2. Sterilizare i dezinfecie.

(GabrielaLoredana Popa, Loredana-Sabina

Manolescu)

2. 1. Cuvinte cheie
Sterilizare
Dezinfecie
Cldur umed
Cldura uscat
Dezinfecie chimic
2. 2. Introducere (definiii)
Curarea reprezint ndeprtarea materiei organice de pe instrumente sau
echipamente. Sanitarizarea reprezint reducerea numrului de ageni patogeni din
locurile publice (restaurante, toalete publice, etc.) n vederea prevenirii transmiterii
bolilor.
Septic = contaminat cu ageni patogeni. Aseptic = lipsit de ageni patogeni i
nepatogeni. Prin asepsie se evit contaminarea mediului cu microorganisme i se
menine sterilitatea esuturilor, mediilor de cultur, medicamentelor etc.
Antisepsie = ndeprtarea / distrugerea formelor vegetative bacteriene de pe
esuturi vii. Se realizeaz cu ajutorul substanelor antiseptice (substane chimice).
Bacteriostatic = inhib creterea bacteriilor far a le distruge. Bactericid =
distruge bacteriile (fr a distruge ntotdeauna i sporii). Sporicid = agent capabil s
distrug sporii. Fungicid = agent chimic capabil s distrug fungii.Virucid = agent
chimic capabil s distrug virusurile.
2. 3. Sterilizarea
Prin sterilizare se distrug toi agenii (patogeni, nepatogeni, forme vegetative sau
spori) de pe o suprafa sau din orice tip de mediu.
2. 3. 1. Sterilizarea prin cldur
Cldura este o metod fizic prin care se distrug agenii patogeni.
2. 3. 1. 1. Sterilizarea prin cldur uscat
Mecanism = oxidarea, denaturarea proteinelor sau carbonizarea structurilor
bacteriene.
Sterilizarea prin nclzire la incandescen (la rou) reprezint meninerea n
flacra becului Bunsen, pn la nroire, a obiectului care urmeaz a fi sterilizat. n
acest mod se sterilizeaz ansa bacteriologic (cu bucl sau fir); exersm la LP.
Flambarea reprezint trecerea prin flacr (de 2-3 ori) a unui obiect, fr a se atinge
temperatura de incandescen. n acest mod se procedm n cazul portansei,
lamelor, gtului unui recipient de sticl (eprubet, etc). Nu reprezint sterilizare !
Incinerarea reprezint arderea complet, la temperaturi ntre 870-980C a
unor materiale de unic folosin, unor materiale infectate (infectele), reziduuri
organice solide, gunoi. Incinerarea se realizeaz n crematorii (incineratoare).
Cuptorul cu aer cald (pupinel, etuv, cuptor Pasteur) este o cutie metalic cu
perei dubli n care se obine i se menine o temperatur constant i uniform
pentru sterilizare. Este necesar i un sistem de ventilaie pentru uniformizarea
temperaturii n interiorul aparatului. Temperatura este de 180C, iar durata o or.
Acest tip de sterilizare este recomandat pentru obiecte de sticl, obiecte de porelan,
pulberi inerte i termostabile, uleiuri anhidre, instrumentar chirurgical (preferabil
sterilizat n autoclav) etc. Pupinelul nu trebuie suprancrcat; aerul trebuie s poat
circula printre obiectele puse la sterilizat. Sticlria i obiectele de porelan trebuie
splate i uscate complet nainte de sterilizare i nvelite n hrtie special. Nu se vor

steriliza n pupinel soluiile apoase, obiectele de plastic, obiectele de cauciuc, alte

