Carte LP Biofizica

UNIVERSITATEA "OVIDIUS" CONSTANA
FACULTATEA DE MEDICIN GENERALA
LUCRRI PRACTICE
BIOFIZIC MEDICAL
Teren Ovidiu
Petcu Lucian Cristian
Vasile Monica
-2009-
Ovidius University Press, 2009
Facultatea de Medicin
Disciplina Biofizic
Aleea Universitatii nr. 2
Constana
Romania
Tel/Fax: 0241-605000
Copyright2004
Toate drepturile sunt rezervate Editurii Universitii Constana
Ovidius University Press
Lucrri Practice de Biofizic Medical
PREFA
Cartea de Lucrri Practice de Biofizic Medical se adreseaz studenilor

Facultii de Medicin General din cadrul Universitii Ovidius Constana.
Coninutul lucrrilor de laborator a fost adaptat cerinelor programelor analitice
ale facultii ct i la performana aparaturii existente n dotarea laboratorului.
Tematica lucrrilor practice este n strns legtur cu problemele teoretice
predate la cursul de biofizic i este orientat spre a dezvolta abilitile studentului de
a utiliza aparatura de laborator, a analiza i interpreta rezultatele obinute.
Lucrarea a fost astfel conceput nct s transmit att cunotinele teoretice
necesare pentru nelegerea lucrrilor prezentate, ct i descrierea tehnicilor de lucru
i a principiului de funcionare a aparaturii ntlnite n mod curent n acest domeniu.
Sperm c n acest mod lucrarea va fi n acelai timp un material de lucru ct i
un material de documentare. Forma actual a crii de lucrri practice a fost ntocmit
de colectivul Disciplinei de Biofizic, al Catedrei de Fiziologie Normal i Patologic
din cadrul Facultii de Medicin General, Constana.
Autorii
CUPRINS
Prelucrarea matematic a datelor experimentale
Microscopia de transmisie microscopia de reflexie
Tehnici speciale de microscopie
Cromatografie i electroforez
Sedimentare i centrifugare
Spectrofotometria de absorbie n UV-VIS
Poteniale de aciune
Fenomene de transport
Determinarea coeficientului de vscozitate a lichidelor
Determinarea coeficientului de tensiune superficial a
7
17
22
31
42
49
57
65
73
79
lichidelor
Determinarea densitii lichidelor
Determinarea concentraiei unor soluii prin indice de
86
91
refracie
Determinarea concentraiei substanelor optic active
Telecobaltoterapia
Bibliografie selectiv
98
105
122
Prelucrarea matematic a datelor experimentale

I. Noiuni teoretice
A. Indicatori de tendin central
Indicatorii de tendin central sunt valori ce localizeaz ntr-un fel oarecare
mijlocul setului de date. Dintre indicatorii de tendin central menionm:
Modul - valoarea care apare cel mai frecvent.
Un set de date poate fi non-modal (dac toate valorile posibile au aceeai
frecven), mono-modal (o singur valoare maximal), multi-modal (cu mai multe valori
ce apar cu aceeai frcven maximal).
Mijlocul - media aritmetic a valorilor extreme ale setului de date.
Mediana - valoarea ce mparte setul de date n dou grupe egal populate.
Pentru setul de date S={X 1,..., Xn}, ordonat cresctor, cnd n=2k+1 (numr
impar de date), mediana este Me=Xk+1. n cazul aceluiai set dar pentru n=2k (numr
par de date), mediana este:
Me
X k X k 1
2
Media - cele mai folosite sunt: media aritmetic (X ma), geometric (XG),
armonic (XH) i cuadratic (XQ). Se poate arta uor c aceste medii se afl n relaia:
X H X G X ma X Q
B. Indicatori de poziie
Indicatorii de poziie sunt folosii pentru localizarea unui anumit subgrup de date
n relaie cu restul eantionului. Se numesc -cuantile acei indicatori ce mpart
eantionul n pri egal populate. Cele mai utilizate sunt: cvartila (qk), decila i
percentila (pk), valori ce mpart datele n pri coninnd o ptrime, o zecime, sau o
sutime din elemente.
S considerm un set de date ordonat cresctor unde L este valoarea cea mai
mic din set iar H valoarea cea mai mare.

Percentila de ordinul pk este valoarea numeric pentru care k% din date sunt
mai mici dect pk iar (100-k)% sunt mai mari. Se observ c p50 = q2.
C. Indicatori de mprtiere (dispersie)
Indicatorii de mprtiere descriu variabilitatea datelor. Datele grupate strns au
valori mici pentru indicatorii de dispersie, n timp ce datele mprtiate au valori mari.
Principalii indicatori de mprtiere sunt: domeniul, variana, deviaia i
momentele.
Domeniul reprezint intervalul de valori al datelor.
=[Xmin, Xmax]
Uneori se indic lrgimea domeniului (amplitudinea mprtierii):
x= Xmax - Xmin
Toate deviaiile medii fa de un indicator de tendin central (media aritmetic,
geometric, cuadratic, armonic sau modul, mediana, notate generic prin <x>) se
definesc n acelai fel, ca medii ale diferenei ntre valoarea msurat i indicatorul
respectiv.
Mai general este momentul centrat de ordin q, mq(x) fa de media x. n
continuare vom analiza semnificaia i utilitatea unora dintre momentele centrate:
- m1(x)=0, momentul centrat de ordinul 1, nu aduce nici o informaie, ntruct ia
valoarea zero oricare ar fi distribuia datelor; din aceast cauz nu este folosit.
- m2(x) se numete varian (V); rdcina ptrat a varianei se numete
deviaie ptratic, notat cu . Ambele mrimi arat mprtierea datelor.
Orice rezultat experimental trebuie prezentat prin media aritmetic deviaia.
Intervalul (<x>-, <x>+) se numete interval de ncredere sau confiden.
ntruct n biologie i medicin sunt n general puine date de procesat, trebuie
s se nlocuiasc variana V cu variana standard SV i deviaia n cu deviaie
standard n-1 sau SD (se utilizeaz indicatorii standard n-1 i SV cnd n<30, adic
setul are mai puin de 30 de valori).
- m3(x) este numit nclinare sau oblicitate i se utilizeaz la definirea
coeficientului de asimetrie, ac (numit n englez skewness i notat SKEW)
ac
m3
SKEW ( x )
3
Funcie de valorile acestui coeficient exist trei tipuri de distribuii: cu nclinare

pozitiv, nul i negativ, aa cum reiese din cazurile prezentate mai jos, unde
Mo=modul, Me=mediana, <x>=media.
6
- m4(x) se numete exces i arat ct de aplatizat este distribuia. Se

folosete la definirea coeficientului de aplatizare sau boltire, (numit n englez
kurtosis, notat prin KURT):
m4
3 KURT ( x )
4
II. Parte experimental

A. Determinarea intervalului de confiden
S presupunem c n urma unui experiment se obin n date experimentale: x 1,
x2, ...., xn. Pentru acest set de date putem defini urmtoarele valori:

- media aritmetic: X med
x 1 ... x n
n
- eroarea absolut: i x i X med

- deviaia standard: n 1
1
12 ... 2n
n 1
Rezultatul determinrilor (R) n urma prelucrrilor statistice a datelor, se

prezint sub forma:
R X med n 1
Dup efectuarea acestor calcule, putem trage concluzia c valoarea real X a

mrimii ctuate se afl n intervalul:
I ( X med n 1 , X med n 1 )
Acest interval se numete interval de confiden sau interval de ncredere.

Problem: Pentru etalonarea unui colorimetru s-au realizat un numr de n = 5
determinri, iar valorile transmisiei au fost urmtoarele: 50.2, 49.1, 49.6, 50.3, 48.9. S
se calculeze rezultatul determinrilor (R) i intervalul de confiden (I).
B. Reprezentarea grafic a datelor
Procesele fizice, chimice, biologice, etc., procese ce depind de mai muli
parametrii, pot fi reprezentate folosind un sistem de referin format din dou drepte
concurente n plan, sau trei drepte concurente n spaiu, numite axe. Dac axele sunt
perpendiculare cte dou, atunci sistemul se numete rectangular.
Coordonatele (xa, ya) ale unui punct A ntr-un sitem rectangular avnd originea O
msoar proieciile segmentului OA pe ax.
Figura 1.1. Legtura dintre sistemul de referin rectangular i cel polar.

n practic se mai utilizeaz i sistemul de coordonate polare. n acest caz
coordonatele punctului A se definesc prin mrimile: r = OA (raz polar) i unghiul
dintre OA i axa OX. Aceast reprezentare se utilizeaz n momentul cnd funcia
reprezentat depinde de unghi.
Legtura ntre cele dou sisteme de coordonate este urmtoarea:
x r cos , y r sin
8

r
x 2 y2
, arctg y
Pentru ca reprezentarea grafic a datelor n coordonate rectangulare s fie ct

mai clar, se recomand s se in cont de urmtoatele indicaii:
-asigurarea unei reprezentri grafice ct mai intuitive const n alegerea scrii
corespunztoare att pe scara absciselor ct i pe scara ordonatelor (atunci cnd
valorile variabilelor x sau y ncep de la un numr oarecare, acest numr se recomand
s fie reprezentat ct mai aproape de originea axei respective).
-indicaiile de pe axele x i y trebuie s fie ct mai simple, adic cu ct mai
puine cifre (de regul indicaiile de pe axe nu trebuie s conin numere cu mai mult
de dou cifre; dac numerele sunt mai mari trebuie indicat un factor de multiplicare la
sfritul axei alturi de unitile de msur).
-pe fiecare ax trebuie s se indice denumirea sau simbolul mrimii
reprezentate pe axa respectiv i n mod obligatoriu unitile de msur.
S urmrim n continuare un exemplu simplu: presupunem c la anumite
intervale de timp msurm temperatura unui bolnav (datele obinute se regsesc n
tabelul de mai jos) i dorim s reprezentm grafic acest proces: temperatura = f (timp).
Tabelul 1
Timp
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
(ore)
Temp.
37,1 37,5 37,9 38 38,2 38,4 38,8 39 39,2 39,5
(C0)
innd cont de precizrile de mai sus se traseaz graficul prin puncte (dar far
a le uni), avnd grij s reprezentm numai zona de interes (figura 1.2).
Figura 1.2. Reprezentarea grafic a datelor din tabelul 1.

Privind graficul de mai sus, ne putem pune urmtoarea ntrebare: care este
valoarea de temperatur a pacientului la un moment de timp la care nu a fost fcut
msurtoarea efectiv?
n aceast situaie suntem nevoii s determinm, pornind de la datele noastre,
curba ce se potrivete cel mai bine cu punctele experi-mentale. n cazul graficului
reprezentat n figura 1.2, putem presupune o dependen de tip liniar: y a 0 a1x ,
unde coeficienii a 0 , a1 sunt necunoscute.
Cea mai simpl variant de determinare a coeficienilor, o ofer programul de
calcul tabelar Microsoft Excel.
Dup introducerea datelor n foaia de lucru i trasarea graficului se utilizeaz
opiunea Insert Trendline. Din fereastra de dialog (figura 1.3) se alege de la grupul
Type tipul de Trend dorit (n cazul nostru liniar), iar de la grupul Options se selecteaz
Display Equation on Chart. Rezultatul este prezentat n figura 1.4.
Figura 1.3. Fereastra de dialog Format Trendline a programului Microsoft Excel.

Facem meniunea c utilizatorul este lsat s aleag, innd cont de distribuia
punctelor, tipul funciei cu care urmeaz s fie fcut fittarea: liniar, logaritmic,
exponenial, putere i polinomial (pn la gradul 6).
Figura 1.4. Determinarea coeficienilor a0 i a1 cu ajutorul programului Microsoft Excel.

10

Revenind la exemplul nostru, rezultatul este:
y 36.973 0.2521 x
Aa cum se poate vedea din graficul prezentat n figura 1.4, punctele

experimentale sunt apropiate de dreapa trasat. n cazul n care exist puncte
deprtate de drept, atunci n acea regiune putem avea o alt dependena i este
necesar reluarea procedeului cu alegerea unui trend adecvat.
Problem: S se reprezinte grafic datele din tabelul de mai jos y=f(x) i apoi
utiliznd programul Microsoft Excel s se traseze curba ce se potrivete cel mai bine
cu punctele experimentale.
x
y
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
37.1 37.5 37.9 38.33 38.4 38.4 38.2 37.85 37.43 36.93
11
Microscopia de transmisie - Microscopia de reflexie

I. Noiuni teoretice
Microscopul reprezint un instrument optic alctuit dintr-un ansamblu de dioptrii
(sferici) i centrai ce are rolul de a forma imagini mult mrite ale unor obiecte de
dimensiuni mici.
Microscopul este alctuit din :
- sistemul mecanic
- sistemul electric
- sistemul optic
Figura 2.1. Schema microscopului de transmisie i de reflexie (sistemul optic).

Microscopia de transmisie: se folosete pentru preparate ce nu au grosimi
mai mari de un micron i prezint un contrast bun.
Microscopia de reflexie: se folosete pentru preparate ce nu permit o
transmisie eficient a luminii. Obiectivul poate juca rol de condensor sau poate exista
un condensor special dispus coaxial cu obiectivul.
Sistemul mecanic (principalele elemente componente):
-msua microscopului prevzut cu doi cavaleri (sau clrei) ce asigur
fixarea preparatului pe msu.
-uruburi de punere la punct a imaginii (macroviza pentru acordul brut i
microviza pentru acordul fin).
-uruburi de centrare a componentelor optice pe acelai ax.
12

-revolverul cu obiective i diafragmele (fante circulare cu diametrul variabil ce
au rolul de a modifica fluxul de lumin pe preparat).
Sistemul optic (principalele elemente componente):
-condensorul focalizeaz razele de lumin ce vin de la surs, pe preparat.
-obiectivul format dintr-un ansamblu de lentile convergente ce formeaz o
imagine real, mrit i rsturnat.
-ocularul format dintr-un ansamblu de lentile convergente ce formeaz o
imagine virtual, mrit i dreapt.
Sistemul electric (principalele elemente componente):
-sursa de tensiune.
-aparate de msur.
Mrimi caracteristice microscopului:
mrirea transversal:
y2
y1
unde: y2 = dimensiunea imaginii (perpendicular pe axa optic)

y1 = dimensiunea obiectului (perpendicular pe axul optic)
grosismentul: G
tg 2
G ob G oc
tg1
unde: 2 = unghiul sub care se vede obiectul privit prin microscop,

1 = unghiul sub care se vede obiectul atunci cnd este privit cu ochiul liber i
situat la distana optim de citire (0.25m pentru un ochi normal),
Gob = grosismentul obiectivului, Goc = grosismentul ocularului.
1
2n sin
puterea separatore: P 1,22
unde: = distana dintre dou puncte ale obiectului care pot fi separate,
n = indicele de refracie dintre preparat i obiectiv,
= lungimea de und a radiaiei utilizate,
= unghiul dintre axa optic i razele cele mai deprtate de ax care mai
ptrund n obiectiv.
13
Figura 2.2. Reprezentare schematic a elementelor prezentate mai sus.

A. Determinarea diametrului eritrocitelor
Materiale necesare:
preparat
microscop
micrometru ocular
Mod de lucru: se aeaz preparatul pe msua microscopului i se pune la
punct imaginea. Se nlocuiete ocularul cu micrometul ocular. Se localizeaz apoi o
celul (eritrocit) i se determin diametrul n diviziuni (figura 2.3).
.
Figura 2.3. Eritrocitele vzute la microscop prin micrometrul ocular.
Diametrul n microni se calculeaz cu ajutorul formulei:
m div
1
100 , unde ( G ob 40 )
G ob
Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos.

