Sumar

UMF
Carol Davila, Bucuresti

Masurarea concentratiei unei

solutii cu ajutorul
spectrofotometrului

Notiuni introductive
Spectrul electromagnetic spectrul vizibil
Interactia radiatiei cu materia
Spectrofotometrie L. Lambert-Beer

Importanta medicala
Aplicatie practica
Scopul experimentului
Spectrofotometrul
Principiul metodei

Catedra de Biofizica

Dr. Magda Mocanu

Prefixe pentru unitati de masura

Factor
10-1
10-2
10-3
10-6
10-9
10-12
10-15
10-18
10-21
10-24

Prefix
deci
centi
milli
micro
nano
pico
femto
atto
zepto
yocto

Simbol
d
c
m

n
p
f
a
z
y

Spectrul electromagnetic

Factor Prefix Simbol

10
deca
da
102
hecto
h
103
kilo
k
106
mega
M
109
giga
G
12
10
tera
T
1015
peta
P
1018
exa
E
1021
zetta
Z
3
1024
yotta
Y

Lungimea de unda (m)

radio

microunde

infrarosu

vizibil

ultraviolet

raze X raze gamma

Frecventa (Hz)

Spectrul electromagnetic

Spectrul electromagnetic
Spectrul vizibil:

Lungime de unda

Amplitudine

Lungimea de unda, = distanta dintre doua varfuri de unda

(m)
Frecventa, = numarul de succesiuni ciclice ale lungimii de
unda care trec prin punct fix in unitatea de timp (Hz)
Perioada, T = inversul frecventei (s)
Amplitudine, A = amploarea oscilatiei
5

(nm)
380450 nm
420450 nm
450495 nm
495570 nm
570590 nm
portocaliu 590620 nm
rosu
620750 nm

Culoare
violet
indigo
albastru
verde
galben

Unghi de
dispersie

Lumina
alba

Prisma

Interactia radiatiei cu materia

Interactia radiatiei cu materia

Absorbtie

Interactia cu sistemele atomice

Interactia cu sistemele moleculare

foton

Molecula de zahar
(sucroza)

foton

Absorbtia = are loc atunci cand un atom absoarbe energie, iar

electronii trec de la un nivel fundamental de energie la un
nivel energetic superior; are loc excitarea atomului.

Glucoza
Fructoza

atom1 + atom2 + + atomn = molecula

molecula1 + molecula2 + + moleculan = macromolecula ( > 5000 Da)
7

Interactia radiatiei cu materia

Emisia = are loc atunci cand electronii trec de la un nivel

energetic superior la un nivel energetic fundamental;
are loc dezexcitarea atomului.

Cromofor
(lb gr chroma = culoare, phorein = a

Spectre moleculare = formate din benzi de absorbtie

(cuprind tranzitii electronice/ spectrul UV, vizibil, tranzitii
vibrationale/ spectrul IR, tranzitii rotationale/ spectrul IR)

purta)

= o grupare ce produce
culoare.

HbO2
domeniul

(nm)

UV

275

Vizibil

414

Interactia radiatiei cu materia

Spectre atomice = totalitatea lungimilor de unda sau a

frecventelor pe care le poate absorbi/ emite un atom

Coeficient molar de absorbtie

(l/ mol cm)

Emisie

Cromofori

(nm)

CC

180

C=C

171

C=O

270, 290

N=N

345

N=O

200, 275

Benzen

268

540
576

-caroten
(morcovi)
9

10

Lungime de unda (nm)

Interactia radiatiei cu materia

Interactia radiatiei cu materia

Fotoluminiscenta = procesul prin care o

substanta absoarbe fotoni (radiatie EM) si
apoi emite fotoni

Fluorescenta = emisia se opreste in momentul in

care excitatia este stopata
Fosforescenta = emisia este mentinuta si dupa ce
excitatia este stopata

Absorbtie

Emisie

Celule marcate fluorescent

11

Sulfura de zinc vs aluminat de strontiu

12

http://en.wikipedia.org/

Spectrofotometrie

Legea Lambert-Beer

Spectroscopie = studiaza interactia dintre

radiatie (EM si corpusculara) si materie.
Spectrometrie = inregistrarea si masurarea
spectrelor EM.
Spectrofotometrie = inregistrarea si
masurarea spectrelor din domeniile EM:
UV, vizibil, IR.

13

Care este diferenta dintre

absorbanta si transmisie?

I I 0 10 cd
I

I0
d

I = intensitatea luminii emergente

I0 = intensitatea luminii incidente
= coeficient de absorbtie
c = concentratia
d = grosimea stratului de solutie
T = transmisie
A = absorbanta (extinctie, densitate optica)

14

absorbanta

Informatii calitative: calcularea

concentratiei unui compus
dintr-o proba (acizi nucleici,
glucoza, nitriti, nitrati,
detergenti etc)

concentratie

Absorbanta = masoara cantitatea de lumina; A ~ c

Absorbanta

Importanta medicala
Informatii cantitative:
identificarea compusilor dintro proba pe baza spectrului de
absorbtie

concentratie

I
10cd T 0,1
I0
1
A lg
T
A cd
A 0,

Lungime de unda (nm)

Aplicatie: analiza toxicologica a

apei, produselor farmaceutice,
fluidelor biologice, alimentelor

Transmisie = este raportul dintre si intensitatea luminii

care paraseste proba de analizat si intensitatea luminii care patrunde
in proba de analizat, T = Iout / Iin.
15

Spectrofotometrul

Principiul metodei

Scop: calcularea concentratiei unei solutii

de acridine-orange pe baza analizei
spectrelor de absorbtie
Monocromator
Lumina

Prisma

Lumina
transmisa
Proba

16

Spectrofotometrul permite trecerea luminii

printr-o proba si masoara intensitatea
luminii care ajunge la detector.

Aparat de inregistrare/

Fotodetector Computer

Lumina monocromatica incidenta

17

18

http://4e.plantphys.net/article.php?ch=7&id=66