materiale termolabile, materiale contaminate din laborator.
2. 3. 1. 2. Sterilizarea prin cldur umed
Mecanism = coagularea proteinelor i degradarea enzimelor. Se consider a fi cea
mai eficient metod de sterilizare.
Fierberea se realizeaz la 100C, 30 minute; distruge formele vegetative bacteriene
dar nu i sporii.
Tindalizarea (sterilizare intermitent) se realizeaz la la 100C, cte 30 minute,
3 zile consecutiv. Se pot steriliza medii de cultur i mediile care conin zaharuri i
gelatin. n prima zi sunt omorte formele vegetative bacteriene iar n a doua i a
treiazisunt omori sporii care germineaz.
Pasteurizarea se realizeaz la trei nivele: nalt, mediu i jos. Este o metod de
conservare a alimentelor fr a distruge calitatea acestora. Prin pasteurizare sunt
distruse bacteriile n form vegetativ dar nu i sporii. Pasteurizarea joas se
realizeaz la 63C, 30 secunde. Pasteurizarea nalt (ultra-high-temperature /
UHT), se realizeaz la 140C, 3 secunde. Se utilizeaz frecvent pentruprodusele
lactate.
Autoclavarea este cea mai folosit metod de sterilizare. Folosete aburul sub
presiune (de ex. la o temperatur de 121C, 15 minute). Autoclavul este un cazan
metalic de presiune care se nchide etan cu un capac. Capacul este prevzut cu un
sistem special de nchidere i n interiorul lui vaporii de ap sunt comprimai la
presiunea necesar sterilizrii. Vaporii de ap ajung la 121C, la 1 atmosfer.
Prin autoclavare se sterilizeaz medii de cultur, obiecte de cauciuc, bumbac, diferite
substane n soluie, unele obiecte de sticlrie, materiale contaminate din laborator,
instrumentar chirurgical (metalic), aparate de filtrat etc.
Controlul sterilizrii prin autoclavare se poate realize prin metode biologice (hrtii de
filtru ce conin o cantitate de 106 spori de Bacillus stearothermophilus; hrtiile sunt
puse in autoclav odata cu materialele ce urmeaz a fi sterilizate i ulterior sunt puse
la incubat pe medii de cultur; dac bacteria se dezvolt n urma incubrii nseamn
c sterilizarea nu a fost eficient).
2. 3. 2. Sterilizarea prin filtrare
Reprezint o metod fizic de sterilizare. Bacteriile pot fi reinute mecanic i
electrostatic n porii unui filtru. De-a lungul timpului au fost utilizate o serie de filtre
clasice (porelan, sticl poroas, azbest impregnat cu caolin, pmnt de infuzori).
Acum se folosesc mai frecvent membrane filtrante din esteri de celuloz sau ali
polimeri precum acetatul de celuloz (pori ntre 8 i 0,025mm). Unele dintre cele mai
bune filtre de sterilizare sunt filtrele HEPA (High Efficiency Particulate Air Filters), filtre
care se utilizeaz pentru sterilizarea aerului n hotele microbiologice. Sterilizarea prin
filtrare este utilizat pentru decontaminarea aerului, a unor medii de cultur (care nu
se pot steriliza prin autoclavare), a unor reactivi care sunt sensibili la temperaturile
atinse n cazul sterilizrii prin cldur etc.
2. 3. 3. Sterilizarea prin intermediul radiaiilor
Se realizeaz prin doua tipuri de radiaii: neionizante (UV) sau ionizante (X etc).
Mecanism = ruperea legturilor de hidrogen sau oxidarea legturilor duble.
2. 3. 3. 1. Radiaiile neionizante
Acest tip de sterilizare este similar cu sterilizarea cu aer cald; poate fi utilizat pentru
a steriliza seringi preambalate sau catetere. Se pot utiliza i microundele.
Un alt exemplu sunt radiaiile ultraviolete, UV. Ele au lungimi de und diferite. Cele de
250-260 nm sunt utile n sterilizarea suprafeelor de lucru, a aerului, (pentru
repartizarea mediilor de cultur, alte manevre aseptice etc) n cazul n care nu exist
hote microbiologice cu flux laminar. Distrug bacteriile dar nu pot penetra sticla, apa
sau unele substane. Pot arde pielea i ochii. Lmpile cu UV sunt numite lmpi
germicide. Radiaiile UV cu lungimi de und de 200-390 nm sunt cele mai eficiente.
2. 3. 3. 2. Radiaiile ionizante

Sunt un tip de radiaii cu putere mare de penetrare (ex. razele X, gamma i

razele cosmic). Este o sterilizare similar sterilizrii la rece. Radiaiile gamma cu
surs Co60 sunt mai eficiente dect radiaiile UV. Radiaiile ionizante se utilizeaz n
sterilizri industriale (pentru alimente, medicamente, mnui, recoltoare, plci Petri,
etc).
2. 4. Antiseptice i dezinfectante
Dezinfecia reprezint distrugerea formelor vegetative bacteriene (uneori i a
sporilor) din anumite medii (lichide, solide) sau de pe suprafee. Se realizeaz cu
ajutorul unor ageni fizici sau cu ajutorul substanelor dezinfectante. Este important
att concentraia, durata aplicrii, ct i remanena dezinfectantului.
2. 4. 1. Hipocloriii

clorinarea descoperit in Suedia (1744), din 1890 se folosete n dezinfectare;

soluiile de hipoclorit se prepar proaspt (n fiecare zi de lucru);

concentraia n clor activ este poate s difere n funcie de scopul urmrit;

au efect dezinfectant asupra bacteriilor n form vegetativ, unor spori

bacterieni, fungilor (100 ppm, n o or), virusurilor (200 ppm, n 10 minute);

se pot utiliza pentru purificarea apei;

efectul este diminuat n prezena substanelor organice (ex. proteine).