No.
1
....
div
med
n-1
S se determine intervalul de confiden i s se compare rezultatul obinut cu

intervalul fiziologic admis n literatura de specialitate pentru hematii.
B. Determinarea grosismentului obiectivului
Materiale necesare:
microscop
14

micrometru obiectiv
micrometru ocular
Mod de lucru: se aeaz micrometrul obiectiv pe msua microscopului i se
pune la punct imaginea. Se nlocuiete ocularul cu micrometul ocular. Se aliniaz cele
doua scale la stnga i se caut diviziuni ce coincid att pe scala micrometrului
obiectiv ct i pe cea a ocularului (figura 2.4).
Figura 2.4. Determinarea grosismentului obiectivului (n = numrul de diviziuni

pe micrometrul ocular, m = numrul de diviziuni pe micrometrul obiectiv).
Grosismentului obiectivului se calculeaz cu ajutorul formulei:
g ob
n
10
m
Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos.

No.
gob
gmed
1
......
S se determine intervalul de confiden.
15
n-1
Tehnici speciale de microscopie

Aceast lucrare urmrete studierea metodelor de observare a preparatelor ce
nu pot fi vizualizate cu ajutorul microscopului n transmisie sau n reflexie.
I. Noiuni teoretice
Metodele clasice de microscopie nu pot pune n eviden detaliile preparatelor
atunci cnd acestea au dimensiuni foarte mici (sub 1 m) sau nu prezint un contrast
bun (detaliile au aceeai culoare ca i restul preparatului). n aceast situaie, la
dispoziia observatorului stau metodele de colorare a preparatului sau tehnicile
speciale de microscopie.
Tehnicile de colorare (ce se vor studia n cadrul disciplinei de Histologie)
prezint n anumite situaii cteva dezavantaje: necesit o cantitate mare de timp,
manopera i substane chimice; nu pot fi observate celule sau organisme vii; imaginea
obinut difer mai mult sau mai puin de structura real.
Pentru nlturarea acestor deficiene pot fi utilizate tehnicile speciale de
microscopie. Dintre acestea amintim:
- Microscopia de imersie
- Microscopia n ultraviolet (UV)
- Microscopia de cmp ntunecat
- Microscopia de polarizare
- Microscopia de fluorescen
- Microscopia de contrast de faz
- Microscopia electronic
1. Microscopia de imersie
Cele dou tehnici de microscopie prezentate (transmisie i reflexie) nu permit o
mrire mai mare de 1000 de ori deoarece apare fenomenul de difracie a luminii pe
detaliile preparatului.
Pentru a permite observarea unor detalii mai fine una din soluii este
introducerea ntre obiect i obiectiv a unui lichid omogen, transparent i izotrop cu
indice de refracie ct mai mare, numit lichid de imersie. De obicei, se utilizeaz ulei de
cedru (n=1.3-1.5) sau compui sintetici (n=1.3-1.6). n acest mod se poate crete
16

mrirea pn la cca. 2000 de ori fr s apar fenomenul de difracie. Un alt avantaj al
folosirii imersiei este mrirea luminozitatii imaginii:
E
E0
2h
)
d h
n2 1
(1
unde:
E - iluminarea imaginii cu lichid de imersie
E0 - iluminarea imaginii n absena lichidului
h - distana obiectiv-obiect
d - diametrul obiectivului
n - indicele de refracie al lichidului de imersie
E=(1.2-4)E0
n cazul utilizrii tehnicii de imersie este necesar ca preparatul s fie acoperit cu
o lamel pentru ca lichidul de imersie s nu modifice structura acestuia. De asemenea,
se utilizeaz obiective speciale (de imersie) ce sunt inscripionate Apo caracterizate
prin distan focal mic, avnd totodat posibilitatea de a culisa, n scopul evitrii
contactului brutal dintre obiectiv i lamel.
Au fost studiate aproape toate tipurile de bacterii. Performanele microscoapelor
cu lumin vizibil merg pana la mrimi de ordinul 2000-3000 de ori (=0.25m).
2. Microscopia de ultraviolet
O alt modalitate de a crete puterea separatoare este micorarea lungimii de
und a radiaiei folosite pn n domeniul ultraviolet UV (610 -10, 3.810-7)m. n acest
mod s-au putut distinge obiecte de dimensiuni de 0,15m, atingndu-se o mrire de
6000-7000 de ori.
n cazul folosirii radiaiei UV este necesar ca toate componentele optice ale
microscopului s fie realizate din cuartz deoarece sticla comun este opac la acest
tip de radiaii.
Imaginea final va fi obinut pe un ecran de proiecie acoperit cu o substana
fluorescent. n cazul folosirii radiaiei UV este obligatorie folosirea ochelarilor i a
ecranelor de protecie deoarece retina este foarte sensibil n acest domeniu de
lungimi de und.
3. Microscopia de cmp ntunecat
Tehnica de cmp ntunecat este utilizat pentru observarea preparatelor
transparente i se bazeaz pe mprtierea luminii pe detaliile preparatului. Orice
17

neomogenitate din preparat va determina o modificare a direciei razelor de lumin.
Din punct de vedere constructiv se utilizeaz un condensor special alctuit dintr-o
oglind concav i una convex (figura 3.1) astfel nct doar razele de lumina
mprtiate pe neomogenitile preparatului s ajung n obiectiv.
Figura 3.1. Microscopia de cmp ntunecat.

Condensoarele de cmp ntunecat ofer nclinri diferite razelor de lumina
trimise spre preparat. Cnd se dorete observarea detaliilor foarte fine, se folosesc
condensoare ce produc nclinri mari fascicolului incident, fiind necesar n acelai timp
mrirea intensitii luminoase, deoarece fluxul de lumin ce ptrunde n obiectiv este
foarte mic. Ataate la microscop, condensoarele de cmp ntunecat trebuiesc centrate
foarte bine pe axul optic al microscopului, n caz contrar obinndu-se imagini cu
umbre.
4. Microscopia de polarizare
Microscopia de polarizare se utilizeaz n evidenierea i observarea
substanelor optic active ce se gsesc n preparat. Substanele optic active au
proprietatea de a roti planul luminii polarizate.
Figura 3.2. Microscopia de polarizare.

Pentru utilizarea acestei tehnici este necesar s se ataeze la microscop un
polarizor i un analizor, ambele confecionate din Spat de Islanda, ce au proprietatea
de a lsa s treac doar razele de lumin ce au un anumit unghi de polarizare.
18

Aceasta tehnic se utilizeaz att n microscopia de transmisie ct i n
microscopia de reflexie. n cazul montrii corecte a polarizorului i a analizorului doar
razele de lumina ce strbat zonele din preparat ce conin substane optic active vor
ajunge la observator.
5. Microscopia de fluorescen
Fluorescena este proprietatea anumitor substane de a emite lumin (radiaie
vizibil) atunci cnd sunt excitate cu radiaie UV. Deoarece multe substane de interes
medical prezint fluorescen (acizi nucleici, proteine) aceast tehnic este foarte
utilizat n practica de laborator i de cercetare medical.
Fiecare substan ce prezint fluorescen este caracterizat de o lungime de
und de excitaie (n UV) i de o lungime de und de emisie (n vizibil), astfel nct
tehnica poate nu doar pune n evident dar i identifica substanele respective. n
acest scop, se utilizeaz filtre optice i de UV pentru selectarea radiaiei de excitaie i
de emisie a substanei ce urmeaz a fi observat. Filtrele se dispun ca n figura 3.3.
Figura 3.3. Microscopia de fluorescen.

n cadrul acestei tehnici, pentru observarea substanelor ce nu prezint
fluorescen n mod direct, se utilizeaz markeri de fluore-scen, substane ce au
urmtoarele proprieti:
- fluorescen intrinsec
- aditivitate foarte mare
- deterioreaz minim structura (substana) de care se fixeaz
Cele mai utilizate sunt substanele din clasa flavinelor.
6. Microscopia de contrast de faz
Este o tehnic ce se utilizeaz n special pentru observarea celulelor i
organismelor vii atunci cnd tehnicile de colorare nu pot fi folosite. Metoda pune n
eviden diferena de drum optic pe care o face lumina trecnd prin diferite zone ale
19

preparatului (reamintim c drumul optic este produsul dintre drumul geometric i
indicele de refracie al mediului pe care l parcurge raza de lumin).
Deci aceast tehnic pune n eviden att diferene de grosime ntre diferitele
zone ale preparatului ct i diferene de indice de refracie ntre acestea. Sunt utilizate
obiective speciale (inscripionate Cf) care au dispuse n planul focal o placa de faz,
ce defazeaz lumina cu o semilungime de unda (n + se numete contrast de faz
pozitiv sau n contrast de faz negativ), i un inel parial absorbant.
De asemenea, condensorul prezint o fanta inelar ce este specific fiecrui
obiectiv folosit. Pentru punerea la punct a micros-copului este necesar un ocular
special cu ajutorul cruia se pot observa simultan att inelul parial absorbant ct i
fanta inelar n scopul suprapunerii acestor dou imagini.
Materiale necesare:
1. Microscop de cercetare MC9
2. Microscop Biorom
3. Condensoare de cmp ntunecat
4. Polarizor, analizor
5. Obiective de imersie
6. Obiective de contrast de faz
7. Lame cu diferite preparate
Modul de lucru:
A. Observarea nucleilor celulelor
-se aeaz lama cu preparat pe masua microscopului i se fixeaz cu ajutorul
clreilor;
-se aduce pe axul optic obiectivul x40 (sau x25) i se localizeaz zona cu
preparat;
-se coboar msua microscopului fr a deplasa preparatul;
-se aduce pe axul optic obiectivul Apo xl00;
-se aplic o pictur de lichid de imersie pe preparat (n dreptul obiectivului);
-cu foarte mare atenie se coboar obiectivul pna ce se imer-seaz n lichid;
-privind prin ocular se pune la punct imaginea.
B. Determinarea depozitelor glucidice
-se monteaz la microscopul MC9 polarizorul i analizorul;
20

-se fixeaz preparatul pe msu;
-se pune la punct imaginea;
-se deplaseaz n plan orizontal preparatul pe msu pn cnd se gsete o
zona liber;
-se rotete ncet polarizorul pn n momentul n care imaginea este maxim de
ntunecat;
-se aduce din nou preparatul n cmpul vizual; zonele luminoase reprezint
zonele n care se gsesc substane optic active.
C. Determinarea ncrcturii biologice a apei
-se monteaz la microscopul Biorom condensorul i obiectivele de contrast de
faz;
-se nlocuiete un ocular cu ocularul de punere la punct;
-din uruburile de punere la punct se centreaz sistemul astfel nct inelul
parial absorbant din obiectiv s corespund cu fanta inelar a condensorului;
-se monteaz din nou ocularul microscopului;
-pe o lam curat se pune o pictur de ap sttut (24h);
-se fixeaz lama la microscop i se caut observarea germenilor existeni n
ap att prin tehnica de microscopie clasic ct i prin cea de contrast de faz.
21
Cromatografia si electroforeza
I. Noiuni teoretice
1. Cromatografia
Cromatografia reprezint o tehnic de separare a componentelor unui amestec,
ntre dou faze: una mobil i alta staionar, ca urmare a deplasrii fazei mobile de-a
lungul celei staionare i a antrenrii compo-nentelor amestecului n micare, cu viteze
diferite, ocupnd astfel poziii diferite de-a lungul fazei staionare. n acest mod
componentele sunt separate i apoi identificate.
n funcie de natura fazelor se disting urmtoarele tipuri de cromatografie:
Faza mobila
lichid
lichid
gaz
gaz
Faza
staionara
lichid
solid
solid
lichid
Denumire
lichid - lichid (LL)
lichid - solid (LS)
gaz - solid (GS)
gaz - lichid (GL)
Metodele de separare cromatografice se mpart n:

- metode bazate pe afinitatea diferit a componenilor (repartiie de faz,
adsorbie, absorbie, schimb ionic, afinitate);
- metode bazate pe mrimea diferit a componenilor (excluziune sferic).
Din punct de vedere practic cele mai utilizate metode de cromatografie sunt:
cromatografia pe coloan, cromatografia pe hrtie, cromatografia n strat subire, gaz
cromatografia.
Cromatografia pe coloan Coloanele cromatografice sunt confecionate din
sticl. Pentru o bun rezoluie se folosesc coloane lungi dar n condiiile n care se
dorete separarea unei cantiti mari de substane se folosesc coloane cu un diametru
mai mare.
n interiorul coloanei se introduce faza staionar ce trebuie, ntr-o prim etap,
echilibrat cu solventul de lucru.
Amestecul ce urmeaz a fi separat se pipeteaz n partea superioara a tubului.
Se conecteaz rezervorul cu solvent (faza mobil) la coloan i se ateapt
pn ce are loc separarea.
Datorit deplasrii fazei mobile de-a lungul celei staionare are loc antrenarea
componentelor din amestec ntr-o micare descendent, n lungul coloanei astfel nct
n timp vor ocupa poziii diferite. Fraciile sunt colectate n tuburi i apoi analizate.
22
Figura 4.1. Cromatografie pe coloan.

Cromatografia pe hrtie - reprezint una din cele mai simple metode de analiz.
n aceast metod faza fix este reprezentat de o suprafa de hrtie special sau
hrtie de filtru, iar faza mobil (eluentul) de un lichid ce se deplaseaz de-a lungul
fazei fixe datorit forelor de adeziune i forelor gravitaionale. Se mparte n:
cromatografie pe hrtie vertical (ascendent sau descendent) i orizontal (Pfeiffer).
n figura 4.2 se poate urmri diferena dintre aceste metode.
Figura 4.2. Cromatografie pe hrtie vertical ascendent i descendent

Identificarea compuilor izolai n timpul cromatografiei se face fie cu ajutorul
spoturilor martor, fie calculnd timpul de reinere al fiecrui component separat (R j),
definit ca raportul dintre distana fa de linia de start pe care a migrat componentul
respectiv (notat cu Xj) i distana pe care a migrat eluentul (notat cu Y):
Rj
Xj
Y
Timpul de reinere depinde de: natura fazei fixe, natura fazei mobile, natura
substanei, temperatur; se gsete tabelat pentru diferite substraturi, elueni i
substane, de regul pentru temperaturi de 20 0C.
23

2. Electroforeza
Reprezint metoda de separare bazat pe migrarea sub influena cmpului
electric a substanelor ncrcate cu sarcin electric.
Eletroforeza poate fi folosit att n scop analitic (separarea componenilor i
dozarea lor), preparativ (obinerea unor componeni n stare pur) dar i ca metod de
studiu a proprietilor superficiale ale unor celule sau organite celulare.
O particul ncrcata electric, cnd este dizolvat sau suspendat ntr-un mediu
lichid, sub influena unui cmp electric uniform, atinge o vitez constant de migrare.
Speciile ncrcate pozitiv se vor ndrepta ctre catod, iar speciile ncrcate negativ
ctre anod. Viteza de migrare a ambelor specii va fi determinat de forele care
acioneaz asupra lor. Aceste forte sunt:
- fora de atracie electroforetic: F1 Q E
- fora de frecare Stokes:
F2 6 r v
- fora de frnare electroforetic: F3 Q r E

- fora F4 datorata efectului de relaxare
Imediat dup aplicarea cmpului electric, suma vectorial a acestor patru forte
este egal cu zero i viteza electroforetic devine constant (figura 4.3). Neglijnd
efectul de relaxare i innd cont de direciile celor trei forte se obine viteza
electroforetic:
v
E
6
unde: - = permitivitatea absolut a mediului

- = potenialul electrocinetic
- E = intensitatea cmpului electric
- = coeficientul de vscozitate
Mobilitatea electroforetic se definete ca raportul dintre vitez i intensitatea
cmpului electric:
v
E
Datorit ncrcrii electrice nete de la suprafaa particulelor biologice, n acest

regiune se organizeaz, se structureaz, un strat dublu electric alctuit dintr-o zon
compact de grosime (a) i una difuz, n care pentru simplitate, suprafaa de
demarcare a particulei fa de mediu este considerat plan (figura 4.3).
Cnd particula este pus n micare de ctre cmpul electric aplicat, aceasta
antreneaz o dat cu ea un strat de lichid mai gros dect cel compact, notat cu (b) .
24

Planul care se afl la distana ba de particul se numete plan hidrodinamic de
alunecare, iar potenialul n acest plan se numete potenial electrocinetic (). Valoarea
potenialului electro-cinetic se poate determina indirect pe baza msurrii mobilittii
electroforetice a particulei n cmp electric.
Figura 4.3. Forele ce acioneaz asupra unei particule ncrcate cu sarcin electric
suspendat ntr-un mediu lichid. Distribuia ionilor n stratul dublu electric de la
suprafaa unei particule scufundate ntr-un electrolit.
Metoda microscopic de electroforez - acest metod este singura tehnic
disponibil pentru determinarea vitezei electroforetice a particulelor mari, cum ar fi
celulele sanguine, microorganisme, particule coloidale, etc. Se bazeaz pe observarea
direct, la microscop a migrrii particulelor suspendate ntr-o soluie tampon adecvat
ca urmare a aplicrii unui cmp electric creat de un curent continuu.
Pentru aceast tehnic este necesar o celul electroforetic (figura 4.4),
prevzut cu doi electrozi, un sistem de umplere i golire, ce se poate introduce n
cmpul unui microscop. Celula poate fi plan sau cilindric (capilar).
Figura 4.4. Electroforeza microscopic: cuva electroforetic folosit i imaginea

observat la microscop prevzut cu micrometru ocular.
Electroforeza la joas tensiune Este o metod ce permite separarea
proteinelor plasmatice. Dispozitivul experimental folosit este prezentat n figura 4.5.
Ca suport al electrolitului (al soluiei tampon) se folosete att hrtie special
pentru electroforez (de tip Whatman) ct i membrane de celuloz. Dintre avantajele
utilizrii membranelor de celuloz amintim, n primul rnd: rezoluia mult mai bun i
un timp de migrare mai mic.
25
Figura 4.5. Electroforeza la joas tensiune dispozitiv experimental.

