intern este practic impermeabil la protoni i, n general, la ioni

12

09.05.2012

ATP sintaza (F0F1 ATP-aza) - particula Fernndez Morn

- 500 kD - Structur de b de tob (trunchi, gt i cap) - Cel puin 9 proteine (2 autonome) - Partea transmembranar (F0): canal protonic - Gtul i capul (3 + 3 + 1 + + 1 + 1 ): ATP sintaza -Funcionarea presupune rotirea subunitii F1 ce cuprinde 3 situsuri catalitice - Fiecare din situsurile catalitice trece prin trei conf ormaii succesive: deschis, lax, strns
F0 ATPaza

H Noji et al., Nature 386:299, 1997

13

09.05.2012

legturi fosfoanhidrice

Adenin

Riboz

Energi e

Energi e

Adenin

fosfat anorganic

Riboz

14

09.05.2012

De unde provine energia necesar funcionrii ATP-sintazei ?

Spaiu intermembranar

Sinteza ATP

Hidroliz ATP

Lanul transportor de electroni (respirator)

I. Complexul NADH dehidrogenazei
800 kD 22 proteine (7 autonome) 1 centru flavinic Cel putin 5 centre fier-sulf Preia e - de la NADH i i transfer ubiquinonei (CoQ)

III. Complexul citocromilor b-c1

- 500 kD - Cel puin 8 proteine (una autonom) - Funcioneaz ca dimer (2x500 kD) - 3 centre hemice; 1 centru fier-sulf - Transfer e - de la CoQ la citocrom c

IV. Complexul citocrom oxidazei (citocromilor a-a3)

300 kD 9 proteine (3 autonome) Funcioneaz ca dimer (2x300 kD) 2 citocromi, 2 centre cu Cu2+ Transfer e- de la citocrom c la oxigen, cu producerea de ap

15

09.05.2012

Decarboxilarea piruvatului
Complexul piruvat-dehidrogenaz - localizat n matricea mitocondrial

- 24 subuniti E1, 24 E2 i 12 E3
- legtura dinte glicoliza anaerob

i fosforilarea oxidativ

Glicoliza anaerob

-se desfoar n citosol - profit net: 2 mol. ATP

- rezult 2 mol. piruvat

16

09.05.2012

oxidarea acizilor grai

- se desfoar n matricea mitocondrial - acizii grai intr sub form de Acil-CoA

- rezult Acetil-CoA

17

09.05.2012

Decuplarea lanului respirator de fosforilare

Cuplarea chemiosmotic (cuplarea

lanului respirator cu fosforilarea din ATP sintaz) este esenial pentru producerea ATP; mpiedicarea acestei cooperri conduce la disiparea sub form de cldur a energiei acumulate n gradientul protonic; Decuplantul fiziologic, termogenina, asigur protecia termic a organismelor.

Funciile mitocondriei
A. Funciile membranei mitocondriale externe
1. Permeabilitate controlat (porine) 2. Acil-CoA sintaza

3. Carnitin-aciltransferaza I

Utilizarea acizilor grai n ciclul Krebs

4. Inactivarea aminelor biogene (monoaminoxidaza)

18

09.05.2012

Funciile mitocondriei

B. Funciile compartimentului intermembranar

1. Compartiment tampon (microclimat adecvat

funcionrii mitocondriei) 2. Adenilat kinaza (ATP + AMP = 2ADP) 3. Nucleozid difosfokinaze

Funciile mitocondriei
C. Funciile matricei mitocondriale
1. Ciclul acidului citric (ciclul acizilor tricarboxilici,

ciclul Krebs) 2. -oxidarea acizilor grai 3. Biosinteza proteinelor 4. Replicarea i transcrierea ADN mitocondrial

19

09.05.2012

Funciile mitocondriei
D. Funciile membranei mitocondriale interne
1. Transportul de metabolii

2. Lanul transportor de electroni (lanul respirator) 3. Producerea de ATP 4. Cooperarea dintre lanul respirator i ATP sintaz

Originea mitocondriei
Teoria

endosimbiotic Argumente:
Prezena cardiolipinei

n membrana intern; Prezena porinelor n membrana extern; ADN propriu, circular; Ribozomi 70S, sintez proteic sensibil la cloramfenicol, insensibil la cicloheximid; Capacitate proprie de a se divide.