2. 4. 2. Derivaii fenolici

distrug membrana plasmatic, inactiveaz enzimele, denatureaz proteinele;

se folosesc sub form de derivai fenolici;

soluiile fenolice se prepar proaspt (n fiecare zi de lucru); efectul nu este

diminuat n prezena substanelor organice;

au efect dezinfectant asupra bacteriilor n form vegetativ, fungilor, unor

virusuri (ex. HIV inactivat de soluia 0,5%).
2. 4. 3. Glutaraldehida

cel mai frecvent este utilizat concentraia de 2% la un pH alcalin (efect asupra

bacteriilor n form vegetativ, endosporilor, fungilor, virusurilor);

efectul nu este diminuat n prezena substanelor organice;

se poate folosi i la dezinfectarea suprafeelor metalice;

nu poate fi folosit pentru suprafee (este nevoie de un timp mare de expunere

pentru a fi eficient); ideal pentru dezinfectarea echipamentelor contaminate,
imersate n containere meninute nchise (ex. endoscoape etc).
2. 4. 4. Iodoforii

sunt substane care elibereaz iodul n soluii apoase;

inhib sinteza proteic;

au efect dezinfectant asupra bacteriilor n form vegetativ, unor spori

bacterieni, fungilor, unor virusuri (ex. virusuri cu nveli lipidic);

sunt inactivai de substane organice (ex. proteice), mase plastice, detergeni;

pot fi utilizai pentru dezinfecia suprafeelor, dezinfecia pipetelor contaminate.

2. 4. 5. Dezinfectarea cu etilenoxid

distruge bacteriile, nu i sporii (ex. sporii de Bacillus subtilis nu sunt distrui);

se utilizeaz pentru materiale puin rezistente la temperaturi ridicate sau radiaii

(ex. materiale din cauciuc, plastic, echipament electronic etc);

1.
2.
3.
4.
5.
6.

este exploziv (pentru evitarea exploziei, de ex. utilizm etilenoxidului n camere

speciale, cu presiune negativ);

pentru siguran trebuie respectate toate recomandrile productorului;

exist inconveniente (efecte carcinogenetice, efecte la nivelul sistemului nervos

etc);