Dup separarea proteinelor urmeaz un procedeu de fixare i colorare. n
primul rnd, mediul suport este fixat prin introducere n etanol, metanol sau acid, ori
prin nclzire fcnd astfel proteinele insolubile.
Benzile sunt colorate cu ajutorul unor colorani specifici proteinelor (albastru de
brom fenol), se spal n mai multe bi cu acid acetic 2% i sunt trecute prin vapori de
amoniac pentru regenerarea colorantului (figura 4.6).
Figura 4.6. Electroforeza mediul suport dup procedeele de fixare i colorare.

Dup aceste procedee benzile sunt scanate cu ajutorul unor densitometre prin
reflexie, transmisie sau combinate, ce permit trasarea spectrelor caracteristice
probelor oferind totodat cantitatea n g/100ml.
Electroforeza pe un mediu suport acetat de celuloz a serului uman este
prezentat n figura 4.7.
Figura 4.7. Electroforeza pe un mediu suport acetat de celuloz a serului uman.

Este cunoscut faptul c scderea albuminelor survine de regul n toate
disproteinemiile, fiind ns mai accentuat n cazul unui deficit n aportul de proteine,
26

n deficitul de sintez (ciroz hepatic), sau n pierderi de proteine (sindrom nefrotic,
arsuri).
Creterea 1, 2 globulinelor se nsoete de regul de o cretere a
fibrinogenului i a glicoproteinelor i de o accelerare a VSH-ului. O cretere marcant
a 2 globulinelor se ntlnete n sindromul nefrotic.
Modificrile globulinelor au o importan mai redus, dar creterea
globulinelor indic prezena unor inflamaii cronice, sau sugereaz o proliferare
reactiv sau tumoral a imunocitelor productoare de imunoglobuline. Scderea
globulinelor survine n sindromul nefrotic, malnutriie.
Toate
aceste
modificri
au
ca
rezultat
forme
diferite
ale
spectrlor
electroforegramelor analizate (figura 4.8).
Figura 4.8. Tipuri de disproteinemie: (A) Inflamaie acut, (B) Inflamaie cronic, (C)
Sindrom nefrotic, (D) Enteropatie exudativ, (E) Ciroz hepatic, (F) Mielom multiplu,
(G) Hipogamaglobulinemie.
Focalizarea izoelectrica (electrofocusing) - reprezint o metod de separare a
particulelor cu puncte izoelectrice diferite ntr-un gradient de pH sub aciunea unui
cmp electric omogen.
Punctul izoelectric al unei particule (sau molecule) corespunde valorii pH-ului la
care sarcina electrica net este nul.
Dispozitivele de electrofocusing folosesc o coloana n care se realizeaz un
gradient natural de pH prin utilizarea unor amfolii transportori cu urmtoarele
proprieti: bun capacitate de tamponare i bun conductivitate la punctul izoelectric,
mas molecular mic, solubilitate bun la punctul izoelectric, absorbie mic a luminii
peste 260nm, nu reacioneaz chimic cu componenii amestecului ce urmeaz a fi
descompus.
Cei mai utilizai sunt acizii poliaminopolicarboxilici avnd masa molecular ntre
300-1000D i puncte izoelectrice situate n domeniul de pH=3-10.
27

A. Separarea clorofilelor prin cromatografie pe hrtie
Materiale
necesare:
hrtie
de
cromatografie,
vas
de
croma-tografie,
micropipete, benzen, eter etilic, ciclohexan, alcooletilic 98%, ap distilat, stativ, mojar.
Mod de lucru: Se mojareaz cteva frunze ntr-o soluie de 80% alcool etilic i
20% ap dup care se las ntr-un loc ntunecat 30 min. Se traseaz foarte fin cu
creionul linia de start pe hrtie i cu ajutorul unei micropipete se pun spoturile de
substana (o cantitate de 0.1-1l avnd grij ca aceasta s nu se ntind).
Se pregtete ntr-un pahar Berzelius eluentul format din 50% eter etilic, 40%
ciclohexan, 8% benzen i 2% ap, se agit bine i apoi se toarn n vasul de
cromatografie astfel nct s acopere fundul vasului cu cel mult 2-3mm.
Se introduce hrtia de cromatografie fixat n stativ 1mm n lichid. Se acoper
vasul i se ateapt 45min dup care se trece la identificarea componentelor i la
calculul timpilor de reinere pentru fiecare component.
B. Determinarea vitezei electroforetice a eritrocitelor
Materiale necesare: cuv de electroforez, microscop Biorom, suspensie de
eritrocite, surs de tensiune, soluie izotonic, micrometru ocular, cronometru.
Mod de lucru: Se conecteaz cuva de electroforeza la microscop i se umple cu
soluie izotonic dup care se ateapt 1-5min pn eritrocitele difuzeaz n toat
cuva. Se pune la punct imaginea astfel nct s se observe cu micrometrul ocular o
hematie. Se conecteaz sursa de tensiune i se msoar timpul (t) n care o celul se
deplaseaz ntre dou repere ale micrometrului ocular (d). Datele se trec n tabelul de
mai jos.
No.
t(s)
v
(m/s)
vmed(m/s)
n-1
1
....
Figura 4.9. Imaginea observat prin micrometrul ocular

(dup aplicarea cmpului electric hematiile se afl n miscare cu vitez v)
28

Deoarece distana (d) vzut pe micrometrul ocular i parcurs de celulele n
micare este n diviziuni, trebuie ca aceasta s fie transformat n microni (m) pentru
a putea fi calculat valoarea vitezei de deplasare.
D d
1
100 m
g ob
D m
t
s
S se calculeze intervalul de confiden i s se compare valorile obinute cu

cele din literatur.
v ( v med n 1 , v med n 1 )
m
s
29
Sedimentarea si centrifugarea
I. Noiuni teoretice
1. Sedimentarea
Sedimentarea - Este o tehnic de separare ce se bazeaz pe diferena de
densitate dintre componentele amestecului. n practica medical se utilizeaz nu numai
ca tehnic de separare dar i ca o metoda de analiz (VSH - viteza de sedimentare a
sngelui).
Pentru o nelegere mai bun a procesului se poate modela comportarea unei
hematii n cmp gravitaional.
S consideram o suspensie de particule sferice de raz R i densitate aflate
ntr-un lichid de densitate 0 (0). Asupra particulelor acioneaz urmtoarele forte:
4
3
- fora de greutate: G m g R 3 g
4
3
- fora Arhimedic: FA m 0 g R 3 0 g
- fora de frecare cu moleculele lichidului - fora de vscozitate; pentru particule
sferice i viteze mici de deplasare, fora de vscozitate este dat de legea lui Stokes:
FV 6 R v
unde:
v este viteza, coeficientul de vscozitate iar R raza particulei.

La echilibru dinamic rezultanta acestor fore este nul i particula coboar cu
vitez constant (figura 5.1).
Figura 5.1. Forele ce acioneaz asupra unei particule

de raz R i densitate aflat ntr-un lichid de densitate 0 ( 0).
4
4
2
R 3 g R 3 0 g 6 R v v R 2 g 0 1 (1)
3
3
9
30

Considernd v
L
unde L este spaiul parcurs n micare rectilinie i uniform
t
iar t timpul de sedimentare, obinem:

t
9
1
L R 2 g 1 0
2
Dup cum se constat din relaia (1) viteza de sedimentare depinde att de
mrimea particulelor (R) ct i de interaciunea acestora cu lichidul n care se afl, prin
coeficientul de vscozitate .
Sedimentarea poate fi deci folosit nu numai ca tehnic de separare a unor
particule de interes dar i ca metod de cercetare n vederea obinerii unor informaii
legate de aceste particule.
De mare importan clinic este determinarea vitezei de sedimentare a
eritrocitelor. n tabelul urmtor sunt prezentate valorile normale obinute prin metoda
Westergreen.
Subiect
barbat
femeie
nou - nascut
sugar
copil mic
1 ora
2 - 8 mm
4 - 10 mm
1 - 2 mm
5 - 10 mm
7 - 12 mm
2 ore
5 - 18 mm
6 - 20 mm
-
2. Centrifugarea
Centrifugarea - reprezint o tehnic de separare a componentelor unui amestec
cu densiti diferite sub influena unui cmp centrifugal.
Deoarece viteza de sedimentare pentru particule de mrimea hematiilor, sau
mai mici, este deosebit de sczut, este necesar o metod care s creasc fora
activ (greutatea n cazul sedimentarii). Astfel, n cazul centrifugrii, rolul forei de
greutate l joac fora centrifug.
Figura 5.2. Forele ce acioneaz asupra unei particule

de raza R i densitate aflat ntr-un lichid de densitate 0 ( 0).
Fcf m a c
16 3 3 2
R x
3
31

Neglijnd fora de greutate i considernd c migrarea duce la creterea razei
traiectoriei circulare, avem urmtoarele relaii:
Fa Fv Fcf
Fv 6 R
Fa
dt
dx
dt
16 3 3 2
R 0 x
3
9
1 dx
2 R 2 2 0
8
x
Prin integrare obinem timpul necesar separrii:

9
x
1
t c ( R ) 2 0 ln f .
8
xi
Ultracentrifugarea - Pentru particule foarte mici cum ar fi proteinele plasmatice

sedimentarea prin centrifugarea obinuit este practic nerealizabil din cauza
fenomenelor de difuzie. Sunt necesare n acest caz turaii deosebit de mari
15000rot/min.
Ultracentrifugele ce realizeaz aceste turaii trebuie s fie bine stabilizate
mecanic (pentru a evita fenomenul de bti care ar duce la ruperea axului) i bine
termostatate (pentru a mpiedica degradarea termic).
Cnd sistemul este monodispers apare o limit net de separaie ntre solvent
i particulele dispuse la fundul eprubetei.
Cnd sistemul este polidispers apar mai multe cmpuri i este necesar o
ultracentrifugare fracionat. Se centrifugheaz pe rnd la fiecare turaie de interes i
se recolteaz sau sedimentul sau super-natantul.

A. Determinarea vitezei de sedimentare a eritrocitelor
(metoda Westergreen)
Materiale necesare:
-snge venos, 1.6 ml, recoltat pe anticoagulantul citrat trisodic 3.8%, n cantitate
de 0.4 ml;
-materiale pentru puncie venoas;
-eprubete de hemoliz;
-hemosedimentrul Westergren, alctuit dintr-un stativ metalic prevzut cu pipete
Westergren, de aproximativ 300mm lungime i 2.53mm diametru.
Mod de lucru:
32

-se aspir cu seringa, n condiii sterile, o cantitate de 0.4ml citrat trisodic 3.8%;
-se puncioneaz vena pacientului i se aspir snge pn la diviziunea de 2ml;
-dup omogenizare sngele se pune ntr-o eprubet de hemoliz;
-se aspir sngele n pipetele Westergren pn la diviziunea zero;
-se fixeaz pipetele n stativ (ntr-o poziie perfect vertical), apoi se noteaz
timpul (momentul se start) i numele pacientului.
Citirea rezultatului se face la o or i/sau la dou ore, valoarea fiind dat de
nlimea coloanei de plasm aprut n partea superioar a tubului exprimat n mm,
pe unitate de timp.
33

B. Centrifugarea sngelui
Materiale necesare:
- sering i ac pentru puncie venoas
- eprubete de hemoliz
- stativ
- pipete gradate
- citrat trisodic 3,8%
- balan de echilibrare
- ser fiziologic
- eprubete de centrifugare
Mod de lucru:
-se recolteaz o cantitate de 5-6 ml snge dup metoda descris anterior;
-se introduce n eprubeta de centrifugare 1ml citrat trisodic 3,8%, 4ml ser
fiziologic i 5ml snge dup care se aseaz eprubeta pe balana de echilibrare;
-pe platanul opus se aseaz o eprubet identic n care se introduce ap
distilat pn la echilibrarea balanei;
-se aeaz cele dou eprubete n centrifug n poziii diametral opuse una fa
de alta, se nchide capacul centrifugii i se regleaz la 2000rotatii/min, dup care se
centrifugheaz 2minute;
-se scoate eprubeta i se masoar deplasarea frontului eritrocitar, apoi se
continu centrifugarea.
Probleme:
1._Cunoscnd valorile fiziologice ale coeficientului de vscozitate la brbat
B=0,047Kg/ms i la femeie F=0,043Kg/ms, densitatea eritrocitului =1095Kg/m3 i a
plasmei o=1027Kg/m3 calculai din formula vitezei de sedimentare ct ar trebui s fie
raza eritrocitului presupus sferic.
2._Determinai viteza de sedimentare a unor particule de cret suspendate ntr-un
lichid i raza acestor particule presupuse sferice cunoscnd apa=1 g/cm3, apa=1.05
10-3Kg/ms, creta=1,545 g/cm3.
3._Cunoscnd raza particulei de cret determinat anterior, evaluai folosind
modelul matematic al centrifugrii, timpul de centrifugare pentru aceste particule
suspendate ntr-un mediu vscos (glicerin). Se cunosc:
34

- =1000rot/min, (500rot/min)
- glicerina=13,93 10-3Kg/ms
- glicerina=1,26 g/cm3
- ln(x2/x1)=0,143
Verificai experimental rezultatul obinut.
35
Spectrofotometria de absorbie n ultraviolet i vizibil

I. Noiuni teoretice
n aceast lucrare ncercm s prezentm aplicaiile spectro-fotometriei n
ultraviolet i vizibil pentru substane n stare lichid, lichide pure, amestecuri i n
special soluii. Spectrele urmrite sunt spectre moleculere electronice la care structura
de rotaie nu mai apare iar cea de vibraie se manifest numai n anumite cazuri printro structurare a benzilor de absorbie care, n general, sunt largi i nerezolvate n linii.
Benzile de absorbie din aceste domenii spectrale corespund tranziiilor de pe
nivelul electronic fndamental pe cele mai joase nivele electronice excitate, pentru care
tranziiile sunt permise conform legilor de selecie. n aceste condiii tranziiile
electronice implic cele mai mari variaii de energie, iar frecvenele cuantelor absorbite
se situeaz att n domeniul vizibil ct i de ultraviolet al spectrului.
La aceste tranziii electronice particip electronii unor anumite grupri
structurale ale moleculelor numite cromofori. n cazul substan-elor organice
asemenea grupri structurale sunt reprezentate de legtura simpl, dubl i tripl,
gruparea bazic, etc.
Interacia cromoforilor ntre ei sau cu alte grupri atomice provoac importante
modificari ale spectru1ui de absorbie atribuit cromoforului singur. n aceste condiii pot
apare urmtoarele efecte:
-
efectul batocromic - de deplasare a maximului de absorbie spre lungimi de

und mai mari (deplasarea spre rosu),
efectul hipsocromic - de deplasare a maximului de absorbie spre lungimi de

und mai mici (deplasarea spre albastru),
efectul hipercromic - de cretere a intensitii de absorbie,
efectul hipocromic - de descretere a intensitii de absorbie.

