FOSFATAZELE

Fosfatazele sunt monoesteraze nespecifice care catalizeaz reacia de hidroliz a esterilor

fosforici (-glicerofosfai, fenil-fosfat disodic, para-nitrofenolfosfat etc.) elibernd acidul fosforic
i fenolul sau alcoolul respectiv. Ecuaia reaciei de hidroliz poate fi reprezentat astfel:
R-OPO3H2 + H2O R-OH + H3PO4
n funcie de pH-ul optim de aciune, fosfomonoesterazele se clasific n:
- fosfataze alcaline: (pH= 9-10,4);
- fosfataze acide cu pH=5,0-6,0 sau cu pH = 3,4 4,2.

Fosfataza alcalin
Fosfataza alcalin:
prezint maximum de activitate la pH 9-10,4;
este activat de ionii de Mg2+ ;
este larg rspndit n oase (n osteoblati), mucoasa intestinal, celulele tubilor renali, ficat (n
celulele ce delimiteaz canaliculele biliare), n celulele glandei mamare i placentei.
Are un rol important n formarea tesutului osos, regenerarea tesutului hepatic, in procesele de
contracie muscular, n absorbia intestinal, particip n diferite reacii biochimice din
metabolismul glucidelor, lipidelor, nucleoproteidelor).
Determinrile de rutin efectuate n clinic msoar de fapt rezultatul activitii mai multor
izoenzime de provenien hepatic, osoas, renal, precum i cele eliberate din peretele intestinal sau
placent. Izoenzima predominant este cea hepatic, cu excepia perioadelor de cretere a scheletului.
Scopurile determinrii activitii fosfatazei alcaline :
1.detectarea i identificarea afeciunilor scheletice caracterizate de activitatea osteoblastic;
detectarea leziunilor locale hepatice determinnd obstrucie biliar, cum sunt tumorile sau
abcesele;
2.suplimentarea informaiilor date de alte teste enzimatice referitoare la funcia hepatic;
3.monitorizarea rspunsului la terapia cu viramina D a rahitismului datorat carenei
vitaminice Determinarea activitii enzimatice a fosfatazelor alcaline cu para-nitrofenilfosfat
Principiul metodei: Prin aciunea fosfatazelor alcaline asupra p-nitrofenilfosfatului este pus n
libertate p-nitrofenolul intens colorat n galben n mediu alcalin. Activitatea enzimei este
proporional cu intensitatea coloraiei.
Calcul: EP/ES X 27,55 = U/l
Valori de referin aduli 20-48 UI/l
copii 38-138 UI/l
gravide (ultimul trimestru) 28-115 UI/l
Variaii fiziologice:
sugarii, copiii i adolescenii au valori de pn la 3 ori mai mari dect adulii datorit
formrii scheletului i creterii osoase.
Creterea fiziologic a valorilor fosfatazei alcaline n sarcina tardiv se datoreaz izoenimei
placentare.
n perioadele postprandiale indeosebi dup prnzuri bogate n glucide i lipide se
constat o cretere a activitii enzimatice datorit izoenzimei intestinale.
Semnificaie diagnostic:
1.Valori crescute se constat n:
1. afeciuni osoase cu activitate osteoblastic intens:
boala Paget (osteita deformant);
tumori sau metastaze osteoblastice;
hiperparatiroidism (mobilizarea calciului i fosforului din oase);
1
 rahitism;
osteomalacie.
Nivelul fosfatazei alcaline de provenien osoas nu este modificat n cazul osteoporozei de involuie
sau n leziunile osoase din mielomul multiplu.
2. afeciuni hepato-biliare:
colestaz intra- i extrahepatic (crete sinteza hepatic i nu retenia); determinarea
activitii fosfatazei alcaline este testul care permite diagnosticul diferenial dintre icterul
obstructiv (valori crescute) i cel hemolitic (valori normale).
forma colestatic a hepatitei virale acute;
neoplasm;
ciroz.
n absena sarcinii sau a unei boli osoase, creterea nivelului seric al fosfatazei alcaline
refelct lezarea funciei excretorii hepatice.
3. hiperfosfatazemia familial benign, extrem de rar (cu determinism genetic).
4. dup administrarea prelungit a unor medicamente, ca de exemplu antiepileptice sau
anticoagulante.
1. Valori sczute se observ n:
hipofosfatazemie;
nanism hipofizar (activitatea osteoblastic este deprimat);
anemie perinicoas;
deficit de vitamin C.