20

09.05.2012

Importul proteinelor n mitocondrie

Adaptare dup Molecular Biology of the Cell 4th Ed., Bruce Alberts, Garland Science, 2002

21

09.05.2012

Mecanismul importului

Adaptare dup Molecular Biology of the Cell 4 th Ed., Bruce Alberts, Garland Science, 2002

Mitocondria i apoptoza Teoria structurrii de canale

1.Cascada caspazelor (Cysteinyl AspartateSpecific Proteases) Modificri mitocondriale: Reducerea dimensiunilor Sporirea densitii matricei Picnoz mitocondrial Eliberarea n citosol de componente intramitocondriale (citocrom c, endonucleaze G, AIF Apoptosis-Inducing Factor

22

09.05.2012

Mitocondria i apoptoza
2. Permeabilizare a membranei mitocondriale externe - capacitatea Bax i t-Bid de a reorganiza moecular bistratul 3. Posibilitatea Bax i Bak de a modifica permeabilitatea porinelor din membrana mitocondrial extern

Mitocondria i apoptoza Teoria ruperii membranei externe

Asemantoare ocului hipoosmotic

Contra-argument: procesul apoptotic decurge cu consum energetic

23

09.05.2012

Mitocondria i apoptoza

B Desagher S et al., Trends Cell Biol 10:369, 2000

Peroxizomii

24

09.05.2012

Peroxizomii
Descoprii de Johannes Rhodin 1954 i

denumii microbodies

Christian DeDuve 1965 peroxizomi

peroxide metabolizing organelles

Peroxizomii

25

09.05.2012

Funciile peroxizomilor
Producerea i descompunerea peroxidului de

hidrogen Oxidarea acizilor grai peste 24 de atomi de carbon Sinteza unor lipide plasmalogeni, colesterol, acizi biliari

Peroxizomii
oxidaze

RH2 + O2 H2O2
RH2 + H2O2

R+
peroxidaze

R+ 2H2O

catalaz

2H2O2

2H2O + O2

26

09.05.2012

Peroxizomii
Organite delimitate de o singur

membran Proteine membranare specifice - PMP 70 (peroxisome membrane protein 70 kDa) din familia transportorilor de proteine prin membrane

Peroxizomii Matricea peroxizomal

Conine peste 50 de

enzime Catalaza reprezint 40% din proteinele peroxizomului

27

09.05.2012

Peroxizomii - MET

Peroxizomii

28

09.05.2012

Aspect MET

Peroxizomii
Lazarov i Fujiki 1985

modelul multiplicrii autonome Cresc prin ncorporare de proteine i lipide. Se autoreplic

Se mpart n dou dup ce

ating o anumit dimensiune

29

09.05.2012

16
Peroxizom matur 3

Diviziune peroxizomal mediat de PEX11 16

16
3

Import de proteine matriceale

Peroxizom capabil 16 de import de 3 proteine matriceale

Diviziune peroxizomal mediat de PEX11 16

16 3

Import de alte PMP-uri mediat de PEX19

Peroxizom capabil 16 de import de PMP 3

Importul PEX3 i PEX16

Vezicul pre-peroxizomal

Biogeneza peroxizomilor
Implicarea

reticulului endoplasmic n generarea componentei lipdice Studii pe celule dendritice de oarece 2003 exist Pex n regiuni bogate n reticul endoplasmic

30

09.05.2012

Proteine de schimb fosfolipidic

Biogeneza peroxizomilor
Toate proteinele peroxizomale sunt sintetizate n

citosol pe ribozomii liberi

La captul C-terminal exist un tripeptid cu rol de

etichet SKL (Ser-Lys-Leu) este semnalul de import al proteinelor n peroxizomi - Peroxisomal targeting signal PTS1 i PTS2 ( la captul N-terminal)

PTS este recunoscut de receptorii Pex (peroxine)

proteine integrale ci de import

31

09.05.2012

Importul de proteine matriceale n peroxizom

1. Legarea receptor-ligand Proteine PTS1

Pex5 Pex7 Pex7

5. Reciclarea receptorilor

Pex5
Proteine PTS2

Pex7

2. Transportul la peroxizom

4. Disociere i translocare

3. Andocarea receptorilor

4
Citosol

17 14

13

12

10

8 22

Proteine PTS1

Proteine PTS2

Matrice

32

09.05.2012

Boli peroxizomale
Produse prin absena unei singure enzime sau a unor

peroxizomi malformai Patologie: Sindrom Zellweger (cerebro-hepato-renal)- absena peroxizomilor- acumulare de lipide n creier, hepatomegalie, chiste renale Adrenoleucodistrofia Lorenzos oil imposibilitatea de a metaboliza corespunztor acizii grai, ducnd la degradarea tecii de mielin a neuronilor maladie X linkat

33