Proprietile de absorbie ale mediului pot fi caracterizate prin mrimile:
absorban, trasmitan, extincie, coeficient de extincie.

Legea Bouguer-Lambert exprim relaia cantitativ dintre inten-sitatea I, a
luminii emergente, intensitatea I0, a luminii incidente, grosimea x a substanei
absorbante i natura substanei.
36
Figura 6.1. Reprezentarea grafic a legii Bouguer-Lambert

(X1/2 grosimea de njumtire).
Expresia legii Bouguer-Lambert se poate scrie:
I( x ) I 0 e kx
Prin definiie transmitana (T), sau coeficientul de transmisie al unei substane

este dat de formula:
T (%)
I
100
I0
iar extincia natural En, este dat de relaia:

E n ln
1
I
ln 0 k n x
T
I
unde kn reprezint coeficientul natural de extincie. Se poate arta uor c 0En.

Avantajul folosirii extinciei este acela al proprietii de aditivitate pe care o are
aceast mrime: un amestec de mai multe soluii diluate avnd extinciile E 1,...,En se
comport ca o singur soluie cu extincia global E, dat de relaia:
E E1 ... E n
Prin absorban (A), sau coeficient de absorbie se nelege:

A(%)
I0 I
I0
100
n practic, deoarece logaritmii naturali sunt mai puin comozi se folosete o

relaie asemntoare n care intervin, ns logaritmii zecimali:
I I 0 10 kx I 0 e E
unde k reprezint coeficientul zecimal de extincie iar E extincia zecimal sau

densitatea optic.
Lege Beer este valabil numai pentru soluii diluate i stabilete o legtur
matematic ntre extincia E, concentraia C a substanei i coeficientul molar de
extincie care depinde de natura substanei i de lungimea de und.
E (, x ) ( ) C x
unde C se msoar n mol/dm3.

n aceste condiii legea Bouguer-Lambert-Beer se poate scrie:
37

I(, x ) I 0 10 ( ) C x
Curbele care dau dependen E=f(), T=f(), A=f(), =f() sau f(), sunt
cunoscute sub numele de spectre de absorbie.Un exemplu de astfel de spectru este
reprezentat n figura 6.2.
Figura 6.2. Spectrul de absorbie de tipul A=f().

Factorii care pot influena spectrul de absorbie al unei substane:
a) natura solventului nivelele energetice electronice ale molecu-lelor n stare
condensat pot fi modificate prin prezena moleculelor solventului datorit
interaciilor ce apar.
b) concentraia soluiei i temperatura cu creterea concentraiei apar asocieri
moleculare care dau un spectru distinct de cel al monomerului substanei de
studiat, temperatura favorizeaz deplasarea echilibrului dintre concentraiile de
monomer i dimer iar temperaturile ridicate pot produce chiar transformri
ireversibile ale spectrelor de absorbie.
c) valoarea pH-ului soluiei la valori diferite de pH, punctul izosbestic aprut n
spectru indic prezena n amestec a unor specii moleculaare ce se transform
una ntr-alta ntr-o proporie depinznd de pH.
d) iradierea substanelor iradierea optic a probei poate conduce la
polimerizarea unei specii moleculare i de aici modificri n spectrul de
absorbie.
e) formarea de compleci cationii prezeni n solvent pot duce la formarea
complecilor i deci influenarea spectrului probei.
f) fluorescena datorit fenomenului de fluorescen, intensitatea radiaiei
reemise va duce la o valoare aparent mai mic a absorbiei probei dect cea
real.
g) fenomene de oxidare
38

h) probele nu sunt dizolvate total sau precipit ulterior
i) fenomene de hidroliz
Descrierea instalaiei spectrofotometrice
Un spectrofotometru conine o parte optic i una electric. Componentele de
baz ale prii optice sunt: sursa, monocromatorul, compartimentul probelor i
detectorul mpreun cu sistemul de nregistrare (figura 6.3).
Figura 6.3. Principalele componente ale unui spectrofotometru.

Spectrofotometrele se pot clasifica att dup sistemul dispersiv ct i dup
sistemul constructiv. Astfel, n funcie de primul criteriu exist spectrofotometre cu
prism, spectrofotometre cu reea, spectro-fotometre mixte, iar n funcie de al doilea
criteriu spectrofotometre cu monofascicul i cu dublu fascicul.
Spectrofotometrul Camspec M330 are ca element dispersiv o reea de difracie
cu 1200 linii/mm i este de tipul monofascicul. M330 poate trasa spectre UV-VIS n
intervalul de lungimi de und cuprins ntre 190-900nm, cu o acuratee de 1nm. n
absorbie poate balea pe intervalul -0.3 la 2.5Abs, iar n transmisie de la 0 la 200%.
M330 poate fi accesat fie direct utiliznd tastatura acestuia, fie prin intermediul unui
calculator.
Trasarea spectrelor de absorbie ale diferitelor tipuri de Hb
(A) Pentru obinerea hemoglobinei:
se centrifugheaz sngele uman la 5000 rot/min
se ndeprteaz supernatantul
se suspend celulele roii n tampon izoton 0.9% NaCl.
se centrifugheaz 10 min la 5000 rot/min (supernatantul trebuie s fie ct mai

limpede)
se lizeaz globulele roii astfel: se adaug la un volum de eritrocite 1.5 volume

de ap i 0.5 volume cloroform
se ndeprteaz cloroformul
se folosete soluia de hemoglobin pentru citire la spectro-fotometru.

39

(B) Pentru obinerea methemoglobinei (de culoare brun):
se trateaz o parte din soluia de hemoglobin cu soluie de fericianur de

potasiu 3%
(C) Pentru obinerea hemoglobinei reduse:
se adaug la soluia iniial de hemoglobin ditionit de sodiu n exces pn la

observarea culorii violete.
Mod de lucru: O posibilitate simpl i rapid de trasare a unui spectru este
utilizarea programului n varianta de lucru Immediate mod. Acest mod permite

scanarea probei ntre dou lungimi de und, mrirea i micorarea
unor zone
prestabilite, deplasare cursorului n zonele dorite obinndu-se valorile de absorbie i

de lungime de und, afiarea datelor sub form de tabel, derivatele 1-4 ale spectrului,
salvare i printare a graficului.
Primul pas l constituie selectarea tipului de grafic dorit absorbie sau
transmisie; acest lucru fcndu-se foarte uor prin selectarea cu ajutorul mouse-lui a
butoanelor Abs sau %T.
Se selecteaz apoi Scan , pe ecran aprnd o fereastr Enter scan
wavelengths pentru selectarea intervalului de lungimi de und. Dup introducerea
datelor se apas OK. Se ateapt cteva secunde pn spectofotometrul i atinge
lungimea de und de start. Fr prob n compartimentul cuvelor sau de preferat cu o
cuv coninnd numai solventul n care a fost preparat soluia, se traseaz zeroul prin
apsarea butonului Set Zero.
Dup obinerea zeroului i primirea mesajului de confirmare se trece la trasarea
spectrului propriu-zis prin apsarea butonului Start. Folosind butonul ID se poate face
o fi de identitate a probei iar apsnd butonul Disk graficul poate fi salvat pe disk n
zona dorit. Butonul Data permite listarea valorilor obinute, Zoom(+-) mrire i
micorare a unor zone prestabilite iar Deriv trasarea derivatelor spectrului.
Se traseaz spectrele de absorbie ale diferitelor tipuri de hemo-globin (A), (B),
(C) preparate i se compar cu datele din literatur.
40
Figura 6.4. Spectrele de absorbie ale diferitelor tipuri de hemoglobin.
41
Potenialul de aciune
I. Noiuni teoretice
n starea normal (numit stare de repaus) membrana celular este polarizat,
avnd faa intern mai negativ dect cea extern. n mod uzual se ia faa intern
drept referin.
Potenialul de membrana, Vm numit potenial de repaus, ia valori de la minus
civa milivoli, pentru majoritatea celulelor, pana la 60mV pentru axolema, 90mV
pentru sarcolema si chiar 200mV pentru membranele celulelor din organul electric al
petelui torpila, Torpedo californicum.
Figura 7.1 prezint ceea ce se ntmpl cnd axolema este excitat de un
stimul electric depolarizant. Dac depolarizarea depeste o valoare critic (sau
liminar), atunci membrana se depolarizeaz n continuare din proprie iniiativa (pana
la 0mV) i chiar se repolarizeaz dar n sens contrar pana pe la +50mV. Apoi
potenialul iniial este restaurat.
Aceasta oscilaie de tensiune de circa 120mV n amplitudine i 1ms durat se
numete potenial de aciune. Depolarizarea extern este de fapt doar un
declanator (trigger) al fenomenului ntruct energia rspunsului specific al membranei
provine de la metabolismul celular i nu de la stimul.
Figura 7.1. Simularea potenialului aciune.

Dup potenialul de aciune apar o serie de oscilaii mici i lente, numite
postpoteniale (pozitive i negative, n funcie de sensul depirii potenialului de
repaus). n timpul potenialului de aciune, membrana este complet inexcitabil
(perioada refractara absoluta). Pe durata derulrii postpotenialelor, membrana este
mai puin excitabil dect n mod normal (perioada refractara relativa). Membrana are
42

nevoie de aproximativ zece durate ale potenialului de aciune, fr nici un stimul
pentru a-i reface complet potenialul de repaus i excitabilitatea anterioar.
Potenialul de aciune se propag far decrement (atenuare) n lungul axonului
sub forma aa-numitului impuls nervos. Impulsul nervos satisface legea totul-saunimic, ceea ce nseamn c nici un fel de excitaie nu se transmite dac stimulul are o
valoare inferioar pragului de excitabilitate, i nici o modificare ca form, amplitudine i
durat nu apare dac stimulul este superior pragului. Pragul depinde de ampli-tudinea,
durata, frecvena i forma stimulului. Influena frecvenei devine important peste
1000Hz, cnd excitabilitatea descrete rapid dac frecvena de stimulare crete. La
frecvene joase (sub 100Hz) nu se observ nici o modificare a potenialului de aciune.
Un stimul cu o rampa mai lung, d posibilitatea membranei s se acomodeze
la excitaie i s i refac (cel puin parial) starea perturbat de depolarizare, deci s
i scad excitabilitatea. Scurtarea timpului de stabilire a pulsului depolarizant las
nemodificat capacitatea de reacie a membranei. n cele ce urmeaz se consider
numai pulsuri rectangulare.
Pentru astfel de stimuli, caracteristicile de prag, adic intensitatea liminar I
(indiferent de natura pulsului: tensiune sau curent electric, oc mecanic, chimic, etc.) i
durata liminal t satisfac legea intensitate-durat:
I( t ) A
B
t
reprezentat grafic n figura 7.2. Legea este de tip hiperbolic i are dou asimptote:
una vertical i una orizontal.
Figura 7.2. Legea intensitate-durata pentru un puls rectangular

Intensitatea minim a unui stimul rectangular ce excit membrana (avnd o
durat infinit) se numete reobaz (notat cu R).
lim I( t ) lim (A
t
B
)AR
t
43

Cea mai mic durat a unui puls rectangular, cu amplitudinea egal cu dublul
reobazei, care nc excit membrana, a fost denumit cronaxie (). Cronaxia este cea
mai utilizat mrime n caracterizarea excitabilitii unui esut. Cu ct este mai mic
cronaxia, cu att mai mare este excitabilitatea membranei. O membran mai excitabil
are nevoie de mai puin energie de stimulare.
Cronaxia poate fi determinat nlocuind valoarea intensitii I=2A (A=R) n legea
intensitate-durat:
2R R
B
B R
Se poate rescrie acum legea prin nlocuirea constantelor A si B:
I( t ) R 1
t
Reobaza i cronaxia depind de aciunea unor chimicale: hormoni, toxine,

anestezice etc., ce pot fi utilizate n scop medical, att n diagnostic ct i n terapie.
Uneori este necesar creterea excitabilitii, alteori, din contr, este nevoie s fie
sczut. Din aceast cauz studiile electrofiziologice ale efectelor unor liganzi asupra
bioelectrogenezei membranei sunt o practic curent de peste un secol.
Au fost fcute numeroase ncercri de explicare a potenialului de aciune. Cea
mai productiv pentru o lung perioad de timp (fapt pentru care e considerat
clasic) a fost Teoria ionic, propus ntre 1949-1952 de doi cercettori britanici,
laureai ai Premiului Nobel pentru medicin n 1963, Hodgkin i Huxley.
Considernd c:
-
exist blocani diferii pentru cele mai importante fluxuri ionice active (TTX
pentru Na+ i TEA pentru K+),
membrana celular este un dielectric (izolator) ce separ dou medii conductive

(citoplasma i lichidul interstiial sunt electrolii),
axonul perfuzat cu soluie salin izoton, avnd aceleai concentraii de sodiu,

potasiu i clor ca i axoplasma, are o comportare electric similar celui
integral, deci impulsul nervos este un fenomen de membran,
Hodgkin i Huxley au propus modelul electric al membranei prezentat n figura 7.3 i

teoria aferenta lui.
44
Figura 7.3. Circuitul echivalent al unei poriuni de membran axonal

Citoplasma i lichidul interstiial, medii conductoare, sunt reprezentate prin
rezistori electrici conectai n serie. Membrana este conceput ca fiind compus din
celule electrice independente.
Fiecare celul conine un condensator i trei ramuri pentru transportul selectiv
al ionilor: una pentru sodiu, una pentru potasiu, i una de scurgere pentru toi ceilali
ioni la un loc.
Din cauza gradienilor de activitate chimic a ionilor implicai ntre cele dou
fee ale membranei, fiecare ramur conine o baterie Nerst, a crei for
electromotoare E este proporional cu logaritmul raportului activitilor chimice.
Conductanele ionice selective sunt reprezentate de rezistori, a cror rezisten
poate varia datorit unui puls de tensiune a membranei sau/i aciunea unor liganzi.
Efectul TTX
Adugarea de tetrodotoxin, TTX (o neurotoxin puternica extras din ficatul i
ovarele unui peste din Marea Japoniei, Sphoeroides rubripes, i unii tritoni), n soluia
de imersie a axonului, blocheaz transportul de sodiu i nu are efecte directe notabile
asupra transportului de potasiu.
Figura 7.4 prezint efectul TTX asupra probabilitilor n, m, h, a conductanelor
de sodiu i potasiu, a potenialului de aciune. Toxina are nevoie de ceva timp pentru a
difuza n structur i a da efect. Cnd conductana maxim a sodiului scade sub o
valoare critic, membrana nu mai rspunde.
45
Figura 7.4. Efectul TTX.
Figura 7.5. Efectul cesiului asupra bioelectrogenezei membranei.