Determinarea activitatii enzimatice a fosfatazei acide serice

Fosfatazele acide exist n cantiti mari n prostat i n cantiti mult mai mici n ficat,
eritrocite, plachete sanguine i esut osos.
Scopul determinrii:
Detectarea carcinomului prostatic extins dincolo de capsula prostatic activitatea ei este
crescut la 80% dintre pacienii cu carcinom metastatic al prostatei.
Principiul metodei: p-Nitrofenolul este hidrolizat sub aciunea fosfatazei producnd acid fosforic i p-
nitrofenol de culoare galben; intensitatea culorii este proporional cu activitatea enzimei.
Izoenzima prostatic este inhibat de tartrat, n timp ce izoenzimele eritrocitare i trombocitare nu
sunt.
Atunci cnd determinarea se face n prezena tartratului, se evalueaz fosfataza nonprostatic.
Fosfataza acid prostatic se calculeaz prin diferena dintre activitatea total i activitatea n prezena
tartratului.
pH-ul optim de aciune este de 5-5,5.
Nu sunt activate de ionii de Mg2+; sunt inhibate de fluoruri i oxalai.

Valori de referin: Fosfataza acid total Fosfataza acid prostatic

Ser: 4,7-13,5 UI/l pentru brbai maxim 3,6 UI/l
5,0 11,0 UI/l pentru femei

Semnificaie diagnostic:
1. Valori crescute:
Fosfataza acid seric este crescut n carcinomul prostatic cu metastaze valorile sunt de
3-15 ori mai mari dect cele normale; carcinomul trebuie s invadeze capilarele sanguine, canalele
limfatice sau alte esuturi, nainte ca valoarea activitii enzimei n ser s creasc; un cancer

2
prostatic ce nu a depit capsula prostatic nu determin creterea valorilor enzimei n ser, iar
scderea valorilor dup tratament indic eficiena acestuia.
n prezent, se utilizeaz numeroase tehnici imunologice bazate pe anticorpi monoclonali
izoenzimatici ai fosfatazaei acide prostatice in scopul detectrii precoce un carcinom prostatic, astfel de
teste fiind de 1000 de ori mai sensibile dect determinrile activitii enzimatice propriu-zise.
Uneori, fosfataza acid prostatic poate crete n unele boli osoase (boala Paget, cancerul
de sn cu metastaze osoase).
Fosfataza acid nonprostatic crete n sfingolipidoze (boala Gaucher) - Termenul generic
de sfingolipidoze desemneaz un ansamblu de boli moleculare, respectiv, de enzimopatii cu caracter
ereditar. Se manifest prin acumularea n esuturi de diferite sfingolipide (sfinfomieline, cerebrozide,
sulfatide, gangliozide) genernd boli specifice. n contextul patologiei moleculare, substratul acestor
dereglri l reprezint deficiena de sintez sau de activitate a anumitor enzime lizozomale implicate n
procesul de catabolizare a sfingolipidelor.
2. Valorile sczute nu au semnificaie diagnostic n practica medical.