sterilizarea este influenat de concentraie, temperatur, umiditatea relativ i

timpul de expunere (o dublare a concentraiei reduce la jumtate timpul necesar).
2. 5. Direcii de cercetare
Chiar dac nu toate noiunile prezentate n manualele de specialitate trebuie nvate
ca atare, n dezvoltarea pe parcursul activitilor universitare considerm c este
necesar ca cititorii s citeasc mai mult, pentru o ct mai bun informare. Ca atare,
recomandm cteva link-uri corespunztoare unor articole care pot fi studiate
folosindu-se resursele World Wide Web.
http://www.microrao.com/micronotes/sterilization.pdf
http://www.cdc.gov/hicpac/disinfection_sterilization/13_10othersterilizationmethods.ht
ml
http://www.ific.narod.ru/Manual/Clean.htm
http://www.health.qld.gov.au/endoscopereprocessing/module_2/2_1.asp
http://generalbacteriology.weebly.com/sterilization-and-disinfection.html
http://www.diffen.com/difference/Disinfect_vs_Sterilize
2. 6. Povestire adevrat
n urma infectrii unei plgi abdominale cu Mycobacterium chelonae (dup o
liposucie), a fost declanat o investigaie. Liposucia a fost realizat n ambulatoriu
(realizat sub anestezie local).
Investigaiei a ncercat s determine dac au avut loc i alte cazuri de infecii cu
mycobaterii atipice, anterior liposuciei, n respectivul cabinet medical.
M. chelonae este rspndit n sol i ap, inclusiv n apa de la robinet. n literatur au
mai fost raportate infecii ale pielii i esuturilor moi, inclusiv infecii dup intervenii
chirurgicale cosmetice. Sursa posibil a infeciei raportate putea fi contaminarea
echipamentelor i/sau dezinfectarea sau sterilizarea lor inadecvat. S-a descoperit c
n acest caz canulele de liposucie au fost cltite cu ap de la robinet i unele
echipamente au fost dezinfectate cu soluie cuaternar de amoniu. Investigaia a
artat c n acel cabinet medical existau nereguli n curarea corespunztoare,
dezinfecia i sterilizarea echipamentelor de liposucie. Cu excepia medicului, ntreg
personalul din cabinet lucra far licen. Att asistenii medicali ct i restul
personalului fuseser instruii pentru curarea i sterilizarea echipamentelor de
liposuctie dar nu existau protocoale scrise pentru sterilizarea n autoclav a
materialelor reutilizabile i nici nu era inut evidena utilizrii acestuia. n plus, nu se
foloseau controale biologice pentru verificarea bunei funcionri a autoclavului aa
cum stipulau instruciunile productorului. Cabinetul nu avea protocoale scrise de
dezinfecie i sterilizare. Asistentele amestecau ce rmnea n sticlue mici de
povidon iodat i apoi foloseau amestecul pus ntr-o sticl mare. De asemenea
foloseau tampoane de vat nmuiate n alcool i inute ntr-un recipient n loc de
tampoane ambalate individual. O alt neregul identificat a fost utilizarea soluiei de
alcool izopropilic 70% dintr-o sticl nesteril deschis, n locul unei soluii sterile de
irigare, pentru a cura canula de liposucie, mai exact pentru a disloca esutul de pe
ea n timpul liposuciei.
Ancheta epidemiologic nu a mai descoperit i alte cazuri de infecii cu micobacterii
atipice n acest cabinet. Testele de laborator efectuate pe probe de ap de la
robinet i aer din sistemul de ventilaie au fost negative pentru M. chelonae. n
acest situaie cabinetul nu a putut fi incriminat pentru mbolnvirea pacientei.
S-a recomandat implementarea unor protocoale corecte pentru curare, sterilizare i
dezinfecie, conform indicaiilor productorilor. S-a recomandat utilizarea unor

controale biologice pentru verificarea bunei funcionri a autoclavului. Cadrelelor

medicale far licen le-a fost suspendat dreptul de practic. Cabinetul a fost nchis
pn la remedierea neregulilor.
2. 7. De reinut
n orice laborator trebuie s existe protocoale scrise ale procedurilor de sterilizare i
dezinfecie.
Laboratoarele trebuie s fie afiliate la un sistem de control i management al bolilor
infecioase i toi care lucreaz n laborator trebuie s cunoasc modul de funcionare
al sistemelor de sterilizare, al autoclavului i a substanelor dezinfectante.
2. 8. Verificai-v cunotinele
1. Sterilizarea distruge:
A. Agenii patogeni
B. Agenii nepatogeni
C. Formele vegetative
D. Sporii
E. Endosporii
2. Dezinfecia:
A. Reprezint distrugerea formelor vegetative bacteriene
B. Reprezint distrugerea tuturor sporilor
C. Este eficient independent de cantitate
D. Se realizeaz cu ajutorul substanelor dezinfectante
E. Este eficient independent de timp
3. Prin autoclavare se sterilizeaz:
A. Articole de cauciuc
B. Medii de cultur
C. Diferite substane n soluie
D. Pipete i lame
E. Materiale contaminate din laborator
4. Iodoforii:
A. Sunt substane care elibereaz iodul n soluii apoase
B. Nu inhib sinteza proteic
C. Au efect dezinfectant asupra bacteriilor n form vegetativ
D. Au efect asupra unor spori bacterieni
E. Nu pot fi utilizai pentru dezinfecia suprafeelor
5. Urmtoarele afirmaii sunt corecte:
A. Autoclavarea se realizeaz la otemperatur de 121C timp de 15 minute
B. Tindalizarea se realizeaz la 100C, 30 minute, 3 zile consecutive
C. Septic nseamn neinfectat
D. Aseptic nseamn infectat cu ageni nepatogeni
E. Agentul bacteriostatic este un agent care distruge bacteriile
2. 9. Myth busters (ALEGEI ntre adevrat i fals)
1. Argintul are propriei antimicrobiene. O moned de argint pus n mediu de cultur
inoculat va inhiba creterea bacterian.
2. Clorura de mercur este bactericid dar este inactivat de materia organic.
3. Afumarea este o metod de sterilizare foarte eficient.
4. Fierberea timp de 10 minute distruge sporii.
5. Radiaiile ultraviolete pot produce leziuni la nivel ocular.