Efectul cesiului
Datorit competiiei la legarea de componentele proteice ale membranei cu
ceilali cationi monovaleni (n special cu ionii de K +) prezenta cesiului n soluia de
imersie afecteaz dinamica probabilitatilor n, m si h i duce la o scdere semnificativ
a conductanei superficiale a potasiului i la o foarte mic cretere a conductanei de
sodiu. Aceste schimbri modific potenialul de aciune, crescndu-i puin durata dup
cum se observa n figura 7.5.
Utiliznd programul de simulare din dotarea laboratorului de biofizic s se
determine valoarea reobazei, a cronaxiei, perioadei refractare i s se urmareasc
efectele TTX i Cs. Comentai rezultatele obinute.
46
Fenomene de transport
I. Noiuni teoretice
1. Difuzia
Difuzia pasiv reprezint fenomenul de transport pasiv, datorat agitatiei termice,
a unor particule din zonele de concentratie, densitate mai ridicate, spre zonele cu
valori mai mici ale acestor mrimi, printr-un mediu suport omogen.
Fenomenul de difuzie pasiv este cel mai intens la gaze, unde viteza termic
este foarte mare i cel mai lent n cazul solidelor, unde moleculele (sau ionii) au poziii
relativ fixe n spaiu.
nainte de a prezenta legile difuziei, vom face unele precizri n legatur cu
anumii termeni folosii: flux i gradient.
Fluxul reprezint cantitatea de substan, sarcin, energie transportat printr-o
suprafa n unitatea de timp.
Prin gradient se ntelege variaia unei mrimi (concentraie, densitate, potenial
electric etc.) ntre dou puncte ale spaiului, raportat la distana dintre cele dou
puncte.
n aceste condiii definim difuzia ca cel mai general tip de transport pasiv
(spontan), produs de gradientul de concentraie (pentru gaze), sau de gradientul de
activatate chimic (pentru materia condensat).
Difuzia pasiv ntr-un mediu omogen se supune la dou legi, cunoscute sub
numele de legile lui Fick:
(1) Cantitatea de substan difuzat printr-o suprafa , n unitatea de timp
este proporional cu aria suprafeei, cu gradientul de concentraie i depinde de
condiiile de mediu. Factorul de proporionalitate se noteaz cu D i reprezint
coeficientul de difuzie.
dm
dc
D S
dt
dx
m=masa de substan, S=supraa de difuzie, D=coeficientul de difuzie,
dc
=
dx
gradientul de concentraie, t = timpul.

(2) Viteza de variaie a concentraiei este proporional cu variaia spatial a
gradientului de concentratie.
dc
2c
c
D 2 D
dt
x x
x
47

Reprezentare grafic a variaiei de concentratie cu distana (ntr-un solvent)
ofer o imagine a gradientului sub forma unei pante de-a lungul creia "coboar"
solvitul.
Figura 8.1. Reprezentarea schematic i grafic a dependenei concentraiei unui

solvit (molecule difuzante) care se injecteaz n partea stng a unui solvent (faza
omogen).
Transportul de substan prin difuzie conduce la modificarea concentraiei n
fiecare punct al spaiului ocupat de ansamblul solvit-solvent, n final ajungndu-se la o
egalizare a concentraiei.
Figura 8.2. Distribuia spaial a concentraiei la diferite momente de timp

(t0t1t2...t) dup nceperea procesului de difuzie, n urma contactului dintre solvit i
solvent.
Prima lege a lui Fick permite calcularea cantitii de substana ce strabate o
membrana permeabil:
m P S c t
unde: c = diferena de concentraie, t = intervalul de timp.

Fie dou vase de volume V1 si V2 desprite de o membran semipermeabil,
ce conin solvent, respectiv o soluie de concentraie C 0 cunoscut.
n timpul difuziei lichidul din vasul V 2 trece de la concentraia C0 la concentraia
C2 (mai mica), iar n vasul V1 concentraia crete de la C 01(=0) la C1. Conform legii
conservrii masei se poate scrie relaia:
V2 C 0 V1 C1 V2 C 2
din care explicitnd variaia masei:

48
m C1 V1
se ajunge la coeficientul de permeabilitate al membranei:
C1 V1
V V2
C0 1
C1 t
V2
Problema n aceasta situatie o reprezint determinarea concentraiei C 1. Pentru

aceasta se folosete metoda conductometric deoarece pentru substanele ionice,
ntre anumite limite ale concentraiei, aceasta este proportional cu conductivitatea
solutiei ().
Conductana este inverul rezistenei i se msoar n -1 (mho):
G
1
R
2. Osmoza
n unele situaii solvitul este mpiedicat s difuzeze ntre compatimente datorit
existenei unei membrane semipermeabile. n aceast situaie sistemul tinde spre o
stare stationar (steady state) i nu spre o stare de echilibru, prin difuzia solventului
prin membran.
Osmoza duce la apariia unei asimetrii a presiunii hidrostatice n sistemul
considerat. Diferena de presiune hidrostatic ce blocheaz difuzia solvitului se
numete presiune osmotic.
Figura 8.3. Procesul de osmoz.

Pentru soluii diluate presiunea este dat de legea lui Van't Hoff:
V n R T
unde: = presiunea osmotic

n = numrul de moli de substan osmotic activ dizolvai
R = constanta universal a gazelor
T = temperatura absolut
n cazul soluiilor de electrolii se introduce un factor de corecie (i) dependent de
gradul de disociere al electrolitului:
V in R T
49

A. Determinarea concentraiei unor soluii ionice prin conductometrie
Materiale necesare:
- sursa de tensiune 12V cc
- punte Wheastone
- electrozi
- soluii ionice de concentraie cunoscut
Mod de lucru: Se realizeaz montajul experimental ca n figura 8.4. Se
introduce prima soluie pn ce aceasta acoper complet electrozii, dup care se
apas butonul (K) punii; dac acul deviaz se va ajusta valoarea rezistenei pn la
atingerea echilibrului punii. Valoarea rezistenei se introduce n tabelul de mai jos. Se
procedeaz analog i pentru celelalte soluii.
No.
1
....
C (mol/l)
R ()
G ( -1)
Se traseaz graficul conductan = f (concentraie), iar cu ajutorul metodei celor

mai mici ptrate se traseaz curba ce se potrivete cel mai bine datele experimentale
(vezi prelucrarea matematic a datelor).
Figura 8.4. (1) surs de tensiune, (2) punte Wheastone, (3) cuv cu electrozi.
B. Determinarea coeficientului de permeabilitate al unei membrane
Materiale necesare:
- sursa de tensiune 12V cc
- punte Wheastone
- electrozi
- membrane sintetice
- vas de difuzie
- cronometru
50

Mod de lucru: Se realizeaz montajul experimental ca n figura 8.5. Se umple
compartimentul din stnga al cuvei cu o soluie concentrat de NaCl iar cel din dreapta
cu ap distilat. Se masoar conductana soluiei din cuva cu electrozi la fiecare 3
minute. Datele obtinute se trec n tabelul de mai jos.
Figura 8.5. (1) surs de tensiune, (2) punte Wheastone, (3) vas de difuzie.
No.
1.
.....
t (min)
R ()
P (m/s)
G ( -1)
S se traseze garficele G = f(t) i R = f(t).

C. Determinarea presiunii osmotice a unor soluii
Materiale necesare:
- osmometru
- membrane semipermeabile
- soluii de glucoz
- vas de 500ml
- ap distilat
Mod de lucru: Se monteaz la osmometru prima membran, dup care se
introduce n vasul cu ap distilat pn cnd suprafaa lichidului din vas se afl la
diviziunea 0 a osmometrului. Se introduce prima soluie de analizat n osmometru tot
pana la diviziunea 0. Dupa 5 minute se msoar diferena de nivel i se calculeaz
presiunea osmotic a soluiilor. Datele se trec n tabelul de mai jos. Se goleste
osmometrul, se spal cu ap distilat i se reia procedeul pentru soluiile urmtoare.
51

Figura 8.6. Determinarea presiunii osmotice cu ajutorul osmometrului.
No.
1.
...
52
Soluia
h (mm)
(atm)
Determinarea coeficientului de vscozitate a lichidelor

biologice
I. Noiuni teoretice
Vscozitatea este fenomenul de frecare intern ce apare n sistemele lichide.
Fenomenul de vscozitate se manifest n dou ipostaze: cnd o particul se mic n
raport cu un lichid staionar vscozitate static i cnd straturile adiacente de lichid
se mica unele n raport cu altele vscozitate dinamica.
Vscozitatea static face obiectul unei alte lucrri practice de tehnici de
separare (sedimentarea).
Vscozitatea dinamic n cazul lichidelor reale care curg se constat c acest
proces are loc n straturi subiri vecine, moleculele din acelai strat avnd aceeai
vitez, n timp ce moleculele din straturile vecine au viteze diferite.
ntre moleculele straturilor vecine (ca i ntre moleculele aceluiai strat) se
exercit fore de atracie, forte ce se opun deplasrii relative a acestor straturi,
determinnd apariia unei frecri interne n lichide numit vscozitate.
Dac n timpul curgerii straturile de lichid rmn paralele, curgerea este
cunoscut sub numele de curgere laminar. Pentru curgerea laminar, fora de
vscozitate este dat de legea lui Newton:
Fv S
dv
dx
unde: = coeficientul de vscozitate dinamica a lichidului

dv
= gradientul de vitez
dx
S = aria comun a celor doua straturi

Coeficientul de vscozitate depinde de natura lichidului i de temperatur
(scznd cu creterea temperaturii). Lichidele pentru care este valabil relaia de mai
sus se numesc lichide Newtoniene. Marea majoritate a lichidelor de interes medical
(lichidul cefalorahidian, plasma sangvin, serul sangvin, urina) sunt lichide
Newtoniene.
Vscozitatea dinamic este un fenomen foarte important n circulaia sngelui.
S consideram un vas de snge de lungime L i raza R la capetele cruia
acioneaz o diferen, de presiune p=p1p2>0 (unde p1 este proiecia presiunii
sistolice pn n acel teritoriu iar p2 rezistena periferic). La peretele vasului ader o
53

pelicul fin de lichid ce rmne n repaus. Dac diferena de presiune nu este foarte
mare, atunci curgerea are loc n pturi cilindrice paralele, cu viteze din ce n ce mai
mari de la periferie spre ax (figura 9.1).
Figura 9.1. Curgerea unui fluid printr-un tub cilindric de lungime L i raza R; p 1, p2 sunt
presiunile ce acioneaz la capetele tubului (p = p1 p2>0)
Se poate determina n acest context fluxul de snge (volumul ce trece n
unitatea de timp) prin seciunea transversal a vasului:
R 4 (p1 p 2 )
(1)
8 L
Pentru lichidele care curg n conducte se introduce aa numitul numr

Reynolds:
Re
vr
unde: r = raza conductei

= densitatea fluidului
v = viteza de curgere
= coeficientul de vscozitate dinamic a lichidului
Pentru sngele din arterele mari exist o valoare critic a numrului Reynolds
(ReCR) egal cu 1000. n funcie de aceast valoare exist mai multe regimuri de
curgere a sngelui :
a) pentru Re< 1000, curgerea este laminar
b) pentru 1000< Re<2000, curgerea este nestabil
c) pentru Re > 2000, curgerea devine turbulent (cu vrtejuri)
n sistemul cardiovascular uman, curgerea turbulent poate s apar n aorta,
imediat deasupra valvulelor sigmoide, n perioada de expulzie a sngelui (cnd viteza
sngelui atinge cea mai mare valoare). Aceast curgere turbulent este caracterizat
prin zgomote caracteristice. Turbulena (consumatoare de energie) poate s apar i
n alte vase, n stri patologice, cnd vscozitatea sngelui este mult mai sczut
(anemie, sau n cazul scderii CO2 din snge).
54

Vscozitatea sngelui
Vscozitatea sngelui, la temperatura de 37 oC, este de aproximativ 4 ori mai
mare dect cea a apei, sngele fiind un lichid nenewtonian. Mai mult, sngele nu
constituie o faz omogen, ci un sistem dispers heterogen, mai precis, o suspensie de
elemente figurate n plasm.
Tot lichidele nenewtoniene sunt i soluiile coloidale i macromoleculare, pentru
care coeficientul de vscozitate depinde de
concentraia particulelor dispersate,
conform legii lui Einstein:

=d(1+KV)
unde: d = coeficientul de vscozitate dinamic al mediului respectiv,
V = volumul fazei dispersate din unitatea de volum a suspensiei,
K = constant ce depinde mrimea i natura particulelor
dispersate (pentru proteine globulare K=4-10)
Determinarea coeficientului de vscozitate a unor lichide
Principiul metodei: Determinarea vscozitii cu vscozimetrul Ostwald se
bazeaz pe msurarea timpului de scurgere a unui volum determinat de lichid printr-un
tub capilar etalonat sub aciunea unei diferene de presiune cunoscut.
Pornind de la relaia (1) i innd cont c diferena de presiune este de tip
hidrostatic p1-p2=gh se poate arta c expresia coeficientului de vscozitate se poate
scrie sub forma:
= Kt
unde: K = o constant ce depinde numai de vscozimetrul utilizat.
Dac un volum V de lichid al crui coeficient de vscozitate este necunoscut
curge n timpul t printr-un tub capilar ntre doua repere i dac acelai volum de apa V
avnd coeficientul de vscozitate cunoscut 0 parcurge aceeai distan n timpul to
putem determina vscozitatea relativa a lichidului rel:
rel
unde: d
t
t
d
(2)
0 0 t o
t0
reprezint densitatea relativ.
Dac cunoatem ns i 0 se poate calcula vscozitatea absolut a lichidului .

Dispozitivul experimental:
55

Pentru determinarea vscozitii unor lichide se folosete dispozitivul Ostwald.
Acesta este confecionat dintr-un tub de sticl n forma literei "U" avnd o ramur (A)
cu un diametru de aproximativ 2cm prevzut cu un rezervor de 3ml capacitate i
respectiv o ramur (B) avnd un diametru de aproximativ 0.8cm cu un rezervor de 2ml
capacitate situat n partea superioar. Acest rezervor este delimitat de dou tuburi
capilare i este prevzut cu dou repere R 1 si R2.
Ramura (B) continu cu sistemul de aspiraie alctuit dintr-un tub de cauciuc,
un tub de sticl prevzut cu un orificiu lateral i o pomp de cauciuc.
Figura 9.2. Vscozimetrul Ostwald.

Mod de lucru:
Se introduce apa distilat n ramura A. Cu ajutorul sistemului de aspiraie se
ridic apa n ramura B undeva deasupra reperului R 1. Se elibereaz pompa iar n
momentul cnd suprafaa lichidului se afl n dreptul reperului R 1 se pornete
cronometrul i se msoar intervalul de timp necesar apei s curg ntre R 1 si R2.
Se nlocuiete lichidul de referina (ap distilat) cu lichidul de studiu i se
repet procedeul prezentat mai sus. Pentru calcul coeficientului de vscozitate se va
folosi relaia (2).
Se vor efectua 15 determinri
pentru fiecare lichid n parte iar datele
experimentale se vor introduce n tabelul de mai jos.