Determinarea activitii enzimatice a -amilazei serice

Amilazele sunt -1,4 glicozodaze care catalizeaz degradarea hidrolitic a amidonului i
glicogenului, acionnd asupra legturilor -1,4 glicozidice cu producere de dextrine, maltoz i
cantiti mici de glucoz.
Amilazele care acioneaz n tubul digestiv uman sunt -amilaze (endoamilaze). Aceste enzime
sunt importante pentru digestia amidonului ingerat, rolul cel mai important revenindu-i amilazei
pancreatice, deoarece amilaza salivar acioneaz numai n cavitatea bucal i este inactivat de mediul
gastric puternic acid.

Determinarea activitii enzimatice a -amilazei serice prin metoda Smith i Roe

modificat
Amilaza seric provine att din glandele salivare, ct i din pancreas, ficat (3/4 din amilaza
normal), intestin, esut gras, musculatur
Principiul metodei: Dozarea activitii enzimatice a -amilazei serice pe substrat de
amidon se bazeaz pe determinarea cantitii de amidon nehidrolizat de ctre enzim ntr-un
anumit interval de timp. n prezena iodului, amidonul formeaz un compus de culoare albastr.
Se determin intensitatea coloraiei cu iodul care este proporional cu concentraia amidonului
rmas nehidrolizat dup incubaie n prezena -amilazei i invers proporional cu activitatea
enzimatic.
Calcul : EM-EP / EM x 1000 = Uniti amilazice/dl ser
Valori de referin: 60-200 U amilazice/dl ser
Semnificaie diagnostic:
1. Valori crescute:
a) valori marcat crescute se constat:
n stimularea secreiei ce caracterizeaz sindroamele pancreatice obstructive n care apare o
cretere imediat i de mari proporii a valorilor acestei enzime (de 6-10 ori normalul), dar
tranzitorie (creterea dureaz aproximativ 3 zile) exemplu: pancreatita acut. Creteri ale
amilazei serice ce depesc de 3-5-10 ori valorile normalese produc la circa 6 ore de la debutul
acut i dureaz 3-5 zile.
Atunci cnd valorile depesc de peste 10 ori pe cele normale, disgnosticul cel mai frecvent este
de pancreatit acut. O cretere a amilazei la triplul valorilor normale indic o leziune
inflamatorie pancreatic, iar n necroza extins a pancreasului valorile pot crete de pn la 40
ori peste valoarea normal.

3
 Creterea amilazemiei este tranzitorie; persistena creterii pe o durat de peste10 zile
semnific fie agravarea procesului pancreatic, fie apariia unei complicaii.
a) valori moderat crescute apar n:
cancer de cap de pancreas;
afeciuni abdominale acute (ulcer perforat, ocluzie intestinal, colecistit acut, apendicit
acut, peritonit);
parotidita acut epidemic;
hepatita acut;
dup intervenii chirurgicale n etajul abdominal superior;
dup administrarea unor medicamente (morfin, corticoizi);
n decompensarea cetoacidozic a ficatului;
cancer pulmonar.
Creteri ale amilazei serice se constat i n macroamilazemie, afeciune cu caracter
familial caracterizat prin prezena unor molecule anormal de mari ale amilazei i care nu
pot fi excretate de rinichi.
2.Valori sczute se constat n:
atrofiile pancreatice;
afectarea acut sau cronic hepatocelular.