No
tapa
(s)
tapa
(s)
mediu
t
lichid
(s)
1.
....
56
rel
(Ns/m2)
rel med
n-1
2
(Ns/m (Ns/m2
)
)
Determinarea coeficientului de tensiune superficial

a lichidelor biologice
I. Noiuni teoretice
_O substan lichid este separat de atmosfera nconjurtoare (n care se
gsesc i vaporii si) printr-o ptur superficial. Moleculele din ptura superficial se
gsesc n condiii care se deosebesc de cele din interiorul lichidului astfel:
Figura 10.1. Moleculele din ptura superficial se gsesc n condiii diferite dat de
moleculele din interiorul lichidului: (a1) molecul situat n interiorul lichidului,
(a2) molecul situat n stratul superficial.
- fiecare molecul din interiorul lichidului este nconjurat complet de moleculele
lui. Corespunztor, forele de interaciune care se manifest ntre aceast molecul i
moleculele vecine sunt repartizate aproximativ simetric. Rezultanta acestor fore este
apropiat de zero i influeneaz puin micarea moleculelor n interiorul lichidului.
- moleculele de la suprafa se gsesc la limita de separare ntre starea lichid
i atmosfera nconjurtoare. Ele interacioneaz concomitent cu moleculele din cele
dou stri astfel nct rezultanta forelor de interaciune este ndreptat spre interiorul
lichidului.
Fore de tensiune superficial apar ca rezultat macroscopic al forelor de
interaciune ntre moleculele lichidului. Forele de tensiune superficial sunt tangente
la suprafaa lichidului i acioneaz n sensul micorrii ei.
Mrimea fizic care caracterizeaz lichidul din acest punct de vedere se
numete coeficient de tensiune superficial (). Acesta se poate defini n dou moduri:
-
coeficientul de tensiune superficial este numeric egal cu lucrul mecanic

efectuat de forele de tensiune superficial pentru a mrii suprafaa lichidului
cu o unitate:
W
S
sau
-
coeficientul de tensiune superficial este numeric egal cu fora de tensiune

superficial care se exercit asupra unitii de lungime:
57
F
l
_La suprafaa de contact solid lichid apar de asemenea fore de atracie

molecular care au fost denumite fore de adeziune. Din experien se tie c unele
lichide ud pereii solidelor cu care intr n contact iar altele nu, aceasta depinznd de
valorile forelor de coeziune i de adeziune.
Figura 10.2. Forma pe care o ia o pictur de lichid, pentru un lichid care nu ud

pereii vasului i pentru un lichid care ud pereii vasului.
Dac forele de coeziune Fc sunt mai mari dect forele de adeziune F a atunci
lichidul nu ud solidul cu care este n contact, unghiul de racordare (900,1800).
Dac forele de coeziune Fc sunt mai mici dect forele de adeziune F a atunci lichidul
ud solidul cu care este n contact iar (00,900).
Valoarea unghiului depinde de compoziia chimic a solidului, lichidului si
gazului; de puritatea celor trei componeni; de temperatur.
_Dac turnm un lichid ntr-un vas marginea suprafeei lichidului o s
primeasc o form determinant. Se numete menisc suprafaa liber curbat a unui
lichid n vecintatea unui corp solid. Pentru un lichid care nu ud pereii vasului
suprafaa meniscului este convex, iar pentru un lichid care ud pereii vasului
suprafaa meniscului este concav.
Figura 10.3. Forma suprafeei meniscului n cazul a dou lichide:

mercur - suprafa convex (stnga), ap - suprafa concav (dreapta).
_n cazul unui tub capilar, ascensiunea capilar (h), adic nlimea la care
urc lichidul este dat de urmtoare relaie:
h
58
2
gr

unde: = este densitatea lichidului
= coeficientul de tensiune superficial
r = raza capilarului
h = ascensiunea capilar
Figura 10.4. Lichid care urc ntr-un tub capilar.

Determinarea coeficientului pentru lichide biologice
A. Metoda stalagmometric
Este o metod dinamic de determinare a tensiunii superficiale a unui lichid
biologic constnd n numrarea picaturilor ce se formeaz la curgerea unui volum bine
determinat de lichid printr-un orificiu capilar. Pornind de la condiia de desprindere a
unei picturi se poate determina expresia coeficientului de tensiune superficial:
FG
F = 2r
G = m g = v g
2r
V
g
n
Vg
2r n
(1)
n
unde: K = constant ce depinde de tipul stalagmometrului utilizat

= densitatea lichidului
n = numr de picturi
Dispozitivul experimental folosit (stalagmometrul) este prezentat n figura 10.5.
Este alctuit dintr-un tub de sticl prevzut cu dou poriuni capilare, una vertical (A)
i una orizontal (B), un tub vertical (C) ce prezint un rezervor de volum V i un
sistem de aspiraie (D) alctuit dintr-un tub de cauciuc, un tub de sticl prevzut cu un
orificiu lateral i o par de cauciuc.
59
Figura 10.5. Dispozitivul experimental pentru determinarea coeficientului

de tensiune superficial (metoda stalagmometric).
n cazul n care nu cunoatem constanta K, pentru determinarea lui este
necesar folosirea unui lichid de referin pentru care cunoatem 0 i 0. Astfel relaia
(1) de determinare a lui devine:
l 0
n 0 l
(2)
n l 0
Mod de lucru:
Se aspir lichidul de referina n stalagmometru pn deasupra diviziunii R 2. Se
las apoi s curg liber lichidul i se numr picturile ce se formeaz la curgerea
acestuia ntre cele dou repere R 2 si R1. Se nlocuiete lichidul de referin (ap
distilat) cu lichidul de studiu i se repet procedeul prezentat mai sus. Pentru calcul
coeficientului de tensiune superficial se va folosi relaia (2). Se vor efectua 15
determinri pentru fiecare lichid n parte iar datele experimentale se vor introduce n
tabelul de mai jos.
No.
1.
....
B.
ascensiunii
Este
n0
n0 mediu
nl
mediu
n-1 (SD)
Metoda
capilare
metoda
foarte
simpl de determinate a coeficientului de tensiune superficial ce se bazeaz pe faptul

c ascensiunea capilar (nlimea la care urc un lichid) pentru un tub capilar este
dat de relaia:
h
2
gr
Metoda presupune folosirea a dou tuburi capilare de diametre diferite D 1 i D2

pe care le imersm ntr-un lichid
superficiala dorim s-l determinm.
60
(figura 10.6) al crui coeficient de tensiune
Figura 10.6. Dispozitivul experimental pentru determinarea coeficientului

de tensiune superficial (metoda ascensiunii capilare)
Notnd cu h1 si h2 nlimile la care urc lichidul n cele dou capilare i
considernd c D1 > D2 putem scrie urmtoarele relaii:
h1
4
,
g D1
h2
4
g D2
de unde, prin diferen, se obine expresia coeficientului de tensiune superficial:
(h 2 h1 ) g D1 D 2
(3)
4 ( D1 D 2 )
Diametrele D1 si D2 respectiv diferena de nivel h2-h1, se vor determina la un

microscop prevzut cu un micrometru ocular, mai nti n diviziuni, iar apoi folosind
relaiile de mai jos se vor face transformrile n microni (m):
h1, 2 h1diviziuni
,2
1
g ob1
100 ,
D1, 2 D1diviziuni
,2
1
g ob 2
100
Cu valorile astfel determinate se calculeaz din relaia (3).
61
Determinarea densitii lichidelor biologice

cu densimetrul i picnometrul
I. Noiuni teoretice
Densitatea unei substane este o mrime fizic caracteristic substanei
respective. Densitatea absolut se definete ca fiind masa unitii de volum.
m
(1)
V
avnd ca unitate de msur g/cm3 i kg/m3.

Mrimile prin care se definete densitatea, respectiv masa i volumul, sunt
dependente de presiune i temperatur, aceti factori influennd valoarea densitii.
De aceea, determinarea densitii corpurilor solide i lichide se va face la temperatur
constant n tot timpul determinrii, iar pentru gaze trebuie respectat i condiia
meninerii constante a presiunii.
Deoarece determinarea densitii presupune msurarea masei i a volumului,
n practic se determin densitatea prin comparatie cu densitatea unui corp de
referin (densitatea relativ), de obicei apa distilat pentru solide i lichide i aerul
atmosferic uscat pentru gaze.
Astfel, densitatea relativ se definete ca fiind raportul dintre densitatea a
unui corp i 0 densitatea corpului de referint:
d
(2)
0
iar pentru volume egale ale corpului de studiat i a celei de referint, relaia devine:
d
m
m0
(3)
Cele mai utilizate metode pentru determinarea densitii lichidelor sunt:

- cu densimetre
- cu picnometre
- cu balanta Mohr-Westphal
a) Determinarea densitii cu densimetrul
Densimetrul numit i plutitor liber sau areometru, fiind un instrument bazat pe
principiul plutirii corpurilor, este format dintr-un tub de sticl, avnd prevzut la partea
inferioar o umfltur unde se introduce mercur sau alice de plumb pentru meninerea
62

sa n poziie vertical la introducerea n lichide. Citirea valorii densitii relative se face
cu ajutorul unei scri gradate aflat pe tija densimetrului.
Se utilizeaz truse de densimetre gradate diferit pentru intervale de densitate
diferite. Lichidul de analizat se introduce ntr-un cilindru uscat i se aduce la
temperatur constant. Densimetrul perfect uscat se introduce n lichid, iar msurarea
densitii se face cnd densimetrul ocup o poziie vertical fr s ating pereii
vasului. Se citete gradaia de la nivelul meniscului lichidului. Pentru o precizie mai
mare citirea se repet de mai multe ori i se face media determinrilor.
b) Determinarea densitii cu picnometrul
Picnometrele sunt vase de sticl de diferite forme n funcie de tipul de
determinare. Au capacitate cunoscut nscris pe vas, ca de altfel i temperatura de
lucru.
n cadrul lucrrii se va urmri determinarea:
- punctului zero al balanei;
- masei picnometrului gol;
- masei picnometrului pentru soluii date i pentru apa distilat;
- densitii relative
Mod de lucru:
A. Determinarea densitii absolute a unui lichid biologic:
- se determin punctul zero al balanei;
- nainte de folosire, se spal picnometrul cu ap distilat, se cltete cu
aceton i se terge cu un tifon uscat;
- se cntrete picnometrul gol mpreun cu dopul, valoarea masei se noteaz
cu m1;
- se umple picnometrul cu lichidul de studiu (soluia 1);
- se nchide picnometrul cu dopul rodat care este prevzut cu un canal capilar
(sau tub lateral) prin care se elimin surplusul de lichid.
- se citete masa picnometrului cu soluia 1, masa respectiv notndu-se cu m 2.
63
Figura 11.1. Determinarea densitii cu picnometrul.

Densitatea absolut se calculeaz cu formula:
m m 2 m1
(4)
V
V
unde: V = volumul picnometrului, n cm3 (scris pe vas)

aer = densitatea aerului n conditii normale (0.0012g/cm 3)
- se procedeaz n mod asemntor, cu determinarea densittii soluiei 2.
B. Determinarea densittii relative a unui lichid biologic:
Densitatea relativ d este raportul dintre densitatea a unui corp i densitatea
o a lichidului de referint - ap distilat:
d
m 2 m1
(5)
0 m 3 m1
unde: m3 = masa picnometrului cu ap distilat.

- se golete picnometrul i se blocheaz balana.
Rezultatele experimentale se trec n tabelul de mai jos.
Solui
a
Masa
picnometrului
m1 m2 m3
1
2
Importana densimetriei n practica medical
Determinarea densitii lichidelor biologice are multe aplicaii clinice. De
exemplu: determinarea densittii urinii permite, alturi de alte metode, diagnosticarea
unor afeciuni renale.
Creterea densittii urinii peste 1.022 (valoarea normal este cuprins ntre
1.015 i 1.022), apare n nefropatii glomerulare compensate; n cazul glicosuriei atinge
1.030 i chiar mai mult.
64

Scderea densitii urinii apare n insuficiena renal decom-pensat, n
nefropatii cu lezarea predominant a tubilor distali (sub 1.010).
De menionat i variaii fiziologice ale densitii urinii:
-
n raport excesiv de ap,
n pierderi extrarenale de ap,
n funcie de vrsta pacientului.

Densitatea urinii se determin n urina colectat pe 24 de ore.
65
Determinarea concentraiei unor soluii prin indice de

refracie
Refractometrul Abbe
I. Noiuni teoretice
Prin refracie se nelege schimbarea direciei unei raze de lumin la trecerea
prin suprafaa de separaie a dou medii transparente cu indici de refracie diferii.
Fie o raz de lumin care cade pe suprafaa de separaie a dou medii sub un
unghi de inciden (i). Raza sufer fenomenul de refracie (figura 12.1) i intr n al
doilea mediu sub unghiul de refracie (r). ntre cele dou unghiuri exist relaia:
sin i n 2 v1
n 21 (1)
sin r n1 v 2
unde:
v1 = viteza de propagare a luminii n mediul cu indice de refracie n 1
v2 = viteza de propagare a luminii n mediul cu indice de refracie n 2
n21 = indice de refractie relativ (al mediului 2 fa de mediul 1)
Figura 12.1. Refracia luminii (sursa de lumin se afl n mediul n 1)

Dac n1 < n2 unghiul de inciden (i) este mai mare dect cel de refracie (r).
Indicele de refracie absolut este definit ca raportul dintre viteza luminii n vid i
viteza luminii n mediul respectiv:
n
c
(2)
v
Indicele de refracie al unei substane depinde de o serie de factori, cum ar fi:

natura substanei, lungimea de und a luminii utilizate, temperatur etc.
n cazul n care lumina trece dintr-un mediu optic mai dens ntr-un mediu mai
puin dens (n1 > n2), din legea refraciei se observ c i < r, deci raza refractat se
ndeprteaz de normala dus la suprafata de separaie n punctul de inciden.
n cazul n care lumina trece dintr-un mediu optic mai puin dens ntr-unul mai
dens (n1 < n2), i > r, raza se apropie de normal.
66

Dac raza de lumin cade normal (perpendicular) pe suprafaa de separaie
(i=0), ea trece nedeviat n al doilea mediu.
n cazul n care raza de lumin cade pe suprafaa de separaie a dou medii, al
doilea avnd indicele de refracie mai mic dect primul pentru anumite valori ale
unghiului de incident are loc reflexia total a razei dup cum urmeaz (figura 12.2):
- dac i = l caz n care raza de lumin se refract sub un unghi r = 90, fiind
tangent la suprafaa de separaie, valoarea unghiului limita (l) este dat de relaia:
sin l
n
2
0
n1
sin 90
sin l
n2
(3)
n1
- dac i > 1 raza de lumin sufer reflexie total pe suprafaa de separaie

ntorcndu-se n mediul din care a venit.
Figura 12.2. Reflexia total.

Unghiul limit se determin cu ajutorul refractometrului Abbe. Cunoscnd
indicele de refracie al aerului n 1 = 1.0003, din formula (3) se poate determina indicele
de refracie al substanei de cercetat. Refractometrul Abbe permite citirea direct a
produsului n1sin l.
Descrierea dispozitivului experimental
Prile componente ale refractometrului Abbe sunt prezentate n figura 12.3.
1. Corpul prismei de msurare care cuprinde:
- prisma de msurare
- prisma de iluminare
Bazele celor dou prisme nchid ntre ele un volum mic n care se introduce
proba de cercetat. Corpul prismei are racorduri pentru termostat, un termometru i o
oglind de iluminat.
67
Figura 12.3. Refractometrul Abbe.

2. Luneta de punere la punct - privind prin ea se observ dou cmpuri inegal
iluminate (figura 12.4).
Figura 12.4. Imaginea vzut prin lunet.