Determinarea activitii amilazei urinare prin metoda Wohlgemuth

n urin exist n mod normal acele enzime a cror greutate molecular este mai mic de
60000 daltoni i care pot filtra prin membrana glomerular i nu mai sunt reabsorbite. Creterea
amilazemiei are drept consecin amilazuri. Practic, se recomand asocierea determinrii
determinrii amilazei serice cu cea urinar, deoarece maximum de eliminare renal este atins mai
trziu i dureaz mai mult dect cel al amilazemiei, leziunile pancreatice putnd fi diagnosticate
chiar i dup ce amilazemia a revenit la normal.
Principiul metodei: Se apreciaz cantitatea minim de urin care mai conine suficient enzim
pentru a hidroliza amidonul pn la dextrine necolorabile (acrodextrine) n reacia cu iodul.
Mod de lucru:
Se iau 10 eprubete numerotate n care se fac diluii de urin de la 1/1 la 1/512 cu ser fiziologic,
astfel:
- n eprubeta 1 se pipeteaz 2 ml de urin, iar n urmtoarele 9 eprubete cte 1 ml soluie NaCl
9/1000;
- din eprubeta 1 se ia 1 ml de urincare se introduce n eprubeta 2 i se agit;
- din eprubeta 2 se ia 1 ml amestec i se introduce n eprubeta 3 i se agit;
- se repet operaia pn la ultima eprubet din care se ia 1ml amestec i se ndeprteaz.
Diluiile de urin sunt redate in tabelul urmtor:
Nr. eprubetei 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Diluia urinii 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512
Activitatea enzimatic 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024
(UW)
Dup ce s-au realizat diluiile, n fiecare eprubet se adaug cte 2ml soluie amidon 1% i se
agit. Se incubeaz toate eprubetele la 370C, 30 minute. Se rcesc i apoi se adaug n fiecare
eprubet cte 2-3 picturi soluie de iod 0,1N i se agit.
Gradul de hidroliz a amidonului sub influena amilazei este reflectat de coloraia soluiilor din
cele eprubete, astfel
- eprubetele cu soluie de culoare albastr conin amidon nehidrolizat;
- eprubetele cu soluie colorat violet conin amilodextrine;

4
- eprubetele cu soluie culoare roie conin eritrodextrine;
- eprubetele cu soluie culoare galben conin flavodextrine;
- eprubetele cu soluie incolor conin acrodextrine i maltoz.
Calcul Dac, de exemplu, culoarea albastr apare n eprubeta 4, calculul se va face pe baza
diluiei
din eprubeta 3 care conine cantitatea minim de enzim necesar hidrolizei totale sau pariale a
intregii cantiti de amidon coninute n eprubeta respectiv.
1 unitate Wohlgemuth reprezint cantitatea de amilaz care hidrolizeaz 1 mg amidon n 30 minute,
la 370C.
Formula de calcul UW= 2/ 1/4= 8 UW
Valori normale 8-64 UW
Valorile crescute ale activitii enzimatice a amilazei n urin sunt efectul acelorai cauze
patologice care determin creterea amilazemiei.
Valori sczute pot s apar n insuficiena renal.

Determinarea lipazei serice

Lipazele sau carboxiesterazele sunt enzime ce catalizeaz hidroliza esterilor carboxilici
rezultnd o molecul de acid i una de alcool, conform reaciei
R-CO-O-R + HOH R-COOH R-OH
Lipazele care acioneaz asupra lipidelor neutre sunt prezente n organismul uman n sucul
pancreatic, snge, plmni, rinichi, stomac (numai la nou-nscut).
Activitatea lipazei este favorizat de prezena activatorilor srurile de Ca2 , acizii biliari i
albuminele.
Lipazele sunt inhibate de metalele grele.
Lipaza pancreatic are pH-ul optim 8,0 i este inhibat de chinin.
Semnificaia diagnostic
Concentraia lipazei serice este mai mult legat de activitatea pancreasului; n toate
pancreatitele verificate postoperator lipazemia a fost crescut, n timp ce amilazemia putea
s aib valori normale.
In pancreatit acut, creterea lipazei serice se produce lent. Dup primele ore, lipaza se
menine crescut n snge mai mult vreme, iar excreia ei urinar este mai lent. Determinarea
lipazei serice este util ncepnd cu a treia zi de boal cnd amilazemia devine normal. De aceea,
n urmrirea evoluiei unei pancreatite acute se recomand dozarea ambelor enzime i n dinamic
(repetat).
n cancerul pancreatic, hiperlipazemia este observat mai frecvent dect
hiperamilazemia.
Lipaza ca i amilaza se determin i n revsatele seroase pleurale i/sau peritoneale.