3. Compensatorul - servete la nlturarea haloului colorat care apare la linia de
separaie a celor dou cmpuri, iar cu ajutorul scalei 4 se poate aprecia cifra de
dispersie.
5. Tambur pentru rotirea corpului prismei;
6. Luneta de citire - este cuplat rigid cu luneta de punere la punct i indic
valoarea indicelui de refracie a probei.
Domeniul de msurare al refractometrului Abbe cuprinde indici ntre 1.3 si 1.7.
Scala permite citirea indicelui de refractie pna la zecimala a treia i aprecierea celei
de-a patra zecimale.
Mod de lucru - Verificarea aparatului:
- corpul refractometrului se rotete nainte pn n poziia extrem;
- cu ajutorul urubului se deschide corpul prismei i se aduce fa lucioas n
poziie perfect orizontal;
- cele dou fee ale prismelor se degreseaz cu amestec de alcool-eter;
- cu ajutorul unei pipete se pun 2-3 picturi de ap distilat pe faa lucioas;
- meninnd orizontalitatea prismei de msurare se nchide corpul prismelor i
se readuce refractometrul n poziia iniial;
68

- privind prin luneta de citire (6) se roteste tamburul (5) pna la captul scalei
(valoarea 1.3 a indicelui de refracie);
- cu ajutorul oglinzii se realizeaz o iluminare uniform i maxim a cmpului
observat n luneta de msurare;
- prin rotirea tamburului (5) se observ o ntunecare a cmpului de jos n sus;
se continu rotirea pn cnd linia de demarcaie lumin/ntuneric ajunge la intersecia
celor dou fire perpendiculare;
- n aceast poziie se citete n luneta (6) indicele de refractie al apei distilate,
care la temperatura de 20C are valoarea de 1.3330;
- se repet determinrile de 3 ori, iar valorile citite se trec n tabel, calculnduse media lor aritmetic.
Modificarea indicelui de refracie n funcie de concentraie i temperatur.
Construirea curbei de etalonare.
Scopul lucrrii este de a studia dependena indicelui de refracie de
concentraie la diferite temperaturi (t 0 = temperatura camerei; t1 = 37C). Totodat se
va construi curba de etalonare n vederea daterminrii concentraiilor necunoscute ale
unor soluii.
A. Determinarea indicelui de refracie n funcie de concentraie la temperatura
camerei
- dup etalonarea aparatului cu ap distilata se degreseaz locaul probei cu
amestec alcool-eter i cu ajutorul unei pipete se pun dou, trei picturi din soluia 1 pe
suprafaa lucioas a prismei;
- se citete indicele de refracie ca la etalonare i valoarea acestuia se trece n
tabel;
- determinrile se repet nc de dou ori pentru soluia dat.
Operaia se repet pentru toate soluiile inclusiv pentru cele cu concentraie
necunoscut (X1 i X2).
B. Determinarea indicelui de refracie n funcie de concentraie la temperatura
de 37C
- n vederea aducerii i meninerii corpului prismelor la temperatura de 37C se
pune n funciune termostatul Hppler;
- se repet determinrile de la punctul (A), avnd grij ca n urma umplerii
spaiului dintre prisme s se atepte 3 minute pentru realizarea echilibrului termic,
dup care se efectueaz citirea indicelui de refracie;
69

- pentru fiecare soluie se execut cte 3 determinri, iar rezultatele se trec n
tabel.
Dup executarea determinrilor se terg prismele cu amestec alcool-eter, se
las deschise pn la uscare apoi aparatul se aduce n poziie de lucru.
C
Numrul determinrilor
1
2
3
Media
t0
t1
t0
t1
t0
t1
t0
t1
n-1
1
....
10
X1
X2
C. Construirea curbei de etalonare
Construirea curbei de etalonare se efectueaz n felul urmtor:
Pentru o serie de soluii de concentraii cunoscute (n cazul nostru 10 soluii cu
concentraii diferite de alcool n ap) se determin indicele de refracie. Dup
determinarea indicelui de refracie cores-punztor concentraiilor cunoscute se
traseaz graficul: C = f(n).
Dup trasarea curbelor de etalonare (cu rezultatele obinute la t 0 i la t1) se
determin concentraiile celor dou soluii X1 i X2 cunoscnd indicele lor de refracie.
70
Determinarea concentraiei substanelor optic active

prin metoda polarimetric
I. Noiuni teoretice
Lumina, ca orice und electromagnetic, const dintr-un cmp electric (E) i un
cmp magnetic (B). Cele dou cmpuri oscileaz n faz, perpendicular pe direcia de
propagare (figura 13.1), fiind perpen-diculare i ntre ele. Lumina este o unda
transversal.
Figura 13.1. n fiecare punct al spaiului atins de o und electromangetic,

vectorii E i B, oscileaz n faz, n direcii normale pe direcia de propagare.
S-a stabilit pe cale teoretic i experimental c aciunile luminoase
(impresionarea retinei) se datoresc n exclusivitate vectorului electric i nu celui
magnetic.
Lumina este emis sub form de unde electromagnetice de atomii excitati ai
sursei de lumin i ca atare se poate afirma c fiecare atom emite lumin polarizat.
Datorit faptului c fiecare atom emite unde electromagnetice de polaritti diferite,
lumina emis de multitudinea de atomi este n ansamblu nepolarizat.
Lumina emis deci, n acest mod nu are o direcie preferenial de oscilatie i
poart numele de lumin natural. n lumin natural planul de oscilaie al vectorului
electric se deplaseaz de-a lungul directiei de propagare cu viteza luminii (figura
13.2a). Dac vectorul electric are o singur direcie de oscilaie avem de a face cu
lumin total polarizat sau lumin liniar polarizat (figura 13.2b). Dac vectorul electric
oscileaz dup mai multe direcii (figura 13.2c) dar care sunt cuprinse ntr-un anumit
interval unghiular avem lumin parialial polarizat.
Figura 13.2. Diferena dintre lumina natural, lumina total polarizat i lumina parial
polarizat din punctul de vedere al direciei de oscilaie a vectorului cmp electric.
71

Lumina natural poate fi polarizat prin reflexie, respectiv refracie (figura 13.3)
sau prin dubl refracie (figura 13.4).
Figura 13.3. Polarizarea prin reflexie, respectiv refracie.

n lucrarea de fa ne vom ocupa doar de polarizarea luminii prin dubl
refracie, utiliznd un cristal de spat de Islanda. Cristalul este tiat dup una din
diagonale, iar feele astfel obinute se lipesc cu balsam de Canada. Ansamblul astfel
obinut poart denumirea de nicol.
Figura 13.4. Polarizarea prin dubl refracie.

Polarizarea luminii prin dubl refracie genereaz dou raze polarizate, avnd
planele de polarizare perpendiculare (figura 13.4):
- raza ordinar, care se supune legilor refractiei;
- raza extraordinar, care nu se supune legilor refractiei.
Balsamul de Canada are pentru raza extraordinar un indice de refracie foarte
apropiat de cel al spatului de Islanda i ca atare aceasta va trece practic nedeviat
prin nicol.
Raza ordinar, odat intrat n nicol sufer reflexie total pe faa AB (pentru
aceast raz balsamul de Canada are indicele de refractie considerabil mai mic fa
de spatul de Islanda) i este eliminat.
Unele substane (n majoritate organice), datorit prezenei unuia sau mai
multor atomi de C asimetrici prezint proprietatea de a roti planul de polarizare a
luminii incidente. Astfel de substante se numesc substane optic active. Dac planul de
polarizare este rotit spre dreapta, substana se numete dextrogir (de exemplu:
glucoza, lactoza, alanina, progesteron etc). n cazul n care planul de polarizare este
rotit spre stnga, substana se numete levogir (de exemplu: fructoza, serina,
colesterolul etc). Substanele optic inactive nu rotesc planul de polarizare.
72

Unghiul de rotatie depinde de concentraia substanei, de lungimea de und a
luminii folosite i de lungimea stratului de substan strbtut conform relaiei:
c
100
(1)
[]20
D l
unde:
c = concentraia procentual a substanei (g la 100ml soluie);
l = lungimea stratului de substan strbtut (l = 0.19014m);
= unghiul de rotaie determinat;
[ ]20
= unghiul de rotaie specific dat de o coloan de lichid de lungine l, de
D
concentraie 1g/ml, la temperatura de 20C pe care cade o radiaie avnd lungimea de

und =589.2nm i valoarea de 52.75 pentru glucoza pur.
Descrierea aparatului: Polarimetrul circular "SM" (figura 13.5) se compune din
urmtoarele elemente:
- polarizor, care este un nicol pe care cade lumina provenit de la o surs de
lumin; la ieirea din polarizor se obtine lumin plan polarizat;
- tub de sticl n care se introduce soluia de cercetat;
Figura 13.5. Schema polarimetrului circular.

- analizor, care este tot un nicol; n cazul n care planul de vibraie a luminii este
paralel cu planul analizorului, lumina trece prin analizor, deci n ocular luminozitatea
este maxim; n cazul n care planul de vibratie este perpendicular pe planul
analizorului, n ocular luminozitatea este minim;
- vernier, constituit dintr-un inelar circular fix pe care sunt nscrise unghiuri ntre
0 i 360 i o plac circular legat solidar cu analizorul, care poate fi rotit cu ajutorul
unui dispozitiv de rotire fin i pe care sunt gravate dou seturi de cte 20 de diviziuni
ncepnd cu 0 i terminnd cu 10.
Citirea: n momentul n care diviziunea 0 de pe inelul exterior coincide cu
diviziunea 0 de pe una din scrile gravate pe placa circular interioar, avem extinctie
(luminozitate minim) datorit poziiei perpendiculare a planului polarizorului fa de
cel al analizorului.
73

n momentul introducerii soluiei de cercetat n tub, datorit rotirii planului de
polarizare se modific luminozitatea cmpului vizual; pentru a ajunge din nou la
luminozitatea minim initial, se rotete vernierul; unghiul obinut care reprezint
unghiul de rotire a planului de polarizare se citete n felul urmtor:
- gradele se citesc pe inelul exterior, diviziunea 0 de pe placa interioar
depete diviziunea 3 de pe inelul exterior, numrul de grade va fi deci, egal cu 3;
- zecimalele de grad se citesc pe placa interioar; se caut acea diviziune de pe
placa interioar care se suprapune cu o diviziune de pe inelul exterior; n exemplul
nostru suprapunerea perfect apare la diviziunea 6.5 de pe placa interioar; deci
unghiul de rotire va fi n cazul nostru 3.65.
- manonul prevzut la capt cu un ocular, care permite obinerea unei imagini
circulare clare prin deplasarea nainte napoi.
n cadrul lucrrii se va determina:
- 0 corespunztor tubului gol;
- 1 corespunztor tubului umplut cu soluia numrul 1;
- se calculeaz unghiul de rotire a planului de polarizare;
- n mod asemntor se determin 2.
Figura 13.6. Imaginea vzut prin ocular n timpul determinrilor.

Mod de lucru:
- privind prin ocular se potrivete sursa de lumin (dac este cazul) prin
micarea stnga dreapta a suportului becului;
- pentru a obine 0 se luczeaz cu tubul gol;
- prin rotirea plcii interioare se observ o imagine divizat net n trei cmpuri (o
band ntunecat mrginit de dou cmpuri luminoase (figura 13.6a); rotind n
continuare se caut imaginea n care banda luminoas este mrginit de dou
cmpuri ntunecate (figura 13.6b); ntre cele dou imagini extreme se caut obinerea
unui cmp cu luminozitate uniform i minim (figura 13.6c).
- se citete unghiul de rotire n modul descris mai sus; se efectueaz mai multe
determinri cu tubul gol i se calculeaz media aritmetic a citirilor, notndu-se cu
0med valoarea obinut;
74

- se scoate tubul i se umple cu soluia de cercetat; se introduce tubul plin cu
soluie n jgheab i se acoper cu capacul metalic;
- privind n ocular se observ c imaginea a devenit neuniform iluminat; se
rotete placa interioar i se obtine din nou un cmp de luminozitate minim i
uniform (situat tot ntre cele dou poziii extreme descrise mai sus); se citete unghiul
de rotire i se noteaz cu 1; se repet procedeul de mai multe ori;
- se calculeaz media aritmetic i se noteaz cu 1med
- se calculeaz diferena: = 1med 0med
- se repet operaiile de mai sus i pentru celelalte soluii de cercetat, iar
rezultatele obinute se trec n tabelul de mai jos;
- cu ajutorul formulei (1) se calculeaz concentraia.
0
Soluia 1
Soluia 2
Soluia 3
Media
(i)
n-1
75
Telecobaltoterapia
I. Noiuni teoretice
Radiaia Cobalt-60 este considerat ca o radiaie de energie mult mai sczut
dect cea obinut cu acceleratoare liniare. Fascicolul de radiaii al Cobalt-60 prezint
o serie de particulariti de ordin calitativ, geometric i cantitativ.
1. Calitatea fascicolului
Izotopul radioactiv artificial Cobalt-60 se obine prin reacia
(n, ), din
elementul natural Cobalt-59.

59
1
60
27 Co 0 n 27 Co
Dezintegrarea
60
27 Co
are loc n cascad: fiecare atom emite o radiaie beta cu
energia E=0.31MeV i doi fotoni gamma de 1.17 MeV i 1.33MeV, trecnd n

elementul
60
28
Ni .
Figura 14.1. Schema de dezintegrare i caracteristicile fizice ale radiaiei Cobalt-60.

Radiaia gamma emis de cobalt-60 este de natur electro-magnetic fiind
constituit din fotoni transportori de energie i poate fi considerat monocromatic, cu
o energie medie de 1.25MeV.
n aer, fascicolul de fotoni nu prezint practic interaciuni i energia pe care o
transport rmne constant, indiferent de distana de surs, repartizndu-se uniform
pe seciunile sferice ale suprafeelor de unde crescnde.
Intensitatea fluxului de fotoni, respectiv energia repartizat pe unitatea de
suprafa este uniform pe suprafaa unei seciuni sferice i scade proporional cu
ptratul distanei fa de sursa de emisie.
La impactul fascicolului cu un mediu material, acesta intr n coliziune cu atomii
mediului i o parte din energia fotonilor este progresiv transferat electronilor
76

secundari generai n urma interac-iunilor elementare. Interaciunea fascicolului de
fotoni cu mediul are ca rezultat patru efecte mai importante:
1. modificarea traiectoriei fotonilor incideni, fr modificarea energiei;
2. modificarea traiectoriei fotonilor cu cedare de energie sau efect Compton;
3. dispariia fotonilor: efectul fotoelectric i generarea de perechi;
4. fascicolul, respectiv fotonii, trec fr nici o modificare.
Primele dou mecanisme produc o mprtiere a radiaiei (sau fenomenul de
difuziune), iar efectul Compton, efectul fotoelectric i generarea de perechi sunt
mecanisme prin care energia este cedat de fascicolul i absorbit de ctre mediu.
Ambele fenomene, absorbia i difuziunea, contribuie n mod distinct la
determinarea debitului dozei absorbite n mediul iradiat. Absorbia energiei se face prin
intermediul electronilor mediului iradiant pui n micare de fotonii purttori de energie
ai fascicolului prin cele trei mecanisme: efect fotoelectric, efect Compton i generare
de perechi.
Efectul fotoelectric este important pn la 0.5MeV i const n expulzarea unui
electron periferic de ctre un foton incident care, n aceast interaciune i cedeaz
ntreaga energie.
Efectul Compton sau fenomenul de difuziune inelastic este o interaciune prin
care fotonul i cedeaz doar o parte din energie unui electron care este expulzat de
pe orbit, iar fotonul incident i continu parcursul, dar cu modificarea traiectoriei.
Generarea de perechi este prezent pentru fotoni a cror energie depete
1.05MeV, dar nu devine important dect pentru radiaii de circa 20MeV. Fotonul
incident, trecnd n apropierea nucleului, se transform ntr-un electron i un pozitron,
fiecare cu energia de 0.51MeV. Pozitronul este anihilat de un electron i se produc 2
fotoni de 0.51MeV, numii radiaie de anihilare.
Figura 14.2. a. Efect fotoelectric; b. Efect Compton; c. Formare de perechi electron

pozitron; e- = electron; e+ = pozitron; h = energia fotonului incident; h = energia
fotonului mprtiat prin efect Compton; h 1 = h2 = energia fotonilor rezultai din
anihilarea unui electron cu un pozitron; = unghiul de mprtiere.
Pentru domeniul de energie al cobaltului, efectul Compton este preponderent i
un foton va produce circa 30 de coliziuni nainte de a-i ceda complet energia unui
electron (prin efect fotoelectric). Electronii rezultai prin cele trei mecanisme de mai sus
77

sunt principalii ageni prin care se realizeaz absorbia energiei i ei sunt cei care
declaneaz toate efectele fizice, fizico-chimice, biochimice i biologice ale radiaiilor.
Energia mare a radiaiilor cobaltului i confer anumite caracteristici fizice, cum
sunt creterea parcursului electronilor secundari, diminuarea coeficienilor de atenuare
i difuziune i egalizarea coeficienilor masici de absorbie n diferite medii biologice.
Energia iniial a electronilor produi prin interaciunea fotonilor gamma ai cobaltului cu
materia, este mare i direcia lor de deplasare va fi apropiat de cea a fascicolului
incident.
Parcursul maxim al acestor electroni rapizi este de 5mm n ap sau esuturi moi
i ei vor ceda treptat din energie, prin ionizri i excitri, pn cnd vor intra n
echilibru termic cu moleculele nvecinate. Importana ionizrilor i excitrilor este mai
mare la sfritul traiectoriei unde viteza lor este mai redus i explic decalajul dintre
locul interaciunii radiaiei cu mediul i locul n care se realizeaz absorbia maxim de
energie.
Zona ntre suprafa i profunzimea de 5mm este o zon de tranziie n care
fluxul electronilor secundari crete progresiv pn cnd atinge valoarea maxim.
La 5mm profunzime se realizeaz un echilibru ntre electronii aflai la sfritul
traiectoriei i electronii pui n micare de radiaia incident. Dup aceast profunzime,
intensitatea radiaiei i a ionizrilor scade, datorit atenurii fascicolului i sub influena
scderii debitului, invers proporional cu ptratul distanei.
Doza ntr-un anumit punct n profunzimea mediului iradiat este rezultatul
radiaiei absorbite n acel punct direct din fascicolul primar sau radiaia primar i a
radiaiei difuzate produse n urma interaciunii radiaiei cu mediul nconjurtor sau
volumul difuzant. Pe msur ce profunzimea crete, contribuia fascicolului primar
scade, dar rmne ntotdeauna superioar radiaiei difuzate.
Fenomenul de difuziune (sau radiaia difuzat) este dependent de mai muli
factori, cei mai importani fiind energia radiaiei incidente i volumul difuzant, delimitat
de suprafaa i forma cmpului de iradiere i profunzimea lui.
Avantajele clinice ale radiaiei cobaltului rezult din carac-teristicile fizice i sunt
comune tuturor radiaiilor de mare energie.
2. Geometria fascicolului
Fascicolul de radiaii este definit prin mai muli parametrii care se utilizeaz n
calcule dozimetrice:
a)_Distana F fa de surs, exprimat ca:
78

- distana surs-piele (DSP), respectiv distana dintre planul frontal al sursei i
suprafaa de intrare n mediul iradiat, msurat n axul central al fascicolului;
- distana surs-ax (DSA), care la aparatele cu montaj izocentric corespunde
distanei dintre planul frontal i axul de rotaie.
b)_Cmpul de radiaii corespunde suprafeei de seciune a fascicolului,
perpendicular pe axul central. Cmpul se delimiteaz prin colimare la distan fa de
surs specific aparatului. Dup cum se alege ca distan de lucru, DSP sau DSA,
respectiv distan surs-piele sau distan surs-ax, se difereniaz dou aspecte:
- cmpul definit la nivelul dozei maxime, n cazul cobaltului sub nivelul pielii la
0.5cm profunzime;
- cmpul definit n axul de rotaie al aparatului, cnd coincide n general cu
centrul volumului tumoral.
3)_Profunzimea pm a dozei maxime Dm: pentru cobalt-60 cores-punde punctului
(P) situat pe axul central al fascicolului la 0.5cm profunzime.
4)_Debitul dozei Dm la profunzime pm: valoarea care caracte-rizeaz cantitativ
un anumit fascicul definit geometric, msurat n fantom sau liber n aer.
Figura 14.3. Parametrii geometrici ai fascicolului,

delimitarea geometric a fascicolului.
3. Calculul timpului de expunere
Calculul dozei absorbite n mediul iradiat se face cu relaia:
D med A , DSP Exp ( DSP ) C FRD A f
unde:
- D med A , DSP debitul dozei absorbite n mediul iradiat, pentru un cmp de
seciune A, la distana DSP, exprimat n cGy/min
- Exp(DSP) = debitul sau expunerea msurat n aer pentru un cmp de
10x10cm2 la distana de referin DSP, exprimat n R/min
- C = factorul collimator
79

- FRD(A) = factorul de retrodifuziune corespunztor radiaiei difuzate de mediu
pentru cmpul ptrat echivalent de seciune A
- f = factorul de conversie doz absorbit/doz expunere (cGy/R) egal cu 0,957
pentru esutul muscular i 0.922 pentru oase
Calculul dozei adsorbite n axul fascicolului la profunzimea p
Doza absorbit n axul fascicolului poate fi determinat prin dou metode:
folosind randamentul n profunzime (RP), cnd se lucreaz cu distana surs-piele
(DSP) fix, sau folosind raportul esut aer (RTS) cnd distana surs-ax (DSA) este
fix i distana surs piele variabil.
a) Calculul cu randamentul n profunzime: tehnica de iradiere folosete o
distan surs-piele fix, cu dimensiunile cmpului stabilite la nivelul porii de intrare.
Astfel, debitul dozei adsorbite n axul fascicolului la profunzimea p este:
D med A , DSP , p D med A , DSP RP A , DSP , p
unde:
- D med A , DSP , p = debitul dozei absorbite n mediu, pentru cmpul de seciune A,
la distana DSP fa de surs i profunzimea p, exprimat n cGy/min
- D med A ,DSP = debitul dozei absorbite n aer pentru cmpul A i distana DSP
- RP A , DSP , p = randamentul n profunzime pentru cmpul A, distana DSP i
profunzimea p
Randamentul n profunzime (RP) este definit de raportul dintre debitul dozei
pentru cmpul de seciune A, la distana DSP i profunzimea p, D (p,A,DSP), fa de debitul
dozei ntr-un punct de referin r, D(r,A,DSP), n condiii similare (cmp de seciune A i
distan DSP). Punctul de referin n cobaltoterapie corespunde dozei maxime 100%
la profunzimea de 5mm. Randamentul n profunzime se exprim n procente fa de
doza de referin:
RP p , A ,DSP
D p, A , DSP
D r , A ,DSP
100%
Valorile randamentului n profunzime, a raportului esut-aer i a factorului de

retrodifuziune sunt date pentru cmpuri ptrate. Valorile respective pentru cmpurile
dreptunghiulare, care sunt mai frecvent folosite n radioterapie, sunt inferioare celor
ptrate sau circulare de aceeai suprafa, datorit contribuiei mai reduse a radiaiei
difuzate de periferia volumului la doz n axul central. Din acest motiv, nainte de a
utiliza tabelele din literatur, care se refer la o anumit suprafa a cmpului, se face
80

trecerea de la cmpul dreptunghiular folosit la cmpul ptrat echivalent, aplicndu-se
formula:
l
2ab
a b
unde: l = latura cmpului ptrat echivalent;

a i b = lungimea i lrgimea cmpului dreptunghiular;
Timpul de expunere se obine prin mprirea dozei D pe care dorim s o
administrm la D med A , DSP , p :
cGy
cGy
min
Timp expunere = D
med ( A , DSP , p )
b) Calculul cu raportul esut-aer: tehnica de iradiere cu DSA (DTS) fix se

utilizeaz la aparatele cu montaj izocentric, dimensiunea cmpului de iradiere fiind
luat n axul de iradiere sau centrul volumului tumoral. Debitul dozei n punctul p se
calculeaz dup formula:
D A , DSA , p Exp ( DSA ) C f RTA ( A , p )
cGy
min
unde:
- D A , DSA , p = debitul dozei absorbite pentru cmpul de seciune A, la distan
DSA i profunzimea p, exprimat n cGy/min
- Exp(DSA) = expunerea pentru cmpul standard (10x10cm2) la distana DSA,
exprimat n R/min
- C = factorul colimator pentru cmpul ptrat echivalent de seciune A
- f = factorul de conversie doz absorbit/doz expunere
- RTA(A ,p) = raportul esut-aer pentru cmpul A la profunzimea p
Raportul esut-aer (RTA) a fost introdus de Johns n 1953 i reprezint raportul
dintre debitul dozei absorbite msurat ntr-un anumit punct p n esut i debitul dozei
absorbite msurat n acelai punct n aer, n condiii de echilibru electronic i condiii
similare de iradiere
RTA p ,A ,E
D p , tesut , A
D p ,aer ,A
Timpul de expunere se obine prin mprirea dozei D pe care dorim s o

administrm la D A , DSA , p :
D
Timpul de expunere = D
( A , DSA , p )
81
cGy
cGy
min

4. Instalaia Theratron Elite 100
Theratron Elite 100 aflat n dotarea Spitalului Judeean Constana, este un
aparat destinat radioterapiei oncologice, avnd urm-toarele componente majore:
surs radioactiv de Cobalt-60, suport n micare GANTRY, partea staionar
(sistemele de alimentare electric, sistemul de aer comprimat care comand micarea
sursei, sistemele electrice i electronice de comand i control), cap rotativ, colimator
ajustabil, masa de tratament, pupitre suspendate de comand (unul pentru sistem i
altul pentru masa de tratament), pupitru central de comand i control.
Sistemul Theratron Elite 100 poate funciona n urmtoarele moduri: RT fix, RT
cinetic, RT rotativ, RT pe arc (pendular).
Figura 14.4. Instalaia Theratron Elite 100 schem general.

A._Valoarea debitului msurat n aer pentru un cmp de A=10x10cm 2,
DSP=80cm este de Exp(DSP)=100R/min. S se calculeze Dmed(A,DSP) pentru un cmp
A=10x10cm2, A=6x12cm2, A=12x17cm2 cnd DSP=80cm.
B._S se calculeze debitul dozei Dmed(A,DSP) i timpul de expunere pentru
D=250cGy, n cazul unui cmp de A=10x10cm 2, DSP=80cm la profunzimile p=10cm i
p=20cm.
C. S se calculeze debitul dozei D med(A,DSA) i timpul de expunere pentru
D=250cGy, n cazul unui cmp de A=10x10cm 2, DSA=80cm, la profunzimile p=10cm i
p=20cm. Se cunoate Exp(DSA)=100R/min.
- Factorul colimator: C10x10=1, C8x8=0.99, C14x14=1.02
- Factorul de conversie: f=0,957cGy/R (muchi), f=0.922cGy/R (oase)
- Randamentul n profunzime, raportul esut aer i echivalentul ptrat al cmpurilor
dreptunghiulare se gsesc date n tabelele 1-6.
82

Tabelul 1. Cobalt-60 DSP 50cm Randament n profunzime (RP)
83

84

85

86

Tabelul 5. Cobalt-60 Raport esut aer (RTA)
87

Tabelul 6. Echivalentul ptrat al cmpurilor dreptunghiulare
88
BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
Dimoftache C., Herman S., Biofizic medical, Ed. Cerma Bucureti, 1999
Dinu V., Truia E., Biochimie Medical, Ed. Medical Bucureti, 1996
Gheorghe V., Popescu A., Introducere n bionic, Ed. Stiinific Bucureti, 1990
Ghilezan N., Cobaltoterapia, Editura Medical, Bucureti, 1983
Herman S., Aparatur medical, Ed. Teora Bucureti, 2000
Iacoba A.D., Biofizic Molecular, Vol I, Ed. Bucura Mond Bucureti, 1995
Iosif N., ndreptar de lucri practice de biofizic, Ed. Eurobit, Timioara, 1993
Mrgineanu D., Biofizic, Ed. Didactic i Pedagogic Bucureti, 1980
Popescu A., Fundamentele biofizicii medicale., Ed. ALL. Bucureti, 1994
Petcu L.C., Biofizic medical, Vol 1, Ed. Muntenia Leda, Constana, 2001
Turcu G., Biochimie - Bioenergetic, Ed. Universitii Bucureti, 1984
Vasilescu V., Biofizic Medical, Ed. Didactic i Pedagogic Bucureti, 1977
89

Carte LP Biofizica

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Carte LP Biofizica

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

UNIVERSITATEA "OVIDIUS" CONSTANA

FACULTATEA DE MEDICIN GENERALA

Ovidius University Press, 2009

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Cartea de Lucrri Practice de Biofizic Medical se adreseaz studenilor

Ovidius University Press, 2009

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Prelucrarea matematic a datelor experimentale

Ovidius University Press, 2009

Funcie de valorile acestui coeficient exist trei tipuri de distribuii: cu nclinare

Lucrri Practice de Biofizic Medical

- m4(x) se numete exces i arat ct de aplatizat este distribuia. Se

II. Parte experimental

Ovidius University Press, 2009

- eroarea absolut: i x i X med

Rezultatul determinrilor (R) n urma prelucrrilor statistice a datelor, se

Dup efectuarea acestor calcule, putem trage concluzia c valoarea real X a

Acest interval se numete interval de confiden sau interval de ncredere.

Figura 1.1. Legtura dintre sistemul de referin rectangular i cel polar.

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Pentru ca reprezentarea grafic a datelor n coordonate rectangulare s fie ct

Figura 1.2. Reprezentarea grafic a datelor din tabelul 1.

Ovidius University Press, 2009

Figura 1.3. Fereastra de dialog Format Trendline a programului Microsoft Excel.

Figura 1.4. Determinarea coeficienilor a0 i a1 cu ajutorul programului Microsoft Excel.

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Aa cum se poate vedea din graficul prezentat n figura 1.4, punctele

Ovidius University Press, 2009

Microscopia de transmisie - Microscopia de reflexie

Figura 2.1. Schema microscopului de transmisie i de reflexie (sistemul optic).

Lucrri Practice de Biofizic Medical

unde: y2 = dimensiunea imaginii (perpendicular pe axa optic)

unde: 2 = unghiul sub care se vede obiectul privit prin microscop,

puterea separatore: P 1,22

Ovidius University Press, 2009

Figura 2.2. Reprezentare schematic a elementelor prezentate mai sus.

Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos.

S se determine intervalul de confiden i s se compare rezultatul obinut cu

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Figura 2.4. Determinarea grosismentului obiectivului (n = numrul de diviziuni

Datele experimentale se trec n tabelul de mai jos.

Ovidius University Press, 2009

Tehnici speciale de microscopie

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Ovidius University Press, 2009

Figura 3.1. Microscopia de cmp ntunecat.

Figura 3.2. Microscopia de polarizare.

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Figura 3.3. Microscopia de fluorescen.

Ovidius University Press, 2009

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Ovidius University Press, 2009

Metodele de separare cromatografice se mpart n:

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Figura 4.1. Cromatografie pe coloan.

Figura 4.2. Cromatografie pe hrtie vertical ascendent i descendent

Ovidius University Press, 2009

- fora de frnare electroforetic: F3 Q r E

unde: - = permitivitatea absolut a mediului

Datorit ncrcrii electrice nete de la suprafaa particulelor biologice, n acest

Lucrri Practice de Biofizic Medical

Figura 4.4. Electroforeza microscopic: cuva electroforetic folosit i imaginea

Ovidius University Press, 2009